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Title:
ANTI-INFLAMMATORY COMPOSITION COMPRISING ACYLHYDRAZONE DERIVATIVE
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2019/151676
Kind Code:
A1
Abstract:
The present invention relates to a composition for preventing, alleviating or treating inflammatory diseases, comprising, as an active ingredient, an acylhydrazone derivative compound, a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof. An acylhydrazone derivative compound, a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof, of the present invention, effectively inhibits inflammatory cytokines and inflammatory signaling pathways, thereby effectively alleviating symptoms of inflammatory diseases such as dermatitis. Therefore, the composition according to the present invention can be effectively used for the prevention, alleviation or treatment of inflammatory diseases.

Inventors:
KIM, Bo Yeon (125 Gwahak-ro, Yuseong-gu, Daejeon, 34141, KR)
HWANG, Joonsung (125 Gwahak-ro, Yuseong-gu, Daejeon, 34141, KR)
SOUNG, Nak Kyun (125 Gwahak-ro, Yuseong-gu, Daejeon, 34141, KR)
AHN, Jong Seog (125 Gwahak-ro, Yuseong-gu, Daejeon, 34141, KR)
LEE, Kyung Ho (125 Gwahak-ro, Yuseong-gu, Daejeon, 34141, KR)
MUN, Jiyun (125 Gwahak-ro, Yuseong-gu, Daejeon, 34141, KR)
GANIPISETTI, Srinivasrao (125 Gwahak-ro, Yuseong-gu, Daejeon, 34141, KR)
CHA, Hyunjoo (125 Gwahak-ro, Yuseong-gu, Daejeon, 34141, KR)
AHN, Mija (125 Gwahak-ro, Yuseong-gu, Daejeon, 34141, KR)
LEE, Hee Gu (125Gwahak-ro, Yuseong-gu, Daejeon, 34141, KR)
JANG, Jae-Hyuk (125 Gwahak-ro, Yuseong-gu, Daejeon, 34141, KR)
RYOO, In Ja (125 Gwahak-ro, Yuseong-gu, Daejeon, 34141, KR)
KO, Sung-Kyun (125 Gwahak-ro, Yuseong-gu, Daejeon, 34141, KR)
Application Number:
KR2019/000482
Publication Date:
August 08, 2019
Filing Date:
January 11, 2019
Export Citation:
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Assignee:
KOREA RESEARCH INSTITUTE OF BIOSCIENCE AND BIOTECHNOLOGY (125 Gwahak-ro, Yuseong-gu, Daejeon, 34141, KR)
International Classes:
A61K31/404; A23L33/10; A61K9/00; A61K31/343; A61P17/00; A61P29/00
Attorney, Agent or Firm:
FIRSTLAW P.C. (60 Mabang-Ro, Seocho-Ku, Seoul, 06775, KR)
Download PDF:
Claims:
2019/151676 1»(:1^1{2019/000482 특허청구범위

1. 하기 화학식 1로표시되는화합물, 이의 입체이성질체, 또는 이의 약학적 으로 허용가능한 염을유효성분으로포함하는, 염증성 질환의 예방또는 치료용 약학적 조성물:

[화학식 1]

3. 제 1항에 있어서,

상기 화학식 1로표시되는화합물은하기 화학식 중하나인, 약학적 조성

4. 제 1항에 있어서,

상기 염증성 질환은피부염인, 약학적 조성물.

5. 제 4항에 있어서,

상기 피부염은 아토피성 피부염, 접촉성 피부염 또는 알레르기성 피부염 인, 약학적 조성물.

6. 제 1항에 있어서,

상기 약학적 조성물은 염증성 사이토카인의 발현을 억제하는 것인, 약학 적 조성물.

7. 제 6항에 있어서,

상기 사이토카인은 인터루킨 (IL)-2, 인터루킨- 4 또는 인터루킨- 13인, 약 학적 조성물.

8. 제 1항에 있어서,

상기 약학적 조성물은 피부홍반또는 피부 건조 증상을 억제하는 것인, 약학적 조성물.

9. 제 1항에 있어서,

상기 약학적 조성물은 상피 과형성 (epidermal hyperplasia)을 억제하는 것인, 약학적 조성물.

10. 제 1항에 있어서, 2019/151676 1»(:1^1{2019/000482 상기 약학적 조성물은경피 투여되거나또는경구투여되는 것인, 약학적 조성물.

11. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 입체이성질체를 유효성분으 로포함하는염증성 질환의 예방또는개선용식품조성물:

[화학식 1]

상기 화학식에서, ¾은 01-04 알킬 또는 -(抑 2111((:=0)0¾이고, ¾는 01-04 알킬이 며,! n은 0, 1, 2또는 3이다.

12. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 입체이성질체를 유효성분으 로포함하는피부염의 예방또는개선용화장료조성물:

[화학식 1]

상기 화학식에서, ¾은 01-04 알킬 또는 -(抑 21110:=0)0¾이고, ¾는 - 알킬이 며, 01은 0, 1, 2또는 3이다.

13. 염증성 질환을예방또는치료하기 위한제 1항의 약학적 조성물의 용도.

14. 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약제를 제조하기 위한 제 1항의 약학적 조성물의 용도. 2019/151676 1»(:1^1{2019/000482

15. 제 1항의 약학적 조성물을 처리하는 단계를 포함하는 염증성 질환의 예방 또는치료방법.

16. 피부염을예방또는개선하기 위한제 12항의 화장료조성물의 용도.

17. 피부염의 예방또는 개선용 화장품을 제조하기 위한 제 12항의 화장료 조 성물의 용도.

