本发明涉及碳青霉烯衍生物 (4R,5S，6S)-3-[(3S,5S)-5- [(呋喃 -2-基曱 基）胺曱酰基] -3-吡咯烷]硫 -6-[(R)-l -羟乙基] -4-曱基 -7-氧 -1-氮杂双环 [3.2.0]庚 -2-烯 -2-羧酸的无定形粉末、 溶剂合物和多晶型物以及其制备 方法， 含有该无定形粉末、 溶剂合物和 /或多晶型物的药物组合物以及 其应用。 背景技术

碳青霉烯类抗生素是七十年代发展起来的一类 β-内酰胺类抗生素。因 其抗菌谱广， 抗菌活性强， 并对 β-内酰胺酶稳定而受到关注。

由于抗生素的滥用， 临床耐药菌越来越多， 开发对各种常见的医院临 床感染病原菌具有高抗菌活性和长半衰期的新 碳青霉烯类抗生素成为抗 生素的研究热点。

WO 2009/000210 A 1公开了一类对 β-内酰胺酶和 DHP-I具有高度稳 定性、 可用于产 β -内酰胺酶菌株的碳青霉烯类衍生物， 其抗菌谱广， 对 革兰氏阳性和阴性、需氧和厌氧菌以及医院临 床病原菌均有较好的抗菌活 性， 并具有较长的半衰期， 抗菌作用持久。 该 PCT申请的实施例 1描述 了 (4R,5S,6S)-3-[(3S,5S)-5-[(呋喃 -2-基曱基）胺甲酰基] -3-吡咯烷 ]硫 -6-[(R)-l -羟乙基] -4-曱基 -7-氧小氮杂双环 [3.2.0]庚 -2-烯 -2-羧酸（即化合 物 A )的制备。 实验证明， 该化合物对革兰阳性、 革兰阴性需氧和厌氧 菌有很强的抗菌活性。 此申请全文经此引用被并入本文。

晶型对化合物的理化性质有一定的影响。 不同晶型的同一药用化 合物在溶解度、 熔点、 密度、 硬度、 稳定性、 吸湿性、 外观等方面可 能会有显著差异， 从而会影响药物的稳定性等。

发明内容

本发明提供下式 （ 1 ) 所示化合物

即 (4R,5S,6S)-3-[(3S,5S)-5-[(呋喃 -2-基曱基）胺曱酰基 ]-3-吡咯烷 ]硫 -6-[(R)-l -羟乙基] -4-曱基 -7-氧 -1 -氮杂双环 [3.2.0]庚 -2-烯 -2-羧酸的无定 形粉末、 溶剂合物和多晶型物： 晶型 II、 晶型 III、 晶型 IV以及晶型 V， 它们的制备方法， 包含该无定形粉末和 /或多晶型物的药物组合物及其 在制备用于治疗和 /或预防感染性疾病的药物以及治疗和 /或预防感染

-I·生疾病方面的应用。 本发明的一方面， 提供下式（1)所示化合物：

为无定形粉末形式。

本发明的另一个方面， 提供以下实施方案:

1. 晶体形式的下式（1)化合物—

该晶体形式被命名为 II型结晶， 即晶型 II , 其特征在于使用 Cu-Ka辐 射、以 2Θ角度表示的 X-射线粉末衍射图在 6.5士 0.2、 1 1.0±0.2、 16.8土 0.2、 23.0士 0.2处具有特征峰。

2. 如实施方案 1所述的晶型 II , 其特征在于使用 Cu-Ka辐射、 以 2Θ角度表示的 X-射线粉末衍射图还在 15.1士 0.2、 15.7士 0.2处具有特征 峰。

3. 如实施方案 2所述的晶型 II， 其特征在于使用 Cu-Ka辐射、 以 2Θ角度表示的 X-射线粉末衍射图还在 13.3士0，2、 21.1±0.2、 22.1±0.2、 24.6±0.2处有特征峰。

4. 如实施方案 1 - 3之任一项所述的晶型 II，其特征在于具有基本 上如图 1所示的 X-射线粉末衍射图。

5. 如实施方案 1 - 4之任一项所述的晶型 II, 其特征在于其 DSC 曲线中最大分解温度在 165-185 °C或如图 2中所示。

本发明的另一方面， 提供下列实施方案：

6. 晶体形式的下式（1)化合物

该晶体形式被命名为 III型结晶， 即晶型 III, 其特征在于使用 Cu-Ka 辐射、 以 2Θ 角度表示的 X-射线粉末衍射图在 5.3±0.2、 10.7±0·2、 15.7±0.2、 21.3士 0.2处有特征峰。

7. 如实施方案 6所述的晶型 III， 其特征在于使用 Cu-Ka辐射、 以

2Θ角度表示的 X-射线粉末衍射图还在 23.1±0.2、 27.3±0.2处有特征峰。

8. 如实施方案 7所述的晶型 III, 其特征在于使用 Cu-Ka辐射、 以 2Θ角度表示的 X-射线粉末衍射图还在 20.7±0.2、 23.5±0.2、 27.0±0.2、 28.8士 0.2处有特征峰。

9. 如实施方案 6 - 8之任一项所述的晶型 III, 其特征在于具有基 本上如图 4所示的 X-射线粉末衍射图。

本发明的再一个方面， 提供下述实施方案：

10. 晶体形式的下式（1)所示化合物

该晶体的分子结构含有 1分子的水和 1 分子的曱醇， 为溶剂合物， 具 有下式结

该晶体形式被命名为 IV型结晶， 即晶型 IV， 其特征在于使用 Cu-Ka 辐射、 以 2Θ 角度表示的 X-射线粉末衍射图在 6.5士0.2、 10.9土 0.2、 12.9±0.2、 26.1±0.2处有特征峰。

11. 如实施方案 10所述的晶型 IV， 其特征在于使用 Cu-Ka辐射、 以 2Θ角度表示的 X-射线粉末衍射图还在 39.6士 0.2、 32.8±0.2处有特征 峰。

12. 如实施方案 11所述的晶型 IV， 其特征在于使用 Cu- Ka辐射、 以 2Θ角度表示的 X-射线粉末衍射图还在 21.2士 0,2、 22.0±0.2、22.8±0.2、 24.4±0.2处有特征峰。

13. 如实施方案 10 - 12之任一项所述的晶型 IV，其特征在于具有 基本上如图 6所示的 X-射线粉末衍射图。

本发明的又一个方面， 提供下述实施方案：

14. 晶体形式的式（1)所示化合物

该晶体形式被命名为 V型结晶， 即晶型 V， 其特征在于使用 Cu-Ka辐 射、以 2Θ角度表示的 X-射线粉末衍射图在 6.1±0.2、 10.3±0.2、 1 1.6士 0.2、 20.8±0.2处有特征峰。 15. 如实施方案 14所述的晶型 V， 其特征在于使用 Cu-Ka辐射、 以 2Θ角度表示的 X-射线粉末衍射图还在 16.5±0.2、 21 ,5土 0.2处有特征 峰。

16. 如实施方案 15所述的晶型 V, 其特征在于使用 Cu-Ka辐射、 以 2Θ角度表示的 X-射线粉末衍射图还在 9.0±0.2、 19.5±0.2、 19.8±0.2、 22.2士 0.2处有特征峰。

