El complejo vegetal antipolucion de esta invención presenta, concretamente, acción antioxidante, acción quelante, acción protectora y/o estabilizante de membranas celulares, acción anti-citotóxica y acción hidratante, por lo que puede utilizarse como componente activo en composiciones farmacéuticas y/o cosméticas para proteger y prevenir la acción de los contaminantes ambientales, como activo anti-envejecimiento y para proteger frente a los cambios metereológicos y mejorar la piel, cabellos y anejos cutáneos. El complejo según la invención se caracteriza por inhibir los radicales libres, quelar metales, estabilizar la membranas celulares frente a agresiones externas y proteger frente a los cambios climáticos.

La piel es un órgano de vital importancia, de estructura compleja y de múltiples funciones, cuya superficie llega casi a los 2 m2. Ocupa una posición de frontera o interfase, limitando nuestro cuerpo del medio externo y desempeñando numerosas funciones, en especial de protección, actuando como barrera, manteniendo el medio interno y protegiendo al organismo de las agresio- nes fisicas, quimica y microbiológicas, manteniendo la homeotermia corporal y protegiendo de la radiación ultravioleta.

Los procesos industriales, el transporte, la combustión de carburante y la eliminación de los residuos sólidos son las principales fuentes de contaminación.

Esta es una problemática que afecta cada dia a más número de individuos y provocando efectos nocivos tanto a nivel interno como a nivel externo.

Los contaminantes ambientales, ya sean gases, partículas o metales pesados, causan efectos mesurables sobre los seres vivos y los materiales, provocando irritación en la piel y en las mucosas y problemas respiratorios. A nivel cutáneo, los efectos se manifies- tan en primer lugar en las capas más externas de la piel, pudiendo llegar en casos extremos a la aparición de necrosis de estos tejidos.

La radiación solar es fuente de energía fundamental, de vital importancia para los organismos vivos. Sin embargo, un exceso de la misma conlleva una serie de efectos negativos a corto (quemaduras) y a largo plazo (envejecimiento, elastosis, cancer). Las radiacio- nes W son generadoras de sustancias reactivas (radicales libres), que solas y/o conjuntamente con agentes externos y xenobioticos pueden desencadenar procesos de oxidación lipídica. Estos procesos tienen lugar principalmente sobre las membranas celulares desencadenando reacciones en cadena y generando a su vez más especies reactivas lo que provoca una desestabilización de estas membranas.

La piel actúa de interfase entre el cuerpo y el entorno, está siempre en contacto con el oxigeno del aire, expuesta a las radiaciones W y a la influencia de los agentes ambientales (gases y metales pesados) y agentes químicos.

El incremento de la tasa de agentes químicos y contaminantes presentes, juntamente con la disminución de la capa de ozono hace que cada vez más la piel se vea sometida a mayor número de agresiones y si a ésto le

añadimos que con el paso del tiempo la piel disminuye su grosor, perdiendo al mismo tiempo la flexibilidad y rigidez que la caracteriza hace necesario la utilización de activos eficaces en este campo.

Por tanto, seria deseable poder disponer de un producto que exhiba una efectividad demostrada sobre los distintos tipos de compuestos involucrados en la contami- nación atmosférica : metales pesados y gases contaminan- tes.

Por el estado de la técnica se conocen ya composiciones cosméticas que comprenden ingredientes activos de origen animal, sintético o biosintético. En este sentido, cabe anticipar aquí el producto activo según la presente invención es totalmente de origen vegetal.

Asi, en la Patente US 5.571.503 se describen formulaciones cosméticas con acción protectora frente a contaminantes ambientales, UVA, UVB y con acción contro- ladora del sebo. Sin embargo, este documento no describe ni sugiere que las formulaciones allí descritas sean activas contra metales pesados.