18. 제 12항의 화장료조성물을처리하는단계를포함하는피부염의 예방또는 개선방법.

Description:
2019/151676 1»(:1^1{2019/000482 명세서 아실하이드라존유도체를포함하는항염중조성 물 기술분야

본 발명은 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환의 예방, 개선 또는치료용조성물에 관한것이다. 배경기술

아토피성 피부염은 현대인에게 빈번하게 발생되며, 의학적으로원인이 불 분명한만성적 피부질환이다. 일반적으로아토피성 피부염은인간면역체계의 불 균형에 의해 초래된 질환으로알려져 있다. 최근들어 국내외적으로아토피성 피 부염 발병이 소아에서 성인에 이르기까지 광범위하게 발생하고 있어, 이에 대한 효과적인치료제 개발이 요구되고있다 .

현재 스테로이드 계열의 아토피성 피부염 억제제가치료제로사용되고 있 다. 하지만, 아토피성 피부염의 병인을정확히 진단할수 있는진단법과이에 따 른 정확한 맞춤 치료법의 부재로 인해 아토피성 피부염의 원천적인 해결방법이 아닌 일시적인 경감효과를나타내며 동시에 내성이 생기는부작용이 있는것으로 알려져 있다. 따라서, 면역학적 치료 및 항염증효능에 탁월하고부작용이 거의 없어 장기간사용할수있는약제의 개발이 시급한실정이다.

한편, 대한민국 공개특허공보 제 10-2014-0032916호에서는 메틸렌나프토 [2, 1-15]퓨란 -2 -카보하이드라지드 유도체가 세포 유사분열을 유의적으로 억제하 고, 다제약내성을보이는 암세포에 효과적으로 작용한다는 점이 개시되어 있다. 또한, 대한민국공개특허공보제 10-2017-0098170호에서는안정성 및 용해도가개 선된 암세포 증식 억제 효과를 나타내는 인돌 유도체 화합물이 개시되어 있다. 상기 문헌들은아실하이드라존유도체 화합물이 일부암세포증식 억제에 효과적 으로 사용될 수 있음을 개시하고 있으나, 염증성 질환의 억제 효과에 대해서는 전혀 개시하고있지 않다. 0 2019/151676 1»(:1^1{2019/000482

기술적 과제

본 발명자들은 효과적인 염증성 질환의 예방 및 치료제를 개발하기 위해 연구한결과, 아실하이드라존유도체 화합물이 염증유발동물모델및 세포주모 5 델에서 우수한항염증효과를 나타내 염증성 질환의 예방또는 치료제로사용될 수있음을확인함으로써 본발명을완성하였다. 과제 해결수단

상기 목적을달성하기 위하여 ,

10 본 발명의 일 측면은, 아실하이드라존유도체 화합물 , 이의 입체 이성질 체 또는이의 약학적으로허용가능한염을유효성분으로포함 하는염증성 질환의 예방또는치료용약학적 조성물을제공한다.

본 발명의 다른측면은, 상기 화합물또는 이의 입체 이성질체를 유효성 분으로포함하는염증성 질환의 예방또는개선용식품조성물을제공한다.

15 본발명의 또다른측면은, 상기 화합물또는 이의 입체 이성질체를유효 성분으로포함하는피부염의 예방또는개선용화장료조성물을제공한다.

본발명의 또다른측면은, 염증성 질환을 예방또는치료하기 위한상기 약학적 조성물의용도를제공한다.

본발명의 또다른측면은, 염증성 질환의 예방또는치료용 약제를제조 2 0 하기 위한상기 약학적 조성물의 용도를제공한다.

본 발명의 또 다른측면은, 상기 약학적 조성물을 처리하는 단계를 포함 하는염증성 질환을예방또는치료방법을제공한다.

본발명의 또다른측면은, 피부염을예방또는개선하기 위한상기 화장 료조성물의 용도를제공한다.

25 본 발명의 또 다른측면은, 피부염의 예방또는 개선용 화장품을 제조하 기 위한상기 화장료조성물의 용도를제공한다.

본 발명의 또 다른측면은, 상기 화장료조성물을 처리하는 단계를포함 하는피부염을예방또는개선하는방법을제공한 다.

30 발명의 효과 본 발명의 아실하이드라존유도체 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로허용가능한염은염증성 사이토카인 및 염증성 신호전달경로를효과 적으로억제하여, 피부염과같은염증성 질환의 증상을효과적으로개선할수 있 다. 따라서, 본발명에 따른조성물은염증성 질환의 예방, 개선또는치료를위 해유용하게사용될수있다. 도면의 간단한설명

도 1은 등쪽에 피부염을 유발시킨 마우스를 이용해 아실하이드라존 유도 체 화합물의 피부염 억제 효과를육안으로확인한도면이다.

도 2a는등쪽에 피부염을유발시킨 마우스에 아실하이드라존유도체 화합 물또는 Cyclospor ine A를처리한후, 피부조직 내 IL-4의 발현량을나타낸도면 이다.

도 2b는등쪽에 피부염을유발시킨 마우스에 아실하이드라존유도체 화합 물또는 Cyclosporine A를 처리한후, 피부조직 내 IL-13의 발현량을나타낸도 면이다.

도 2c는등쪽에 피부염을유발시킨 마우스에 아실하이드라존유도체 화합 물또는 Cyclosporine A를처리한후, 피부조직 내 IL-2의 발현량을나타낸도면 이다.

도 3a는 표피를 이루고 있는 기저층, 유극층, 과립층 및 각질층과각층 의 발현마커를나타낸도면이다.

