ZHANG ZHENGPING (CN)
FENG LIN (CN)
DONG QINGLI (CN)
LI FULONG (CN)
WANG LEI (CN)
ZHANG BOYU (CN)
YANG SHIBAO (CN)
| ES2277741A1 | 2007-07-16 |
北京集佳知识产权代理有限公司 (CN)
| 权 利 要 求 1.一类如式 I所示的化合物或其药学上可接受的盐， 0 R N H2 R1、、,人, Υ人 Υ丄 R2H R5 R3 式 I 其中， R选自芳基或杂芳基， 所述芳基或杂芳基的环上任选位置被卤 素原子、 羟基、 巯基、 氨基、 硝基、 氰基、 芳基、 杂芳基、 d-do烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链婦基或 C2-C8炔基取代， 其中任选两个位置的取代 基可以合起来构成脂肪环、杂环、芳环或杂芳环， 所述 d-Cu)烷基、 C3-C8 环烷基、 C2-C8链婦基或 C2-C8炔基中的任选 -CH2-可被一个或多个 -0-、-S -、 -S02-、 -C(O)-或 /和 -NR6-置换， 所述 d-do烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链 婦基或 c2-c8炔基中的任意位置氢可被一个或多个卤素原子、氛基、硝基、 杂脂环基、 羟基、 -NR8R9取代； X选自 -0-, -NR7-; R8和 R9独立选自氢、 CrC8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8 炔基， 或者 R8和 R9合起来形成一个 5至 9个环原子的杂脂环基； R6和 R7独立选自氢、 -C8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基、 C2-C8 炔基； R1选自氢、 羟基、 芳基、 杂芳基、 CrC8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8 链烯基或 C2-C8炔基，所述 CrC8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8 炔基中的任选 -CH2-可被一个或多个 -0-、 -S -、 -S02-、 -C(O)-或 /和 -NR6-置 换， 所述 d-C8烷基、 c3-c8环烷基、 c2-c8链烯基或 c2-c8炔基中的任意 位置氢可被一个或多个卤素原子、 氛基、 硝基、 芳基、 杂芳基、 -NR8R9 取代； R2选自氢、 卤素原子、 硝基、 氨基、 羟基、 三卤烷基、 d-C8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8炔基，所述 -C8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8炔基中的任选 -CH2-可被一个或多个 -0-、 -S -、 -S02-、 -C(O)-或 /和 -NR6-置换， 所述 CrC8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8炔基中的任意位置氢可被一个或多个卤素原子、氛基、硝基、 -NR8R9 取代； R3选自氢、 CrC8烷基或 C3-C8环烷基， 所述 CrC8烷基或 C3-C8环烷 基中的任选 -CH2-可被一个或多个 -0-、 -S -、 -S02-、 -C(O)-或 /和 -NR6-置换， 所述 CrC8烷基或 C3-C8环烷基中的任意位置氢可被一个或多个 素原 子、 氰基、 硝基、 -NR8R9取代； R4和 R5独立选自 -C8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8 炔基， 所述 d-C8烷基、 c3-c8环烷基、 c2-c8链烯基或 c2-c8炔基中的任 选 -CH2-可被一个或多个 -0-、 -S -、 -S02-、 -C(O)-或 /和 -NR6-置换， 所述 d-c8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链婦基或 C2-C8炔基中的任意位置氢可 被一个或多个卤素原子、 氛基、 硝基、 芳基、 杂芳基、 -NR8R9取代。 2. 根据权利要求 1所述的化合物或其药学上可接受的盐， 其特征在 于， 其中所述 R选自 C6-C12芳基或 C3-C12杂芳基， 所述芳基或杂芳基的环上任选 位置被卤素原子、 氨基、 硝基、 氰基、 C6-C12芳基、 C3-C12杂芳基、 c c8 烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8炔基取代， 其中任选两个位置 的取代基可以合起来构成脂肪环、杂环、芳环或杂芳环，所述 crc8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链婦基或 C2-C8炔基中的任选 -CH2-可被一个或多个 -0-、 -S -、 -S02-、 -C(O)-或 /和 -NR6-置换， 所述 d-C8烷基、 C3-C8环烷基、 c2-c8链烯基或 c2-c8炔基中的任意位置氢可被一个或多个 素原子、 氰 基、 羟基、 -NR8R9取代； X选自 -0-, -NR7-; R8和 R9独立选自氢、 d-C8烷基、 C3-C8环烷基， 或者 R8和 R9合起 来形成一个 5至 9个环原子的杂脂环基； R6和 R7独立选自氢、 CrC8烷基、 C3-C8环烷基； R1选自 d-C8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8炔基， 所述 C Cs烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8炔基中的任选 -CH2-可被 一个或多个 -0-、 -S -、 -C(O)-或 /和 -NR6-置换， 所述 -C8烷基、 C3-C8环 烷基、 C2-C8链烯基或 02-08炔基中的任意位置氢可被一个或多个卤素原 子、 氛基、 硝基、 C6-C12芳基、 C3-C12杂芳基、 -NR8R9取代； R2选自！ ¾素原子、 d-C8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8 炔基， 所述 d-C8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8炔基中的任 选 -CH2-可被一个或多个 -0-、 -S-或 /和 -NR6-置换， 所述 d-C8烷基、 C3-C8 环烷基、 C2-C8链婦基或 C2-C8炔基中的任意位置氢可被一个或多个卤素 原子、 氰基、 -NR8R9取代； R3选自氢、 CrC8烷基或 C3-C8环烷基， 所述 CrC8烷基或 C3-C8环烷 基中的任选 -CH2-可被一个或多个 -0-、 -S -、 -C(O)-或 /和 -NR6-置换， 所述 CrC8烷基或 C3-C8环烷基中的任意位置氢可被一个或多个 素原子取代； R4和 R5独立选自 d-C4烷基、 C3-C4环烷基、 C2-C4链婦基或 C2-C4 炔基， 所述 crc4烷基、 c3-c4环烷基、 c2-c4链烯基或 c2-c4炔基中的任 选 -CH2-可被一个或多个 -0-、 -S -、 -S02-、 -C(O)-或 /和 -NR6-置换， 所述 d-C4烷基、 C3-C4环烷基、 C2-C4链烯基或 C2-C4炔基中的任意位置氢可 被一个或多个卤素原子、氰基、硝基、 C6-C12芳基、 C3-C12杂芳基、 -NR8R9 取代。 3. 根据权利要求 1所述的化合物或其药学上可接受的盐， 其特征在 于， 其中所述 R选自 C6-C12芳基或 C3-C12杂芳基， 所述芳基或杂芳基的环上任选 位置被 [¾素原子、 硝基、 氛基、 -C8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基 或 c2-c8炔基取代， 其中任选两个位置的取代基可以合起来构成脂肪环、 杂环、 芳环或杂芳环， 所述 CrC8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8炔基中的任选 -CH2-可被一个或多个 -0-、 -S -、 -S02-、 -C(O)-或 /和 -NR6-置换， 所述 CrC8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8炔基中 的任意位置氢可被一个或多个卤素原子、 氛基、 -NR8R9取代； X为选自 -0-, -NR7-; R8和 R9独立选自氢、 CrC8烷基、 C3-C8环烷基， 或者 R8和 R9合起 来形成一个 5至 9个环原子的杂脂环基； R6选自氢、 CrC8烷基、 C3-C8环烷基； R7选自氢、 CrC8烷基； R1选自 d-C8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8炔基， 所述 C Cs烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8炔基中的任选 -CH2-可被 一个或多个 -0-、 -S -、 -C(O)-或 /和 -NR6-置换， 所述 -C8烷基、 C3-C8环 烷基、 C2-C8链烯基或（¾-08炔基中的任意位置氢可被一个或多个卤素原 子、 氛基、 C6-C12芳基、 C3-C12杂芳基、 -NR8R9取代； R2选自 -C8烷基或 C3-C8环烷基， 所述 CrC8烷基或 C3-C8环烷基 中的任选 -CH2-可被一个或多个 -0-、 -S-或 /和 -NR6-置换， 所述 CrC8烷基 或 C3-C8环烷基中的任意位置氢可被一个或多个 素原子、 -NR8R9取代； R3选自氢、 d-C8烷基； R4和 R5独立选自 CrC4烷基、 C2-C4链烯基或 C2-C4炔基，所述 C C4 烷基、 C2-C4链婦基或 C2-C4炔基中的任选 -CH2-可被一个或多个 -0-、 -S -、 -S02-或 /和 -C(O)-置换， 所述 d-C4烷基、 c2-c4链烯基或 c2-c4炔基中的 任意位置氢可被一个或多个 素原子取代。 4. 根据权利要求 1所述的化合物或其药学上可接受的盐， 其特征在 于， 其中所述 R选自苯基或 C3-C6杂芳基， 所述苯基或杂芳基的环上任选位置被卤 素原子、 硝基、 氛基、 CrC8烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8炔基取代， 其中 两个相邻取代基可以合起来构成脂肪环、杂环、芳环或杂芳环，所述 CrC8 烷基、 C2-C8链婦基或 C2-C8炔基中的任选 -CH2-被一个或多个 -0-、 -S -、 -S02-、 -C(O)-或 /和 -NR6-置换， 所述 CrC8烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8炔 基中的任意位置氢可被一个或多个卤素原子、 氛基、 -NR8R9取代； X为 -0-； R8和 R9独立选自氢、 d-C8烷基、 C3-C8环烷基， 或者 R8和 R9合起 来形成一个 5至 9个环原子的杂脂环基； R6选自氢、 CrC8烷基、 C3-C8环烷基； R1选自 d-C8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8炔基， 所述 C Cs烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8链烯基或 C2-C8炔基中的任选 -CH2-可被 一个或多个 -0-、 -S-或 /和 -NR6-置换，所述 d-C8烷基、 C3-C8环烷基、 C2-C8 链烯基或 C2-C8炔基中的任意位置氢可被一个或多个 素原子、 氛基、 -NR8R9取代； R2选自三卤烷基、 d-C8烷基； R3选自氢、 C C4烷基； R4和 R5独立选自 d-C4烷基， 所述 CrC4烷基中的任选 -CH2-可被一 个或多个 -0-、 -S -、 -S02-或 /和 -C(O)-置换， 所述 CrC4烷基中的任意位置 氢可被一个或多个! ¾素原子取代。 5. 根据权利要求 1所述的化合物或其药学上可接受的盐， 其特征在 于， 其中所述 R选自苯基或 C3-C6杂芳基， 所述苯基或杂芳基的环上任选位置被卤 素原子、 硝基、 氛基、 CrC6烷基取代， 所述 CrC6烷基中的任选 -CH2-被 一个或多个 -0-、 -S -、 -C(O)-或 /和 -NR6-置换， 所述 CrC6烷基中的任意位 置氢可被一个或多个卤素原子、 氛基、 -NR8R9取代； X为 -0-； R8和 R9独立选自氢、 CrC8烷基、 C3-C6环烷基， 或者 R8和 R9合起 来形成一个 5至 9个环原子的杂脂环基； R6选自氢、 C Cs烷基、 C3-C6环烷基； R1选自 d-C8烷基、 C3-C6环烷基、 C2-C4链烯基或 C2-C4炔基， 所述 C Cs烷基、 C3-C6环烷基、 C2-C4链烯基或 C2-C4炔基中的任选 -CH2-可被 一个或多个 -0-、 -S -、 -C(O)-或 /和 -NR6-置换， 所述 -C8烷基、 C3-C6环 烷基、 c2-c4链烯基或 c2-c4炔基中的任意位置氢可被一个或多个 素原 子、 氰基、 -NR8R9取代； R2选自三卤曱基、 d-C6烷基； R3选自氢、 曱基、 乙基； R4和 R5独立选自 CrC4烷基。 6. 