En WO 92/17160 se describe el uso de esfingolípidos en la preparación de una composición cosmética con acción protectora frente a contaminantes ambientales por metales pesados (Cd, Pb, Hg) y en sentido amplio frente a todos los contaminantes atmosféricos. Sin embargo, los componentes activos allí descritos (derivados de lípidos) son completamente diferentes de los usados en la presente invención, como más adelante se indicará con mayor detalle. Por otro lado, las composiciones de la presente invención requieren una concentración de ingrediente activo menor de la mencionada en dicho documento, para lograr una actividad demostrada in vitro, como se expondrá más adelante.

La Patente FR 92 02611 describe una formulación cosmética que contiene entre 9 y 12 componentes activos conjuntamente que, al parecer, tienen actividad contra las agresiones atmosféricas, pero en ninguna parte de ese documento se aportan pruebas que confirmen la eficacia de tales formulaciones. De este modo, la FR 92 02611 requiere el uso de un total de 9-12 ingredientes activos para reivindicar una acción anti- contaminación no demostrada. Además, el producto activo de la presente invención es hidrosoluble, de total solubilidad y muy fácil incorporación, y permite la formulación de todo tipo de productos cosméticos y/o farmacéuticos, incluyendo geles acuosos monofásicos, lo que no permite la combinación de los 9-12 ingredientes ya que algunos de ellos son hidrosolubles y algunos liposo- lubles.

Lo mismo ocurre en US 5.571.503 en donde se emplea una multitud de ingredientes para lograr la finalidad alli preconizada. Por otro lado, esta referen- cia se limita a una fórmula cosmética en emulsión.

En consecuencia, el estado de la técnica antes mencionado se refiere a productos activos sólo contra metales pesados o contra gases, pero no contra los dos tipos conjuntamente.

Se ha demostrado que los efectos nocivos de la contaminación ambiental se combinan en la piel con los de la radiación solar W y otras agresiones ambientales climáticas, incrementando estos efectos.

También se ha demostrado que, en el mecanismo de la acción tóxica de los metales pesados, está involu- crada la generación de radicales libres y la desestabili- zación de las membranas biológicas. Por ello es importan- te también la acción contra los radicales libres y contra la deshidratación dérmica. En este sentido, el producto de esta invención combina la acción antipolución con las

acciones hidratante y anti-radicales libres. Las patentes anteriormente citadas no describen o sugieren la totali- dad de éstas acciones en ninguno de los casos.

Ahora y según la presente invención, se proporciona un complejo activo de origen vegetal que presenta acción antioxidante, acción quelante, acción protectora y/o estabilizante de membranas celulares, acción anti-citotóxica y acción hidratante, que puede utilizarse como ingrediente activo para proteger y prevenir la acción de los contaminantes ambientales, como activo anti-envejecimiento y para proteger frente a los cambios metereológicos y mejorar la piel, cabellos y anejos cutáneos. Este producto activo, según la inven- ción, se caracteriza por inhibir los radicales libres, quelar metales, estabilizar la membranas celulares frente a agresiones externas y proteger frente a los cambios climáticos.

El complejo activo antipolución de la presente invención está constituido por una serie de extractos vegetales seleccionados con el fin de proporcionar principios activos con una acción antioxidante frente a la generación de radicales libres, un efecto quelante sobre los metales pesados, una protección y/o estabiliza- ción de las membranas celulares de la piel frente a la agresión de los agentes externos, una acción anti- citotóxica y una acción hidratante.

Por tanto y según un primer aspecto, la presente invención proporciona un complejo vegetal antipolución caracterizado porque comprende : -un extracto de frutas que aportan azúcares y polisacáridos como principios activos para la protección y/o estabilización de las membranas celulares de la piel frente a la agresión de los agentes externos; -una fase liquida derivada de un extracto de plantas que aportan sapogeninas y/o flavonoides como

principios activos con acción antioxidante frente a la generación de radicales libres; y -un fase liquida derivada de un extracto de cereales y/o leguminosas que aportan ácidos dicarboxili- cos, hidroxiácidos, ácidos polifosfóricos, aminoácidos, péptidos, proteínas y porfirinas como principios activos con acción quelante para secuestrar metales pesados.

