2，2，，6，6，-四异丙基 -4，4，-二联苯酚脂微球制剂及其制备方法 技术领域

本发明涉及 2,2',6,6'-四异丙基 -4,4'-二联苯酚脂微球制剂及其制备方法， 属 于药物制剂领域。

背景技术

2,2' ,6,6， -四异丙基 -4,4' -二联苯酚（以下简称二联苯酚）是本公司新� �发 的一种能够对抗癲痫发作的化合物（中国专利 CN101804043 A二联苯酚及其衍 生物在治疗癲痫药物中的应用）， 其能够治疗全身性强直痉挛发作（大发作）、 失 神发作 （小发作）、 单纯部分性发作、 复杂部分性发作 （精神运动性发作） 和植 物神经性发作 （间性发作） 等多种癲痫症状。 实验研究表明， 二联苯酚对 GABA 受体具有很强的亲和力， 并且具有 GABA激动作用， 还能拮抗 NMDA受体， 调节 Ca ²⁺ 通道的 Ca ²⁺ 内流， 还对海人藻酸 （kainic acid) 引起的兴奋性毒性具有保 护作用。研究还证实二联苯酚的抗氧化作用明 显强于丙泊酚， 具有较强的脑保护 作用。尤其重要的是二联苯酚并不会导致患者 意识丧失， 因此对治疗各种不同类 型的癲痫患者具有重要的临床应用价值。

但是二联苯酚为脂溶性极强的化合物， 难溶于水。 曾有研究使用环糊精、 tween80, V _c DMS0等表面活性剂助溶或增溶， 均很难达到理想效果， 从而影响 其发挥药效， 限制其临床应用。本发明以脂微球作为二联苯 酚递药体系， 不仅解 决了二联苯酚难溶于水的缺点，还可以使药物 选择性地在病变部位聚积，将治疗 药物最大限度地运送到靶区，使治疗药物在靶 区浓度超出传统制剂的数倍甚至数 百倍， 提高了治疗效果。 同时药物在正常组织分布量极少， 药物的毒副作用和不 良反应明显减轻， 达到高效低毒的效果。 目前， 国内外有关二联苯酚脂微球制剂 报道尚未见到。 因此， 如何针对二联苯酚的特殊理化性质设计合理制 剂配方， 以 制备出安全、 稳定、 有效的二联苯酚脂微球制剂是本发明需要解决 的问题。

本发明提供一种二联苯酚脂微球制剂及其制备 方法，本发明针对二联苯酚易 氧化的性质特别加入 0.5~1%的抗氧化剂， 尤其是抗氧化能力极强易溶于油相的 维生素 E， 保证药物在制剂中的稳定性； 本发明仅采用磷脂类乳化剂， 其用量只 占到 1~1.5%， 不含助溶剂， 避免产生溶血现象及血栓炎性物质； 另外本发明采 用的乳化剂来源于动物胚胎蛋黄的蛋黄卵磷脂 ， 更有利于人体吸收， 更安全。 发明内容

本发明的技术方案提供了一种 2,2' ,6,6' -四异丙基 -4,4' -二联苯酚脂微球 制剂， 同时还提供了该脂微球制剂的制备方法。

本发明所述的脂微球制剂由活性成分 2,2' ,6,6' -四异丙基 -4,4' -二联苯酚 (以下简称二联苯酚）， 注射用油， 乳化剂， 和注射用水加工而成。 具体为： 二 联苯酚 0.1〜3%、 注射用油为 10〜30%、 乳化剂 1〜1.5%， 抗氧化剂 0.5〜1%， 附加剂 0〜5%， 其余为注射用水。 其中单位为重量百分比。

其中所述二联苯酚的化学结构式分别为：

其中所述的注射用油为大豆油、 中链油、 沙棘油、 茶油中得一种或几种； 其中所述的乳化剂为大豆卵磷脂、氢化卵磷脂 、人工合成磷脂、 蛋黄卵磷脂 中的一种或几种；

其中所述的抗氧化剂为维生素E、 抗坏血酸、 亚硫酸氢钠中的一种或几种； 其中所述的附加剂为 pH调节剂、 等渗调节剂、 或络合剂中的一种或几种； 所述的 pH调节剂为盐酸或氢氧化钠， 所述的等渗调节剂为甘油， 所述的络合剂 为 EDTA，按注射剂组成重量百分比计，含量分别� � 0.01〜1%， 0.1〜2.5%， 0.01〜 1%；

优选的， 本发明所述脂微球制剂， 含有以下成分- 每 100ml脂微球制剂中含二联苯酚 1000mg、大豆油 10g、注射用蛋黄卵磷脂 1.2g， 维生素 E lg， 甘油 2.5g， EDTA 0.5g, 其余为注射用水。