化合物或其药学上可接受的盐， 其特征在于， 所述化合物选自： 化合物 1 : 5-氨基 -7-乙基 -2,6-二曱基 -4-(3-硝基苯基) -1,4-2H-1,8-萘啶 -3-羧酸曱酯， 如 S1所示； 化合物 2: 5-氨基 -7-乙基 -4-(3-曱氧基苯基) -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘 啶 -3-羧酸乙酯， 如 S2所 化合物 3: 5-氨基 -7-乙基 -4-(2, 3 二氯苯基) -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8- 萘啶 -3-羧酸曱酯， 如 S3所示； 化合物 4: 5-氨基 -4-(3-硝基苯基) -2-曱基 -6-乙基 -7-丙基 -1,4-2H-1,8- 萘啶 -3-羧酸曱酯， 如 S4所示； S5 化合物 5: 5-氨基 -7-乙基 -2,6-二曱基 -4-(3-氯苯基 )-l,4-2H-l,8-萘啶 -3- 羧酸乙酯， 如 S5所示； 化合物 6: 5-氨基 -6-乙基 -2-曱基 -4-(4-氟苯基 )-7-丙基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3-羧酸乙酯， 如 S6所示； 化合物 7: 5-氨基 -4-(2-氯苯基 )-7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3- 羧酸异丙酯， 如 S7所示； 化合物 8: 5-氨基 -4-(2-氟苯基 )-7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3- 羧酸异丙酯， 如 S8所示； 化合物 9: 5-氨基 -4-(3-硝基苯基) -6-乙基 -2-曱基 -7-丙基 -1,4-2H-1,8- 萘啶 -3-羧酸异丙酯， 如 S9 示； S10 化合物 10: 5-氨基 -4-(2-氯苯基 )-7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3- 羧酸烯丙酯， 如 S10所 化合物 11 : 5-氨基 -4-(2-氯苯基 )-7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3- 羧酸 -2-曱氧基乙酯， 如 11所示； 化合物 12: 5-氨基 -4-(2-氟苯基 )-6-乙基 -2-曱基 -7-丙基 -1,4-2H-1,8-萘 啶 -3-羧酸烯丙酯， 如 S12所示； 化合物 13: 5-氨基 -4-(3-硝基苯基) -6-乙基 -2-曱基 -7-丙基 -1,4-2H-1,8- 萘啶 -3-羧酸 -2,2,2-三氟乙 化合物 14: 5-氨基 -4-(2-氟苯基 )-7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3- 羧酸 -2,2,2-三氟乙酯， 如 14所示； 化合物 15 : 5-氨基 -4-(2,3,4,5,6-五氟苯基） -7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3-羧酸- 化合物 16: 5-氨基 -4-(2-曱氧基苯基) -7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8- 萘啶 -3-羧酸-乙酯， 如 S 16所示； S17 化合物 17: 5-氨基 -4-(3-氟苯基 )-2,6-二乙基 -7-丙基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3- 羧酸-曱酯， 如 S17所示； 化合物 18 : 5-氨基 -4-(2-氯苯基）-2-三氟曱基 -6-曱基 -7-乙基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3-羧酸- 化合物 19: 5-氨基 -4-(3-三氟曱基苯基 )-7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8- 萘啶 -3-羧酸-乙酯， 如 S19所示 化合物 20: 5-氨基 -4-(3-氟苯基 )-7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3- 羧酸-炔丙酯， 如 S20所示； 化合物 21 : 5-氨基 -4-苯基 -7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3-羧酸 -环丙曱基酯， 如 S21所 S22 化合物 22: 5-氨基 -4-苯基 -7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3-羧酸 -氰乙基酯， 如 S22所示； 化合物 23: 5-氨基 -4- (嘧啶 -5-基) -7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3-羧酸-异丙酯， 如 S23所示。 7. 如权利要求 1 ~ 6中任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐 在制备钙离子通道抑制剂药物中的应用。 8. 如权利要求 1 ~ 6中任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐 在制备乙酰胆碱酯酶抑制剂药物中的应用。 9. 如权利要求 1 ~ 6中任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐 在制备调节钙体内稳态、治疗心血管疾病、脑血管疾病或痴呆药物中的应 用。 10. 根据权利要求 9所述的应用， 其特征在于， 所述痴呆为阿尔茨海 默病或血管性痴呆。 11. 一种药物组合物， 其特征在于， 包含权利要求 1 ~ 6中任意一项 所述化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。 |
本发明涉及药物化学领域，特别涉及一类 5-氨基 -1,4-二氢 -1,8-萘啶类 化合物或其药学上可接受的盐及包含该化合物 或其药学上可接受的盐的 药物组合物，涉及该类化合物或其药学上可接 受的盐及包含该化合物或其 药学上可接受的盐的药物组合物作为 L-型钙通道阻滞剂或 /和乙酰胆碱酯 酶抑制剂的应用，特备是在制备治疗心血管疾 病、脑血管疾病或痴呆药物 中的用途。 背景技术
阿尔茨海默病，是一种以慢性、进行性认知障 碍和记忆力损害为主的 中枢神经系统退行性疾病，主要病理特征表现 为老年斑、神经元纤维缠结 和神经元丟失，严重影响患者的认知、记忆、 语言功能及个人生活能力和 情感人格等。 目前，世界上较为接受的阿尔茨海默病病理为 "胆碱能缺失 学说"。 学说认为患者大脑内神经递质——乙酸胆碱的 缺失是导致阿尔茨 海默病的关键原因。
胆碱酯酶是生物神经传导中的一种关键性的酶 ，在胆碱能突触间，该 酶能够降解乙酰胆碱，终止神经递质对突触后 膜的兴奋作用，保证神经信 号在生物体内的正常传递。但是乙酰胆碱酯酶 由于能够催化乙酰胆碱的裂 解反应，会导致乙酰胆碱缺失，神经信号传递 失败，从而影响机体的认知、 记忆等功能。 目前多采用乙酰胆碱酯酶抑制剂来抑制胆碱酯 酶的活性，延 緩乙酰胆碱水解的速度，提高突触间隙乙酰胆 碱的水平，达到治疗阿尔茨 海默病的目的。
血管性痴呆是由各种脑血管疾病引起的获得性 智能损害综合征，临床 表现为记忆力、计算力、 注意力及执行功能等方面的智能衰退， 是仅次于 阿尔茨海默病的第二位最常见的痴呆原因。研 究人员认为，一种损伤机制 为： 脑梗死、 缺血缺氧性低灌注及出血性病变， 导致脑组织容积减少、 神 经元迟发性坏死，进而引起脑内乙酰胆碱能神 经受损，乙酰胆碱译放减少， 逐渐出现记忆障碍、 认知障碍、 社会和日常生活、 活动能力下降。 服用乙 酰胆碱酯酶抑制剂， 能有效地改善患者的认知功能、执行功能和日 常生活 能力。
血管性痴呆患者脑皮质神经元的另一损伤机制 是由于脑内钙内流增 加，导致学习和记忆功能下降。如果钙通道拮 抗剂如尼莫地平等进入脑组 织，与钙通道有关的受体可逆地与之结合，从 而抑制钙离子流入神经细胞， 就可以提高对缺血的耐受性，扩张脑血管和改 善脑供血，保护神经元， 有 效改善血管性痴呆患者的认知功能。
而目前尚无一种既能抑制乙酰胆碱酯酶活性， 又能阻滞细胞外钙离子 通过钙通道流入细胞的化合物， 因此， 研发此类化合物， 具有重要意义。 发明内容
本发明的目的是提供一种既能抑制乙酰胆碱酯 酶活性， 又能阻滞细 胞外钙离子通过钙通道流入细胞的化合物和药 物组合物及其作为 L-型钙 通道阻滞剂或 /和乙酰胆碱酯酶抑制剂的应用。
为解决上述技术问题， 本发明提供的技术方案为：
一类如式 I所示的 的盐，
其中， R选自芳基或杂芳基， 所述芳基或杂芳基的环上任选位置被卤 素原子、 羟基、 巯基、 氨基、 硝基、 氰基、 芳基、 杂芳基、 d-do烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链婦基或 C 2 -C ;fe基取代， 其中任选两个位置的取代 基可以合起来构成脂肪环、杂环、芳环或杂芳 环， 所述 d-Cu)烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链婦基或 C 2 -C 8 炔基中的任选 -CH 2 -可被一个或多个 -0-、-S -、 -S0 2 -、 -C(O)-或 /和 -NR 6 -置换， 所述 d-do烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链 婦基或 C 2 -C 8 炔基中的任意位置氢可被一个或多个卤素 原子、氛基、硝基、 杂脂环基、 羟基、 -NR 8 R 9 取代；
X选自 -0-, -NR 7 -;
R 8 和 R 9 独立选自氢、 d-C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基， 或者 R 8 和 R 9 合起来形成一个 5至 9个环原子的杂脂环基；
R 6 和 R 7 独立选自氢、 -C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基、 C 2 -C 8 炔基；
R 1 选自氢、 羟基、 芳基、 杂芳基、 C Cs烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基，所述 C r C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基中的任选 -CH 2 -可被一个或多个 -0-、 -S -、 -S0 2 -、 -C(O)-或 /和 -NR 6 -置 换， 所述 C r C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基中的任意 位置氢可被一个或多个卤素原子、 氛基、 硝基、 芳基、 杂芳基、 -NR 8 R 9 取代；
R 2 选自氢、 卤素原子、 硝基、 氨基、 羟基、 三卤烷基、 d-C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基，所述 C r C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基中的任选 -CH 2 -可被一个或多个 -0-、 -S -、 -S0 2 -、 -C(O)-或 /和 -NR 6 -置换， 所述 C r C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基中的任意位置氢可被一个或多个卤素 原子、氛基、硝基、 -NR 8 R 9 取代；
R 3 选自氢、 C r C 8 烷基或 C 3 -C 8 环烷基， 所述 C r C 8 烷基或 C 3 -C 8 环烷 基中的任选 -CH 2 -可被一个或多个 -0-、 -S -、 -S0 2 -、 -C(O)-或 /和 -NR 6 -置换， 所述 C r C 8 烷基或 C 3 -C 8 环烷基中的任意位置氢可被一个或多个 素原 子、 氛基、 硝基、 -NR 8 R 9 取代；
R 4 和 R 5 独立选自 -C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链婦基或 C 2 -C 8 炔基， 所述 d-C 8 烷基、 c 3 -c 8 环烷基、 c 2 -c 8 链烯基或 c 2 -c 8 炔基中的任 选 -CH 2 -可被一个或多个 -0-、 -S -、 -S0 2 -、 -C(O)-或 /和 -NR 6 -置换， 所述 C Cs烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基中的任意位置氢可 被一个或多个卤素原子、 氛基、 硝基、 芳基、 杂芳基、 -NR 8 R 9 取代。 作为优选， 上述化合物中，
R选自 C 6 -C 12 芳基或 C 3 -C 12 杂芳基， 所述芳基或杂芳基的环上任选 位置被卤素原子、 氨基、 硝基、 氰基、 C 6 -C 12 芳基、 C 3 -C 12 杂芳基、 C C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链婦基或 C 2 -C 8 炔基取代， 其中任选两个位置 的取代基可以合起来构成脂肪环、杂环、芳环 或杂芳环，所述 C r C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链婦基或 C 2 -C 8 炔基中的任选 -CH 2 -可被一个或多个 -0-、 -S -、 -S0 2 -、 -C(O)-或 /和 -NR 6 -置换， 所述 d-C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基中的任意位置氢可被一个或多个 素原子、 氰 基、 羟基、 -NR 8 R 9 取代；
X选自 -0-, -NR 7 -;
R 8 和 R 9 独立选自氢、 d-C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基， 或者 R 8 和 R 9 合起 来形成一个 5至 9个环原子的杂脂环基；
R 6 和 R 7 独立选自氢、 C r C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基；
R 1 选自 d-C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链婦基或 C 2 -C 8 炔基， 所述 d-C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基中的任选 -CH 2 -可被 一个或多个 -0-、 -S -、 -C(O)-或 /和 -NR 6 -置换， 所述 -C 8 烷基、 C 3 -C 8 环 烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基中的任意位置氢可被一个或多个卤素 原 子、 氛基、 硝基、 C 6 -C 12 芳基、 C 3 -C 12 杂芳基、 -NR 8 R 9 取代；
R 2 选自！ ¾素原子、 C Cs烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基， 所述 d-C 8 烷基、 c 3 -c 8 环烷基、 c 2 -c 8 链烯基或 c 2 -c 8 炔基中的任 选 -CH 2 -可被一个或多个 -0-、 -S-或 /和 -NR 6 -置换， 所述 C r C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链婦基或 C 2 -C 8 炔基中的任意位置氢可被一个或多个卤素 原子、 氰基、 -NR 8 R 9 取代；
R 3 选自氢、 C r C 8 烷基或 C 3 -C 8 环烷基， 所述 d-C 8 烷基或 C 3 -C 8 环烷 基中的任选 -CH 2 -可被一个或多个 -0-、 -S -、 -C(O)-或 /和 -NR 6 -置换， 所述 C r C 8 烷基或 C 3 -C 8 环烷基中的任意位置氢可被一个或多个 素原子取代； R 4 和 R 5 独立选自 -C 4 烷基、 C 3 -C 4 环烷基、 C 2 -C 4 链婦基或 C 2 -C 4 炔基， 所述 d-C 4 烷基、 c 3 -c 4 环烷基、 c 2 -c 4 链烯基或 c 2 -c 4 炔基中的任 选 -CH 2 -可被一个或多个 -0-、 -S -、 -S0 2 -、 -C(0)-或 /和 -NR 6 -置换， 所述 d-C4烷基、 C 3 -C 4 环烷基、 C 2 -C 4 链烯基或 C 2 -C 4 炔基中的任意位置氢可 被一个或多个 素原子、氛基、硝基、 C 6 -C 12 芳基、 C 3 -C 12 杂芳基、 -NR 8 R 9 取代。
更优选地， 上述化合物中，
R选自 C 6 -C 12 芳基或 C 3 -C 12 杂芳基， 所述芳基或杂芳基的环上任选 位置被卤素原子、 硝基、 氛基、 -C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基 或 C 2 -C 8 炔基取代， 其中任选两个位置的取代基可以合起来构成脂 肪环、 杂环、 芳环或杂芳环， 所述 C r C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基中的任选 -CH 2 -可被一个或多个 -0-、 -S -、 -so 2 -、 -c(o)-或 /和 -NR 6 -置换， 所述 d-C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基中 的任意位置氢可被一个或多个卤素原子、 氛基、 -NR 8 R 9 取代；
X为选自 -0-, -NR 7 -;
R 8 和 R 9 独立选自氢、 C r C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基， 或者 R 8 和 R 9 合起 来形成一个 5至 9个环原子的杂脂环基；
