Изобретение относится к медицине, конкретно, к. фармакологии, и касается средств, обл давших гемореодогиес й, антшгрегаша! . антатромбогенной , огнодрал то ной, эадотелийдротёкториой _; . ней 01фоте-гторйой,. -яротгйвоаритм еской я протшоиш ич щй активностью., а также увеличиваю их мозговой кровоток

Известно средство,. обладающее адтирад гшой, гемореодоп«ес. и, _: анштро боцитарной и автнтро богевжщ активностью [Патент 2347561, А&1К 31/05, 2008].

Известно средство, проявляющее иротивоише ические свойства [Патент jfe 2499593, А &Мт, 201.3],

Извес но средство, нро.явд»ющее н ойи й й йческ активность р етйний. Γί,ίΐ, Противоаретми ческая активность диборнода в условиях модели острой ищем-ни - ренерфузии даокарда Бюляетеш» сибирской медицины, 2003, том. 12, ХзЗ, с.153-156],,.

Известно средство, обладающее нейродротекторной активностью [Патент 2406488, Ά6Ϊ 31/05, 2010],

Известно средство,, обладающее ретивйиротекториой активностью [Патент 2406487, А61 31/05, 2010],

Известно средство, проявляющее эидотеднинротекторные свойства [Иванов И.С.. Не роиротекторная: и антитромбог на активность 4- ехия-2,6-да| >борш лфевола Автореферат дяссертации авдидата биодогачеашх наш, Томск, 2009, 24 с].

Известно средство, способное увеличивать мозговой кровоток [Патент 2351321,. А6 3.1/05, 2009],

Указанные средства представляют собой 4"метил-2 ₅ 6-дй .оборнилфеиол.

Известно, что данное соединений представляет смесь структурных, изомеров мезо- формы и: рацемической смеси [Патент 2502719, Q)7C 39/17, 20131, однако не известно о соотношении данных изомеров в смеси, и владние вх соотношения на проявляемую ими фармако от'йчёскум акхнянршт».

Технической проблемой, на. решение которой направлено заявляемое изобретение, является расширение арсенала средств, обла ающих .одновременно геморео ощче кой, антмагрегатнои, антитромбогенной, ретаноиротекторной, эндот нйяротекторной, нейропротекторйой, ^' п ^: рч)тмвоарйтм.ической н протйво.ашемйчёской активностью, увеличивающих мозговой кровоток.

Поставленная задача достигается исвояьзован смеси изомеров, впервые описанных в RU 50271 а именн ; 1) 2 - S^R _; 411)4ДЛ-трмме:^ 6~{( IE, 25, 4S>-i ,7,7- тр1 ет1шбнщждо[2.2Д]ген^ (мезо-формз, дадее изомер ί) м

2} радемичес ой смеси 2,6- яи{(Ш, 2S _f 4S}-I _? ?, 7-т|жметз1яб*Щ1Т о[2.2,1]гепт-2- йя}-4-жшяфенода) и 2,6- де{(1$, 2К, )-1, -7, 7-трты& п6мтжт2 Л} ж-2-тя)-4- мтшфт&й , (рацемическая смесь, даже изомер 2)

в качестве средства, обладающего гемореояогачееюшй, тиагрегатными;, amm O SorerabiMHj. рбтинохгрт'е гориымн, эндотш^нй1хроте торн.Ш'да, нейронротекториыми, протйвоар*гтичес «вд и противоишемическими свойствами, увеличивающий мозговой кровоток с со ой степенью ажта оети в и следующем соот ношении изомеров :

от 60 до 95%маес. для изомера ! (меш-фор а) и от 40 до $? Масс. ят изомера 2

При следующем содержаний ах смеси:

- изомер 1 (мезо-форма) от 60 до 95 мас. ;

- изомер 2 ^' {рацемическая, смесь) от 40 до 5 а . _*

Указанное средстве может применяться для лечения, сердечно-сосудистых забодетаннй.

Заявленная, смесь изомеров получается в результате реакции ажмдщздвания но Фриделад-Крафтеу пара-крезола камфеном в присутствии катализатора & не требует дорогостоящих методов очистки.

Пример L В колбу ёмкостью 5О0 1, помещают 65т п-крезода и нагревают до 1бО- ^в С,- далее добавляют неб льши и порциями 0.7г алюминиевой стружки,, активированной парами йода, при растворении раство нагревается до кипения. После полного растворения а ю тт. в и -крезоле раствор охл аждают до 100°C _f после чего добавляют ίό3.5 йгамфен (молярное соотношение и- резол;.камфен 1 ;2). Температуру решшданной смеси повшнают с ISCPC до 18в°С в течении 3.5 часов. При Ί..80 · реакционную смес выдерживают в течении 4 часов д полной конверсии по камфену (контроль но ТС ), По окончании реакционную смесь охлаждают, разбавляют л офо ом И фильтруют через актквировайный уголь и окись алюминия, после Чего ударнвада д образования стеклооёразиой: массы которую добавляют этиловый спирт. Образовавшийся осадок, фильтруют и промывают этиловым спиртом. В подученном, продукте- соотношение мезоформы (Т ил. 207-210°С) ш радемнческон смеси (Тил. 166- 169°С) составляет 6 : 40(масс), Кипячение в водно-ениртовом растворе вымывает ранемическую смесь изомеров н изменяет соотношение изомеров д 95 : 5 (масс).

Разделение изомеро»: проводили методом дробной иерекристаллизапна из этанола в результате были получены образны чистых изомеров.

Таким образом, предмето исследования явились следующие соединения,

Соединение 2; смес 2- {(1S2R., 41)-1,7,7-тр1- етидбнцй ло[2,2Л ]гент-2-.{:Ш}, 6~ ( Ш, 2S, )-1,77~трим:ешлбндатг£о[ ;,1 ^{^} (далее изомер 1) и. рацемической смеси 2,6- ди{(0 , 2S _y 4S)-1, 7, 7~триметнлбнцикло[2.2Л.Згеит-2-ил}-4- ешлфенода] и 2,6- дм {(IS, 2R, 4-R)-l, 7, 7-трнм:ет-щбйЦ1шл»[2,2 Л |геят-2- л} -4- метидфеиола}- (изомер 2) с содержанием ио еров » смеси: изомер 1 - 9 %масс _; и изомер 2 (ранеминескал смесь)- 5%масс. [Тил. смеси ! ^' 95-201 ^й С].

