【명세서】

【발명의 명칭】

참당귀 추출물을 포함하는 항혈전 조성물 【기술분야】

참당귀 Gi/we/Zca gigas Nakai） 추출물을 포함하는 항혈전용 조성물 （혈소판 응집 억제제） 및 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료용 약학 조성물이 제공된다. 상기 조성물은 위장장애를 일으키지 않는 것을 특징으로 한다.

【배경기술】

혈관계 질환은 혈관이 막히거나 터져서 생기는 모든 질환을 총칭하는 것으로， 뇌혈관계 질환, 심혈관계 질환 （관상동맥 질환）， 동맥경화증， 말초혈관계 질환 등이 있다. 혈관계 질환은 주로 콜레스테롤 등으로 인하여 생성된 혈전에 의한 것이며, 혈소판의 응집을 억제함으로써 치료 효과를 얻을 수 있다. 기존에 혈소판 응집 억제를 위하여 아스피린, 이부브루펜 등의 비스테로이드 항염증제 （Nonsteroidal ant i-inf lammatory drugs ; NSAIDs） 계열 약물이 사용되었다.

아스피린（Aspi r in; 아세틸 살리실산（acetyl sal icyl ic acid , ASA））은 살리실산염 의약품으로， 해열， 진통， 항염 작용을 가지며, 프로트롬빈 생성 억제를 통한 혈소판 응집 억제 효과를 갖기 때문에 뇌졸중 등의 2차 발병을 억제하는 용도로도 사용된다. 그러나, 아스피린 등의 비스테로이드 항염증제 계열 약물은 위궤양과 같은 부작용을 일으킬 수 있고, 특히 위장에서의 과다출혈을 유발하여 위장 장애를 일으킬 수 있는 부작용이 있다.

따라서, 위장 장애를 일으키지 않으면서 혈소판 응집 억제 및/또는 이로 인한 혈관계 질환의 예방 또는 치료 효과가 우수한 약물의 개발이 요구된다. 【발명의 상세한 설명】

【기술적 과제】 \¥0 2019/221571 1 ^> 0'/1 ?2019/006004

일 예는 참당귀 0½ e//ca gigas Nakai ) 주줄물을 유효성분으로 포함하는 항혈전용 약학 조성물 또는 혈소판 응집 억제용 약학 조성물을 제공한다.

다른 예는 참당귀 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료용 약학조성물을 제공한다.

다른 예는 참당귀 04/? e//ca gigas Nakai ) 추출물을 포함하는 항혈전용 건강기능성 식품 또는 혈소판 응집 억제용 건강기능성 식품을 제공한다.

다른 예는 참당귀 추출물을 포함하는 혈관계 질환의 예방 및/또는 개선용 건강기능성 식품을 제공한다.

다른 예는 참당귀 추출물의 약학적 유효량을 혈소판 응집 억제를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 항혈전 (혈소판 응집 억제， 또는 혈전 억제) 방법을 제공한다. 상기 방법은, 상기 투여하는 단계 이전에 혈소판 응집 억제를 필요로 하는 환자를 확인하는 단계를 추가로 포함할수 있다.

다른 예는 참당귀 추출물의 약학적 유효량을 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다. 상기 방법은, 상기 투여하는 단계 이전에 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 환자를 확인하는 단계를추가로 포함할수 있다.

다른 gigas Nakai ) 추출물이 기존의 항혈전 및/또는 혈관계 질환 치료제의 부작용인 위장장애를 일으키지 않는 다는 점에 기초하여 , gigas Nakai ) 추출물 비스테로이드 항염증제 (Nonsteroidal ant i-inf lammatory drugs； NSAIDs) 계열 약물과 같은 기존의 항혈전 및/또는 혈관계 질환 치료제에 의하여 유발되는 위장장애의 예방, 감소， 개선, 완화, 및/또는 치료 용도를 제공한다.

