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Title:
ACRYLOYL-CONTAINING NUCLEAR TRANSPORT REGULATOR AND USES THEREOF
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2020/173417
Kind Code:
A1
Abstract:
The present invention relates to a novel acryloyl-containing compound, a preparation method for same, and uses thereof. Specifically, the present invention relates to an acryloyl-containing compound as represented by formula (1), a preparation method therefor, and uses of the formula (1) compound and of a pharmaceutically acceptable salt thereof in preparing a relevant medicament for treating, regulating and/or preventing diseases related to CRM1-related physiological conditions.

Inventors:
FAN HOUXING (CN)
XIE YULI (CN)
Application Number:
CN2020/076525
Publication Date:
September 03, 2020
Filing Date:
February 25, 2020
Export Citation:
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Assignee:
WIGEN BIOMEDICINE TECH SHANGHAI CO LTD (CN)
International Classes:
C07D403/12; A61K31/397; A61K31/4196; A61K31/45; A61K31/496; A61K31/4965; A61K31/498; A61K31/4985; A61K31/501; A61K31/513; A61K31/55; A61P35/00; C07D401/12; C07D413/12; C07D471/10; C07D487/04; C07D487/10; C07D491/107; C07D498/10
Domestic Patent References:
WO2014205393A12014-12-24
WO2014144772A12014-09-18
Foreign References:
CN103842340A2014-06-04
CN105339358A2016-02-17
CN103874690A2014-06-18
Attorney, Agent or Firm:
SHANGHAI BESHINING LAW OFFICE (CN)
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Claims:
权利要求

1、 一种结构如通式 (1)所示的化合物或其各光学异构体、 各晶型、 药学上可接受的 盐、 水合物或溶剂合物:

式⑴中:

X选自 -NH-或化学键;

当 X是 -NH-时, R为 -NRtOR2, 其中 R1和 R2以及它们相连的酰胺一起形成 4-7元 饱和、 不饱和或部分饱和的杂环, 该杂环可以被 1-2个选自卤素、 CN、 CF3、 CH2CF3, CH2CN、 OCF3、 OCH2CF3、 OH、 R3 、 OR3 或 NR3 R3’的基团取代;其中 R3和 R3’单独选 自 H、 取代或未取代的 C1-C3烷基、 取代或未取代的 C3-C6环烷基; 或

R1和 R2和它们相连的酰胺一起形成 5-7元非芳香杂环并 5-6元芳香杂环的并环结构 片段、 5-7元非芳香杂环并 3-6元非芳香杂环的并环结构片段、 5-7元非芳香杂环和 3-6元 非芳香杂环形成的螺环片段、 5-7元非芳香杂环和 3-6元非芳香杂环形成的桥环片段, 上 述并环、 螺环或桥环片段可以被 1-2个选自卤素、 CN、 CF3、 OCF3、 OCH2CF3, OH, R3 或 OR3的基团取代; 其中 R3是取代或未取代的 C1-C3烷基, 取代或未取代的 C3-C6环 焼基;

当 X是化学键时, R为 -NR4NR5COR6, 其中 R5选自 H、取代或未被取代的 C1-C3焼 基、 取代或未被取代的 C3-C6环烷基、 C1-C3烷基-烷氧基、 C1-C3烷基-环烷基、 取代或 未被取代的 5-7元杂芳基、 取代或未被取代的 5-7元非芳香杂环基; 其中 R4和 R6以及他 们相连的酰肼一起形成 5-7元非芳香杂环, 该非芳香杂环可以被 1-2个选自卤素、 CN、 OH、 R3或 OR3的基团取代;其中 R3是取代或未取代的 C1-C3烷基,取代或未取代的 C3- C6环焼基; 或

当 X为化学键时, R为如下结构片段:

其中, n表示 1或 2;

Y表示化学键、 -CH2-、 -CH2CH2-、 -CO-、 -S02-、 -SO-、 -CON(R8)-、 -S02N (R8)-、 - COCON(R8)-, R8表示 H、 取代或未取代的 C1-C3烷基, 取代或未取代的 C3-C6环烷基;

R7选自 H、 取代或未被取代的 C1-C3烷基、 取代或未被取代的 C1-C3烷氧基、 取代 或未被取代的 C3-C6环烷基、取代或未被取代的 5-7元杂芳基、取代或未被取代的 5-7元 非芳香杂环基。

2. 如权利要求 1所述的化合物, 其中该化合物是由结构式 (1A)所代表:

或其药学上可接受的盐, 其中:

R1和 R2以及它们相连的酰胺一起形成 4-7元饱和、 不饱和或部分饱和的杂环, 该杂 环可以被 1-2个选自卤素、 CN、 CF3、 CH2CF3、 CH2CN、 OCF3、 OCH2CF3、 OH、 R3、 OR3 或 NR3 R3’的基团取代; 其中 R3和 R3’单独选自 H、 取代或未取代的 C1-C3烷基、 取代或 未取代的 C3-C6环烷基; 或

R1和 R2和它们相连的酰胺一起形成 5-7元非芳香杂环并 5-6元芳香杂环的并环结构 片段、 5-7元非芳香杂环并 3-6元非芳香杂环的并环结构片段、 5-7元非芳香杂环和 3-6元 非芳香杂环形成的螺环片段、 5-7元非芳香杂环和 3-6元非芳香杂环形成的桥环片段, 上 述并环、 螺环或桥环片段可以被 1-2个选自卤素、 CN、 CF3、 OCF3、 OCH2CF3, OH, R3 或 OR3; 其中 R3是取代或未取代的 C1-C3烷基, 取代或未取代的 C3-C6环烷基。

3. 如权利要求 1所述的化合物, 其中该化合物是由结构式 (1B)所代表:

或其药学上可接受的盐, 其中:

R5选自 H、 取代或未被取代的 C1-C3烷基、 取代或未被取代的 C3-C6环烷基、 C1- C3烷基-烷氧基、 C1-C3烷基-环烷基、取代或未被取代的 5-7元杂芳基、取代或未被取代 的 5-7元非芳香杂环基; R4和 R6以及他们相连的酰肼一起形成 5-7元非芳香杂环, 该非 芳香杂环可以被 1-2个选自卤素、 CN、 OH、 R3或 OR3的基团取代; 其中 R3是取代或未 取代的 C1-C3烷基, 取代或未取代的 C3-C6环烷基。

4. 如权利要求 1所述的化合物, 其中该化合物是由结构式 (1C)所代表:

或其药学上可接受的盐, 其中:

n表示 1或 2;

Y表示化学键、 -CH2-、 -CH2CH2-、 -CO-、 -S02-、 -SO-、 -CON(R8)-、 -S02N (R8)-、 - COCON(R8)-, R8表示 H、 取代或未取代的 C1-C3烷基, 取代或未取代的 C3-C6环烷基;

R7选自 H、 取代或未被取代的 C1-C3烷基、 取代或未被取代的 C1-C3烷氧基、 取代 或未被取代的 C3-C6环烷基、取代或未被取代的 5-7元杂芳基、取代或未被取代的 5-7元 非芳香杂环基。

5. 如权利要求 2所述的化合物, 其中该化合物是由结构式 (1AA)所代表:

或其药学上可接受的盐, 其中:

m表示 0、 1、 2或 3 ;

Ra、 Rb、 Rc和 Rd独立地选自 H、 卤素、 CN、 CF3、 OCF3、 OCH2CF3、 OH、 NMe2

R3或 OR3的基团取代; 其中 R3是 C1-C3烷基或者 C3-C6环烷基; 或

Ra和 Rb和它们相连 C原子形成 C3-C6环烷基或者 3-6元非芳香杂环; 或

Re和 Rd和它们相连 C原子形成 C3-C6环烷基或者 3-6元非芳香杂环; 或 Ra (或 Rb) 和 Re (或 Rd) 和它们相连 C-C键形成 C3-C6环烷基或者 3-6元非芳香杂环;

上述 3-6元非芳香杂环形可以被 1-2个选自卤素、 CN、 OH、 R3或 OR3的基团取代; 其中 R3是取代或未取代的 C1-C3烷基, 取代或未取代的 C3-C6环烷基。

6. 如权利要求 2所述的化合物, 其中该化合物是由结构式 (1AB)所代表:

或其药学上可接受的盐, 其中:

n表示 1或 2;

RlP Rf独立地选自 H、 OH、 OCH2CF3、 R3或 OR3; 其中 R3是取代或未取代的 C1- C3烷基、 取代或未取代的 C3-C6环烷基。

7. 如权利要求 2所述的化合物, 其中该化合物是由结构式 (1AC)所代表:

或其药学上可接受的盐, 其中:

M表示 -0-、 -S-、 -NR3- 或 -CONR3-, 其中 R3是 C1-C3烷基或者 C3-C6环烷基;

Rg、 Rh、 和 独立地选自 H、 R3或 OR3; 其中 R3是取代或未取代的 C1-C3烷基、 取代或未取代的 C3-C6环烷基; 或

Rg和 Rh—起表示 -CO-基团, 或 R P Rh和它们相连 C原子形成 C3-C6环烷基; 或 和 Rj—起表示 -CO-基团, 或 和 和它们相连 C原子形成 C3-C6环烷基。

8. 如权利要求 3所述的化合物, 其中该化合物是由结构式 (1BA)所代表:

或其药学上可接受的盐, 其中:

n表示 1或 2;

Q表示 -CH2 -或 -CO-; R9选自 H、 C1-C3烷基、 氘代 C1-C3烷基、 C3-C6环烷基、 C1-C3烷基-胺基、 C1- C3焼基-焼氧基、 C1-C3焼基-环焼基、 5-7兀杂芳基、 5-7兀非芳香杂环基。

9. 如权利要求 1所述的化合物, 或其一种药学上可接受的盐, 其中该化合物是由以 下结构式中的任一个代表:

10. 如权利要求 1-9中至少一项所述的化合物, 其特征在于, 所述药学上可接受的盐 包括:通式 (1)所示的化合物与酸形成的盐; 其中,酸包括无机酸、有机酸和酸性氨基酸; 所述无机酸选自盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸或磷酸;所述有机酸选自甲酸、乙酸、 丙酸、 草酸、 三氟乙酸、 丙二酸、 琥拍酸、 富马酸、 马来酸、 乳酸、 苹果酸、 酒石酸、 柠 檬酸、苦味酸、 甲磺酸、对甲基苯磺酸、 乙磺酸或苯磺酸; 所述酸性氨基酸选自天冬氨酸 或谷氨酸。

11.一种用于治疗、 调节和 /或预防与 CRM1 相关的生理学病况相关的疾病的药物组 合物, 其特征在于, 它含有药学上可接受的赋形剂或载体, 以及作为活性成分的权利要 求 1-10中至少一项所述的化合物、 或其各光学异构体、 药学上可接受的盐、 水合物或溶 剂合物。

12. 如权利要求 11所述的药物组合物, 其特征在于, 所述的组合物为口服剂型。

13.—种权利要求 1-10中至少一项所述的化合物、 或其各光学异构体、 各晶型、 药学 上可接受的盐、 水合物或溶剂合物的用途, 其特征在于, 用于制备治疗、 调节和 /或预防 与 CRM1相关的生理学病况相关的疾病的药物组合物。

14.一种权利要求 1-10中至少一项所述的化合物、 或其各光学异构体、 各晶型、 药学 上可接受的盐、 水合物或溶剂合物的用途, 其特征在于, 用于制备治疗、 调节和 /或预防 与 CRM1相关的生理学病况相关的疾病的药物。

Description:
含丙烯酰基的核转运调节剂及其用途 本申请要求申请日为 2019年 2月 26日的中国专利申请 CN2019101440054的优先 权。 本申请引用上述中国专利申请的全文。 技术领域

本发明属于药物学、 药物化学和药理学领域, 更具体而言, 涉及一类含丙烯酰胺的 CRM1蛋白调节剂, 及其制备方法和该类化合物的应用。 背景技术

细胞的正常功能依赖于细胞内特定功能蛋白的 正确定位, 蛋白的核内外转运在维持 细胞稳定平衡中发挥了重要的作用。 生物体的一些特异性蛋白通过特定的转运蛋白 运入 或输出细胞核, 这些转运蛋白分为输入蛋白和输出蛋白。 蛋白的核输出依赖于核输出蛋 白 (Exportin 1)又叫染色体区域稳定蛋白 1 (Chromosome region maintenance 1, CRM1, 又叫 XPOl), 其介导 200多种蛋白核输出, 大多数为肿瘤抑制蛋白、细胞周期调节蛋白及 凋亡 相关蛋白, 例如 P53、 P21、 Rbl、 APC、 BCR-ABL、 FOXO、 cyclinbl、 survinvin等, 在 生理条件下,在没有 DNA损伤或其它致癌应激时,这些蛋白的核输出 避免了自身的过度 激活。 然而在肿瘤细胞中, 这些蛋白的过度核输出这一行为则促进了肿瘤 的发生[Current Medicinal Chemistry, 2008, 15(26): 2648-2655]。

有大量的研究表明, CRM1蛋白在多种肿瘤类型如乳腺癌[Cancer, 2008, 112(8): 1733 - 1743]、宫颈癌[Internation Jouml of Cancer, 2009, 124(8): 1829-1840]、胃癌[Medical Oncology,

2013, 30(4): 726]、 骨肉瘤[Oncology Reports, 2009, 21(1): 229-235]、 神经胶质瘤 [Neurosurgery, 2009, 65(1): 153-160]、 肺癌[British Journal of Cancer (2014) 111, 281-291]、 膜腺癌[Gastroenterology, 2013, 144(2): 447-456]、 肝癌[Cancer Chemother Pharmacol, 2014, 74(3): 487-495]、肾癌[Journal of Urology, 2013, 189(6): 2317-2326]、食管癌[Oncology Report, 2014, 32(2): 730-738] 、淋巴瘤[Blood, 2012, 120(23): 4621-4634]、多发性骨髓瘤[Leukemia,

2014, 28(1): 155-165]、 白血病[Blood, 2013, 121(20): 4166-4174]中均呈高表达, 并且这种 高表达与这些肿瘤的不良预后结果相关。 CRM1 的过表达使得肿瘤抑制蛋白被运送到细 胞质并被降解, 失去了肿瘤抑制功能, 被认为是肿瘤细胞逃避凋亡的一种机制 [Biochemical Pharmacology, 2012,83(8): 1021-1032; Seminars in Cancer Biology, 2014, 27:74 - 86]。 此外, 研究发现核转运相关基因与 KRAS突变引起的肿瘤有关, KRAS突变细胞株 对 CRM1抑制齐 U(KPT-185和 KPT-330)敏感,但是无 KRAS突变的肺癌对 CRM1抑制剂不 敏感。 对 CRM1抑制剂敏感肿瘤的基因分析显示, KRAS突变的肺癌中 CRM1核输出蛋 白受体与 NF-KB表达有关[Nature, 2016, 538: 114- 117]。

除了肿瘤抑制蛋白之外, CRM1 还输出许多涉及炎症与免疫相关的若干关键蛋 白, 包括 I K B、 NF- K B、 COX-2、 RXR a 、 Commdl、 HIF1、 HMGB1、 FOXO、 FOXP等。 I K B是 NF- K B的蛋白抑制剂, 在细胞核中结合 NF- K B使得其转录功能失活, 从而调节 这一与炎症及免疫过程密切相关的信号通路。 在炎症或免疫失调过程中, CRM1 的过量 表达使得 I K B在细胞质中被降解而失去了对 NF- K B的调节作用[Journanl of Biological Chemistry, 1999, 274(13):9108-9115; Shock, 2008, 29(2): 160-166]。 CRM1介导的核输出在 NF- K B、 HIF-1和 RXR a信号传导中的作用提示, 阻断核输出可在多个组织和器官间的 许多炎性过程中可能有益, 包括脉管炎、 动脉炎、 动脉粥样硬化、 皮炎、 牛皮藓、 类风湿 性关节炎、 系统性红斑狼疮、 脊椎关节病和硬皮病等。

除了上述病理过程外, CRM1介导的细胞核输出也与许多病毒组装和成 所需要的, 例如: 人免疫缺陷病毒 (HIV)、 流感病毒 (H1N1病毒株)、 乙型肝炎病毒 (HBV)和丙型肝炎 病毒 (HCV)、人乳头啦病毒 (HPV)、 呼吸道合胞病毒 (RSV)、 登革热病毒 (Dungee)、 重度急 性呼吸器官综合症冠状病毒、 西尼罗河病毒、 单纯性疱瘆病毒 (HSV)、 巨细胞病毒 (MCV) 等[Proceedings of the National Academy of Sciences, 2002, 99(22): 14440-14445; Journal of Virology, 2008, 82(21): 10946-10952; Journal of Biological Chemistry, 2009, 284(23): 15589 - 15597; Journal ofVirology, 2009, 83(11): 5353-5362]。 这些病毒中, 许多与特定类型的人类 癌症相关, 包括由于长期 HBV或 HCV感染引起的肝细胞癌 (HCC),由于 HPV感染引起 的子宫颈癌。 CRM1 抑制剂因此可以对病毒感染过程以及这些病毒 的肿瘤转化过程均具 有有益的效果。