其他优选的， 本发明所述的脂微球制剂配方组成在实施例中 ；

本发明的另一个目的在于提供二联苯酚脂微球 制剂的制备方法。

本发明所述的制备方法， 包括以下步骤：

( 1 )在 70°C水浴及氮气保护下， 用注射用油将乳化剂完全溶解， 加入抗氧 化剂搅拌溶解， 然后加入二联苯酚， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

(2) 将等渗调节剂、 络合剂溶解于注射用水中， 得水相；

( 3 ) 将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 5min,得到初乳；

(4) 将制备好的初乳， 用高压均质机进行均质， 微孔滤膜过滤， 充氮， 灌 封， 115 °C高压灭菌， 即可。

本发明中， 由于抗氧化剂的水溶性不同， 所以加入的方式也不同。油溶性抗 氧化剂加入油相中， 水溶性抗氧化剂加入水相中。

具体地， 所述二联苯酚脂微球制剂的制备方法， 包括如下步骤：

( 1 ) 称取各原料： 二联苯酚 lg〜30g、 注射用油 100ml〜300ml、 甘油 25g 乳化剂 10g〜15g、 抗氧化剂 5g〜10g、 其余为注射用水。

(2)在 70°C水浴及氮气保护下， 将配方量的乳化剂和抗氧化剂（维生素 E) 加入注射用油中，待其溶解完全后再加入二联 苯酚，加热搅拌使其溶解，得油相；

( 3 ) 将配方量的甘油和络合剂溶解于注射用水中， 搅拌均勾得水相；

(4)将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

( 5 )将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115 °C高压灭菌， 制得终产品 （1000ml)。

具体地， 所述二联苯酚脂微球制剂的制备方法， 包括如下步骤：

( 1 ) 称取各原料： 二联苯酚 lg〜30g、 注射用油 100ml〜300ml、 甘油 25g 乳化剂 10g〜15g、 抗氧化剂 5g〜10g、 其余为注射用水。

(2)在 70°C水浴及氮气保护下， 将配方量的乳化剂加入注射用油中， 待其 溶解完全后再加入二联苯酚， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

( 3 ) 将配方量的甘油、 抗氧化剂 （抗坏血酸或亚硫酸氢钠） 和络合剂溶解 于注射用水中， 搅拌均勾得水相；

(4)将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

( 5 )将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115 °C高压灭菌， 制得终产品 （1000ml)。

本发明其他优选的制备方法在实施例中。 本发明所述的制剂为静脉注射用脂微球制剂。

本发明所述的脂微球的粒径分布范围在 100nm〜800nm,平均粒径为 150nm〜 300nm。

本发明所述制剂中， 二联苯酚被包裹在脂微球中， 大大提高了其在水中的溶 解性， 增加了载药量， 同时也增加了制剂的稳定性。 另外， 脂微球作为新型载药 体， 无毒性和免疫原性， 减少了药物剌激， 很好地减低了药物的毒副作用。

本发明提高了注射剂的稳定性，延长了药品的 保质期，改进了药物的溶解性， 保证了药品的安全。 而且， 本发明的制备工艺简单可行， 节省了时间和成本， 适 合大规模生产。此外， 本发明所述制剂， 其配方组成和制备方法经过了科学的筛 选和论证。

本发明所述的制剂为涉及对抗癲痫发作的制剂 ；

本发明所述的制剂对抗癲痫发作的药效较 CMCNa-二联苯酚有很大的提高； 本发明将给药方式由口服改为静脉，改善了药 物吸收，提高了药物治疗效果; 本发明所述制剂对抗癲痫发作的的具体实验结 果在实验例中。

显然， 根据本发明的上述内容， 按照本领域的普通技术知识和惯用手段， 在 不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可 以做出其它多种形式的修改、替换 或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发 明的上述内容再做进一步的详 细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的 范围仅限于以下的实例。凡基于本 发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范 围。

具体实 式

以下实施例是对本发明的进一步说明， 但绝不是对本发明范围的限制。 下面 参照实施例进一步详细阐述本发明，但是本领 域技术人员应当理解，本发明并不 限于这些实施例以及使用的制备方法。而且， 本领域技术人员根据本发明的描述 可以对本发明进行等同替换、组合、 改良或修饰， 但这些都将包括在本发明的范 围内。

第一部分不同二联苯酚浓度制备的脂微球制剂

实施例 1 1 ϋ联苯酚脂微球制剂

药物及其辅料 用量 ( g) 二联苯酚 10.0 注射用大豆油 100

蛋黄卵磷脂 12

维生素 E 10

甘油 25

EDTA 5

注射用水 定容至 1000ml 制备工艺

(1) 在 70°C水浴及氮气保护下， 用 lOOg注射用油将 12g蛋黄卵磷脂完全 溶解， 加入 10g 二联苯酚和 10g维生素 E， 通入氮气保护， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

(2) 将 25g甘油和 5gEDTA溶解于注射用水中， 搅拌均勾得水相；

(3)将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

(4)将制备好的初乳， 在 800~ 900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115°C高压灭菌， 制得终产品 t

