本发明属于天然药物及药物化学领域并涉及新 型高三尖杉酯碱衍 生物， 特别是高三尖钐酯碱的胺化衍生物， 及制备这些化合物的方法、 包含谅化合物的组合物及其在制备抗肿瘤药物 中的用途。

背景技术

高三尖杉酯城 ( Homoharringtonine, HHT ) 又称为氧- 3-[(2R)-2,6-二羟基 -2- ( 2'-曱氧基 -2'-氧代乙基） -6-甲基庚酰基]粗榧碱

(0-3-[(2R)-2,6-dihydroxy-2-(2'-methoxy-2'-oxoethyl)-6-methyl heptanoyl]c ephalotaxine)是从中国+草药三尖杉利」植物三尖^ (cephatotaxus fortuneif) 或其同属植物中， 提取分离得到的生物碱。 三尖杉科三尖杉属植物共 9 种， 其中 8种产于中国。 此属植物中含有多种生物碱， 其中三尖杉酯碱 (harringtonine) 高三臾杉醋减 (homoharringtonine)、 异三尖杉醋碱

(isohiarringtonine)及脱氧三尖杉酯械 (deoxyharringtonine)被提取分离、 鉴 定， 并得到了广泛的研究 （钟三保等， 三尖杉酯类生物碱的半合成及结 构和抗肿瘤活性的关系， 药学学 4艮， 1994, 29 ( 1 ) , 33-39; 王定志等， 三尖杉属植物中生物碱的研究， 药学学报， 1992, 03， 178-184 )。 此外 非酯碱的三尖杉緘（即粗榧碱 cephalotacine)也作为主要成分被分离出来。

高三尖杉酯碱 三尖杉酯« 异三尖杉酯碱 脱氧三尖杉酯碱

CAS: 26833-87-4 CAS: 26833-85-2 CAS: 26833-86-3 CAS: 36804-95-2 临床研究证明 HHT应用于急性髓系细胞白血病的诱导緩解及緩 解 后治疗， 骨髓增生异常综合征 (MDS)、 慢性粒细胞性白血病及真性红细 胞增多症及恶性淋巴瘤等， 尤其是应用于治疗急性非淋巴细胞白血病 (章志学等， HAG方案治疗中高危骨髓增生异常综合征及急性 髓性白血 病的临床研究， 井冈山大学学报， 2010, 31 (6) ， 108-110; 邓建群等， 高三尖杉酯碱对白血病原癌基因 bcl-l， c-myc, 抑癌基因 pl5的影响， 临床合理用药杂志， 2010, 3 (7) ， 15-16; 陈丽娟等， 阿糖胞苷， 高三 尖杉酯碱诱导急性非淋巴细胞凋亡的临床应用 ，江苏医药， 1999 , 25 ( 4 ) , 257-258; 张辉等， LD- HA方案治疗急性髓性白血病 27例临床分析， 苏 州医学院学报， 1997, 17 (4) ， 689-690; 丁素心等， LD-HA方案治疗 低增生性白血病 26例临床分析，苏州医学院学报， 1997, 17( 1 ), 89-90; 薛艳萍等， HAD方案治疗成人急性非淋巴细胞白血病的临床 观察， 中华 血液学杂志， 1995, 16 (2) ， 59-61 ) 。

HHT可促进细胞分化及凋亡（王昀等， 高三尖杉酯碱诱导 K562和

CML细胞凋亡及分化的实验研究， 上海医学， 2001, 24 (3 ) , 166-168; 卢大用等， 高三尖杉酯碱对白血病细胞分化和肿瘤转移的 影响， 上海大 学学才艮， 1999, 5 (2) ， 175-177) 。

从对同步化 KB (人类口腔表皮样癌）细胞的研究显示， HHT具有细 胞周期特异性， 其对 G1和 G2期细胞杀伤作用最强， 而对 S期细胞作 用较小 （金伟等， 高三尖杉酯碱对 HL-60细胞 QCY7703细胞的作用研 究， 中医药学报， 2001, 29 ( 3 ) , 44-45; 罗晨美等， 高三尖杉酯碱和 血栓通对人翼状胬肉成紆维细胞周期性变化的 影响， 中国中医眼科杂 志， 1999, 9 (2) , 67-70 ) 。

HHT的药理学作用主要抑制真核细胞的蛋白质合 成， 抑制氨酰基

-tR A对核糖的结合及其核糖体与舦链的形成， 因此影响多聚体形成的 早期阶段，并使多聚核糖体解聚，干扰蛋白质 核糖体功能，对细胞内 DNA 的合成也有抑制作用 （蔡真等， 凋亡相关基因 Survivin, Bcl-2和 bax表 达在高三尖杉酯碱诱导骨髓增生异常综合征 MUTZ-1细胞凋亡作用， 中 华实用肿瘤杂志， 2003, 18 (3 ) ， 188-191; 蔡真等， surviving mR A 表达水平与高三尖杉酯碱 ιί秀导恶性血液病细胞凋亡的相关性研究， 浙江 大学学报， 2006, 35 (2) , 204-208; 王恒等， 高三尖^酯碱通过抑制 P210-bcr/abl诱导 K562细胞凋亡， 中国试验血液学杂志， 2000， 8(4) , 287-289; 陈春燕等， 高三尖杉酯碱启动白血病细胞凋亡的比较蛋白 质组 学研究， 中华血液学杂志， 2003, 24 ( 12) ， 624-628; 李玉峰等， 高三 尖杉酯碱对慢性粒细胞白血病患者骨髓 CD34+细胞端粒酶活性的影响， 白血病 '淋巴瘤， 2004, 13 ( 1 ) , 42-43; 李玉峰等， 高三尖杉酯碱对慢 性粒细胞白血病患者骨髓 CD34— + CD7 +细胞的影响， 中华血液学杂 志， 2007, 28 ( 10) , 706-707; 李玉峰等， 高三尖杉酯碱对慢性粒细胞 白血病患者骨髓 T细胞亚群和 Th细胞亚群的影响，白血病 '淋巴瘤， 2006, 15 (1) ， 37-39; 李玉峰等， 高三尖杉酯碱对慢性粒细胞白血病患者骨 髓及 K562细胞端粒酶活性的影响， 中华血液学杂志， 2003, 24 ( 6 ) , 329-329; 孟小莉， 高三尖杉酯碱诱导 HL60细胞端粒酶活性的变化， 郑 州大学学报， 2004, 39 ( 3 ) , 440-442; 谢万灼等， 端粒酶在高三尖杉 酯碱诱导 HL- 60细胞凋亡中的作用，中华医学遗传学杂志， 2002 , 19( 2 ), 169-171 ) 。

另一方面胺化或酰胺化的小分子在药物的研发 和应用中得到广泛 的应用， 但是尚未见到胺化或酰胺化的高三尖杉酯碱衍 生物的合成和 应用的 4艮道 发明内容

本发明的目的之一是提供特征为通式 (ί)的新型高三尖杉酯碱的胺 化或酰胺化衍生物或其药学上可接受的加成物 ， 复合物或者盐：

其中 和 选自 Η、取代或无取代的 C _r C _ls 烷基、取代或无取代的 C ₂ - C ₁₈ 烯烃基或炔烃基， 取代或无取代的 C ₃ -C ₇ 环烷基或环烯烃基， 取代或无 取代的芳烃基，取代或无取代的杂环基或芳香 杂环基。取代基选自卤素， 胺基， 取代胺基， 硝基， 氰基， 羟基， C ₆ 烷氧基， 巯基， d-C ₆ 烷硫基。 和 可以相同， 也可以不同， 也可以成环合为一体。