도 3b는등쪽에 피부염을유발시킨 마우스에 아실하이드라존유도체 화합 물또는 Cyc lospor ine A를처리한후, 피부조직 내 K14(Kerat in 14)의 발현량을 나타낸도면이다.

도 3c는등쪽에 피부염을유발시킨 마우스에 아실하이드라존유도체 화합 물또는 Cyclospor ine A를처리한후, 피부조직 내 KKKerat in 1)의 발현량을나 타낸도면이다.

도 3d는등쪽에 피부염을유발시킨 마우스에 아실하이드라존유도체 화합 물또는 Cyclospor ine A를처리한후, 피부조직 내 FLG(Fi laggr in gene)의 발현 량을나타낸도면이다. 도 4는 귀에 피부염을 유발시킨 마우스를 이용해 아실하이드라존 유도체 화합물의 피부염 억제 효과를육안으로확인한도면이다.

도 5는 귀에 피부염을 유발시킨 마우스에 아실하이드라존 유도체 화합물 또는 Cyclospor ine A를처리한후, 피부조직을헤마톡실린 및 에오신으로 염색한 사진이다.

도 6a는귀에 피부염을유발시킨 마우스에 아실하이드라존유도체 화합물 또는 Cyclosporine A를처리한후, 피부조직 내 IL-4의 발현량을 나타낸 도면이 다.

도 6b는귀에 피부염을유발시킨 마우스에 아실하이드라존유도체 화합물 또는 Cyclospor ine A를처리한후, 피부조직 내 IL-13의 발현량을나타낸도면이 다.

도 6c는귀에 피부염을유발시킨 마우스에 아실하이드라존유도체 화합물 또는 Cyclospor ine A를처리한후, 피부조직 내 IL-2의 발현량을 나타낸 도면이 다.

도 7은 귀에 피부염을 유발시킨 마우스에 아실하이드라존 유도체 화합물 또는 Cyclospor ine A를처리한후, 피부조직 내 면역세포수를측정한도면이다. 도 8a는귀에 피부염을유발시킨 마우스에 아실하이드라존유도체 화합물 또는 Cyclospor ine A를 처리한후, 피부조직 내 K14의 발현량을 나타낸 도면이 다.

도 8b는귀에 피부염을유발시킨 마우스에 아실하이드라존유도체 화합물 또는 Cyclosporine A를처리한후, 피부조직 내 K1의 발현량을나타낸도면이다. 도 9는 면역세포주를 이용해 아실하이드라존 유도체 화합물의 염증성 신 호전달경로의 억제 효과를확인한도면이다. 발명의 실시를위한최선의 형태

이하, 본발명을구체적으로설명한다. 한편, 본발명에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는각각에 대한다른설명 및 실시형태에도적용될수 있다. 즉, 본발명에 개시된 다양한요소들의 모든조합이 본발명의 범주에 속한다. 또한, 하기에 기술된구체적인서술에 의하여 본발명의 범주가제한된다고볼수없다. 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 아실하이드라존 유도체 화합물, 이 2019/151676 1»(:1^1{2019/000482 의 입체이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하 는, 염증성 질환의 예방또는치료용약학적 조성물을제공한다.

[화학식 1]

상기 화학식에서, ¾은 0 1 -0 4 알킬 또는 -(抑 2 )! 11 ᄄ=0)0¾이고, ¾는 0 1 -0 4 알킬이며, 111 은 0, 1, 2또는 3이다. 구체적으로, 상기 ¾은 메틸, 에틸, 프로필 또는부틸일 수 있다. 또한, ¾은 111 이 0일 때, -(00)0¾일 수 있으며 , 01 이 1일 때 , -((:¾) 0>0)0¾일수 있으며, 이 2일 때, -(대 2 2 (00)0¾일수있으며 , - (抑 2 3 ( 0)0¾일 수 있다. 또한, ¾는 메틸, 에틸, 프로필 또는부틸일 수 있 다.

본 발명의 일 실시양태에 따르면, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물에서 ¾은 메틸일 수 있다. 본 발명의 다른 일 실시양태에 따르면, 상기 화학식 1로 표시되는화합물에서 ¾는메틸또는에틸일수있다.

본발명의 일 실시양태에서, 상기 화학식 1로표시되는화합물은하기 화 학식 2의 화합물일수있다:

[화학식 2]

상기 화학식 2로 표시되는화합물은 에틸(2 -메틸- 3-犯)-{[(나프토[2 , 1-13] 퓨란 -2 -일카보닐)하이드라조노]메틸}-내-인돌- 1 -일)아세테이트로 명명되며, 본 명세서에서 간략히【1-1004라명명된다.

본발명의 일 실시양태에서, 상기 화학식 1로표시되는화합물은하기 화 학식 3의 화합물일수있다: 2019/151676 1»(:1^1{2019/000482

[화학식 3]

상기 화학식 3으로표시되는화합물은

(幻내’ -(1, 2 -다이메틸-대-인돌- 3 -일)메틸텐)나프토 [2 , 1 -비퓨란- 2 -카르보 하이드라지드로명명되며, 본명세서에서 간략히 1-1015라명명된다.

본발명의 일 실시양태에서, 상기 화학식 1로표시되는화합물은하기 화 학식 4의 화합물일수있다:

[화학식 4]

상기 화학식 4로 표시되는 화합물은 메틸 犯)-2-(2-메틸-3-((2-(나프토

[2, 1-13]퓨란 -2 -카보닐)히드라조노)메틸)-내-인돌- 1 -일)아세테이트로 명명되며, 본명세서에서 간략히 1-1031이라명명된다.

본발명에서, 상기 화학식 1로표시되는화합물은 예컨대, 대한민국공개 특허공보 제 10-2017-0098170호에 개시된 방법으로 제조될 수 있으나, 이에 제한 되지 않는다.