实例 2 0.1%二联苯酚脂微球制剂

药物及其辅料 用量 (g)

二联苯酚 1.0

注射用沙棘油 100

氢化卵磷脂 12

抗坏血酸 10

甘油 25

EDTA 5

注射用水 定容至 1000ml 制备工艺

(1) 在 70°C水浴及氮气保护下， 用 100g注射用油将 12g氢化卵磷脂完全 溶解， 加入 lg二联苯酚， 通入氮气保护， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

(2) 将 25g甘油、 10g抗坏血酸和 5g EDTA溶解于注射用水中， 搅拌均勾 得水相；

( 3 )将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

(4)将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115 °C高压灭菌， 制得终产品。

实例 3 3%二联苯酚脂微球制剂

药物及其辅料 用量 ( g)

二联苯酚 30

注射用中链油 100

大豆卵磷脂 12

亚硫酸氢钠 10

甘油 25

EDTA 5 注射用水 定容至 1000ml 制备工艺

( 1 ) 在 70°C水浴及氮气保护下， 用 100 g注射用油将 12g大豆卵磷脂完全 溶解， 加入 30g二联苯酚， 通入氮气保护， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

(2) 将 25g甘油、 10g亚硫酸氢钠和 5g EDTA溶解于注射用水中， 搅拌均 勾得水相；

( 3 )将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

(4)将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115 °C高压灭菌， 制得终产！ P 第二部分不同注射用油种类和含 备的脂微球制剂

实施例 4 20%大豆油的脂微球制剂

药物及其辅料 用量 ( g)

二联苯酚 10. 0

注射用大豆油 200

蛋黄卵磷脂 12 维生素 E 10 甘油 25

EDTA 5 注射用水 定容至 1000ml 制备工艺

(1) 在 70°C水浴及氮气保护下， 用 200g注射用油将 12g蛋黄卵磷脂完全 溶解， 加入 10g 二联苯酚和 10g维生素 E， 通入氮气保护， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

(2) 将 25g甘油和 5gEDTA溶解于注射用水中， 搅拌均勾得水相；

(3)将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

(4)将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115°C高压灭菌， 制得终产品 t

实施例 5 10%中链油的脂微球制剂

药物及其辅料 用量 (g)

二联苯酚 10.0

注射用中链油 100

蛋黄卵磷脂 12

维生素 E 10

甘油 25

EDTA 5 注射用水 定容至 1000ml 制备工艺

(1) 在 70°C水浴及氮气保护下， 用 100g注射用油将 12g蛋黄卵磷脂完全 溶解， 加入 10g 二联苯酚和 10g维生素 E， 通入氮气保护， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

(2) 将 25g甘油和 5gEDTA溶解于注射用水中， 搅拌均勾得水相；

(3)将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。 (4)将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115°C高压灭菌， 制得终产品 t

实施例 6 30%沙棘油的脂微球制剂

药物及其辅料 用量 (g)

二联苯酚 10.0

注射用沙棘油 300

蛋黄卵磷脂 12

维生素 E 10

甘油 25

EDTA 5 注射用水 定容至 1000ml 制备工艺

(1) 在 70°C水浴及氮气保护下， 用 300g注射用油将 12g蛋黄卵磷脂完全 溶解， 加入 10g 二联苯酚和 10g维生素 E， 通入氮气保护， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

(2) 将 25g甘油和 5gEDTA溶解于注射用水中， 搅拌均勾得水相；

(3)将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

(4)将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115°C高压灭菌， 制得终产品 t

实施例 7 10%茶油的脂微球制剂

药物及其辅料 用量 (g)

二联苯酚 10.0

注射用茶油 100

蛋黄卵磷脂 12

维生素 E 10

甘油 25

EDTA 5 注射用水 定容至 1000ml 制备工艺

( 1 ) 在 70°C水浴及氮气保护下， 用 100g注射用油将 12g蛋黄卵磷脂完全 溶解， 加入 10g 二联苯酚和 10g维生素 E， 通入氮气保护， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

(2) 将 25g甘油和 5gEDTA溶解于注射用水中， 搅拌均勾得水相；

(3 )将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

(4)将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115°C高压灭菌， 制得终产品。

第三部分不同乳化剂种类和含量制备的脂微球 制剂

实施例 8 1%蛋黄卵磷脂的脂微球制剂

药物及其辅料 用量 ( g)

二联苯酚 10. 0

注射用大豆油 100

蛋黄卵磷脂 10

维生素 E 10

甘油 25

EDTA 5 注射用水 定容至 1000ml 制备工艺

( 1 ) 在 70°C水浴及氮气保护下， 用 100g注射用油将 10g蛋黄卵磷脂完全 溶解， 加入 10g 二联苯酚和 10g维生素 E， 通入氮气保护， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