구체적으로， 일 예는 참당귀 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장장애의 예방 및/또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. 다른 예는 참당귀 U ^· e//ca gigas Nakai ) 추출물을 포함하는 위장장애의 예방 및/또는 개선용 건강기능성 식품을 제공한다. 다른 예는 참당귀 추출물의 약학적 유효량을 위장장애의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 위장장애의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다. 상기 방법은， 상기 투여하는 단계 이전에 위장장애의 예방 및/또는 치료를 2019/221571 1»（：1^1{2019/006004

필요로 하는 환자를 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 위장장애는 항혈전 및/또는 혈관계 질환 치료제, 예컨대， 비스테로이드 항염증제 (Nonsteroidal ant i-inf lammatory drugs； NSAIDs) 계열 약물에 의하여 유발되는위궤양， 위장출혈 등일 수 있다.

다른 예는 참당귀 0切요 e//ca gigas Nakai ) 추출물 및 비스테로이드 항염증제를 포함하는， 항염증， 진통， 또는 염증성 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 병용투여용 약학 조성물을 제공한다. 다른 예는 항염증 또는 진통 또는 염증성 질환의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 환자에게 Nakai ) 추출물 및 비스테로이드 항염증제를 병용 투여하는 단계를 포함하는， 항염증 또는 진통， 또는 염증성 질환의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다 . 상기 병용 투여 단계는 참당귀 U ^· e//ca gigas Nakai ) 추출물 및 비스테로이드 항염증제를 동시에 또는 순서에 무관하게 순차적으로 투여하여 수행되는 것일 수 있다. 상기 방법은 상기 병용 투여하는 단계 이전에， 항염증， 진통, 또는 염증성 질환의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 환자를 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 조성물 및 방법은 비스테로이드 항염증제로 인하여 유발되는 위궤양, 위장 출혈 등의 위장장애를 예방， 감소, 개선， 완화, 제거 또는 치료할수 있는 것을특징으로 한다.

또한， 참당귀 ( e//ca容/ as Nakai ) 추출물의 위장장애를 일으키지 않으면서 항혈전 및/또는 혈관계 질환 치료 효과 및 위장장애를 일으키지 않는 효과에 기초하여， 참당귀 ( ^· e//ca gigas Nakai ) 추출물의 항혈전 및/또는 혈관계 질환 치료제의 일부 또는 전부를 대체하여 사용되는 용도를 제공한다.

구체적으로， 일 예는 참당귀 gigas Nakai ) 추출물 및 항혈전제를 포함하는 항혈전 (또는 혈소판 응집 억제)， 또는 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료를위한 병용투여용 약학조성물을 제공한다.

다른 예는 참당귀 ( 요 e//ca gigas Nakai ) 추출물 및 항혈전제를 항혈전 (또는 혈소판응집 억제) , 또는 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 환자에게 병용 투여하는 단계를 포함하는， 항혈전 (또는 혈소판 응집 억제, 또는 혈전 억제) 방법， 또는 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다. 상기 병용 투여 단계는 참당귀 ( 모 e//ca gigas Nakai ) 추출물 및 항혈전제를 동시에 또는 순서에 무관하게 순차적으로 투여하여 수행되는 것일 수 있다. 상기 방법은 상기 병용 2019/221571 1»（：1^1{2019/006004

투여하는 단계 이전에， 항혈전 (또는 혈소판 응집 억제)， 또는 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 환자를 확인하는 단계를 추가로 포함할수 있다.

【기술적 해결방법】

본 발명은 참당귀 gigas Nakai ) 추출물의 항혈전 , 및 혈관계 질환의 예방， 치료 및/또는 개선 효과와관련된 것이다.

보다 구체적으로 , 일 Nakai ) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항혈전용 약학 조성물 (항혈전제) 또는 혈소판 응집 억제용 약학조성물 (혈소판응집 억제제)을 제공한다.

다른 예는 참당귀 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료용 약학조성물을 제공한다.

다른 예는 참당귀 ( ge/Zca gigas Nakai ) 추출물을 포함하는 항혈전용 건강기능성 식품 또는 혈소판 응집 억제용 건강기능성 식품을 제공한다.

다른 예는 참당귀 추출물을 포함하는 혈관계 질환의 예방 및/또는 개선용 건강기능성 식품을 제공한다.

다른 예는 참당귀 추출물의 약학적 유효량을 혈소판 응집 억제를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 항혈전 (혈소판 응집 억제， 또는 혈전 억제) ) 방법을 제공한다. 상기 방법은， 상기 투여하는 단계 이전에 혈소판 응집 억제를 필요로 하는 환자를 확인하는 단계를 추가로 포함할수 있다.