大多数 CRM1抑制剂研究利用了天然产物 CRM1抑制剂 Leptomycin B (LMB), LMB 本身对肿瘤细胞具有很强活性, 且动物耐受性差。 LMB由于毒性过大, 致使临床 I期试 验终止[Trends in Cell Biology, 2007, 17(4 ): 193-201]。 根据 CRM1 核输出信号 (NES ) 的 疏水口袋结构,利用分子对接技术,设计一系 列目标化合物,并评价它们的抗肿瘤活性。 通过这种方法, Karyopharm Therapeutic公司发现了几种特定顺反异构的、 水溶性的、 可 逆的 CRM1抑制剂[W02012099807; WO2013019548; W02013019561; WO2013170068], 其代表性化合物 KPT-185、 KPT-276、 KPT-335、 KPT-330(Selinexor) 和 KPT-251结构如 下:

和早期研制的 KPT-185和 KPT-276相比, KPT-330在药物代谢动力学、药物效应动 力学、 口服生物利用度和安全性等方面更具有优势。 KPT-330 目前己经开展治疗急性髓 系白血病、 多发性骨髓瘤、 弥漫大 B细胞淋巴瘤 ( DLBCL) 、 恶性胶质瘤、 妇科恶性肿 瘤、 前列腺癌和头颈部鱗状细胞癌等癌症的临床试 验。

KPT-330仍然存在易穿过血脑屏障,代谢性质较 和毒副作用较强的缺点。本发明的 目的就是提供一种水溶性改善的、代谢性质更 优、体内活性更强和安全性更好的新型 CRM1 抑制剂化合物,以克服该类化合物目前普遍存 在的严重缺陷, 开发出新一代候选药物。 发明内容

本发明旨在提供一类结构通式如式 (1)所示的化合物, 或其光学异构体、 药学上可接 受的无机或有机盐。

式⑴中:

X选自 -NH-或化学键;

当 X是 -NH-时, R为 -NRtOR 2 , 其中 R 1 和 R 2 以及它们相连的酰胺一起形成 4-7元 饱和、 不饱和或部分饱和的杂环, 该杂环可以被 1-2个选自卤素、 CN、 CF 3 、 CH 2 CF 3 , CH 2 CN、 OCF 3 、 OCH 2 CF 3 、 OH、 R 3 、 OR 3 或 NR 3 R 3’ 的基团取代;其中 R 3 和 R 3’ 单独选 自 H、 取代或未取代的 C1-C3烷基、 取代或未取代的 C3-C6环烷基; 或

R 1 和 R 2 和它们相连的酰胺一起形成 5-7元非芳香杂环并 5-6元芳香杂环的并环结构 片段、 5-7元非芳香杂环并 3-6元非芳香杂环的并环结构片段、 5-7元非芳香杂环和 3-6元 非芳香杂环形成的螺环片段、 5-7元非芳香杂环和 3-6元非芳香杂环形成的桥环片段, 上 述并环、 螺环或桥环片段可以被 1-2个选自卤素、 CN、 CF 3 、 OCF 3 、 OCH 2 CF 3 , OH, R 3 或 OR 3 的基团取代; 其中 R 3 是取代或未取代的 C1-C3烷基, 取代或未取代的 C3-C6环 焼基;

当 X是化学键时, R为 -NR 4 NR 5 COR 6 , 其中 R 5 选自 H、取代或未被取代的 C1-C3焼 基、 取代或未被取代的 C3-C6环烷基、 C1-C3烷基-烷氧基、 C1-C3烷基-环烷基、 取代或 未被取代的 5-7元杂芳基、 取代或未被取代的 5-7元非芳香杂环基。 R 4 和 R 6 以及他们相 连的酰肼一起形成 5-7元非芳香杂环, 该非芳香杂环可以被 1-2个选自卤素、 CN、 OH、 R 3 或 OR 3 的基团取代;其中 R 3 是取代或未取代的 C1-C3烷基, 取代或未取代的 C3-C6环 焼基; 或

当 X为化学键时, R为如下结构片段: 其中, n表示 1或 2;

Y表示化学键、 -CH 2 -、 -CH 2 CH 2 -、 -CO-、 -S0 2 -、 -SO-、 -CON(R 8 )-、 -S0 2 N (R 8 )-、 - COCON(R 8 )-, R 8 表示 H、 取代或未取代的 C1-C3烷基, 取代或未取代的 C3-C6环烷基;

R 7 选自 H、 取代或未被取代的 C1-C3烷基、 取代或未被取代的 C1-C3烷氧基、 取代 或未被取代的 C3-C6环烷基、取代或未被取代的 5-7元杂芳基、取代或未被取代的 5-7元 非芳香杂环基。

在一优选例中, 通式 (1)化合物如结构式 (1A)所示:

或其药学上可接受的盐, 其中:

R 1 和 R 2 以及它们相连的酰胺一起形成 4-7元饱和、 不饱和或部分饱和的杂环, 该杂 环可以被 1-2个选自卤素、 CN、 CF 3 、 CH 2 CF 3 、 CH 2 CN、 OCF 3 、 OCH 2 CF 3 、 OH、 R 3 、 OR 3 或 NR 3 R 3’ 的基团取代; 其中 R 3 和 R 3’ 单独选自 H、 取代或未取代的 C1-C3烷基、 取代或 未取代的 C3-C6环烷基; 或

R 1 和 R 2 和它们相连的酰胺一起形成 5-7元非芳香杂环并 5-6元芳香杂环的并环结构 片段、 5-7元非芳香杂环并 3-6元非芳香杂环的并环结构片段、 5-7元非芳香杂环和 3-6元 非芳香杂环形成的螺环片段、 5-7元非芳香杂环和 3-6元非芳香杂环形成的桥环片段, 上 述并环、 螺环或桥环片段可以被 1-2个选自卤素、 CN、 CF 3 、 OCF 3 、 OCH 2 CF 3 , OH, R 3 或 OR 3 ; 其中 R 3 是取代或未取代的 C1-C3烷基, 取代或未取代的 C3-C6环烷基。

在另一优选例中, 通式 (1)化合物如结构式 (1B)所示:

或其药学上可接受的盐, 其中:

R 5 选自 H、 取代或未被取代的 C1-C3烷基、 取代或未被取代的 C3-C6环烷基、 C1- C3烷基-烷氧基、 C1-C3烷基-环烷基、取代或未被取代的 5-7元杂芳基、取代或未被取代 的 5-7元非芳香杂环基; R 4 和 R 6 以及他们相连的酰肼一起形成 5-7元非芳香杂环, 该非 芳香杂环可以被 1-2个选自卤素、 CN、 OH、 R 3 或 OR 3 的基团取代; 其中 R 3 是取代或未 取代的 C1-C3烷基, 取代或未取代的 C3-C6环烷基。

在另一优选例中, 通式 (1)化合物如结构式 (1C)所示:

或其药学上可接受的盐, 其中:

n表示 1或 2;

Y表示化学键、 -CH 2 -、 -CH 2 CH 2 -、 -CO-、 -S0 2 -、 -SO-、 -CON(R 8 )-、 -S0 2 N (R 8 )-、 - COCON(R 8 )-, R 8 表示 H、 取代或未取代的 C1-C3烷基, 取代或未取代的 C3-C6环烷基;

R 7 选自 H、 取代或未被取代的 C1-C3烷基、 取代或未被取代的 C1-C3烷氧基、 取代 或未被取代的 C3-C6环烷基、取代或未被取代的 5-7元杂芳基、取代或未被取代的 5-7元 非芳香杂环基。

在另一优选例中, 通式 (1 A)化合物如结构式 (1 AA)所示:

或其药学上可接受的盐, 其中:

m表示 0、 1、 2或 3 ;

R a 、 R b 、 R c 和 R d 独立地选自 H、 卤素、 CN、 CF 3 、 OCF 3 、 OCH 2 CF 3 、 OH、 NMe 2

R 3 或 OR 3 的基团取代; 其中 R 3 是 C1-C3烷基或者 C3-C6环烷基; 或

R a 和 R b 和它们相连 C原子形成 C3-C6环烷基或者 3-6元非芳香杂环; 或

R e 和 R d 和它们相连 C原子形成 C3-C6环烷基或者 3-6元非芳香杂环; 或 R a (或 R b ) 和 R e (或 R d ) 和它们相连 C-C键形成 C3-C6环烷基或者 3-6元非芳香杂环;

