Die vorliegende Erfindung liegt auf dem Gebiet der antimikrobiellen Wirkstoffe. Neben neuen, erfindungsgemäßen Verwendungen bestimmter antimikrobieller Mischungen betrifft die vorliegende Erfindung auch solche Mischungen enthaltende Zubereitungen, insbesondere der Ernährung oder dem Genuss dienende oder pharmazeutische Zubereitungen, sowie Verfahren zur Herstellung solcher Zubereitungen und Verfahren zum antimikrobiellen Behandeln von der Ernährung oder dem Genuss dienenden oder pharmazeutischen Zubereitungen. Weitere Aspekte der vorliegenden Erfindung ergeben sich aus den nachfolgenden Ausführungen und insbesondere den beigefügten Patentansprüchen.

Lebensmittel, insbesondere mit Zutaten tierischen Ursprungs (wie Mayonnaise, Hackfleischzubereitungen und Wurstwaren) sowie zuckerhaltige Lebensmittel (wie gesüßte Getränke, Sirupe, Ketchup und Dressing) sind aufgrund ihres Nährstoffreichtums und hohen Wasseraktivitätskoeffizienten (aw-Wert) anfällig gegenüber mikrobiellem Verderb.

Zur Stabilisierung solcher Produkte wird üblicherweise das Hürdenkonzept angewendet [Krämer, J., Alexander, P. (2017). Lebensmittel-Mikrobiologie. Stuttgart, Verlag Eugen Ulmer. 7., vollständig überarbeitete Auflage.]: Rohstoffe mit geringer Anfangskeimzahl werden ausgewählt, bei der Formulierung der Produkte werden aw-Wert, das Redoxpotential und pH Wert nach Möglichkeit reduziert, und bei der Verarbeitung der Produkte wird besonders auf Lebensmittelhygiene und gute Herstellungspraxis geachtet. Als letzte Hürde werden Konservierungsverfahren wie die Pasteurisierung oder der Einsatz von Konservierungsmittel eingesetzt. Klassische Konservierungsverfahren werden von Verbrauchern allerdings zunehmend kritisch bewertet. So können durch Pasteurisierung die Mengen an Nährstoffe reduziert und der Geschmack durch Bildung von Kochnoten beeinträchtigt werden. Konservierungsmittel wie Sorbin- und Benzoesäure sind synthetisch gewonnen und müssen als Zusatzstoffe deklariert werden. Natürliche Konservierungsmittel wie Essigsäure, Senfsaaten, ätherische Öle und Extrakte daraus sind nur eingeschränkt verwendbar, da sie das Produkt sensorisch stark verändern.

Während das Wachstum von Bakterien durch einen pH-Wert kleiner 4,5 mit Ausnahme von acidophilen Bakterien wie Lactobacillus sp. oder Acetobacter sp. stark gehemmt ist, können Hefen und Pilze auch bei pH-Werten kleiner 3 wachsen und zum Verderb führen. Spezielle Hefen wie Zygosaccharomyces baili, Zygosaccharomyces lentus und Saccharomyces cerevisiae zeigen zudem eine Toleranz gegenüber Konservierungsmitteln wie Sorbinsäure und Benzoesäure auf [Steels, H., James, S. A., Roberts, I. N. and Stratford, M. (1999). "Zygosaccharomyces lentus: a significant new osmophilic, preserva- tive-resistant spoilage yeast, capable of growth at low temperature." Journal of Applied Microbiology 87(4): 520-527. Juvonen, R., Virkajärvi, V., Priha, O. and Laitila, A. (2011 ) "Microbiological spoilage and safety risks in non-beer beverages." VTT Tiedotteita - Research notes 2599]. Obwohl der Verderb eines Lebensmittels durch Hefen und Pilze am schwierigsten zu kontrollieren ist, ist überwiegend nur die antibakterielle Wirkung von Pflanzenextrakten bekannt [Friedman, M. (2015). "Antibiotic-resistant bacteria: preva- lence in food and inactivation by food-compatible compounds and plant extracts." J Agric Food Chem 63(15): 3805-3822]. Beispielsweise haben Kräuter, Gewürze und die aus ihnen gewonnen ätherischen Öle und Extrakte eine nachgewiesene Wirkung gegen Bakterien [Weber, H. (2010). Mikrobiologie der Lebensmittel - Grundlagen. Hamburg, Behrs Verlag], allerdings verändern diese mit ihrer Eigenaromatik bei vielen Produkten den Geschmack auf inakzeptable Art und Weise. Pflanzenextrakte mit antimikrobieller Wirkung gegen Hefen und Pilze sind nur wenige bekannt, und deren Einsatz in Lebensmitteln ist oftmals wegen ihrer starken Eigenaromatik, stark färbender Eigenschaften und schlechten Löslichkeit beschränkt.

Deshalb war es Ziel und primäre Aufgabe der vorliegenden Erfindung, alternative Formulierungen zu entwickeln, um die Haltbarkeit eines verderblichen Lebensmittels ohne großen technologischen Aufwand, vorzugsweise durch Zusatz pflanzenbasierter natürli- eher Zutaten, zu verlängern und dabei vorzugsweise zudem den Geschmack nicht negativ zu beeinflussen oder idealerweise sogar abzurunden bzw. zu verbessern.

Die bereitzustellenden Formulierungen sollten vorzugsweise zudem toxikologisch unbedenklich, gut verträglich, stabil (insbesondere in üblichen Formulierungen) und/oder preiswert herstellbar sein.