17. 如实施方案 14 - 16之任一项所述的晶型 V, 其特征在于具有 基本上如图 Ί所示的 X-射线粉末衍射图。

18. 如实施方案 14 - 17 之任一项所述的晶型 V， 其特征在于其 DSC曲线如图 8中所示。

的晶体混合物， 其中包含实施方案 .1 -5之任一项所述的晶型 II和实施 方案 14-18之任一项所述的晶型 V。

本发明还提供式（1)所示化合物的无定形粉末� �� 溶剂合物和多晶型 物： 晶型 II、 晶型 III、 晶型 IV以及晶型 V的制备方法。 式（1)化合物无定形粉末的制备

可以通过包括如下步骤的方法得到式（1)化合� ��无定形粉末：

其中 PG _r X代表氨基保护试剂， PG ₂ X代表羧基保护试剂， AA-X代表 羟基活化剂， 其中 PGi代表氨基保护基， PG ₂ 代表羧基保护基， AA代 表离去基团， X代表卤素， 选自氟、 氯、 溴和碘， 优逸氯； CH ₃ CO-S-M 代表碱金属硫代乙酸盐， 其中 M代表碱金属阳离子， 例如钾离子、 钠 离子等；

将 L-羟基脯氨酸与氨基保护试剂 PG X进行氨基保护反应以形成中间 体 b, 进而在偶联活化剂存在下和 ^反应， 形成中间体 c， 中 间体 c与羟基活化剂 AA-X反应， 形成中间体 d， 与碱金属硫代乙酸盐 反应生成中间体 e， 进而用碱水解进行脱保护反应， 脱掉 CH ₃ CO-部分 形成中间体 f，在碱性条件下 f与 反应形成中间 体 g , 然后进行脱保护反应， 获得式（1)化合物。

所述 "氨基保护反应" 是指用氨基保护试剂对化合物中氨基上的 活泼氢进行保护的常规反应， 所述 "氨基保护试剂" 可以是常规氨基 保护试剂，例如 PG _r X,也可以是本领域普通技术人员常用的其� ��可作 为氨基保护试剂使用的试剂； 其中， PGi选自例如， 但不仅限于， 对硝 基苄氧羰基 (PNZ)、 苄氧羰基 (Cbz)、 叔丁氧羰基（Boc ) 、 芴曱氧羰基 ( Fmoc ) 、 烯丙氧羰基（Alloc ) 、 三曱基硅乙氧羰基（ Teoc ) 、 曱氧 羰基、 乙氧羰基、 邻苯二曱酰基（Pht ) 、 对甲苯磺酰基（Tos ) 、 三氟 乙酰基（Tfa ) 、 对硝基苯磺酰基（Ns ) 、 特戊酰基、 苯曱酰基、 三苯 曱基（Trt ) 、 2，4-二曱氧基苄基（Dmb ) 、 对曱氧基苄基（PMB ) 等， 优选对硝基苄氧羰基 (PNZ)、 苄氧羰基 (Cbz)、 叔丁氧羰基（Boc ) 、 对 曱氧基苄基（PMB ) 。

所述 "羧基保护反应" 是用羧基保护试剂对化合物中羧基上的活 泼氢进行保护的反应， 所述 "羧基保护试剂" 可以是常规羧基保护试 保护试剂使用的试剂； 其中， PG ₂ 选自例如， 但不仅限于， 对硝基苄基 (PNB)、 曱基、 甲氧基曱基、 曱硫曱基、 四氢吡喃基、 四氢呋喃基、 曱 氧乙基曱基、 烯丙基、 苄氧曱基、 苯曱酰曱基、 对溴苯曱酰曱基、 （X- 曱基苯曱酰曱基、 对曱氧基苯曱酰曱基、 二酰基甲基、 N-邻苯二甲酰 亚胺基曱基、 乙基、 2,2,2-三氯乙基、 2-甲硫基乙基、 叔丁基、 苄基、 2，4,6-三曱基苄基、 对溴苄基、 邻硝基苄基、 对硝基苄基、 对曱氧基苄 基、 4-吡啶曱基、 三曱基曱硅烷基、 三乙基甲硅烷基、 叔丁基二曱基曱 硅烷基、 二苯基曱基、 Ν,Ν'-二异丙基酰肼等， 优选对硝基苄基 (ΡΝΒ)、 苄氧曱基、 叔丁基、 苄基、 对溴苄基、 邻硝基苄基、 对硝基苄基、 对 曱氧基苄基、 对溴苄基、 二苯基曱基。 所述 "偶联活化剂" ， 是指促使中间体 b的羧基与 ^中的氨 基进行缩合反应的一类常规试剂， 选自例如， 但不限于， [¾代曱酸异 丙酯、 曱基磺酰氯、 对曱苯磺酰氯、 代曱酸异丁酯、 Ν,Ν-羰基 -二咪 唑、' 三曱基乙酰氯等， 优选 代甲酸异丙酯、 Ν，Ν-羰基-二咪唑； 其中 所述 "卤代" 是指氟代、 氯代、 溴代或碘代， 优选氯代， 例如氯曱酸 异丙酯。

所述 "羟基活化反应" ， 是指用常规羟基活化剂将中间体 C 中的 羟基上的活泼氢活化为离去基团 ΑΑ -， 使得碱金属硫代乙酸盐能够更 好的进行亲核取代反应制得中间体 e 的一类常规活化反应， 其中羟基 活化剂 AA-X选自， 例如， 但不仅限于， 甲基磺酰氯、 卤代曱酸异丙 酯等； 其中所述 "卤代" 是指氟代、 氯代、 溴代或碘代， 优选氯代等。

所述 "脱保护反应" 是指用常规方法脱掉羧基保护基、 氨基保护 基和其他保护基的反应， 在脱保护基的过程中， 可以加入催化剂， 例 如镍催化剂 （Raney Ni、 载体镍、 还原镍和硼化镍） 、 钯催化剂 （氧化 钯、： 钯黑和载体钯） 、 铂催化剂 （氧化铂、 铂黑和载体铂） ， 优选钯 催化剂， 例如钯 /炭和氯化钯； 还可以用金属氢化物为催化剂， 例如氢 化铝锂、 乙硼烷、 硼氢化钠等。

在进行上述反应时， 可以根据所用保护试剂的种类选择合适的碱 或酸制造碱性或者酸性环境， 所述的碱包括有机碱和无机碱， 所述的 酸包括有机酸和无机酸。

所述无机碱选自例如， 但不仅限于， 氢氧化钾、 氢氧化钠、 氢氧 化锌、 氢氧化钙、 碳酸钾、 碳酸氢钾、 碳酸钠、 碳酸氢钠等。

所述有机碱选自， 例如， 但不仅限于， 胺类化合物， 如曱胺、 三 曱胺、 二乙胺， 三乙胺、 二异丙胺、 乙二胺、 三乙醇胺、 二异丙基乙 胺、 三丁基胺、 N，N-二曱基苯胺、 二环己基胺、 二苄基胺、 N-苄基 -β- 苯乙基胺、 1-二苯羟曱胺、 Ν,Ν，-二苄基亚乙基二胺、 二乙醇胺、 三乙 醇胺、 二甲基乙醇胺、 2- (二乙基氨基）乙醇、 2-氨基乙醇、 氨丁三醇、