(2) 将 25g甘油和 5gEDTA溶解于注射用水中， 搅拌均勾得水相；

(3 )将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

(4)将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115°C高压灭菌， 制得终产品。

实施例 9 1.5%大豆卵磷脂的脂微球制剂 药物及其辅料 用量 ( g) 二联苯酚 10. 0

注射用大豆油 300

大豆卵磷脂 15

维生素 E 10

甘油 25

EDTA 5

注射用水 定容至 1000ml 制备工艺

( 1 ) 在 70°C水浴及氮气保护下， 用 lOOg注射用油将 15g大豆卵磷脂完全 溶解， 加入 10g 二联苯酚和 10g维生素 E， 通入氮气保护， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

(2) 将 25g甘油和 5gEDTA溶解于注射用水中， 搅拌均勾得水相；

( 3 )将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

(4)将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115 °C高压灭菌， 制得终产品

实施例 10 1.2%氢化卵磷脂的脂微球制剂

药物及其辅料 用量 ( g)

二联苯酚 10. 0

注射用大豆油 100

氢化卵磷脂 12

维生素 E 10

甘油 25

EDTA 5

注射用水 定容至 1000ml 制备工艺

( 1 ) 在 70°C水浴及氮气保护下， 用 lOOg注射用油将 12g氢化卵磷脂完全 溶解， 加入 10g 二联苯酚和 10g维生素 E， 通入氮气保护， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

(2) 将 25g甘油和 5gEDTA溶解于注射用水中， 搅拌均勾得水相；

( 3 )将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

(4)将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115 °C高压灭菌， 制得终产品。

实施例 11 1.2%人工合成磷脂的脂微球制剂

药物及其辅料 用量 ( g)

二联苯酚 10. 0

注射用大豆油 100

人工合成磷脂 12

维生素 E 10

甘油 25

EDTA 5

注射用水 定容至 1000ml 制备工艺

( 1 ) 在 70°C水浴及氮气保护下， 用 100g注射用油将 12g人工合成磷脂完 全溶解， 加入 10g 二联苯酚和 10g维生素 E， 通入氮气保护， 加热搅拌使其溶 解， 得油相；

(2) 将 25g甘油和 5gEDTA溶解于注射用水中， 搅拌均勾得水相；

( 3 )将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

(4)将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115 °C高压灭菌， 制得终产品。

第四部分不同抗氧化剂的种类和用量制备的脂 微球制剂

实施例 12 0.5%维生素 E的脂微球制剂

药物及其辅料 用量 （g)

二联苯酚 10. 0

注射用大豆油 100 蛋黄卵磷脂 12 维生素 E 5

甘油 25 EDTA 5

注射用水 定容至 1000ml 制备工艺

( 1 ) 在 70°C水浴及氮气保护下， 用 lOOg注射用油将 12g蛋黄卵磷脂完全 溶解， 加入 10g 二联苯酚和 5g维生素 E， 通入氮气保护， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

(2) 将 25g甘油和 5gEDTA溶解于注射用水中， 搅拌均勾得水相；

( 3 )将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

(4)将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115 °C高压灭菌， 制得终产品。

实施例 13 1%抗坏血酸的脂微球制剂

药物及其辅料 用量 ( g)

二联苯酚 10. 0

注射用大豆油 100

蛋黄卵磷脂 12

抗坏血酸 10

甘油 25

EDTA 5

注射用水 定容至 1000ml 制备工艺

( 1 ) 在 70°C水浴及氮气保护下， 用 lOOg注射用油将 12g蛋黄卵磷脂完全 溶解， 加入 10g 二联苯酚， 通入氮气保护， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

(2) 将 25g甘油、 5gEDTA和 10g抗坏血酸溶解于注射用水中， 搅拌均勾 得水相；

( 3 )将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

(4)将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115 °C高压灭菌， 制得终产品。

实施例 14 1%亚硫酸氢钠的脂微球制剂

药物及其辅料 用量 ( g)

二联苯酚 10. 0

注射用大豆油 100

蛋黄卵磷脂 12

亚硫酸氢钠 10

甘油 25

EDTA 5

注射用水 定容至 1000ml 制备工艺

( 1 ) 在 70°C水浴及氮气保护下， 用 100g注射用油将 12g蛋黄卵磷脂完全 溶解， 加入 10g 二联苯酚， 通入氮气保护， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

(2) 将 25g甘油、 5gEDTA和 10g亚硫酸氢钠溶解于注射用水中， 搅拌均 勾得水相；

( 3 )将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

(4)将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115 °C高压灭菌， 制得终产品。

第五部分不同附加剂含量制备的脂微球制剂

实施例 15 含 1.5%甘油和 0.3%EDTA的脂微球制剂

药物及其辅料 用量 ( g)

二联苯酚 10. 0

注射用大豆油 100

蛋黄卵磷脂 12

维生素 E 10

甘油 15 EDTA 3

注射用水 定容至 1000ml 制备工艺

( 1 ) 在 70°C水浴及氮气保护下， 用 lOOg注射用油将 12g蛋黄卵磷脂完全 溶解， 加入 10g 二联苯酚和 10g维生素 E， 通入氮气保护， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