Ferner ist es wünschenswert, in den entsprechenden Formulierungen möglichst wenig der antimikrobiellen Wirkstoffe einsetzen zu müssen, um einen bestimmten antimikrobiellen Effekt zu erzielen.

Die Suche nach geeigneten Substanzen, die eine oder mehrere der genannten Eigenschaften in ausreichendem Maße besitzen, ist dem Fachmann dadurch erschwert, dass keine klare Abhängigkeit zwischen der chemischen Struktur einer Substanz einerseits und ihrer biologischen Aktivität gegenüber bestimmten Mikroorganismen (Keimen) sowie ihrer Stabilität andererseits besteht. Des Weiteren gibt es keinen vorhersehbaren Zusammenhang zwischen der antimikrobiellen Wirkung, der toxikologischen Unbedenklichkeit und der Stabilität einer Substanz.

Bevorzugte Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es daher, Formulierungen anzugeben, die mehrere oder vorzugsweise alle der oben genannten Vorgaben erfüllen oder eine wünschenswerte Kombination der oben genannten Eigenschaften besitzen.

Die primäre Aufgabe wird gelöst durch die Verwendung einer Mischung umfassend oder bestehend aus

(A) einem oder mehreren antimikrobiell wirksamen Pflanzenextrakt(en) und/oder einer oder mehreren antimikrobiell wirksamen Fraktion(en) davon, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Extrakten aus Pflanzen der folgenden Familien: Asparagaceae, Cannabaceae, Ericaceae, Lythraceae, Krameriaceae, Rosaceae, und Vitaceae, vorzugsweise aus folgenden Pflanzen: Humulus lupulus, Fragaria x anapassa, Krameria lappacea, Punica granatum, Vaccinium angustifolium, Vaccinium macrocarpon, Vaccinium myrtillus, Vaccinium vitis-idaea, Vitis vinifera, und Fraktionen davon,

(B) einem oder mehreren antimikrobiell wirksamen und/oder die antimikrobielle Wirksamkeit des Bestandteils (A) verstärkenden und/oder einen unangenehmen Geschmackseindrucks des Bestandteils (A) vermindernden, maskierenden oder modifizierenden und/oder einen angenehmen Geschmackseindrucks des Bestandteils (A) verstärkenden oder modifizierenden Aromastoff(en), ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Abrusoside und Balansine (vorzugsweise wie in WO 2012 164,062) beschrieben, Äpfelsäure, Benzaldehyd, gamma-Decalacton, delta-Decalacton, 3,7’-Dihydroxy-4’-methoxyflavan- Isomere (vorzugsweise wie in EP 2,253,226 beschrieben), Eriodictyol, Ethyl- 2-methylbutyrat, Ethylbutyrat, Ethylcapronat, Geranial, Hesperetin (vorzugsweise wie in WO 2007/014879, EP 2,368,442-B1 oder EP 1 ,909,599-B1 beschrieben), oder Extrakte aus Rubus suavissimus (vorzugsweise wie in US Provisional Application 61/333,435 und den darauf basierenden Patentanmeldungen beschrieben), Hesperetindihydrochalkon,

Hesperidindihydrochalkon, Hydroxybenzoesäureamide (vorzugsweise wie beschrieben in WO 2006/024587) zum Beispiel 2,4- Dihydroxybenzoesäurevanillylamid, 4-Hydroxydihydrochalcone (vorzugsweise wie beschrieben in US 2008/0227867 A1 und WO 2007/107596) zum Beispiel Phloretin und Davidigenin, p-Hydroxybenzaldehyd, p- Hydroxybenzoesäure, Homoeriodictyol, Limonen, Milchsäure, Menthofurolacton, Mogroside, Naringenin, Naringindihydrochalkon, Neoisoflavonoide (vorzugsweise wie in EP 2,570,036 B1 beschrieben), Neohesperidindhydrochalkon, Neral, delta-Octalacton, Pellitorin (vorzugsweise wie in EP 2 008 530 A1 beschrieben oder in Form darin beschriebener abgeleiteter Aromakompositionen), Piperonal, Phloridzin, Phyllodulcin- Isomere (vorzugsweise wie in EP 2,298,084 B1 beschrieben), Rubusoside (vorzugsweise wie in EP 2,386,21 1 beschrieben), Mischungen von Rubusosid-Isomeren und -Homologen, 1-(2,4-Dihydroxy-phenyl)-3-(3- hydroxy-4-methoxy-phenyl)-propan-1-on (vorzugsweise wie in EP 2,353,403-B1 beschrieben), Stevioside und Rebaudioside (vorzugsweise Mischungen verschiedener Rebaudioside, z.B. wie in WO 2015 062,998 beschrieben), Trilobatin, Vanillin, Vanillinsäure, Vanillyllignane (vorzugsweise wie in der europäischen Patentanmeldung mit dem Aktenzeichen EP 2,517,574 beschrieben), Weinsäure und Zimtaldheyd, als antimikrobielle Mischung, vorzugsweise als synergistische antimikrobielle Mischung.

Für den oder die einen oder mehrere antimikrobiell wirksamen Pflanzenextrakt(e) gemäß (A) und/oder die eine oder mehreren Fraktion(en) davon werden gemäß einer Ausgestaltung der vorliegenden Erfindung bevorzugt die Wurzel und/oder die fruchtbildenden Organe der Pflanze oder Teile davon verwendet, bevorzugt Endo-, Meso-, Exokarp und/oder Teile des Blütenstands.