本发明的目的之二是提供制备本发明通式（I ) 的高三尖^酯碱的 胺化或酰胺化衍生物的方法：

HHT HHT acid (!) 本发明的高三尖杉酯碱的胺化或酰胺化衍生物 (I)可按上式所示由 两步反应制取。 先将高三尖杉酯碱在碱或碱性试剂存在下， 温和水解生 成高三尖杉酯碱的酸中间体； 再由高三尖衫酯碱的酸中间体与相应的有 机胺在有縮合剂和碱的存在下， 缩合胺化而成高三尖杉酯碱的胺化或酰 胺化衍生物。 也可以由高三尖杉酯碱与相应的有机胺在有缩 合剂或者碱 性试剂存在下， 一步缩合胺化而成高三尖杉酯碱的胺化或酰胺 化衍生 物。 式 (I)中 R p R ₂ 与上文在通式 (I)中的定义相同。

本发明的目的之三是提供包含本发明化合物的 药物组合物， 所述 药物组合物包括至少一种本发明化合物， 和任选的药学上可以接受的 赋形剂。

本发明的目的之四是提供本发明化合物或包含 该化合物的药物组 合物在制备药物、 特别是抗肿瘤药物中的用途。 相应地， 本发明提供 一种治疗肿瘤患者的方法， 包括给予需要治疗的患者治疗有效量的至 少一种本发明的化合物。 所述肿瘤特别选自白血病、 多发性骨髓瘤、 淋巴瘤、 肝癌、 胃癌、 乳腺癌、 胆管细胞癌、 胰腺癌、 肺癌、 大肠癌、 骨肉瘤、 黑色素瘤、 人宫颈癌、 神经胶质瘤、 鼻咽癌、 喉癌、 食管癌、 中耳肿瘤、 前列腺癌等。

本发明还涉及用于治疗肿瘤的本发明的化合物 。 具体实施方式

本发明特别涉及如下内容。

1. 通式 (I)的新型高三尖杉酯碱的胺化或酰胺化衍生物 或其药学上 可接受的加成物、 复合物或者盐，

(I)

其中 和 独立地选自 H、 C ₁₈ 烷基、 C ₂ -C ₁₈ 烯烃基、 C ₂ - C ₁₈ 炔烃基、 C ₃ -C ₇ 环烷基或环烯烃基、 芳基、 杂环基、 杂芳基、 芳基- C C ₄ 烷基、 杂 芳基 -C C ₄ 烷基、杂环基 -C _r C ₄ 烷基，或者 和 与它们所连接的氮原 子一起形成含氮杂环、 芳基 -含氮杂环或杂芳基 -含氮杂环， 所述基团每 个任选地被一个或多个选自下组的取代基所取 代： C _r C ₄ 烷基、 素、氨 基、 C _r C ₆ 烷基氨基、 硝基、 氰基、 羟基、 羟基 C _r C ₆ 烷基、 C _r C ₆ 烷氧 基、 巯基和 C _r C ₆ 號石 基。

2.根据上述第 1项的高三尖杉酯碱的胺化衍生物或其药学上� �接受 的盐， 其中 1? 和 独立地选自 H、 d-C ₆ 烷基、 C ₂ -C ₆ 烯烃基、 C ₂ -C ₆ 炔烃基、 C ₃ - C ₇ 环烷基或环烯烃基、 芳基、 杂环基、 杂芳基、 芳基 -C _r C ₄ 烷基、 杂芳基 - C ₄ 烷基、 杂环基 -C _r C ₄ 烷基， 或者 和 与它们所连 接的氮原子一起形成含氮杂环、 芳基-含氮杂环或杂芳基-含氮杂环， 所 述基团每个任选地被一个或多个选自下组的取 代基所取代： c _r c ₄ 烷基、 鹵素、氨基、 C _r C ₆ 烷基氨基、硝基、氰基、羟基、羟基 d- c ₆ 烷基、 c c ₆ 烷氧基、 巯基和 <^-0；烷硫基。

3. 根据上述第 1项的高三尖杉酯碱胺化衍生物或其药学上可� �受的 盐， 其中 R P R ₂ 独立地选自 H、 C _r C ₆ 烷基、 C ₃ -C ₇ 环烷基、 杂芳基、 杂芳基 -C _r C ₄ 烷基， 或者 1^和 与它们所连接的氮原子一起形成含氮 杂环、 芳基-含氮杂环或杂芳基 -含氮杂环， 所述基团每个任选地被一个 或多个选自下组的取代基所取代： C _r C ₄ 烷基、 卤素、 氨基、 C _r C ₆ 烷基 氨基、 硝基、 氰基、 羟基、 羟基 C _r C ₆ 烷基、 C _r C ₆ 烷氧基、 巯基和 C _r C ₆ 垸硫基。 4. 根据上述第 i_ ³ 任一项的高三尖杉酯碱胺化衍生物或其药 学上可 接受的盐， 其中所述芳基是苯基或萘基。

5. 根据上述第 1-4任一项的高三尖杉酯碱胺化衍生物或其药学 上可 接受的盐， 其中所述杂芳基是呋喃基、 噻 p分基、 吡咯基、 噻唑基、 噁唑 基、 异噁唑基、 吡唑基或吡啶基； 优选呋喃基、 噻哈基或噻唑基。

6. 根据上述第 1-5任一项的高三尖杉酯碱胺化衍生物或其药学 上可 接受的盐， 其中所述杂环基或含氮杂环是哌嗪基、 吗淋基、硫代吗啉基、 哌啶基、 吡咯烷基、 吡咯啉基、 噁唑烷基、 异噁唑烷基、 噻唑烷基、 吡 唑烷基。

7.根据上述第 1-6任一项的高三尖衫酯碱衍生物或其药学上可 接受 的盐， 其中所述 C _r C ₇ 环烷基是环丙基、 环丁基、 环戊基或环己基。

8. 根据上述第 1-7任一项的高三尖杉酯碱衍生物或其药学上可 接受 的盐， 其中所述取代基选自 !¾素、 氨基、 d-C ₆ 烷基氨基、 硝基、 氰基、 羟基 d-Cs烷基、 d-C ₆ 烷氧基、 C _r C ₆ 烷基； 优选曱基、 乙基、 异丙基、 甲氧基、 乙氧基、 羟甲基、 羟乙基、 羟基、 硝基、 氰基、 氟或氣。

9. 根据上述第 1-8任一项的高三尖杉酯緘衍生物或其药学上可 接受 的盐，其中 1^和 R ₂ 独立地选自 H、 C ₃ - C ₇ 环烷基如环己基、杂芳基 -OC4 烷基如呋喃甲基或甲基呋喃曱基， 或者 1? 和 R ₂ 与它们所连接的氮原子 一起形成含氮杂环如吡咯垸基、哌啶基或二曱 氨基哌啶基或芳基-含氮杂 环如 4-苯基哌嗪小基或 4- ( 4-氟苯基） -哌嗪小基。 本发明的部分高三尖杉酯碱的胺化或酰胺化衍 生物如下所示。 这些 实施例举只对本发明做进一步说明， 并不对本发明的范围构成任何限 制。



BS-HH-046 BS-HH-050 BS-HH-051

BS-HH-054 BS-HH-055

上述化合物的部分数据列于下表:

BS-HH-014 C ₃₂ H ₄₄ N ₂ 0 ₈ S 616.8 白色 固体 44

BS-HH-018 C32H42N2O8 582.7 白色 固体 43

BS-HH-020 C34H49N3O9 643.8 白色 固体 34

BS-HH-021 C33H46N2O9 614.7 白色 固体 42

BS-HH-025 C33H46N2O9 614.7 白色 固体 39

BS-HH-028 C32H46N2O 602.7 浅黄色 粉末 11

BS-HH-034 C ₃₅ H ₅₁ N ₃ 0 ₈ 641.8 白色 固体 38

BS-HH-035 C ₃₄ H ₄₅ N ₃ 0 ₈ 623.7 白色 固体 41

BS-HH-037 C34H48N2O8 612.8 黄褐色 黏状物 27

BS-HH-038 C33H46N2O8 612.8 浅黄色 黏状物 38

BS-HH-041 C34H49N3O8 627.8 浅黄色 黏状物 33

BS-HH-042 C34H 8N2O8 612.8 浅黄色 黏状物 32

BS-HH-043 。33Η ₄₂ Ν ₂ θ9 610.7 白色 油状物 6

BS-HH-044 C37H ₄ 8N 0g 676.8 浅黄色 黏状物 37

BS-HH-046 C ₃₈ H _4S FN ₃ 0 ₈ 693.8 浅黄色 固体 42

BS-HH-050 C ₃₅ H ₅₁ N ₃ O _s 641.8 黄色 黏状物 29

BS-HH-051 C ₃₃ H ₄₆ N ₂ 0 ₈ 598.7 黄色 黏状物 34

BS-HH-054 C34H44N2O9 624.7 浅黄色 粉末 25

BS-HH-055 C33H42N O8S 626.8 浅黄色 油状物 9 在另一种实施方式中， 本发明特别优选如下的通式（I )化合物:

BS-HH-012 氧- 3-[(2R)-2,6-二羟基 -2- ( 2'-吡咯基 -2'-氧代乙基） -6-甲基庚酰基]粗榧碱.

BS-HH-042

氧 -3-[(2R)-2，6-二羟基 -2- ( 2'-环己烷胺基 -2'-氧代乙基） -6-曱基庚酰基] 粗榧 .

BS-HH-046

氧 -3-[(2R)-2,6-二羟基 -2- ( 2 '-(4- ( 4-氟苯基） 哌嗪基 )-2'-氧代乙基） -6- 甲基庚酰基]粗榧碱.

BS-HH-050

氧 -3- [(2R)-2，6-二羟基 -2- ( 2'-(4- N， N, -二甲基胺哌啶基) -2 '-氧代乙基） -6-曱基庚酰基]粗榧碱.

BS-HH-054

氧 -3-[(2R)-2,6-二羟基 -2- ( 2'- ( 5-甲基）呋喃 -2-甲胺基 -2'-氧代乙基） -6- 甲基庚酰基]粗榧碱. 本发明涉及以下形式的本发明的式 (I)化合物： 它们的盐、 溶剂化 物、 水合物、 加成物、 复合物、 多晶型物和前药。

如本文所使用， 术语"炕基"是指含有指定碳原子数的直链或支� �� 烷基， 例如 C _r C ₁₈ 烷基、 C _r C ₆ 烷基、 C _r C ₄ 烷基、 C _r C ₃ 烷基等。 烷基 的例子包括但不限于甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 叔丁基、 正戊基、 正己基和正十八烷基等。

术语"烯烃基 "是指含有指定碳原子数的直链或支链的含有� �少一 个碳-碳双键的烃基，例如 C ₂ -C _1S 烯烃基、 C ₂ -C _1Q 烯烃基、 c ₂ - c ₈ 烯烃基、 C ₂ -C ₇ 烯烃基、 C _r C ₆ 烯烃基、 C ₂ -C ₄ 烯烃基和 C ₂ -C ₃ 烯烃基。 烯烃基的 例子包括但不限于乙烯基、 烯丙基、 和十八碳烯基。

术语"炔烃基"是指含有指定碳原子数的直链或� ��链的含有至少 一个碳-碳三键的烃基， 例如（： ₂ -< ₁₈ 炔烃基、 Crd。炔烃基、 C ₂ -C ₈ 炔烃 基、 c ₂ -c ₇ 炔烃基、 c ₂ - c ₆ 炔烃基、 c ₂ -c ₄ 炔烃基和 c ₂ -c ₃ 炔烃基。 炔烃 基的例子包括但不限于乙炔基、 炔丙基、 和十八碳炔基

术语 "C _r C ₇ 环烷基或环玲烃基"是指饱和或不饱和的 3 -7元单环烃 基， 例如 C ₃ - C ₇ 环烷基可以为环丙基、 环丁基、 环戊基、 环己基、 环庾 基、 环丙烯基和环己烯基。

术语"芳基"是指含有 6-14 个碳原子的单碳环芳香基或稠合或非 稠合的多碳环芳香基， 在多碳环的情况下， 只要一个碳环是芳香的即 可。 芳基也包括与杂环基稠合的芳基。 所述芳基的例子有苯基、 联苯 基、 萘基、 5,6,7,8-四氢萘基、 2.3-二氢苯并呋喃基等。

术语"杂芳基，，是指在环中含有 1-4个杂原子 （例如 1、 2、 3或 4 个杂原子）作为环原子的芳香环基团。 杂原子是指氮、 氧或硫。 杂芳 基可以是具有 5-7个环原子的单环杂芳基， 或者具有 7-11个环原子的双 环杂芳基。 所述双环芳基中只要一个环是芳香杂环即可， 另一个可以是 芳香的或非芳香的、 含杂原子的或不含杂原子的。 杂芳基的例子有例如 吡咯基、 吡唑基、 咪唑基、 噁唑基、 吡啶基、 嘧啶基、 呋喃基、 噻吩基、 异噁唑基、 吲哚基等。

"杂环基" 含有 1-4个杂原子 （例如 1、 2、 3或 4个杂原子）作 为环原子的非芳香环基团。 杂原子是指氮、 氧或硫。 杂环基可以是具 有 4—8个环原子的单环杂环基，或者具有 7-11个环原子的双环杂环基。 杂环基可以是饱和的， 或者不饱和但非芳香的。 杂环基的例子有氮杂 环丁基、 吡咯烷基、 四氢呋喃基、 二氢呋喃基、 哌嗪基、 哌啶基、 四 氢吡喃基、 四氢噻吩基等。

术语"! ¾素 "是指氟、 氯、 溴或碘。

术语"烷基氨基"是指被一个或两个具有指定碳� ��子数的烷基 (包 括环烷基）取代的氨基。 术语"烷氧基"包括烷氧基和环烷基氧基。

术语 "烷硫基"烷硫基和环烷基硫基。

术语"式 (I)化合物的药学上可以接受的加合物和复合物 ，，是指本发 明的化合物进一步与其他小分子或生物大分子 以非化学键或者非共 价分子间力结合的产物。

如本文所使用， 术语"式 (I)化合物的药学上可以接受的盆"的例子是 由形成药学上可以接受的阴离子的有机酸形成 的有机酸盐； 这些有机酸 盐包括但不限于甲苯磺酸盐、 甲磺酸盐、 苹果酸盐、 醋酸盐、 柠檬酸盐、 丙二酸盐、 酒石酸盐、 琥珀酸盐、 苯甲酸盐、 抗坏血酸盐、 α-酮戊二酸 盐和 (X-甘油磷酸盐； 也可形成合适的无机盐； 这些无机酸盐包括但不限 于盐酸盐、 硫酸盐、 硝酸盐、 碳酸氢盐和碳酸盐、 磷酸盐、 氢溴酸盐、 氢碘酸盐等。