다른 예는 참당귀 추출물의 약학적 유효량을 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다. 상기 방법은， 상기 투여하는 단계 이전에 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 환자를 확인하는 단계를추가로포함할수 있다.

다른 예는 참당귀 (Age/ /ca gigas Nakai ) 추출물이 기존의 항혈전 및/또는 혈관계 질환 치료제의 부작용인 위장장애를 일으키지 않는 다는 점에 기초하여, 참당귀 ( _/ 4 ^· e//ca gigas Nakai ) 추출물 비스테로이드 항염증제 (Nonsteroidal ant i-inf lammatory drugs； NSAIDs) 계열 약물과 같은 기존의 항혈전 및/또는 혈관계 질환 치료제에 의하여 유발되는 위장장애의 예방, 감소, 개선, 완화， 및/또는 치료 용도를 제공한다. 2019/221571 1»（：1^1{2019/006004

구체적으로, 일 예는 참당귀 주줄물을 유효성분으로 쏘함하는 위장장애의 예방 및/또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. 다른 예는 Nakai ) 추출물을 포함하는 위장장애의 예방 및/또는 개선용 건강기능성 식품을 제공한다. 다른 예는 참당귀 추출물의 약학적 유효량을 위장장애의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 위장장애의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다. 상기 방법은, 상기 투여하는 단계 이전에 위장장애의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 환자를 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 위장장애는 항혈전 및/또는 혈관계 질환 치료제， 예컨대， 비스테로이드 항염증제 (Nonsteroidal anti-inflammatory drugs； NSAIDs) 계열 약물에 의하여 유발되는위궤양， 위장출혈 등의 위장장애일 수 있다.

다른 Nakai) 추출물 및 비스테로이드 항염증제를 포함하는, 항염증, 진통， 또는 염증성 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 병용투여용 약학 조성물을 제공한다. 다른 예는 항염증 또는 진통 또는 염증성 질환의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 환자에게 gigas Nakai) 추출물 및 비스테로이드 항염증제를 병용 투여하는 단계를 포함하는, 항염증 또는 진통, 또는 염증성 질환의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다 . 상기 병용 투여 단계는

gigas Nakai) 추출물 및 비스테로이드 항염증제를 동시에 또는 순서에 무관하게 순차적으로 투아하여 수행되는 것일 수 있다. 상기 방법은 상기 병용 투여하는 단계 이전에, 항염증, 진통， 또는 염증성 질환의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 환자를 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 조성물 및 방법은 비스테로이드 항염증제로 인하여 유발되는 위궤양, 위장 출혈 등의 위장장애를 예방， 감소， 개선, 완화, 제거 또는 치료할수 있는 것을특징으로 한다.

상기 병용 투여용 약학 조성물에 포함되거나 병용 투여 단계에서 투여되는 참당귀 C4/J容 e//ca gigas Nakai ) 추출물 및 비스테로이드 항염증제의 함량비는 투여 대상 환자의 상태에 따라서 적절히 처방될 수 있으며, 예컨대， 중량 기준으로， 1:0.1 내지 10, 1:0.1 내지 7.5, 1:0.1 내지 5, 1:0.1 내지 2.5, 1:0.1 내지 1, 1:0.1 내지 0.75, 1:0.1 내지 0.5, 1:0.1 내지 0.25, 1:0.25 내지 10, 1:0.25 내지 7.5, 1:0.25 내지 5, 1:0.25 내지 2.5, 1:0.25 내지 1, 1:0.25 내지 0.75, 1:0.25 내지 0.5, 1:0.5 내지 10, 1:0.5 내지 7.5, 1:0.5 내지 5, 1:0.5 내지 2.5, 1:0.5 2019/221571 1»（：1^1{2019/006004

내지 1， 1:0.5 내지 0.75， 1:0.75 내지 10， 1:0.75 내지 7.5， 1:0.75 내지 5， 1:0.75 내지 2.5, 1:0.75 내지 1, 1:1 내지 10, 1:1 내지 7.5, 1:1 내지 5, 1:1 내지 2.5, 1:2.5내지 10， 1:2.5 내지 7.5， 1:2.5내지 5， 1:5 내지 10， 또는 1:5 내지 7.5 （참당귀 추출물 중량: 비스테로이드 항염증제 중량）일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한， 참당귀（ 추출물의 위장장애를 일으키지 않으면서 항혈전 및/또는 혈관계 질환 치료 효과 및 위장장애를 일으키지 않는 효과에 기초하여， 참당귀（ / 35 쇼 ） 추출물의 항혈전 및/또는 혈관계 질환 치료제의 일부 또는 전부를 대체하여 사용되는 용도를 제공한다.