Die Substanz(en) gemäß (B) oder Bestandteile davon können gemäß einer Ausgestaltung der vorliegenden Erfindung ebenfalls in Form eines Extrakts / in einem Extrakt oder in Form einer Fraktion davon / in einer Fraktion davon vorliegen, vorzugsweise ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Extrakten (oder Fraktionen davon) aus folgenden Pflanzen: Artemisia xanthochroa, Artemisia dracunculus, Bauhinia manca, Chenopodium album, Chysothamnus ssp., Citrus ssp. (insbesondere Citrus sinensis, Citrus paradisi, Citrus bergamia), Dracaena cinnabaria, Herba santa, Hydrangea dulcis, Lippia dulcis, Lycoris aurea, Malus domestica, Mariscus psilostachys, Momordica grosvenorii, Piper ssp., Stevia ssp., Vanilla ssp., Zanthoxylum rubescens.

Erfindungsgemäß bevorzugt ist eine solche Verwendung als antimikrobielle Mischung, wobei Bestandteil (B) die antimikrobielle Wirksamkeit des Bestandteils (A) verstärkt (synergistische antimikrobielle Wirkung; d.h., die antimikrobielle Wirksamkeit der Mischung geht über die Summe der antimikrobiellen Wirksamkeit(en) der in der Mischung enthaltenen antimikrobiell wirksamen Substanzen hinaus), was es vorteilhafterweise erlaubt, mit geringe(re)n Mengen an antimikrobiell wirksamen Substanzen in der Mischung auszukommen, und/oder einen unangenehmen Geschmackseindruck des Bestandteils (A) vermindert, maskiert oder modifiziert, und/oder einen angenehmen Geschmackseindruck des Bestandteils (A) verstärkt oder modifiziert.

Es ist daher erfindungsgemäß bevorzugt, dass Bestandteil (B) in einer Gesamtmenge in einer erfindungsgemäß zu verwendenden Mischung enthalten ist, die ausreicht, um die antimikrobielle Wirksamkeit des Bestandteils (A) zu verstärken und/oder einen unangenehmen Geschmackseindruck des Bestandteils (A) zu vermindern, zu maskieren oder zu modifizieren und/oder einen angenehmen Geschmackseindruck des Bestandteils (A) zu verstärkt oder zu modifizieren.

Hierbei sind die zu vermindernden, zu maskierenden oder zu modifizierenden Geschmackseindrücke vorzugsweise ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus adstringierend, bitter, krautig, metallisch, sauer.

Die zu verstärkenden oder zu modifizierenden Geschmackseindrücke sind vorzugsweise ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus süß, saftig und vollmundig.

Die erfindungsgemäß zu verwendenden Mischungen sind hervorragend als antimikrobielle Wirkstoffmischung zur Verlängerung der Haltbarkeit von verderblichen Zubereitungen geeignet.

Vorteilhafterweise erlauben es erfindungsgemäß zu verwendende Mischungen zudem, die einleitend genannten Vorgaben zu erfüllen.

Obwohl sich die Fachwelt bereits z.T. mit den antimikrobiellen Eigenschaften hierin beschriebener Bestandteile befasst hat, gab es bislang keinen Hinweis, dass speziell die erfindungsgemäß zu verwendenden Mischungen die hierin beschriebenen Effekte und Vorteile aufweisen. Besonders überraschend ist eine deutlich verbesserte antimikrobielle Wirkung (insbesondere gegenüber den hierin beschriebenen Keimen).

Die Erfindung beruht auf der überraschenden Erkenntnis, dass die erfindungsgemäßen Mischungen einen besonders vorteilhaften antimikrobiellen Effekt, insbesondere gegen- über Pilzen bzw. Hefen, zeigen, insbesondere gegen einen oder mehrere Keime ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus

Dekkera bruxellensis, Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida pseudo- intermedia, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomycodes ludwigii, Zygosac- charomyces bailii und Pichia sp.,

Aureobasidium sp., Alternaria alternata, Aspergillus brasiliensis, Aspergillus fumi- gatus, Cladosporium sp., Fusarium sp. Rhodotorula sp., Sporidiobolus sp., Sporobolomyces sp., Paecilomyces sp. und Penicillium sp.

Besonders bevorzugt - und vorteilhaft - ist daher eine erfindungsgemäße Verwendung gegen Pilze bzw. Hefen, vorzugsweise gegen einen, mehrere oder sämtliche Keime ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus S. cerevisiae, Z. bailii, C. albicans, A. pullulans und A. brasiliensis.

Erfindungsgemäß ist es bevorzugt, wenn der/die Extrakt(e) des Bestandteils (A) ausgewählt ist/sind aus der Gruppe bestehend aus Beerenextrakten, vorzugsweise Extrakten aus roten Beeren, Granatapfelextrakten und Kräuterextrakten.

Die Extrakte für Bestandteil (A) können aus ganzen Pflanzen, Pflanzenteilen, biotechnologisch veränderten oder unveränderten Pflanzenmaterialien hergestellt werden, wobei dem Fachmann bekannte, übliche Methoden zum Einsatz kommen können, vorzugsweise Fest-Flüssig-Extraktionen. Des Weiteren können bei Bedarf nach erfolgter Extraktion auch Anreicherungen / Aufkonzentrierungen ausgewählter Substanzen erfolgen.