Ν-曱基葡萄糖胺等； 碱性氨基酸类， 如左旋精胺酸、 赖氨酸、 组氨酸 等； 季铵碱类， 如甜菜碱、 胆碱、 氢氧化三曱基.乙基铵等； 生物碱类， 如普鲁卡因、 咖啡因、 麻黄碱等； 醇的碱金属盐类， 例如甲醇钠、 乙 醇钾、 叔丁醇钾等； 烷基金属锂化合物， 例如丁基锂、 苯基锂等； 胺 基锂化合物， 例如二异丙基胺基锂 （ LDA ) 、 六曱基二硅胺基锂 ( LiHMDS ) 等； 其他碱性物质， 如 1-(2-羟乙基)吡咯、 4-(2-羟乙基) 吗啉、 N-曱基吗啉、 咪唑、 吡啶、 N-曱基哌啶等。

所述无机酸选自例如， 但不限于， 氢溴酸、 盐酸、 硫酸、 亚石充酸、 硝酸、 磷酸等。

所述有机酸选自例如， 但不限于， 曱磺酸、 十二烷基硫酸、 2-萘 磺酸、 苯磺酸、 草酸、 2,2-二氯乙酸、 甘油磷酸、 2-羟基乙磺酸、 L-天 冬氨酸、 马来酸、 乙磺酸、 1 ,5-二磺酸萘、 乙烷 -1 ,2-二磺酸、 环己基氨 基磺酸、 对甲苯磺酸等。 式 ( 1 )化合物多晶型物的制备

本发明的一个方面， 提供式（1)化合物晶型 II的制备方法： 方案一： 在式（1)化合物无定形粉末的水悬浮液中加入� ��至化合物 完全溶解后， 将所得溶液用酸调至 pH<7 , 例如 pH值大约为 5-6， 析出 晶体， 过滤， 干燥， 即得式 (1)化合物晶型 II。

方案二： 在式（1)化合物无定形粉末的水悬浮液中加入� ��至化合物 完全溶解后， 加入良溶剂， 将所得混合物用酸调至 pH<7， 例如 pH值 大约为 5-6， 析出晶体， 过滤， 干燥， 即得式 (1)化合物晶型 II。

方案三： 在式（1)化合物无定形粉末的水悬浮液中， 加入良溶剂至 化合物完全溶解后， 减压蒸出良溶剂， 过滤， 析出晶体， 干燥， 即得 式（1)化合物晶型 II。

方案四： 在式（1)化合物无定形粉末的水悬浮液中加入� ��溶剂至化 合物完全溶解后， 加入不良溶剂， 析出晶体， 过滤， 干燥， 即得式（1) 化合物晶型 II。

在上述方案二、 方案三和方案四中， 所述良溶剂是指式（1)化合物 在其中能溶解的溶剂， 选自例如， 但不限于， 曱醇、 乙醇、 正丙醇、 乙腈、 四氢呋喃或其混合物， 以及水-曱醇混合物、 水-乙醇混合物等， 优选 5 - 95%体积比的曱醇 -水溶液或乙醇-水溶液或者四氢呋喃。

上述方案四中， 所述不良溶剂是指式（1)化合物在其中不溶或� ��溶 的溶剂， 选自例如， 但不限于， 异丙醇。

方案五： 将式（ 1 )化合物无定形粉末的水悬浮液加热至化合物� �全 溶解后， 降温析出晶体， 过滤， 干燥， 即得式 (1)化合物晶型 II。

本发明的另一个方面， 提供式（1)化合物晶型 III的制备方法： 将式 (1)化合物无定形粉末的水 /乙腈 （例如 4:3 ) 悬浮液加热搅拌至化合物 溶解， 过滤， 将滤液冷冻析晶， 过滤， 即得式（1)化合物晶型 III。

本发明的再一个方面，提供式（1)化合物晶型 IV的制备方法： 在式 (1)化合物无定形粉末的水悬浮液中加入碱至化 合物完全溶解后， 加入 极性有机溶剂甲醇，将所得混合物用酸调至 pH<7,例如 pH值 5 ~ 6后， 置于低温 0- 5 °C析晶， 即得式（1)化合物的晶型 IV。

本发明的又一个方面， 提供式（1)化合物晶型 V的制备方法： 将式

(1)化合物晶型 II在水和能与水混溶的有机溶剂 （例如乙腈、 曱醇、 乙 醇、 二甲亚砜、 二甲基甲酰胺等）的混合物例如水 /乙腈悬浮液中搅拌， 将所得悬浮液抽滤， 将滤饼干燥即得式 (1)化合物的晶型 V。

上述式（1)化合物晶型 II、 晶型 III、 晶型 IV以及晶型 V的制备方 法中， 所述的碱为有机碱或者无机碱， 所述的酸为无机酸或者有机酸。

所述的无机碱选自例如， 但不限于， 氢氧化钾、 氢氧化钠、 氢氧 化锌、 氢氧化钙、 碳酸钾、 碳酸氢钾、 碳酸钠、 碳酸氢钠等。

所述的有机碱选自例如， 但不限于， 左旋精胺酸、 甜菜碱、 胆碱、 二乙胺、 赖氨酸、 Ν,Ν'-双苄基乙撑二胺、 2- (二乙基氨基）乙醇、 2-氨基 乙醇、 1-(2-羟乙基)吡咯、 二乙醇胺、 二曱基乙醇胺、 Ν-甲基葡萄糖胺、 氨丁三醇、 三乙醇胺、 4- (2-羟乙基)吗啉、 咪唑、 乙二胺等。

所述的无机酸选自例如， 但不限于， 氢溴酸、 盐酸、 硫酸、 亚硫 酸、 硝酸、 磷酸等。 所述的有机酸选自例如， 但不限于， 曱磺酸、 十二烷基硫酸、 2- 萘磺酸、 苯磺酸、 草酸、 2,2-二氯乙酸、 甘油磷酸、 2-羟基乙磺酸、 L- 天冬氨酸、 马来酸、 乙磺酸、 1，5-二磺酸萘、 乙烷 -1 ,2-二磺酸、 环己基 氨基磺酸、 对曱苯磺酸等。

本发明所述式（1)化合物的晶型 II、 晶型 III、 晶型 IV以及晶型 V 在一定条件下可以相互转化。

本发明的晶型 III含有 4个水分子，完全干燥后可以转化为晶型 II, 晶型 II不含结晶水。

在晶型 III向晶型 II转化的过程中， 可以观察到不同的过渡晶型。 在干燥过程开始后（ 自然风干大约 8-15分钟， 抽滤干燥大约 1分钟）， 可以观察到一个过渡态的晶型 X出现， 晶型 X使用 Cu-Ka辐射， 以 2Θ 角度表示的 X-射线粉末衍射图在 5.6±0.2、 21.1±0.2、 6.1±0.2 1 1.0±0.2、 10.1士 0.2、 23.0±0.2、 18.5±0.2、 9.0士 0.2、 26.0±0.2、 26.9±0.2 处有特征 峰； 继续干燥 （大约 1 小时） ， 可以观察到晶型 V的出现， 继续充分 干燥 （大约 50分钟） ， 可以得到单一晶型 II。

