MUÑOZ-TORRERO LÓPEZ-IBARRA, Diego (Avenida Riera Sant Llorenç, 136 3º 3ª, Viladecans, E-08840, ES)
FORMOSA MÁRQUEZ, Xavier (C/ Sant Joan, 22 2º, Gavà, E-08850, ES)
SCARPELLINI, Michele (Via Fosse Ardeatine, 18 Treviolo, Bergamo, I-24048, IT)
CAMPS GARCÍA, Pelayo (C/ Capitán Arenas, 17 2º 4ª, Barcelona, E-08034, ES)
MUÑOZ-TORRERO LÓPEZ-IBARRA, Diego (Avenida Riera Sant Llorenç, 136 3º 3ª, Viladecans, E-08840, ES)
FORMOSA MÁRQUEZ, Xavier (C/ Sant Joan, 22 2º, Gavà, E-08850, ES)
SCARPELLINI, Michele (Via Fosse Ardeatine, 18 Treviolo, Bergamo, I-24048, IT)
| REIVINDICACIONES
1. Compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o un solvato del mismo, incluyendo cualquier estereoisómero o mezcla de estereoisómeros, donde:
(I)
Ri. R2, R3, y R4 son radicales seleccionados independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, CF 3 , (Ci~C 4 )-alqu¡lo, (Ci-C 4 )-alcoxilo, y nitro;
Rδ, Re, R7, y Re son radicales seleccionados independientemente del grupo que consiste en H y (Ci-C 6 )-alcoxilo; n es un entero de 3 a 5; r es un entero de 2 a 5; s es un entero de 1 a 5; y
X es un birradical seleccionado entre CO y CH 2 .
2. Compuesto según Ia reivindicación 1 , donde:
R-i, R2, R3, y R4βon radicales seleccionados independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl y Br;
R5, R θ , R7 y R δ Son radicales seleccionados independientemente del grupo que consiste en H y metoxilo; y s es 1.
3. Compuesto según Ia reivindicación 2, donde R 2 se selecciona entre H y Cl; RL R 3 , R 4 , R 5 y Rs son H; RQ y R 7 son metoxilo; n es un entero de 3 a 4; y r es un entero de 2 a 3.
4. Compuesto según Ia reivindicación 3, que es 9-[(2-{4-[(5,6-dimetoxi¡ndan- 2-¡l)metil]p¡peridin-1 -il}etil)amino]-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina.
5. Compuesto según Ia reivindicación 3, que es 6-cloro-9-[(2-{4-[(5,6- dimetoxiindan-2-il)metil]piper¡din-1-il}etil)am¡no]-1 ,2,3,4-tetrahidroacrid¡na.
6. Compuesto según Ia reivindicación 3, que es 9-[(3-{4-[(5,6-dimetoxi¡ndan-2- il)metil]piperidin-1-il}prop¡l)amino]-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina.
7. Compuesto según Ia reivindicación 3, que es 6-cloro-9-[(3-{4-[(5,6- dimetoxi¡ndan-2-il)metil]piperidin-1-il}prop¡l)amino]-1 ,2,3,4-tetrahidroacr¡d¡na.
8. Compuesto según Ia reivindicación 3, que es 9-[(2-{4-[(5,6-dimetox¡-1- oxoindan-2-il)met¡l]p¡perid¡n-1-il}etil)am¡no]-1 ,2,3,4-tetrahidroacr¡dina.
9. Compuesto según Ia reivindicación 3, que es 6-cloro-9-[(2-{4-[(5,6- dimetoxi-1-oxoindan-2-il)met¡l]piperid¡n-1-¡l}etil)amino]-1 ,2,3,4- tetrahidroacridina.
10. Compuesto según Ia reivindicación 3, que es 9-[(3-{4~[(5,6-dimetox¡-1- oxoindan-2-il)metil]piperidin-1-il}propil)amino]-1 ,2,3,4-tetrahidroacrid¡na.
11. Compuesto según Ia reivindicación 3, que es 6~cloro-9-[(3-{4-[(5,6- dimetoxi-1 -oxoindan-2-il)metil]p¡perid¡n-1 -il}propil)amino]-1 ,2,3,4- tetrahidroacridina.
12. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-11 , en el que Ia sal farmacéuticamente aceptable es el hidrocloruro o el dihidrocloruro.
13. Procedimiento para Ia preparación de un compuesto como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-12, que comprende hacer reaccionar un intermedio de fórmula (II)
(II)
con un intermedio de fórmula (III),
y opcionalmente tratar con el ácido farmacéuticamente aceptable para formar Ia sal correspondiente;
donde R 1 , R 2 , R3, R4, R5, Rδ, R7, Rs, n, r, s y X tienen los valores que se han definido en Ia reivindicación de compuesto correspondiente; y R 9 es un radical seleccionado del grupo que consiste en CF 3 , (C 1 -C 4 )^IqUiIo, fenilo, y fenilo mono- o disustituido por un radical seleccionado entre (C-i-C^-alquilo, halógeno y nitro.
14. Procedimiento para Ia preparación de un compuesto como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-12, que comprende hacer reaccionar un intermedio de fórmula (VII),
con un intermedio de fórmula (V) 1
y opcionalmente tratar con un ácido farmacéuticamente aceptable para formar Ia sal correspondiente;
donde R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R5, Re, R7, Rs, n, r, s y X tienen los valores definidos en Ia reivindicación de compuesto correspondiente.
15. Uso de los compuestos definidos en cualquiera de las reivindicaciones 1- 12, para Ia preparación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de Ia enfermedad de Alzheimer en un mamífero, incluyendo un ser humano.
16. Composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-12, junto con las cantidades apropiadas de excipientes o portadores farmacéuticamente aceptables. |
Compuestos inhibidores de acetilcolinesterasa para el tratamiento de Ia enfermedad de Alzheimer
La invención se refiere a compuestos inhibidores de acetilcolinesterasa y a un proceso para su preparación. También se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos y su uso para el tratamiento de Ia enfermedad de Alzheimer.