Соединение 3: смесь 2- {(1S,2R, 4К)-1,7 _г 7-1рй ет'илйидакд [2Д.1]тп:-2~}щ} , 6-{( Ш, 2S, 48)-1,7 _! :7-три егая:бвди^ (далее изомер 1) и рацемической смеси 2,6- ди|( , 2-S, 45>}-1, % 7-трмм«ггалбй *кяо[2.2.1 ]ШПТ-2-ЙЙ:} -4- метмлфеиола и 2,6- 3Μ.{(Ι8, 2Е, 4R)-I, 7, 7^риметидбиш1клО2,2Л]геот-2-йл|-4- метняфенояа} (изомер 2) с содержанием изомеров в смеси: изомер 1 - 60% масс и. изомер 2 (рацемическая смесь) 40% [Тол, смеси 1 5-180°С],

Таблица --сравниваемое соединения 1,2, 3. Tim ^s C Содержание тао ера, масе.%

изомер 1 , мезо- изомер 2,

фор а рацемическая ^" смесь

Соединение 1 207-210 100 0

Соединение 2 195-201 95 5

Сое иензе 3 60 0

Ддя подтверждения фармакологической активности были исследованы серии субстанции содержанием изомере» мезо-формы и рацемической смеси в соотношении 95:5 80:2 масс,%,, 75:25 маес.%„ 70:30 масс.%, и 60:40 масс< ,. По всем, сериям субетшщни были, подучены еоиоставимые результаты со значениями в рамжах погрешности- В описании дайной заявки приведены е льт та^ подученные для серий с еотугиощением мзомеров 95:5 % и, 60:40 %,

Эффективность исследуемых соединений 2 и 3 но сравнению с контролем и соединением- I продемонстрирована в модел ных экспе иментах на крысам линии Wistar при .шутрижедудочном введении в дозе 00 г/кг.

Во всех примерах статистическая обработка результатов была осуществлена с помощью : пакетов программ "BioStat" для Windows с применением i-критерня Стьюдента и критерия χ\ Для оценки доетоверноета различий при сравнении средних величин, исноя&з в& и. кепя шричгескйй: ^ите ий Майиа-Уитви,

Сушиость изобретения поясняется ириме и конкретного выполнения.

Пример 2, Опыт проведены: на 100 крысах -самцах: линии Wistar массой 200-220 г. Животные были распределены на 4 группы. На модели тотальной транзиторной ишемии головного мозга по методу W, А. Piilsmeili, ,В< Brierley [19791 оценивали нейроиротекторние эффекты. Для этого за 1 сутки до моделирования ишемии у .наршхшнровашшх щтс (тиояектаяон-нш ия ^' в дозе 60 мг/ г,. внутрибрк>шинно) на уровне первого шейного позвонка производили термо агулади обеих аертебральмых артерий. Через 24 ч под эфирным наркозом: на обе сонные артерии накладывали кдаоде я я течение 30 мин. Состоятельность модели оценивал» но раси ренню з ачков, развитию гапервеитидянин, ноодеднешп» видимой части сосудистой оболочки глаза _* Реперфузв» проводил» снятием, ожклюдеров.. Крыса контрольной г уппы вводили трижелудочно 3 мл 1% крахмального .геля, животным опытных групп -- соединенна 1,. 2 и 3 в дозе 100 мг/кг в 3 мл крахмального геля одни раз в сутки в течение 7 суток. Первое введение осуществляли через i час после созданий, модели ишемии, последнее введение - за 1 час до забора крови. В первые 2-4 ч после воспроизведения модели тотальной транзиторной ишемии головного- мозга у жршс наблюдали наиболее тяжелые симптомы .повреждения нейтральной нервной системы -в виде арефдексии, судорог _. , снаетического паралича конечностей, тонического напряжения мышц туловища, бокового положения. Опенку уещиона ьного состояйзш высше нервной деятельности на 1 -е, 3-е и 5-е сутки после создания модели тотальной тршзиторнон ишемией головног мозга проводили по шкале Stroke-index- [MeGraw Ci\ ₅ 1977] следующим показателям: спонтанная двнгатаъная активность (нормальная _* повышенная, иди сниженная:, отсутствие} _* расстройства йоходкм (скованность, шаткость, замедленность движений, нарушение ориентации) _.* - рефлексы отдергивания хвоста, обеих, передних и задних дат, реаздиа на звук., тремор, судороги, тонус мышц туловища и конечностей (нормальный, повышенный, отсутствие), нр на м птоза (отсутствие, одноеторонщ-вд, двусторонний). Каждый показатель оценивали в баллах; 0 баллов - норма; 1 бал - умеренно выраженные йзмдаенй 2 баша - режо шфаженнме изменения-. Йейро ^гвч скнй де ицит ЖИ ОТМОГО онеинвади су мой баллов но всем показателям, ^' Кроме того, в ^к ой крупке крыс оиредедядн додю животных с тяжелыми неврологическими расстройствами (6 б&ддоа к более), -с трушенными средней тяжести (3-5 б&вддав) в с легкими изменениями (до 2 баллов). Выживаемость животных регистрировали на 1-е, 3-е н 5-е сутки после тотальной транзнторной ишемии головного мозга. По завершению опытов проводила эвтаназию ^• животных,-

Полученные э сиериментальн е данные свидетельствуют _* что в ойт оле в течение первых суток ^' после тотальной трашиторной ишемии головного .мозга погибло 32 % крыс. В то же время у леченных животных ед ижш I, 2 и 3 в нервые су ки соотвешшенно погибл , 12 и 10 % особен _s что было примерно в 2 и более раза ниже контрольного показателя (табл.2). Несмотря на то, что средний балл неврологического дефицита у вьшжвших крыс все трута достоверно не хлипшсй (табл. 3), отмечена отчетливая тенденция к уменьшению под .влиянием соединений 1, 2 и 3 количества даюотн ; с тяжелыми невродотаческими нарушениями и соответствующее достоверное увеличение количества животных со средней степенью не&родогичес г дефицита (табл. 3). При лечении соединениями 2 и 3 отменено достоверное снижение уровня смертности рыс и нейрологнчее нх нарушений но сравнению как с контролем ^ так и при применений соединения L Наилучшие результаты были получены при. введении крысам соединения 3.

В контроле смертность крыс к третьим, суткам после тотальной транзиторной ишемии головного мозга достигала максимальных значений (41%), течение последующего периода набдшдейия летадьншжь не уветичИвалась, В опытных группах гибель ж:иаотньж этому срок была существенно ниже и не изменялась к 5 суткам (табл.2). Структура тяжести неврологически расстройств: была сходной у выживших животных, получавших соединение ί и контроля к 3 суткам.. У крыс, леченных, соединениями 2 и 3, было отмечено улучшение неврологических расстройств (табл. 3). Начиная с 3-х суток, у животных крщ оя фй - йод- н Ои^одй б- - ийеенйф- фжв$Щ неврологической симптоматики. Однако восстановление невродогмческого статусе у крыс, леченных соединениями 1 , 2 и. 3, происходило более высокими ^' темпами. Так, к 5-м суткам средний баял неврологи вес ого де шта в группах леченных соедгшенияш Ί, 2 и 3 был соответственно в 1,4, 2 и 2,4 раза ниже контроля, а к 7 суткам сохранялась тенденция »: й яйому воестановяешш фуню и центральной не вной сйстемй.