晶型 ΙΠ→晶型 Χ→晶型 V—晶型 II的过程是一个失去结晶水的过 程。 在此过程中， 晶型 X和晶型 V的单一晶型很难长时间稳定存在， 在转化过程中容易形成混晶 （其中包括晶型 X和晶型 V ) ， 如果在自 然空气中放置足够长时间都会最终可重复地转 化到单一晶型 II。

本发明人为了制备单一的晶型 V, 将晶型 II在乙腈 /水的混合体系 中搅拌。 长时间的搅拌 （例如 5 小时以上， 例如 9、 10、 1 1、 12小时 等） 后可以得到晶型 III, 但是较短时间的搅拌 （例如 5小时以下， 如 2小时）后得到混晶， 其中包含晶型 III、 晶型 II、 晶型 V以及过渡态 的晶型 Υ,晶型 Υ与晶型 X的特征峰类似但不能确定是否为同一晶型； 此混晶如果继续搅拌（ 10小时左右） 可以制得单一晶型 III, 如果将晶 型 III、 晶型 II、 晶型 V以及过渡态的晶型 Υ自然风干或者抽滤干燥可 以得到包含晶型 V和晶型 II的混晶， 用此混晶重复在乙腈 /水的混合体 系中较短时间的搅拌而后自然风干或者抽滤干 燥可以制得主要为晶型 V和晶型 II的混晶， 主要为晶型 V和晶型 II的混晶多次重复这个转化 过程， 可以制得单一晶型 V。

晶型 V在自然放置中是稳定的， 于常温真空干燥下放置无明显向 晶型 II的转化。将晶型 V在乙腈 /水的混合体系中搅拌 10小时以上（例 如 12小时， 16小时） ， 可以得到单一晶型 III， 将 III用前面描述的方 法充分干燥则制备得到单一晶型 II。

晶型 II 晶型 Y→晶型 III是一个增加结晶水的过程；

晶型 11→晶型 Υ→晶型 V是一个先增加结晶水再失去结晶水的过 程。

本发明的晶型 IV含有 1个水分子和 1个甲醇分子，在真空干燥的 条件下可以转化为晶型 II。 本发明还提供了一种药物组合物， 含有式（ 1 )所示化合物的无定 形粉末、 晶型 II、 晶型 III、 晶型 IV、 晶型 V中的任意一种或多种。

本发明药物组合物含有式（ 1 )所示化合物的无定形粉末、 晶型 II、 晶型 III、 晶型 IV、 晶型 V中的任意一种或多种和一种或多种药用载体 和 /或稀释剂。所述组合物可以制成临床上或药� �上可接受的任一剂型， 优选为口服制剂和注射剂。

本发明式（ 1 )所示化合物的无定形粉末、 晶型 II、 晶型 III、 晶型 IV或晶型 V可以经口服、 肠胃外 （静脉内、 肌肉内、 皮下或直肠） 、 局部等给药方式施用于哺乳动物， 例如人。

本发明式（1)所示化合物无定形粉末、 晶型 II、 晶型 III、 晶型 IV 或晶型 V 或其两种或两种以上的混合物的用量范围为大 约 250-1000mg/天， 人体重按照 60kg计算， 约为 4-20 mg/kg/天。

用于肠胃外给药时， 可将本发明式（1)化合物的无定形粉末、 晶型

II、 晶型 III、 晶型 IV或晶型 V或其两种或两种以上的混合物配制成注 射剂， 包括用于肌内注射、 静脉注射、 静脉滴注、 皮下注射等的无菌 溶液型、 乳液型、 分散液型或混悬液型制剂， 以及^ ^临用前配制或稀 释成溶液、 分散液或混悬液的注射用无菌粉末或浓溶液。

所述注射剂可采用现有制药领域中的常规方法 生产， 可选用水性 溶剂或非水性溶剂。 最常用的水性溶剂为注射用水， 也可用 0.9 %氯化 钠溶液或其他适宜的水溶液； 常用的非水性溶剂为植物油， 例如供注 射用大豆油， 其他还有乙醇、 丙二醇、 聚乙二醇等的水溶液等。 配制 注射剂时， 可以任选加入适宜的添加剂， 如渗透压调节剂、 pH值调节 剂、 增溶剂、 填充剂、 抗氧剂、 抑菌剂、 乳化剂、 助悬剂等。 常用的 渗透压调节剂包括氯化钠、' 葡萄糖、 氯化钾、 氯化镁、 氯化钙、 山梨 醇等， 优选氯化钠或葡萄糖； 常用的 pH值调节剂包括醋酸-醋酸钠、 乳酸、 枸橼酸 -枸橼酸钠、 碳酸氢钠 -碳酸钠等； 常用的增溶剂包括聚山 梨酯 80、 丙二醇、 卵磷脂、 聚氧乙烯蓖麻油等； 常用的填充剂包括乳 糖、 甘露醇、 山梨醇、 右旋糖酐等； 常用的抗氧剂有亚硫酸钠、 亚硫 酸氢钠、 焦亚硫酸钠等； 常用抑菌剂为苯酚、 甲酚、 三氯叔丁醇等。

所述药物组合物也可以采用常规方法配制为经 直肠或局部给药的 剂型， 包括栓剂、 软膏剂、 乳膏剂、 贴剂、 散剂、 喷雾剂、 吸入剂等。

用于口服给药时， 可将本发明式（1)化合物的无定形粉末、 晶型 II、 晶型 III、 晶型 IV或晶型 V或其两种或两种以上的混合物采用常规方 法配制成常规的固体制剂， 如片剂、 胶嚢剂、 丸剂、 颗粒剂等； 也可 制成口服液体制剂， 如口服溶液剂、 口服混悬剂、 糖浆剂等。 片剂以 口服普通片为主， 另有含片、 舌下片、 口腔贴片、 咀嚼片、 分散片、 可溶片、 泡腾片、 緩释片、 控释片与肠溶片等。 胶嚢剂依据其溶解与 释放特性， 可分为硬胶嚢、 软胶嚢、 緩释胶嚢、 控释胶嚢和肠溶胶嚢 等。 丸剂包括滴丸、 糖丸、 小丸等。 颗粒剂可分为可溶颗粒、 混悬颗 粒、 泡腾颗粒、 肠溶颗粒、 緩释颗粒和控释颗粒等。

在制备口服制剂时， 可以加入适宜的填充剂、 粘合剂、 崩解剂、 润滑剂等。 常用填充剂包括淀粉、 糖粉、 磷酸钙、 硫酸钙二水物、 糊 精、 微晶纤维素、 乳糖、 预胶化淀粉、 甘露醇等； 常用粘合剂包括羧 曱基纤维素钠、 PVP K30、 羟丙基纤维素、 淀粉浆、 曱基纤维素、 乙 基纤维素、 羟丙曱纤维素、 胶化淀粉等； 常用崩解剂包括干淀粉、 交 联聚维酮、 交联羧曱基纤维素钠、 羧曱基淀粉钠、 低取代羟丙基纤维 素等； 常用润滑剂包括硬脂酸镁、 滑石粉、 十二烷基硫酸钠、 微粉硅 胶等。