Beispielsweise kann eine Extraktion von getrockneten Pflanzenteilen mit reinem oder einer Lösemittelmischung aus Aceton, Butan, Butan-1-ol, Butan-2-ol, Cyclohexan, Distickstoffmonoxid, Diethylether, Ethylacetat, Ethanol, Ethylmethylketon, Hexan, Kohlendioxid, Methanol, Methylacetat, pflanzlichen Ölen, Propan, Propan-1-ol, Propan-2-ol und/oder Wasser erfolgen.

Den Extraktionslösemitteln können Hilfsstoffe wie beispielsweise oberflächenaktive Stoffe, hygroskopische Stoffe und/oder Salze zur Verbesserung der Ausbeute hinzugegeben werden. Feuchte Pflanzenteile können mit Unterstützung von Mikrowellenstrahlung, Ultraschall und pulsiertem elektrischen Feld extrahiert werden.

Eine Fraktionierung der Extrakte (Herstellung einer hierin beschriebenen Fraktion) wird bevorzugt durch Abtrennung von unerwünschten Nebenkomponenten und/oder Aufkonzentrierung ausgewählter Substanzen durchgeführt, beispielsweise durch Adsorption, Destillation, chromatographische Trennung, Fermentation, Filtration, Flüssig- Flüssigextraktion, Membranfiltration und/oder Zentrifugation, vorzugsweise durch chromatographische Trennung, Flüssig-Flüssigextraktion und/oder Membranfiltration.

Nach der Fraktionierung der Extrakte können die Bestandteile der jeweiligen Fraktionen bei Bedarf mit bekannten Methoden ermittelt werden. Die Bestimmung der Bestandteile mittels Massenspektrometrie, insbesondere LC-MS, ist dabei eine bevorzugte Methode.

Erfindungsgemäß besonders bevorzugt ist es, wenn Bestandteil (A) wenigstens eine, zwei, drei oder mehr Verbindung(en) ausgewählt aus der Gruppe bestehend Catechine, Chlorogensäure, p-Cumarsäure, Epicatechine, Ellagsäure, Gallussäure, Kaffeesäure, Sinapinsäure und Zimtsäure, umfasst.

Abhängig von der Methode der Fraktionierung können die Konzentrationsverhältnisse insbesondere der Stoffe Catechine, Chlorogensäure, p-Cumarsäure, Epicatechine, Ellagsäure, Gallussäure, Kaffeesäure, Sinapinsäure und/oder Zimtsäure zu den übrigen Bestandteilen durch die Fraktionierung gezielt verändert werden. Eine Veränderung erfolgt dabei vorzugsweise in einer die antimikrobielle Wirkung verbessernden Weise.

In einer weiteren bevorzugten Ausgestaltung umfasst Bestandteil (B) wenigstens einen, zwei, drei oder mehr Aromastoff(e) ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Eriodictyol, Hesperetin, Homoeriodictyol, Naringenin, Pellitorin und Vanillinsäure, oder besteht daraus.

Für eine erfindungsgemäß zu verwendende Mischung gilt vorzugsweise, dass das Verhältnis der Gesamtmenge an Bestandteil (A) zur Gesamtmenge an Bestandteil (B) im Bereich von 1000 : 1 bis 1 : 10, vorzugsweise 100 : 1 bis 1 : 10, vorzugsweise im Bereich von 100 : 1 bis 1 : 1 , bevorzugt 10 : 1 bis 1 : 1 , liegt. Für die Zwecke dieses Merkmals gilt vorzugsweise, dass die Menge(n) etwaiger Komponenten, die sowohl Bestandteil (A), als auch Bestandteil (B) zuordenbar wären, der Gesamtmenge an Bestandteil (A) zugeordnet werden. Vorteilhafterweise eignen sich die hierin beschriebenen Mischungen besonders gut für den Einsatz in einer der Ernährung oder dem Genuss dienenden Zubereitung oder pharmazeutischen Zubereitung.

Dementsprechend betrifft die vorliegende Erfindung auch eine der Ernährung oder dem Genuss dienende Zubereitung oder pharmazeutische Zubereitung, umfassend eine Mischung wie hierin beschrieben, wobei die Mischung in einer Menge enthalten ist, die ausreicht, um eine antimikrobielle Wirkung zu erzielen, vorzugsweise um eine synergistische antimikrobielle Wirkung zu erzielen.

Für bevorzugte Ausgestaltungen der enthaltenen Mischung gilt dabei das oben für bevorzugt erfindungsgemäß zu verwendende Mischungen Gesagte entsprechend.

Demnach ist es bevorzugt, wenn die Mischung in einer Menge enthalten ist, die ausreicht, um eine antimikrobielle Wirkung, vorzugsweise um eine synergistische antimikrobielle Wirkung, gegen einen oder mehrere Keime ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus

Dekkera bruxellensis, Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida pseudo- intermedia, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomycodes ludwigii, Zygosac- charomyces bailii und Pichia sp.,

Aureobasidium sp., Alternaria alternata, Aspergillus brasiliensis, Aspergillus fumi- gatus, Cladosporium sp., Fusarium sp. Rhodotorula sp., Sporidiobolus sp., Sporobolomyces sp., Paecilomyces sp. und Penicillium sp., zu erzielen.

Besonders bevorzugt ist es, wenn die Mischung in einer Menge enthalten ist, die ausreicht, um eine antimikrobielle Wirkung, vorzugsweise um eine synergistische antimikrobielle Wirkung, gegen einen, mehrere oder sämtliche Keime ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus S. cerevisiae, Z. bailii, C. albicans, A. pullulans und A. brasiliensis, zu erzielen.