上述 3-6元非芳香杂环形可以被 1-2个选自卤素、 CN、 OH、 R 3 或 OR 3 的基团取代; 其中 R 3 是取代或未取代的 C1-C3烷基, 取代或未取代的 C3-C6环烷基。

在另一优选例中, 通式 (1 A)化合物如结构式 (1 AB)所示:

或其药学上可接受的盐, 其中:

n表示 1或 2;

RlP R f 独立地选自 H、 OH、 OCH 2 CF 3 、 R 3 或 OR 3 ; 其中 R 3 是取代或未取代的 C1- C3烷基、 取代或未取代的 C3-C6环烷基。

在另一优选例中, 通式 (1 A)化合物如结构式 (1 AC)所示:

或其药学上可接受的盐, 其中:

M表示 -0-、 -S-、 -NR 3 - 或 -CONR 3 -, 其中 R 3 是 C1-C3烷基或者 C3-C6环烷基;

R g 、 R h 、 和 独立地选自 H、 R 3 或 OR 3 ; 其中 R 3 是取代或未取代的 C1-C3烷基、 取代或未取代的 C3-C6环烷基; 或

R g 和 R h —起表示 -CO-基团, 或 R P R h 和它们相连 C原子形成 C3-C6环烷基; 或 和 R j —起表示 -CO-基团, 或 和 和它们相连 C原子形成 C3-C6环烷基。

在另一优选例中, 通式 (1B)化合物如结构式 (1BA)所示:

或其药学上可接受的盐, 其中:

n表示 1或 2;

Q表示 -CH 2 -或 -CO-;

R 9 选自 H、 C1-C3烷基、 氘代 C1-C3烷基、 C3-C6环烷基、 C1-C3烷基-胺基、 C1- C3焼基-焼氧基、 C1-C3焼基-环焼基、 5-7兀杂芳基、 5-7兀非芳香杂环基。

在另一优先例中, 通式 (1)化合物选自表 1中的化合物。

表 1 : 本发明化合物列表:

本发明的另一个目的是提供了一种药物组合物 , 它含有药理上可接受的赋形剂或载 体, 以及本发明的式 (1) 化合物、 或其各光学异构体、 药学上可接受的无机或有机盐做 为活性成分。

本发明的再一个目的提供了本发明的上述化合 物、 或其各光学异构体、 药学上可接 受的无机或有机盐用于制备治疗 XP01抑制剂相关的疾病、特别是抗肿瘤药物中 应用。

应理解, 本发明的前述一般性描述和以下详细描述都是 示例性和说明性的, 旨在提 供对所要求保护的本发明的进一步说明。 附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例技术中的技术 方案, 下面将对实施例技术描述所需 要使用的附图作简单地介绍, 显而易见地, 下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施 例。

图 1是溶剂对照、 KPT-330、 化合物 38、 79和 62对 BxPC-3移植瘤的生长抑制作用 的测试结果图。

图 2 是溶剂对照、 KPT-330、 化合物 38、 79和 62对 BxPC-3移植瘤模型小鼠体重的 影响的测试结果图。

具体实施方式

下面具体地描述本发明通式 (1)结构化合物的制备方法, 但这些具体方法不对本发明 构成任何限制。

以上说明的式 (1)化合物可使用标准的合成技术或公知的技术 与文中结合的方法来合 成。 此外, 在此提到的溶剂, 温度和其他反应条件可以改变。 用于式 (1)化合物的合成的 起始物料可以由合成或从商业来源上获得,如 ,但不限于 Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, Wis.)或 Sigma Chemical Co. (St. Louis, Mo.)。 本文所述的化合物和其他具有不同取代基 的有关化合物可使用公知的技术和原料来合成 , 包括发现于 March, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4 th Ed. , (Wiley 1992); Carey和 Sundberg, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4 th Ed., Vols. A和 B (Plenum 2000, 2001), Green和 Wuts, PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS 3 rd Ed. , (Wiley 1999)中的方法。 化合物制备的一般方法可通过使用适当的试剂 和在此提供的分子式中引入不同基团的条件来 改变。

一方面,本文所述的化合物根据工艺中公知的 方法。然而方法的条件,例如反应物、 溶剂、碱、所用化合物的量、反应温度、反应 所需时间等不限于下面的解释。本发明化合 物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域 己知的各种合成方法组合起来而方便的制 得, 这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容 易的进行。 一方面, 本发明还提供了 一种所述的通式 (1)所示化合物的制备方法,其采用下列方法 A、方法 B、或方法 C制备: 方法 A包含下列步骤: 化合物 1-1和 1-2为原料, 在缩合剂和碱存在下进行缩合反 应, 得到通式 (1A)化合物。

上述反应方程式中, R 1 和 R 2 的定义如前所述。

方法 B包含下列步骤: 化合物 1-1和 II-1为原料, 在缩合剂和碱存在下进行缩合反 应, 得到通式 (1B)化合物。

上述反应方程式中, R 4 、 R 5 和 R 6 的定义如前所述。

方法 C包含下列步骤: 化合物 1-1和 III-1为原料, 在缩合剂和碱存在下进行缩合反 应, 得到通式 (1C)化合物。

上述反应方程式中, n、 Y和 R 7 的定义如前所述。

化合物的进一步形式

在某个具体实施例中,式 (1)化合物按照药学上可接受的酸加成盐 (一种药学上可接受 的盐 )来制备, 通过化合物的自由碱形式与药学上可接受的无 机、 有机酸或酸性氨基酸反 应, 包括但不限于无机酸, 如盐酸、 氢溴酸、 氢氟酸、 硫酸、 硝酸、 磷酸等; 有机酸如甲 酸、 乙酸、 丙酸、 草酸、 三氟乙酸、 丙二酸、 琥珀酸、 富马酸、 马来酸、 乳酸、 苹果酸、 酒石酸、 柠檬酸、 苦味酸、 甲磺酸、对甲基苯磺酸、 乙磺酸和苯磺酸; 酸性氨基酸如天冬 氨酸和谷氨酸。 “药学上可接受”这里指一种物质,如载体或 稀释液,不会使化合物的生物活性或性质 消失, 且相对无毒, 如, 给予个体某物质, 不会引起不想要的生物影响或以有害的方式与 任何其含有的组分相互作用。

术语“药学上可接受的盐”指一种化合物的存 在形式, 该形式不会引起对给药有机体 的重要的刺激, 且不会使化合物的生物活性和性质消失。 在某些具体方面, 药学上可接 受的盐是通过式 (1)化合物与酸反应获得, 如盐酸、 氢溴酸、 氢氟酸、 硫酸、 磷酸、 硝酸 等无机酸, 甲酸、 乙酸、 丙酸、 草酸、 三氟乙酸、 丙二酸、 琥珀酸、 富马酸、 马来酸、 乳 酸、 苹果酸、 酒石酸、 柠檬酸、 苦味酸、 甲磺酸、 苯磺酸、 对甲苯磺酸等有机酸以及天冬 氨酸、 谷氨酸等酸性氨基酸。

应理解药学上可接受的盐的参考包括溶剂添加 形式或结晶形式, 尤其是溶剂化物或 多晶型。溶剂化物含有化学计量或非化学计量 的溶剂,且是在与药学上可接受溶剂如水, 乙醇等, 结晶化过程中选择性形成的。 当溶剂是水时形成水合物, 或当溶剂是乙醇时形 成醇化物。 式 (1)化合物的溶剂化物按照本文所述的方法, 很方便的制得或形成。 举例说 明, 式 (1)化合物的水合物从水 /有机溶剂的混合溶剂中重结晶而方便的制得 使用的有机 溶剂包括但不限于, 二氧杂环乙烷, 四氢呋喃, 乙醇或甲醇。此外, 在此提到的化合物能 够以非溶剂化和溶剂化形式存在。 总之, 对于在此提供的化合物和方法为目的, 溶剂化 形式被认为相当于非溶剂化形式。

在其他具体实施例中, 式 (1)化合物被制备成不同的形式, 包括但不限于, 无定形, 粉碎形和毫微 -粒度形式。 此外, 式 (1)化合物包括结晶型, 也可以作为多晶型。 多晶型包 括化合物的相同元素组成的不同晶格排列。 多晶型通常有不同的 X-射线衍射图, 红外光 谱, 熔点, 密度, 硬度, 晶型, 光和电的性质, 稳定性和溶解性。 不同的因素如重结晶溶 剂, 结晶速率和贮存温度可能引起单一晶型为主导 。