R 6 选自氢、 C Cs烷基、 C 3 -C 8 环烷基；
R 7 选自氢、 C r C 8 烷基；
R 1 选自 d-C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基， 所述 C Cs烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基中的任选 -CH 2 -可被 一个或多个 -0-、 -S -、 -C(O)-或 /和 -NR 6 -置换， 所述 -C 8 烷基、 C 3 -C 8 环 烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 0 2 -0 8 炔基中的任意位置氢可被一个或多个卤素 原 子、 氛基、 C 6 -C 12 芳基、 （¾-0 12 杂芳基、 -NR 8 R 9 取代；
R 2 选自 C r C 8 烷基或 C 3 -C 8 环烷基， 所述 C r C 8 烷基或 C 3 -C 8 环烷基 中的任选 -CH 2 -可被一个或多个 -0-、 -S-或 /和 -NR 6 -置换， 所述 C r C 8 烷基 或 C 3 -C 8 环烷基中的任意位置氢可被一个或多个 素原子、 -NR 8 R 9 取代； R 3 选自氢、 C r C 8 烷基；
R 4 和 R 5 独立选自 -C 4 烷基、 C 2 -C 4 链烯基或 C 2 -C 4 炔基，所述 C C4 烷基、 C 2 -C 4 链婦基或 C 2 -C 4 炔基中的任选 -CH 2 -可被一个或多个 -0-、 -S -、 -S0 2 -或 /和 -C(O)-置换， 所述 d-C4烷基、 c 2 -c 4 链烯基或 c 2 -c 4 炔基中的 任意位置氢可被一个或多个 素原子取代。
更优选地， 上述化合物中，
R选自苯基或 C 3 -C 6 杂芳基， 所述苯基或杂芳基的环上任选位置被卤 素原子、 硝基、 氛基、 C r C 8 烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基取代， 其中 两个相邻取代基可以合起来构成脂肪环、杂环 、芳环或杂芳环，所述 C r C 8 烷基、 C 2 -C 8 链婦基或 C 2 -C 8 炔基中的任选 -CH 2 -被一个或多个 -0-、 -S -、 -S0 2 -、 -C(O)-或 /和 -NR 6 -置换， 所述 C r C 8 烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔 基中的任意位置氢可被一个或多个卤素原子、 氛基、 -NR 8 R 9 取代；
X为 -0-；
R 8 和 R 9 独立选自氢、 C r C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基， 或者 R 8 和 R 9 合起 来形成一个 5至 9个环原子的杂脂环基；
R 6 选自氢、 C r C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基；
R 1 选自 d-C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基， 所述 C Cs烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基中的任选 -CH 2 -可被 一个或多个 -0-、 -S-或 /和 -NR 6 -置换，所述 d-C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 c 2 -c 8 炔基中的任意位置氢可被一个或多个 素原子、 氛基、 -NR 8 R 9 取代；
R 2 选自三卤烷基、 d-C 8 烷基；
R 3 选自氢、 d-C 4 烷基;
R 4 和 R 5 独立选自 -C 4 烷基， 所述 C r C 4 烷基中的任选 -CH 2 -可被一 个或多个 -0-、 -S -、 -S0 2 -或 /和 -C(O)-置换， 所述 -C 4 烷基中的任意位置 氢可被一个或多个! ¾素原子取代。
更优选地， 上述化合物中，
R选自苯基或 C 3 -C 6 杂芳基， 所述苯基或杂芳基的环上任选位置被卤 素原子、 硝基、 氛基、 C r C 6 烷基取代， 所述 C r C 6 烷基中的任选 -CH 2 -被 一个或多个 -0-、 -S -、 -C(O)-或 /和 -NR 6 -置换， 所述 C r C 6 烷基中的任意位 置氢可被一个或多个卤素原子、 氛基、 -NR 8 R 9 取代；
X为 -0-；
R 8 和 R 9 独立选自氢、 C r C 8 烷基、 C 3 -C 6 环烷基， 或者 R 8 和 R 9 合起 来形成一个 5至 9个环原子的杂脂环基；
R 6 选自氢、 C r C 8 烷基、 C 3 -C 6 环烷基；
R 1 选自 d-C 8 烷基、 C 3 -C 6 环烷基、 C 2 -C 4 链烯基或 C 2 -C 4 炔基， 所述 C Cs烷基、 C 3 -C 6 环烷基、 C 2 -C 4 链烯基或 C 2 -C 4 炔基中的任选 -CH 2 -可被 一个或多个 -0-、 -S -、 -C(O)-或 /和 -NR 6 -置换， 所述 -C 8 烷基、 C 3 -C 6 环 烷基、 C 2 -C 4 链烯基或 C 2 -C 4 炔基中的任意位置氢可被一个或多个 素原 子、 氰基、 -NR 8 R 9 取代；
R 2 选自三卤曱基、 d-C 6 烷基；
R 3 选自氢、 曱基、 乙基；
R 4 和 R 5 独立选自 C r C 4 烷基。
除非另有说明，在权利要求书和说明书中使用 的以下术语具有下面讨 论的含义：
本申请书中提到的基团碳原子个数表示方法， 例如 d-Cu),是指该基 团可以含 1个碳原子、 2个碳原子、 3个碳原子等，直至包含 10个碳原子； 烷基指的是饱和的脂烃基， 包括直链和支链烃基，非限制性地包括曱 基、 乙基、 丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基、叔丁基、 正戊基、 正己基等； 亚烷基指的是二价烷基；
链烯基指的是由至少一个碳-碳双键组成的不 和的直链或支链烃 基， 非限制性地包括乙烯、 丙烯、 异丙烯、 丁烯、 异丁烯、 叔丁烯、 正戊 烯、 异戊烯、 正己烯等；
亚链烯基指的是二价链烯基；
炔基指的是由一个或两个以上碳-碳参键组成 不饱和的直链或支链 烃基， 非限制性地包括乙炔基、 丙炔、 异丙炔、 丁炔、 异丁炔、 叔丁炔、 戊炔、 己炔；
亚炔基指的是二价炔基；
环烷基指全部为碳的单环或稠合的环（稠合环 意味着系统中的每个环 与系统中的其他环共享毗邻的一对碳原子）基 团，其中一个或多个环不具 有完全连接的 π电子系统，环烷基的实例非限制性地包括环 烷、环丁烷、 环戊烷、 环戊烯、 环己烷、金刚烷、 环己烯、 环己二烯、 环庚烷、 环辛烷、 环庚二烯和环庚三烯等；
烷氧基指的是通过氧键连接的烷基或环烷基；
芳氧基表示 -0-芳基和 -0-杂芳基， 包括但不限于苯氧基、 吡啶氧基、 呋喃氧基、 噻吩氧基、 嘧啶氧基、 吡嗪氧基等及其衍生物；
取代的苯基指的是被一个或两个以上取代基取 代的苯基，其中取代基 非限制性地包括 C r C 6 烷基、 C 2 -C 6 链烯基、 C 2 -C 6 炔基、 d-C 6 烷氧基、 C 2 -C 6 烯氧基、 苯氧基、 苄氧基、 羟基、 絲、 过氧羟基、 脲基、 氨基曱 酰基、 氨曱酰基、 羰基、 氨基、 羟氨基、 曱酰氨基、 曱酰基、 脒基、 氰基、 氛氨基、 异氛基、 异氰酸基、 重氮基、 叠氮基、肼基、 三氮烷基、 次氮基、 硝基、 亚硝基、 异亚硝基、 亚硝氨基、 亚氨基、 亚硝亚氨基、 氧代、 d-C 6 烷硫基、磺氨基、氨横酰基、 亚氧硫基、 巯基、 亚硫酰基、磺基、磺酰基、 硫代烷氧基、 氰硫基、 异氰硫基、 硫代曱酰氨基、 卤代、 卤代烷基、 亚氯 氧基、 氯氧基、 高氯酸基、 三氟曱基、 亚碘酰基、碘酰基、 膦基、 氧膦基、 二氧磷基、 膦酰基、 胂基、 硒烷基、 乙硅烷基， 曱硅烷氧基、 曱硅烷基、 亚曱硅烷基和碳环及杂环部分；
"芳基"指的是有一个或两个以上闭环的环状芳 部分，非限制性地 包括苯基、 苄基、 萘基、 蒽基、 菲基、 联苯基等； 芳基可以是取代的或未 取代的； 当被取代时优选为一个或多个， 更优选为一个、 两个或三个， 取 代基独立地选自 （不局限于） 卤素原子、 硝基、 氛基、 三卤烷基、 酰基、 杂脂环基、 烷基、 环烷基、链烯基、 炔基、 单或二烷基氨基、 羟基、 巯基、 烷氧基、 烷硫基等；
"杂芳基" 表示 5至 12个环原子的单环或稠合环基团， 含有一个、 两个、 三个或四个选 N、 0或 S的环杂原子， 其余环原子是 C, 另外具 有完全共轭的 π电子系统； 未取代的杂芳基非限制性地包括吡咯、 呋喃、 ρ塞。分、 咪唑、 吡 1 定、 噁唑、 异噁唑、 ρ塞唑基、 吡唑、 嘧 1 定、 ρ 奎啉、 异奎啉、 嘌呤、 咔唑、 苯并呋喃、 苯并噻吩、 苯并噁二唑等； 杂芳基可以是取代的 或未取代的， 取代基优选为一个或多个， 更优选为一个、 两个或三个， 独 立地选自 （不局限于） 卤素原子、 硝基、 氛基、 三卤烷基、 酰基、 杂脂环 基、 烷基、 环烷基、 链烯基、 炔基、 氨基、 单或二烷基氨基、 羟基、 巯基、 烷氧基、 烷硫基等；
杂脂环基表示单环或稠合环基团，在环中具有 5到 9个环原子，其中 一个、 两个或三个环原子选 N、 0或 S(0)m的杂原子， 其中 m是 0至 2的整数， 其余环原子是 C, 这些环可以具有零条、 一条或多条双键， 但 这些环不具有完全共轭的 π 电子系统； 未取代的杂脂环基非限制性地包 括吡咯烷基、 哌啶子基、 哌嗪子基、 吗啉代基、 硫代吗啉代基、 高哌嗪子 基等； 杂脂环基可以是取代的或未取代的， 当被取代时， 取代基优选为一 个或两个以上， 更优选为一个或两个或三个， 进而更优选为一个或两个， 非限制性地包括低级烷基、 三卤烷基、 卤素、 羟基、 烷氧基、 巯基、 烷硫 基、 氰基、 酰基、 硫代酰基、 0-氨基曱酰基、 Ν-氨基曱酰基、 0-硫代氨 基曱酰基、 Ν-硫代氨基曱酰基、 C-酰氨基、 Ν-酰氨基、 硝基、 Ν-磺酰氨 基、 S-横酰氨基； 优选地， 杂脂环基可选地被一个或两个取代基取代， 取 代基非限制性地包括卤素、 低级烷基、 三卤烷基、 羟基、 巯基、 氛基、 Ν-酰氨基、 单或二烷基胺基、 羧基或 Ν-磺酰氨基；
素原子指氟、 氯、 溴或破基团；
三卤烷基表示 -CX 3 基团， 其中 X是如上定义的卤素原子；
脂肪环表示 3到 9个碳原子组成的环状基团，环可以具有零条 一条 或多条双键， 但这些环不具有完全共轭的 π 电子系统； 脂肪环可以是取 代的或未取代的，取代基优选为一个或两个以 上，更优选为一个或两个或 三个，进而更优选为一个或两个，独立选自（ 不局限于）卤素原子、硝基、 氰基、 三卤烷基、 酰基、 杂脂环基、 烷基、 环烷基、 链烯基、 炔基、 氨基、 单或二烷基氨基、 羟基、 巯基、 烷氧基、 烷硫基等。
杂环表示在环中具有 5到 9个环原子，其中一个、两个或三个环原子 选自 Ν、 0或 S(0)m的杂原子， 其中 m是 0至 2的整数， 其余环原子是 C, 这些环可以具有零条、 一条或多条双键， 但这些环不具有完全共轭的 π 电子系统； 未取代的杂环非限制性地包括吡咯烷、 哌啶、 哌嗪、 吗啉、 硫代吗啉、 高哌嗪等； 杂环可以是取代的或未取代的， 当被取代时， 取代 基优选为一个或两个以上，更优选为一个或两 个或三个，进而更优选为一 个或两个， 非限制性地包括低级烷基、 三卤烷基、 卤素、 羟基、 烷氧基、 巯基、 烷硫基、 氰基、 酰基、 硫代酰基、 0-氨基曱酰基、 N-氨基曱酰基、 0-硫代氨基曱酰基、 N-硫代氨基曱酰基、 C-酰氨基、 N-酰氨基、 硝基、 N-磺酰氨基、 S-磺酰氨基；优选地，杂环可选地被一个或两 取代基取代， 取代基非限制性地包括卤素、 低级烷基、 三卤烷基、 羟基、 巯基、 氰基、 N-酰氨基、 单或二烷基胺基、 羧基或 N-磺酰氨基；
芳环表示有一个或两个以上闭环的环状芳烃部 分， 非限制性地包括 苯、 萘、 蒽、 菲等； 芳环可以是取代的或未取代的； 当被取代时优选为一 个或多个， 更优选为一个、 两个或三个， 取代基独立地选自 （不局限于） 卤素原子、 硝基、 氰基、 三卤烷基、 酰基、 杂脂环基、 烷基、 环烷基、 链 烯基、 炔基、 单或二烷基氨基、 羟基、 巯基、 烷氧基、 烷硫基等；
杂芳环表示表示 5至 12个环原子的单环或稠合环基团， 含有一个、 两个、 三个或四个选 N、 0或 S的环杂原子， 其余环原子是 C, 另外具 有完全共轭的 π电子系统； 未取代的杂芳环非限制性地包括吡咯、 呋喃、 ρ塞。分、 咪唑、 吡 、 噁唑、 异噁唑、 塞唑基、 吡唑、 嘧 1 定、 ρ奎啉、 异 ρ 奎啉、 嘌呤、 咔唑、 苯并呋喃、 苯并噻吩、 苯并噁二唑等； 杂芳环可以是取代的 或未取代的， 取代基优选为一个或多个， 更优选为一个、 两个或三个， 独 立地选自 （不局限于） 卤素原子、 硝基、 氛基、 三卤烷基、 酰基、 杂脂环 基、 烷基、 环烷基、 链烯基、 炔基、 氨基、 单或二烷基氨基、 羟基、 巯基、 烷氧基、 烷硫基等。
本发明提供的化合物还包含该化合物在药学上 可接受的等价物或两 者以上的混合物。
作为优选，本发明提供的化合物在药学上可接 受的等价物可以包含药 学上可接受的盐、 水合物、 溶剂合物、 代谢物、 前药或等排物中的一种或 两者以上的混合物。
作为优选，本发明提供的化合物在药学上可接 受的等价物中， 药学上 可接受的盐包含本发明所提供化合物的酸式盐 或碱式盐。所述药学上可接 受的盐具有该化合物的药学活性， 且在生物学上和实际应用中均符合需 要。
本发明提供的化合物在药学上可接受的等价物 中，药学上可接受的酸 式盐非限制性地包括醋酸盐、 硫酸盐、 磷酸盐、 曱酸盐、 丙酸盐、 己二酸 盐、琥珀酸盐、 酒石酸盐、 藻酸盐、 天冬氨酸盐、苯曱酸盐、 曱苯横酸盐、 曱磺酸盐、 苯横酸盐、 硫酸氢盐、 丁酸盐、 柠檬酸盐、 樟脑酸盐、 樟脑磺 酸盐、 环戊烷丙酸盐、 二葡糖酸盐、 十二烷基石克酸盐、 乙基横酸盐、 富马 酸盐、 葡庚酸盐、 甘油磷酸盐、 半硫酸盐、 庚酸盐、 己酸盐、 盐酸盐、 氢 溴酸盐、 氢碘酸盐、 2-羟基乙磺酸盐、 乳酸盐、 马来酸盐、 曱磺酸盐、 2- 萘横酸盐、 烟酸盐、 草酸盐、 硫氰酸盐、 曱苯横酸盐和十一烷酸盐。
作为优选，本发明提供的化合物在药学上可接 受的等价物中， 药学上 可接受的碱式盐可以包含铵盐、碱金属盐如钠 和钾盐、碱土金属盐如钙和 镁盐、 与有机碱所成的盐如二环己胺盐、 N-曱基 -D葡糖胺盐， 与和氨基 酸如精氨酸和赖氨酸所成的盐。优选地，含碱 性氮基团可被下述试剂季铵 化，非限制性地包括低级烷基 化物如曱基、乙基、丙基和丁基的氯化物、 溴化物和碘化物； 二烷基硫酸盐如二曱基、二乙基、二丁基和二 戊基的硫 酸盐； 长链 化物如癸基、 月桂基、 肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、 溴化物 和碘化物； 芳烷基 化物如苯基溴化物。
作为优选，本发明提供的化合物在药学上可接 受的等价物中，前药指 的是本发明化合物的衍生物， 在表现其药理学效用之前需要经过生物转 化， 如代谢。 前药由改善化学稳定性、 改善患者接受和依从度、 改善生物 利用度、 延长作用时间、 改善了器官选择性、 改善制剂如增强水溶解性， 或减少副作用如毒性的物质配制而成。前药可 由本发明化合物用常规方法 制备而成， 见 BURGER'S MEDICINAL CHEMISTRY AND DRUG CHEMISTRY , 第 5版， Vol. 1, pp. 172-178, 949-982 (1995)。