Таким образом,, применение соединений 2 и 3 в терапий ишемндескоге повреждения головного мозга в наибольшей степени но сравнению с соединением I спишет гибель животных и ускоряет восстанс ие неврол гачсского статуса у .вьмш крыс.

Таблица 2

Влияние исследуемых, соединений ^' на смертность крыс после тотальной траи.даюрной нше головного мозга, %

римечание: - ρ< , по сравнению с контролем;

- · р< 0,05 т сравненив трудны животных, йвдшавищх соединения 2.и .3 с

группой с-;, получавших соединение 1,

Таблица 3

редо .бащов) 32,0 36,9 I 31, 32,3

Ле » (менее 2 баалов) 8,4 17,9 1 26.3 42,6

С еда»ен»е 1 (п==2$). ]

Тяжелая (более о баллов) 43,5 37,5 1 26,1 * 13. ,3*

Средняя (3-5 баллов) 48,1* 39.3 1 1 ,5 35,6

Легкая (менее 2 баллов) 8,4 23,2 : j 42,4" 53 ^: :

Соединение 2 (Й~27}

Тяжелая (более 6 баллов) .32,0* 30.5* I;

Средняя (3 -5 балдо») 61 ,8* 56,3 I; 29, 35,8

7Л&т& (менее 2, баллов} 6,2 13,2 53,2** 64,

Соединение 3 Й 2 ) ]

Тджелм (более бал ов 30.1 *·' 21,7* Г 13,8** w

Средня» (3-5 баллов) 60,9** 52,8 I 27,0 33,6:

?Дегка,я (менее 2 баллов) 9,0 18,5 59,2** 66, р<0,05 но сравнению с контролем;

~ р< 0,05 при. сравнении группы животных, нодуча ищ

3 с груш н крыс, получавших

Приме 3. Из чение зндоте^нй^ро екторннх свойств срединемий 1, 2 и 3 было проведено на моделях, патологических состояний (неродной ишемий головного мозга й сахарног диабе а} .

Модель неполной ншемин головного мозга у на котнаироааннмх (эфирный, наркоз) рые-самнов линии istar воспроизводили посредством: полной окклюзия левой сонной артерии и огран.йнения кровотока ио правой сонной: артерии т 50 % от ис о ног »0Д ттр д электромагнитного флоу етра. У ло иоопермрованим жавгаш проводмлось аналогичное оиераздвиое вмешательство, но без перевязки сосудов, Рая были обработаны, антисептиками и на них наложены швы.

Для оценки эндотедйиьной. дисфункций исследовали эндотелийзав.иси ую и эндотедийнезависимую реакцию сосудов у крыс, Для этого наркотизированных животных неирерывно решстрировали системное артериальное давлени (САД). Ддя мереймй САД живо ны : в правую ео у артерию и^нлайтнровадй катетер, заполненной смесью шйолопиеекого раствора и гепарнна. Зндотед йзавиСймую вйзоднлйтайня регистрировали ври бо шеш внутривенном введении аиетижояин (5 ш ' г},. эняотеянинезависимую ваэодилатацию - при болюсном 8н>Л"ривенном введении ннтроируссида натрия (30 мкг/ г). А ет яхояин и ннтрс руссид натрия вводили в бедренную вену. Функциональное состояние эндотелия оценивали с использованием коэффициента эндотейма ьной дисфункции (КЭД), рассчитываемого ак отношени площадей под кривыми снижения артериального давления в ответ на внутривенное «ведение натрия шгтропрус да ж в ответ на внутривенное введение ацетидхолина [Тк рен ов И ЗО., Воронов А .В. , 20081.

Э сщрй щ ы с восйршзведением модели неполной мш ж го внош мозга провеян на. крысах-самцах ЛИНИЙ Wistar массой 240-270 г. Были сформированы 6 групп животных по ] 2 в каждой. Груш . крыс: интактиая, контрольная, ложиоонерированная и. леченные соединения и 1 , 2 и 3. Животным: контрольных, ложнооперировйнн и нн актиых групп вводили вну^рижедудонво 3 мл 1 % крахмальной гели, Крысам, й^ё соединемшУн ! , 2 и 3 вводили дозе 100 мгУкг. Жрй &й&кая. гедь (I %} я суто й соединений 1 , 2 ш 3 в крйх н>иом геле аводдаи крысам :1. раз в сутки в течение 6 суток. Первое введение осуществляли через I час после создания модели неполной ишемии ^' головного мозга. На 6-е суши через I чае после последнего введения соединений ^' 1, 2 и 3 или крахшль й гаш кр ы были наркотизированы (тнопентало -натр в дозе 60 мг/кг, внутрибр вдннно} и проведена ценка функции эндотелия сосудов.

Подученные экспериментальные данные показывают, что в группе дсшнодоерированных. крыс шменекий: :ШД0те.Шй:незавне«мой и дадоте ийзавйеймой вазодила ации по сравнению с ннтажтны и животными не выявлено, при этом КЭД составил 2,0- . (табл.4). Следовательно, все наблюдаемие изменения в контроле и грунтшх. лененньгх соединениями ! , 2 и 3 не связаны с влиянием оперативного вмешательства. В контрольной группе у ншемизнрованн крыс КЭД составил: 3,9±0,3, что на S1 % иревьшгало т& е в группе жноонерированных животных (таол.4). акнм образом, неполная ишемия головною мозга у крыс сопровождалось эндотелиадьной .дисфункцией. Описанные н енеи * функции эндотелия с ^' преимущественным нарушением зндотедмйзависимой вазодилатации согласуются с данными о формирований зндотеди ьной дисфункции при и е и еском и реиерфузнонно повреждении тканей л вного мозга крыс. В грунйе крыс с мпгемией головного мозга, леченных соединениями 2 и 3 КЭ составил 1,9±0,.| и 1,8*0,3., соответственно, чт достоверно отличалось от контроля и группы,, получавших соединение I и было близким по значениям к тактным и дожноояерироеанньш животным..

Таким образом, при внутрижедудочно введении соединений 2 а 3 в течение 6 суток но еравненшо с соединением 1 проявляет более высокую эндоте тийнротекторную активность в условиях модели неполной ишемии головного мозга у крыс.

Таблица 4 Влияние исеяедуел х единеш-зй 1, 2 д 3 щ функцию эндотелия сосудов }'' крыс е неполной ишемии головного мозга

Группы животных КЭД, ед

Мнтакшые (п-12)

о>ртоонерй с®да ше (л™ 12}

Контроль (п ^~ 1.2)

Со шение ! (п-12) 2,& ,2*

.Соединение 2 .(n~i2)

Соед»щ ке З Сп ^:::: 1 1 | 1,8*0,3*"

Оримелание - р 0 ₅ 05 но сравнению е шитроде ;

s - р 0$5 йрй сравнении грушш щшотных, колупавших соединенна 2 й 3 с груиной крые, нодулавгнмх соединение 1.