另一方面， 本发明还提供式（1)所示化合物的无定形粉末� �� 晶型 II、 晶型 III、 晶型 IV或晶型 V或其两种或两种以上的混合物在制备治疗 和 /或预防感染性疾病的药物方面的应用。

再一方面， 本发明还提供治疗和 /或预防感染性疾病的方法， 包括 将本发明式（1)化合物的无定形粉末、 晶型 II、 晶型 III、 晶型 IV或晶 型 V 或其两种或两种以上的混合物给予需要此治疗 或预防的哺乳动 物， 例如人的步骤。

本发明式（1)化合物无定形粉末、 晶型 II、 晶型 III、 晶型 IV或晶 型 V对革兰氏阳性和阴性、 需氧和厌氧菌均具有优良的抗菌活性， 具 有出人意料的超长半衰期， 且对 β-内酰胺酶和 DHP- 1稳定， 能被安全 的用于治疗和 /或预防各种哺乳动物 （如小鼠、 大鼠、 兔、 狗、 猫、 牛、 猪等） 包括人类由病原微生物引起的各种疾病， 如呼吸道感染和泌尿 道感染等。 附图说明

图 1是式（1)化合物晶型 II的 X-射线粉末衍射图，纵坐标表示衍射 强度 （CPS ) ， 横坐标表示衍射角度 （2Θ ) 。

图 2是式（1)化合物晶型 II的 DSC图， 纵坐标表示功率 （mW ) ， 横坐标表示温度 （ °C ) 。

： 图 3是式 (1)化合物晶型 III的单晶 X-射线单分子结构图。

. 图 4是式（1)化合物晶型 III的 X-射线粉末衍射图， 纵坐标表示衍 射强度 （CPS ) , 横坐标表示衍射角度 （2Θ ) 。

图 5是式 (1)化合物晶型 IV的单晶 X-射线单分子结构图。

图 6是式（1)化合物晶型 IV的 X-射线粉末衍射图， 纵坐标表示衍 射强度 （CPS) , 横坐标表示衍射角度 （2Θ) 。

图 Ί是式（1)化合物晶型 V的 X-射线粉末衍射图，纵坐标表示衍射 强度 （CPS) , 横坐标表示衍射角度 （2Θ) 。

图 8是式（1)化合物晶型 V的 DSC图， 纵坐标表示功率 （mW) , 横坐标表示温度 （ °C ) 。

图 9是式（1)化合物无定形粉末的 X-射线粉末衍射图， 纵坐标表示 衍射强度 （CPS) , 横坐标表示衍射角度 （2Θ) 。

图 10是式（1)化合物晶型 I的 X-射线粉末衍射图， 纵坐标表示衍 射强度 （CPS) ， 横坐标表示衍射角度 （2Θ) 。

图 11是式 (1)化合物晶型 I的 DSC图， 纵坐标表示功率 （mW) , 横坐标表示温度 （ °C ) 。

具体实施方式

以下通过实施例， 对本发明的上述内容作进一步的详细说明。 这 些实施例旨在例证而非限制本发明。 凡基于上述内容所能实现的技术 均属于本发明的范围。

^! HNMR是在 600 MHz下使用 Bruker Avance 600 MHz (德国布鲁 克）， 用 DMSO-d ₆ 作为溶剂测定的。

X射线粉末衍射 （ XRPD ) 图是在 D/max-RB 12kw转靶 X射线衍 射仪 （ 日本理学林式会社） 上， 在采用 CuKa， 40 kV, 100mA,

2-Theta:3°C -45 V , 4deg/min的条件下测定。 差示扫描量热法（DSC)使用 DZ3335差示扫描量热仪（南京大展）， 在升温速率 10°C/min， 测量温度范围 25°C ~ 230°C， 氮气气氛， 流量 40 ml/min条件下测定。

实施例

制备例 I： 式（1)化合物无定形粉末的制备：

按下述合成路线制备化合物（1):

中间体制备例

AJ2S，4R)-2-羧酸 -4-羟基 -1- (对硝基苄氧羰基)吡咯烷（中间体 b)的制备 在反应瓶中， 将 880g ( 6.72mol ) L-羟基脯氨酸溶于 2mol/L的氢 氧化钠溶液 6.72L 中， 冰浴下滴加 1305g ( 6.05mol ) 氯曱酸对硝基苄 酯在 4000mL二氯曱烷中的溶液， 控制温度不超过 10°C， 搅拌反应 3h 后， 分出水相。 将水相用二氯曱烷洗涤后用浓硫酸酸化至 pH<7, 析出 大量白色固体， 抽滤， 滤饼用水洗涤， 真空干燥， 得产物 (2S,4R)-2-羧 酸 -4-羟基 -1- (对硝基苄氧羰基)吡咯烷 1523g, 产率 81.1%。 B. (2S,4R)-2-「(呋喃 -2-基曱基)胺曱酰基 1-4-羟基 -1- (对硝基苄氧羰基)吡 咯烷（中间体 C ) 的制备

在干燥反应瓶中， 将 124g ( 0.4mol ) (2S,4R)-2-羧酸 -4-羟基- 1- (对 硝基苄氧羰基)吡咯烷溶于 400 mL 二氯甲烷中。 -25 °C下， 加入 58g ( 0.57mol ) 三乙胺， 搅拌使反应物溶解。 緩慢滴加 69g ( 0.56mol ) 氯 曱酸异丙酯， 滴加完毕后于 -25°C保温搅拌 1.5h。 在 0°C以下加入 38.8g ( 0.4mol ) 呋喃 -2-基曱胺在丙酮 （约 30mL ) 中的溶液， 继续反应 lh。 然后滴加 lmol/L盐酸酸化至 pH<7， 以乙酸乙酯提取， 有机相依次用 水、 饱和氯化钠溶液洗涤， 减压浓缩。 向所得残余物中加入 5mol/L的 盐酸进行酸化， 搅拌 2h, 然后以稀碱 NaOH溶液 0.1-2 mol/L调节至碱 性，析出固体，将反应液抽滤，滤饼真空干燥 ，得到 135.1g (2S,4R)-2- [(呋 喃 -2-基)亚曱胺基曱酰基] -4-羟基 -1- (对硝基苄氧羰基)吡咯烷， 收率： 86.7%。

C (2S,4R)-2-「(呋喃 -2-基甲基)胺曱酰基] -4-曱磺酰'氧基 - 1 - (对硝基苄氧 羰基)吡咯烷（中间体 d ) 的制备

在干燥的反应瓶中加入 75g ( 0.19mol ) (2S,4R)-2- [(呋喃 -2-基曱基) 胺甲酰基] -4-羟基- 1- (对硝基苄氧羰基)吡咯烷、 25g ( 0.25mol ) 三乙胺 和 200mL二氯曱烷。 于 0°C緩慢滴加 25.2g ( 0.22mol ) 曱基磺酰氯的 二氯曱烷（ 20mL )溶液，继续反应 1.5h。将反应液依次用稀盐酸（ 1 mol/L)、 水、 碳酸氢钠饱和溶液洗涤后， 将有机相减压蒸干， 得 79.5g (2S,4R)-2- [(呋喃 -2-基曱基)胺甲酰基] -4-曱磺酰氧基 -1- (对硝基苄氧羰 基)吡咯烷， 产率 89.5%。