En una modalidad preferida de la presente invención, el complejo vegetal antipolución comprende : -un extracto de frutas seleccionadas del grupo consistente en manzana, pera, naranja, naranja amarga, pomelo, limón y mezclas de las mismas que aportan pectinas como principios activos para la protección y/o estabilización de las membranas celulares de la piel frente a la agresión de los agentes externos; -una fase liquida derivada de un extracto de plantas seleccionadas del grupo consistente en Raíz de regaliz, Semillas de Castaño de Indias, Planta de Centella entera, Raíz de Ginseng, Raíz de Eleuterococo y mezclas de las mismas y/o de plantas seleccionadas del grupo consistente en Frutos de Cardo Maria, Hojas de Ginkgo, Frutos de Rutáceas, Flores de Primavera, Flores de espino blanco y mezclas de las mismas que aportan, respectivamente, sapogeninas y/o flavonoides como principios activos con acción antioxidante frente a la generación de radicales libres; y -una fase liquida derivada de un extracto de trigo y/o cebada que aportan hexafosfato de inositol como principo activo con acción quelante para secuestrar metales pesados.

Según otro aspecto, la presente invención proporciona un procedimiento para la obtención del complejo vegetal antipolución caracterizado porque comprende :

(1) preparar el extracto de frutas mediante las etapas de : -lavar las frutas con agua desionizada, triturarlas y eliminar entonces los jugos; -extraer pulpa a un pH de 1,5 a 3 y a temperaturas entre 60 y 100°C; -opcionalmente, concentrar el extracto resultante; -filtrar y/o centrifugar la solución extractiva acida; y -mantener el extracto (Extracto A) en agitación constante, a una temperatura inferior a 60°C y a un pH inferior a 4; (2) preparar la fase liquida del extracto de plantas mediante las etapas de : -molturar y disgregar las plantas que contienen sapogeninas (Raíz de regaliz y/o Semillas de Castaño de Indias y/o Planta de Centella entera y/o Raiz de Ginseng y/o Raíz de Eleuterococo) y/o plantas que contienen flavonoides (Frutos de Cardo Maria y/o Hojas de Ginkgo y/o Frutos de Rutáceas y/o Flores de primavera y/o Flores de espino blanco); -realizar la extracción por maceración con un disolvente de extracción hidroalcohólico que contiene entre 50-70% en peso de alcohol etílico, manteniendo una relación planta/disolvente de extracción de 1 : 2 o de 1 : 2,5, según el caso, a una temperatura no superior a 50°C y por espacio de 24 horas; -separar los liquidos de extracción y repetir el proceso de extracción; -reunir los líquidos de extracción, filtrando previamente para eliminar cualquier partícula en suspen- sión y obtener así una solución nitida y transparente (Fase B) cuyo pH deberá situarse alrededor de 5;

(3) añadir la Fase B al Extracto A con agitación y a una temperatura inferior a 60°C; (4) preparar la fase liquida del extracto de cereales y/o leguminosas mediante las etapas de : -limpiar los cereales y/o leguminosas para eliminar partículas extradas, partículas de polvo y semillas ajenas y realizar luego un acondicionamiento a temperaturas inferiores a 65°C; -molturar hasta obtener un diámetro de partícula entre 250-20ut (harina); -realizar la extracción por maceración con un disolvente acuoso ligeramente adicificado; -filtrar los líquidos de extracción hasta obtener una solución totalmente transparente (Fase C) (5) añadir la Fase C al Extracto A con agitación y a una temperatura inferior a 40°C; y (6) agitar la mezcla de Extracto A, Fase B y Fase C hasta la total homogenización y neutralización y obtener asi el complejo vegetal antipolución.

Según un aspecto más, la presente invención proporciona una composición farmacéutica y/o cosmética provista de acción protectora de la piel, cabellos, uñas, mucosas y vias respiratorias, individual o colectivamen- te, contra los efectos nocivos de la contaminación atmosférica y de la radiación solar W y cambios metereo- lógicos, caracterizada porque comprende una mezcla del complejo vegetal antipolución anteriormente descrito con otros ingredientes, aditivos y/o excipientes.