본 발명에서, 약학적으로 허용가능한 염은의약업계에서 통상적으로사용 되는 염을의미한다. 예컨대 칼슘, 칼륨, 나트륨 및 마그네슘등으로 제조된 무 기이온염, 염산, 질산, 인산, 브롬산, 요오드산, 과염소산 및 황산등으로 제조 된무기산염, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 시트르산, 말레산, 숙신산, 옥 살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만델산, 프로피온산, 시트르산, 젖산, 글 리콜산, 글루콘산, 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산, 글루쿠론산, 아스파르트 산, 아스코르브산, 카본산, 바닐릭산, 하이드로 아이오딕산등으로 제조된 유기 산염, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, I) -톨루엔설폰산 및 나프탈렌설폰산 2019/151676 1»(:1^1{2019/000482 등으로 제조된 설폰산염, 글리신, 아르기닌, 라이신 등으로 제조된 아미노산염 및 트라이메틸아민, 트라이에틸아민, 암모니아, 피리딘, 피콜린 등으로 제조된 아민염 등이 있으나, 열거된 이들 염에 의해 본 발명에서 의미하는 염의 종류가 한정되는것은아니다.

5 본 발명의 화학식 1로 표시되는화합물은 1 개 이상의 비대칭 탄소를 함 유할수 있다. 이에 따라라세미체, 라세믹 혼합물, 단일의 에난티오머, 부분입 체이상체 혼합물 및 각각의 부분입체이성체로서 존재할수 있다. 이러한 이성질 처1 예컨대, 화학식 1로표시된 화합물은관크로마토그래피 또는卵1名등의 분 할에 의해 분리가가능하다. 또는, 화학식 1로표시되는화합물 각각의 입체 이 1 0 성질체는공지된 배열의 광학적으로 순수한출발물질 및/또는 시약을사용하여 입체 특이적으로합성할수있다.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 아실하이드라존 유도체 화합 물, 이의 입체이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 염증성 질환의 예방또는치료에 유용하게사용될수 있다.

15 본원에 사용된 용어 "염증성 질환'’은 통증(유해 물질의 생성 및 신경 자 극으로 인한동통), 발열(혈관확장으로인한열), 발적(혈관확장및 혈류증가 로인한조홍), 종창(유체의 과도한유입 또는제한된유출로인한종양), 및 기 능상실(부분적 또는완전, 일시적 또는영구적인 것일수 있는기능상실)의 징 후중 하나이상을특징으로하는상태를지칭한다. 본발명에 따른화학식 1의 20 화합물이 사용될 수 있는 염증성 질환의 비제한적 예시로는 피부염, 알레르기, 건선, 습진, 소양증( 따1: ), 피부가려움증, 두드러기 , 특발성 만성 두드러기 , 경피증, 비강용종, 비염, 만성 부비동염, 비충혈, 코가려움증, 천식, 만성 폐 색성 폐질환, 류마티스 관절염, 결막염, 각결막염, 안염, 안구 건조증, 심부전, 부정맥, 아테롬성 동맥 경화증, 다발성 경화증, 염증성 장 질환, 염증성 통증, 25 신경성 동통, 골관절염 통증 및 갑상선 자가면역질환을포함하나, 이제 제한되 지 않는다.

본발명의 일 실시양태에서, 염증성 질환은피부염일 수 있다. 본발명에 서 상기 피부염은아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 알레르기성 피부염, 여드름, 습진, 장미증, 건선 및 지성 피부 및 접촉전염 농가진을포함하나, 이에 제한되 30 지 않는다. 본발명의 일 실시양태에서 , 피부염은아토피성 피부염일 수 있다. 본발 명에서, 용어 아토피성 피부염은 다른 아토피성 장애 예컨대 알레르기 비염 및 천식과 종종 연관되는, 염증성이고 재발성이며 비-전염성이고 소양성인 만성 피 부 장애를지칭한다. 발생하는장소또는 이의 외관또는 이를 유발하는스트레 스요인으로부터 이름이 붙여지는특정 형태의 아토피성 피부염 또한본발명의 용어 아토피성 피부염에 포함된다. 아토피 피부염은 건조한습진성 피부, 구진, 심한 가려움과 같은 증상을 보이며 , 아토피 환자의 병변 샘플에서 상피 과형성 (epidermal hyperplasia) , 표피 증식 및 림프구 및 비만세포의 축적 등이 확인 된다. 아토피 피부염 환자는 일반적으로 심한가려움증을 앓고 있으며, 이에 의 해 피부 병변의 염증을유발하여 가려움증을더욱 악화하며, 임상증상을더 악 화시킨다.

본 발명의 실시예에서, 화학식 1로 표시되는 화합물은 피부염 유발동물 모델에서 피부홍반및 피부건조증상을억제하고(도 1및 4), 염증성 사이토카 인의 발현과 상피 과형성 증상을 효과적으로 억제하였을 뿐 아니라(도 2a 내지 2c, 도 3a내지 3d, 도 6a내지 6c, 도 8a및 8b), 면역세포주에서 염증성 신호 전달경로를효과적으로억제한다는것이 확인되어(도 9), 피부염을포함한염증 성 질환의 치료제로서 유용하게 활용될수있다는점이 확인되었다.

본 발명에서, 용어 “염증성 사이토카인”이란, 체내에서 발생하는 염증 반응을 유발시키는사이토카인을 의미하며, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통 상적인 의미로사용된다. 예컨대, 피부염의 유발에 IL-2, IL-4및 IL-13등이 염 증성 사이토카인으로작용할수있다.