K2S,4S)-2- [(呋喃 -2-基曱基)胺曱酰基] -4-乙酰硫基 -1 - (对硝基苄氧羰 基)吡咯烷（中间体 e ) 的制备

在反应瓶中加入 26.2g ( 56mmol ) (2S,4R)-2- [(呋喃 -2-基曱基)胺曱 酰基 ]_4-曱磺酰氧基 -1- (对硝基苄氧羰基)吡咯烷、 10.5g ( 92mmol )硫 代乙酸钾和 100 mL N,N-二曱基曱酰胺（简称 DMF )与 100 mL曱苯的 混合溶液， 搅拌， 于氮气气氛下升温至 65 ~ 75°C , 反应 6h。 反应完毕 后， 向反应液中加入水， 分出有机层， 水层用甲苯提取， 合并有机层。 将有机层用饱和氯化钠溶液洗涤， 用无水硫酸钠干燥， 抽滤， 将滤液 减压蒸干， 得到 20.5g 红色固体状 (2S，4S)-2- [(呋喃 -2-基曱基)胺曱酰 基] -4-乙酰硫基 -1- (对硝基苄氧羰基)吡咯烷， 收率 81.6%。

K2S,4S)-2- [(呋喃 -2-基曱基)胺甲酰基] -4-巯基 -1- (对硝基苄氧羰基)吡 咯烷 （中间体 f ) 的制备

将 21.6g ( 48mmol ) (2S,4R)-2- [(呋喃 -2-基曱基)胺曱酰基] -4-乙酰 巯基 -1 - (对硝基苄氧羰基)吡咯烷加至 125 mL曱醇中， 搅拌使其溶解， 冷却至 0 ~ 5°C， 滴加 4mol/L的氢氧化钠溶液 13.5 mL, 于 0 ~ 15 °C反 应 15min。 反应完毕后， 将反应液以 4mol/L的氢氧化钠溶液调 pH值 为 10， 用二氯曱烷萃取， 弃去有机层， 水层经滴加 4mol/L稀盐酸调 pH值为 1后用乙酸乙酯提取， 将有机相用饱和氯化钠溶液洗涤， 用无 水硫酸钠干燥后蒸干， 得油状物， 将其用乙酸乙酯-乙醚重结晶， 得到 17.1g (2S，4S)-2- [(呋喃 -2-基曱基)胺甲酰基] -4-巯基- 1 - (对硝基苄氧羰基) 吡咯烷， 为粉末状固体， 收率 87.9%。

F. (4R,5S，6S)-34(3S，5S)-N- (对硝基苄氧羰基) -5-「(呋喃 -2-基曱基)胺曱 酰基] -3-吡咯烷]硫 -6-[(R)-l-羟乙基] -4-曱基 -7-氧代 -1-氮杂双环

[3.2.0]庚 -2-烯 -2-羧酸对硝基苄酯 （中间体 g ) 的制备

将 73g ( 180mmol ) (2S,4S)-2- [(呋喃 -2-基甲基)胺甲酰基] -4-巯基 -1- (对硝基苄氧羰基) -吡咯烷与 120g ( 200mmol ) [(4R，5S,6S)-3- [(二苯 氧膦酰）氧] -6-[(R)-l-羟乙基) -4-曱基 -7-氧代-氮杂双环 [3.2.0]庚 -2-烯 -2- 羧酸对硝基苄酯 （MAP )溶于 350 mL Ν,Ν-二曱基曱酰胺中， 降温至 -15 °C ; 于氮气气氛中， 滴加 18.7g三乙胺； 于 -15 °C反应 2h, 液相色语 检测反应结束。 向反应液中加入 1600 mL乙酸乙酯； 分出有机层， 依 次用 800 mL水、 200 mL 5%盐酸和 200 mL饱和碳酸氢钠洗， 无水硫 酸钠干燥后浓缩，析晶， 过滤，将滤饼真空千燥，得 74.6g标题化合物， 产率 55.3%。 式 （ 1 )化合物制备例

(4R,5S,6S)-3-[(3S,5S)-5-[(呋喃 -2-基曱基）胺曱酰基 ]-3-吡咯烷 ]硫 -6- [(R)-l-羟乙基 ]-4-曱基 -7-氧- 1-氮杂双环 [3.2.0]庚 -2-烯 -2 -羧酸 (式（1) 化合物） 制备

将 40g( 53mmol )(4R,5S，6S)-3-[(3S,5S)-N- (对硝基苄氧羰基) -5- [(呋 喃 -2-基)亚曱胺基曱酰基] -3-吡咯烷]硫 -6-[(R)-l-羟乙基 ]-4-甲基 -7-氧代 -1 -氮杂双环 [3.2.0]庚 -2-烯 -2-羧酸对硝基苄酯溶于 160 mL四氢呋喃中； 另取 120 mL水， 向其中加入 11.2g碳酸氢钠。 将所得两溶液混合， 向 所得混合物中加入 4.0g无水普通钯炭， 高压 l-6MPa氢化 2h。 将反应 液过滤以除去钯炭；所得滤液用 200 mL乙酸乙酯洗涤三次，分出水层， 将其在冰浴冷却下用醋酸调至 _p H 值为 5.5 , 使其流过制备液相 ( CHP-20P大孔树脂）进行纯化，将收集的含产物� �流份冻干，得 6.6g 式（1)化合物， 为无定形粉末形式， 收率 28.4%。 将其作为原料， 用于 下述式（1)化合物多晶型物的制备。

分子式： C ₂ 。H ₂₅ N ₃ 0 ₆ S

分子量： 435.49

!HNMR (DMSO-d ₆ , 600MHz) δ: 1.12(d, 3Η), 1.15(d, 3H), 1.55(dt, IH), 2.55(dt, IH), 2.65(dd, IH), 3.17(t, IH), 3.37(m, 2H), 3.57(m, IH), 3.80(t, IH), 3.94(m, I H), 4.12(d, IH), 4.29(m, 2H), 6.23(d, IH), 6.38(s, IH), 7.56(s， 1H)， 8.50(t, 1H)。

XRPD衍射： XRPD衍射测定结果示于图 9中。 制备例 Π: 式（1)化合物多晶型物的制备

对比例 1 式 Π)化合物晶型 I的制备

称取 1.02g上述制备例 I制备的式（1)化合物， 力 p 50mL甲醇后， 搅 拌至溶解后继续搅拌至析出晶体。 过滤， 将滤饼真空干燥 12小时， 得 到 0.34g晶体。 该晶体被命名为 I型结晶， 即式（1)化合物晶型 I, 该晶 体与按照 WO 2009/000210 A1 中实施例 1所述制备的式（1)所示化合物 (即化合物 A ) 相同。