La invención será ahora descrita a través de los siguientes ejemplos de preparación del complejo vegetal antipolución y de formulaciones farmacéuticas y/o cosméticas que incorporan dicho compleho vegetal. Ha de entenderse que tales ejemplos se ofrecen solo con fines

ilustrativos y de ningún modo limitativos del alcance de la invención.

Ejemplo 1 Preparación del Complejo Vegetal Antipolución En primer lugar, se realiza el lavado con agua desionizada de las frutas (manzana, pera, naranja, naranja amarga, pomelo, limón), trituración y posterior eliminación de los jugos. A continuación, se procede a su extracción a pH francamente ácido (1,5-3.0) y temperatu- ras superiores a 60°C, que no deben sobrepasar en nigún caso los 100°C. Finalmente, la solución extractiva acida se filtra y/o centrifuga. En algunos casos puede concen- trarse en primer lugar, filtrarse y centrifugarse a continuación. Este extracto (que llamaremos A) se mantiene en agitación constante, a temperatura inferior a 60 8C y pH inferior a 4 y se le adiciona la fase B y la fase C tal como se describe en su preparación.

Para la obtención de la fase B, se procede en primer lugar a la molturación y disgregación de las plantas que contienen sapogeninas (Raiz de regaliz y/o Semillas de Castaño de Indias y/o Planta de Centella entera y/o Raiz de Ginseng y/o Raíz de Eleuterococo) y/o plantas que contienen flavonoides (Frutos de Cardo Maria y/o Hojas de Ginkgo y/o Frutos de Rutáceas y/o Flores de primavera y/o Flores de espino blanco). A continuación se procede a realizar la extracción por maceración mediante un solvente de extracción hidroalcohólico que contiene entre 50-70% en peso de alcohol etílico, manteniendo una relación planta-solvente de extracción de 1 : 2 ó 1 : 2,5 según el caso, a una temperatura no superior a 50°C. El proceso de extracción se prolonga por espacio de 24 horas. Tras separar los líquidos de extracción se repite este mismo proceso de extracción. Finalmente, se unen los líquidos de extracción, realizando en primer lugar una

filtración sobre telas para eliminar cualquier partícula en suspensión y a continuación una filtración sobre filtros prensa para obtener una solución nitida y transparente cuyo pH deberá situarse alrededor de 5. Esta fase, que llamaremos B, se adiciona al extracto A mediante agitación y temperatura inferior a 60°C.

Para la preparación de la fase C, se parte de uno o varios de los frutos de cereales y/o leguminosas.

En primer lugar se procede a una limpieza para eliminar articulas extrañas, partículas de polvo y semillas ajenas y posteriormente se somete a un acondicionamiento a temperaturas inferiores a 65QC. Después, se procede a su molturación mediante molino de rodillos u otro sistema, hasta obtener el diámetro de partícula entre 250-20Tm (harina). Seguidamente, se realiza la extracción por maceración mediante solvente acuoso ligeramente adicificado (pH 4-5). Finalmente, los líquidos de extracción se filtran hasta obtener una solución total- mente transparente. Esta fase, que llamaremos C, se adiciona mediante agitación mecánica al extracto A a temperatura inferior a 40oC.

Una vez se adicionan las fases B y C al extracto A, se continua agitando hasta la total homogeni- zación y neutralización para obtener el complejo vegetal antipolución.