상기 약학적 조성물은 항염증 활성을 나타내는 유효성분을 1 종 이상 더 포함할수있다.

상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 더 포함할수 있다. 이때 약제학적으로 허용가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정 셀룰로오스, 유당, 포비돈 , 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘 , 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시 프로필셀룰로오스 , 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바납, 합성규산알 루미늄, 스테아린산 , 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄 , 스테아린산칼슘 , 백당, 덱스트로스, 소르비톨및 탈크등이 사용될수 있다. 본발명에 따른약제 학적으로 허용가능한 첨가제는상기 조성물에 대해 0.1내지 90중량부포함되 는것이 바람직하나이에 한정되는것은아니다.

상기 약학적 조성물은실제 임상투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제항으로투여될수 있다. 제제화할경우에는보통사용하는중진제 , 증량제 , 결 합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는부형제를사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를위한고형제제에는정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함될수 있다. 이러한고형제제는담배풀추출물에 적어도하나이상의 부형제 예를들면, 전분, 칼슘카보네이트 (Calcium carbonate) , 수크로스 (Sucrose) , 락토 오스 (Lactose) 또는 젤라틴 등을섞어 조제될수 있다. 또한, 단순한부형제 이 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되 는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤 제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될수 있다. 비경구투여를위한제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가포함될 수 있 다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜 (Propylene glycol ) , 폴리에틸렌 글리콜, 올리브오일과 같은식물성 기름, 에틸올레이트와 같은주사가능한에 스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol ) , 마크로골, 트 원 (tween) 61 , 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴등이 사용될수있다.

상기 약학적 조성물은목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투 여할 수 있다. 비경구 투여시 경피 투여, 피부 외용, 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사또는흉부내 주사주입방식을선택할수 있으 며, 예컨대 경피 투여될수 있다. 투여량은환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도등에 따라그 범위가다양 하다.

상기 약학적 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서 , ”약제학적으로유효한양"은의학적 치료에 적용가능한합리적인수혜/ 위험 비율로질환을치료하기에 충분한양을의미한다. 상기 유효한양은환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한민감도, 투여시간, 투여경로및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘알려진요소에 따라결정될수있다. 2019/151676 1»(:1^1{2019/000482 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고종래의 치료제와는순차적 또는동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는다중투여될수 있다. 상기한요소들을모두고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을수 있는 양을투여하는 것이 중요하다. 이는당업자에 의해용이하게 결정될수있다.

구체적으로, 본발명에 따른화합물의 유효량은환자의 나이, 성별, 체중

1일 1 내지 5회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나투여경로, 중증도, 성별, 체 중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로상기 투여량이 어떠한방법으로도본 발명의 범위를한정하는것은아니다.

본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물은 피부염 유발 마우스 모델에서 우수한염증 억제 활성을나타냈으므로, 이들을유효성분으로포함하는조성물은 염증의 예방또는개선용식품조성물로유용하게사용될 수있다.

상기 식품조성물은다른식품조성물, 건강기능식품또는음료에 통상적 으로첨가제등을더 포함할수있다.

예를들면, 상기 식품조성물은 백당, 결정과당, 포도당, I)-솔비톨, 만니 톨, 이소말토올리고당 , 스테비오사이드, 아스파탐, 아세설팜칼륨, 수크랄로오스 등의 감미제, 무수구연산, 此-사과산, 호박산및 그의 염 등의 산미제, 안식향산 및 그의 유도체 등의 보존제, 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍 미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, 如조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 또한, 상기 식품조성물들은천연 과일 쥬스및 야채 음료의 제조를위 한과육을함유할수 있다. 이러한 첨가제의 비율은본발명의 식품조성물 100 중량부당약 20중량부이하의 범위에서 사용될수 있다.

상기 식품조성물이 음료인 경우, 음료에 통상적으로포함되는향미제 또 는 천연 탄수화물을 더 포함할수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은모노사카라이드, 말토오스, 슈크로스와같은디사카라이드, 덱스트린, 시크 롤덱스크린과같은폴리사카라이드또는자일리 톨, 소르비톨, 에리쓰리톨과같은 2019/151676 1»(그1^1{2019/000482 당알콜일 수 있다. 또한, 상기 향미제로는타우마틴, 스테비아추출물(레바우디 오시드 글리시르히진등)의 천연 향미제 또는사카린 , 아스파탐등의 합성 향 미제일 수 있다. 상기 식품 조성물이 음료인 경우 천연 탄수화물은 조성물 100

있다.

상기 식품 조성물은분말, 과립, 정제, 캡슐또는 음료인 형태로 제조되 어 식품류, 음료, 껌 , 차, 비타민복합제, 건강보조식품류로이용될수있다. 또한, 본발명의 화학식 1로표시되는화합물은피부염 유발마우스모델 에서 우수한 염증 억제 활성을 나타냈으므로, 이들을유효성분으로포함하는조 성물은피부염의 예방또는개선용화장료조성물로도유용하게사 용될수있다. 상기 화장료조성물은당해 업계에서 통상적으로 제조되는어떠한제형으 로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레아등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한 정되는 것은 아니다. 보다상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는파우더의 제형으로제조될수있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스유 도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크또는산화아연 등 이 이용될수있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성 분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘실리케이트또는폴 리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는추가적으로클로 로플루오로히드로카본, 프로판/부탄또는디메틸 에테르와같은추진체를포함할 수있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 용액 또는유탁액인 경우에는 담체 성분으 로서 용매, 용해화제 또는유탁화제가이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판 올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필 렌글리콜, 1,3 -부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 2019/151676 1»(:1^1{2019/000482 또는소르비탄의 지방산에스테르가있다.