ESTADO DE LA TéCNICA
La enfermedad de Alzheimer, Ia forma de demencia más común en las personas mayores, constituye uno de los mayores problemas sanitarios en países desarrollados junto con trastornos cardiovasculares y cáncer. Este lento, progresivo y finalmente fatal desorden neurodegenerativo se caracteriza clínicamente por un notable declive cognitivo definido por una pérdida de memoria y capacidad de aprendizaje, junto con una reducida habilidad para desarrollar actividades básicas de Ia vida diaria, y una variada gama de síntomas neuropsiquiátricos tales como apatía, agitación verbal y física, irritabilidad, ansiedad, depresión, delirios y alucinaciones. La enfermedad de Alzheimer afecta actualmente aproximadamente a 20 millones de personas en todo el mundo, y esta cantidad aumentará sustancialmente en el futuro a medida que aumente el número de ancianos en Ia población, teniendo en cuenta que Ia prevalencia de Ia enfermedad de Alzheimer se duplica cada 5 años a partir de los 65, con 47% de afectados entre los mayores de 85 años. A consecuencia de Ia incidencia creciente y de los efectos devastadores de esta enfermedad, hay una urgente y creciente necesidad de una farmacoterapia efectiva. El carácter multifacético de Ia enfermedad de Alzheimer ha llevado al desarrollo de una variedad de aproximaciones para su corrección farmacológica. Aunque se ha hecho un ingente progreso en Ia identificación de los orígenes moleculares de Ia enfermedad de Alzheimer, actualmente no existe cura para esta enfermedad.
La enfermedad de Alzheimer se caracteriza por dos aspectos patológicos principales: las placas amiloides y los ovillos neurofibrilares, además de Ia pérdida de células neuronales en regiones específicas del cerebro. Un aumento en Ia producción de péptido β-amiloide (Aβ) y su subsiguiente deposición como placas ¡nsolubles de amiloide, formando las placas seniles
extraneuronales, parece constituir el hecho patológico clave que dispara el proceso neurodegenerativo en Ia enfermedad de Alzheimer. Se han desarrollado diferentes estrategias dirigidas a disminuir, prevenir o incluso revertir Ia generación y Ia deposición de Aβ con Ia idea de reducir Ia velocidad de progreso de Ia enfermedad y prevenir más pérdidas de células neuronales.
El desarrollo de Ia más avanzada de estas aproximaciones, que implicaba Ia inmunización con Aβ, se discontinuó recientemente debido a Ia observación de efectos laterales no deseados, como inflamación del sistema nervioso central (CNS), durante ensayos clínicos de Fase II. Otras aproximaciones como el uso de inhibidores de β- y γ-secretasa o de cortadores de hojas β son prometedoras para el tratamiento y prevención de Ia enfermedad de Alzheimer, aunque están aún en su infancia y de momento no hay experiencia clínica disponible.
En contraste con estas aproximaciones, el tratamiento sintomático de Ia enfermedad de Alzheimer, en particular el tratamiento de los déficits cognitivos, ha sido abordado con éxito a través de Ia reposición de los neurotransmisores deficientes, especialmente acetilcolina, en el CNS de los pacientes de Ia enfermedad de Alzheimer. Así, los esfuerzos de investigación se han dirigido, entre otros, al potencial terapéutico de los inhibidores de Ia acetilcolinesterasa (AChE) para ralentizar Ia progresión del trastorno. La aproximación terapéutica más establecida para Ia enfermedad de Alzheimer implica el uso de un grupo de agentes colinomiméticos indirectos con el perfil farmacológico de inhibidores de Ia AChE (tacrina, donepezilo, rivastigmina y galantamina), los cuales incrementan Ia neurotransmisión colinérgica central inhibiendo Ia degradación de Ia acetilcolina.
Los inhibidores de Ia AChE han mostrado ser una clase de medicamentos efectivos para mejorar Ia función cognitiva y las actividades de Ia vida diaria, y poseer generalmente perfiles de tolerabilidad y seguridad favorables. Pruebas recientes sugieren que el enzima AChE tiene también funciones secundarias no colinérgicas. Así, mientras que Ia AChE tiene una actividad neurotrófica no colinérgica, puede también jugar un papel clave en el desarrollo de las placas seniles, por aceleración de Ia deposición de Aβ.
El diseño y síntesis de nuevos inhibidores de AChE capaces de interaccionar simultáneamente con el sitio activo y con el sitio periférico del enzima AChE (inhibidores de AChE de sitio de unión dual) como candidatos a fármacos anti-Alzheimer con potencial para modificar Ia enfermedad constituyen actualmente un área de investigación muy intensa.
El donepezilo, el segundo fármaco anti-Alzheimer aprobado por Ia FDA, es el único inhibidor de AChE de sitio de unión dual comercializado en Ia actualidad, aunque no fue específicamente diseñado como tal. El carácter de inhibidor de sitio de unión dual del donepezilo puede explicar su excelente perfil farmacológico. Por un lado, el donepezilo (Cl 50 = 5.7 nM, utilizando AChE de cerebro de rata) es el inhibidor de AChE, licenciado para el tratamiento de casos suaves a moderados de Ia enfermedad de Alzheimer, más ampliamente utilizado. Por otro lado, en un estudio reciente sobre Ia capacidad de varios inhibidores de AChE para prevenir Ia agregación de Aβ inducida por AChE recombinante humana, se observó un efecto anti- agregante significativo para el donepezilo (22% de inhibición), mientras que ligandos específicos del sitio periférico como el propidio mostraron un mayor efecto antiagregante (82% de inhibición de Ia agregación). El perfil farmacológico superior del donepezilo ha estimulado el desarrollo de otros derivados λ/-bencilpiperidín¡cos como candidatos potenciales a fármacos para el tratamiento de Ia enfermedad de Alzheimer.
En los últimos años, varios grupos de investigación han descrito el diseño, síntesis y evaluación farmacológica de una serie de homo- y hetero-dímeros conteniendo dos unidades estructurales idénticas o diferentes de conocidos inhibidores de AChE unidos a través de una cadena oligometilénica. El primer inhibidor conocido de AChE que fue utilizado como compuesto cabeza de serie en esta estrategia fue Ia tacrina, el primer fármaco aprobado (en 1993) para el tratamiento de Ia enfermedad de Alzheimer, actualmente en gran parte desplazado del mercado debido a inducción de hepatotoxicidad. Una gran cantidad de inhibidores de AChE de sitio de unión dual basados en tacrina han sido desarrollados por diferentes grupos, algunos de los cuales exhiben un efecto antiagregante del Aβ muy potente. Análogamente, Ia tacrina se ha utilizado para el diseño de inhibidores de AChE de sitio de unión dual en combinación con un fragmento de donepezilo. Por ejemplo, WO 2004/032929 describe una familia de heterodímeros, conteniendo Ia unidad
de ¡ndanona del donepezilo y un resto de tacrina, que se comportan como inhibidores de AChE de sitio de unión dual y que pueden ser utilizados para el tratamiento de Ia enfermedad de Alzheimer.