Ejemplos de Formulaciones Farmacéuticas y/o Cosméticas

GEL DE BANJO Agua 24, 7 Sodium Lauril éter sulfate 28% 55,0 Conservante 0,05 PEG-4 Rapessedamide 0,3 Cocamido propyl Betaine 30% 16,0 PEG-7 Glycerylcocoate 1,0 COMPLEJO VEGETAL ANTIPOLUCION 2,0 Perfume 0,5 Trietanolamina 99% 0,06 CI 16035 0,04 CI 19140 0,2 Cloruro sódico 0,15 JABON LIQUIDO Agua 55, 87% Hydroxypropyl Guar Hydroxypropyltrimonium Chloride 0,2 Acido citrico 0,03 TEA Lauril sulfato 40%30,0 Conservante 0,5 Cocamidopropyl Betaine 30% 8,0 Dimethicone Copolyol 0,5 PEG-7 Glyceryl cocoate 0,5 Decyl Polyglucose 50% 2,0 Perfume 0,4 COMPLEJO VEGETAL ANTIPOLUCION 2,0 CHAMPU Agua 42, 1% Conservante 0,5 Cocamidopropyl Betaine 30% 4,0 Cocamidopropylamina Oxide 30% 5,0 Sodium LauriléterSulfosuccinato 30% 17,0 Cocamido MEA 1,3 Sodium C14-16 Olefin sulfonate 37% 12,0 Agua 15,0

Acido láctico 0, 1 Cloruro sódico 0,5 Perfume 0,5 COMPLEJO VEGETAL ANTIPOLUCION 2,0 CHAMPU-ACONDICIONADOR Hydroxypropyl Guar Hydroxypropyltrimonium Chloride 0,1% Agua 42,83 Acido láctico 0,2 Sodium Lauril éter Sulfato 27% 32,0 Conservante 0,5 Polyquaternium-39 1,5 Cocamidopropyl Betaine 30% 6,0 Stearamine oxide 25% 1,5 Decyl Polyglucose 50% 5,0 Glycol Distearate (20%); LESS (5) %; Cocamido DEA (10%) 2,0 Peg-55 Propylen Glycol Oleate (50%) 0,8 COMPLEJO VEGETAL ANTIPOLUCION 3,0 Perfume 0,3 Styrene/Acrylate Copolymer 0,5 Agua 3,0 Cloruro sódico 0,7 CI 19140 0,07 TONICO CAPILAR Agua 65,11 Alcohol denat 30,0 PVP/VA Copolymer 2,5 Conservante 0,2 PEG-40 Hydrogenated Castor Oil 0,5 Perfume 0, 1 Triethanolamina 50% 0,02 COMPLEJO VEGETAL ANTIPOLUCION 1,5 CI 16225, CI 47005, CI 42051 0,06 CI 19140 0,01

AFTER SHAVE BALSAMO Agua 72,2% Acrylates/C10-30 Alquil Acrylates Crosspolymer 0,3 Glycerina 2,0 Aloe barbadensis 8,0 Triethanolamina 99% 0,15 Agua 0,15 Alcohol denat. 10,0 Menthol 0,2 BHT 0, 05 Conservante 0,5 PPG-15 Stearyl Ether 3,0 Perfume 1,25 Bisabolol 0,1 COMPLEJO VEGETAL ANTIPOLUCION 2,0 Disodium EDTA 0,1 CREMA SOLAR SPF 20 PEG-100 Stearate 50%; Glyceryl Stearate 50% 6, 0% Petrolatum 5,0 Cetyl Alcohol 2,5 Paraffinum Liquidum 9,0 Octyl Methoxycinnamate 9,0 Benzophenone-3 3,5 Triticum vulgare 1,5 BHT 0,1 Agua 55, 4 Propylene Glycol 2,0 Conservante 0,7 Perfume 0,3 COMPLEJO VEGETAL ANTIPOLUCION 2,0 Titanium Dioxide 3,0 LECHE SOLAR PROTECCION MEDIA Glyceryl Stearate; Ceteth-20 3, 0%