在另一个方面, 式 (1)化合物有一个或多个立体中心, 并因此以消旋体、 外消旋混合 物、 单一对映体、 非对映异构体化合物和单一非对映体的形式出 现。 可以存在的不对称 中心, 取决于分子上各种取代基的性质。 每个这种不对称中心将独立地产生两个旋光异 构体, 并且所有可能的旋光异构体和非对映体混合物 以及纯或部分纯的化合物包括在本 发明的范围之内。 本发明意味着包括这些化合物的所有这种异构 形式。

术语

如果无另外说明,用于本发明申请,包括说明 书和权利要求书中的术语,定义如下。 必须注意,在说明书和所附的权利要求书中, 如果文中无另外清楚指示, 单数形式“一个” 包括复数意义。 如果无另外说明, 使用质谱、 核磁、 HPLC、 蛋白化学、 生物化学、 重组 DNA技术和药理的常规方法。在本申请中,如果 无另外说明,使用“或”或“和”指“和 /或”。

“式 (1)化合物”指结构式为 (1)的化合物。

“烷基”指饱和的脂肪烃基团,包括 1至 6个碳原子的直链和支链基团。优选含有 1至 4个碳原子的低级焼基, 例如甲基、 乙基、 丙基、 2 -丙基、 正丁基、 异丁基、 叔丁基。 如 本文所用,“烷基”包括未取代和取代的烷基 ,尤其是被一个或多个卤素所取代的烷基。优 选的烷基选自 CH 3 , CH 3 CH 2 , CF 3 , CHF 2 , CF 3 CH 2 i pr, n Pr, [Bu, c Pr, n Bu或 1 Bu。

“环烷基”指 3至 6元全碳单环脂肪烃基团, 其中一个或多个环可以含有一个或多个双 键, 但没有一个环具有完全共轭的 71电子系统。 例如, 环丙基、 环丁基、 环戊基、 环己 烷、 环己二烯等。

“烷氧基”指通过醚氧原子键合到分子其余部 分的烷基。 代表性的烷氧基为具有 1-6个 碳原子的焼氧基, 如甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 异丙氧基、 丁氧基、 异丁氧基、 仲丁氧基 和叔丁氧基。如本文所用,“烷氧基”包括未 取代和取代的烷氧基,尤其是被一个或多个卤 素所取代的烷氧基。 优选的烷氧基选自 OCH 3 , 0CF3, CHF2O, CF3CH2O, i pro, n PrO, BuO, c PrO, n BuO或 1 BuO。

“芳基”指具有至少一个芳环结构的基团, 即具有共轭的 71电子系统的碳环芳基, 如苯 环和萘环。

“杂芳基”指含有一个或多个杂原子 (0, S或 N)的芳香基团, 杂芳基是单环或多环的, 例如单环杂芳基环与一个或多个碳环芳香基团 或其它单环杂环基基团稠和。 杂芳基的例 子包括但不限于, 吡啶基、哒嗪基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、 三唑基、吡嗪基、喹啉基、 异喹啉基、 四唑基、 呋喃基、 噻吩基、 异噁唑基、 噻唑基、 噁唑基、 异噻唑基、 吡咯基、 吲哚基、 苯并咪唑基、 苯并呋喃基、 苯并噻唑基、 苯并噻吩基、 苯并噁唑基、 苯并吡啶基 和吡咯并嘧啶基。

“烯基”指具有 2至 12个碳原子并具有至少一个碳 -碳双键的饱和直链或支链非环状 烃。

“卤素”指氟、 氯、 溴或碘。

“氧代”是指 “=0”。

“氘代”是指取代基上的 H原子部分或全部被 D取代。

术语“键”或“单键”指两个原子间或两个片 断间 (当通过键来连接的原子被认为是大结 构的一部分时 )的化学键。 一方面, 当本文所述的基团是一个键时, 缺少参考基团, 允许 在剩余的确定基团间形成一个键。

术语“元环”包括任何环状结构。术语“元” 意为表示构成环的骨架原子的数量。这样, 如, 环己基、 吡啶基、 吡喃基、 噻喃基是六元环, 环戊基、 吡咯基、 呋喃基和噻吩基是五 元环。

术语“片断”指分子的具体部分或官能团。 化学片断通常被认为是包含在或附在分子 中的化学实体。 特定药学及医学术语

术语“可接受的”,如本文所用,指一个处方 组分或活性成分对一般治疗目标的健康没 有过分的有害影响。

术语“治疗”、“治疗过程”或“疗法”如本 文所用, 包括缓和、 抑制或改善疾病的症状或 状况; 抑制并发症的产生; 改善或预防潜在代谢综合症; 抑制疾病或症状的产生, 如控制 疾病或情况的发展; 减轻疾病或症状; 使疾病或症状减退; 减轻由疾病或症状引起的并 发症, 或预防或治疗由疾病或症状引起的征兆。

如本文所用, 某一化合物或药物组合物, 给药后, 可以使某一疾病、症状或情况得到 改善, 尤指其严重度得到改善, 延迟发病, 减缓病情进展, 或减少病情持续时间。无论固 定给药或临时给药、 持续给药或断续给药, 可以归因于或与给药有关的情况。

“活性成分”指通式(1)所示化合物, 以及通式(1)化合物的药学上可接受的无机 有机盐。 本发明的化合物可以含有一个或多个不对称中 心, 并因此以消旋体、 外消旋混 合物、 单一对映体、 非对映异构体化合物和单一非对映体的形式出 现。 可以存在的不对 称中心, 取决于分子上各种取代基的性质。 每个这种不对称中心将独立地产生两个旋光 异构体, 并且所有可能的旋光异构体和非对映体混合物 以及纯或部分纯的化合物包括在 本发明的范围之内。 本发明意味着包括这些化合物的所有这种异构 形式。

通式(1)所示化合物是顺式丙烯酰胺, 为了方便起见, 本申请中通式(1)化合物简 称为丙烯酰胺。

另外, 根据需要, 可以将本发明的化合物在极性质子性溶剂中, 如甲醇、 乙醇、异丙 醇, 和药学上可以接受的酸反应生成药学上可接受 的盐制备得到。 所述的药学上可接受 的无机或有机酸可为: 盐酸、 氢溴酸、 氢氟酸、 硫酸、 硝酸、 磷酸、 甲酸、 乙酸、 丙酸、 草酸、 丙二酸、 琥珀酸、 富马酸、 马来酸、 乳酸、 苹果酸、 酒石酸、 柠檬酸、 苦味酸、 甲 磺酸、 乙磺酸、 对甲基苯磺酸、 天冬氨酸或者谷氨酸等。

“化合物(compound)”、 “组合物(composition)”、 “药齐(agent)”或“医药品(medicine or medicament)”等词在此可交替使用, 且都是指当施用于一个体(人类或动物)时, 能够透 过局部和 /或全身性作用而诱发所亟求的药学和 /或生理反应的一种化合物或组合物。 “施用 (administered、 administering或、 administration)”一词在此是指直接施用所述的 化合物或组合物, 或施用活性化合物的前驱药 (prodrug)、 衍生物 (derivative)、 或类似物 (analog)等, 而可在施用个体体内形成该活性化合物的一相 当用量者。

本文中交替使用“个体 (subject)”或“患者 (patient)”等词, 其是指可接受所述化合物和 / 或方法治疗的动物 (包括人类 )。“个体”或“患者”在此涵盖了雄性与雌 两种性别, 除非另 有具体说明。 因此“个体”或“患者”包含任何哺乳类动物 , 包括, 但不限于, 人类、 非人类 的灵长类, 如哺乳动物、 狗、 猫、 马、 羊、 猪、 牛等, 其可因利用所述化合物进行治疗而 获益。 适合接受本发明化合物和 /或方法治疗的动物较佳为人类。 一般来说, “患者”一词 及“个体”一词在本文中可彼此交替使用。

虽然用以界定本发明较广范围的数值范围与参 数皆是约略的数值, 此处己尽可能精 确地呈现具体实施例中的相关数值。 然而, 任何数值本质上不可避免地含有因个别测试 方法所致的标准偏差。在此处,“约”通常是 指实际数值在一特定数值或范围的正负 10%、 5%、 1%或 0.5%之内。 或者是, “约”一词代表实际数值落在平均值的可接受 标准误差之 内, 视本领域技术人员的考虑而定。除了实验例之 外, 或除非另有明确的说明, 当可理解 此处所用的所有范围、数量、数值与百分比 (例如用以描述材料用量、 时间长短、温度、 操作条件、 数量比例及其它相似者)均经过“约”的修饰 因此, 除非另有相反的说明, 本 说明书与附随权利要求书所揭示的数值参数皆 为约略的数值, 且可视需求而更动。 至少 应将这些数值参数理解为所指出的有效位数与 套用一般进位法所得到的数值。