在本发明中，等排物指的是具有不同的分子式 但显示出相似的或同样 的物理特性的元素、 官能团、 取代基、 分子或离子。 例如， 四唑是羧酸的 等排物，因为它有与羧酸相似的性质，即使它 们有不同的分子式。典型地， 两个等排的分子有相似的或同样的大小和形状 。理想地，等排的分子将是 同构的和能够共同结晶。等排物分子其它物理 性质通常都包括沸点、密度、 粘性和热传导性。 然而， 因为外部轨道可以不同地杂化， 故某些性质可能 会不同： 偶极力矩、 极性、 极化作用、 大小和形状。 等排物包括生物等排 物。 生物等排物之间， 除了物理的相似性之外， 共有某些生物学性质。 典 型地，生物等排物与之相同的识别部位相互作 用或广泛地产生相似的生物 学作用。
在本发明中， 代谢物指的是由代谢或由代谢过程产生的物质 。
本发明提供了 1,4-二氢 -1,8-萘啶衍生物在制备钙离子通道抑制剂药 物和乙酰胆碱酯酶抑制剂药物中的应用。
本发明还提供了 1,4-二氢 -1,8-萘啶衍生物在制备调节钙体内稳态、治 疗心血管疾病、 脑血管疾病或治疗痴呆药物中的应用。
其中， 所述痴呆优选为阿尔茨海默病或血管性痴呆。
在本发明的实施例中，发明人利用膜片钳技术 及高内涵筛选分析仪检 测了 1,4-二氢 -1,8-萘啶衍生物对 L-型 Ca 2+ 通道阻滞活性。 实验结果表明， 1,4-二氢 -1,8-萘啶衍生物对 L-型 Ca 2+ 通道普遍具有较强的阻滞活性，且其 活性优于阳性对照药物 Nifedipine和 Nimodipine。
在本发明的实施例中，发明人检测了 1,4-二氢 -1,8-萘啶衍生物对乙酰 胆碱酯酶的抑制活性。 实验结果表明， 1,4-二氢 -1,8-萘啶衍生物能够抑制 乙酰胆碱酯酶的活性。
综合上述实验结果，本发明中的化合物是一种 既能抑制乙酰胆碱酯酶 活性， 又能阻滞细胞外钙通过钙通道流入细胞的化合 物， 具有双重活性。
根据本发明的制备和效果实施例及本领域的知 识，可以推断出本发明 通式中取代基 R为芳基或杂芳基时， 芳基或杂芳基的环上任意位置被卤 素原子、羟基、氰基、烷基、 环烷基、链烯基、 炔基等取代基取代或成环， 所得到的化合物在效果上相同或相近，且制备 方法简单易行。其中，烷基、 环烷基、 链烯基、 炔基上的任意位置也可被取代基取代或其任意 -CH 2 -被 置换。
根据本发明的制备和效果实施例及本领域的知 识，可以推断出本发明 通式中取代基 R 1 为氢、 羟基、 芳基、 杂芳基、 -C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基时， -C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基上的任意位置被取代基取代或其任意 -CH 2 -被置换，所得到的化 合物在效果上相同或相近， 且制备方法简单易行。 根据本发明的制备和效果实施例及本领域的知 识，可以推断出本发明 通式中取代基 R 2 为氢、 卤素原子、 硝基、 氨基、 羟基、 三卤烷基、 -C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基时， -C 8 烷基、 C 3 -C 8 环 烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基上的任意位置被取代基取代或其任意 -CH 2 -被置换， 所得到的化合物在效果上相同或相近， 且制备方法简单易 行。
根据本发明的制备和效果实施例及本领域的知 识，可以推断出本发明 通式中取代基 R 3 为氢、 d-C 8 烷基或 C 3 -C 8 环烷基时， d-C 8 烷基或 C 3 -C 8 环烷基上的任意位置被取代基取代或其任意 -CH 2 -被置换， 所得到的化合 物在效果上相同或相近， 且制备方法简单易行。
根据本发明的制备和效果实施例及本领域的知 识，可以推断出本发明 通式中取代基 X为 -0-或 -NR 7 -时， 所得到的化合物在效果上相同或相近， 且制备方法简单易行。 其中， R 7 为氢、 芳基、 杂芳基、 -C 8 烷基、 C 3 -C 8 环烷基、 C 2 -C 8 链烯基或 C 2 -C 8 炔基。
本发明还提供了一种药物组合物， 其包含 1,4-二氢 -1,8-萘啶衍生物、 药学上可接受的等价物或其混合物以及药学上 可接受的载体。
本发明通式化合物可经过以下路线合成：
NH HCI NC^ /\
具体实施方式
本发明公开了 5-氨基 -1,4-二氢 -1,8-萘啶衍生物及其药物组合物和用 途， 本领域技术人员可以借鉴本文内容， 适当改进工艺参数实现。特别需 要指出的是， 所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说 是显而易见 的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方 法及应用已经通过较佳实施 例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发 明内容、精神和范围内对本 文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组 合，来实现和应用本发明技 术。
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的 技术方案， 下面结合 具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
本发明实施例中所制
化合物 1 : 5-氨基 -7-乙基 -2,6-二曱基 -4-(3-硝基苯基) -1,4-2H-1,8-萘啶 -3-羧酸曱酯， 如 S1所示。
化合物 2: 5-氨基 -7-乙基 -4-(3-曱氧基苯基) -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘 啶 -3-羧酸乙酯， 如 S2所示
化合物 3: 5-氨基 -7-乙基 -4-(2, 3 二氯苯基) -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8- 萘啶 -3-羧酸曱酯， 如 S3所示。
S4
化合物 4: 5-氨基 -4-(3-硝基苯基) -2-曱基 -6-乙基 -7-丙基 -1,4-2H-1,8- 萘啶 -3-羧酸曱酯， 如 S4
S5
化合物 5: 5-氨基 -7-乙基 -2,6-二曱基 -4-(3-氯苯基 )-1,4-2Η-1,8-萘啶 -3- 羧酸乙酯， 如 S5所示。
化合物 6: 5-氨基 -6-乙基 -2-曱基 -4-(4-氟苯基 )-7-丙基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3-羧酸乙酯， 如 S6所示。
化合物 7: 5-氨基 -4-(2-氯苯基 )-7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3- 羧酸异丙酯， 如 S7所示。
化合物 8: 5-氨基 -4-(2-氟苯基 )-7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3- 羧酸异丙酯， 如 S8所示。
化合物 9: 5-氨基 -4-(3-硝基苯基) -6-乙基 -2-曱基 -7-丙基 -1,4-2H-1,8- 萘啶 -3-羧酸异丙酯， 如 S9 示。
S10
化合物 10: 5-氨基 -4-(2-氯苯基 )-7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3- 羧酸烯丙酯， 如 S10所
化合物 11 : 5-氨基 -4-(2-氯苯基 )-7-乙基 -2，6-二曱基 -1,4-2H-1 ,8-萘啶 -3- 羧酸 -2-曱氧基乙酯， 如 S11所示。
化合物 12: 5-氨基 -4-(2-氟苯基 )-6-乙基 -2-曱基 -7-丙基 -1,4-2H-1,8-萘 啶 -3-羧酸烯丙酯， 如 S
化合物 13: 5-氨基 -4-(3-硝基苯基) -6-乙基 -2-曱基 -7-丙基 -1,4-2H-1,8- 萘啶 -3-羧酸 -2,2,2-三氟乙
化合物 14: 5-氨基 -4-(2-氟苯基 )-7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3- 羧酸 -2,2,2-三氟乙酯， 如 S14
化合物 15 : 5-氨基 -4-(2,3,4,5,6-五氟苯基） -7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3-羧酸-乙酯， 如 S15所示。
S16
化合物 16: 5-氨基 -4-(2-曱氧基苯基) -7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8- 萘啶 -3-羧酸-乙酯， 如 S 1
化合物 17: 5-氨基 -4-(3-氟苯基 )-2,6-二乙基 -7-丙基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3- 羧酸-曱酯， 如 S17所示。
化合物 18 : 5-氨基 -4-(2-氯苯基）-2-三氟曱基 -6-曱基 -7-乙基 -1,4-2Η-1,8-萘啶 -3-羧酸-
S19
化合物 19: 5-氨基 -4-(3-三氟曱基苯基 )-7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2Η-1,8- 萘啶 -3-羧酸-乙酯， 如 S19所示。
化合物 20: 5-氨基 -4-(3-氟苯基 )-7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3- 羧酸-炔丙酯， 如 S20所
化合物 21 : 5-氨基 -4-苯基 -7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3-羧酸 -环丙曱基酯， 如 S21所
S22
化合物 22: 5-氨基 -4-苯基 -7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3-羧酸
-氰乙基酯， 如 S22所示。
化合物 23: 5-氨基 -4- (嘧啶 -5-基) -7-乙基 -2,6-二曱基 -1,4-2H-1,8-萘啶 -3-羧 酸-异丙酯， 如 S23所示
实施例 1: 化合物 S1的合成
S1 步骤 1 原料 A的合成
将丙二腈 6.64g ( 10.06mmol )及 4.63g无水乙醇（ 10.06mmol )混合, 在反应瓶中室温搅拌均勾后， 在冰浴下加入盐酸的乙醚溶液
( 10.39mmol ),升至室温搅拌 冷藏过夜, 过滤， 洗涤， 干燥即得 A ( 12.1g ), 收率 80.4%, ESI- MS: 113.1 [M+H] + „ 步骤 2化合物 CI的合成
将乙酰乙酸曱酯 ( 13.0 g, 0.1 mol ) 与醋酐 ( 7.5 g, 0.073 mol ) 混合， 在冰浴搅拌下加入硫酸（ 0.8 mL ),再加入 3-硝基苯曱醛（ 16.1 g, 0.11 mol ), 固体緩慢溶解， 搅拌 lh后， TLC监测反应结束， 加入 95%乙醇 lOOmL, 搅拌均勾，冰箱冷藏 lh后，过滤，固体干燥即得产品 CI 20.1g收率 80.7%。 ESI- MS: 250.2 [M+H] + 。
步骤 3 中间体 D1的合成
将 A (2.2 g, 0.015 mol), 醋酸铵（ 3.3 g, 0.043 mol )及 lOmL曱醇加入 反应瓶中， 搅拌， 回流反应 30 min, 加入 C1 ( 3.5 g, 0.014 mol ), 继续回 流 30 min, TLC检测， 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析（石油 醚： 乙酸乙酯 = 3:1 ),得黄色固体粉末 D1 ( 2.4 g ),收率 54.5%。 ESI- MS: 313.4 [M-H]" 0
步骤 4 将中间体 Dl ( HOmg, 0.35 mmol )溶于 1,2-二氯乙烷 10 mL中， 向 其中加入 3-戊酮 （ 90.35mg, 1.05mmol )和 A1C1 3 ( 85mg 0.63 mmol ), 氮 气保护下， 微波（ MW=200W )反应 30min, TLC监测原料反应完全后， 停止加热， 冷却至室温后， 倒入 THF:H 2 0 = 1 : 1溶液（ 15 mL ) 中， 搅拌 下滴加 10% NaOH水溶液至 PH>7, 混合物用二氯曱烷萃取（ 15 mL χ 3 ), 合并有机相， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石 油醚： 乙酸乙酯 = 3: 1 ), 分离得到产品 S1黄色固体 58.6 mg, 收率 40%。 ESI- MS [M+H] + =383.1„
¾NMR (400HZ CDC13): δΐ .20 (3Η, m), 1.94(3Η, s), 2.71(2Η, m), 2.51(3Η, s), 3.62 (3Η, s), 5.44 (2H, s), 7.56(1H, t, J=8.0), 7.76(1H, d, J=2.0), 8.05(1H, dd, J=1.2, 8.0), 8.38 (1H, s).
实施 2: 化合物 S2的合成
步骤 1 化合物 C2的合成
将 3-曱氧基苯曱醛（ 27.2 g, 0.2 mol )、乙酰乙酸乙酯（ 26.1 g, 0.2 mol )、 催化量哌啶 ( 0.85g, 0.01 mol )、 醋酸 ( 0.6 g, 0.01 mol )及曱苯 lOOmL加 入反应瓶中回流反应 4h , TLC检测反应结束后， 加入乙酸乙酯稀释反应 液， 同时加适量水， 进行萃取， 有机相用饱和 NaHC0 3 溶液洗涤， 饱和 NaCl溶液洗涤， 50x3 ,有机层污水 Na 2 S0 4 干燥，即得油状物产品 C2 39.7g 收率 80 %。 ESI- MS: 249.2 [M+H] + 。
步骤 2 中间体 D2的合成 将 A (2.2 g, 0.015 mol), 醋酸铵（ 3.3 g, 0.043 mol )及 lOmL曱醇加入 反应瓶中， 搅拌， 回流反应 30 min, 加入 C2 ( 3.47 g, 0.014 mol ), 继续 回流 30 min, TLC检测， 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析（石 油醚： 乙酸乙酯 = 3 : 1 ), 得黄色固体粉末 D2 ( 2.1 g ), 收率 47.7%。 ESI- MS: 312.4 [M-H]"„
步骤 3
将中间体 D2 ( HOmg, 0.35 mmol )溶于 1,2-二氯乙烷 10 mL中， 向 其中加入 3-戊酮（ 90mg, 1.05mmol )和 A1C1 3 ( 85mg 0.63 mmol ), 氮气保 护下， 加热回流反应， TLC监测原料反应完全后， 停止加热， 冷却至室 温后， 倒入 THF:H 2 0 = 1 : 1溶液（ 15 mL ) 中， 搅拌下滴加 10% NaOH水 溶液至 PH>7, 混合物用二氯曱烷萃取（15 mL x 3 ), 合并有机相， 饱和 食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石油醚:乙酸乙酯 = 3: 1 ), 分离得到产品 S2黄色固体 59.2 mg, 收率 44%。 ESI- MS
[M+H] + =382.1。
¾NMR (400Hz CDC1 3 ): 1.21 (6H, m), 1.90(3H, m), 2.33 (3H, s),
2.68(2H, m), 3.69 (3H, s), 4.06 (2H, m), 5.18 (1H, s), 6.73 (lH,dd, J=l .6,8.0), 6.86 (1H, t, J=8.0), 7.02 (1H, s), 7.14 (1H, t, J=8.0).