Для соз ания, модели сахарного иабета к ш м-едацам дищга Wisiar однократно внутрибрюшинно вводила стрентозотозд- в дозе 60 мг/кг в нитратном буфере. В опыт отбирали крью с уровнем гаю ы в крови от 18 до 28 ммодь/я. Уровень .гяюкозж в цельной кроаи из ерщзм с иомощьда глюкометра (Р ко ст о по ирше еи о доклинических исследований лекарственных средсте.. Часть первая. - М: Гриф .и- К, 2012.- 944 с ).

Оценка эндотеяиаяьиой дисфункнии сосудов провеян в соответствии с методикой, изложенной в «редь ущш разделе.

Эксперименты, с в0еп|шизведением модели сахарною диабета проведены на крысах-самцах ЯЙЙИЙ Wistar массой 220-250 г, У 48 животных воспроизводили модель сахарного диабета и через 28 суток после инъекции етрегатаотош а были отобраны крщ 8 .группы даленнщ: сэдедв нениями I., 2 в 3 и контроля с близким уровнем глюкозы в крови, нахо ящимс в пределах от 18 до 2S м оль/я. В течение последующих 28 суток ежедневно вт-лрй елудо ¹ шо животным контрольной и иитактао груш вводили 1 % кра -шй гель в количестве 3 мл, крысам опытных труни - соединения 1, 2 и 3 в дозе 100 мг/кг в. крахмальном геле. Через 1 час после последнего введения соединений I, 2 и 3 к ысы были нврко даированы (т.вднент юм-е хр в дозе 60 мг/кг, .внутрнбрюшинно) и. проведена оценка функции эндотелия сосудов.

Эк^ римерт дьн е дайние, пол ченные в результате проведенных исследований, свидетельствуют, что у крыс контрольной группы была выявлена зндотедиадьная дисфункция. Об этом свидетельствовало достоверное увеличение КЭД в 1,76 раза но сравнению с инт&ктнь м животными, Ониеан ле изменений в контрольной группе крыс согласуются с данными о наличии зидотеднадьной дисфункнии у больных сахарным ю диабетом ш у животных с моделями данного заболевания. ¥ крыс, леченных соедтшениями 2 .и 3, КЭД был достоверно значимо ниже, чем в контроле й _: при применении соединения } ш терапий сахарного диабета (табл.. 5).

Таблица 5

Влияние исследуемых соединений 1, 2 и 3 на функцию эндотелия ещудов у крыс с

Ори ечание: - 0.$5 но сравнению с контролем;

³ - р 0,05 при -сравнении груши* животных, получавших соединения: 2 и 3 . удаой крыс, вдщучавших соединение 1.

Таким образом,, применение соединений 2 и по с авнению с соединением ! обесиеян ет более высокую эндотелнйпротееторнук) активность при сахарном: диабете у крыс.

Пример 4, На модели диабетической .ретинопатии оценивали рет оп.ротекторные свойства соединений 1, 2 ш Опыты проведены на 4S крысах -самцах л инии Wistar массой 240-270 г. Маже дтабетнчеекой ретено тни у крш- воспроизводили тоередетвш однократного в утрибрюшниного введения стрентозотсшнна в дозе 60 мг/жг массы тела. Уровень гииергл емии (свыше 3 & ммоль д), потеря массы тела, выраженность нодиурии и полидипсии .я шсь к итериями -тяжести сахарного диабета. Через 2$ суток после введения, етрептозотошша крысы были разделены н 4 группы. Крысам опытных групп с нцентрацней глюкозы 2в,4±З (соединение 1), 21,2.-i-.2.,Q (соединение 2) и 20,$*2 ₅ 5 {соединение 3) иы т ежедневно в течение 28 суток вводили вкутрнжеяудонн соединения :1 , 2 и 3 в дозе 100 мт/кг массы тела, в виде суспензии в 3 мл 1 крахмальной гели. Животным контрольной группы, с концентрацией глюкозы 2] -1*2,6 ммодь/д вводили такое же кознчеста крахмальной гели по той же схеме. Груш НЙГЙКТЯМХ ЖИВОТНЫХ, находилась в ан логичных условиях. .Цетраяьные отделы сетчаток крыс явились, атери лом неследошнйД которые были отареотри вйны через S 6 суток после; нас д йяье ии етрептозотоцина) сразу после эвтаназии эфи ны наркозом, живо ных. Центральные участки задней етенщ глаза были фиксированы в 2,5·% растворе глютаральдегида щ (О М .како йяатбм буфере (рН 7,4), после фиксированы в 2% растворе четырехо си осмия и залиты в смесь смол эпен-аралдит, 11ояугонкие срезы бйди окрашены одундиновы еиним _* удьтратонкие контраетированы арил ешто и цитратом свмша, просмотрены в. сфотографированы в электронном микроскопе. На к у онких срезах йрошводен подсчет «ейросенеорн х клеток с шжтоц ядра на 3000 клеток с каждой сетчатки, гаперж.о&шьт н гошном.орфных. ассоциативных нейронов и радйад ых глйоцнтш _. , гайгд нарньгх нейронов с тотальным,. о* тшым хроматолизом в пнхноморфв на 200 клеток с каждой сетчатки. С использованием окулярной измерительной сетки Автанд ова были высчитаны численная плотность ядер в наружном, ядерно слое . площади 900 мкм ² , удельная площадь сосудов- со стазом, еяаджем и тромбозом., гя нейронаяыш индекс,

лученн е Данте о»м ете &с в т4 'что после азвития етрцрт зожнхнв й го диабета в сетчатках крыс меэд ея м о ойческй признакм дегеиера а всех, структурных комцонентов сетчатки. естрта- е изменения нейросенсор х клето

нейросенсорвда клеток в нару ны ядерный слой по отношению к шжжтому контролю (хаба.6). Изменения ассоциатийны нейронов носят реактивный характер. При стр тозртонйновом диабете у крыс контрольной группы наблюдалось увеличение процента гаперхромных нейронов по сравнению с штакгнвш контролем (табл.?):. Дегенерации мудьжподярных нейронов яри длительной пшергликемии на фоне стрентозотоциново диабета характеризуются » основном .разявчной степени выраженности хроматолизом. В контрольной груше в первую очередь отмечены хроматодитические мшенещщ генгаионарных нейронов (табд.8): поввтшещ уровня нейронов с очаговым й тотальным х ома олизо й 6 _* 7 раз но отяо0*ен«ш к. итактному контролю, ври этом количество «{и о о фных нейронов возрастает примерно 4 раза. При длительной гаг. ргд емим у крыс конт|олькой группы были, выявлены деструктивные процессы в радиальных глнондаах, что выражалось повышением электронной плотности цитоплазм и ядра. Количеств птжноморфных р т гляоцитов относительно значений интажтного контроля увеличивается, что сопровождается снижением гднонейронал ого индекс (та6#.9). В контрольной группе отмечались выраженные -расстройства микроваскуляризации, характеризующиеся достоверным увеличение по

соединения 2 и 3 с группой крыс, нодучавгвдх соединение .1.