除非本说明书另有定义, 此处所用的科学与技术词汇的含义与本领域技 术人员所理 解与惯用的意义相同。 此外, 在不和上下文冲突的情形下, 本说明书所用的单数名词涵 盖该名词的复数型; 而所用的复数名词时亦涵盖该名词的单数型。 治疗用途

文中描述的化合物或组合物通常可用于抑制 CRM1, 因此可用于治疗与 CRM1活性 相关的一种或多种病症。 因此, 在某些实施方式中, 本发明提供了用于治疗 CRM1介导 的病症的方法, 所述方法包括向有需要的患者施用本发明化合 物、 或其药学上可接受的 组合物的步骤。

术语“CRM1介导的”疾病, 在本文中使用时是指己知 CRM1在其中发挥作用的任何 疾病或其它有害的病状。 因此, 本发明的另一中实施方式涉及治疗己知 CRM1在其中发 挥作用的一种或多种疾病或减轻其严重程度。 在一些实施方式中, 本发明提供了在受试 者中治疗与 P53、 P21、 Rbl、 APC、 c-ABL、 FOXO、 IKB、 NFKB、 COX-2或 HD AC的表 达或活性有关的疾病的方法, 所述方法包括向患者施用治疗有效量的本发明 化合物。 在 另一种实施方式中, 本发明涉及治疗选自增值性疾病(例如癌) 、 炎性病症、 自身免疫病 症、 病毒感染或神经变性病症的疾病或病况或减轻 其严重程度的方法, 其中所述的方法 包括向有需要的患者施用本发明的化合物或组 合物。 在更具体的实施方式中, 本发明涉 及治疗癌症或减轻其严重程度的方法。

可用本发明化合物治疗的癌症包括但不限于, 血液恶性肿瘤(白血病、淋巴瘤、骨髓 瘤包括多发性骨髓瘤、 骨髓异常增生综合症和骨髓增生姓综合症) 和实体瘤 (癌例如前 列腺、 乳腺、 肺、 结肠、 胰腺、 肾、 卵巢以及软组织癌和骨肉瘤, 以及间质瘤)。

给药途径

本发明的化合物及其药学上可接受的盐可制成 各种制剂, 其中包含安全、 有效量范 围内的本发明化合物或其药学上可接受的盐及 药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安 全、 有效量”指的是: 化合物的量足以明显改善病情, 而不至于产生严重的副作用。 化合 物的安全、 有效量根据治疗对象的年龄、 病情、 疗程等具体情况来确定。

“药学上可以接受的赋形剂或载体”指的是: 一种或多种相容性固体或液体填料或凝 胶物质,它们适合于人使用, 而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相 容性”在此指的 是组合物中各组份能与本发明的化合物以及它 们之间相互掺和, 而不明显降低化合物的 药效。 药理上可以接受的赋形剂或载体部分例子有纤 维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、 乙基纤维素钠、 纤维素乙酸酯等)、 明胶、 滑石、 固体润滑剂(如硬脂酸、 硬脂酸镁)、 硫酸 钙、 植物油(如豆油、 芝麻油、 花生油、 橄榄油等)、 多元醇(如丙二醇、 甘油、 甘露醇、 山 梨醇等)、 乳化剂(如吐温®)、 润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、 着色剂、 调味剂、 稳定剂、 抗 氧化剂、 防腐剂、 无热原水等。

施用本发明化合物时,可以口服、直肠、肠胃 外(静脉内、肌肉内或皮下)、局部给药。 用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、 丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型 中, 活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载 体)混合, 如柠檬酸钠或磷酸二钙, 或与 下述成分混合: ⑻填料或增容剂, 例如, 淀粉、 乳糖、 蔗糖、 葡萄糖、 甘露醇和硅酸; (b) 粘合剂, 例如, 羟甲基纤维素、 藻酸盐、 明胶、 聚乙烯基吡咯烷酮、 蔗糖和阿拉伯胶; (c) 保湿剂, 例如, 甘油; (d)崩解剂, 例如, 琼脂、 碳酸钙、 马铃薯淀粉或木薯淀粉、 藻酸、 某些复合硅酸盐、和碳酸钠; (e)缓溶剂, 例如石蜡; (f)吸收加速剂, 例如, 季胺化合物; (g)润湿剂, 例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯; (h)吸附剂, 例如, 高岭土; 和(i)润滑剂, 例 如,滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二 醇、十二烷基硫酸钠,或其混合物。胶囊剂、 片剂和丸剂中, 剂型也可包含缓冲剂。 固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、 丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备, 如肠衣和其 它本领域公知的材料。 它们可包含不透明剂, 并且, 这种组合物中活性化合物或化合物 的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分 中释放。 可采用的包埋组分的实例是聚合 物质和蜡类物质。 必要时, 活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种 形成微胶囊形 式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的 乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除 了活性化合物外, 液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释 剂, 如水或其它溶剂, 增溶剂和乳化剂, 例知, 乙醇、 异丙醇、 碳酸乙酯、 乙酸乙酯、 丙二醇、 1,3 -丁二醇、 二 甲基甲酰胺以及油, 特别是棉籽油、花生油、 玉米胚油、橄榄油、 蓖麻油和芝麻油或这些 物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外, 组合物也可包含助剂, 如润湿剂、 乳化剂和悬浮剂、 甜味 剂、 矫味剂和香料。

除了活性化合物外, 悬浮液可包含悬浮剂, 例如, 乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山 梨醇和脱水山梨醇酯、 微晶纤维素、 甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受 的无菌含水或无水溶液、 分散液、 悬 浮液或乳液, 和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液 的无菌粉末。 适宜的含水和 非水载体、 稀释剂、 溶剂或赋形剂包括水、 乙醇、 多元醇及其适宜的混合物。

用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏 剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活 性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及 任何防腐剂、 缓冲剂, 或必要时可能需要 的推进剂一起混合。

本发明化合物可以单独给药, 或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。

使用药物组合物时, 是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治 疗的哺乳动物(如 人), 其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量 ,对于 60kg体重的人而言, 日给药剂 量通常为 1〜 lOOO mg, 优选 10〜 500 mg。 当然, 具体剂量还应考虑给药途径、 病人健康 状况等因素, 这些都是熟练医师技能范围之内的。 本发明提到的上述特征, 或实施例提到的特征可以任意组合。 本案说明书所揭示的 所有特征可与任何组合物形式并用,说明书中 所揭示的各个特征,可以任何可提供相同、 均等或相似目的的替代性特征取代。 因此除有特别说明, 所揭示的特征仅为均等或相似 特征的一般性例子。

在下面的说明中将会详细阐述上述化合物、 方法、 药物组合物的各个具体方面、 特 性和优势, 使本发明的内容变得十分明了。 在此应理解, 下述的详细说明及实例描述了 具体的实施例, 仅用于参考。 在阅读了本发明的说明内容后, 本领域的技术人员可对本 发明作各种改动或修改, 这些等价形势同样落于本申请所限定的范围。

所有实施例中, i fi-NMR用 Varian Mercury 400核磁共振仪记录,化学位移以 8 (ppm) 表示; 分离用硅胶未说明均为 200-300目, 洗脱液的配比均为体积比。

本发明采用下述缩略词: CDCb代表氘代氯仿; CD 3 OD代表氘代甲醇; DABCO代 表 1,4 -二氮杂双环[2.2.2]辛焼; DCM代表二氯甲烷; DIPEA代表二异丙基乙基胺; DMF 代表二甲基甲酰胺; DMSO代表二甲基亚砜; EA代表乙酸乙酯; h代表小时; LiOH代 表氢氧化锂; MgCh代表氯化镁; mins代表分钟; MS代表质谱; NaSH代表硫氢化钠; NMR代表核磁共振; T3P代表丙基磷酸酐; THF代表四氢呋喃。 本发明人经过广泛的研究, 合成并筛选了大量的化合物, 首次发现式 (1)化合物具有 很强的抗肿瘤活性, 同时具有良好水溶性改善, 更优异的药代动力学性质和体内抗肿瘤 活性。 本发明人在此基础上完成了本发明。