XRD: 其 XRD测定结果示于附图 10中；

DSC最大分解温度： 164.6 °C， 结果示于附图 1 1 中。 实施例 1 式 Π)化合物晶型 II的制备

称取 0.20 g上述制备例 I制备的式（1)化合物无定形粉末， 向其中 加入 1 mL水搅拌使其悬浮， 然后加入 0.047 g碳酸氢钠固体， 搅 至 形成溶液后， 然后滴入 2 mol/L盐酸将所得溶液调至 pH=6.0, 析出晶 体，继续搅拌大约 0.5小时。过滤，将滤饼真空干燥 12小肘，得到 0.065 g晶体。其 XRPD衍射测定结果示于图 1 中； DSC最大分解温度： 169.5 °C， 结果示于图 2中。 该晶体被命名为 II型结晶， 即式（1)化合物晶型 II。 实施例 2 式 Π)化合物晶型 II的制备

称取 0.30克上述制备例 I制备的式（1)化合物无定形粉末， 向其中 加入 2mL水搅拌使其悬浮， 然后加入 0.07克碳酸氢钠固体， 搅拌至形 成溶液后， 加入 45%体积比的曱醇， 然后向所得混合物中滴入 2N盐酸 调至 pH=6.0， 析出晶体， 继续搅拌大约 0.5 小时。 过滤， 将滤饼真空 干燥 12小时， 得到 0.105克晶体。 其 XRPD衍射图与如图 1所示的式 (1)化合物晶型 II的衍射图相符，衍射角度（2Θ )在以下位置有峰： 6.60、 10.96、 12.36、 13.32、 14.02、 15.18、 15.70、 16.94、 19.74、 20.80、 21.26、 21.64、 22.12、 23.04、 24.42、 25.12、 26,60、 26.94、 28.42、 28.80。 实施例 3 式（1)化合物晶型 II的制备

称取 0.4克上述制备例 I制备的式（1)化合物无定形粉末， 向其中 加入 lmL水搅拌使其悬浮， 然后加入 2mL THF搅拌至其溶解。 然后减 压蒸出 THF, 将所得混合物过滤， 将滤液于 0 °C冰箱放置 12小时。 将 析出的晶体滤出， 并真空干燥 12 小时， 得到 0,07克晶体。 其 XRPD 衍射图与如图 1所示的式（ 1 )化合物晶型 II的衍射图相符，衍射角度（ 2Θ ) 在以下位置有峰： 6.46、 10.92、 13.16、 13.98、 15.08、 15.58、 16.78、 19.50、 20.76、 21.18、 21.56、 22.04、 22.94、 24.48、 24.94、 25.68、 26.52、 26.66、 27.42、 28.76。 实施例 4 式（υ化合物晶型 Π的制备

称取 1.00克上述制备例 I制备的式（1)化合物无定形粉末， 向其中 加入 4mL水和 4mL THF, 搅拌至其溶解。 然后滴入 14mL异丙醇， 有 晶体析出。剧烈搅拌 1小时后过滤。将滤饼真空干燥 12小时，得到 0.28 克晶体。 其 XRPD衍射图与如图 1所示的式（1)化合物晶型 II的衍射图 相符， 衍射角度 （2Θ ) 在以下位置有峰: 6.54、 1 1.00、 13.24、 14.08、 15.16、 15.74、 16.88、 19.50、 20.84、 21.28、 22.10、 23.04、 23.80、 24.52、 25.02、 26.20、 26.52、 28.88、 30.44。 实施例 5 式 Π)化合物晶型 II的制备

称取 0.20克上述制备例 I制备的式（1)化合物无定形粉末， 向其中 加入 2mL水搅拌使其悬浮， 然后加热到 50-60 °C至其溶解后， 将所得 溶液转移至冰水浴中冷却 1 小时， 析出晶体。 将析出的晶体滤出， 并 真空干燥 12小时， 得到 0.055克晶体。 其 XRPD衍射图与如图 1所示 的式（1)化合物晶型 II的衍射图相符， 衍射角度（2Θ )在以下位置有峰： 6.54、 10.98、 12.34、 13.26、 14.06、 15.18、 15.72、 16.92、 19.68、 20.80、 21.26、 21.62、 22.12、 23.04、 23.78、 24.60、 25.00、 25.68、 26.52、 26.68、 28.92。 实施例 6 式 ΠΜ匕合物晶型 III的制备 称取 0.6 g上述制备例 I制备的式（1)化合物无定形粉末， 向其中加 入 1.2 mL水和 0.9 mL乙腈， 加热至化合物溶解。 将所得溶液过滤， 将 滤液置于 0 °C冰箱放置析晶。 24小时后得到大小适于单晶测试的晶体。 其 XRPD衍射测定结果示于图 4中。 该晶体被命名为 III型结晶， 即式 (1)化合物晶型 III。

该式（1)化合物晶型 III的晶胞参数如下:

该式 (1)化合物晶型 III的单晶 X-射线单分子结构图示于图 3中。

实施例 7 式 Π)化合物晶型 IV的制备

称取 0.60 g上述制备例 I制备的式（1)化合物无定形粉末， 向其中 加入 3 mL水搅拌使其悬浮， 然后加入 0.14 g碳酸氢钠固体， 搅拌至形 成溶液后， 加入 2 mL 曱醇， 然后滴入 2 mol/L HC1 将混合物调至 pH=6.0, 将所得溶液膜过滤， 将滤液置于 0 °C冰箱放置析晶， 24小时 后出现大小适于单晶衍射的晶体。 其 XRPD衍射测定结果示于图 6中。 该晶体被命名为 IV型结晶， 即式（1)化合物晶型 IV。

式（1)化合物晶型 IV的晶胞参数如下:

参数 值

晶系 正交

空间群 p ι a (A) 8. 48

b (A) 10. 00

c (A) 27. 16

晶胞参数

a (。 ) 90

β (。 ) 90

Y (。 ) 90

晶胞体积 v (A ³ ) 2307. 64

z (单胞内分子个数） 4

计算密度 （g/cm ³ ) 1. 621 式 (1)化合物晶型 IV的单晶 X-射线单分子结构图示于图 5中。

实施例 8 式 Π)化合物晶型 II制备晶型 ΠΙ

称取 1 g式（1)化合物晶型 II (实施例 1-5中制备的晶体） , 加入 3 mL乙腈， 4 mL水, 搅拌使其形成悬浮液， 将悬浮液搅拌 16小时， 抽 滤， 即得到晶型 III。 实施例 9 式 Π)化合物晶型 II制备晶型 V

称取 l g 上述实施例 1 制备所得式 (1)化合物的晶型 II， 向其中加 入 3 mL乙腈和 4 mL水， 搅拌使其悬浮， 将悬浮液搅拌 2小时， 抽滤， 干燥， 可得到晶型 II与晶型 V的混晶， 将此混晶重复在乙腈 /水的混合 体系搅拌 2小时，抽滤， 干燥可以制得主要为晶型 II和晶型 V的混晶， 此混晶多次 （2 次以上） 重复这个转化过程， 真空干燥可以制得 0.2g 晶体。 其 XRPD衍射测定结果示于图 7中； DSC最大分解温度： 148.7 °C， 结果示于图 8中。 该晶体被命名为 V型结晶， 即式（1)化合物晶型 V。 实施例 10 式 Π)化合物晶型 V制备晶型 III