Таблица 7

лияние исодд ем соединений 1, 2 и 3 на. показатели деструктор аееони^от да широко» внутреннего гаерноге шщ еетнаток к ыс со стренгозотоцмновым сах арным: диабетом

римечание: - р , но сравнению с контролем;

^" ~ р< 0,05 при срй ида г утщы животнь , яуч шщ. соединения 2 ж З е. грудной крыс, получавших соединение L

Таблица S

соединения 2.и 3 с группой крыс, получавших соединение 1.

Табдищ 9

Влияние йссдедуемк соей еййй 1 , 2: ш 3 на. нокшатеди деструтаки радйад&ной гдаи .» еет ашах крыс со ет егоххташщ еахарнмм диабете»

О шдаш ие - р<0,05 по е не щ} с контролем;

- р< 0,05 ери сравнении грустны животных, получавших соединения 2 и 1 3 с группой крыс, получавших, соединение 1.

Таблица 10

Вдяшие соединений !, :| ι 3 на потазатеяь удеашой. и щади ( } сосудов рвдндеи со стазом, еладжем и тромбозом сетчаток у : жс со етреттозетоцш-ювьш сахарны м диабетом

Групша животных Показатель удельной ндощйдн

И нтактный койтродь(п"9) 1 ,53*0.12 Контроль (ф

Соединение 1 ( ~ )

Соединение 2 (11=9)

Соединение 3 (п-9)

Примечание: ^% - р 0,05 по сравнению: с контролем;

* * р 0,05 жрй сравнении грукны животных, нопуадвтанх соединен» 2. и 3 с грушей крыс, изу авших соединение 1.,

Введение соединений 2 и более эффективно йредотврапзает деструкцию нейросенсорных е к, что выражается в е нженни процента пи отичннх ядер нейронов до значений: кш щ ош одя; и оовдадещм количества рядов ядер относитедшо контрольной грунпм и группы крыс,, лененных соединением 1 (та6д,6). Вместе с тем плотность р снредедения яде нейроеенсорных клеток в наружном ядерном сдое остается сниженным, что связано, вероятно, пролиферативно*прогрессивной- еакцией радиальной гдмк в виде пролиферации и гипертрофии склеральных отростков. Введение соединений 2 и 3 в отличие от соединения 1 способствовало водной сохранности нейронов внутреннего ядерного сдоя от яонре дак> его действия: стойкой дднтедьйой гнйерглике ни, что вы а ал сь в отсутствии достоверных ратдичнй но всем показателям деструкции ассошжшвньгх нейронов крыс (та6д,7). Внутрижелудочное введение соедтеен т 2 и 3 омзмвад нодо ж мое м тие ж состояние гангяио рных нейронов сетчатки, -причем процент нейронов с тотальным и очаговым ^ома ш ш ейн адось относительно адачений контрояьво группы и группы шшотн с леченных соедтншнмем 1 ₅ оставаясь ври этом все же достоверно шше значений и актйого контроля (табя.>£). Также при введении крысам соединений 2 и 3 отмечалось, полное восстановление всех показателей ^' деструкции радиальных глиоци ов (табл.9). Так, п оцент гоп Оморфнмх радиааьнъж .гяиоцитов снижался яри этом, гдщщейрондаьньта индекс возрастал по отношению как к контрольным ^" значениям, так и значениям группы крыс леченных соединением I, При жеденшт животным соединений 2 и 3 отмечалось .значительнее улучшение гемодинамики _» что вы ажалось- в ^* достоверном снижении удельной .площади сосудов со стазом, сладжем и тромбозом по сравнению с аналогичными показателями к ыс контроля и леченных соединением 1 (табл Л 0),

Таким образом, введение соединений 2 и 3 но сравнению с соединением 1 в течение Ж суток: крысам с диабетдаеской ретт онатней., развившейся на- фоне стрентозотощ ового диабета, оказывало более ажеш-шй ретйнойротекториьгй эффект, привода к снижению выраженности деструкции всех структурных компонентов сетчатки. Соединения 2 и 3 в отличие ох соединения .1. обладают достове но более высокой ретинопротекторной активностью.

соединения 1 , 2 м З в дозе 100 мг. кг в виде раствора в ί мл: кремофора,

У яаркошзяроваш х крыс (тшшенталом-натрия в дозе 6 г/жг, виугрибрюшиино): были от.г1реиарироваиы правая' бедренная, артерия и имплантирован катете для измерения системного артериального давления... Девая общая сонная артерия была отпрепарирована к перевязана наружная сонная артерия. На общую сонную артерию был. наложили, нжехочный датчик, и региехриравали ведй.чнму мозгового кровотока с помощью эдектромагнитного расходомера жровн.

Опыты по изучению влияния трехкратного Бнутрижедудочнога введения срединений L 2 » 3 на мозговой кровоток б ^' ыт проведены: на 2S крысах -самцах линии Wistef массой 270-300 г, Бьши. сформированы 3 гру ы животных. Крысам конт ояъной группы :(п=7) вводили внугрйжелудо*шо ежедневно однократно в течение Э»х суток жвиобвемное количество 1 % крахмальной гели. ^' Животным- одагшмх групп .вяу ри едудочно ежедневно однократно в течение 3-х суток, были введены соединения 3. (а ⁵⁵⁵ ?), 2 и .3 (в"7) в дозе 100 г кг в 1 % крахмальном геле. На 3-й сутки эксперимента через 1 чае после последнего введения были проведены измерения мозгового кровотока у крыс

Рез льтату, пррвеяекнмх исследований «оказывают, что в контроле ври однократном парентерадвно (подкожном) введении кремафо а крысам уровень МК. в течение 1 часа был стабильным _» в последующие 30 минут намерения выявлена незначительная тенденция снижению мозгового кровотока. При это отменена тенденция к снижению САД в течение проведения измерения, что, очевидно, связано с условиями опыта (наличие онерашадн -травмы и использование наркоза) (табл. М). При ту шту Шом трехдневном введении 1 % крахмального геля у животных контрольной груши значение мозгового кровотока составляло 6,2^0,4 мл/мин (табл.12), Подкожные введени Масляного раствора соединений 1 , 2 и 3 к ысам способствовали, начиная с 5 мйнут измерения и до конца наблюдения существенному повышению МК, В период: с 45 до 90 мни эксперимента при введении соединений ^' 2 и 3 з чен МК у рис, достоверно оь и выше этого показа еля « группах контроля и леченных соединением I . При этом по уровню САД в течение всего периода наблюд ая достоверных различий между грушами животных не выявлено (та х.11),

При трехкратном внугрижелудочном введении крысам соединений 2 и 3 значения мозгового кровотока составили 9 Л*0 и 9,4 *0 ₅ мл/мни, что было, соответственно, выше, лем шок йдь контрольно» группы и животных леченных соединением 1 (та§л.