Así, a pesar de todos los esfuerzos de investigación efectuados en el pasado, el tratamiento y/o prevención de Ia enfermedad de Alzheimer está lejos de ser satisfactorio. Por tanto, el desarrollo de compuestos para el tratamiento de Ia enfermedad de Alzheimer en humanos es todavía de Ia mayor importancia.
EXPLICACIóN DE LA INVENCIóN
Los inventores han encontrado nuevos compuestos que se comportan como inhibidores de acetilcolinesterasa de sitio de unión dual mostrando una elevada potencia de inhibición de Ia AChE. Así, estos compuestos son agentes muy prometedores para el tratamiento de Ia enfermedad de Alzheimer.
Así, según un aspecto de Ia presente invención, se proporciona un compuesto de fórmula (I) 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o un solvato del mismo, incluyendo cualquier estereoisómero o mezcla de estereoisómeros, donde R 1 , R 2 , R 3 y R 4 son radicales seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en H, F, Cl ,Br, CF 3 , (Ci-C 4 )-alquilo, (CrC 4 )-alcoxilo y nitro; R 5 , Re, R 7 y Re son radicales seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en H y (Ci-C 6 )-alcoxilo; n es un entero de 3 a 5; r es un entero de 2 a 5; s es un entero de 1 a 5 y X es un birradical seleccionado entre CO y CH 2 .
Compuestos preferidos de fórmula (I) son aquéllos en los que R-i, R 2 , R 3 y R 4 son radicales seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en H, F, Cl y Br; R5, R 6 , R 7 y Rs son radicales seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en H y metoxilo, y s es 1.
Compuestos más preferidos de fórmula (I) son aquéllos en los que R 2 se selecciona entre H y Cl; R 1 , R 3 , R 4 , R 5 y R 8 son H; R 6 y R 7 son metoxilo; n es un entero de 3 a 4; y r es un entero de 2 a 3. Sales farmacéuticamente aceptables preferidas de los compuestos de fórmula (I) son el hidrocloruro o el dihidrocloruro.
Los compuestos más preferidos son los siguientes:
9-[(2-{4-[(5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]p¡perid¡n-1-il} et¡l)am¡no]-1 , 2,3,4- tetrahidroacridina;
6-cloro-9-[(2-{4-[(5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin -1-il}etil)am¡no]-1 ,2,3,4- tetrahidroacridina;
9-[(3-{4-[(5,6-dimetoxi¡ndan-2-il)metil]piperid¡n-1-¡l }prop¡l)amino]-1 ,2,3,4- tetrahidroacridina; 6-cloro-9-[(3-{4-[(5,6-d¡metox¡indan-2-il)metil]piperidin- 1-il}propil)amino]-
1 ,2,3,4-tetrahidroacridina;
9-[(2-{4-[(5,6-dimetoxi-1 -oxoindan-2-il)metil]p¡perid¡n-1 -il}etil)amino]-1 ,2,3,4- tetrahidroacridina;
6-cloro-9-[(2-{4-[(5,6-dimetoxi-1-oxoindan-2-¡l)metil]pi peridin-1-il}et¡l)amino]- 1 ,2,3,4-tetrahidroacridina;
9-[(3-{4-[(5,6-dimetoxi-1 -oxoindan-2-il)metil]p¡perid¡n-1 -¡l}propil)amino]-1 ,2,3,4- tetrahidroacridina; y
6-cloro-9-[(3-{4-[(5,6-dimetoxi-1-oxoindan-2-il)metil]pip erid¡n-1-il}propil)amino]-
1 ,2,3,4-tetrahidroacridina.
Otro aspecto de Ia presente invención se refiere a un procedimiento para Ia preparación de compuestos de fórmula (I), según el Esquema I. que comprende hacer reaccionar un intermedio de fórmula (II) con un intermedio de fórmula (III), donde los radicales y variables son como se han definido antes para los compuestos correspondientes, y Rg es un radical seleccionado del grupo que consiste en CF 3 , (CrC 4 )-alquilo, fenilo, y fenilo mono- o disustituido por un radical seleccionado entre (Ci-C 4 )-alquilo, halógeno y
nitro; n es un entero de 3 a 5; y r es un entero de 2 a 5. Cuando se desea una sal farmacéuticamente aceptable, ésta se obtiene por tratamiento con el ácido correspondiente. Un ácido preferido es HCI.
Preferentemente, el sulfonato -OSO 2 R9 se selecciona entre mesilato (R 9 = -CH 3 ), tosilato (R 9 = -C 6 H 4 -P-CH 3 ), besilato (R 9 = -C 6 H 5 ) y triflato (R 9 = -CF 3 ), siendo el mesilato el más preferido.
Los intermedios de fórmula (III) pueden prepararse por reacción de un derivado de Ia acridina de fórmula (V) con una alcanolamina de fórmula (Vl), seguido de reacción del grupo hidroxilo del compuesto obtenido con un cloruro de sulfonilo para dar el correspondiente sulfonato, de acuerdo con el Esquema II. donde los radicales y variables tienen los valores definidos antes.
Los intermedios de fórmula (V) o bien son conocidos en Ia técnica o son fácilmente preparables por analogía con aquéllos conocidos en Ia técnica. Los intermedios (II) puede ser obtenidos por desbencilación del donepezilo (R 6 = R 7 = OMe; R 5 = R 8 = H; X = CO; s = 1) o de los análogos correspondientes del donepezilo.
Los compuestos de fórmula (I) pueden ser obtenidos también a través del procedimiento indicado en el Esquema (III). que comprende hacer reaccionar un intermedio de fórmula (VII) con un intermedio de fórmula (V).
Los intermedios de fórmula (VII) pueden ser preparados por métodos convencionales a partir de intermedios de fórmula (II).
Esquema
Otro aspecto de Ia presente invención se refiere a una composición farmacéutica que contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o un solvato del mismo, incluyendo cualquier estereoisómero o mezcla de estereoisómeros, junto con cantidades apropiadas de excipientes o portadores farmacéuticos.
El ejemplo 17 ilustra que los compuestos de Ia presente invención son potentes inhibidores de AChE (de eritrocitos bovinos o humanos), mostrando concentraciones inhibitorias, expresadas como CI5 0 (nM), que se encuentran en el intervalo de 0,09-5 nM, evaluadas por el método descrito por Ellman et al. Las concentraciones inhibitorias CI50 (nM) de estos compuestos son considerablemente inferiores a las de Ia clorotacrina o el donepezilo. Comparado con los resultados de los heterodímeros descritos en WO 2004/032929, también evaluados por el mismo método de Ellman et al., las concentraciones inhibitorias CI5 0 (nM) de los compuestos de Ia presente
invención son también considerablemente inferiores. En consecuencia, estos compuestos son útiles para el tratamiento de Ia enfermedad de Alzheimer con ventajas sobre los conocidos en Ia técnica.