药学上可以接受的盐可使用本领域熟知的标准 程序获得。 例如， 通 过将足量的碱性化合物和提供药学上可以接受 的阴离子的合适的酸反 应生成。

如本文所使用， 术语"多晶型物 "是指本发明的化合物或其复合物 的固体晶体形式。 相同化合物的不同的多晶型物可以显示不同的 物 理、化学和 /或光谱性质。不同的物理性质包括但不限于� �定性（例如， 对热或光） 、 可压缩性和密度 （对于配制制剂和产品生产是重要的） 和溶解速率（其可以影响生物吸收度和利用度 ） 。 稳定性的不同会造 成化学反应性（例如差异氧化， 使得当由一种多晶型物构成时比由另 一多晶型物构成时剂型更快地褪色）或机械性 能（例如， 储存时作为 动力学有利的多晶型物的片剂碎末转化成热力 学更加稳定的多晶型 物）或两者（例如，一种多晶型物的片剂在高 潮湿度时更加容易破碎） 中的变化。 多晶型物的不同的物理性质可以影响它们的加 工。 例如， 一种多晶型物可能比另一种更可能形成溶剂化 物或可能比另一种更 加难以过滤或洗去杂质， 这是由于其颗粒的形状或大小分布不同的缘 故。

如本文所使用， 术语"水合物 "是指本发明的化合物或其盐， 其进 一步包含通过非共价分子间力结合的化学计量 的或非化学计量的水。 如本文所使用， 除非另外说明， 术语"前药"是指可以在生物学条 件（体外或体内） 下水解、 氧化或进行其他反应以提供本发明的化合 物的衍生物。 前药仅在生物学条件下经过谚反应成为活性化 合物， 或 者它们在它们不反应的形式中具有活性。通常 可以使用公知的方法制 备前药 ,例如 1 Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery (1995) 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff Editor, 5th Edition) and J, Rautio's Prodrugs and Targeted Delivery (2011) 31-60 (Wiley- VCH, Methods and Principles in Medicinal Chemistry, Vol. 47) and G. Thomas's Fundamentals of Medicinal Chemistry (2003) 195-200(Wiley)中描述的 那些方法。

本发明化合物中高三尖杉 ® ^威衍生物的四个手性中心具有式 （ I ) 结构式所显示的立体化学结构。 本文使用的立体化学的定义和约定一 殳遵循 MCGRAW-HILL DICTIONARY OF CHEMICAL TERMS (S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Book Company, New York, 1984); ELIEL, E.和 WILEN, S.， STEREOCHEMISTRY OF ORGANIC COMPOUNDS (John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994)。 许多有机化合物以光学活性形式存在， 即它们具有 旋转平面偏光的平面的能力。

本文使用的术语"治疗"一般是指获得需要的药� ��和 /或生理效应。 该效应根据完全或部分地预防疾病或其症状， 可以是预防性的； 和 / 或根据部分或完全稳定或治愈疾病和 /或由于疾病产生的副作用，可以 是治疗性的。本文使用的"治疗"涵盖了对患者� ��病的任何治疗， 包括：

(a)预防易感染疾病或症状但还没诊断出患病 的患者所发生的疾病或 症状； （b)抑制疾病的症状， 即阻止其发展； 或 (c)緩解疾病的症状， 即， 导致疾病或症状退化。 发明的式 (I)化合物的制备方法如下：

HHT HHT acid (I) 式 (I)的高三尖杉酯碱的胺化衍生物可由天然提取 分离的高三尖杉 酯碱（HHT )先经水解， 再和相应的有机胺缩合反应制取。 式 (I)中 和 R ₂ 与上文在式 (I)中的定义相同。

上述的水解反应一般在有碱或有碱性试剂存在 下进行。这里碱可以是 但不限于无机緘。 例如： 氢氧化钠、 氢氧化钾、 氢氧化锂。

上述的水解反应一般在溶剂中进行。 使用的溶剂包括但不限于极性 溶剂。 例如曱醇、 水、 或曱醇与水的混合溶剂等。

上述的水解反应的反应温度一般为 0 °C至 40 °C。 反应温度随所用 的碱或其浓度的不同而变化。

水解反应的原料是高三尖杉酯碱（HHT )。 该原料是由天然产物提取 分离而得到， 可以在市场上购买荻得。 胺化或酰胺化反应的有机胺全部 可以在市场上购买获得。

高三尖杉酯碱的水解产物， 酸中间体， 与相应的有机胺在有缩合剂 和碱的存在下， 缩合胺化而成式（I )的高三尖杉酯碱的胺化或酰胺化衍 生物。

胺化或酰胺化反应一般在有缩合剂存在下进行 。这里缩合剂可以是 但不限于有机缩合剂。 例如： 2-(7-偶氮苯并三氮唑) -Ν,Ν,Ν',Ν'-四甲基脲 六氣礫酸酯 （HATU ) , 苯并三氮唑 -Ν,Ν,Ν',Ν'-四甲基脲六氟硼酸盐 ( HBTU ) ， 苯并三氮唑- 1-基氧基三 (二曱基氨基)磷鑰六氟磷酸盐

( ΒΟΡ ) , 苯并三氮唑- Ν，Ν,Ν'，Ν'-四甲基脲六氟硼酸盐 （TBTU ) 。

胺化或酰胺化反应一般在有碱存在下进行。 这里碱可以是但不限于 有机碱。 例如： Ν,Ν-二异丙基乙基胺（DIPEA ) , 三乙基胺（TEA ) , 吡啶， 4-二甲胺基吡啶（DMAP ) 。

胺化或酰胺化反应一般在溶剂中进行， 也可在无溶剂存在下进行。 使用的溶剂包括但不限于有机极性溶剂。 例如： 二氯曱烷（DCM ) , 四 氢呋喃（THF ) , N, N-二曱基甲酰胺（DMF )， 二甲亚砜（DMSO ) 等。

胺化或酰胺化反应的一般操作可以是但不局限 于： 向二氯甲烷溶剂 中， 投入合适比例的反应物原料，碱和缩合剂。 在常温下搅拌 24小时， 然后用有机溶剂萃取生成的产物， 经水洗和饱和食盐水洗、干燥、 浓缩， 得到粗品。 再用高效液相色 仪纯化， 得到产物纯品.

常规的化学转换可用于实施本发明。 本领域的技术人员可以决定 用于这些化学转换的适当的化学试剂、 溶剂、 保护基和反应条件。 相 关信息描述于 R. Larock, Comprehensive Organic Transformations■> VCH Publishers (1989); T. W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed. , John Wiley and Sons (1999)； L. Fieser and M. Fieser , Fieser and Fieser 's Reagents for Organic Synthesis , John Wiley and Sons (1994)； L. A. Paquette editor, Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis-, John Wiley and Sons (1995)及其后来的版本。 保护基指那些一旦连接活性部分 (例如， 羟基或氨基)， 防止这些 部分被后来的反应干扰并可在反应后通过常规 的方法去除的基团。 羟 基保护基的例子包括但不限于，垸基、苯甲基 、烯丙基、三苯甲基 (即， 三苯基甲基）、 酰基 (例如， 苯曱酰基、 乙酰基或 HOOC- X"-CO-， X" 为亚烷基、 亚链烯基、 亚环烷基或亚芳基)、 甲硅烷基 (例如， 三甲基 硅烷基、 三乙基硅烷基和叔丁基二甲基硅烷基）、 烷氧基羰基、 氨基 羰基 (例如， 二曱基氨基羰基、 甲基乙氨基羰基和苯基氨基羰基)、 烷 氧曱基、苯甲氧曱基和烷基巯甲基。氨基保护 基的例子包括但不限于， 烷氧基羰基、 烷酰基、 芳氧基羰基、 芳基取代的烷基等。 羟基和氨基 保护基已在 T.W. Greene and P.G. M. Wuts , Protective Groups in Organic Synthesis , 2nd Edition, John Wiley and Sons (1991)中讨论。 羟基和氨基保护基都可在反应后通过常规的方 法去除。