구체적으로 , 일 예는 /요 ^· 35· ^） 추출물 및 항혈전제를 포함하는 항혈전 （또는 혈소판 응집 억제， 또는 혈전 억제） 방법, 또는 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 병용 투여용 약학 조성물을 제공한다 .

다른 예는 ^） 추출물 및 항혈전제를 항혈전 （또는 혈소판응집 억제）, 또는 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 환자에게 병용 투여하는 단계를 포함하는， 항혈전 （또는 혈소판 응집 억제）， 또는 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다. 상기 병용 투여 단계는 참당귀 04/2표 6// / 35 쇼^） 추출물 및 항혈전제를 동시에 또는 순서에 무관하게 순차적으로 투여하여 수행되는 것일 수 있다. 상기 방법은 상기 병용 투여하는 단계 이전에， 항혈전

（또는 혈소판 응집 억제）, 또는 혈관계 질환의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는환자를 확인하는 단계를추가로포함할수 있다.

상기 병용 투여용 약학 조성물에 포함되거나 병용 투여 단계에서 투여되는 요/요 1（^0 추출물 및 항혈전제의 함량비는 투여 대상 환자의 상태에 따라서 적절히 처방될 수 있으며， 예컨대， 중량 기준으로, 1:0.1 내지 10， 1:0.1 내지 7.5， 1:0.1 내지 5， 1:0.1 내지 2.5, 1:0.1 내지 1, 1:0.1 내지 0.75, 1:0.1 내지 0.5, 1:0.1 내지 0.25， 1:0.25 내지 10, 1:0.25 내지 7.5, 1:0.25 내지 5, 1:0.25 내지 2.5, 1:0.25 내지 1, 1:0.25 내지 0.75, 1:0.25 내지 0.5， 1:0.5 내지 10, 1:0.5 내지 7.5,

1:0.5 내지 5, 1:0.5 내지 2.5, 1:0.5 내지 1, 1:0.5 내지 0.75, 1:0.75 내지 10, 1:0.75 내지 7.5, 1:0.75 내지 5, 1:0.75 내지 2.5， 1:0.75 내지 1， 1:1 내지 10, 1:1 내지 7.5, 1:1 내지 5， 1:1 내지 2.5， 1:2.5 내지 10, 2019/221571 1»（：1^1{2019/006004

1 : 2.5 내지 7.5 , 1 : 2.5 내지 5 , 1 : 5 내지 10 , 또는 1 : 5 내지 7.5 （참당귀 추출물중량:항혈전제 중량）일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 명세서에서， ¹ 항혈전제'는 항혈전 （예컨대, 혈소판 응집 억제） 작용을 하는 모든 약물 （소분자 화합물, 단백질, 펩타이드， 천연물, 천연 추출물 등） 중에서 선택된 것일 수 있으며, 예컨대, 아스피린， 이부프로펜 등을 포함하는 비스테로이드 항염증제 （Nonsteroidal ant i-inf l ammatory drugs； NSAIDs） 중에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 명세서에서， ’비스테로이드 항염증제 ¹ 또는 '비스테로이드 항염증제 계열 약물’은 아스피린, 세레콕시브， 이부프로펜 등으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상일 수 있다

본 명세서에서, ’치료’는 증상의 경감， 완화， 호전, 또는 개선， 질환의 범위의 감소， 질환 진행의 지연 또는 완화， 질환 상태 또는 증상의 개선, 경감 또는 안정화, 부분적 또는 완전한 회복， 생존의 연장， 기타 다른 이로운 치료 결과등을모두포함하는 의미로사용된다.