Adicionalmente a Ia actividad inhibidora de Ia AChE, los inventores han encontrado que los compuestos de Ia presente invención también inhiben Ia butirilcolinesterasa (BChE), Io que puede representar una ventaja sobre otros agentes anti-Alzheimer conocidos en Ia técnica. Pruebas recientes han mostrado que, en pacientes con Ia enfermedad de Alzheimer en fase avanzada, Ia actividad de Ia AChE está muy reducida en regiones específicas del cerebro, mientras que Ia actividad de Ia BChE aumenta (cfr. Giacobini, E., Neurochem. Res. 2003, vol. 28, pp. 515-522). La importancia creciente de Ia BChE en Ia hidrólisis del neurotransmisor acetilcolina, a medida que Ia relación AChE/BChE decrece gradualmente en estos pacientes, hace de Ia inhibición de Ia BChE una diana importante en Ia búsqueda de nuevos agentes anti-Alzheimer. Comparado con clorotacrina o donepezilo, así como con los heterodímeros descritos en WO 2004/032929, los compuestos de Ia presente invención muestran concentraciones inhibitorias Cl 50 (nM) frente a BChE (de suero humano) considerablemente menores.
Así, un aspecto adicional de Ia presente invención se refiere al uso de los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o un solvato de los mismos, incluyendo cualquier estereoisómero o mezcla de estereoisómeros, para Ia preparación de un medicamento para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de Ia enfermedad de Alzheimer en mamíferos, incluyendo seres humanos. La invención también está relacionada con un método para el tratamiento o Ia profilaxis de un mamífero, incluyendo un ser humano, que padece o es susceptible de padecer Ia enfermedad de Alzheimer. Dicho método comprende Ia administración a dicho paciente de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I) definido antes, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o un solvato del mismo, incluyendo cualquier estereoisómero o mezcla de estereoisómeros, junto con excipientes o portadores farmacéuticos.
Para los expertos en Ia materia, otros objetos, ventajas y características de Ia invención se desprenderán en parte de Ia descripción y en parte de Ia práctica de Ia invención. A Io largo de Ia descripción y las reivindicaciones Ia
palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. El resumen de esta solicitud se incorpora aquí como referencia. Los siguientes ejemplos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de Ia presente invención.
EJEMPLOS
Procedimiento general para Ia reacción de Q-cloro-I ^.Sλ-tetrahidroacridina o 6,9-dicloro-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina con ω-amino-1 -alcoholes.
Una mezcla de 9-cloro-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina o 6,9-dicloro-1 ,2,3,4- tetrahidroacridina (1 mmol) y exceso de aminoalcohol (3 mmol) en pentanol (1 mL / mmol tetrahidroacridina) se calentó a reflujo bajo agitación magnética durante 18 h. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con CH 2 CI 2 (3,5 mL / mmol) y se lavó con disolución acuosa de NaOH (10%, 3.5 mL) y agua (2 x 3 mL / mmol). La fase orgánica se secó con Na2SO 4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío dando un residuo aceitoso. El exceso de aminoalcohol y de disolvente se eliminó del residuo por destilación en un microdestilador rotatorio a 85 0 C / 0.8 Torr dando el producto de sustitución como un residuo sólido ligeramente pardo. Las muestras analíticas de los hidrocloruros se prepararon como sigue: La 9-(ω- hidroxialquilamino)tetrahidroacridina (1 mmol) se disolvió en metanol (10 mL), Ia disolución se filtró a través de un filtro PTFE de 0.45 μm, y se trató con un exceso de disolución metanólica de HCI (3 mmol / mmol) y Ia disolución resultante se concentró a sequedad al vacío. El sólido se recristalizó de una mezcla metanol / acetato de etilo en Ia relación 1 :4 (5 mL / mmol). El sólido se aisló por filtración y se secó a 80 0 C / 30 Torr durante 48 h, dando el hidrocloruro de Ia 9-(ω-hidroxialquilamino)tetrahidroacridina como un sólido ligeramente pardo.
La estructura de los intermedios y de los compuestos de los siguientes Ejemplos se han asignado por 1 H-RMN (500 MHz, CD 3 OD o CDCI 3 ) y 13 C- RMN (100.6 MHz, CD 3 OD o CDCI 3 ).
Ejemplo 1 : 9-r(2-h¡drox¡et¡l)aminol-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina hidrocloruro
Este compuesto se obtuvo por el método general descrito antes: a partir de 9- cloro-1 ,2,3,4-tetrah¡droacridina (3,00 g, 13,8 mmol) y 2-aminoetanol (2,49 ml_, 40,6 mmol) se obtuvo 9-[(2-hidrox¡et¡l)amino]-1 ,2,3,4-tetrah¡droacr¡d¡na (3,07 g, 92% rendimiento de base): CCF (placa de gel de sílice), R f = 0,38 (CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 9:1 :0,1). A partir de este compuesto (239 mg, 0,99 mmol), se obtuvo Ia muestra analítica del hidrocloruro correspondiente (215 mg, 78% rendimiento): pf 184-185 0 C (MeOH / AcOEt); IR (KBr), v (cm ~1 ): 3700-2400 (máx. a 3358, 3142, 3058, 3016, 2938, 2872; OH, + N-H y C-H st), 1633, 1592, 1577, 1524, 1477, 1447, 1412, 1375, 1352, 1324, 1296, 1253, 1181 , 1160, 1057, 986, 946, 869, 831 , 779, 758, 706, 680.
Ejemplo 2: 6-cloro-9-lY2-h¡drox¡et¡l)am¡no1-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina hidrocloruro
Este compuesto se obtuvo por el método general descrito antes: a partir de 6,9-dicloro-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina (3,00 g, 11 ,9 mmol) y 2-aminoetanol (2,16 ml_, 35,9 mmol) se obtuvo 6-cloro-9-[(2~hidroxietil)amino]-1 ,2,3,4- tetrahidroacridina (3,16 g, 98% rendimiento de base): TLC (placa de gel de sílice), R f = 0,42 (CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 9:1 :0,1). A partir del compuesto anterior (150 mg, 0.54 mmol) se obtuvo Ia muestra analítica del hidrocloruro correspondiente (149 mg, 88%
rendimiento): pf221-222 0 C (MeOH /AcOEt); IR (KBr), v (crrf 1 ): 3600-2400 (máx. a 3372, 3291, 3136, 3052, 3009, 2939, 2872, 2784; OH, + N-H y C-H st), 1632, 1588, 1573, 1518, 1455, 1365, 1351, 1317, 1291, 1254, 1180, 1084, 1072, 1055, 952, 918, 886, 818, 759, 680, 616.