将晶型 V (实施例 9制备的晶体)在乙腈 /水 （3:4 ) 的混合体系中混 悬搅拌 12小时， 将悬浮液抽滤， 即得到晶型 III。 实施例 11 式（η化合物晶型 in转化为晶型 II

将晶型 III (实施例 6放置 24小时后析出的晶体） 抽滤， 真空干 燥 90 min后得到晶型 II。 实施例 12 式 Π)化合物晶型 IV转化为晶型 II

将式（1)化合物晶型 IV (实施例 7所得晶体） 置于真空干燥箱内， 真空干燥过夜， 即可得到晶型 II。

式 (1)化合物无定形粉末和多晶型物的体外抗菌活 性测定

供试菌株: 标准菌株， 市购； 临床分离菌株： 市购。

实验方法：采用标准琼脂二倍稀释法， 参考 《药理实验方法学》

P1659-1660, 人民卫生出版社， 主编： 徐叔云等， 2002年 1 月第 3版。

实验结果: 见下表 1和表 2。 式 （ 1 )化合物无定形粉末的体外抗菌活性

临床分离菌株 式 （ 1 ) 化合物无定形粉末 MIC ₉ Q (mg/L) 肺炎克雷伯菌 0.062

铜绿假单胞菌 16

金黄色葡萄球菌 0.125

表皮葡萄球菌 0.25 实验结果表明， 本发明式（1)化合物无定形粉末对临床分离菌� ��较好 的抗菌活性。 表 2 式 （ 1 )化合物晶型 II的体外抗菌活性

标准菌株 式 （ 1 ) 化合物晶型 II MIC (mg/L) 大肠埃希菌 ATCC25922 0.016

肺炎克雷伯菌 ATCC700603 0.031

阴沟肠杆菌 P99 0.016 铜绿假单胞菌 ATCC27853 8

流感嗜血杆菌 ATCC49247 0.5

金黄色葡萄球菌 ATCC29213 0.062

表皮葡萄球菌， ATCC12228 0.031

化脓性链球菌 ATCC19615 0.004

粪肠球菌 ATCC29212 1

脆弱拟杆菌 ATCC25285 0.125

临床分离菌株 式 （ 1 ) 化合物晶型 II MIC ₉₀ (mg/L) 金黄色葡萄球菌 0.125

表皮葡萄球菌 0.25

肺炎链球菌 0.016

奇异变形杆菌 0.031

卡他莫拉菌 0.004

流感嗜血杆菌 0, 125

阴沟肠杆菌 0.25

肺炎克雷伯菌 0.062 实验结果表明， 本发明式（1)化合物晶型 II对标准革兰氏阳性菌、 阴 性菌及厌氧菌和临床分离革兰氏阳性菌、阴性 菌及厌氧菌均具有较好的 抗菌活性。 式 (1)化合物晶型 Π的 SD大鼠体内药代动力学试验

供试品: 本发明式 （ 1 ) 化合物晶型 II ( 自制）

实验动物: 雄性 SD大鼠， 体重 200〜250g， 市购。

实验方法: 按照 WO 2009/000210 A1中效果例 2 "SD大鼠体内药代动 力学数据" 中的测定方法

实验结果: 半衰期 t _1/2 ( h ) 为 0.36 ± 0.01 ( X土 SD ) 。

实验结果表明， 本发明式（ 1 )化合物晶型 II具有良好的血浆半衰 期， 药代动力学性质好。 式 (1)化合物多晶型物的物理性能测试

实验例 1 本发明式 （ 1 ) 化合物晶型 II与晶型 I的残留溶剂检查 方法: 按照残留溶剂测定法（中国药典 2005年版二部附录丽 P )试验。 以（5%)苯基 -(95%)曱基聚硅氧烷为固定液 （或极性相似的固定 液）的毛细管柱为色谱柱，检测器为氢火焰离 子化检测器（ FID )。 按外标法以峰面积计算。

结果: 见下表 3。

表 3 本发明式 （ 1 ) 化合物晶型 II与晶型 I中的残留溶齐:

结论： 晶型 I甲醇含量明显超过质量标准限度， 对临床应用存在安全隐 患， 而本发明晶型 II曱醇含量很低， 远远低于质量标准规定的限度。 实验例 2 本发明式 （ 1 ) 化合物晶型 II与晶型 I的稳定性试验比较 考察条件: 高温 60°C , 光照 4500Lx±500Lx,

方法: 分别在高温 60°C和 4500Lx±500Lx光照实验条件下对本发明式 ( 1 )化合物晶型 II与晶型 I进行稳定性试验， 测定其在实验条件下有 关物质含量 （开环物及其他杂质的总含量） 及主药含量， 并以有关物 质增加幅度， 式 （ 1 ) 化合物含量降低幅度作为考察项目。

有关物质测定: 按照中国药典 2005年版二部附录 V D, 用高效液相色 谱法测定， 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 流动相为 0.03mol/L磷 酸二氢铵溶液 (用磷酸调 pH值至 4.0)-乙腈 （90: 10 ) , 和 0.03mol/L磷 酸二氢铵溶液 (用磷酸调 pH 值至 4.0)-乙腈 （ 20:80 ) ； 流速为每分钟 1.0ml, 梯度洗脱； 检测波长为 220nm; 按外标法以峰面积计算。 式（ 1 )化合物含量测定: 按照中国药典 2005年版二部附录 V D, 以高 效液相色谱法测定。 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以 0.03mol/L 磷酸二氢铵溶液 (用磷酸调 pH值至 3.8)-乙腈（88: 12), 为流动相， 检测 波长为 220nm。 计算公式:有关物质增加幅度 =(5天或 10天有关物质含量- 0天有关物质 含量) /0天有关物质含量 X 100%

式 (1)化合物含量降低幅度 =(0天含量 -5天或 10天含量 )/0天含量 X 100% 结果: 见下表 4和 5。 表 4-1 式 （ 1 )化合物晶型 I高温考察结果

表 5-1 式 （ 1 )化合物晶型 I光照考察结果

结论：

由上表 4-1和 4-2可知， 本发明晶型 II在高温 60°C时， 有关物质 增加幅度比晶型 I低， 式 （ 1 ) 化合物含量降低幅度也比晶型 I小， 且 具有显著差异， 说明晶型 II在 60°C高温时， 稳定性比晶型 I好。

由上表 5-1和 5-2可知， 本发明晶型 II在 4500Lx±500Lx光照时， 式 （ 1 ) 化合物含量降低幅度比晶型 I 低， 差异显著， 说明晶型 II 在 4500Lx±500Lx光照时， 稳定性比晶型 I好。 式 (1)化合物多晶型物的制剂实施例

制剂实施例 1 本发明式 （ 1 ) 化合物晶型 II的无菌粉针制剂的制备

将无菌的式（ 1 )化合物晶型 II无菌粉末与无菌的无水碳酸钠粉末 混合， 将所得无菌粉末分装、 压盖即得。 本说明书已详细完整地描述了本发明。 凡基于上述内容所能实现 的技术均属于本发明的范围。 此外， 本领域技术人员在阅读了上述内 容之后， 可以在不违背本发明精神的范围内对本发明作 各种各样的修 饰、 变动或修改， 这些变化形式同样也在本申请所附权利要求书 所限 定的范围内。