实施 3: 化合物 S3的合成
步骤 1 化合物 C3的合成
将乙酰乙酸曱酯 ( 13.0 g, 0.1 mol ) 与醋酐 ( 7.5 g, 0.073 mol ) 混合, 在冰浴搅拌下加入硫酸（ 0.8 mL ), 再加入 2, 3-二氯苯曱醛（ 18.9 g, 0.11 mol ), 固体緩慢溶解， 搅拌 lh后， TLC监测反应结束， 加入 95%乙醇 lOOmL, 搅拌均匀， 冰箱冷藏 lh后， 过滤， 固体干燥即得产品 C3 23.5g 收率 86.1%。 ESI- MS: 274.2 [M+H] + 。
步骤 2 中间体 D3的合成
将 A (2.2 g, 0.015 mol), 醋酸铵（ 3.3 g, 0.043 mol )及 lOmL曱醇加入 反应瓶中， 搅拌， 回流反应 30 min, 加入 C3 ( 2.7 g, 0.01 mol ), 继续回 流 30 min, TLC检测， 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析（石油 醚： 乙酸乙酯 = 3 : 1 ),得黄色固体粉末 D3 ( 2.1 g ),收率 63.6%。 ESI- MS: 337.2 [M-H]"„
步骤 3
将中间体 D3 ( 120mg, 0.35 mmol )溶于 1,2-二氯乙烷 10 mL中， 向 其中加入 3-戊酮（ 90mg, 1.05mmol )和 A1C1 3 ( 85mg 0.63 mmol ), 氮气保 护下， 加热回流反应， TLC监测原料反应完全后， 停止加热， 冷却至室 温后， 倒入 THF:H 2 0 = 1 : 1溶液（ 15 mL ) 中， 搅拌下滴加 10% NaOH水 溶液至 PH>7, 混合物用二氯曱烷萃取（15 mL x 3 ), 合并有机相， 饱和 食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石油醚： 乙酸乙酯 = 3: 1 ), 分离得到产品 S3 , 黄色固体 36.8 mg, 收率 25.9%。 ESI- MS
[M+H] + =406.0。
toMR (400Hz, CDC1 3 ): 1.21 (3H, m), 1.97(3H, s), 2.46 (3H, s),
2.66(2H, m), 3.64 (3H, s), 4.51 (2H, s), 5.15 (1H, s), 7.11 (1H, t, J=8.0), 7.28 (1H, dd, J=1.6, 8.0), 7.40 (1H, dd, J=1.6, 8.0).
实施 4: 化合物 S4的合成
将中间体 Dl ( lOOmg, 0.32 mmol )溶于 1,2-二氯乙烷 10 mL中， 向 其中加入 4-庚酮（ 75mg, 0.64mmol )和 A1C1 3 ( 85mg 0.63 mmol ), 氮气保 护下， 回流反应， TLC监测原料反应完全后， 停止加热， 冷却至室温后， 倒入 THF:H 2 0 = 1 : 1溶液（ 15 mL ) 中， 搅拌下滴力。 10% NaOH水溶液至 PH>7, 混合物用二氯曱烷萃取（15 mL x 3 ), 合并有机相， 饱和食盐水 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石油醚： 乙酸乙酯 = 5 : 1 ~ 3: 1 ), 分离得到产品 S4黄色固体 17.4 mg, 收率 13%。 ESI- MS
[M+H] + =411.3。
ifiNMR (400Hz CDC1 3 ): 1.02 (3H, t, J=7.2), 1.09(3H, t, J=7.2), 1.65 (2H m), 2.44 (3H, s), 2.59 (2H, m), 2.65 (2H, m), 3.69 (3H, s), 4.48 (2H, s), 5.15(1H, s), 7.44 (1H, t, J=8.0), 7.67 (1H, d, J=2.0), 8.06 (1H, dd, J= 1.2, 8.0), 8.21 (1H, d, J=2.0).
实施 5: 化合物 S5的合成
步骤 1 化合物 C5的合成
将 3-氯苯曱醛（ 3.0 g, 0.02 mol )、 乙酰乙酸乙酯（ 2.8 g, 0.02 mol )催 化量哌啶 8d、 醋酸 0.5 mL )及曱苯 15mL加入反应瓶中回流过夜反应， TLC监测反应结束， 加水 5 mL, 乙酸乙酯萃取（20 mL x 3 ), 合并有机 相， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 得到产品 C1淡黄色油状 物 4.9g, 收率 94%。 ESI- MS: 253.2 [M+H] + 。
步骤 2 中间体 D5的合成 将 A (2.9 g, 0.019 mol), 醋酸铵（ 4.5 g, 0.058 mol )、 C5 ( 4.9 g, 0.019 mol)及 150mL曱醇加入反应瓶中， 搅拌， 回流反应 45min, TLC检测， 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析（石油醚： 乙酸乙酯 =3:1 ), 得黄色固体粉末 D5 ( l.Og), 收率 16%。 ESI-MS: 316.2 [M-H] -。
步骤 4
将中间体 D5 ( 220mg, 0.69 mmol )溶于 1,2-二氯乙烷 30 mL中， 向 其中加入 4,4-二曱基环己酮 （ 120mg, 1.38mmol)和 A1C1 3 ( 190mg 1.43 mmol), 氮气保护下， 加热回流反应， 过夜， TLC监测原料反应完全后， 停止加热， 冷却至室温后， 倒入 THF:H 2 0= 1:1溶液（ 15 mL) 中， 搅拌 下滴加 10% NaOH水溶液至 PH>7, 混合物用二氯曱烷萃取（ 15 mL χ 3 ), 合并有机相， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石 油醚： 乙酸乙酯 =3:1 ), 分离得到产品 S5黄色油状物 124.3 mg, 收率 46.6%。 ESI-MS [M+H] + =386.2。
¾NMR (400Hz DMSO-d 6 ): 1.10(3H, m), 1.19(3H, m), 1.89(3H, s), 2.54 (2H, m), 2.30 (3H, s), 3.98 (2H, m), 5.04 (1H, s), 5.41 (2H, m), 7.12 (1H, m), 7.19 (2H, t, J=2), 7.42 (1H, s).
步骤 1 化合物 C6的合成
将乙酰乙酸曱酯 ( 6.5 g, 0.05 mol ) 与醋酐（ 3.8 g, 0.036 mol ) 混合， 在冰浴搅拌下加入硫酸 ( 0.4 mL ), 再加入 4-氟苯曱醛 ( 6.2 g, 0.05 mol ), 固体緩慢溶解， 搅拌 lh后， TLC监测反应结束， 加入少量水淬灭反应， 加入二氯曱烷 50mL, 分离有机层，有机层水洗， 干燥， 浓缩，柱层析（石 油醚： 乙酸乙酯 =10: 1 ) 即得产品 C6 lO. lg收率 85.6%。 ESI- MS: 237.2 [M+H] + 。
步骤 2 中间体 D6的合成
将 A (2.2 g, 0.015 mol), 醋酸铵 ( 3.3 g, 0.043 mol )、 C6 ( 3.5 g, 0.014 mol )及 40mL曱醇加入反应瓶中 , 搅拌， 回流反应 30 min, TLC检测 , 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析（石油醚： 乙酸乙酯 = 3: 1 ), 得黄色固体粉末 D6 ( 1.4 g ), 收率 33.3%。 ESI- MS: 313.4 [M-H] -。
步骤 3
将中间体 D6 ( 220mg, 0.69 mmol )溶于 1,2-二氯乙烷 10 mL中， 向 其中加入 3-戊酮（ 120mg, 1.38mmol )和 A1C1 3 ( 190mg 1.43 mmol ), 氮气 保护下， 回流反应， TLC监测原料反应完全后， 停止加热， 冷却至室温 后， 倒入 THF:H 2 0 = 1 : 1溶液（ 15 mL ) 中， 搅拌下滴加 10% NaOH水溶 液至 PH>7, 混合物用二氯曱烷萃取（ 15 mL x 3 ), 合并有机相， 饱和食 盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩，硅胶柱层析（石油醚： 乙酸乙酯 = 5: 1 ~ 3: 1 ),分离得到产品 S6黄色固体 124.3 mg,收率 46.6%。 ESI- MS: 398.2 [M+H] + 。
¾NMR (400Hz DMSO-d6): 0.95 (6H, m), 1.18 (3H, m), 1.68(2H, m), 2.29 (3H, s), 2.48 (4H, m), 3.97 (2H, m), 5.02 (1H, s), 5.32 (2H, s), 7.00 (2H,m), 7.33 (2H, m), 9.13 (1H, s).
实施例 7: 化合物 S7的合成
步骤 1 化合物 C7的合成
将 2-氯苯曱醛（ 2.8 g, 0.02 mol )、 乙酰乙酸异丙酯 ( 2.88 g, 0.02 mol )、 催化量的哌啶 0.5mL、 醋酸 0.5 mL及曱苯 20mL加入反应瓶中加热回流 反应 , TLC监测反应结束， 加水 10 mL, 乙酸乙酯萃取 ( 20 mL 3 ), 合 并有机相， 有机相依次用饱和 NaHS0 3 、 NaCl洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石油酸:乙酸乙酯 = 10:1 ), 分离得到产品 C7淡黄色 油状物 4.8g, 收率 91%。 ESI- MS: 267.1 [M+H] + 。
步骤 2 中间体 D7的合成
将 A ( 2.7 g, 0.018 mol ), 醋酸铵 ( 4.2 g, 0.054 mol )及 20mL曱醇加 入反应瓶中， 搅拌， 回流反应 30 min, 加入 C7 ( 4.8 g, 0.018 mol ), 继续 回流 30 min, TLC检测， 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析（石 油醚： 乙酸乙酯 = 3:1 ),得黄色固体粉末 D7 ( 2.0 g ),收率 34%。 ESI- MS: 330.1 [M-H] -。
步骤 3
将中间体 D7 ( 331mg, 1 mmol )溶于 1,2-二氯乙烷 10 mL中， 向其中 加入 3-戊酮 （ 129mg, 1.5mmol )和 A1C1 3 ( 200mg, 1.5 mmol ), 氮气保护 下， 加热回流反应过夜， TLC监测原料反应完全后， 停止加热， 冷却至 室温后， 倒入 THF:H 2 0 = 1:1溶液（ 15 mL ) 中， 搅拌下滴加 10% NaOH 水溶液至 PH>7, 混合物用二氯曱烷萃取（ 15 mL x 3 ), 合并有机相， 饱 和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石油醚： 乙酸乙酯 = 3:1 ), 分离得到产品 S7黄色固体 188.1 mg, 收率 47%。 ESI-MS
[M+H] + =400.0。
ifiNMR (CDC1 3 , 400 MHz): 7.27-7.55 (4H, m), 6.86 (1H, s), 5.43 (1H s), 4.87 (1H, m), 4.10 (2H, s), 2.65-2.78 (2H, m), 2.36(3H, s), 1.95(3H, s), 1.15-1.42 (6H, m), 1.00-1.09 (3H, m).
步骤 1 化合物 C8的合成
将 2-氟苯曱醛( 1.24 g, 0.01 mol)、乙酰乙酸异丙酯（ 1.44 g, 0.01 mol )、 催化量的哌啶 0.25mL、 醋酸 0.25 mL及曱苯 20mL加入反应瓶中加热回 流反应 , TLC监测反应结束， 加水 10 mL, 乙酸乙酯萃取 ( 20 mL 3 ), 合并有机相， 有机相依次用饱和 NaHS0 3 、 NaCl洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石油醚： 乙酸乙酯 = 10:1 ), 分离得到产品 C8淡黄 色油状物 1.4g, 收率 56%。 ESI- MS: 267.1 [M+H] + 。
步骤 2 中间体 D8的合成
将 A (0.83 g, 5.6m mol), 醋酸铵 ( 1.3 g, 16.8m mol)及 15mL曱醇 加入反应瓶中， 搅拌， 回流反应 30 min, 力口入 C8 ( 1.4 g, 5.6m mol ), 继 续回流 30 min, TLC检测， 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析（石 油醚： 乙酸乙酯 =3:1 ),得黄色固体粉末 D8(0.63g),收率 36%。ESI-MS: 314.1 [Μ-Η;Γ。 将中间体 D8 ( 261mg, 0.83 mmol )溶于 1,2-二氯乙烷 10 mL中， 向 其中加入 3-戊酮（ 107mg, 1.25mmol )和 A1C1 3 ( 166mg, 1.25 mmol ), 氮 气保护下， 加热回流反应过夜， TLC监测原料反应完全后， 停止加热， 冷却至室温后， 倒入 THF:H 2 0 = 1 : 1溶液（ 15 mL ) 中， 搅拌下滴力。 10% NaOH水溶液至 PH>7, 混合物用二氯曱烷萃取（ 15 mL χ 3 ), 合并有机 相， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石油醚： 乙 酸乙酯 = 3: 1 ), 分离得到产品 S8黄色固体 153 mg, 收率 48%。 ESI-MS [M+H]+=384.3。
ifiNMR (CDC1 3 , 400 MHz): 7.74 (1H, s), 6.90-7.40 (4H, m), 5.33 (1H, s), 4.91-4.96 (1H, m), 4.14 (2H, s), 2.60-2.68 (2H, m), 2.48(3H, s), 1.96(3H, s), 1.26 (3H, d, J =6.4 Hz), 1.18 (3H, d, J =7.6 Hz), 1.02 (3H, d, J =6.4 Hz). 实施例 9: 化合物 S9的合成
步骤 1 化合物 C9的合成
将 3-硝基苯曱醛（ 1.51 g, 0.01 mol )、 乙酰乙酸异丙酯（ 1.44 g, 0.01 mol )、 催化量的哌啶 0.25mL、 醋酸 0.25 mL及曱苯 20mL加入反应瓶中 加热回流反应 , TLC监测反应结束， 加水 10 mL, 乙酸乙酯萃取 ( 20 mL 3 ), 合并有机相， 有机相依次用饱和 NaHS0 3 、 NaCl洗涤， 无水硫酸钠 干燥，浓缩，得到产品 C9淡黄色油状物 2.77g,收率：定量。 ESI- MS: 278.1 [M+H] + 。
步骤 2 中间体 D9的合成 将 A ( 1.49 g, 10 mmol ), 醋酸铵 ( 2.31 g, 30 mmol )及 15mL曱醇加 入反应瓶中， 搅拌， 回流反应 30 min, 加入 C9 ( 2.77 g, 10m mol ), 继续 回流 30 min, TLC检测， 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析（石 油醚：乙酸乙酯 = 3: 1 ),得黄色固体粉末 D9 ( 1.92 g ),收率 56%。 ESI- MS: 341.1 [Μ-Η;Τ。
步骤 3