Ejemplo 3: 9-f(3-h¡droxiprop¡πaminol-1 ,2,3,4-tetrah¡droacr¡dina hidrocloruro.
Este compuesto se obtuvo por el método general descrito antes: a partir de 9- cloro-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina (1 ,12 g, 5,14 mmol) y 3-amino-1 -propanol (1 ,16 ml_, 15,2 mmol) se obtuvo 9-[(3-hidroxiprop¡l)amino]-1 , 2,3,4- tetrahidroacridina (1 ,25 g, 95% rendimiento de base): CCF (placa de gel de sílice), R f = 0,27 (CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 9:1 :0,1). A partir del compuesto anterior (371 mg, 1 ,45 mmol) se obtuvo Ia muestra analítica del hidrocloruro correspondiente (340 mg, 83% rendimiento): pf 125-126 0 C (MeOH / AcOEt); IR (KBr), v (crτT 1 ): 3700-2400 (máx. a 3283, 3145, 3052, 3020, 2938, 2868, 2806, 2773; OH, + N-H y C-H st), 1632, 1582, 1528, 1477, 1461 , 1448, 1414, 1348, 1323, 1278, 1260, 1180, 1167, 1085, 1071 , 1038, 993, 979, 917, 883, 864, 828, 798, 781 , 755, 706, 682, 607.
Ejemplo 4: 6-cloro-9-[(3-h¡drox¡propil)am¡no1-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina hidrocloruro
Este compuesto se obtuvo por el método general descrito antes: a partir de 6,9-d¡cloro-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina (3,00 g, 11.9 mmol) y 3-amino-1- propanol (2,16 mL, 28,2 mmol) se obtuvo 6-cloro-9-[(3-hidroxipropil)amino]- 1 ,2,3,4-tetrahidroacridina (1 ,25 g, 36% rendimiento de base): CCF (placa de gel de sílice), R f = 0,32 (CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 9:1 :0,1). A partir del compuesto anterior (334 mg, 1 ,15 mmol) se obtuvo Ia muestra analítica del hidrocloruro correspondiente (270 mg, 72% rendimiento): pf 164-165 0 C (MeOH/AcOEt); IR (KBr), v (cnT 1 ): 3500-2400 (máx. a 3353, 3314, 3263, 3131 , 3051 , 3014, 2936, 2907, 2875, 2845, 2803; OH, + N-H y C-H st), 1630, 1572, 1526, 1467, 1436, 1421 , 1356, 1341 , 1322, 1253, 1245, 1184, 1102, 1068, 1056, 948, 881 , 818, 760, 726, 709.
Procedimiento general para Ia mesilación de 9-(ω-hidroxialquilamino)-1 , 2,3,4- tetrahidroacridinas.
A una disolución fría (-10 0 C, baño de hielo-sal) de Ia 9-(ω~ hidrox¡alquilamino)-1 ,2,3,4-tetrahidroacr¡dina (1 mmol) y trietilamina (1 ,7 mmol) en CH 2 CI 2 anhidro (6 mL / mmol) se añadió gota a gota cloruro de metanosulfonilo (1 ,5 mmol) y Ia mezcla se agitó durante 30 min a esa temperatura. La mezcla se concentró al vacío, el residuo se disolvió en
CH 2 CI 2 (3 mL / mmol) y Ia disolución orgánica se lavó con disolución acuosa de NaOH (10%, 2 x 3 mL / mmol) hasta que Ia fase acuosa permaneció básica (pH > 10), se secó con Na 2 SO 4 anhidro y se concentró al vacío dando el mesilato correspondiente como un residuo aceitoso pardo. Las muestras analíticas de los mesilatos se obtuvieron por tratamiento del producto aceitoso con acetato de etilo.
Ejemplo 5: 9-[(2-metanosulfonilox¡etil)amino1-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina.
rendimiento cuantitativo): CCF (placa de gel de sílice), R f = 0.67 (CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 9:1 :0,1). IR (NaCI), v (crrf 1 ): 3391 , 3339 (N-H st), 3092, 3069, 2936, 2866 (C-H st), 1638, 1586, 1524, 1493, 1440, 1413, 1352, 1331 , 1194, 1178, 1051 , 771.
Ejemplo 6: 6-cloro-9-r(2-metanosulfonilox¡etil)aminol-1 ,2.3,4-tetrahidroacridina hidrocloruro
Este compuesto se obtuvo por el método general descrito antes: a partir de 6- cloro-9-(2-hidroxietilamino)-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina (2,95 g, 10,7 mmol), se obtuvo 6-cloro-9-[(2-metanosulfoniloxietil)amino]-1 , 2, 3,4-tetrahidroacridina (3,72 g, 98% rendimiento): CCF (placa de gel de sílice), R f = 0,63 (CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 9:1 :0,1). En este caso, se preparó una muestra analítica del hidrocloruro como sigue: el compuesto anterior (2,59 g, 7,3 mmol) se disolvió en metanol (20 ml_), Ia disolución se filtró a través de un filtro PTFE de 0.45 μm, se trató con exceso de disolución metanólica de HCI (1 ,7 M, 14 ml_) y Ia disolución se concentró a sequedad al vacío. El sólido (2,65 g) se recristalizó de metanol (10 mL). Después de filtrar, el sólido se secó a 80 0 C / 30 Torr durante 48 h, dando el hidrocloruro correspondiente como un sólido blanco (2,30 g, 81 % rendimiento), pf: 149- 150 0 C (MeOH); IR (KBr), v (ατT 1 ): 3700-2500 (máx. a 3426, 3234, 3114, 3012, 2925, 2798; + N-H y C-H st), 1630, 1606, 1582, 1572, 1487, 1463, 1452, 1409, 1374, 1354, 1161 , 1094, 1030, 1002, 983, 933, 916, 874, 804, 762, 733, 671.
