技术领域

本发明涉及一种嘧啶类化合物的抗宫颈癌的新 用途。

背景技术

宫颈癌是最常见的妇科恶性胂瘤。 原位癌高发年龄为 30〜35岁， 浸润 癌为 45-55岁，

的普遍应用 使宫颈癌和癌前病变得以早期发现和治疗， 宫颈癌的发病率和 死亡率已有明

宫颈癌的发生是多因素作用的结果、 主要与人乳头瘤病毒 （human papillomavirus , HPV), 尤其是高危型 HPV16、 18型感染密切相关， 而其 它易感因素， 如早婚- 性伴侣过多等， 均是 HPV感;

作用。 经研究 997%的子宫颈癌， 都是因感染 HPV所造成。 该病毒属乳头 多瘤空泡病毒科 (papovaviridae)乳头瘤病毒属， 直径 52-55nm， 无被膜， 正 20 面体结构， 表面有 72个壳体， 病毒基因组是双链环状 DNA分子。 它是一种 嗜上皮性病毒， 在人和动犓中分布广泛 有高度的特异性， 长期以来， 已知 HPV可引起人类良性的肿瘤和疣，如生长在生殖 器官附近皮肤和粘膜上的人 类寻常疣、 尖锐湿疣以及生长在粘膜上的乳头状瘤。 若反复感染某些高危险 性， 且又没有疣等症状的 HPV类型， 可能发展成为癌前病变， 甚至是侵袭 性癌症。

根据 HPV的同源性， g前已发现 130多种型别。这些 HPV病毒按危险 性分类， 可以划分为低危型（非癌相关型）和高危型 (癌相关型）， 其中， 与 生殖道癌前病变或生殖道癌症相关的高危型 HPV类型主要有 HPV16、 18、

31、 33等 因此， 研制抗 HPV病毒的药物， 也有助于治疗与 HPV病毒相 中瘤类疾病。

专利申请号 201310013707 1 , 公开了一种式 1所示的嘧啶类化合物或 其药学上可接受的盐，

,ΟΗ

式 1

该专利申请中还记载了， 该类化合物具有一定抗疱瘆病毒、 流感病毒 活性， 可治疗水痘、 带状疱疹、 流感等相关感染型疾病。

目前还未见上述化合物抗其他胂瘤或病毒的报 道。

发明内容

本发明的目的在于提供式 1所示嘧啶类化合物的新用途。

本发明提供了式 1所示的嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐� �制备抗 宫颈癌的药物中的用途，

.OH

R选自取代或非取代的 C4-10的芳香基或杂环芳香基， 其中， 取代基选 自 C1-6的垸基、 C1-4的垸氧基、 C1-4的氨垸基或卤素。

进一歩地， 所述宫颈癌是伴有人类乳头瘤病毒感染的宫颈 癌， 此种宫颈 癌中， HPV呈阳性， 但其致癌原因可能是由 HPV所致， 也可能由除 HPV感 染外的其他因素所致。