Stearyl alcohol; Steareth 7; Steareth 10 2,5 Cetyl Alcohol 1,0 Caprylic/Capric Triglyceride 4,0 BHT 0,1 Triticum vulgare 3,0 Benzophenone-3 1,0 Paraffinum Liquidum 7,0 Octyl Methoxycinnamate 4,0 Agua 72,35 Perfume 0,35 Conservante 0,7 COMPLEJO VEGETAL ANTIPOLUCION 1, 0 TONICO FACIAL Agua 79t3% Rosa canina 15,0 Conservante 0,5 Propylene Glycol 2,5 COMPLEJO VEGETAL ANTIPOLUCION 2,0 Perfume 0,1 PEG-40 Hydrogenated Castor oil 0,6 CI 16035 c. s CREMA HIDRATANTE Steareth-2 2,4% Steareth-21 1,6 PEG-15 Stearyl Ether 4,0 Paraffinum liquidum 3,0 Conservante 0,6 Cetyl alcohol 3,0 Benzophenone-3 0,5 Triticum vulgare 1, 0 BHT 0,1 Cera alba 1,0 Propylene Glycol 2,5 Agua 75, 9

DimethiconeCopolyol 2,0 Perfume 0,4 COMPLEJO VEGETAL ANTIPOLUCION 2,0 GEL-CREMA Glicerina 2, 5% Agua 77, 3 Acrylates C/10-30 Alkyl-Acrylate Crosspolymer 0,4 Carbomer 0,35 Conservante 0,5 BHT 0,1 Octyl cocoate 6,0 Dimethicone copolyol 1,0 Caprylic/Capric Triglyceride 3,0 Triticum vulgare 3,0 Perfume 0,2 Trietanolamina (99æ) 0,65 COMPLEJO VEGETAL ANTIPOLUCION 5,0 MAQUILLAJE Cetyl Dimethicone Copolyol 2, 0% Polyglyceryl-3 Oleate 0,75 Cetyl Dimethicone 2,0 Octyl Palmitate 3,0 Hydrogenated Castor Oil 0,4 Beeswax 0,8 Decyl Oleate 1,0 Dimethicone 350 cst 0,25 Octyl Stearate 3,0 Cyclomethicone 15,0 Brown Iron Oxides 0,3 Red, Yellow, Black, Titanium Dioxide 2,1 Water 64,9 Sodium chloride 0,5 Propylene Glycol 2,0

COMPLEJO VEGETAL ANTIPOLUCION 2,0 AGUA ATOMIZADORA Agua 91,4% Acrylates C/10-30 Alkyl-Acrylate Crosspolymer 0,05 Conservante 0,05 Quarternium-15 0,05 Perfume 0,2 PEG-40 Hydrogenated Castor Oil 1,1 Agua 1,0 COMPLEJO VEGETAL ANTIPOLUCION 5,0 Dimethicone Copolyol 0,4 Trietanolamina (99%) 0,75 Para evaluar la eficacia del complejo vegetal antipolución, se procedió a realizar una serie de tests Cin-vitro e Cin-vivo para conocer en primer lugar el efecto sobre el tejido cutáneo de los contaminantes ambientales sobre los sistemas modelo elegidos y a continuación evaluar el efecto protector de este complejo vegetal.

Para la realización de los estudios Cin-vitro, se eligieron los sistemas modelos de liposomas y de cultivos celulares de fibroblastos.

Los liposomas se utilizan como modelo alternativo para el estudio de la peroxidación lipídica mediante el uso de membranas artificiales. Debido a la gran difi- cultad de trabajar con membranas naturales, se han desarrollado modelos para simular el efecto de las especies de oxígeno reactivas sobre las estructuras biológicas, cuantificar el deterioro producido y estudiar los mecanismos de protección. Los liposomas son vesículas microscópicas de una o más bicapas concéntricas, que contienen compartimentos acuosos en el interior. La composición lipidica de estas vesículas se selecciona en función del tipo de estudio a realizar. En este caso fueron liposomas multilamelares que contiene principal-

mente, ácido oleico (41%), ácido palmítico (22%) y ácido esteárico (18%).