Ejemplo 7: 9-í(3-metanosulfonilox¡propil)aminol-1 ,2.3.4-tetrahidroacridina
Este compuesto se obtuvo por el método general descrito antes: a partir de 9- (3-h¡drox¡prop¡lam¡no)-1 ,2,3,4-tetrah¡droacridina (433 mg, 1 ,68 mmol), se obtuvo 9-[(3-metanosulfoniloxiprop¡l)amino]-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina (565 mg, rendimiento cuantitativo): CCF (placa de gel de sílice), R f = 0.95 (CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 9:1 :0,1). IR (NaCI), v (cm '1 ): 3282 (N-H st), 3100, 3065, 2935, 2864 (C-H st), 1639, 1586, 1524, 1501 , 1448, 1418, 1352, 1332, 1194, 1174, 1041 , 964, 931 , 767, 733.
Ejemplo 8: 6-cloro-9-í(3-metanosulfon¡lox¡prop¡l)amino1-1 ,2,3,4- tetrahidroacridina
Este compuesto se obtuvo por el método general descrito antes a partir de 6- cloro-9-(3-hidroxipropilamino)-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina. El producto crudo se utilizó en Ia siguiente etapa sin más purificación (véanse ejemplos 12 y 16).
Procedimiento general para el acoplamiento de 9-(ω- metanosulfon¡loxialαuilamino)-1 ,2,3,4-tetrahidroacridinas v 5,6-dimetoxi-2-f(4- piperid¡l)met¡π¡ndano o 5,6-d¡metoxi-2-r(4-p¡per¡dil)metiπindan-1 -ona
Una disolución del mesilato (1 mmol), el derivado piperidínico (1 mmol) y trietilamina anhidra (2,5 mmol) en DIVISO (8 ml_) se calentó a 85 0 C durante 48 h. La disolución se dejó atemperar y se concentró al vacío. El residuo aceitoso pardo se trató con NaOH acuoso (2 N, 25 m L) y se extrajo con CH 2 CI 2 (3 x 35 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (5 x 40 mL) y salmuera (2 x 30 mL), se secaron con Na 2 Sθ 4 anhidro y se concentraron al vacío dando un residuo aceitoso que se sometió a cromatografía en columna (gel de sílice 35-70 μm, mezclas CH 2 CI 2 / metanol / NH 4 OH acuoso al 25% como eluyente). El producto se transformó en el dihidrocloruro correspondiente como sigue: Una disolución de Ia base (1
mmol) en metanol (40 ml_) se filtró a través de un filtro PTFE de 0.45 μm PTFE y se trató con exceso de disolución metanólica de HCI (5 mmol). La disolución se concentró a sequedad al vacío y el residuo sólido se recristalizó de metanol (20 mL). El sólido se separó por filtración y se secó a 80 0 C / 30 Torr durante 48 h.
Ejemplo 9: 9-í(2-f4-r(5.6-dimetox¡indan-2-ihmet¡np¡per¡d¡n-1-¡l& gt;et¡l)- aminol-1.2,3,4-tetrahidroacridina dihidrocloruro
Este compuesto se obtuvo por el método general descrito antes a partir de 9- (2-metanosulfoniloxietilamino)-1,2,3,4-tetrah¡droacrid¡na (365 mg, 1 ,14 mmol) y 4-[(5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]p¡peridina (306 mg, 1 ,11 mmol). Al eluir con una mezcla de CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 99:1 :0,1 , se obtuvo 9-[(2-{4-[(5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piper¡din-1- il}etil)amino]-1 ,2,3,4-tetrahidroacrid¡na (191 mg, 34% rendimiento) como un sólido ligeramente pardo: CCF (placa de gel de sílice), R f = 0.68 (CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 90:10:0,1). La muestra analítica del dihidrocloruro se obtuvo en Ia forma descrita en el método general: a partir de Ia base (114 mg, 0.23 mmol) se obtuvo el dihidrocloruro monohidrato correspondiente como un sólido amarillo pálido (48 mg, 35% rendimiento), pf 254-255 0 C (metanol). IR (KBr), v (cnrT 1 ): 3700-2400 (máx. a 3399, 3245, 2928, 2834; + N-H y C-H st), 1635, 1613, 1584, 1524, 1504, 1452, 1440, 1310, 1226, 1181 , 1095, 989, 953, 850, 758, 677.
Ejemplo 10: 6-cloro-9-f(2-(4-r(5.6-d¡metox¡indan-2-il)metillp¡peridin -1- ¡l)etil)aminol-1.2.3.4-tetrahidroacridina dihidrocloruro
Este compuesto se obtuvo por el método general descrito antes a partir de 6- cloro-9-(2-metanosulfon¡loxietilamino)-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina (386 mg, 1 ,20 mmol) y 4-[(5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidina (300 mg, 1 ,09 mmol). Al eluir con una mezcla de CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 99:1 :0.1 , se obtuvo 6-cloro-9-[(2-{4~[(5,6-dimetoxiindan-2- il)metil]p¡per¡din-1-il}et¡l)amino]-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina (165 mg, 28% rendimiento) como un sólido ligeramente pardo: CCF (placa de gel de sílice), R f = 0,68 (CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 90:10:0,1). La muestra analítica del dihidrocloruro se obtuvo como se describió en el método general: a partir de Ia base (165 mg, 0,31 mmol), se obtuvo el dihidrocloruro hidratado correspondiente como un sólido ligeramente amarillo (80 mg, 40% rendimiento), pf 159-160 0 C (metanol). IR (KBr), v (crn "1 ): 3700- 2400 (máx. a 3414, 3259, 3047, 2932, 2835; + N-H y C-H st), 1631 , 1585, 1504, 1451 , 1362, 1315, 1252, 1223, 1181 , 1094, 949, 886, 839, 760.
Ejemplo 11 : 9-í(3-(4-r(5.6-dimetox¡indan-2-iπmet¡πpiper¡d¡n-1-il| prop¡πam¡nol- 1.2,3.4-tetrahidroacridina dihidrocloruro.