本发明还提供了包含本发明式 I化合物的药物组合物。

本发明提供了这样的药物组合物， 其中包含至少一种如上所述的 本发明的式 I化合物， 和任选的药学上可以接受的赋形剂。 制备各种含有一定量的活性成分的药物组合物 的方法是已知的， 或根据本发明的公开内容对于本领域技术人员 是显而易见的。 如

REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, Martin, E.W., ed" Mack Publishing Company, 19th ed. (1995)所述。制备所述药物组合物的方法 包括摻入适当的药学赋形剂、 载体、 稀释剂等。

以已知的方法制造本发明的药物制剂， 包括常规的混合、 溶解或 冻干方法。

本发明的化合物可以制成药物组合物， 并向患者以适于选定的施用 方式的各种途径施用， 例如口服或肠胃外 （通过静脉内、 肌内、 局部或 皮下途径） 。

因此， 本发明的化合物结合药学上可以接受的载体（ 如惰性稀释剂 或可食用的载体）可以全身施用， 例如， 口服。 它们可以封闭在硬或软 壳的明胶胶嚢中， 可以压为片剂。 对于口服治疗施用， 活性化合物可以 结合一种或多种赋形剂， 并以可吞咽的片剂、 颊含片剂、 含片、胶嚢剂、 酏剂、 悬浮剂、 糖浆、 圓片等的形式使用。 这种组合物和制剂应该包含 至少 0.1%的活性化合物。这种组合物和制剂的比例� �然可以变化， 可以 占给定的单位剂型重量的大约 1%至大约 99%。 在这种治疗有用的组合 物中， 活性化合物的量使得能够获得有效剂量水平。

片剂、 含片、 丸剂、 胶嚢剂等也可以包含： 粘合剂， 如黄蓍胶、 阿 拉伯胶、 玉米淀粉或明胶； 赋形剂， 如礫酸氢二钙； 崩解剂， 如玉米淀 粉、 马铃薯淀粉、 藻酸等； 润滑剂， 如硬脂酸镁； 和甜味剂， 如蔗糖、 果糖、 乳糖或阿司帕坦； 或调味剂， 如薄荷、 冬青油或樱桃香味。 当单 位剂型是胶嚢时， 除了上面类型的材料， 它还可以包含液体载体， 如植 物油或聚乙二醇。 各种其他材料可以存在， 作为包衣， 或以其他方式改 变固体单位剂型的物理形式。 例如， 片剂、 丸剂或胶嚢剂可以用明胶、 蜡、 虫胶或糖等包衣。 糖浆或酏剂可以包含活性化合物， 蔗糖或果糖作 为甜味剂， 对羟苯曱酸曱酯或对羟苯曱酸丙酯作为防腐剂 ， 染料和调味 剂 （如樱桃香料或桔子香料） 。 当然， 用于制备任何单位剂型的任何材 料应该是药学上可以接受的且以应用的量基本 上无毒。 此外， 活性化合 物可以掺入緩锋制剂和緩释装置中。

活性化合物也可以通过输注或注射到静脉内或 腹膜内施用。 可以制 备活性化合物或其盐的水溶液， 任选的可混和的无毒的表面活性剂。 也 可以制备在甘油、 液体聚乙二醇、 甘油三乙酸酯及其混合物以及油中的 分散剂。 在普通的储存和使用条件下， 这些制剂包含防腐剂以防止微生 物生长。

适于注射或输注的药物剂型可以包括包含适于 无菌的可注射或可 输注的溶液或分散剂的即时制剂的活性成分（ 任选封装在脂质体中） 的 无菌水溶液或分散剂或无菌粉末。 在所有情况下， 最终的剂型在生产和 储存条件下必须是无菌的、 液体的和稳定的。 液体载体可以是溶剂或液 体分散介质， 包括， 例如水、 乙醇、 多元醇（例如， 甘油、 丙二醇、 液 体聚乙二醇等） 、 植物油、 无毒的甘油酯及其合适的混合物。 可以维持 合适的流动性， 例如， 通过脂质体的形成， 通过在分散剂的情况下维持 所需的粒子大小， 或通过表面活性剂的使用。 可以通过各种抗细菌剂和 抗真菌剂 （如对羟苯甲酸酯、 氯丁醇、 苯酚、 山梨酸、 硫柳汞等）产生 预防微生物的作用。 在许多情况下， 优选包括等渗剂， 如糖、 緩冲剂或 氯化钠。 通过使用延緩吸收剂的组合物 （例如， 单硬脂酸铝和明胶）可 以产生可注射的组合物的延长吸收。

通过将合适的溶剂中的需要量的活性化合物与 需要的上面列举的 各种其他成分结合， 然后进行过滤灭菌， 制备无菌可注射溶液。 在用于 制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下， 优选的制备方法是真空干燥和 冷冻干燥技术， 这会产生活性成分加上任何另外需要的以前无 菌过滤溶 液中存在的成分的粉末。

有用的固体载体包括粉碎的固体（如滑石、 粘土、 微晶纤维素、 二 氧化硅、 氧化铝等）。 有用的液体载体包括水、 乙醇或乙二醇或水 -乙醇 /乙二醇混合物，本发明的化合物可以任选在� �毒的表面活性剂的帮助下 以有效含量溶解或分散在其中。 可以加入佐剂 （如香味）和另外的抗微 生物剂来优化对于给定用途的性质。 增稠剂 （如合成的聚合物、 脂肪酸、 脂肪酸盐和酯、 脂肪醇、 改性 纤维素或改性无机材料）也可和液体载体用于 形成可涂覆的糊剂、凝胶、 软膏、 肥皂等， 直接用于使用者的皮肤上。

化合物或其活性盐或衍生物的治疗需要量， 不仅取决于选择的特定 的盐， 而且取决于施药方式、待治疗的疾病的本盾和 患者的年龄和状态， 最终取决于在场医师或临床医生的决定。

上述制剂可以以单位剂型存在， 该单位剂型是含有单位剂量的物 理分散单元， 适于向人体和其它哺乳动物体给药。 单位剂型可以是胶 嚢或片剂， 或是很多胶嚢或片剂。 根据所涉及的具体治疗， 活性成分 的单位剂量的量可以在大约 0.1到大约 1000亳克或更多之间进行变化 或调整。 物、 特别是抗肿瘤药物中的用途。 相应地， 本发明提供一种治疗肿瘤 患者的方法， 包括给予需要治疗的患者治疗有效量的至少一 种本发明 的化合物。 本发明的单酰化和双酰化的高三尖杉酯碱衍生 物或其药学 上可接受的盐例如可用于治疗白血病、多发性 骨髓瘤、淋巴瘤、肝癌、 胃癌、 乳腺癌、 胆管细胞癌、 胰腺癌、 肺癌、 大肠癌、 骨肉瘤、 黑色 素瘤、 人宫颈癌、 神经胶质瘤、 鼻咽癌、 喉癌、 食管癌、 中耳肿瘤、 前列腺癌等肿瘤。

在下列实施例中， 将更加具体地解释本发明。 但应理解， 下列实 施例旨在说明本发明而不对本发明的范围构成 任何限制。

以下

的合成方法获得， 胺化反应的通式与方法:

将高三尖杉酯碱 11111 ¹ (2.5 ^ 4.58 11111101)溶于甲醇（18 1111 ,加入 1 M 碱溶液 (4.6 mL), 碱可以是氢氧化钠， 也可以是氢氧化锂， 常温搅拌 7 小时， 用 1 N 酸溶液调节反应液的 pH至 5-7， 酸可以是盐酸也可以是 其他无机酸， 浓缩除去有机溶剂， 剩下的水溶液用甲苯处理若干次， 浓 缩干燥得到白色固体高三尖杉酯碱酸（2.5 g ) ,纯度为 88%。另外 5% 的 原料可回收。 回收后可进行二次水解。

将高三尖杉酯碱酸 XOl-l(l.O eq)和胺 (1.0-1.5 eq)溶于无水 N, N-二甲 基甲酰胺 (20- 50 eq), 加入 N, N-二异丙基乙胺 (2.0 eq)和 2- (7-偶氮苯并 三氮唑) N, Ν', Ν'-四曱基脲六氣碑酸酯 (1.5 eq), 常温搅拌 2小时后， 往反应液中加入水， 再用乙酸乙酯萃取， 有机相用饱和食盐水洗涤， 干 燥， 浓缩， 粗品用高效液相色谱法纯化， 得到 2，-氨化高三尖杉酯碱。 实施例 1: 化合物 BS-HH-043的合成

HHT X01-1 BS-HH-043 式中， XOl-1 : 高三尖杉酯碱酸； Zi: 呋喃 -2-乙基胺； HATU: 2-(7-偶氮 苯并三氮唑) -Ν, Ν, Ν', Ν'-四甲基脲六氟嶙酸酯； DIPEA: Ν, Ν-二异丙基 乙胺。

按上面所述的通用方法将高三尖杉酯碱进行水 解。 而后，再将高三尖 杉酯碱水解得到的中间体酸 Χ01-1 (106 mg, 0.2 mmol)和 2-胺曱基呋喃 (24 mg, 0.24 mmol)溶于无水 N, N-二甲基曱酰胺 (2 mL), 加入 N, N-二异 丙基乙胺 (52 mg, 0.4 mmol)和 2-(7-偶氮苯并三氮唑) -N, N, Ν', Ν'-四甲基 脲六氣碑酸酯（114 mg, 0.3 mmol),在 30。C条件下搅拌 3小时，在 5-10。C 条件下加入水 (6 mL), 用乙酸乙酯萃取， 用饱和食盐水洗涤有机相， 干 燥， 浓缩， 粗品用硅胶柱分离 （二氯甲烷 ： 甲醇 =10:1 ) 纯化得到无色 油状物产品 BS-HH-043 (9 mg, 6%) ₀

LC-MS: 保留时间： 1.18 min (60.6%), m/z: 611.4 [M+H] ⁺ .

lR NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 7.34 (s, IH), 6.67 (s， IH), 6.58 (s, IH), 6.31 (d, IH), 6.20 (d, IH), 5.94-5.87 (m， 3H), 4.34 (m, 2H), 3.81 (s, IH), 3.71 (s, 3H)， 2.02 (m, 3H), 1.17 (s, 6H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01- 1与 2-胺基噻唑反应得到 BS- HH-008: LC-MS: 保留时间： 1.09 min (90.35%), m/z: 614.5 [M+H] ⁺ . 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01- 1与 1-甲基哌嗪反应得到 BS-HH- 009: LC-MS: 保留时间： 1.08 min (94.6%), m/z: 308.2 [1/2M+H] ⁺ .

lH NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.60 (s, IH), 6.59 (s, IH), 5.95 (m， 2H), 5.80-5.8 (s, IH), 5.02 (s, 1H)， 4.49 (s, IH), 3.78 (d， =12,0Hz， IH), 3.68 (s, 3H), 3.13-3.39 (m, 4H), 2.95 (m, IH), 2.39 (m， 2H)， 2.28 (s, 3H), 2.26-2.16 (m， 4H), 1.69 (m, 6H), 1.18 (d， 6H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01- 1与吗啉反应得到 BS-HH-011 : LC- MS: 保留时 间： 1.05 min (90.03%), m/z: 601.3 [M+H] ⁺ .

】H NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.60 (d, 2H), 5.97 (m, 2H)， 5.81 (s， IH), 5.02 (s, IH), 4.31 (s, IH), 3.79 (d, IH), 3.68 (s, 3H)， 3.57 (m, 2H), 2.59(m, 2H), 2.38 (m, IH), 2.00 (s, 3H), 1.05 (s， 6H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与吡咯烷反应得到 BS-HH-012: LC-MS: 保留 时间： U4 min (95.15%), m/z: 585.4 [M+H] ⁺ .

^J H N R (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.60 (d, 2H), 5.89 (m, 2H), 5.79 (s, IH), 5.01 (s, 1H)， 4.76 (s, IH), 3.78 (d, IH), 3.68 (s, 3H), 3.36 (m, 2H), 3.27-3.01 (m, 4H)， 2.59(m, 2H), 2.38 (m, IH), 1.18 (s, 6H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与硫代吗淋反应得到 BS- HH-014: LC-MS: 保 留时间： 1.17 min (100%), m/z: 617.4 [M+H] ⁺ .

² H NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.58 (d, 2H), 6.00 (m， 2H), 5.80(s, IH), 5.02 (s, IH), 4.32 (s， IH), 3.75 (d, =9 Hz, IH), 3.68 (s， 3H), 3.48 (m, 2H), 2.95 (m, IH), 2.37 (m, IH), 2.23 (d， IH), 1.19 (s, 6H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与 2,5-二氢吡咯反应得到 BS-HH-018: LC-MS: 保留时间： 1.08 min (100%), m/z: 583.3 [M+H] ⁺ .

^! H NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.60 (s, IH), 6.58 (s, IH), 6.02 (d, J=9 Hz, 1H)， 5.85 (m, 2H), 5.78 (m， 2H), 5.01 (s, IH), 4.37 (s， IH), 3.78 (d, IH), 3.67 (s, 3H), 2.56 (m, 2H), 2.38 (m, IH), 2.24 (d， 1H)， 2.00 (s, 3H) ₅ 1.19 (s, 6H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与 2- (哌嗪- 1-基） 乙醇反应得到 BS-HH-020: LC-MS: 保留时间： 0.91 min (96.62%), m/z: 644.5 [M+H] ⁺ .

^! H NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.59 (d, 2H)， 5.93 (m， 2H), 5.80 (s， IH), 5.02 (s, IH), 4.43 (s, IH), 3.79 (d, IH), 3.68 (s, 3H)， 3.61 (m， 2H), 2.95 (m, IH), 2.61-2.54 (m, 5H), 2.00 (m, 4H), 1.32 (m, 6H), 1.18 (s, 6H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与 4-羟基哌啶反应得到 BS-HH- 021 : LC-MS: 保留时间： 1.02 min (98.13%), m/z: 615.4 [M + H] ⁺ .

^! H NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.60 (s, IH), 6.58 (s, IH), 5.99-5.90 (m, 2H), 5.80 (s， IH), 5.01 (s, 1H)， 4,54 (d, IH), 3.78 (d， IH), 3.68 (s, 3H), 2.61 (m， 2H), 2.39 (m, IH), 2.26 (m, 2H), 1.18 (s, 6H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与 3-羟基哌啶反应得到 BS- HH-025: LC-MS: 保留时间： 1.04 min (97.26%), m/z: 615.3 [M + H] ⁺ .