(2) 将 15g甘油和 3gEDTA溶解于注射用水中， 搅拌均勾得水相；

(3 )将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

(4)将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115°C高压灭菌， 制得终产品。

实施例 16 含 2%甘油和 1%EDTA的脂微球制剂

药物及其辅料 用量 ( g)

二联苯酚 10. 0

注射用大豆油 100

蛋黄卵磷脂 12

维生素 E 10

甘油 20

EDTA 10 注射用水 定容至 1000ml 制备工艺

( 1 ) 在 70°C水浴及氮气保护下， 用 100g注射用油将 12g蛋黄卵磷脂完全 溶解， 加入 10g 二联苯酚和 5g维生素 E， 通入氮气保护， 加热搅拌使其溶解， 得油相；

(2) 将 20g甘油和 lOgEDTA溶解于注射用水中， 搅拌均勾得水相；

(3 )将油相缓慢地加入水相中， 同时氮气保护下进行剪切 （10000r,5min) , 得到初乳,用氢氧化钠调节 pH至 8.0左右。

(4)将制备好的初乳， 在 800〜900bar的压力下均质 5〜8次， 微孔滤膜过 滤， 充氮， 灌封， 115°C高压灭菌， 制得终产品。 实施例 17、 配方雌试验

1、 注射用油的选择

本实验分别采用了大豆油、中链油、沙棘油和 茶油分别制备二联苯酚的脂微 球制剂， 终乳外观均勾良好， 均未出现分层及漂油现象， 分别取制成的脂微球注 射液 lml,稀释 1000倍， 用美国 Marvlen公司的激光动态光散射仪检测粒径。 结 果显示， 以上注射用油制得微粒径均勾， 70%的粒径小于 500nm,100%的粒径小 于 1μηι，符合静脉注射用脂微球制剂的相关要� �。其中，以大豆油及中链油最优， 90%的粒径小于 500nm， 100%的粒径小于 1μηι。

2、 乳化剂的选择

本实验分别采用蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢 化卵磷脂作为制备二联苯酚的 脂微球制剂， 终乳外观均勾良好， 均未出现分层及漂油现象， 分别制成的脂微球 注射液 lml,稀释 1000倍， 用美国 Marvlen公司的激光动态光散射仪检测粒径。 结果显示， 以上注射用油制得微粒径均勾， 70%的粒径小于 500nm,100%的粒径 小于 1μηι， 符合静脉注射用脂微球制剂的相关要求。

3、 等渗调节剂的选择

本实验选用甘油作为等渗调节剂， 以保证脂微球制剂在人体内等渗，渗透压 计（冰点下降法）测定各终乳渗透压为 300〜400m0sm/L,符合静脉注射用脂微球 制剂的相关要求。

4、 抗氧化剂

本实验选用抗氧化剂维生素 E， 以防止氧化而导致性状不稳定。所得终乳外 观均勾良好， 均未出现分层及漂油现象， 分别取制成的脂微球注射液 lml， 稀释 1000倍， 用美国 Marvlen公司的激光动态光散射仪检测粒径。 结果显示， 以上 注射用油制得微粒径均勾， 70%的粒径小于 500nm,100%的粒径小于 1μηι， 符合 静脉注射用脂微球制剂的相关要求。

5、 络合剂

本实验在脂微球制备中选用常用离子络合剂 EDTA， 以减少微球中游离阳离 子的浓度， 帮助提高脂微球制剂的稳定性。所得终乳外观 均勾良好， 均未出现分 层及漂油现象， 分别取制成的脂微球制剂 lml， 稀释 1000倍， 用美国 marvlen 公司的激光动态光散射仪检测粒径。结果显示 ，以上注射用油制得微球粒径均勾， 70%的粒径小于 500nm， 100%的粒径小于 1μηι， 符合静脉注射用脂微球制剂的 相关要求。

以下通过对上述实施例制备的脂微球制剂迸 行理化 ft 及安全性检测试验. 试验例 1本发明药物稳定性检测

我们对本发明部分实施例制备的二联苯酚脂微 球制剂于 4°C放置 6个月、高 温 45 °C放置 6个月、 室温放置 12个月后， 检测样品的外观、 pH及包封率， 考 察本品的稳定性， 结果见表 1。

表 1本发明制备的二联苯酚脂微球制剂的稳定性� �察结果 时 外观 pH 包封率 （％) 间 4°C 25 °C 45 °C 4°C 25 °C 45 °C 4°C 25 °C 45 °C