Der Einsatz erfindungsgemäß zu verwendender Mischungen in erfindungsgemäßen Zubereitungen ist hierbei nicht begrenzt. So kommen eine Vielzahl von unterschiedlichs- ten der Ernährung oder dem Genuss dienenden Zubereitungen oder pharmazeutische Zubereitungen in Betracht. Besonders bevorzugt handelt es sich bei erfindungsgemäßen Zubereitungen um Lebensmittel, insbesondere solche mit Zutaten tierischen Ursprungs (wie Mayonnaise, Hackfleischzubereitungen und Wurstwaren) sowie zuckerhaltige Lebensmittel (wie gesüßte Getränke, Sirupe, Ketchup und Dressings).

Gemäß einer bevorzugten Ausgestaltung der vorliegenden Erfindung kommt eine erfindungsgemäß zu verwendende Mischung daher in einer Zubereitung zum Einsatz, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Lebensmitteln, vorzugsweise Lebensmitteln mit Zutaten tierischen Ursprungs, zum Beispiel Mayonnaise, Hackfleischzubereitungen und Wurstwaren, zuckerhaltige Lebensmittel, zum Beispiel gesüßte Getränke, Sirupe, Würzsaucen, zum Beispiel Ketchup, Salatcremes und Dressings.

Eine erfindungsgemäß zu verwendende Mischung kann hierbei z.B. in einer Gesamtmenge von 3 bis 0,001 , vorzugsweise von 0,5 bis 0,01 , besonders bevorzugt von 0,1 bis 0,01 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zubereitung, enthalten sein.

Eine erfindungsgemäß zu verwendende Mischung kann für diese Zwecke z.B. in Form von einem flüssigen Präparat oder Pulver oder sprühgetrocknetem Produkt in solchen Zubereitungen eingesetzt werden. Hierfür werden beispielsweise Bestandteile (A) und (B) gemischt und gelöst, in flüssiger oder sprühgetrockneter Form zugegeben, Bestandteile (A) und (B) können aber auch separat und in sich unterscheidender Form eingesetzt werden. Im Übrigen bestehen die erfindungsgemäßen Zubereitungen darüber hinaus vorzugsweise aus für solche Zubereitungen üblichen Bestandteilen. Beispielsweise können Lösemittel oder Trägerstoffe enthalten sein.

Die Lösemittel können dabei beispielsweise Wasser, Ethanol, 1 ,2-Propandiol, Triacetin, Diacetin, Triethylcitrat und/oder Glycerin sein.

Vorteilhafte Trägerstoffe sind beispielsweise Siliciumdioxid (Kieselsäure, Kieselgel), Kohlenhydrate und/oder Kohlenhydratpolymere (Polysaccharide), Cyclodextrine, Stärken, abgebaute Stärken (Stärkehydrolysate), chemisch oder physikalisch modifizierte Stärken, modifizierte Cellulosen, Gummi Arabicum, Ghatti-Gummi, Traganth, Karaya, Carrageenan, Guarkernmehl, Johannisbrotkernmehl, Alginate, Pektin, Inulin oder Xanthan Gum; Bevorzugte Stärkehydrolysate sind Maltodextrine und Dextrine, wobei hier wiederum Maltodextrine mit DE-Werten im Bereich 5 bis 20 besonders bevorzugt sind. Dabei ist unerheblich, welche Pflanze ursprünglich die Stärke zur Herstellung der Stärkehydrolysate geliefert hat. Geeignet und leicht verfügbar sind Mais-basierende Stärken sowie Stärken aus Tapioka, Reis, Weizen oder Kartoffeln. Die Trägerstoffe können dabei auch als Fließhilfsmittel fungieren, wie beispielsweise Siliciumdioxid.

Ein Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft auch ein Verfahren zum Herstellen einer erfindungsgemäßen Zubereitung, umfassend oder bestehend aus folgenden Schritten:

(i) Bereitstellen einer hierin beschriebenen Mischung,

(ii) Bereitstellen eines oder mehrerer zum Verzehr geeigneter weiterer Bestandteile, und

(iii) Mischen der in den Schritten (i) und (ii) bereitgestellten Bestandteile.

Auch hierbei gilt für bevorzugte Ausgestaltungen der enthaltenen Mischung das oben für bevorzugt erfindungsgemäß zu verwendende Mischungen Gesagte entsprechend. Entsprechendes gilt für bevorzugte Ausgestaltungen der herzustellenden Zubereitungen.

Besonders vorteilhaft ist auch ein erfindungsgemäßes Verfahren zum antimikrobiellen Behandeln einer der Ernährung oder dem Genuss dienenden Zubereitung, vorzugsweise wie oben beschrieben, oder einer pharmazeutischen Zubereitung, umfassend oder bestehend aus folgenden Schritten:

(i) Bereitstellen einer Mischung wie hierin beschrieben,

(ii) Bereitstellen einer zu behandelnden Zubereitung oder eines oder mehrerer zum Verzehr geeigneter Bestandteile einer zu behandelnden Zubereitung, und

(iii) Hinzufügen der Mischung zu der bereitgestellten Zubereitung bzw. dem/den zum Verzehr geeigneten Bestandteil(en) der Zubereitung, in einer Menge, die ausreicht, um eine antimikrobielle Wirkung zu erzielen, vorzugsweise um eine synergistische antimikrobielle Wirkung zu erzielen, vorzugsweise um eine antimikrobielle Wirkung, vorzugsweise um eine synergistische antimikrobielle Wirkung, gegen einen oder mehrere Keime ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus

Dekkera bruxellensis, Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida pseudointermedia, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomy- codes ludwigii, Zygosaccharomyces bailii und Pichia sp.,

Aureobasidium sp., Alternaria alternata, Aspergillus brasiliensis, Aspergillus fumigatus, Cladosporium sp., Fusarium sp. Rhodotorula sp., Sporidiobolus sp., Sporobolomyces sp., Paecilomyces sp. und Penicil- lium sp., zu erzielen, weiter bevorzugt um eine antimikrobielle Wirkung, vorzugsweise um eine synergistische antimikrobielle Wirkung, gegen einen, mehrere oder sämtliche Keime ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus S. cerevisiae, Z. bailii, C. albicans, A. pullulans und A. brasiliensis, zu erzielen.