^! H丽 R (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.61 (d, 2H), 5.90 (m, 2H)， 5.81 (s, 1H)， 5.02 (s， 1H), 4.60 (s, 1H), 3.76 (d， 1H), 3.68 (s， 3H), 2.63-2.56 (m, 2H), 2.36 (m, 1H), 1.18 (s, 6H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与 3-甲氧基丙胺反应得到 BS-HH- 028: LC-MS: 保留时间： 1,06 min (69.32%), m/z: 603.8 [M + H] ⁺ . 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与 1-异丙基哌嗪反应得到 BS-HH-034: LC- MS: 保留时间： 0.95 min (98.32%), m/z: 642.4 [M + H] +.

lB NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.58 (d, 2H) ₅ 5.95 (m, 2H), 5.82 (d， 1H),

5.01 (s, 1H)， 4.56 (s, lH), 3.79 (d, 1H), 3.68 (s, 3H), 2.72 (m, 1H)， 2.55 (m, 4H), 2.36 (m, 3H), 2.25 (s， 2H), 2.00 (s, 3H), 1.31 (m, 6H), 1,18 (s, 6H), 1.01 (d, 6H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与 4-氰基哌啶反应得到 BS-HH-035: LC-MS: 保留时间： 1.11 min (99.31%), m/z: 624.3 [M + H] ⁺ .

】H NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.61 (d, 2H), 5.9 (m, 2H)， 5.79 (d, 1H),

5.01 (s, 1H)， 4.30 (d, 1H), 3.67 (s, 3H), 3.35 (m， 2H), 2.59 (m, 2H), 2.38 (m, 1H), 2.24 (m， 1H), 2.16 (d, 1H), 1.66-1.87 (m, 4H), 1.19 (s, 6H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与 2-曱基哌 ^p ^应得到 BS- HH-037: LC-MS: 保留时间： 1.59 min (98.91。/ο), πι/2: 613.6 [Μ+Η] ⁺ .

]H NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.60 (d, 2H), 5.88 (m, 2H)， 5.82 (s, 1H),

5.02 (s, 1H),4.41 (d, 1H), 3.80 (d, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.59 (m, 2H), 2.38 (m, 1H), L18 (s, 6H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01- 1与 3-甲基哌啶反应得到 BS-HH- 038: LC-MS: 保留时间: 1.57 min (98.69%), m/z: 613.6 [M + H] ⁺ . Ή NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.59 (d, 2H), 5.97-5.88 (m, 2H), 5.81 (m, IH), 5.02 (d， IH), 4.64 (m, IH), 3.80 (m, IH), 3.69 (s,3H), 2.59 (m, 2H), 2.28 (m, 2H), 1.18 (d, 6H), 0.92-0.84 (m，3 H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与 1-乙基哌嗪反应得到 BS-HH- 041: LC-MS: 保留时间: 1.08 min (100%), m/z: 628.6 [M+H] ⁺ .

^! H NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.58 (d, 2H), 5.94 (m, 2H), 5.80 (s, IH), 5.01 (s, 1H)， 3.77 (d, IH), 3.68 (s, 3H), 3.35-3.05 (m, 4H), 1.75 (m, 4H)， 1.18 (s, 6H), 1.07 (t，3H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与 2-胺曱基呋喃反应得到 BS-HH-042: LC- MS: 保留时间： 1.57 min (85.35%), m/z: 613.6 [M + H] ⁺ .

!H NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.66 (d, 2H)， 5.97-5.88 (m, 3H), 4.91 (s，

IH), 4.74 (d, IH), 3.78 (s, 3H), 3.48 (m, 2H), 3.19 (m, 2H), 2.90 (m, 2H)， 1.88 (m, 4H), 1.20-1.17 (m, 10H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与 1- (吡啶 -2-基)哌嗪反应得到 BS-HH-044: LC-MS: 保留时间： 1.17 min (100%), m/z: 677.6 [M+H] ⁺ . ^l R NMR (300 MHz, CDCI3): δ 8.20 (dd， J=4.8 Hz, 1.2 Hz, IH), 7.50 (m, IH), 6.68-6.63 (m _: 2H), 6.60 (d, 2H), 5.96 (d, IH), 5.81 (s， IH), 5.74 (s， 1H)， 5.02 (s, IH), 4.39 (s, IH), 3.83-3.73 (m, 3H), 3.68 (s, 3H), 3.45-3.30 (m, 5H)， 2.63-2.56 (m, 2H), U9 (s, 6H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01- 1与 1 -(4-氟苯基)哌嗪反应得到 BS-HH-046:

LC-MS: 保留时间： 1.61 min (89.27%), m/z: 694.6 [M + H] ⁺ .

JH NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.98 (m， 2H), 6.85 (m， 2H)， 6.61 (d, 2H),

5.98 (d, IH), 5.88 (d, IH), 5.78 (d, IH), 5.02 (s， IH), 4.36 (s, 1H)， 3.79 (d， IH), 3.68 (s, 3H), 3.44 (m， 3H)， 3.12 (m， 4H), 2.93 (m, 2H), 2.59 (s, 1H)， 1.19 (s, 6H). 按照实例 1的搡作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与 4-(N,N-曱基胺基)哌啶反应得到 BS- HH- 050: LC-MS: 保留时间： 1.10 min (90.31%), m/z: 642.6 [M+H]+. Ή NM (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.59 (d， 2H), 5.98-5.86 (m, 2H), 5.80 (m, IH), 5.02 (m, IH), 3.80 (m, IH), 3.69 (s, 3H), 3.57 (s, IH), 2.59 (m, 3H), 2.28 (d， 6H), 1.71 (m, 8H), 1.19 (s, 6H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与哌啶反应得到 BS-HH-051 : LC-MS:保留时 间： 1.48 min (98.45%), m/z: 599.5 [M + H] +.

^J H NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.59 (d, 2H), 5.95-5.81 (m, 3H), 5.01 (s, IH), 4.72 (s, 1H)， 3.78 (d, IH), 3.68 (s， 3H), 3.25-2.90 (m, 6H), 2.59 (m, 2H) 2.40 (m, IH), 2.26 (s, IH), 1.69 (m, 6H), 1.18 (s, 6H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖杉酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与 5-曱基- 2-胺曱基呋喃反应得到 BS-HH-054: LC-MS: 保留时间： 1.23 min (63.39%), m/z: 625.8 [Μ+Η]+·

¾ NMR (300 MHz, CDC1 ₃ ): δ 6.73 (s, 1H)， 6.62 (s, 1H)， 6.06-5.89 (m,

4H), 4.30 (s， 1H)， 3.78 (s， 3H), 2.26 (s, 3H)， 1.33 (s, 6H). 按照实例 1的操作方法， 使用相同的偶合试剂， 将高三尖衫酯碱水 解得到的中间体酸 X01-1与 2-胺甲基噻吩反应得到 BS-HH-055: LC-MS: 保留时间： 1.21 min (83.64%), m/z: 627.8 [M + H] ⁺ . 实施例 2: 本发明的高三尖杉酯碱胺化衍生物抗白血病的 活性测定

(1) 实验材料：

白血病细胞株： K562/adr (耐药慢性髓系白血病， CML)、 NB4 (急性 早幼粒细胞白血病， AML)、 Kasumi-1 (急性髓系白血病 M2型，

AML-M2) Jurkat (急性淋巴细胞白血病， ALL), 以上细胞系均受赠于 浙江大学肿瘤研究所； H9 (急性淋巴细胞白血病， ALL)， 购自中国典型 培养物保藏中心。