0月 均一 均一 均一 7. 85 7. 86 7. 84 98. 45 98. 35 98. 46

1月 均一 均一 均一 7. 74 7. 71 7. 68 98. 45 98. 38 98. 45

2月 均一 均一 均一 7. 66 7. 64 7. 55 98. 40 98. 36 98. 44

3月 均一 均一 均一 7. 54 7. 66 7. 46 98. 41 98. 37 98. 45

6月 均一 均一 均一 7. 32 7. 52 7. 29 98. 38 98. 25 98. 36

9月 均一 7. 48 98. 26

12月 均一 7. 31 98. 23

0月 均一 均一 均一 7. 94 7. 84 7. 91 98. 54 98. 38 98. 44

1月 均一 均一 均一 7. 80 7. 73 7. 82 98. 39 98. 44 98. 54

2月 均一 均一 均一 7. 74 7. 66 7. 60 98. 39 98. 45 98. 33

3月 均一 均一 均一 7. 62 7. 62 7. 47 98. 64 98. 38 98. 31

6月 均一 均一 均一 7. 39 7. 53 7. 33 98. 55 98. 31 98. 35

9月 均一 7. 44 98. 34

12月 均一 7. 28 98. 29 实施 0月 均 均一 均一 7. 88 7. 92 7. 93 99. 12 98. 85 98. 65 例 6 1月 均 均一 均一 7. 86 7. 85 7. 80 98. 57 98. 74 98. 37 2月 均一 均一 均一 7. 79 7. 81 7. 74 98. 65 98. 75 98. 29

3月 均一 均一 均一 7. 68 7. 75 7. 63 98. 36 98. 63 98. 54

6月 均一 均一 均一 7. 59 7. 62 7. 44 98. 54 98. 68 98. 47

9月 均一 7. 46 98. 58

12月 均一 7. 31 98. 71

0月 均一 均一 均一 7. 87 7. 93 7. 89 99. 02 98. 99 98. 66

1月 均一 均一 均一 7. 80 7. 82 7. 80 98. 72 98. 47 98. 87

9月 均一 7. 45 98. 63

12月 均一 7. 30 98. 42

0月 均一 均一 均一 8. 03 7. 96 7. 88 99. 03 98. 69 98. 42

1月 均一 均一 均一 7. 98 7. 88 7. 85 98. 72 98. 77 98. 68

2月 均一 均一 均一 7. 78 7. 75 7. 73 98. 33 98. 64 实施

3月 均一 均一 均一 7. 72 7. 68 7. 65 98. 34 98. 58 98. 62 例 12

6月 均一 均一 均一 7. 55 7. 47 7. 41 98. 65 98. 79 98. 79

9月 均一 7. 42 98. 99 0 0

12月 均一 7. 36 98. 45

0月 均一 均一 均一 7. 96 7. 84 7. 94 99. 62 98. 64 98. 41

1月 均一 均一 均一 7. 90 7. 80 7. 78 98. 54 98. 84 98. 89

2月 均一 均一 均一 7. 84 7. 76 7. 68 98. 80 98. 62 99. 03 实施

3月 均一 均一 均一 7. 75 7. 71 7. 60 98. 67 98. 87 98. 74 例 16

6月 均一 均一 均一 7. 60 7. 58 7. 24 98. 43 98. 59 98. 66

9月 均一 7. 51 98. 44

12月 均一 7. 29 98. 63 由表 1可见， 采用本发明制备的脂微球稳定性良好。 低温 4°C放置 6个月、 高温 45 °C放置 6个月、室温 25 °C放置 12个月后， 样品的外观、及包封率均无明 显变化， pH有一定程度下降， 但不影响制剂稳定性。 上述实验中，仅列出本发明部分实施例，本发 明其他实施例都具有上述相同 或者相近的有益效果。

综上结果可知，采用本发明制备的脂微球制剂 稳定性良好，可达到国家新药 研究技术指导原则中关于制剂稳定性的要求。

试验例 2本发明药物的质量控制

本发明中二联苯酚含量测定方法， 采用高效液相色谱法测定二联苯酚的含 量。 方法： 采用 C18柱 (4.6mmx200mm,5 m) ，以甲醇〜乙腈〜水 ( 60:22: 18 ) 为流动相， 流速 l .Oml/min,紫外检测波长 275nm。 结果： 平均回收率 99.35%， RSD=0.75% (n=l l ) ，二联苯酚在 l〜10(^g/ml范围内浓度与峰面积呈良好线性 关系， r=0.9999。

试验例 3本发明药物脂微球制剂包封率的测定

以二联苯酚为指标:采用超速离心法离心脂微� �制剂， lOOOOr/min,离心 30mitv 取上层清液 0.5ml,用异丙醇溶解， 以高效液相色谱法测定二联苯酚含量， 可确定 被包封的二联苯酚含量 M _{l t)} 脂微球制剂中二联苯酚总量为 M _Q ， 按下式计算二联 苯酚脂微球制剂对二联苯酚的重量包封率 Q。