Auch hierbei gilt für bevorzugte Ausgestaltungen der enthaltenen Mischung das oben für bevorzugt erfindungsgemäß zu verwendende Mischungen Gesagte entsprechend. Entsprechendes gilt für bevorzugte Ausgestaltungen der zu behandelnden Zubereitungen.

Im Folgenden wird die vorliegende Erfindung anhand ausgewählter Beispiele näher erläutert, ohne den Gegenstand der vorliegenden Erfindung hierauf zu beschränken. Soweit nicht anders angegeben, beziehen sich hierbei alle %-Angaben auf das Gewicht (Gew.-%). Beispiele:

1. Punica qranatum Extrakt (GRAV

Es wird ein Granatapfelschalenextrakt hergestellt, indem Granatäpfel halbiert und ausgepresst und die verbleibenden Schalenreste anschließend mit 50°C warmen Wasser homogenisiert werden. Die Maische wird anschließend abgepresst. Der erhaltene Extrakt (Filtrat) wird anschließend destillativ aufkonzentriert.

Der erhaltene, aufkonzentrierte Extrakt enthält u.a. folgende Bestandteile:

' Bestimmung der Flächenprozent mittels UPLC-NQAD

Für eine anschließende Herstellung einzelner Fraktionen des aufkonzentrierten Extrakts kann beispielsweise eine Membranfiltration zum Einsatz kommen.

Zur Herstellung der Membranfiltrate aus dem Granatapfelschalenextrakt wurde eine auf Polyethylenglycol basierte Flachmembran mit einer Membranfläche von 26 cm ² und einem cutoff von 2500 Da mit Reinstwasser unter 30 bar zweimal für 20 Minuten gespült. In den Feedbehälter wurde eine 1 %ige Extraktlösung (200 g) vorgelegt, auf 30 °C erwärmt sowie mit 30 bar Druck beaufschlagt. Nach Durchlauf von 138,23 g wurde mit 100 g Wasser rückverdünnt und erneut filtriert. Die Membranfiltrate wurden gefriergetrocknet und es wurde ein Permeat mit 16,8 % und ein Retentat mit 65,8 % Ausbeute erhalten. Die erhaltenen Fraktionen wurden anschließend massenspektrometrisch auf ihre Bestandteile untersucht. Die erhaltenen Fraktionen enthalten u.a. folgende nichtflüchtige Bestandteile:

2. Roter Beerenextrakt - Mischung aus Vaccinium macrocarpon, Vaccinium anqustifoliunn und Fraqaria x anapassa (ROBE):

Es wird ein Extrakt hergestellt, indem Früchte von Vaccinium macrocarpon, Vaccinium angustifolium und Fragaria x anapassa gemaischt und anschließend ein Filtrat nach Abpressung gewonnen wird. Anschließend wird das Filtrat (Extrakt) destillativ aufkonzentriert.

Der erhaltene, aufkonzentrierte Extrakt enthält u.a. folgende Bestandteile:

¹ Bestimmung der Flächenprozent mittels UPLC-NQAD

3. Vitis vinifera Extrakt (Traubenkernextrakt):

Es wird ein Extrakt hergestellt, indem zunächst Traubenkerne vermahlen werden. Dann wird mit Wasser bei 50°C extrahiert und filtriert, um den Extrakt zu erhalten. Anschließend wird der erhaltene Extrakt destillativ aufkonzentriert.

Der erhaltene, aufkonzentrierte Extrakt enthält u.a. folgende Bestandteile:

¹ Bestimmung der Flächenprozent mittels UPLC-NQAD

Für eine anschließende Herstellung einzelner Fraktionen des aufkonzentrierten Extrakts kann eine Membranfiltration und/oder zum Einsatz kommen.

Für die Herstellung der Membranfiltrate aus dem Traubenkernextrakt wurde eine auf Polyethylenglycol basierte Flachmembran mit einer Membranfläche von 26 cm ² und einem cutoff von 2500 Da mit Reinstwasser unter 30 bar zweimal für 20 Minuten gespült. In den Feedbehälter wurde eine 1 %ige Extraktlösung (200 g) vorgelegt, auf 30 °C erwärmt sowie mit 30 bar Druck beaufschlagt. Nach Durchlauf von 138,23 g wurde mit 100 g Wasser rückverdünnt und erneut filtriert. Die Membranfiltrate wurden gefriergetrocknet und es wurde eine Permeat mit 7,6 % und ein Retentat mit 58,8 % Ausbeute erhalten.

Alternativ oder ergänzend können eine polare und eine unpolare Fraktion gewonnen werden, z.B. mittels chromatographischer Methoden.

