Title:
核酸鎖の結合および修飾方法
Document Type and Number:
Japanese Patent JPWO2011052013
Kind Code:
A1
Abstract:
【課題】 第一の核酸鎖と第二の核酸鎖と第三の核酸鎖とを用いて、短時間で反応が終了し、且つ放射性アイソトープを使用せず安全に実験を遂行できる、第一の核酸鎖と第二の核酸鎖との結合方法およびそれを利用した核酸鎖の標識方法を提供すること。【解決手段】 第一の核酸鎖の３’ヒドロシル基と、第二の核酸鎖の５’リン酸基とを結合する方法であって、前記第一の核酸鎖の少なくとも一部と前記第二の核酸鎖の少なくとも一部とに相補的に結合する第三の核酸鎖の存在下において、少なくとも１以上のリボヌクレオチドを３’末端に有する前記第一の核酸鎖と前記第三の核酸鎖との塩基対形成、および前記第二の核酸鎖と前記第三の核酸鎖との塩基対形成を、同時にまたは別々に行う工程と、その工程で得られた前記第一の核酸鎖、前記第二の核酸鎖、前記第三の核酸鎖の三者の核酸鎖の混合物に、ＥＣ６．５．１．３に分類され且つ二本鎖核酸ニック修復活性を有するＲＮＡリガーゼを添加する工程を有し、前記第三の核酸鎖は、前記第一の核酸鎖の３’末端の塩基を含む少なくとも１以上の連続する塩基配列と相補的な塩基配列を有し、また前記第三の核酸鎖は、前記第二の核酸鎖の５’末端の塩基を含む少なくとも１以上の連続する塩基配列と相補的な塩基配列を有し、且つ前記第二の核酸鎖に対して相補的となる前記第三の核酸鎖における塩基配列が、前記第二の核酸鎖の鎖長の１／２未満となるものであることを特徴とする方法。【選択図】 図１
Inventors:
Toshiyuki Kato
Masaaki Onda
Masaaki Onda
Application Number:
JP2011538118A
Publication Date:
March 14, 2013
Filing Date:
October 29, 2009
Export Citation:
Assignee:
Biodynamics Research Institute, Inc.
International Classes:
C12N15/09
Other References:
JPN6014007995; Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ ｖｏｌ．１６， ｎｏ．２, 2004, ｐｐ．２１１-２２１
JPN6014007997; Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔ． Ｅｄ． ｖｏｌ．４８， ｎｏ．１８, 2009, ｐｐ．３２６８-３２７２
JPN6014007988; Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ． ｖｏｌ．３１７, 2003, ｐｐ．１０９-１２３
JPN6014007990; ＲＮＡ ｖｏｌ．１１， ｎｏ．１２, 2005, ｐｐ．１９０９-１９１４
JPN6014007991; ＲＮＡ ｖｏｌ．１２， ｎｏ．１１, 2006, ｐｐ．２０１４-２０１９
JPN6014007993; Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｊ． ｖｏｌ．３９８， ｎｏ．１, 2005, ｐｐ．１３５-１４４
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Attorney, Agent or Firm:
Taro Yaguchi