상기 화장료조성물의 제형이 현탁액인 경우에는담체 성분으로서 물, 에 탄올또는프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코 올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄메타히드록시드, 벤토나이트, 아 가또는트라칸트등이 이용될수있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신 산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체 , 메틸타우레이트 , 사르 코시네이트, 지방산아미드에테르설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족알코올, 지방산글리세리드, 지방산디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에 톡실화글리세롤지방산에스테르등이 이용될수있다.

본발명의 또다른측면은, 염증성 질환을 예방또는치료하기 위한상기 약학적 조성물의 용도를제공한다.

본발명의 또다른측면은, 염증성 질환의 예방또는치료용 약제를제조 하기 위한상기 약학적 조성물의 용도를제공한다.

본 발명의 또 다른측면은, 상기 약학적 조성물을 처리하는 단계를포함 하는염증성 질환을예방또는치료방법을제공한다.

본발명의 또다른측면은, 피부염을 예방또는개선하기 위한상기 화장 료조성물의 용도를제공한다.

본 발명의 또 다른측면은, 피부염의 예방또는 개선용 화장품을 제조하 기 위한상기 화장료조성물의 용도를제공한다.

본 발명의 또 다른측면은, 상기 화장료조성물을 처리하는 단계를포함 하는피부염을예방또는개선하는방법을제공한 다. 발명의 실시를위한형태

이하, 본 발명을실시예를 통하여 보다상세하게 설명한다. 그러나 이들 제조예 및 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가이들실시예에 한정되는것은아니다. I. 등쪽에 피부염을 유발한 마우스를 이용한 아실하이드라존 유도체 화합물의 피부염 억제효과확인

실시예 1. 아실하이라존유도체화합물의 피부염 억제효과육안확인 아실하이라존 유도체 화합물의 항염증 효과를 증명하기 위해, 옥사졸론으로유도된 피부염 모델마우스를제작하였다. 구체적으로, 6주령 HR-1

(Hai r less) 마우스의 등쪽 피부에 5% 옥사졸론(4- 61 上(« 3 11161:]¾ 1 6]16 -2- 1)]161171 -2- oxazol in-5-one) 150 를 도포한 뒤, 0.1% 희석한 동일 화합물 150 를 일주일에 3회씩, 총 11회 도포하여 피부 염증반응을 유도하였다. 그 후, 아실하이라존유도체 화합물을각 500 nM의 농도로 150狀를 일주일에 5회씩 , 총 19회 도포하였다. 화합물의 효능을 비교·검증하기 위해, 항염증 효과가 널리 알려진 시클로스포린 (Cyclosporine) A를 비교물질로 사용하였으며, 용매인 에탄올만을 처리한 음성 대조군과 옥사졸론만을 처리한 양성 대조군도 실험에 반영하였다. 각실험군의 마우스개체수는 10마리 이상으로유지하였고, 총 2회 반복실험하였다.

그결과, 옥사졸론만을처리한양성 대조군에서는붉은 반점 형태와함께 건조 상태의 피부가 관찰되어, 전형적인 피부 염증반응이 유도되었음을 확인하였다. 반면, 아실하이드라존 유도체 화합물인 WCI-1004, ffCI-1015, WCI- 1031 화합물또는 Cyclospor ine A처리한실험군에서는용매인 에탄올을 처리한 음성 대조군과 매우유사한피부상태가관찰되었다. 이를 통해 아실하이드라존 유도체화합물이 피부염증반응을효과적으로억제하는것을확인 하였다 (도 1) . 실시예 2. 아실하이드라존유도체 화합물의 염중성 사이토카인 발현 억제 효과확인

아토피 피부염과 같은 피부염 발병과 가장 연관 있는 염증성 사이토카인은 Th2 T세포에서 주로분비되는 IL-4와 IL-13등으로 알려져 있다. 옥사졸론에 의해 피부염이 유발된 마우스에서 아실하이드라존 유도체 화합물의 항염증효과를추가로확인하기 위해, 염증조직을대상으로피부염 발병과가장 깊은관련이 있는사이토카인인 IL-4및 IL-13과함께, Th2 T세포에서 분비되는 IL-2의 mRNA수준을정량화하였다. 구체적으로, 실시예 1에서 제작된 피부염 유발 마우스로부터 피부조직을 채취하여 조직 파쇄기로분쇄하였다. 분쇄한조직분말을 Tr i zol reagent(Sigma사) 용액에 녹여 RNeasy mini ki t(Qiagen사)를 이용하여 RNA를 추출하였다. 추출한 ■를 ImProm-I ITM Reverse Transcr ipt ion ki t(Promega사)를 이용하여 cDNA로 역전사한 후, CFX96TM Real-Time PCR Detect ion System(Bio_Rad사)을 사용하여 피부조직에 존재하는 사이토카인의 수준을 qPCR(quant itat ive PCR) 방법으로 측정하였다.