Für die Herstellung einer polaren und einer unpolaren Fraktion wurde eine Lösung aus 100 mg Traubenkernextrakt in 1 mL entionisiertem Wasser hergestellt und auf die mit Wasser/Ethanol (90/10) vorkonditionierte präparative HPLC (PRP-1 Säule 250x21 ,5 mm; 10 pm Partikelgröße) Säule bei einer Flussrate von 10 mL/Minute gegeben. Als Laufmittel wurden entionisiertes Wasser und Ethanol (99,5%) bei einer Ofentemperatur (60°C isotherm) eingesetzt. Es wurde erst für 25 min mit Wasser/Ethanol (90/10) eluiert. Danach erhöhte sich der Ethanolanteil innerhalb von zehn Minuten um zehn Prozentpunkte auf 20 % und wurde für zehn Minuten konstant gehalten. Im Anschluss wurde der Ethanolanteil auf 100 % innerhalb von fünf Minuten erhöht und für fünf Minuten gehalten. Die polare Fraktion wurde bei einer Laufzeit von 10 bis 36 Minuten und die unpolare Fraktion wurde von 37 bis 55 Minuten Laufzeit aufgefangen. Die Ausbeute der polaren Fraktion betrug 48 % und der unpolaren Fraktion 28 %.

Die erhaltenen Fraktionen wurden anschließend massenspektromethsch auf ihre Bestandteile untersucht. Die erhaltenen Fraktionen enthalten u.a. folgende nichtflüchtige Bestandteile:

4. Untersuchungen zur antimikrobiellen Wirkung unterschiedlicher Extrakte:

Zur Untersuchung der antimikrobiellen Wirkung unterschiedlicher Extrakte allein, d.h. ohne erfindungsgemäße Kombination mit Bestandteil (B), wurden beispielhafte Extrakte, wie in den Beispielen 1 bis 3 beschrieben, eingesetzt. Hierfür wurden die Extrakte in Citratpuffer bei pH 3 mit 500 mg/kg gelöst. Die Proben wurden mit 5,63 x 10 ⁴ KBE/mL S. cerivisiae, 1 ,89 x 10 ⁴ Z. bailii und 3,75 x 10 ⁴ C. albicans beimpft. Anzahl der KBE/mL nach Tag

Inokulum

S. ceri- 1 7 14 21 28 visiae (KBE/mL)

ROBE 5,63 x 10 ⁴ 1 ,0 x 10 ³ 0 0 0 0

GRA 5,63 x 10 ⁴ 4,0 x 10 ⁴ 0 0 0 0

Z. bailii

ROBE 1 ,89 x 10 ⁴ 4,0 x 10 ³ 1 ,0 x 10 ² 0 0 0

GRA 1 ,89 x 10 ⁴ 4,0 x 10 ² 7,0 x 10 ¹ 0 0 0

C. albicans

ROBE 3,75 x 10 ⁴ 4,0 x 10 ³ 4,0 x 10 ⁴ 4,0 x 10 ⁴ 4,0 x 10 ⁴ 7,0 x 10 ⁴

GRA 3,75 x 10 ⁴ 1 ,0 x 10 ³ 4,0 x 10 ³ 4,0 x 10 ³ 3,3 x 10 ³ 7,0 x 10 ³

A. pullu- lans

ROBE 2,5 x 10 ⁴ 7,0 x 10 ² 4,0 x 10 ¹ 4,0 x 10 ⁴ 1 ,0 x 10 ³ 4,0 x 10 ²

GRA 2,5 x 10 ⁴ 1 ,0 x 10 ² 7,0 x 10 ¹ 7,0 x 10 ² 7,0 x 10 ¹ 0

A. brasil- iensis

ROBE 1 ,0 x 10 ⁴ 3,7 x 10 ³ 7,0 x 10 ¹ 1 ,0 x 10 ² 4,0 x 10 ¹ 4,0 x 10 ¹

GRA 1 ,0 x 10 ⁴ 7,0 x 10 ¹ 3,7 x 10 ² 1 ,0 x 10 ² 4,0 x 10 ¹ 3,7 x 10 ²

Bei S. cerivisiae wurden nach 24 h Bebrütungszeit geringere Keimzahlen ermittelt. Nach 7 Tagen stellte sich das Wachstum ein. Bei Z. bailii wurden geringere Keimzahlen nach 7 Tagen ermittelt und ab 14 Tagen hatte keine erneute Kolonienausbildung stattgefunden.

C. albicans hielt den Extrakten über die 21 Tage stand.

A. pullulans konnte während der 28 Tage reduziert werden. Für GRA konnte sogar eine 100% Reduktion nach 28 Tagen beobachtet werden.

A. brasiliensis konnte nach 28 Tagen mit geringeren Keimzahlen detektiert werden.

Wie sich aus den Ergebnissen weiter unten (s. Beispiel 7) ergibt, kann die antimikrobielle Wirksamkeit der Extrakte durch Kombination mit einem hierin beschriebenen Bestandteil (B) verbessert werden.

5. Weitere Untersuchungen zur antimikrobiellen Wirkung ausqewählter Extrakte und Fraktionen davon:

Für weitere Untersuchungen der antimikrobiellen Wirkung unterschiedlicher Extrakte allein, d.h. ohne erfindungsgemäße Kombination mit Bestandteil (B), oder Fraktionen davon wurden beispielhafte Extrakte oder Fraktionen davon, wie in den Beispielen 1 und 4 beschrieben, eingesetzt. Die Extrakte bzw. Fraktionen davon wurden in Phosphatpuffer bei pH 5 entsprechend der in der Tabelle angegebenen Dosage gelöst. Die Proben wurden mit 3,8 x 10 ⁴ KBE/mL S. cerevisiae beimpft.