试剂： 高三尖杉酯碱 ( HHT )标准品购自泰华天然生物制药有限公 司 （陕西） ， 本发明高三尖杉酯碱胺化衍生物。

主要仪器： Thermo Scientific 3111细胞培养箱 , Bio-Rad iMark酶标 仪

(2) 实-险方法

取生长良好的白血病细胞 6000个， 接种到 96孔细胞培养板孔内。 培养液为含 10%胎牛血清的 1640细胞培养液。 加入不同浓度的高三尖 杉酯碱胺化衍生物， 混勾后， 置于二氧化碳（5%C0 ₂ )细胞培养箱 37。C 培养 7 ² 小时。 然后用 MTT法测定活细胞浓度。 在本实险中对照组（不 加化合物处理） 细胞活力设为 100%, 并计算出化合物作用后细胞活力 ( % )和 72小时白血病细胞半数生长抑制浓度 (72小时 IC _5Q 值)。

(3) 实验结果

实验结果见表 1。 表 1显示本发明的高三尖杉酯碱胺化衍生物能诱 导人慢性髓系白血病、 急性髓系白血病和急性淋巴细胞白血病细胞死 亡 和抑制这些白血病细胞生长， 其中本发明高三尖杉酯碱胺化衍生物 BS-HH- 012、 BS-HH-042, BS-HH-050和 BS-HH-054显示了较强的抗 K562/adr (耐药慢性髓系白血病， CML)、 NB4 (急性早幼粒细胞白血病， AML)、 Kasumi-1 (急性髓系白血病 M2型， AML-M2)和 H9 (急性淋巴细 包白血病， ALL) 活性.

表 1：高三尖杉酯碱胺化衍生物对白血病细胞生� �抑制浓度测定（ 72 小时， IC ₅₀ ( g/mL )值和 IC ₉₀ ( \ glmL )值）

K562/adr Kasumi-1 NB4

化合物 IC ₅₀ IC90 IC50 IC 0 ic ₅₀ IC90

HHT 0.035 0.98 0.005 0.024 0.006 0.012

BS-HH-008 >16 >16 5 >16 5.62 12.83

BS-HH-009 >16 >16 8.54 >16 2.97 11.2

BS-HH-011 >16 >16 8.28 >16 3.22 9.54

BS-HH-012 0.65 9.87 0.038 0.14 0.08 0.23

BS-HH-014 >16 >16 1.33 8.61 1.29 3.7

BS-HH-018 7.77 >16 0.47 2.32 0.38 1

BS-HH-020 >16 >16 >16 >16 7.46 15.79

BS-HH-021 >16 >16 14.58 >16 8 16

BS-HH-025 >16 >16 >16 >16 8.31 >16

BS-HH-028 >16 >16 2.75 13 2.59 7.52

BS-HH-034 4.53 16 0.31 1.77 0.48 2.3

BS-HH-035 14.1 >16 0.8 2.96 0.72 6.3

BS-HH-037 >16 >16 1.58 16 0.7 5.08

BS-HH-050 0.12 16 0.13 0.35

BS-HH-051 1.3 >16 7.26 >16

BS-HH-054 0.11 16 0.17 0.43

BS-HH-055 1.58 8 4 10.64

实施例 3:本发明高三尖杉酯碱胺化衍生物抗人多发性� ��髓瘤和淋巴 瘤细胞活性测定

(1) 实验材料

骨髓瘤和淋巴瘤细胞株： RPMI8226(多发性骨髓瘤)，购自上海复祥 生物科技有限公司。

试剂： 同实施例 2

主要仪器： Thermo Scientific 3111细胞培养箱， Bio-Rad iMark酶标 仪。

(2) 实验方法

取生长良好的上述肿瘤细胞 6000个，接种到 96孔细胞培养板孔内。 培养液为含 10%胎牛血清的 1640细胞培养液。 加入不同浓度的高三尖 杉酯碱类化合物， 混匀后, 置于二氧化碳（5%C0 ₂ ) 细胞培养箱 37 °C 培养 72小时。 然后用 MTT法测定活细胞浓度。 在本实验中对照组（不 加化合物处理） 细胞活力设为 100%, 并计算出化合物作用后细胞活力 ( % )和 72小时白血病细胞半数生长抑制浓度 (72小时 IC ₅₀ 值)。

(3) 实验结果

实验结果见表 2。 表 2显示本发明的高三尖杉酯碱胺化衍生物能诱 导人骨髓瘤和淋巴瘤细胞死亡和抑制这些肿瘤 细胞生长， 其中本发明的 高三尖杉酯碱胺化衍生物 BS-HH-012, BS-HH-042, BS-HH-054显示了 较强的抗 RPMI8226(多发性骨髓瘤)效果。 实施例 4: 本发明高三尖杉酯碱的胺化衍生物抗人实体瘤 作用测定

(1) 实验材料

人实体瘤细胞抹： Hep- 2(人肝细胞肝癌， HCC)、 A549(人肺癌）、 CaES-17(食道癌细胞)、 PC-3(前列腺癌）、 CNE (鼻咽癌细胞)、 SK-OV-3(卵 巢癌细胞)均购自中国典型培养物保藏中心； R O(人结肠腺癌细胞)、 MGC 803(人胃癌细胞)、 MG6 ³ (骨肉瘤）、 MG (恶性脑胶质瘤细胞） 均购自上海复祥生物科技有限公司； PANC-1(胰腺癌）、 Huh7(人肝癌细 胞)、 Becap37(人乳腺癌细胞)、 Hela (人宫颈癌细胞） 均受赠于浙江大学 肿瘤研究所。

试剂： 同实施例 2

主要仪器： Thermo Scientific 3111细胞培养箱， Bio- Rad iMark酶标 仪。

(2) 实验方法

取生长良好的人实体瘤细胞 4000个，接种到 96孔细胞培养板孔内。 培养液为含 10%胎牛血清的 DMEM高糖细胞培养液。置于二氧化碳（ 5% C0 ₂ ) 细胞培养箱 37。C培养 24小时， 然后， 加入不同浓度的高三尖杉 酯碱类化合物， 混匀后， 继续置二氧化碳（5%C0 ₂ ) 细胞培养箱 37 °C 培养 72小时。 然后用 MTT法测定活细胞浓度， 并计算出药物作用后细 胞活力（％ )。在本实验中对照组（不加化合物处理）细� �活力设为 100%。

(3) 实验结果见表 ² 。

表 2显示本发明的高三尖杉酯碱的胺化衍生物能� �导人实体瘤细胞 死亡和抑制这些肿瘤细胞生长， 其中本发明的高三尖杉酯誠的胺化衍生 物 BS-HH-012, BS-HH-042, BS-HH-046, BS-HH-050和 BS-HH-054,显示 了较强的抗人实体瘤 A549(人肺癌）， PANC-1(胰腺癌）， Becap37(人乳腺 癌细胞） ， MG63(骨肉瘤）， 抗 Huh7(人肝癌细胞） ， RKO(人结肠腺癌细 胞)， Hela (人宫颈癌细胞)， CaES- (食道癌细胞)， CNE (鼻咽癌细胞)， Hep-2(喉癌）， PC-3(前列腺癌）， 和 SK-OV-3(卵巢癌细胞)的效果。 表 2： 高三尖杉酯碱胺化衍生物对淋巴瘤和多发性骨 髓瘤和人实体 瘤细胞生长抑制浓度测定（72小时， IC ₅ Q ( g/mL )值和 IC ₉₍₎ ( g/mL ) 值） 。