그 결과, 옥사졸론만을 처리한 양성 대조군에서는 상기 염증성 사이토카인의 수준이 상당히 증가하였다. 반면, Cyclospor ine A, WCI-1004, WCI- 1015 또는 WCI-1031 화합물을 처리한 실험군의 피부조직에서는 상기 염증성 사이토카인의 발현 수준이 현저히 감소한 것을 확인하였다. 특히, WCI-1004, WCI-1015 또는 WCI-1031 화합물을 처리한 실험군의 피부조직에서 Cyclospor ine A를처리한실험군의 피부조직보다염증성 사이토카인 발현수준이 낮았다. 이를 통해 아실하이드라존 유도체 화합물이 Cyclospor ine A보다 염증성 사이토카인 억제 효과가우수하다는점을확인하였다(도 2a내지 2c). 실시예 3. 아실하이드라존유도체화합물의상피 과형성 억제효과확인 피부염이 유발될 경우, 피부 두께가 두꺼워지는 상피 과형성(epidermal hyperplasi a)와 같은 병리적 증상이 유발된다. 아실하이드라존 화합물이 옥사졸론으로 염증반응이 유발된 피부에서 피부염 증상을 완화하고 피부 항상성을 유지할 수 있는지 확인하기 위해, 실시예 2와 동일한 방법으로, 피부조직으로부터 RNA을추출한 뒤 qPCR방법으로 K14(Kerat in 14), KKKerat in 1), FLGCFi laggr in gene)의 mRNA발현수준을측정함으로서 조사하였다.

그 결과, 옥사졸론을 단독 처리하여 피부염이 유발된 마우스는 피부 기저층의 K14, 피부 상층의 K1, 피부 최상위층의 FLG의 발현 수준이 모두 증가하는 상피 과형성(epidermal hyperpl as i a) 증상이 나타났다(도 3a). 반면, Cyclospor ine A, WCI-1004, WCI-1015 또는 WCI-1031 화합물을 처리한·실험군의 피부조직에서는 상기 인자의 발현 수준이 모두 정상 수준으로 회복되어 상피 과형성 증상이 회복되었음을확인하였다(도 3b내지 3d).

이를 통해 아실하이드라존 유도체 화합물의 우수한 염증 억제 효과 및 피부재생 효과를확인하였다.

II . 귀에 피부염을 유발한 마우스를 이용한 아실하이드라존 유도체 화합물의 피부염 억제효과확인

실시예 4. 아실하이라존유도체화합물의 피부염 억제효과육안확인 아실하이드라존 유도체 화합물의 항염증 효과를 증명하기 위해, 옥사졸론으로 유도된 피부염 모델 마우스를 제작하였다. 구체적으로, 6주령 마우스의 복부피부에 3%농도의 옥사졸론 150成를도포하여 면역반응유도하고, 0.5%농도로 희석한동일 화합물 20 IJ見를 하루 간격으로 마우스의 귀에 종 5회 도포하여 염증반응을 유도하였다. 그 후, 아실하이라존 유도체 화합물들은 각 500 nM의 농도로 20 씩 , 옥사졸론도포 30분후총 5회 도포하였다.

화합물의 효능을 비교·검증하기 위해, 항염증 효과가 널리 알려진

Cyclospor ine A를비교물질로사용하였다. 또한, 용매인 에탄올만을처리한음성 대조군과 옥사졸론만을 처리한 양성 대조군도 실험에 반영하였다. 각 실험군의 마우스개체수는 10마리 이상으로유지하였고, 총 2회 반복실험하였다.

그결과 , 옥사졸론을단독도포한양성 대조군의 귀는용매인 에탄올만을 도포한 귀에 비해 붉은 발적을 보였으며, 염증반응이 잘 유도되었음을 확인하였다. 반면, 아실하이드라존유도체 화합물인 WCI-1004, WCI-1015및 WCI- 1031 화합물들과 Cyclospor ine A를 처리한 동물군에서는 에탄올을 처리한 음성대조군과 매우 유사한 피부상태가 관찰되었다. 이를 통해 아실하이드라존 유도체 화합물들이 피부 염증반응을효과적으로 억제하는 것을확인하였다 (도 4) . 실시예 5. 조직 병리학적 분석을 통한 아실하이드라존 유도체 화합물의 피부염 억제효과확인.

도포실험 종료 후 피부의 병리학적 관찰을 위해, 각 마우스의 귀 피부조직을채취하여 헤마톡실린-에오신 (Hematoxyl in and Eosin)으로 염색하였다. 그 결과, 일반적으로 피부염이 유발되면 상피 과형성 (epidermal hyperplasi a)이라는 병리학적 현상이 나타나는데, 옥사졸론을 단독 도포한 양성 대조군으로부터 채취한 귀 피부조직은 에탄올만을 도포한 음성대조군의 귀 피부조직에 비해 전체의 두께가 2배 정도 증가하였으며, 상피의 두께도 약 3배 정도 증가하였다. 반면, ffC 1-1004, WCI-1015 , WCI-1031 화합물 또는

Cyclospor ine A를 처리한 실험군으로부터 채취한 귀 피부조직에서는 음성대조군과 매우 유사할 정도로 피부 전체 및 상피의 두께가 감소된 것을 확인하였다. 이를 통해 아실하이드라존 유도체 화합물이 피부 염증반응을 효과적으로억제하는것이 확인하였다(도 5). 실시예 6. 아실하이드라존유도체 화합물의 염증성 사이토카인 발현 억제 효과확인

아토피 피부염과 같은 피부염 발병과 가장 연관 있는 염증성 사이토카인은 Th2 T세포에서 주로 분비되는 IL-4와 IL-13등으로 알려져 있다. 실시예 4에서 옥사졸론에 의해 피부염이 유발된 마우스에서 아실하이드라존 유도체 화합물의 항염증 효과를 추가로 확인하기 위해, 귀 피부조직을 채취하여 IL-4 및 IL-13과 함께, Th2 T 세포에서 분비되는 IL-2의 mRNA 수준을 정량화하였다.