Die Negativkontrolle führte zu keiner signifikanten Reduktion der Keimzahl.

Die Positivkontrolle mit 375 mg/kg Kaliumsorbat zeigte allerdings ebenfalls keine signifikante Reduktion der Keimzahl. Dies liegt zum einen darin begründet, dass Sorbinsäure im Vergleich zu pH 3 wie in Anwendungsbeispiel Tabelle 2 nur in geringem Maße in seiner wirksamen undissoziierten Form vorliegt und bei pH 5 das Wachstumsoptima zwischen pH 4 und 6 von S. cerevisiae eintritt.

Für den Punica granatum Extrakt (und für das Vitis vinifera Extrakt) ist keine signifikante Reduktion der Keimzahlen von S. cerevisiae zu beobachten. Umso überraschender war es, dass durch Fraktionierung der Extrakte eine Hemmung des antimikrobiellen Wachstums, d.h. Reduktion der Keimzahl um log2 zu beobachten war. So wurde die Keimzahl durch Zugabe von 200 mg/kg der unpolaren Fraktion von Vitis vinifera Extrakt und durch Zugabe von 200 mg/kg Punica granatum Membranfiltrat > 2500 Da signifikant reduziert.

Wie sich aus den Ergebnissen weiter unten (s. Beispiel 7) ergibt, kann die antimikrobielle Wirksamkeit der Extrakte durch Kombination mit einem hierin beschriebenen Bestandteil (B) verbessert werden.

6. Zusammenwirken von Extrakten und Aromen:

Die Bespiele zeigen, dass durch Zusatz bestimmter Aromen der sensorische Eindruck des Produktes, welches mit den oben genannten Extrakten versetzt wurde, unter Erhalt produktcharakterisierender Geruchs- und Geschmacksnoten verbessert wird. Dabei hat sich herausgestellt, dass unerwünschte Begleitnoten der Pflanzenextrakte wie bitter, adstringierend, metallisch in Kombination mit den Aromen in sensorisch positiv wahrgenommene Attribute wie saftiger, vollmundiger, süßer und komplexer umgewandelt werden können. Entsprechendes gilt für die Kombination von hierin beschriebenen Fraktionen solcher Extrakte mit den hierin beschriebenen Aromen. Um die gewünschte Wirkung zu optimieren, kann der Fachmann je nach Matrix unterschiedliche Dosagen testen und verwenden.

Für einen weiteren Test wurde ein stilles Wasser, zusammengesetzt aus 60 mg/kg Acesulfam-K, 60 mg/kg Sucralose, 0,15 g/100g Zitronensäure, 200 mg/kg GRA (Bsp. 1 ) und 0,1 g/100g Kirsch-Aroma, verwendet. Es wurden Aromastoffe und Aromastoffmischungen mit der unten beschriebenen Wirkung zugesetzt und mit dem sensorischen Profil der Base ohne Zusatz verglichen:

Im Rahmen eines weiteren Tests wurde die antimikrobielle Wirkung von Aroma- und Extrakt-Kombinationen untersucht. Die nachfolgende Tabelle zeigt die Auswertung eines Keimbelastungstests analog zu den Versuchen aus Beispielen 5 und 6, mit dem Unterschied, dass die Mischung auf reinem Wasser bei pH 7 angesetzt wurde. So wirken beispielsweise Traubenkernextrakt und der Aromastoff Vanillinsäure unterschiedlich gut gegen Hefen. In der Kombination dagegen ist auch eine Wirkung gegen Pilze und eine optimale Wirkung gegen Hefen festzustellen. Der Granatapfel- und rote Beerenextrakt wirken bei pH 7 im Vergleich zu pH 3 schwächer (vgl. Bsp. 5) so eliminiert der Granatapfelextrakt bei 1000 mg/kg S. cerevisiae in weniger als 14 Tagen. In Kombination mit limonenhaltigen Citronenölen lässt sich die Wirkung der Extrakte bei höherem pH dagegen steigern.

1 ) der Gehalt an Limonen der Citronenöle beträgt zwischen 70 % und 1 %. 7. Anwendunqsbeispiele:

Die erfindungsgemäß zu verwendenden Mischungen bzw. Kombinationen können in einer Vielzahl von Zubereitungen zum Einsatz kommen. Beispielhaft sei hierzu auf Folgende Applikationsmöglichkeiten verwiesen (anstelle der beispielhaft genannten Extrakte können auch andere hierin beschriebene Extrakte oder Fraktionen davon zum Einsatz kommen):

7.1 Getränk mit Kirschgeschmack (zuckerfrei):

1 )der Extrakt enthält 8,3 g/kg Ellagsäure und 4,7 g/kg Gallussäure

7.2 Getränk mit Kirschgeschmack (zuckerhaltig):

1 )der Extrakt enthält 8,3 g/kg Ellagsäure und 4,7 g/kg Gallussäure

7.3 Biermixgetränk mit Grapefruitgeschmack (< 0, 1 Vol.% Alk.):

1 ) der Extrakt enthält 10,3 g/kg Gallussäure

7.4 alkoholfreies Malzgetränk (< 0, 1 Vol.% Alk.):

1 ) der Extrakt enthält 10,3 g/kg Gallussäure

7.5 Tomatenketchup:

1 ) der Extrakt enthält 2,2 g/kg Chlorogensäure

7.6 Salatcreme (ca. 55 Gew.% Wasser):

1) der Extrakt enthält 8,1 g/kg Chlorogensäure