본 명세서에서， ¹ 항혈전제’는 혈관 내 혈전 생성을 저해하거나， 및/또는 혈전에 의하여 유발되는 증상을 예방, 완화， 개선， 및/또는 치료하는 작용을 하는 모든 약학 조성물을 의미하는 것으로， 혈소판 응집 （응고） 억제제， 항혈소판제， 항혈전증제 등으로 표현될 수 있다.

본 명세서에서 , ¹ 혈관계 질환’은 혈관에서 혈전에 의하여 유발되는 모든 질환을 의미하는 것으로， 뇌졸중, 뇌경색, 고혈압등의 뇌혈관계 질환， 심근경색, 협심증 등의 심혈관계 질환, 동맥경화증, 말초혈관계 질환 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.

본 발명에서 제공되는 항혈전제 및 혈관계 질환의 예방 또는 치료용 조성물은 기존의 항혈전제로서 사용되는 아스피린， 이부프로펜 등의 비스테로이드 항염증제 （Nonsteroi dal ant i-inf l ammatory drugs； NSAIDs） 계열 약물의 부작용인 위궤양, 위장 출혈 등의 위장 장애를 유발하지 않는다는 이점을 갖는다.

본 명세서에서, ’염증’은 세균， 진균, 바이러스, 기생충, 및/또는 외래 면역원성 물질 （예컨대， 단백질， 소분자 화합물 등）의 감염， 또는 자가면역 등에 의하여 유발되는 염증을 모두 포함하는 의미로 사용될 수 있다. 본 명세서에서， ’항염증’은 염증을 예방， 완화， 개선， 호전, 또는 제거（치료）하는 작용을의미할수 있다. 2019/221571 1»（：1^1{2019/006004

본 명세서에서， ’통증 ¹ 은 신경병증성 통증 （신경통 등）， 두통, 근육통, 위통, 생리통 등에서 선택될 수 있으며， ’진통 ¹ 은 통증의 완화, 개선， 호전, 또는 제거（치료）를 의미할수 있다.

본 명세서에서， '염증성 질환’은 관절염 （예컨대， 골관절염， 류마티즘 관절염 등）， 심낭염， 혈관염（가와사키병） , 척수염 등에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

당귀는 산형과에 속하는 다년생 초본식물로서， 주로 한국， 일본， 중국 등지에서 약용을 목적으로 재배되고 있다. 당귀는 그 산지에 따라 한국에서 생산되는 참당귀（ 7¾¾//＜：3 일본에서 생산되는 일당귀（ / 크 3£¾ 706＜3 크요크 ） , 그리고 중국에서 생산되는 중국당 구분되고, 그 성분과 약리적 효과는 상이한 것으로 알려져 있다. 예로부터 당귀는 어린 순을 나물로 식용하고， 뿌리를 진통, 항암, 신장 독성경감， 간기능 개선, 당뇨성 고혈압 치료, 혈액순환 개선 등다양한 질환에 대한 약재로사용하고 있다.

추출물은 참당귀（예컨대， 전체 또는 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 추출용매로 추출하여 얻어진 것일 수 있다. 일 예에서， 상기 참당귀 추출물은 참당귀 （예컨대， 뿌리）을 30 내지 100% 八 0， 40 내지 100%（\"\0， 50 내지 100% 八，）， 60 내지 100%（\" ， 70 내지 100% 八 0 , 80 내지 100% 八0， 90 내지 100%（＞八 0 , 92 내지

100%^八 0 , 96 내지 100% 八）, 또는 98 내지 100% 八 0 에탄올 수용액 （예컨대， 98% 八 0 에탄올 수용액（주정））으로 추출하여 얻어진 참당귀 에탄올 수용액 추출물일 수 있다. 또한， 상기 참당귀 추출물은 10 내지 901：, 10 내지 80 ^° 0 , 10 내지 701〕, 10 내지 60 ^° 0 , 10 내지 50 ^° 0 , 20 내지 90 ^° 0 , 20 내지 701〕, 20 내지 60 ^° 0 , 20 내지 50 ^° 0 , 30 내지

90 ^° 0 , 30 내지 80 ^° 0 , 30 내지 70 ^° 0 , 30 내지 60 ^° 0 , 30 내지 50 ^° 0 , 40 내지

90 ^° （〕, 40 내지 80 ^° 0 , 40 내지 70 ^° 0 , 40 내지 60 ^° 0 , 40 내지 55 ^° 0 , 또는 40 내지 50ᄃ에서 추출된 것일 수 있다.