구체적으로, 실시예 4에서 제작된 피부염 유발 마우스로부터 귀 피부조직을 채취하여 조직 파쇄기로 분쇄하였다. 분쇄한 조직분말을 Tr i zol reagent(Sigma사) 용액에 녹여 RNeasy mini ki t(Qiagen사)를 이용하여 RNA를 추출하였다. 추출한 RNA를 ImProm-I ITM Reverse Transcr ipt ion ki t(Promega사)를 이용하여 cDNA로 역전사한 후, CFX96TM Real-Time PCR Detect ion System(Bio- Rad사)을 사용하여 피부조직에 존재하는 사이토카인의 수준을 qPCR 방법으로 측정하였다.

그 결과, 옥사졸론을 단독 도포한 양성 대조군의 귀 피부조직에서는 에탄올만을도파한음성 대조군의 귀 피부조직보다조직 내 IL-4, IL-13 및 IL- 2의 발현량이 증가하였다. 반면, WC 1-1004, WCI-1015, WCI-1031 화합물 또는

Cyclospor ine A를 처리한 실험군의 귀 피부조직 내 사이토카인 발현량은 상기 양성 대조군의 사이토카인 발현량의 50% 수준으로 현저히 감소되는 것을 확인하였다(도 6a내지 6c). 실시예 7. 아실하이드라존유도체 화합물의 염증성 면역세포수감소효과 확인

피부염이 유발되면 일반적으로 피부 전체의 염증성 면역세포수가 증가하는 병리학적 현상이 관찰된다. 실시예 4에서 옥사졸론에 의해 피부염이 유발된 마우스에서 아실하이드라존 유도체 화합물의 항염증 효과를 추가로 확인하기 위해, 귀 피부조직을채취하여 염증성 면역세포수를측정하였다.

그 결과, 옥사졸론을 단독 도포한 양성 대조군의 귀 피부조직에서 에탄올만을도포한음성대조군의 피부조직에서 보다염증성 면역세포수가약 3배 정도 증가하였다. 반면, WCI-1004, WCI-1015, WCI-1031 화합물 또는 Cyclospor ine A를 처리한 실험군의 귀 피부조직에서는 음성대조군과 비슷한 수준의 염증성 면역세포수가 관찰되었다. 이를 통해 아실하이드라존 유도체 화합물가염증성 면역세포수를감소시키는것을확인하였다 (도 7). 실시예 8.아실하이드라존유도체화합물의 상피 과형성 억제효과확인 피부염이 유발될 경우, 피부 두께가 두꺼워지는 상피 과형성 (epidermal hyperplas ia)와 같은 병리적 증상이 유발된다. 아실하이드라존 유도체 화합물이 옥사졸론으로 염증반응이 유발된 피부에서 피부염 증상을 완화하고, 피부 항상성을 유지할 수 있는지 확인하기 위해 , 실시예 6과 동일한 방법으로, 피부조직으로부터 RNA를추출한뒤 qPCR방법으로 K14와 의 mRNA발현 수준을 측정함으로서 조사하였다.

그 결과, 옥사졸론을 단독 도포한 양성 대조군의 귀 피부조직은 K14 및 의 발현수준이 모두증가하는상피 과형성 증상이 나타났다. 반면, WCI-1004, WCI-1015, WCI-1031화합물또는 Cyclospor ine A를처리한실험군의 귀 피부조직 내 K14 및 단의 발현 수준이 회복되어 상피 과형성 증상이 회복되었다. 이를 통해, 아실하이드라존유도체 화합물의 우수한염증억제 효과와함께 피부재생 및항상성 유지효과를확인하였다 (도 8a및 8b) . 실시예 9. 면역세포주를 이용한 아실하이드라존 유도체 화합물의 염증성 신호전달경로억제효과확인

아실하이드라존 유도체 화합물의 염증 억제 효과에 관여하는 약리 기전 (mechani sm of act ion)을 추가로 확인하기 위해, 마우스 유래 매크로파지 면역세포주인 RAW 세포주를 배양한 후, 염증성 사이토카인의 생산에 관여하는 NF- KB (nuclear factor kappa- 1 ight -chain-enhancer of activated B cells) 신호전달경로에 대한본발명의 화합물의 영향을관찰하였다. NF-KB신호 전달 경로는 염증반응에 중요하게 관여하는데, 특히 P65( RelA)의 인산화가유도되면, 인산화된 p65가면역세포의 핵으로 이동하여 염증반응을 일으키는사이토카인의 발현을유도하는것으로알려져있다.

구체적으로, 일정량 (6 -웰 플레이트의 경우, 5X10 5 내지 10X10 5 개八 veil)의 RAW 세포를 DMEM 배지 (1M우태아 혈청 포함)에 배양한 뒤, NF-KB 신호 전달과정을 유발하는 인자 (Tumor necrosis factor- a 또는 Lipopolysaccharide등)와 함께 WCI-1004, WCI-1015, WCI-1031화합물을 12시간 내지 24시간 동안 처리하였다. RIPA Lysis and Extraction

Buf fer(Thermof isher사)에 단백질 분해 저해제와 탈인산 저해제를 첨가하여 RAW 세포로부터 단백질을 추출하였다. 웨스턴 블롯팅 과정은 본 발명이 속한 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 방법을 사용하였고, 인산화된 p65에 특이적인 항체는 Cell Signaling Technology사제품을사용하였다.

그 결과, 마크로파지 면역세포주에 WC 1-1004, WCI-1015또는 WCI-1031 화합물을처리할경우, 염증성 사이토카인의 생산에 관여하는 NF-KB신호경로를 통해 면역반응을 유도하는 것으로 알려진 p65(RelA)의 인산화가 효과적으로 억제되었음을확인하였다 (도 9).

아를 통해, 아실하이드라존 유도체 화합물이 염증반응과 관련된 NF-KB 신호경로를효과적으로차단하는것을확인하였 다.