Таки образом, иодкйжиое введени масляного раствора соединений и п Бй кз? более существенно до сравнению с контролем, и жщотнв и денеинйми. соединением- 1 мозговой кровоток, не вызывай, снижение системного артериального давления. Трехкратное виутрижед.уд теое введение соединении 2 и 3 въ значи ое увеличение мозгового кровотока и по внрш аюсхж эффекта .превосходя соединение 1. Предлагашое изобретение расширяет арсена средств, способны увеличивать мозговой кровоток.

Таблица 1-2

Влияние нсследуемых гаедннений I.... и 3 на мозговой кровоток

Примечание: - р 0,05 и© сравневдда с кдатроа ^*

* - < 0,05 »р« сравнении руппы ивотнь , получавших соединения 2 и 3 с группой рздс, полетавших соединение 1.

Пример 6. Изучение гемореояост«чес ой, антйтттобошггарной и антнтромбогенной активностей соединений L 2 ж ^' 3 было нровёден© на моделях ганервяжоети крови ex vivo:, йнугрисосудастогр тромбоза у крыс.

Онй ы по изучению ге ореодош'юекнж свойств соединений 1, 2 и 3 б ш проведены: ма .30 кр еах-самцах т&ат Wistar. массой 250-28D г, $ р м были уящ щю т. на 5 групп д 6 5 даотаь?х в каждой, Крисам контрольно хруипм вводили крахмальный гедь, животные ОНЫШЬЙ груди -· деитоксй иддии (400 г/кг) иди соединени 1, 2 и 3 (100 мг кг). Препараты и эетиобъемное количество 1 % к ахмальн й гедн (3 мл) вводили внут ижедудочно че ез зонд за- один час до забора, крови.

Вязкость кро и » агреганнй зрнтроштев Оценивали в пробах крови сраз после, взята» и через 1. час после инкубаиим крови при температуре 20,0*0,3°С,. Кровь забирали из общей сонной артерии иод эфирным наркозом, В качестве антикоугул нта был иснодьзован 3,8% раствор цитрата натрия в соотношении с кровью 1 :9. Вязкость крови была измерена ма ротационном вискозиметре в диапазоне скоростей сдвига от 5 до 300 с ^*! до и после инкубаннв образцов при температуре 20,0*0,3°C в течение 60 минут.

В этой же серии оньгге» еповданнуш агрегацию эритроцитов иссдед вадн с помощью сндяектометрнчеегого метода. Критерием агрега о оЙ: активности

агрегации зр роцитов. Введение неш'Ок.сифиялина Предотвращало ускорение агрегадии. эритроцитов при инкубации, Вн; ршкеДудочное введение крысам соединений 2 и 3 замедляло агрегацию эритроцитов цри инкубации крови, что выразилось в достоверном повышении подунернода агрегации эритроцитов до сравнению с контролем и • ^' соединением 1 (табл. 14),

Таким образом, соединения. 2 и: 3 способны ограничивать развитие гшервязкоети крови и повышение axperaipH ^■■ эритроцитов ex vivo. Эффективность соединений 2 й 3 по .ад а ениоеТи выше _; чем эффект еоединейия I и ешвдетавий с кентоксмфвдлииом.

Таблица 1

Влияние однократного внутрижелудо'шого введения нентокеифнлдз з и соединений- 1 , 2 и 3 на подуиериод агрегации эритроцитов до (1) через I ч после инкубации при комнатной температуре (20,0±0,3* ^' С) (2)

* - p O _s 05 но еращен о с грунной контроля;

* - р< 0,05 яри орашешш я угаш- животных, получавши соединения 2 и 3 с группой крыс, получавших -соединение I .

(Мы ы не нссде оваййю ктн ромбоедгта свойства соединений 1 , 2 н 3 бьши проведены 30 крьтсах-самцах линии Wistar массой 280-300 г, которые б ли разделены на 5 групп (но 6 особей в к дой). За час до щатиа крови крысам опытных групп вводили пеитоксйфйлянй (400 мг/кг) или соединения: 1, 2 и 3 (100 мг кг). ыс м: контрольно! грушы вводил» эквиоб е ные количества I % ра аданого геля . Кровь бш.а взята да общей сон вон артерии иод эфи ным наркозом:. В качестве аитшоугудянт был и одьзован % > раствор цитрата натрий, в соотношении с кровью 1:9. Агрегаций ромбоннтов определялн нефедометрнчееким методом. По стандартному методу были получены богатая (БТП) и бедная (БеТП) тромбоцитами плазм :« гщдсчштвалось число тромбоцитов _* Поете определения числа тромбонитов в БТП была проведена стандартизация числа тромбоцитов, ля чего БТП разводилось необходимым количеством: БеТП до 400*27 тыс. тромбоцитов в I мм* в пробе. Дтя оценки аШтп омбонита иого действия сосудистой, стенки были использованы БТП и БеТП интактиьж крыс-доноров. Агрегацию тромбоцитов оценивали в стандартизованной плазме н приборе, агрегатограмвд. регистрировали с по ощью самописца. После добавления гщдуктора агрегации регистрировалось изменение уровня оптической плотности ΒΤΙΪ. В качестве критерия агрепвдтонной активности тромбоцитов был использован показател степени агрегации (в %}, характеризуемый иженением оптической ^" плотности БТП п еде добавлен в кювету индуктора агрегаций. ш этом: за 100% принимали величину оятачесжой плотности ВеГО, а з 0% - величину ои иче ой плотности БТП. Б качестве индуктора агрегации использовали АД в конечной концентрации 4 - 10 ^" * М. Подученные данные свидетельствуют., что у крыс контрольной группы амялнтуда агрегации тро боцитов, индуцированная АДФ в конечном концентрации 4- 10 ^'6 М, составила 28*2 %. А шитуда АД -индуадроэашгой агрегации, тромбоцитов после введения йшт еифмддкна была достоверно ниже аналогичного показателя в контрольной груше. Посяе введения соединений 2 и 3 амплитуда агрегации 1|х мбоцшов также была достоверно ниже показателей в адед 1 (табл. 15)..