Este compuesto se obtuvo por el método general descrito antes a partir de 9- (3-metanosuIfonilox¡propilamino)-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina (294 mg, 0,88 mmol) y 4-[(5,6-d¡metoxiindan-2-il)metil]piperid¡na (242 mg, 0,88 mmol). Al eluir con una mezcla de CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 99:1 :0,2, se obtuvo 9-[(3-{4-[(5,6-dimetoxiindan-2-il)metil]piperidin-1- il}propil)amino]-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina (81 mg, 18% rendimiento) como un sólido amarillo pálido: CCF (placa de gel de sílice), R f = 0,66 (CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 90:10:0,1). La muestra analítica del dihidrocloruro se obtuvo como se describió en el método general: a partir de Ia base (81 mg, 0,16 mmol), se obtuvo el dihidrocloruro hidratado correspondiente como un sólido amarillo pálido (95 mg, 93% rendimiento), pf 184-185 0 C (metanol). IR (KBr), v (crrf 1 ): 3660-2200 (máx. a 3370, 2924, 2854, 2706; + N-H y C-H st), 1634, 1588, 1522, 1503, 1455, 1363, 1308, 1249, 1117, 1182, 1093, 1033, 987, 947, 844, 759, 678.
Ejemplo 12: e-cloro-g-ffó^-rfδ.e-dimetoxiindan^-iDmetiπpiperidin-i- ¡I)propil)am¡no1-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina dihidrocloruro
.2Cl-
A una disolución fría (-10 0 C 1 baño de hielo-sal) de 6-cloro-9-(3- h¡droxiprop¡lam¡no)-1 ,2,3,4-tetrah¡droacr¡d¡na (1.50 g, 5,16 mmol) y trietilamina (1 ,20 mL, 8,6 mmol) en CH 2 CI 2 anhidro (35 mL), se añadió gota a gota cloruro de metanosulfonilo (0,65 mL, 8,40 mmol) y Ia mezcla se agitó a esa temperatura durante 30 min. La mezcla se concentró al vacío, el residuo se disolvió en CH 2 CI 2 (50 mL) y Ia disolución orgánica se lavó con disolución acuosa saturada de NaHCO 3 (3 x 50 mL) hasta que Ia fase acuosa permaneció básica (pH = 10), se secó con Na 2 SO 4 anhidro, y se concentró al vacío dando un residuo aceitoso pardo (1 ,90 g), que contenía el mesilato correspondiente, que se utilizó como tal en Ia etapa siguiente. Parte de este producto (368 mg, 1.0 mmol) se hizo reaccionar con 4-[(5,6-d¡metoxündan-2- il)metil]piperidina (271 mg, 0,98 mmol) siguiendo el método general descrito antes. Al eluir con una mezcla de CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 97:3:0,2, se obtuvo 6-cloro-9-[(3-{4-[(5,6-dimetoxiindan-2- il)metil]piperidin-1-il}propil)amino]-1 ,2,3,4-tetrah¡droacr¡dina (210 mg, 39% rendimiento) como un sólido pardo pálido: CCF (placa de gel de sílice), R f = 0,49 (CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 90:10:0,1). La muestra analítica del dihidrocloruro se obtuvo como se describió en el método general: a partir de Ia base (81 mg, 0,15 mmol), se obtuvo el correspondiente dihidrocloruro hidratado como un sólido amarillo pálido (52 mg, 52% rendimiento), pf 173-174 0 C (metanol). IR (KBr), v (crτT 1 ): 3700-2450 (máx. a 3401 , 2928; + N-H y C-H st), 1630, 1581 , 1503, 1463, 1451 , 1358, 1309, 1250, 1217, 1182, 1093, 988, 949, 880, 759.
Ejemplo 13: 9-r(2-(4-f (5.6-dimetox¡-1 -oxoindan-2-i0metillp¡per¡din-1 - iltetil)amino1-1 ,2.3,4-tetrahidroacridina dihidrochloruro
Este compuesto se obtuvo por el método general descrito antes a partir de 9- (2-metanosulfoniloxietilamino)-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina (276 mg, 0,86 mmol) y 4-[(5,6-dimetoxi-1-oxoindan-2-il)metil]piperidina (249 mg, 0,86 mmol). Ai eluir con una mezcla de CH 2 Cb / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 99.5:0.5:0,4, se obtuvo 9-[(2-{4-[(5,6-dimetoxi-1-oxoindan-2- ¡l)metil]piperidin-1-il}etil)amino]-1 ,2,3,4-tetrah¡droacridina (87 mg, 19% yield) como un sólido pardo pálido: CCF( placa de gel de sílice), R f = 0,91 (CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 90:10:0,1). La muestra analítica del dihidrocloruro se obtuvo como se describió en el procedimiento general: a partir de Ia base (54 mg, 0,10 mmol), se obtuvo el dihidrocloruro hidratado correspondiente como un sólido amarillo pálido (62 mg, 98% rendimiento), pf 190-191 0 C (metanol). IR (KBr), v (cιτf 1 ): 3700-2400 (máx. a 3401 , 2928, 2871 , 2718; + N-H y C-H st), 1685, 1672 (C=O st), 1636, 1588, 1523, 1500, 1458, 1363, 1317, 1266, 1220, 1120, 1037, 949, 863, 760.
Ejemplo 14: 6-cloro-9-r(2-(4-r(5.6-d¡metox¡-1-oxo¡ndan-2-il)metillpip erid¡n-1- ¡I)etil)amino1-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina dihidrocloruro
Este compuesto se obtuvo por el método general descrito antes, a partir de 6-cloro-9-(2-metanosulfoniloxietilamino)-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina (305 mg, 0,86 mmol) y 4-[(5,6-dimetoxi-1-oxoindan-2-il)metil]piper¡dina (248 mg, 0,86 mmol). Al eluir con una mezcla de CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 99.2:0.8:0,4, se obtuvo 6-cloro-9-[(2-{4-[(5,6-dimetoxi-1-oxoindan- 2-i)met¡l]piper¡din-1-il}etil)am¡no]-1 ,2,3,4-tetrahidroacr¡dina (178 mg, 38% rendimiento) como un sólido pardo pálido: CCF (placa de gel de sílice), R f =
0,94 (CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación of 90:10:0,1). La muestra analítica del dihidrocloruro se obtuvo como se describió en el método general: a partir de Ia base (168 mg, 0,31 mmol), se obtuvo el dihidrocloruro hidratado correspondiente como un sólido beige (65 mg, 33% rendimiento), pf 222-223 0 C (metanol). IR (KBr) v (crrf 1 ): 3700-2400 (máx. a 3375, 3259, 3125, 3051 , 2927, 2854, 2792; + N-H y C-H st), 1687 (C=O st), 1633, 1588, 1501 , 1456, 1363, 1316, 1266, 1220, 1179, 1121 , 1091 , 1036, 949, 917, 884, 759.