将中间体 D9 ( 342mg, 1 mmol )溶于 1,2-二氯乙烷 10 mL中， 向其中 加入 4-庚酮 0.6mL和 A1C1 3 ( 200mg, 1. 5 mmol ), 氮气保护下， 加热回 流反应过夜， TLC监测原料反应完全后， 停止加热， 冷却至室温后， 倒 入 THF:H 2 0 = 1 : 1溶液（ 15 mL ) 中， 搅拌下滴加 10% NaOH水溶液至 PH>7, 混合物用二氯曱烷萃取（15 mL x 3 ), 合并有机相， 饱和食盐水 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石油醚： 乙酸乙酯 = 3: 1 ), 分离得到产品 S9黄色固体 198 mg, 收率 45%。 ESI-MS [M+H]+=439.3。
ifiNMR (CDC1 3 , 400 MHz): 8.24 (1H, s), 8.04 (1H, d, J =8.0 Hz), 7.67 (1H, d, J =7.6 Hz), 7.42 (1H, t, J =8.0 Hz), 7.05 (1H, s), 5.15 (1H, s),
5.00-5.06 (1H, m), 4.11 (2H, s), 2.30-2.53 (4H, m), 2.42(3H, s), 1.65-1.71 (2R m), 1.31 (3H, d, J =6.0 Hz), 1.20 (3H, d, J =6.4 Hz), 1.09 (3H, t, J =7.6 Hz), 1.02 (3H, t, J =7.2 Hz)。
sio
步骤 1 化合物 C10的合成 将 2-氯苯曱醛（2.8 g, 0.02 mol )、 乙酰乙酸烯丙酯（ 2.84 g, 0.02 mol )、 催化量的哌啶 0.5ml、 醋酸 0.5 ml及曱苯 20ml加入反应瓶中加热回流反 应， TLC监测反应结束， 加水 10 mL, 乙酸乙酯萃取（20 mL x 3 ), 合 并有机相， 有机相依次用饱和 NaHS03、 NaCl洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 得到产品 C10淡黄色油状物 5.28g, 收率： 定量。
步骤 2 中间体 D10的合成
将 A ( 1.49 g, 10 mmol ), 醋酸铵 ( 2.31 g, 30 mmol )及 15ml曱醇加 入反应瓶中， 搅拌， 回流反应 30 min, 加入 C10 ( 2.64 g, 10m mol ), 继 续回流 30 min, TLC检测， 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析（石 油醚： 乙酸乙酯 = 3: 1 ), 得黄色固体粉末 D10 ( 1.33 g ), 收率 40%。 ESI- MS: 328.1 [M-H] -。
步骤 3
将中间体 D10 ( 329mg, 1 mmol )溶于 1,2-二氯乙烷 10 mL中， 向其 中加入 3-戊酮 lmL和 A1C1 3 ( 200mg, 1. 5 mmol ), 氮气保护下， 加热回 流反应过夜， TLC监测原料反应完全后， 停止加热， 冷却至室温后， 倒 入 THF:H 2 0 = 1 : 1溶液（ 15 mL ) 中， 搅拌下滴加 10% NaOH水溶液至 PH>7, 混合物用二氯曱烷萃取（15 mL x 3 ), 合并有机相， 饱和食盐水 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石油醚： 乙酸乙酯 = 3: 1 ), 分离得到产品 S10黄色固体 303 mg, 收率 76%„ ESI-MS [M+H]+=398.2。
ifiNMR (CDC1 3 , 400 MHz): 7.50 (IH, d, J =7.6 Hz), 7.27 (IH, d, J =7.6
Hz), 7.17 (IH, t, J =7.6 Hz), 7.09 (IH, t, J =7.6 Hz), 6.70 (IH, s), 5.86-5.93 (IH, m), 5.47 (IH, s), 5.13 (IH, s), 5.08-5.12 (IH, m), 4.57-4.60 (2H, m), 4.50 (2H, s), 2.58-2.72 (2H, m), 2.46 (3H, s), 1.96 (3H, s), 1.20 (3H, t, J =7.6 Hz). 实施例 11: 化合物 Sll的合成
步骤 1 化合物 CI 1的合成
将 2-氯苯曱醛（ 2.8 g, 0.02 mol )、 乙酰乙酸曱氧基乙酯 （ 3.2 g, 0.02 mol )、 催化量的哌啶 0.5ml、 醋酸 0.5 ml及曱苯 20ml加入反应瓶中加热 回流反应， TLC监测反应结束， 加水 10mL, 乙酸乙酯萃取（20 mL 3), 合并有机相， 有机相依次用饱和 NaHS0 3 、 NaCl洗涤， 无水硫酸钠 干燥，浓缩，得到产品 C11淡黄色油状物 5.1g,收率：定量。 ESI-MS: 283.1 tM+H]+。
步骤 2 中间体 D5的合成
将 A (2.69g, 18.1 mmol), 醋酸铵（ 4.19 g, 54.3 mmol )及 15ml曱醇 加入反应瓶中， 搅拌， 回流反应 30min, 加入 C11 ( 5.1 g, 18.1m mol ), 继续回流 30min, TLC检测， 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析 (石油醚： 乙酸乙酯 =3:1), 得黄色固体粉末 D11 (3.31 g), 收率 53%。 ESI- MS: 348.1 [M-H]
步骤 3
将中间体 Dll ( 280mg, 0.81 mmol )溶于 1,2-二氯乙烷 10 mL中， 向 其中加入 3-戊酮 lmL和 A1C1 3 ( 160mg, 1.2 mmol), 氮气保护下， 加热 回流反应过夜， TLC监测原料反应完全后， 停止加热， 冷却至室温后， 倒入 THF:H 2 0 = 1:1溶液（ 15 mL ) 中， 搅拌下滴力。 10% NaOH水溶液至 PH>7, 混合物用二氯曱烷萃取（15 mLx 3), 合并有机相， 饱和食盐水 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石油醚:乙酸乙酯 =3:1), 分离得到产品 S11黄色固体 223 mg, 收率 66%。 ESI-MS [M+H]+=416.2。 ifiNMR (CDC1 3 , 400 MHz): 7.50 (1H, d, J =7.6 Hz), 7.27 (1H, d, J =7.6 Hz), 7.17 (1H, t, J =7.6 Hz), 7.09 (1H, t, J =7.6 Hz), 6.70 (1H, s), 5.46 (1H, s), 4.51 (2H, s), 4.15-4.28 (2H, m), 3.55-3.67 (2H, m), 3.33 (3H, s), 2.48-2.59 (2H, m), 2.45 (3H, s), 1.96 (3H, s), 1.20 (3H, t, J =7.6 Hz).
施例 12: 化合物 S12的合成
步骤 1 化合物 C12的合成
将 2-氟苯曱酸 ( 0.62 g, 5mmol ), 乙酰乙酸烯丙酯（ 0.71 g, 5mmol )、 催化量的哌啶 0.25ml、 醋酸 0.25 ml及曱苯 10ml加入反应瓶中加热回流 反应， TLC监测反应结束， 加水 10 mL, 乙酸乙酯萃取（10 mL 3 ), 合并有机相， 有机相依次用饱和 NaHS03、 NaCl洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 得到产品 C12淡黄色油状物 2g, 收率： 定量。 ESI- MS: 249.1 tM+H]+。
步骤 2 中间体 D12的合成
将 A ( 1.2 g, 8.1 mmol ), 醋酸铵 ( 1.87 g, 24.3 mmol )及 20ml曱醇加 入反应瓶中， 搅拌， 回流反应 30 min, 加入 C12 ( 2.64 g, 10m mol ), 继 续回流 30 min, TLC检测， 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析（石 油醚： 乙酸乙酯 = 3: 1 ),得黄色固体粉末 D12( 1.6 g ),收率 63%。 ESI- MS: 312.1 [Μ-Η;Γ。
步骤 3 将中间体 D12 ( 313mg, 1 mmol )溶于 1,2-二氯乙烷 10 mL中， 向其 中加入 4-庚酮 1 mL和 A1C1 3 ( 200mg , 1. 5 mmol ) , 氮气保护下， 加热回 流反应过夜， TLC监测原料反应完全后， 停止加热， 冷却至室温后， 倒 入 THF:H 2 0 = 1: 1溶液（ 15 mL ) 中， 搅拌下滴加 10% NaOH水溶液至 PH>7, 混合物用二氯曱烷萃取（15 mL x 3 ), 合并有机相， 饱和食盐水 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石油醚： 乙酸乙酯 = 3: 1 ), 分离得到产品 S12黄色固体 213 mg, 收率 52%。 ESI-MS [M+H]+=410.3。
ifiNMR (CDC1 3 , 400 MHz): 7.39 (IH, t, J =6.8 Hz), 7.11-7.16 (IH, m), 6.69-7.10 (2H, m), 6.76 (IH, s), 5.83-5.93 (IH, m), 5.38 (IH, s), 5.14-5.17 (IH, m), 5.12 (IH, s), 4.51-4.58 (2H, m), 4.37 (2H, s), 2.50-2.58 (3H, m), 2.47 (3H, s), 2.28-2.38 (IH, m), 1.60-1.72 (2H, m), 1.09 (3H, t, J =7.2 Hz), 1.02 (3H, t, J =7.2 Hz).
13: 化合物 S13的合成
步骤 1 化合物 B13的合成
将 2,2,6-三曱基 -1,3-二恶英 -4-酮 （7.1g, 0.05mol )和 2,2,2-三氟乙醇 ( 10g, O.lmol )溶于二曱苯（60 mL ) 中， 加热至 90°C , 反应搅拌过夜, 待反应完全后， 冷却至室温直接用于下一步。
步骤 2化合物 C13的合成
将 3-硝基苯曱醛（2.5 g, 16.7mmol )、 乙酰乙酸 -2,2,2-三氟乙酯（约 16.7mmol )、 催化量的哌啶 0.5ml、 醋酸 0.5 ml及曱苯 20ml加入反应瓶中 至 90 °C , TLC监测反应结束，加水 10 mL, 乙酸乙酯萃取 ( 30 mL 3 ), 合并有机相， 有机相依次用饱和 NaHS03、 NaCl洗涤， 无水硫酸钠干燥, 浓缩， 硅胶柱层析（石油醚:乙酸乙酯 = 10: 1 ), 分离得到产品 C13淡黄 色油状物 l.Og, 两步收率 19%。 ESI- MS: 318.1 [M+H] + 。
步骤 3 中间体 D13的合成
将 A ( 0.47 g, 3.15 mmol ), 醋酸铵 ( 0.73 g, 9.45 mmol )及 20ml曱醇 加入反应瓶中， 搅拌， 回流反应 30 min, 加入 C13 ( 1.0 g, 3.15m mol ), 继续回流 30 min, TLC检测， 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析 (石油醚： 乙酸乙酯 = 3: 1 ), 得黄色固体粉末 D13 ( 0.83 g ), 收率 69%。 ESI- MS: 381.1 [Μ-Η; 。
步骤 4
将中间体 D13 ( 357mg, 0.93 mmol )溶于 1,2-二氯乙烷 10 mL中， 向 其中加入 4-庚酮 lmL和 A1C1 3 ( 186mg, 1. 4 mmol ), 氮气保护下， 加热 回流反应过夜， TLC监测原料反应完全后， 停止加热， 冷却至室温后， 倒入 THF:H 2 0 = 1 : 1溶液（ 15 mL ) 中， 搅拌下滴力。 10% NaOH水溶液至 PH>7, 混合物用二氯曱烷萃取（15 mL x 3 ), 合并有机相， 饱和食盐水 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石油醚： 乙酸乙酯 = 3: 1 ), 分离得到产品 S13黄色固体 267 mg, 收率 60%。 ESI-MS [M+H]+=479.3。
ifiNMR (CDC1 3 , 400 MHz): 8.18 (1H, s), 8.06 (1H, d, J =8.4 Hz), 7.68 (1H, d, J =7.6 Hz), 7.44 (1H, d, J =8.0 Hz), 6.99 (1H, s), 5.12 (1H, s),
4.40-4.52 (2H, m), 4.09 (2H, s), 2.50-2.63 (3H, m), 2.44 (3H, s), 2.32-2.40 (1H, m), 1.66-1.73 (2H, m), 1.09 (3H, t, J =7.6 Hz), 1.03 (3H, t, J =7.6 Hz). 施例 14: 化合物 S14的合成
步骤 1 化合物 C14的合成
将 2-氟苯曱酸 ( 2.07 g, 16.7mmol ), 乙酰乙酸 -2,2,2-三氟乙酯（约 16.7mmol )、 催化量的哌啶 0.5mL、 醋酸 0.5 mL及曱苯 20mL加入反应瓶 中至 90°C , TLC监测反应结束，加水 10 mL, 乙酸乙酯萃取 ( 30 mL 3 ), 合并有机相， 有机相依次用饱和 NaHS0 3 、 NaCl洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石油醚:乙酸乙酯 = 10: 1 ), 分离得到产品 C14淡黄 色油状物 0.93g, 两步收率 19%。 ESI- MS: 291.1 [M+H] + 。
步骤 2 中间体 D14的合成
将 A ( 0.48g, 3.2 mmol ), 醋酸铵 ( 0.74 g, 9.6 mmol )及 20mL曱醇加 入反应瓶中， 搅拌， 回流反应 30 min, 加入 C14 ( 0.93 g, 3.2m mol ), 继 续回流 30 min, TLC检测， 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析（石 油醚： 乙酸乙酯 = 3: 1 ), 得黄色固体粉末 D14 ( 0.63g ), 收率 56%。 ESI- MS: 354.1 [Μ-Η; 。
步骤 3
将中间体 D14 ( 264mg, 0.74 mmol )溶于 1,2-二氯乙烷 10 mL中， 向 其中加入 3-戊酮 l.O mL和 A1C1 3 ( 148mg, 1. 11 mmol ), 氮气保护下， 加 热回流反应过夜， TLC监测原料反应完全后， 停止加热， 冷却至室温后， 倒入 THF:H 2 0 = 1 : 1溶液（ 15 mL ) 中， 搅拌下滴力。 10% NaOH水溶液至 PH>7, 混合物用二氯曱烷萃取（15 mL x 3 ), 合并有机相， 饱和食盐水 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石油醚:乙酸乙酯 = 3: 1 ), 分离得到产品 S14黄色固体 152 mg, 收率 49%。 ESI-MS [M+H]+=424.2。
ifiNMR (CDC1 3 , 400 MHz): 7.37 (1H, td, Jj =7.6 Hz, J 2 =2.0 Hz), 7.13-7.19 (1H, m), 6.97-7.08 (2H, m), 6.94 (1H, s), 5.34 (1H, s), 4.36-4.43 (2H, m), 4.35 (2H, s), 2.59-2.70 (2H, m), 2.48 (3H, s), 1.98 (3H, s), 1.20 (3H, t, J =7.6 Hz).