Таким образом, исследуемые соединений 2 и 3 но сравнению с соединением 1 обладают выраженным влиянием на соеудисто-тромбоцитарный гемостаз, Антатромбогенная активность соединений 2 ж 3 может быть обу бвд а как анштро бсщмтарн мй, так и эн рте л нйоротек:торнь1ми свойствами ,

Таблица 15

Влияние однократного вн трижеяудочного введения нентоксифидлиш и. ео инеиий I, 2 и 3 на АД -кидудироваин ю агрегацию тромбоцитов

Примечание; ^N - р<Й,Й5 но сравнению с ^: группой контроля;

" - < 0 ₅ 05 дрн сратещни грукрм ждаотйь , нолучавщнх вдединения 2 и 3 с группой крыс, получавших, соединение I ,

Эксперимент но изучению антятромбогенкых свойств соединени 1 , 2 и 3 были проведены на 30 крысах-самцах линии Wistar массой- 240-270 г. Были сформированы 5 труни до 6 животиьж в каждой. Животным кош одъной грушш вводили 1 % ра н»ный гель . Крысам рп тнмх груш соответственно вводили кентексйфиллин (400 мг/кг), соединения ί, 2- й 3 ( 0 г/кт). Соединен»» и жвнобъемнее -количество- I % крахмально! гели (3 мл) .вводили внутри едудочн через зонд I раз в день в течение й суток, На. 6-е сутки опыта, -через 1 чае- гэдеде последнего введения крысы были наркотаЗкровйта (тиопевхад натрия в дозе 60 мг/кг, внутрибрюшиино), выделена левая общая сонная артерия и воспроизведен модель ^^йс с йс огр тромбоза. На отп пари ованн ю сонную арте цк> б да наяо енад м и еточйые датчики, и регистрировали ведичнну кровотока до сосуду с номошью здектромагшгшаге расходомера крови. Далее под сонную артерию была подложена полоски фильтровальной бумаги н полиэтиленовой пленки. На Дгу артерию свержу накладывали, подоску фт ьтров&^ ой бу аги,, ад которую был несена 1 капля 10% раствора FeCb. Измерения величины кровотока в артерии проводили от момента нанесения хлорида железа на левую сонную артерию до полной остановки кровотока в ней (время образования тромба). Расчет снижения кровотока относитея о исходной веп ин кровотока бы выражен в п оцентах. Массу тромб оценивали гравиметрнческим методом.

У животных к нт ольной трупом носяе воздействия на соеулнс у стенку раствором FeCl г происходило полное прекращение кровотока но сосуду. Среднее время полной остановки кровотока до нудя составило 23=fe2 минуты. Масса тромба, определяемая через сутки после аппликации х орида железа, составила 1 ,38^0,2 ж (табл. 16). При вн>ч щедуяонном введении крыса «ентгжшфнядина зарешетрироваяо снижение кровоток на 30 % от исхо ного значения к 90; минуте щеиернмен а. На следующие еут is и ошё сонных артерий у крыс этой грунп ромб в не обнаружено. Применение нентоксйфиллина уменьшае тромйообразоваийе в зоне стеноза. Внутрижеяудочное введение крыс соединений 2 и 3 нредотвра мо прекращение кровотока после анли ащш раствором Fe€i ₃ .,. 90 минуте эксперимента у крыс, леченных, соединениями 2 и 3, §ыяо тштто снижение кровотока на ! 2 и 10 %, соответственно. Введение соединений 2 м 3 полностью препятствовало тромбообразоваиию в сонной артерии на еледуда ие сутки после аиликадни раствором Ее . По шштромбогенной активности соединения 2 и 3 шачительно превосходили соединение 1 ,

Таким образом, соединени 2 и 3 но сравнению с соединением I обладают выраженной антитромбогенной а гавност&кк

Таояи 16-

Влияние иенто фмллйна и соединений 1, 2 и 3 на снижение кровотока в сонной артерии в течение 90 минут и массу тромба через сутки после «пиликаний хлорида железа

римечание: ~ р , но сравнению с группо контроля;

^?! - р й$5 п и С авнений, гругош жи ных, «одуча»шнх соединения 2 и 3 с групп й крыс, получавших соединение 1. Пример 7.. Исследование ^' вротйвомше ической й протйвоаргг шеской активности соединений 1, 2 и 3 проведено в соответствии с Руководством но проведению доклинически исследований лекарственных средств (Часть первая. - М.; Гриф а К, 2012,- 944 с.) на модели ишемии и реперф з шттрм у крыс

Опыты проведены на 96 крысах-самцах лйний istar массой 240-250 г, Крысы были шдоЩ'Ззмровашй в 4 уйны. Крысам онштшдх групп соответственно «водили щщйненвд 1, 2 и 3 в дозе 100 «г/кг а виде еушешии на \% крахмальном геле (3 мя) вну вижедудочно через зонд 1 раз в день в течение 3 суток до м 3 суток после создания модели. Животным контрольной г шы' вводили эквиооьемное количество 1 % крахмальной гели по аналогичной -схеме;.

Эффективность еоед еш-ш .1 ,. 2 и. 3 §ЬШЙ изучены с помощью элёш окардйогрвфического (ЭКГ) и о олошчбежог методой. Для воепрощ&едения модели крысы. ли йаркотйзированм гттойе гадом. натрия, в дозе 60 кт; виу рйбрюштшио, интубкрованм и подключены к аппарату искусственной веи ия ни леших. После проведения торако- .и г ракардо омин б ла .· осуществлена окклюзия девой коронарной артерии на уровне нижнего края а с«1а sinistra без -нарушения топография сердца в грудной клетке по- методу Когана. [Коган А.Х. Хирургический метод моделирования корстеароокклюзионного инфаркта и аневризма сердца у к.р.мс//Патол6гическая: физиология и жшериментальная терапия. 79. J s3. с, 79-81]. Длительность окклюзии левой коронарной артернн составила 20 мин, после чего лигатуру развязывал» и осуществляли- лоети емическую реперфузию. В течение периода ишемии и 10 минут рш.ерфузни проводили мовиторнроваяне ЭКГ во П стандартном отведении с мощ&ю компьютерного з ектройюдишрафа. Верификацию правильности наложения лигатуры и адекватность модел:н отслежнвалн йО степени изменения высоты ST-c-егмеета на ЭКГ, У лш ноонерйрованнвхх животны проводили -аналогичное- оперативное- в ешателкство без иааожеиия лигатур «а левую коронарную артерию.

На 3-е сутки после ренерфузни крысы бы и вновь наркотнзярованы тионенталом натрия в дозе 60; мг/кг, внутрнбрюшинно,. шнтубнрованы и подключены к аппарату искусственной вентндодим легких и наложена, лигатура. Для выявления зоны, п-шоиерфузнп в бедренную: вену бод сио вводили 0.2 мл 5% раствора краентеяя patent Ыде violet, в течение после ующих 20- 30 секун извлекали сердце. Участки миокарда с сохраненной перфузией окрашив знсь в зедений д е , неперфузнруемые оставались неокрашенными.