Ejemplo 15: 9-r(3-(4-f(5,6-dimetoxi-1-oxo¡ndan-2-il)metillp¡peridin-1- ilk>rop¡l)aminol-1 ,2,3.4-tetrahidroacridina dihidrochloruro
Este compuesto se obtuvo por el método general descrito antes, a partir de 9- (3-metanosulfoniloxipropilamino)-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina (80 mg, 0,24 mmol) y 4-[(5,6-dimetoxi-1-oxoindan-2-il)metil]piper¡dina (82 mg, 0,28 mmol). Al eluir con una mezcla de CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 98:2:0,5, se obtuvo 9-[(3-{4-[(5,6-dimetoxi-1-oxoindan-2- il)met¡l]p¡perid¡n-1-il}propil)amino]-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina (87 mg, 68% rendimiento) como un sólido pardo pálido: CCF (placa de gel de sílice), R f = 0.46 (CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% in Ia relación 9:1 :0,1). La muestra analítica del dihidrocloruro se obtuvo según el método general: a partir de Ia base (50 mg, 0,095 mmol), se obtuvo el dihidrocloruro hidratado correspondiente como un sólido amarillo pálido (37 mg, 60% rendimiento), pf 198-199 0 C (metanol). IR (KBr), v (cnT 1 ): 3700-2400 (máx. at 3435, 2930, 2706; + N-H y C-H st), 1690 (C=O st), 1636, 1590, 1522, 1500, 1458, 1364, 1316, 1265, 1121 , 1036, 759.
Ejemplo 16: 6-cloro-9-r(3-(4-r(5.6-dimetox¡-1 -oxo¡ndan-2-¡Dmetillpiper¡din-1 - íl)propíl)amino1-1 ,2,3,4-tetrahidroacridina dihidrocloruro
A una disolución fría (-10 0 C, baño de hielo-sal) de 6-cloro-9-(3- hidrox¡propilamino)-1 ,2,3,4-tetrahidroacrid¡na (1,50 g, 5,16 mmol) y trietilamina (1 ,20 ml_, 8,6 mmol) en CH 2 CI 2 anhidro (35 ml_), se añadió gota a gota cloruro de metanosulfonilo (0,65 ml_, 8,40 mmol) y Ia mezcla se agitó a esa temperatura durante 30 min. La mezcla se concentró al vacío, el residuo se disolvió en CH 2 CI 2 (50 ml_) y Ia disolución orgánica se lavó con disolución acuosa saturada de NaHCO 3 (3 x 50 ml_) hasta que Ia fase acuosa permaneció básica (pH = 10), se secó con Na 2 SO 4 anhidro, y se concentró al vacío dando un residuo aceitoso pardo (1 ,90 g), conteniendo el mesilato correspondiente, que se utilizó como tal en Ia etapa siguiente. Parte de este producto (506 mg, 1 ,37 mmol) se hizo reaccionar con 4-[(5,6-dimetoxi-1- oxoindan-2-il)met¡l]piper¡dina (470 mg, 1 ,62 mmol) siguiendo el método general descrito antes: por elución con una mezcla de CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 98:2:0,2, se obtuvo 6-cloro-9-[(3-{4- [(5,6-dimetoxi-1-oxoindan-2-¡l)metil]piperid¡n-1-il}propil )amino]-1 ,2,3,4- tetrahidroacridina (254 mg, 33% rendimiento) como un sólido pardo pálido: CCF (placa de gel de sílice), R f = 0.52 (CH 2 CI 2 / MeOH / NH 4 OH acuoso al 25% en Ia relación 9:1 :0,1). La muestra analítica del dihidrocloruro se obtuvo como se describió en el método general: a partir de Ia base (254 mg, 0,45 mmol), se obtuvo el dihidrocloruro hidratado correspondiente como un sólido amarillo pálido (212 mg, 68% rendimiento), pf 185-186 0 C (metanol). IR
(KBr), v (crrf 1 ): 3700-2400 (máx. a 3402, 3263, 3071 , 3039, 2925, 2842; + N-H
y C-H St) 1 1695 (C=O st), 1631, 1608, 1590, 1556, 1501, 1462, 1357, 1313, 1264, 1218, 1124, 1036, 971, 948, 882, 803, 758.
Ejemplo 17: Estudios bioquímicos
La actividad inhibidora de AChE se evaluó espectrofotométricamente a 25 0 C por el método de Ellman (véase Ellman et al., Biochem. Pharmacol. 1961 , vol. 7, p. 88), utilizando como sustrato AChE de eritrocitos bovinos o humanos y yoduro de acetiltiocolina (0,53 mM o 0,27 mM para Ia AChE bovina y humana, respectivamente). La reacción tuvo lugar en un volumen final de 3 mL de solución tampón 0,1 M fosfatos pH 8,0, conteniendo 0,025 unidades de AChE y se utilizó una disolución 333 μM de ácido 5,5'-ditiobis(2- nitrobenzoico (DTNB) para producir el anión amarillo del ácido 5-tio-2- nitrobenzoico. Las curvas de inhibición se efectuaron por triplicado incubando con al menos 12 concentraciones de inhibidor durante 15 min. Una muestra triplicada sin inhibidor estuvo siempre presente para conocer el 100% de actividad de Ia AChE. La reacción se detuvo por adición de 100 μL de eserina 1 mM, y Ia producción de color se determinó a 414 nm. Las determinaciones de Ia actividad inhibidora de Ia BChE se efectuaron de manera similar, utilizando 0,035 unidades de BChE sérica humana y butiriltiocolina 0,56 mM, en lugar de AChE y acetiltiocolina, en un volumen final de 1 mL.
Los datos a partir de los experimentos concentración-inhibición de los inhibidores fueron calculados por análisis de regresión no-lineal, utilizando el paquete GraphPad Prism program (GraphPad Software; San Diego, USA), que da estimaciones de las CI 50 (concentración del fármaco que produce 50% de inhibición de Ia actividad del enzima). Los resultados se expresan como media ± S. E. M. de al menos 4 experimentos efectuados por triplicado. DTNB, acetiltiocolina, butiriltiocolina, y los enzimas se compraron a Sigma y Ia eserina a Fluka.
Tabla 1. Datos farmacológicos de los nuevos heterodímeros donepezilo- tacrina, y tacrina, 6-clorotacrina y donepezilo como compuestos de referencia. Los valores se expresan como media ± error estándar de Ia media de al menos cuatro experimentos. Concentración inhibitoria Cl 50 (nM) de Ia actividad de AChE (de eritrocitos bovinos o humanos) o de BChE (de suero humano).
Next Patent: CONTAINER FOR FOOD PRODUCTS THAT PRODUCE AN EXUDATE