结果以二联苯酚为指标， 本发明所制备的静脉脂微球制剂包封率均大于 98%。

试验例 4本发明药物无菌检査

取以本发明方法自制脂微球制剂，按照无菌检 查法（中国药典 2010版附录) 检查， 以本发明方法制备的脂微球制剂无菌检查合格 。

试验例 5本发明药物热源检査

取以本发明方法自制脂微球制剂，按照热原检 查法（中国药典 2010版附录) 检查， 以本发明方法制备的脂微球制剂热原检查合格 。

试验例 6本发明药物过敏性试验

实验方法： 将豚鼠按体重随机分为 3组， 每组 8只， 1,2两组豚鼠间日一次， 连续三次腹腔注射二联苯酚注射用脂微球制剂 0.5ml/只致敏， 1， 2两组分别于第 一次腹腔注射后的 14天及 21天足趾静脉注射二联苯酚注射用脂微球制剂 1.0ml/ 只激发； 第 3组豚鼠间日一次， 连续三次腹腔注射 20%鸡蛋清夜 0.5ml/只致敏， 于注射后的 14 天足趾静脉注射鸡蛋清液 1.0ml/只激发， 三组均在激发注射后 15min内观察过敏反应症状。

实验结果： 注射二联苯酚脂微球制剂的两组豚鼠分别于第 一次腹腔注射后 14天和第 21天用原药液进行攻击均未出现过敏性反应； 而阳性对照组豚鼠于注 射后 2min内出现呼吸困难，抽搐倒下，而后死亡，� �鼠死亡均发生在注射后 1〜 3min内。

实验结论:在本次实验条件下，二联苯酚脂微� �制剂对受试豚鼠无致敏作用。 试验例 7本发明药物溶血性试验

实验方法：取试管七支， 1〜5管分别加入 0.1ml、 0.2ml、 0.3ml、 0.4ml、 0.5ml 的二联苯酚脂微球制剂， 并用 10%葡萄糖注射液稀释至 2.5ml, 6号试管中加入 10%葡萄糖注射液 2.5ml、 7号试管中加入蒸馏水 2.5ml (完全溶血对照)。 最后每 管均加入 2%兔红细胞悬液 2.5ml， 轻轻摇勾， 置 37 摄氏度水浴中， 分别记录 15min、 30min、 45min、 lh、 2h、 3h、 4h各管的溶血和凝集情况。

实验结果： 二联苯酚脂微球制剂 1〜5管在 4小时内均未引起溶血和凝集反 应。

实验结论： 本实验条件下， 二联苯酚脂微球制剂对兔红细胞无溶血和凝集 反 应。

实验例 8本发明药物剌激性实验

实验方法： 取新西兰兔 2只，均于左耳缘静脉缓慢注射二联苯酚脂微� �制剂 5ml/kg。 右耳缘静脉缓慢注射 10%葡萄糖注射液 5ml/kg,每天一次， 连续注射五 天， 于注射第一天开始， 每天观察注射部位有无水肿、 红斑， 末次注射后 24小 时， 从耳根剪下耳朵置 10%甲醛溶液中固定， 然后作病理切片检查。

实验结果： 二联苯酚脂微球制剂给兔耳缘静脉每日注射一 次， 连续五日， 2 只兔耳注射部位未见有水肿和红斑的发生。病 理组织学观察，兔耳表皮结构正常。 表皮下乳头层及网织层无炎细胞渗出、无出血 ， 血管内无血栓形成。 附件结构正 常。

实验结论： 二联苯酚脂微球制剂对兔耳缘静脉血管无剌激 性。 以下通过对上述实施例制备的脂微球制剂迸行 癲痫疗效的动物模型验证试验。 实验分为模型组、 对照组 （CMC-Na-二联苯酚组）、 给药组 1、 给药组 2、 给 药组 3共五组， 每组各 20只昆明小鼠。 实验例 1 不同浓度二联苯酚脂微球制剂对抗 PTZ致痫小鼠的药效学实验 实验分为 5 组， 给药方式、 给药种类和给药剂量如下表， 给药 1 小时后 PTZ (75mg/kg) 腹腔注射造模， 结果如下表：

给药剂

发作级别

给药 有效率 分组 给药种类 里

方式 ΠΙ)

(mg/kg) 0 I II III IV V 模型组

静脉 空白脂微球 100 0 0 0 0 18 2 0

(n=20) 对照组 CMCNa-二联

灌胃 100 0 0 0 2 18 0 10% (n=20) 苯酚 给药组 二联苯酚脂微

静脉 100 20 0 0 0 0 0 100% l(n=20) 球 给药组 二联苯酚脂微

静脉 50 20 0 0 0 0 0 100% 2(n=20) 球 给药组 二联苯酚脂微

静脉 20 15 3 2 0 0 0 100% 3(n=20) 球 发作级别 照 Racine标 瘫痫模型动物进 fi «H0级 无反应 I级 节律性嘴或面部抽动 Π级 点头或者通尾 m级单肢抽动 IV级 多肢抽动或强直 V级全面性强直 -陣发作）