En la primera etapa, se han determinado el efecto de diferentes sales de metales pesados (Pb, Zn, Cd, Hg) en la peroxidación de los lípidos de las membranas celulares mediante el ensayo del acido tiobarbitúrico y a continuación se ha estudiado la inhibición de la peroxidación lipidica por la presencia del complejo vegetal antipolución (250Tg/mL).

El uso del ácido 2-tiobarbitúrico (TBA) para estudiar la evolución de la oxidación lipidica, se basa en la capacidad que tiene este ácido de reaccionar con sustancias que se originan durante la degradación de los hidroperóxidos, Estos compuestos son productos primarios de la oxidación lipidica, los cuales acaban originando dialdehido malónico (MDA). E1 TBA reacciona específica- mente con el MDA dando un producto coloreado cuyo máximo de absorbancia se encuentra a 530 nm.

Los resultados obtenidos en esta primera etapa demuestran que la lipoperoxidación lipidica inducida por metales pesados (Pb, Hg, Zn, Cd) es apreciable a tiempos de incubación largos (72h). E1 complejo vegetal antipolu- ción ejerce una acción protectora sobre la peroxidación lipidica que llega hasta el 40%.

En la segunda etapa, se ha estudiado la citotoxi- cidad de los metales anteriormente citados en cultivos celulares de fibroblastos y se ha evaluado el efecto pro- tector del complejo vegetal antipolución, mediante la viabilidad celular, los cambios morfológicos y niveles de lactato deshidrogenasa (LDH) en el medio de cultivo.

Los cultivos celulares de fibroblastos empleados en esta etapa corresponde a la linea celular Foreskin (ATCC CRL-1635) correspondiente a fibroblastos de piel facial humana que procedía de Boehringer Mannheim. La viabilidad celular se ha determinado mediante el método

de exclusión del azul Tripano y se ha realizado el contaje celular en una cámara de Neubauer. Los cambios morfológicos se han seguido por microscopía electrónica en diferentes periodos de tiempo. Los niveles de LDH se han determinado espectrofotometricamente, utilizando un kit de LDH (LDH MPR 1, Boehringer Mannheim). La lactato deshidrogenasa es un enzima citosólico ubicuo en todos los tipos celulares y cuando existe daño o muerte celular se produce una permeabilización de la membrana citoplas- mática de forma que los enzimas citosólicos se liberan al medio extracelular y por tanto un incremento en su niveles extracelulares.

Los resultados obtenidos en esta segunda etapa demuestran en primer lugar la total ausencia de toxicidad del complejo vegetal antipolución. Este complejo vegetal antipolución (250T1) ejerce un efecto protector que alcanza valores del 78% en contaje celular y del 67% por medida de la actividad de la LDH (Zn 0,3M) y del 20% en contaje celular para el caso del Cd 0,2mM y del 11% en contaje celular para Hg 0,05mM.

Los resultados obtenidos con los gases muestran el efecto citotóxico sobre los cultivos celulares y su efecto activador en los procesos de lipoperoxidación. El complejo vegetal antipolución protege efectivamente frente a esta acción tóxica.

Para comprobar la eficacia"in-vivo"del complejo vegetal antipolución se procedió a la realización de técnicas de pruebas biofísicas"no invasivas". Se midió la hidratación de la superficie cutánea, utilizando dos formulaciones cosméticas, una de las cuales contenía un 2% del principio activo, mientras que la otra era una formulación de control o placebo. Mediante un corneómetro (CM 825 Courage&Khazaka) se registraron los valores de capacitancia de la superficie de la piel. Este método se basa en la constante dieléctrica del agua, normalmente de

81 unidades de capacitancia, mientras que el resto de sustancias presentan valores inferiores a 7 unidades, de tal forma que los cambios de capacitancia medidos son función medible de los niveles de agua, y por tanto de la hidratación de la piel. el experimento fue diseñado como un estudio experimental, aleatorio y doble ciego. Los resultados obtenidos muestran que la utilización de las formulaciones cosméticas y farmacéuticas conteniendo complejo vegetal antipolución incrementan la hidratación de la piel.