制备例 1 (Z)-3-(3-(3,5 -双 (三氟甲基)苯基 )-lH-l,2,4 -三唑 -1-基)丙烯酸 (1-1)的合成

3.5 -双 (三氟甲基)硫代苯甲酰胺 (M2)的合成

3.5-双(三氟甲基)苯甲腈(47.82 & 0.2mol)溶于 DMF(250mL)中, 加入 NaSH(22.42g, 2.0eq)和 MgCh(38.08g, 2.0eq), 室温下搅拌 3h, 混合物倒入冰-水 (2L)中, EA(250 mL*3) 萃取, 合并有机层, 饱和氯化钠水溶液 (100 mL*2)洗, 经过无水硫酸钠干燥, 过滤和减压 浓缩后得到粗产物 3,5-双(三氟甲基)硫代苯甲酰胺(46.97 & 收率 86%) o

3-(3, 5 -双 (三氟甲基)苯基 )-lH-l, 2, 4 -三唑 (M3)的合成

3.5-双(三氟甲基)硫代苯甲酰胺(46.44 § , 0.17mol)溶于 DMF(250mL)中, 逐滴加入水 合肼 (16.5mL, 2.0eq), 加完室温继续搅拌 lh, 后逐滴加入 HCOOH(200mL), 加完加热到 90°C反应 3h。 冷却到室温后, 将反应混合物倒入饱和 NaHC0 3 水溶液 (1.2L)中, 并用 EA(300 mL*3)萃取。 合并有机层用饱和氯化钠水溶液 (100 mL*2)洗涤, 经过无水硫酸钠 干燥, 过滤和减压浓缩后得到粗产物后, 用石油醚 (400mL)打浆, 过滤干燥后得到目标化 合物 3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-111-1,2,4-三唑(34.40 & 收率 72%)。 MS(ESI,m/z): 282.1 [M+H] +

(Z)-3-(3-(3,5 -双 (三氟甲基)苯基 )-lH-l,2,4 -三唑 -1-基)丙嫌酸异丙酯 (M4)的合成

3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-111-1,2,4-三唑(33.74§, 0.12mol)溶于 DMF ( 150mL)中, 加 A DABCO(26.92g, 2.0eq), 室温搅拌 30mins, 冷却到 0 °C后, 逐滴加入 (Z)-3 -碘代丙烯 酸异丙酯 (31.68g, l.leq), 加完室温反应 lh。 混合物倒入冰-水 (;1L)中, EA(;200 mL*3)萃 取, 合并有机层, 饱和氯化钠水溶液 (50 mL*2)洗, 经过无水硫酸钠干燥, 过滤和减压浓 缩后得到粗产物 (Z)-3-(3-(3,5 -双 (三氟甲基)苯基 )-lH-l,2,4 -三唑 -1-基)丙烯酸异丙酯 (28.32g, 收率 60%)。

(Z)-3-(3-(3,5 -双 (三氟甲基)苯基 )-lH-l,2,4 -三唑 -1-基)丙稀酸 (1-1)的合成

(Z)-3-(3-(3,5 -双 (三氟甲基)苯基 )-lH-l,2,4 -三唑 -1-基)丙烯酸异丙酯 (27.53g,70mmol)溶 解在 THF中, LiOH溶液 (8.4g, 5.0eq,溶于水 200mL)逐滴加入上述反应液中, 室温继续反 应 4h, 加入冰-水化合物 (100mL), 并用稀盐酸调节到 pH为 2-3, EA(200 mL*3)萃取, 合并有机层,经过无水硫酸钠干燥,过滤和减 压浓缩后得到产物 (Z)-3-(3-(3,5 -双 (三氟甲基) 苯基 )-lH-l,2,4 -三唑 -1-基)丙烯酸 (23.36g, 收率 95%)。

9.54 (s, 1H), 8.63-8.56 (m, 2H), 8.04 (tt, 1.6, 0.9 Hz, 1H), 742 (4 7= 10.6 Hz, 1H), 5.90 (d, J= 10.6 Hz, 1H); MS (ESI, m/z): 352.1 [M+H] + . 实施例 1 (Z)-3-(3-(3,5 -二 (三氟甲基)苯基 )-lH-l,2,4 -三哇 -1-基) -N-(2 -氧代氮杂环丁基 1-基)丙纖胺 (化合物 1)的合成

(Z)-3-(3-(3,5 -双 (三氟甲基)苯基 )-lH-l,2,4 -三唑 -1-基)丙烯酸 (105mg, 0.3mmol)和 1-氨 基氮杂环丁基 -2 -酮 (39mg, 0.45mmol)溶于干燥 EA(10 mL)中, 氮气保护并冷却到 -60 °C, 反应体系中加入 T 3 P(0.3mL, 2M的 EA溶液), 然后加入 DIPEA(77mg, 0.6mmol), 并继 续搅拌反应 3h, 加入少许冰水淬灭反应, 水洗 (20mL), 水相用 EA(20mL*2)萃取, 合并有 机层, 饱和氯化钠溶液 (20mL)洗, 无水硫酸钠干燥, 减压浓缩后柱层析 (DCM/MeOH = 1/100 至 1/30)纯化, 得到产物 (Z)-3-(3-(3,5 -二 (三氟甲基)苯基 )-lH-l,2,4 -三唑 -1-基) -N-(2- 氧代氮杂环丁基 -1-基 )丙烯酰胺 (15.1mg, 收率 12%)。

10.70 (s, 1H), 9.39 (s, 1H), 8.56 (s, 2H), 8.28 (s, 1H), 752 (4 7= 10.8 Hz, 1H), 5.95 (d, J= 10.6 Hz, 1H), 3.52 (t, 4.4 Hz, 2H), 2.91 (t, 4.2 Hz,

2H); MS (ESI, m/z): 352.1 [M+H] + . 实施例 2-89 (化合物 2-89) 的合成

以 1-1为原料, 和不同的酰肼反应, 类似于化合物 1的合成, 可以得到化合物 2-89。 表 2. 化合物 2-89的质谱和核磁数据

实施例 90(Z)-3-(3-(3,5 -二(三氟甲基)苯基)-lH-l,2,4 -三唑 -1-基)-1-(吡哇烷 -1-基两 -2- 烯 -1. (化合物 9G)的合成

100 mL三口瓶中加入吡唑啶二盐酸盐 (1.5 g, 10.34 mmol)、 DIPEA (6.23 g, 48.3 mmol)和 DMF (72 mL), 混合液 Ar置换后降温至 -50 °C, 后加入化合物 1-1 (2.42 g, 6.9 mmol), -50°C下滴加 T 3 P (6.58g, 10.34 mmol ) o 滴毕, 混合液 -50 °C下搅拌 12 h。 TLC (DCM:MeOH = 20: 1 至 DCM: MeOH= 10: 1) 和 LC-MS监测。 反应完成后体系 -50 °C 下加水 ( 145 mL) 淬灭, 后室温搅拌 30 min, 过滤, 滤饼用水 (10mL) 洗涤三次, 真空 干燥得类白色固体化合物 90 (1.97 g, 收率: 71.6%)。

iHNMR (400 MHz, CD 3 OD) : 59.18 (s, 1H), 8.60-8.55 (m, 2H), 8.04 (s, 1H), 726(4 ^ 7 = 10.3 Hz, 1H), 6.42 (d,J= 10.3 Hz, 1H), 4.57 (s, 1H), 3.65-3.55 (m, 2H), 2.95 (t, 6.6 Hz, 2H), 2.15-2.06 (m, 2H); MS (ESI, m/z): 406.1 [M+H] + . 实施例 91(Z)-3-(3-(3,5 -二(三氟甲基)苯基)-lH-l,2,4 -三唑 -1-基)-l-(2 -甲基吡唑烷 -1-基) 丙 -2 -烯 -1-酮(化合物 91)的合成

10 mL单口瓶中加入化合物 85 (50 mg, 0.123 mmol)、 K 2 C0 3 (34 mg, 0.247 mmol) 和 DMF (5 mL), 混合液 Ar置换后加入 Mel (35 mg, 0.247 mmol), 混合液升温至 50 °C 搅拌反应 20 h。 TLC (DCM: MeOH =20: 1 )和 LC-MS监测。 反应完成后体系降至室温加 水 ( 10 mL) 淬灭, EA (10 ml)萃取两次, 合并有机相浓缩至干, 残留物 pre-TLC纯化得 白色固体化合物 91 (31 mg, 收率: 60%)。

iH NMR (400 MHz, CDCb): 5 9.76 (s, 1H), 8.58 (s, 2H), T89 (s, 1H), T 15 (d, J= 11.0 Hz, 1H), 6.52 (d, J= 11.0 Hz, 1H), 3.71 (m, 2H), 3.00 (t, 6.9 Hz, 2H), 2.54 (s, 3H), 2.24 (m, 2H);