实验例 2不同浓度二联苯酚脂微球制剂对抗荷包牡丹� �致痫小鼠的药效学实验 实验分为 5 组， 给药方式、 给药种类和给药剂量如下表， 给药 1 小时后 Bic (2.7mg/kg) 皮下注射造模， 结果如下表： 给药剂

发作级别

给药 有效率 分组 给药种类 里

方式 ΠΙ)

(mg/kg) 0 I II III IV V 模型组

静脉 空白脂微球 等体积 0 0 0 0 0 0 0%

(n=20) 对照组 CMCNa-二联

灌胃 100 0 0 0 0 4 4 40% (n=20) 苯酚 给药组 二联苯酚脂微

静脉 100 20 0 0 0 0 0 100% l(n=20) 球 给药组 二联苯酚脂微

静脉 50 12 1 2 3 2 0 100% 2(n=20) 球 给药组 二联苯酚脂微

静脉 20 10 2 3 4 1 0 100% 3(n=20) 球 荷包牡舰 (Bic)模型冊标准：滅型造概亡率为 100%, 故给药后 亡即为有效。

实验例 3不同浓度二联苯酚脂微球制剂对抗 3-巯基丙酸致痫小鼠的药效学实验 实验分为 5组， 给药方式、 给药种类和给药剂量如下表， 给药 1 小时后 3-MP (60mg/kg) 皮下注射造模， 结果如下表：

给药剂量 发作级别

有效率 分组 给药方式 给药种类

(mg/kg) «III)

0 I II III 模型组 (n=20) 静脉 空白脂微球 等体积 0 0 0 20 0% 对照组 (n=20) 灌胃 CMCNa-二联苯酚 100 1 1 3 15 25% 给药组 l(n=20) 静脉 二联苯酚脂微球 100 20 0 0 0 100% 给药组 2(n=20) 静脉 二联苯酚脂微球 50 20 0 0 0 100% 给药组 3( _n =20) 静脉 二联苯酚脂微球 20 18 0 1 1 95%

3-巯基丙酸 (3-MP)模型冊标准： I潜伏期 II »性惊厥发作（前肢 III强直性惊厥发作（后 肢强直）

方给

式药

实验例 4不同浓度二联苯酚脂微球制剂对抗电击致痫� �鼠的药效学实验 实验分为 5组， 给药方式、 给药种类和给药剂量如下表， 给药 1小时后 MES 模， 结果如下表- 给药剂量 发作级别

分组 给药方式 给药种类 对抗有效率

(mg/kg)

未发作 发作 模型组 (n=20) 静脉 空白脂微球 等体积 20 对照组 (n=20) 灌胃 CMCNa-二联苯酚 100 18 给药组 1(η=20) 静脉 二联苯酚脂微球 100 给药组 2 =20) 静脉 二联苯酚脂微球 50 给药组 3 =20) 静脉 二联苯酚脂微球 20 电击发作（MES)模型评价标准： 以动物是否出现四肢强直作为评价标准。 实验例 5不同浓度二联苯酚脂微球制剂对抗青霉素致� �小鼠的药效学实验 实验分为 5组，给药方式、给药种类和给药剂量如下表� �给药 1小时后青霉素 (600 万 U/kg)腹腔注射造模， 结果如下表： 给药剂

发作级别

有效率 分组 给药种类

ΠΙ)

(mg/kg) I II III IV V 模型组

静脉 空白脂微球 等体积 0 0 0 0 2 18 0%

(n=20) 对照组 CMCNa-二联

灌胃 100 0 1 2 1 3 13 20%

(n=20) 苯酚 给药组 二联苯酚脂微

静脉 100 18 2 0 0 0 0 100% l(n=20) 球 给药组 二联苯酚脂微

静脉 50 18 1 1 0 0 0 100% 2(n=20) 球 给药组 二联苯酚脂微

静脉 20 15 2 0 1 1 1 90% 3(n=20) 球 青霉素发作级别 照 Racine标？ |Χί瘫痫模型动物进 fi ^HO级 无反应 I级 节律性嘴或面 部抽动 Π级 点头或者思尾 m级单肢抽动 IV级 多肢抽动或强直 V级全面性强直 -陣发作） 实验结果表明： 二联苯酚脂微球制剂较 CMC-Na-二联苯酚的药效有了几倍 甚至十几倍的提高。 从以上结果可以看出， 采用本发明制备的脂微球制剂安全可靠， 无过敏性、 溶血性及剌激性， 符合临床用药的相关要求。

上述实验例中选用本发明实施例 1作为实验用药，本发明其他配方制备的制 剂都具有和实施例 1相同或者相近的效果。

对采用本发明方法制备的脂微球制剂进行了过 敏性、 溶血性及剌激性实验， 实验结果表明，本发明制备的脂微球制剂稳定 性强，无过敏性、溶血性及剌激性， 符合临床用药的相关要求。