实施例 15: 化合物 S15的合成
五氟苯曱醛（ 500 mg, 2.55 mmol ), 乙酰乙酸乙酯（ 431 mg, 3.32 mmol ), 中间体 A ( 383 mg, 2.55 mmol )和醋酸按 ( 256 mg, 3.32 mmol ) 置于圓底烧瓶中， 加入 30 mL曱醇溶解， 加热回流下搅拌 5 h, 冷却至室 温， 在真空下浓缩， 硅胶柱层析（石油醚:乙酸乙酯 = 3:1 ), 分离得到黄 色油状物的目标中间体 D15, 102 mg, 收率 11%。 ESI-MS (m/z): 374.0 [M+H] + , 396.6 [M+Na] + 。
步骤 2
将中间体 D15 ( 80 mg, 0.214 mmol )置于 ^ ^应管中，用 3 mL 1,2- 二氯乙烷溶解，向其中加入 3-戊酮（ 110 mg, 1.287 mmol )和三氯化铝（ 85.5 mg , 0.643 mmol ) , 置于微 ^^应器中进行反应， 温度 Τ = 100°C , 时间 t = 3 h, TLC监测原料反应完全后，停止反应，冷却至室 温后，倒入 THF:H 2 0 = 1: 1溶液（ 10 mL ) 中， 搅拌下滴力口 10% NaOH水溶液至 PH>7, 混合物 用二氯曱烷萃取（10 mL x 3 ), 合并有机相， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸 钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石油醚： 乙酸乙酯 = 3:1 ), 分离得到产品 S15黄色油状物 24 mg, 收率 25%。 ESI-MS (m/z): 442 [M+H] + 。
¾NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.54 (1H, s), 5.55 (1H, s), 4.99 (2H, s), 3.94 (2H, m), 2.54 (2H, m), 2.31 (3H, s), 1.90 (3H, s), 1.11 (6H, t, J = 7.2 Hz). 实施例 16: 化合物 S16的合成
S16
步骤 1
称取 2-曱氧基苯曱醛（6.8g,0.05mmol)溶于曱苯（20mL) 中， 向 其中加入哌啶（3.1 mL), 乙酰乙酸乙酯（ 8.4 g, 0.06 mmol )和醋酸（6.2 mL), 加热回流过夜， 真空下浓缩， 浓缩液中加入水 10 mL, 二氯曱烷萃 ( 20 mL 3 ), 合并有机相， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 硅胶柱层析（石油醚:乙酸乙酯 =10:1 ), 分离得到产品 C16, 黄色油状物 8.6 g, 收率 68.7%。
步骤 2
将 A ( 2.2 g, 14.6 mmol ), 醋酸铵（ 3.3 g, 42.8 mmol )及 20mL曱醇 力口入反应瓶中， 搅拌， 回流反应 30 min, 力口入 C16 ( 3.5 g, 14.1 mmol ), 继续回流 30min, TLC检测， 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析 (石油醚： 乙酸乙酯 =3:1 ), 得黄色固体 D16 ( 1.1 g), 收率 27%。
步骤 3
参照实施例 15中 S15的合成方法， 利用中间体 D16 ( 80 mg, 0.256 mmol ), 3-戊酮 （ 132 mg, 1.53 mmol )和三氯化铝 （ 68 mg, 0.511 mmol ) 进行 ^ ^应， 得到目标产品 S16黄色固体 28 mg, 收率 29%。 ESI-MS (m/z): 382 [M+H] + 。
toMR (400MHz, CDC1 3 ): δ 7.38 (1H, m), 7.15 (1H, m), 6.88 (1H, m),
5.47 (1H, s), 4.89 (2H, br s), 4.02 (2H, m), 3.99 (3H, s), 2.62 (2H, q, J = 7.6 Hz), 2.48 (3H, s), 1.95 (3H, s), 1.15 (6H, m).
D17 S17
步骤 1
参照实施例 15中 D15的合成方法， 3-氟苯曱酸 ( 1.5g, 0.012 mol ), 丙酰乙酸曱酯 ( 2.04 g, 0.015 mol ), 中 A ( 1.8 g, 0.012 mol )和醋酸 铵（ 1.1 g, 0.014 mol )反应得到目标中间体 D17, 黄色固体 365mg, 收率 11%。
步骤 2
参照实施例 15中 S15的合成方法， 利用中间体 D17 ( 150 mg, 0.5 mmol ), 4-庚酮 （ 510 mg, 5.0 mmol )和三氯化铝（ 133 mg, 1.0 mmol )进 行 波反应，得到目标产品 S17黄色固体 11 mg,收率 6%。 ESI-MS (m/z): 398 [M+H] + 。
¾NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.19 (IH, s), 7.24-7.18 (IH, m), 7.14-7.09 (2H, m), 6.92-6.87 (IH, m), 5.46 (2H, br s), 5.08 (IH, s), 3.55 (3H, s), 2.82-2.75 (IH, m), 2.74-2.60 (IH, m), 2.49-2.30 (4H, m), 1.61-1.52 (2H, m), 1.09 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.95-0.92 (6H, m).
步骤 1
参照实施例 15中 D15的合成方法， 2-氯苯曱醛 ( 1.4g, 0.01 mol ), 三 氟乙酰乙酸乙酯（2. 4 g, 0.013 mol ), 中间体 A ( 1.5 g, 0.01 mol )和醋酸 铵（ 0.92 g, 0.012 mol )反应得到目标中间体 D18, 黄色固体 430 mg, 收 率 12%。
步骤 2
参照实施例 15中 S15的合成方法， 利用中间体 D18 ( 120 mg, 0.323 mmol ), 3-戊酮（ 167 mg, 1.941 mmol )和三氯化铝（ 85.9 mg, 0.646 mmol ) 进行 ^ ^应， 得到目标产品 S18黄色固体 51 mg, 收率 36%。 ESI-MS (m/z): 440 [M+H] + 。
ifiNMR (400MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.52 (1H, br s), 7.41-7.35 (2H, m), 7.29 (1H, t, J = 7.2 Hz), 7.23-7.19 (1H, m), 5.36 (1H, s), 5.23 (2H, br s), 4.01-3.97 (2H, m), 2.58-2.55 (2H, m), 1.88 (3H, s), 1.10-1.09 (6H, m).
S19
步骤 1 化合物 C19的合成
乙酰乙酸乙酯 （ 1.95g, 0.015 mol ), 溶于 30mL曱苯中， 同时加入间 三氟苯曱醛（2.61g, 0.015 mol ), 在搅拌的的过程中緩慢滴加 2滴哌啶， 搅拌 2min, 随后緩慢滴加 2滴醋酸， 继续搅拌， 有大量白色烟雾产生， 待反应平稳后， 将上述反应体系至于 95 °C油浴中加热回流， TLC检测， 4h后停止反应， 冷却、 并将反应溶剂于旋转蒸发仪上蒸干， 粗品经硅胶 柱层析色谱进行分离， 采用石油醚与乙酸乙酯的体积比为 20:1-10:1的梯 度进行洗脱， 得到淡黄色油状化合物 C19 ( 3.0g ), 收率 70 %。 步骤 2 中间体 D19的合成
将 A ( 2.35g, 0.015mol ) 置于 100 mL反应瓶中， 加入 30 mL曱醇， 然后加入醋酸铵（3.0g, 0.038mol ), 于 80°C油浴中加热回流， 搅拌 0.5h 后， 停止搅拌， 向该体系中加入 C19 ( 3.0g, 0.01mol ), 继续回流搅拌， TLC检测， lh后停止反应， 冷却， 并将反应溶剂于旋转蒸发仪上蒸干， 粗品经硅胶柱层析色谱进行分离， 采用石油醚与乙酸乙酯的体积比为 4: 1-2: 1的梯度进行洗脱， 得到白色固体化合物 D19 ( 2g ), 收率 35%。
步骤 3
将 D19(70mg, 0.20mmol)溶于 15mL的 1,2-二氯乙烷中， 加入 3-戊酮 (lOOmg, 1.2mmol), 然后加入三氯化铝 (40mg,0.3mmol), 上述体系于 95 °C 油浴中加热回流搅拌， TLC检测， 48h后停止反应， 冷却， 将上述反应液 倒于 30mL的四氢呋喃 /水 =1 : 1的混合溶液中，緩慢滴加 10% 的 NaOH溶 液调节 PH >7.0,搅拌 0.5h后， 两相分层， 水相用二氯曱烷（3 X 10mL ) 萃取， 合并有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤、 浓缩后， 硅胶柱层析色谱进行分离， 采用石油醚与乙酸乙酯的体积比为 6: 1 - 4: 1 的梯度进行洗脱，得到化合物 S19, 35mg, 收率 39.3%。 ESI-MS [M+H] + = 420.2。
ifiNMR (400MHz, CDC1 3 ): δ 1.29 (6H, m), 1.99 (3H, s), 2.41 (3H, s), 2.66 (2H, m), 4.01 (2H, s), 4.13 (2H, m), 5.10 (1H, s), 6.22 (1H, m), 7.36 (1H, t, J=8.0Hz), 7.43 (1H, d, J=7.6Hz), 7.50 (1H, d, J=7.6Hz), 7.63 (1H, s).
20: 化合物 S20的合成
步骤 1.
称量 2,2,6-三曱基 -4H-1,3-二噁英 -4-酮 （ 5.4g, 0.037mol ), 溶于 60mL 二曱苯中， 然后緩慢滴加丙炔醇（2.76g,0.049mol), 将上述体系至于 115 °C油浴中加热回流， TLC检测， 4 h后停止反应， 冷却， 并将反应溶剂于 旋转蒸发仪上蒸干，粗品经硅胶柱层析色谱进 行分离，采用石油醚与乙酸 乙酯的体积比为 40:1-20:1的梯度进行洗脱， 得到无色油状化合物 B20 (4.11g), 收率 77.4%, ESI-MS [M+H]+=141.1。
步骤 2.
称量化合物 B20 ( 2.2g, 0.015 mol ), 溶于 30mL曱苯中， 同时加入间 氟苯曱醛 ( 1.94g, 0.015 mol ), 在搅拌的的过程中緩慢滴加 2滴哌啶， 搅 拌 2min, 随后緩慢滴加 2滴醋酸， 继续搅拌， 有大量白色烟雾产生， 待 反应平稳后， 将上述反应体系至于 95°C油浴中加热回流， TLC检测， 4h 后停止反应， 冷却、 并将反应溶剂于旋转蒸发仪上蒸干， 粗品经硅胶柱层 析色谱进行分离， 采用石油醚与乙酸乙酯的体积比为 20:1-10:1的梯度进 行洗脱， 得到淡黄色油状化合物 C20 (2.078g), 收率 54%。
步骤 3.
将化合物 A ( 1.5g, O.Olmol )置于 100 mL反应瓶中， 加入 75 mL曱 醇， 然后加入醋酸铵（ 1.6g, O.Olmol), 于 80°C油浴中加热回流，搅拌 0.5h 后， 停止搅拌， 向该体系中加入上述制得化合物 C20 (2.1g, O.Olmol), 继 续回流搅拌， TLC检测， lh后停止反应， 冷却， 并将反应溶剂于旋转蒸 发仪上蒸干，粗品经硅胶柱层析色谱进行分离 ，采用石油醚与乙酸乙酯的 体积比为 4:1-2:1的梯度进行洗脱， 得到白色固体化合物 D20 ( 1.34g ), 收率 43%。
步骤 4.
将上述制得的化合物 D20 (260mg, 0.8mmol)溶于 15mL的 1,2-二氯 乙烷中， 加入 3-戊酮 （345mg,4.2mmol), 三氯化铝（ 319mg, 2.5mmol ), 上述体系于 95 °C油浴中加热回流搅拌， TLC检测， 48h后停止反应， 冷 却， 将上述反应液倒于 30mL的四氢呋喃 /水 =1:1的混合溶液中， 緩慢滴 加 10% 的 NaOH溶液调节 PH >7.0, 搅拌 0.5h后， 两相分层， 水相用二 氯曱烷（3xl0mL)萃取， 合并有机相用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干 燥， 过滤、 浓缩后， 硅胶柱层析色谱进行分离， 采用石油醚与乙酸乙酯的 体积比为 6:1 - 4: 1的梯度进行洗脱， 得到化合物 S20, 90 mg, 收率 30%。 ESI-MS [M+H] + = 380.2; ESI-MS [Μ-ΗΓ= 378.2。
ifiNMR (400MHz, CDC1 3 ): δ 1.23 (3H, t, J=7.6Hz), 1.99 (3H, s), 2.42 (3H, s), 2.47 (1H, m), 2.68 (2H, m), 4.04 (2H, s), 4.70 (2H, m), 5.07 (1H, s), 6.69 (1H, m), 6.87 (1H, m), 7.07 (1H, m), 7.20 (1H, m).