MS (ESI, m/z): 420.1 [M+H] + . 实施例 92-103化合物 92-103的合成

以化合物 90为原料, 和卤代物、 酰胺和磺酰胺等在碱性条件下反应, 类似于化合物

91的合成, 可以得到化合物 92-103。

表 3.化合物 92-103的质谱和核磁数据

实施例 104核输出抑制活性测试

使用 RevGFP测定的方法评估本发明的化合物抑制 CRM1介导的核输出能力。 Rev 是一种来自人类免疫缺陷病毒 (HIV-1)的蛋白并且在其 C-末端结构域包含一种核输出信 号 (NES)以及在其 N-末端结构域包含核定位信号 (NLS)。 Rev蛋白的核输出依赖于经典的 NES/CRM1途径。 实验开始的前一日, 将 U20S-RevGFP细胞接种于透明底、 黑色、 384 孔板上。 在 384孔板中, 从 40^M开始在 DMEM中连续地对化合物进行 1 : 2稀释, 并 转移到这些细胞中。 将细胞和化合物孵育大约 1小时, 再用 3.7%的甲醛固定细胞后, 用 Heechst33258进行细胞核染色。 测量细胞核中 GFP量并且确定每种化合物的 IC 5Q 值。 如 果本发明的化合物的 IC 5 o值小于 IO^IM,在上述 RevGFP测定中被认为具有活性,而最优 的化合物的 IC 5 c值小于 l pM。 表 4中列出化合物在该 RevGFP测定中的结果。 实施例 105肿瘤细胞抗增殖活性 (IC 5n )测试

把对数生长期的肿瘤 (胰腺癌 BxPC-3和乳腺癌 MDA-MB-231)细胞消化后,吹打成单 细胞悬液,分别接种于 96孔培养板;每孔 2x l0 4 个细胞,每孔加入培养基 100 |iL, 37 °C, 5% C0 2 培养箱中培养过夜。 待细胞贴壁后, 分别加入适当浓度的受试化合物和阳性对照 药物, 配置五种不同浓度的样品, 以空白组为阴性对照组, 在培养箱中再培养 72 h。 然 后, 每孔加入 20 |i L质量浓度为 5 mg/mL 的 MTT液, 连续培养 4 h。 吸去上清液, 每孔 加入 100 |iL二甲亚砜, 将培养板置于微孔板振荡器上振荡 10 min,使结晶物溶解。在 570 nm 波长处用酶标仪测吸光度 A值, 计算抑制率; 按 Bliss法计算 IC50。 表 4. 化合物的活性测定结果 (A=<l nM, B=l-10nM, 0=>10^1^, '=未检测)

由上表数据可知, 本发明化合物具有很强的抑制 Rev核输出活性, 同时化合物也 具有非常强的肿瘤细胞抗增殖活性, 如化合物 87对 BxPC-3细胞和 MDA-MB-23 1细 胞的 ICso分别为 41 nM和 21 nM, 而阳性对照 KPT-330分别为 705 nM和 458 nM, 活 性强 20倍左右。 实施例 106水溶性测试

取供试化合物两份 (每份 10-30mg), 分别加入水和 pH = 1.2 HC1水溶液中, 在摇床 上摇三天, 样品在离心机上以 10000转 /分离心五分钟, 取上层清液 2 mL于 50 mL容量 瓶中, 加水定容到刻度, 制成样品溶液; 精密称量样品 2.5 mg于 50 mL容量瓶中, 加甲 醇适量溶解。加水定容到刻度, 摇匀得对照样品溶液。将样品溶液和对照样品 溶液, 各进 样 20 , 液相测试。 计算如下:

溶解度(mg/mL)=C(对)*25 * A(样)/A(对)

C(对): 对照样品浓度

A(样): 样品溶液液相峰面积

A(对): 对照样品溶液液相峰面积

表 5. 化合物的水溶性

由上表测试结果可知, 本发明中化合物均具有较好的水溶性, 化合物在纯水和 pH = 1.2 HC1水溶液中的溶解性好于 KPT-330, 良好的水溶性可以提高药物的药代动力学性 质, 同时有利于药物制剂的制备。 实施例 107小鼠体内药代动力学评价

化合物采用灌胃给药,给药剂量均为 5mg/kg (0.5%CMC-Na悬浮),每组选用 ICR 小鼠 9只, 雄性,每只小鼠采集 3个不连续的时间点, 每个时间点有 3只小鼠。 采样时 间点为给药前、 给药后 15min、 30min、 lh、 2h、 4h、 8h、 12h和 24h, 给药后小鼠在各 时间点, 由眼眶或心脏采血约 80 |i L。 所有全血样品采集在含 EDTAK 2 的试管中, 于 4 °C离心 ( 1500-1600 rpm/min) lO min后分离血浆, 保存在 -90至 -60 °C的冰箱, 以供样 品分析。 以液相色谱 -串联质谱法测定血浆中化合物的浓度, 根据血浆浓度 -时间曲线求 出相应的药代动力学参数。

表 6. 化合物小鼠口服给药(5 mg/kg)药代动力学参数

由上表可以看出, 化合物均具有良好的口服吸收特性, 半衰期(t %)、 最大血药浓度 (C max )和药时曲线下面积(AUC( H )等均优于对照药物 KPT-330。 口服吸收性质良好在提高 药物的药效, 减少用药剂量, 节省成本等方面都具有重要的意义。 实施例 108小鼠体内抗肿瘤活性评价

人胰腺癌 BxPC-3细胞用含 10%胎牛血清的 1640于 37°C、 5%C0 2 培养箱中常规培 养, 传代后, 待细胞达到所需量时, 消化收集细胞。 将 8x 10 6 个 BxPc-3人胰腺癌细胞注 射入每只裸小鼠左侧腋下, 待肿瘤生长至 65 mm 3 后, 将动物随机分组开始给药。 从 40 只预先接种 BxPC-3裸小鼠中选择肿瘤生长较一致的 30只裸小鼠随机分成 5组, 分别为 1) 溶剂对照组, 6只; 2) KPT-330(简称 330)、 实施例 38 (化合物 38)、 实施例 79 (化 合物 79) 和实施例 62 (化合物 62) 组, 每组 6只。 溶剂对照组每周三次(星期一, 三, 五)灌胃 5%DMSO+45%PEG400+50%水的溶剂; KPT-330、实施例 38和实施例 62组每周 三次(星期一, 三, 五)灌胃 1 mg/mL的化合物溶液 0.1 mL/10g(10 mg/kg, tiw)。 实施例 79每天灌胃 0.25 mg/mL的化合物溶液 0.1 mL/10g (2.5 mg/kg, qd)。 每两天测定肿瘤体 积, 小鼠体重, 于给药第 21天处死裸小鼠, 称体重, 测定瘤块体积, 计算相对肿瘤体积 (RTV)、相对肿瘤增值率 ( T/C )和肿瘤生长抑制率,做统计学检测。试验结 见下表 7, 图 1和图 2。

表 7. 实施例化合物对人胰腺癌 BxPC-3裸小鼠移植瘤的实验治疗作用 土 s )

与对照相比 * : P < 0.05 ; D1 : 分笼给药时间。 RTV: 相对肿瘤体积,计算公式为: RTV

= V t / V Q 。 T/C(%) = TRTV / CRTV X 100。 TRTV :为治疗组 RTV; CRTV :为阴性对照组 RTV。 TGI (%): 肿瘤生长抑制率 (%)。 疗效评价标准: T/C(%) > 60 为无效; T/C(%^ 60, 并经 统计学处理 P < 0.05为有效.

从表 7, 图 1和图 2的结果可以看出, 实施例化合物具有很强的体内抗肿瘤活性, 实 施例 79剂量 2.5 mg/kg比对照药物 KPT-330剂量在 10mg/kg具有更强的体内抗肿瘤活 性; 实施例 38在相同剂量下显示比对照药 KPT-330更强的体内抗肿瘤活性, 且小鼠体重 增长正常, 显示实施例 38比对照药 KPT-330具有更好的活性和安全性。

虽然以上描述了本发明的具体实施方式, 但是本领域的技术人员应当理解, 这些仅 是举例说明, 在不背离本发明的原理和实质的前提下, 可以对这些实施方式做出多种变 更或修改。 因此, 本发明的保护范围由所附权利要求书限定。