更迸一歩地、 所述宫颈癌是人类乳头瘤病毒所致的宫颈癌， 其宫颈癌中

HPV呈阳性， 但其致癌原因是由感染 HPV所致。

其中， 所述人类乳头瘤病毒为高危型人类乳头瘤病毒 。

进一歩地，所述高危型人类乳头瘤病毒为 HPV16、HPV18、HPV31或 HPV33。 更进一歩地， 所述高危型人类乳头瘤病毒为 HPV16。

优选地， 所述药物是抑制 HPV16中 E6或 E7蛋白的药物。

其中， R选自取代或非取代的 C4-6的芳香基或杂环芳香基； 其中， 所述 杂环芳香基为含 0或 N杂环芳香基。

进一歩地， 取代基选自 C1-4的垸基、 C1-2的垸氧基、 C1-2的氨垸基、 更进一歩地， 所述化合物为 OH

式 2

其中， 选自 Cl-6的垸基、 C1-4的垸氧基、 C1-4的氨垸基、 氨基 或

其中， 选自 C1-4的垸基、 C1-2的垸氧基、 C1-2的氨垸基、 氨基 或

进一歩地， 选自 C1-4的垸基或 C1-2的垸氧基。

更进一歩地， R2、 R4为 H; Rl、 R5为 H或 C1-2的垸氧基， 但不同时 为 H; R3为 C1-4的垸基。

其中， 所述 C1-4的垸基为丁基， C1-2的垸氧基为甲氧基， C1-2的氨垸 基为氨甲基。

进一歩地， 所述丁基为叔丁基。

优选地， 所述化合物为：

4- (4-叔丁基苄胺） -5-甲醛肟 -6-氯嘧啶、 或 4- (2-甲氧基苄胺） -5-甲酸 肟 -6-氯嘧啶。

目前已知， 99.7%的子宫颈癌都是因感染 HPV所造成， 而本发明也发 现， 上述化合物或其药学上可接受的盐类能够同日 t对宫颈癌中的 HPV有抑 制活性 因 本发明根据相关实验， 还提供了式 1所示的嘧啶类化合物或 其药学上可接受的盐在制备抗人类乳头瘤病毒 的药物中的用途，

式 1 R选自取代或非取代的 C4-10的芳香基或杂环芳香基， 其中， 取代基选 自 C1-6的垸基、 C1-4的垸氧基、 C1-4的氨垸基或卤素。

进一歩地， 所述人类乳头瘤病毒为高危型人类乳头瘤病毒 。

更进一歩地， 所述高危型人类乳头瘤病毒为 HPV16、 HPV18、 HPV31或 HPV33 ₀

优选地， 所述高危型人类乳头瘤病毒为 HPV16。

进一歩优选地， 所述药物是抑制 HPV16中 E6或 E7蛋白的药物。

其中， R选自取代或非取代的 C4-6的芳香基或杂环芳香基； 其中， 所述 杂环芳香基为含 0或 N杂环芳香基。

进一歩地， 取代基选自 C1-4的垸基、 C1-2的垸氧基、 C1-2的氨垸基、 氨基或卤素。

更进一歩地， 所述化合

其中， 选自 C1-6的垸基、 C1-4的垸氧基、 C1-4的氨垸基、 氨基 或

其中， 选自 C1-4的垸基、 C1-2的垸氧基、 C1-2的氨垸基、 氨基 或

进一歩地， 选自 C1-4的垸基或 C1-2的垸氧基。

更进一歩地， R2、 R4为 H; Rl、 R5为 H或 C1-2的垸氧基， 但不同时 为 H; R3为 C1-4的垸基。

其中， 所述 C1-4的垸基为丁基， C1-2的垸氧基为甲氧基， C1-2的氨垸 基为氨甲基。

进一歩地， 所述丁基为叔丁基。

优选地， 所述化合物为：

4- (4-叔丁基苄胺） -5-甲醛肟 -6-氯嘧啶、 或 4- ( 2-甲氧基苄胺） -5-甲酸 肟 -6-氯嘧啶。 本发明所述 "药学上可接受的盐"包括通式 1或 2化合物与对活生物体 无毒性的盐， 包含有本发明化合物与盐酸、 氢溴酸、 硝酸、 硫酸、 磷酸、 柠 檬酸、 苹果酸、 甲酸、 马来酸、 乙酸、 丙二酸、 双羟萘酸、 1,5-萘二磺酸、 环己基氨基磺酸、 水杨酸、 己二酸、 戊二酸、 香草酸、 草酰乙酸、 抗坏血酸、 乳酸、 富马酸、 琥珀酸、 酒石酸、 甲磺酸或对甲苯磺酸等形成的盐类， 或， 本发明化合物与碱形成的含钠、钾、 镁、锌或铁等的盐类， 但并不局限于此。 本发明的一种实施方式中， 还包括了同位素标记的上述化合物或其药学 上可接受的盐， 所述同位素标记化合物是指与本文中所列化合 物相同， 但是 其中的一个或多个原子被另一个原子取代， 该原子的原子质量或质量数不同 于自然界中常见的原子质量或质量数。 可以引入化合物中的同位素包括氢、 碳、 氮、 氧、 硫， §卩 2 H, 3 H、 13 C、 14 C、 15 N、 17 0、 18 0、 35 S。 含有 上述同位素和 / 或其它原子同位素的化合物及其立体异构体， 以及该化合 物、 立体异构体的可药用的盐的制药用途均应包含 在本发明范围之内。 除本发明所述化合物及其药学上可接受的盐外 ， 所述化合物前体药物的 相关制药用途也应该被包括在本发明的保护范 围内， 其中， 所述前体药物是 指本发明所述嘧啶类化合物经过化学结构修饰 后得到的在体内经酶或非酶的 转化释放出活性成分而发挥药效的化合物。 本发明研究发现， 上述嘧啶类化合物能够有效对抗宫颈癌， 并对 HPV16 的 E6、 E7有良好的抑制作用， 表明上述嘧啶类化合物也具有良好的抗人类 乳头瘤病毒的作用， 为临床用药提供了新的选择。 显然， 根据本发明的上述内容， 按照本领域的普通技术知识和手段， 在 不脱离本发明上述基本技术思想前提下， 还可以做出其他多种形式的修改、 替换或变更。