Срезы ^' сердца были приготовлены на замораживающем микротоме. Часть- срезов оставляли в нативно виде для оценки зоны г бйерфуза ^' И, Др г ю часть срезов окрашивали нйтросияйм тетразолнем (НСТ) е целью вь влениа в ткани дегидрогеназной активности. Срезы были заключены в г ерииобО^жедатиновый гель и сканированы. Размер зон гиподерфузии и изменения дегидрогеназной активности оценивали с применением программы Adobe Photoshop, За зону инфаркта принимали зон с резким c-нйженвем дегидрогеназной активности. Для этого срезах миокарда в деляли уч стки, суммарная интенсивность окраски которых бв снижена в 2,5 раза и более относительно интактных одааетей миокарда, что отражало топографи снижения в той же степени дегидрогеназной активности [Коган А.Х. Хир гический метод моделирования коронароош юзнонного инфаркта ш аневризма се дца у крыс/УНатологнческйя физиология и э сп«римея я»н8я « авия. 1979. З. с, 79-81].

В результате проведеших: исследований было установлено, что в контрольной группе в течение первых асов после вееетановдешш кровошабжения миокарда левого желудочка погибло ! крыс из 24 (54%). При введении соединений 2 и 3,. в период, реперфузии нз 24 ЖИЙОТН ногабдо 1 - 2. Смертность в группе крыс леченных соедйиенияма: 2 а 3 составила 4 - 8 ^' %, что достоверно отличалось от показателя в контроле ж группе животных, учавших

У &р онтрол ной грунщы к первым суткам и в течение й сде у^щйх 3 суток после возобновления перфузии миокарда левого желудочка на ЭКГ отмечалось появление патологического зубца Q _> свидетедьствуи щего о надмчии некротических изменений в миокарде, и снижение ашхх ям зубца Т относительно исходных значений. После восстановлений кровоснабжения миокарда в течение периода репер уз у крыс контрольной группы сохранялось существенное снижение амплитуды зубца относительно исходник значений,, харакдершутощее нарушение процесса деполяризаций жедудочюв вследствие выключения части миокарда и процессов возбуждения. В группе крыс с; вве ением соединений 2 и 3 сравнению с «ощролем и группой животных леченных соединением I в течение 1-3 суток доеяе реиер уз ? миокарда отмечено достоверное снижение ппту х зубца. О ш ЭКГ после эпизода ищешда реперфузив. В течение периода ренерфузий к третьим суткам в группе крыс, леченных соединениями 2 и 3 бьгао выявлено отчетливое достоверное повышение амплитуды зубцов R и Т относительно контроля и группы животных с введением вдединеншг 1 (табд.18}.

Как видно из таблицы 19 по размеру зоны гипоперфузии от обшей площади поперечных срезов миокард исследуемые группы, существенно не отличались, У животных, леченных соединениями 2 и 3, ио сравнению с контролем и грувной крыс с введением соединения 1 отмечено достоверное уменьшений зон резко сниженной дегидрогенззион активности от общей площади миокарда и о шющщ зоны гипоперфузии. йвдовадагьно, ечебно- профнлакшческое введение соединений 2 и 3 снижает смертность животных после эпизода ашемии ренерфузте и значительно уменьшало зону инфаркта как от общей пдошади миока а, так- и от площади гаш ерфузии но сравнению с аналогичными показателями контрольной группы н ^" Группы животных леченных соединением 1 (табл.19),,

Таблица 17 Влияние исследуемых соединений 1 _г 2 ш 3 выживаемость ---животных в течение яервьж суток после ишодии яе!рф зик миокарда

Прнмеч нне; - p<0,G5 по сра енню с труппой контроля;

* - р 0,05 при еравнеини труппы, жкготных., гюлу а щих соеданенйя 2 и 3 с группой к ыс, получ их соединение 1.

Таблица 18

it, -мкВ

T , мк В 89,2*8, f* I 133,5±8 _> б"

Примечание: - p<0,O5 но сравнению с исходными значениям»;

* - p<£),Q5 по сравнению с группой контроля;

! ^? - р 9,05 яри сра ешда группы ивотны , получавших соединения 2 щ 3 С груидой крыс, получавших соединение 1.

с группой крыс, нодучавшш соедииенне I ,

У кр контрольной « опытных групп в шпемический и реиерфузиош й периоды в ра ш. соотношеннжж §нж отмечены все ви ы елудоч овых аритмий высоких адащш по LOWT .нолйтониая желудочковая зке раснегодия _^ желудочковые тахда рдйи, фибр п щ желудочков. При этом у крыс контрольной гр га ишемичес Й период основную долю в нарушениях ритма еердна составили желудочковые фибридяяд и и желудопковйя тахикардия (табл. 2§-2!}. Смертность в контрольной груше крыс составила 54 % (табл. 16). Основной причиной гибели животных, явилис фатдаьные аритмии, в частности фибрилляции левого желудочк иослед^жвдей остановкой сердил

У животных опытных групп проф жктннесгае введение соединений 1 , 2 и 3 во время эпизода ишемии существенно не щменядо струк уру и а сердца в сравнении с частотой и аракте ом аритмий у животных контроля (табл. 20). Существенные различия в жличеетве в тяжести аритмий у крыс иадея груш были вв вдены в ренефуз нный период. В группе животных, леченных соединениями 2 и 3, но сравнению с контролем и группой с введением соединения 1. знанитедьно вединядосв число шотных без желудочковых аритадн и достоверно снизилось количество крыс с фатальными желудочковыми мбрнлляци н (табл. 21}» Снижение патологических изменений ритма сердца и уменьшение чис а крыс с наиболее тяжелым видом аритмии ~ -желудочковыми фибриллящшми - проявились уменьшением летальности жнвотн йс, при введении соедане й т 3 в _: яерефузиоякыЙ период.

Исследуемые соединения 2 в З в дозе 300 мг/кг массы тела, в отличие от шрояя. и соединения ! при его яетебяо-профйлзктй еском введении в условиях модели ишемии и ренер узии миокарда статистически значимо снижая частоту вознщщовеннЕ и т есть аритмий _» уменьшая смертность животных, обусловленную фатальными аритмиями.

Таким образом, сушествеодое уменьшение зоны инфаркта миокарда, снижение частоты и тяжести аритмии и смертности животных, щт. введении соединений 2 и 3, обусловлено их

|^0ТИ» ИШШН^СКИ Н И И >О Н8 а Й МЙЧ«С И деёс внямв.

я- 3 с грудной крыс, получавших соединение 1.

Таблица 21

Вя шне исщедуемых соединений L 2 и 3 н частоту и характер аритмий во время ре-перфузин миокарда

Соедщ* «е 2 !3* ^;; 4 4 I з*"

Соединение 3 14* 4 4 2*" ^!

Примернее; - р<0,05( ) да сравнению с т опой контроля;

* - р 0,05 (χ ² ) при сравнений: грушш животных _» шдучдаш х сойдниеяня 2 и 3 с гругшой крыс, яолу^авщта .соединение 1.

Предлагаемое юобретеше расширяет ареека средств, обладающих одновременно г ореодотечее ой* аш регат.ной ^' , ащ грамбогеш . ретешойротекторкой, эндотеяийпроте торно , нейропроте торкой,, нротвдаари.тш-иеекой и противоншемшес ой актавность ,, уведдадаашэдих мозговой кр оток.