实施例 21: 化合物 S21的合成
步骤 1 化合物 C21的合成
将乙酰乙酸环丙曱基酯 （ 15.6 g, 0.1 mol )与醋酐（ 7.5 g, 0.073 mol ) 混合， 在冰浴搅拌下加入硫酸（ 0.8 mL ), 加入苯曱醛（ 11.6 g, 0.11 mol ), 固体緩慢溶解， 搅拌 lh后， TLC监测反应结束， 加水 5 mL, 二氯曱烷 ( 20 mL 3 ), 合并有机相， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓 缩， 硅胶柱层析（石油醚： 乙酸乙酯 = 10:1 ), 分离得到产品 C21淡黄色 油状物 10.98g, 收率 45%。
步骤 2 中间体 D21的合成
将 A ( 1.24 g, 8.4 mmol ), 醋酸铵 ( 1.94 g, 25.2 mmol )及 lOmL曱醇 加入反应瓶中， 搅拌， 回流反应 30 min, 力口入 C21 ( 2.04 g, 84 mmol ), 继续回流 30 min, TLC检测， 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析 (石油醚： 乙酸乙酯 = 3: 1 ), 得黄色固体粉末 D21 ( 0.71 g ), 收率 56%。
步骤 3
准确称取 D21 ( 280 mg, 0.91 mmol ), 溶于 10 mL 1,2-二氯乙烷溶液 中， 搅拌溶解， 然后緩慢滴加 3-戊酮 （ 117 mg, 1.36 mmol ), 加入 A1C1 3 ( 181 mg, 1.36mmol)。 加热至回流反应 12 h, TLC检测无原料， 冷却。 加入 THF:H 2 0 = 1:1水溶液 10 mL稀释。 滴加 1 mol/LNaOH水溶液调节 PH至碱性， 室温搅拌 30min, 二氯曱烷萃取 20 mL x 3, 合并有机层， 干 燥， 柱层析， 二氯曱烷:曱醇 = 100:1〜40:1, 得到淡黄色固体 50mg, 收率 14.66 %。 ESI-MS: 378.1 [M + H] + 。
¾NMR (400 MHz, CDC1 3 ) δ 0.86 (2Η, m), 1.24 (6Η, m), 1.64 (2H, m), 1.98 (3H, s), 2.11 (2H, m), 2.68 (3H, s), 2.70 (1H, m), 4.21 (2H, m), 4.97 (1H, m), 7.19 (1H, m), 7.28 (2H, m), 7.36 (2H, m)。
实施例 22: 化合物 S22的合成
步骤 1 化合物 C22的合成
将乙酰乙酸氛基乙酯（ 15.5 g, 0.1 mol)与醋酐（ 7.5 g, 0.073 mol )混 合， 在冰浴搅拌下加入硫酸 ( 0.8 mL ), 再加入苯曱醛 ( 11.6 g, 0.11 mol ), 固体緩慢溶解， 搅拌 lh后， TLC监测反应结束， 加水 5mL, 二氯曱烷 ^ ( 20 mL 3 ), 合并有机相， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓 缩， 硅胶柱层析（石油醚： 乙酸乙酯 = 10:1 ), 分离得到产品 C22淡黄色 油状物 18.96g, 收率 50.4%。
步骤 2 中间体 D22的合成
将 A ( 1.24 g, 8.4 mmol ), 醋酸铵 ( 1.94 g, 25.2 mmol )及 lOmL曱醇 加入反应瓶中， 搅拌， 回流反应 30 min, 力口入 C22 ( 2.04 g, 84 mmol ), 继续回流 30min, TLC检测， 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析 (石油醚： 乙酸乙酯 =3:1 ), 得黄色固体粉末 D22 (0.71 g), 收率 56%。 步骤 3
准确称取 D22 ( 308 mg, 1 mmol ), 溶于 10 mL 1,2-二氯乙烷溶液中， 搅拌溶解，然后緩慢滴加 3-戊酮（ 129 mg, 1.5 mmol ),加入 A1C1 3 ( 200 mg, 1.5 mmol )。加热至回流反应 12 h, TLC检测无原料，冷却。加入 THF:H 2 0 = 1:1水溶液 10 mL稀释。 滴加 1 mol/LNaOH水溶液调节 PH至碱性， 室 温搅拌 30min, 二氯曱烷萃取 20 mL x 3, 合并有机层， 干燥， 柱层析， 石油醚：乙酸乙酯 = 10:1〜1:1,得到淡黄色固体 S22(30mg),收率 7.98 %。 ESI-MS: 377.0 [M + H] + ； 375.0 [M-H] -。
¾NMR (400 MHz, DMSO-i 6 ): δ 1.12 (3Η, t,J=1.6 Hz), 1.90 (3H, s),
2.33 (3H, s), 2.54 (2H, m), 2.88 (2H, m), 4.13 (2H, m), 5.01 (1H, s), 5.25 (2H, s), 7.08 (1H, m), 7.18 (2H, t, J= 7.6 Hz), 7.32 (2H, d,J= 7.2 Hz), 9.27 (1H, s)。
实施例 23: 化合物 S23的合成
步骤 1 化合物 C23的合成
将乙酰乙酸异丙酯 ( 0.72 g, 5 mmol )与醋酐 ( 0.1 g, 0,9 mmol )混合， 在冰浴搅拌下加入硫酸（ 0.01 mL ), 加入嘧啶 -5-曱醛（ 0.54 g, 5 mmol ), 固体緩慢溶解， 搅拌 lh后， TLC监测反应结束， 加水 5 mL, 二氯曱烷 ^ ( 20 mL 3 ), 合并有机相， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓 缩， 硅胶柱层析（石油醚： 乙酸乙酯 = 10:1 ), 分离得到产品 C23淡黄色 油状物 0.88g, 收率 75%。 步骤 2 中间体 D23的合成
将 A ( 0.56 g, 3.7 mmol ), 醋酸铵 ( 0.87 g, 11.1 mmol )及 lOmL曱醇 加入反应瓶中， 搅拌， 回流反应 30 min, 加入 C23 ( 0.88 g, 3.7 mmol ), 继续回流 30 min, TLC检测， 反应完全， 真空下浓缩， 粗品硅胶柱层析 (石油醚： 乙酸乙酯 = 3: 1 ), 得黄色固体粉末 D23 ( 0.53 g ), 收率 47%。
步骤 3
准确称取 D23 ( 125 mg, 0.42 mmol ), 溶于 10 mL 1,2-二氯乙烷溶液 中， 搅拌溶解， 然后緩慢滴加 3-戊酮 （36 mg, 0.42 mmol ), 加入 A1C1 3 ( 84 mg, 0.63 mmol )。 波 98 °C反应 2 h, TLC检测无原料， 冷却。 加 入 THF:H 2 0 = 1: 1水溶液 10 mL稀释。滴加 1 mol/L NaOH水溶液调节 PH 至碱性， 室温搅拌 30 min, 二氯曱烷萃取 20 mL x 3 , 合并有机层， 干燥， 柱层析，石油醚：丙酮 = 10: 1-3: 1 ,得到淡黄色固体 53.4 mg,收率 65.91 %。 ESI-MS: 368.3 [M + H] + ； 366.0: [M - H] - 。
¾NMR (400 MHz, CDC1 3 ) δ 0.91 (3Η, t, «/= 6.8 Hz), 1.22 (6H, m), 2.01 (3H, s), 2.42 (3H, s), 2.68 (2H, m), 4.02 (2H, s), 5.02 (1H, s), 5.05 (1H, m), 8.70 (2H, s), 9.03 (1H, s)。 实施例 24:利用高内涵筛选分析仪检测化合物对 L-型 Ca 2+ 通道阻滞活性 利用高内涵筛选分析仪 (HCS)平台， 实时荧光法测定化合物(@10 μ Μ, @50 μ Μ )对 KC1诱导 SH-SY5Y细胞电压门控钙离子内流抑制活性， 从而评价实施例所制备的部分化合物对钙离子 通道抑制活性。
实验采用 Fluo-4-AM钙离子探针在生理条件下，对 SH-SY5Y细胞进 行负载， 然后利用 KC1诱导电压门控钙通道开发， 钙离子经细胞膜钙通 道内流， 与荧光探针结合产生荧光信号； 于此同时， 高内涵记录细胞内实 时荧光信号，反映钙流自内流强度。 Fluo-4-AM本身不能被激发产生荧光， 当进入细胞后被胞浆内酯酶切割成 Fluo-4,再与钙离子结合后，经 488nm 光激发产生强烈绿色荧光。 KC1作为电压门控钙离子通道的激动剂： 当 K+达到一定浓度时， 电压门控钙离子通道开放， 钙离子内流进入细胞， 与染料结合产生荧光。如果钙通道被化合物抑 制，则进入细胞内的钙离子 减少， 荧光强度降低， 降低程度与化合物对钙离子通道的抑制程度相 关。 L型钙离子通道属于电压门控钙离子通道。 本实验中采用的 SH-SY5Y细 胞， 其细胞膜表面电压门控钙离子通道以 L-型为主， 故 KC1诱导产生的 钙流信号大多为 L-型钙通道信号。
材料与仪器：
1640+10% FBS+1%P/S培养液、 胰酶均购自 Gibico。
SH-SY5Y细胞来自南京医科大学细胞生物学研究 。
Fluo-4 Direct™ Calcium Assay Kits： 购自 Invitrogen , 货号 F 10471。 高内涵筛选分析仪（ HCS ): Molecular Devices公司， 型号：
Imagexpress。
96孔黑板： Corning 3603。
KCL无机试剂 （分析纯）： 购自 sigma, 使用时配制成 1M储液， 使 用时 4美稀释成 250 mM应用液。
实验步骤
染料配制过程：
完全按照 Fluo-4 Direct™ Calcium Assay Kits ( Invitrogen, 货号
F10471 )说明书配制好染料应用液， 简介如下： 一瓶组分 A (染料固体） 加入 10mL组分 C (緩冲液 )溶解， 一管组分 B ( Probenecid )加入 1 mL 组分 C (緩冲液）； 然后向溶解好的组分 A染料中加入 200 μ∑组分 Β即 得到 2xFluo-4-AM应用液； 按照与细胞孔对应的孔每孔加入 100 染 料应用液到一块新的 96孔板（ Corning 3599 )并放入 HCS仪器待用。
2χ化合物溶液配制过程：
本实验测定所有化合物在高浓度 50 μΜ以及低浓度 10 μΜ时对钙通 道的抑制率，具体的配药过程如下：先将所有 化合物用 DMSO配制成 0.01 Μ的储液， 然后每个化合物用 DMSO稀释成 5000 μΜ以及 1000 μΜ两 个浓度， 每个浓度再用 1640完全培养液稀译 50倍（以 DMSO作为纯溶 剂对照） 即得到 2x化合物溶液备用。
细胞操作过程：
将汇合度为 90%左右的 SH-SY5Y细胞胰酶消化，以 20000个 /孔接入 96孔黑板中； 培养 24 h后去掉培养液， 每孔加入 45 上述不同浓度的 2x化合物溶液（以 DMSO作为纯溶剂对照）， 每个浓度设置 4个复孔， 具 体 96孔设置如表 4所示：
表 4 96孔设置
设置 HCS自动加样的程序， 仪器自动每孔依次加入 45 L完全按照 说明书配置好的 2xFluo-4-AM应用液， 设置参数使每孔加入染料的时间 与每孔的检测所需要的时间相同，同时使所有 孔加完染料所需要的时间与 染料孵育的时间相同 （本实验染料孵育时间为 30 min )
设置 HCS程序， 按照加染料的孔的顺序， 每孔依次加入（保证每孔 染料孵育的时间相同 ) 3(^L浓度为 250 mM的 KC1溶液， 并实时扫描 每孔的荧光强度变化， 加入 KC1之前扫描 10 个时间点的荧光强度， Fl、 F2、 F3、 ...F10;加入 KC1之后再扫描 40个时间点的荧光强度： Fll、 F12、
F13 F50。
结果处理， 结果见表 5。
取 Fl、 F2、 ...F10的平均值 F0,取 Fll、 F12、 F13、 ...F50 中的最 大值 Fmax, 记录 A=Fmax - F0
抑制率 = 100%* ( Δ对照组 -Δ给药组 ) /Δ对照组
表 5本发明提供的化合物对 L-型 Ca 2+ 通道阻滞活性 本发明提供的化合物 10μΜ 50μΜ
SI 26.1% 99.37%
S2 2.4% 49.19%
S3 10.37% 90.99%
S4 18.08% 29.80% S5 22.61% 98.30%
S6 1.37% 70.71%
S7 21.42% 24.67%
S8 41.34% 83.01%
S9 1.94% 85.45%
S10 77.81% 100.37%
Sll 3.90% 26.07%
S12 42.92% 81.31%
S13 70.26% 94.46%
S14 51.79% 69.93%
S15 1.37% 32.97%
S16 7.01% 35.71%
S17 34.75% 68.83%
S18 1.91% 48.57%
S19 21.11% 68.63%
S20 20.08% 93.85%
S21 44.84% 89.13%
S22 25.56% 34.47%
S23 52.34% 84.40%
Nimodipine 15.72% 33.87% 实验结果表明， 本发明提供的化合物对 L-型 Ca 2+ 通道有明显的阻滞 活性， 大部分化合物的活性优于阳性对照药物 Nimodipine。 实施例 25: 化合物对乙酰胆碱酯酶抑制活性的检测
样品： 实施例 1-22所制备的化合物
材料与仪器：
Kit, A12217, invitrogen; 96孔黑板， Costar #3925; Infinite M200酶标 检测仪， Tecan公司。 试剂盒储备液配置：
一支 Amplex Red reagent, Component A, 力口入 200μL· DMSO , Component B , -20°C避光保存； 5 x buffer, Component E使用时根据所需 要的体积用去离子水稀释到 l x , 即为 1 X Reaction Buffer; —支 hrp, Component C,加入 1 mL 1 Reaction Buffer,分装后 -20 oC保存； 5 μ 3.3 %的¾0 2 , Component D, 加入到 234.1 去离子水中， 得到 20 mmol/L 的 H 2 0 2 工作液，现配现用；一支 Choline Oxidase,加入 600 μ 1 Reaction Buffer, 分装后 -20°C保存； 5 mg Ach-cl, Componentg, 加入 275 去离 子水的比例配置 100 mmol/L Ach应用液， 现称现配现用； 一支 AchE, 加 入 600 μΐ^ 1 X Reaction Buffer, 分装后 -20 °C保存。
化合物的配置： 根据样品质量及分子量将化合物用 DMSO配置成 0.01 mol/L的储液； 配制 lOOx化合物浓度： 即先用 DMSO将化合物储液 配置成 1000 mol/L、 200 μηιοΙ/L, 40 mol/L、 8 μηιοΙ/L, 1.6 μηιοΙ/L, 0.32 μηιοΙ/L, 0.064 μηιοΙ/L的浓度梯度。
4 X AchE应用液的配置： 根据实际需要的体积按照 1 : 250的比例将
AchE储备液用 1 X Reaction Buffer稀释。
2 工作液的配置： 根据实际需要的体积按照 200 μ Aπφ\ex Red reagent ： 100 Horseradish peroxidas: 100 Choline Oxidase: 10 Ach ： 9590 1 Reaction Buffer的比例将各储备液进行混合得到 2 x 工 作液。
操作过程：在设计好的 96孔黑板的化合物测定孔中每孔先加入 48 μ 的 1 X Reaction Buffer, 以每孔 2 μL的量加入 100 化合物浓度的溶液于 上述化合物测定孔中， 化合物每个浓度设置 2个复孔； 阳性对照孔加入 2 μL DMSO + 4S μL l x Reaction Buffer,阳性验证孔直接加入 100 μL20 mM 的 ¾0 2 工作液，阴性对照孔加入 2 DMSO + 98 μΐ^ 1 x Reaction Buffer, 每孔均设置两个复孔； 化合物测定孔与阳性对照孔每孔加入 50 4 X AchE应用液， 所有的孔以每孔 100 加入 2χ工作液， 混匀， 启动酶促 反应，总反应体系为 200 μΐ^,这样得到的化合物终浓度分别为 l(^mol/L、 2 μηιοΙ/L, 0.4 μηιοΙ/L, 0.08 μηιοΙ/L, 0.016 μηιοΙ/L, 0.0032 μηιοΙ/L, 0.00064 μηιοΙ/L; 室温孵育 30 - 45 min。
荧光检测：在 Infinite M200酶标检测仪下检测各孔在激发波长 540 nm : 发射波长 590 nm下的荧光值， 参数设置 gain值选择 optimal。
数据处理：计算所有给药组和对照组的平均值 ，按如下公式计算抑制 率：
^合药组平均 0D值-阴性对照平均 0D值
欄率 (1 ) X 100%
阳性对 平均 0D值-阴性对照平均 0D值 求出给药浓度以 10为底的对数值， 以该对数值为横坐标， 抑制率为 纵坐标， 在 origin6.0中画图， 拟合出一条药理学量效关系 S形曲线， 求 出对应 50%抑制率时的药物浓度， 即为此化合物抑制乙酰胆碱酯酶活性 的 IC50值。 化合物对乙酰胆碱酯酶抑制活性的检测结果见 表 6。
表 6 本发明化合物对乙酰胆碱酯酶抑制活性的检测 结果
~本发明提供的化合物 抑制活性 IC 5 Q ( nmol/L ) ~
SI 1764
S2 270
S3 720
S4 1080
S5 630
S6 1296
S7 360
S8 324
S9 1242
S10 306
Sl l 310
S12 918
S13 625
S14 428 S15 2320
S16 332
S17 1350
S18 1146
S19 718
S20 495
S21 515
S22 412
tacrine 180 实验结果表明， 实施例所制备的化合物能够抑制乙酰胆碱酯酶 的活 性。
结论： 综合上述实验结果，本发明中的化合物是一种 既能抑制乙酰胆 碱酯酶活性，又能阻滞细胞外钙通过钙通道流 入细胞的化合物，具有双重 活性， 具有重要的潜在治疗价值。 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指 出，对于本技术领域的 普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前 提下，还可以做出若干改进 和润饰， 这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
-I-
Next Patent: SCROLL COMPRESSOR