以下通过具体实施例的形式， 对本发明的上述内容再做进一歩的详细说 明。 但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限 于以下的实施例。 凡基于 本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的 范围。 具体实施方式

实施例 1 CHOI, CH02对人宫颈癌细胞 Caski和 HPV16病毒的影响

【实验目的】 为研究 CH01，CH02体外抗宫颈癌和 HPV16病毒作用，本试验在 人宫颈癌细胞（HPV16阳性）培养中研究了上述� ��合物等对细胞的毒性， 对 HPV16 E6和 E

CHOI CH02

本发明受试化合物按照专利申请号 201310013707。 1 中的方法制备。 【实验方法】 一

1.细胞毒性：采用 MTT法， 以 Reed-Muench法计算半数有毒浓度 （TC ₅ 。） 和最大无毒浓度 （TC。） 为指标。

2. HPV16 E6和 E7 mRNA :以最大无毒浓度处理细胞培养 48小时后终止 培养，提取细胞内的总 RNA, 采用 Real-time PCR法， 测定待测样品对 HPV16 E6和 E7 mRNA的影响。

【实验结果】

1. 宫颈癌细胞 Caski的抑制试验：

表 1

上表结果表明， 化合物对宫颈癌细胞具有很好的抑制作用， 样品 CH01 的 IC ₅ 。约为 1. 5 ug/ml , 样品 CH02的 IC ₅ 。约为 0. 4 ug/ml。

另外， 本发明试验证明了化合物对此宫颈癌细胞有抑 制作用， 此宫颈 癌细胞为 HPV16阳性， 提示上述化合物可能对 HPV病毒具有抑制作用

2. 样品对 Caski细胞 HPV16 E6 mRNA 、 HPV16 E7 mRNA表达的抑制作用:

【实验结论】

1、 CH01对 Caski细胞中的 HPV E6和 E7 mRNA有抑制作用

2、 CH02对 Caski细胞中的 HPV E6和 E7 mRNA有抑制作用

E6、 E7为 HPV16病毒表达的两种重要的蛋白， 这两种蛋白在细胞中能 够激活原癌基因 P53 , 从而使细胞癌变， 目前有大量文献研究表明对 HPV16 的 E6、 E7蛋白的抑制可能是原癌基因 P53失活而达到抗肿瘤的效果。 本实 验结果表明样品 CH01、 CH02对 E6、 E7具有很好的抑制活性， 比阳性对照 西多夫韦的抑制活性更高， 表明本发明提供的化合物可能是通过抑制 HPV 中的 E6、 E7蛋白来抑制病毒活性， 从而达到抗宫颈癌 （HPV阳性） 效果。 综合上述实验可知， 本发明所述的嘧啶类化合物具有良好的抗宫颈 癌活 性， 并且对 HPV16病毒的 E6、 E7等与癌症密切相关的蛋白有显著的抑制作 用， 表现出了良好的生理活性， 为临床用药提供了新的选择。