본 명세서에 사용된 참당귀 추출물, 예컨대， 참당귀 에탄올 추출물（90 내지 100%^八 0， 92 내지 100%^八 0， 96 내지 100% 八 0， 또는 98 내지 100% 八） 에탄올 수용액으로 10 내지 80 ^° 0 , 10 내지 70 ^° 0 , 10 내지 60 V , 10 내지 50 V , 20 내지 80 ^° 0 , 20 내지 70 V , 20 내지 60 ^° 0 , 20 내지 50 ^° 0 , 30 내지 80 ^° 0 , 30 내지 70 V , 30 내지 60 ^° 0 , 30 내지 501〕， 40 2019/221571 1»（：1^1{2019/006004

내지 80 ^° 0 , 40 내지 70 ^° 0 , 40 내지 60°0 , 40 내지 551：, 또는 40 내지 50公에서 추출)은， 추출물 총 10½당，

( 1) 데커신 함량이 약 2000收 이상, 약 22001將 이상， 약 24001收 이상, 약 2600!雄 이상， 또는 약 28001雄 이상，약 30001犯 이상, 예컨대， 2000 내지 5000 1雄， 2000 내지 4500 1雄, 2000 내지 4000 2000 내지 3500 1服, 2200 내지 5000 1雄, 2200 내지 4500 1犯, 2200 내지 4000 1犯, 2200 내지 3500 1收，

2400 내지 5000 1犯， 2400 내지 4500 1 ， 2400 내지 4000 1地， 2400 내지 3500 1犯， 2600 내지 5000 1收, 2600 내지 4500 1犯， 2600 내지 4000 1將， 2600 내지 3500 1眼， 2800 내지 5000 1收， 2800 내지 4500 1收， 2800 내지 4000 1將， 2800 내지 3500 1 ， 3000 내지 5000 1收， 3000 내지 4500 1犯， 3000 내지 4000 :眼， 또는 3000 내지 3500 이거나， 및/또는

(2) 데커시놀 안젤레이트 함량이 약 12001犯 이상, 약 1400 1眼 이상, 약 1600 1犯 이상, 또는 약 1800【 이상， 예컨대, 1200 내지 3000 1收, 1200 내지 2800 1眼, 1200 내지 2600 0塔, 1200 내지 2400 1收, 1200 내지 2200 1400 내지 3000 1眼, 1400 내지 2800 1將, 1400 내지 2600 1眼, 1400 내지

2400 1收, 1400 내지 2200 1雄, 1600 내지 3000 1犯, 1600 내지 2800 1明, 1600 내지 2600 1明, 1600 내지 2400 1 , 1600 내지 2200阿, 1800 내지 3000 1將,

1800 내지 2800 1雄， 1800 내지 2600 ［地， 1800 내지 2400 1雄, 또는 1800 내지 2200 이거나， 및/또는

(3) 노다케닌 ( 0<131½ 11) 함량이 약 80011退 이상, 약 1000111용 이상, 약 1200阿 이상， 약 1500［明 이상， 약 1700 이상， 약 20001犯 이상， 약 22001 이상， 약 250(¾¾ 이상， 또는 약 2700 이상, 예컨대， 800 내지 5000 1 ， 800 내지 4500 1收， 800 내지 4000 1眼， 800 내지 3500 1雄， 800 내지 3200 1雄, 1000 내지 5000 1雄， 1000 내지 4500 1犯， 1000 내지 4000 1犯, 1000 내지 3500 1眼， 1000 내지 3200 0退， 1200 내지 5000 1犯, 1200 내지 4500 1犯，

1200 내지 4000 1犯, 1200 내지 3500 !¾, 1200 내지 3200 1雄, 1500 내지

5000 1收， 1500 내지 4500 1犯， 1500 내지 4000 1雄, 1500 내지 3500 1收， 1500 내지 3200 1收， 1700 내지 5000 1犯, 1700 내지 4500 ， 1700 내지 4000 1雄, 1700 내지 3500 1 , 1700 내지 3200 1¾， 2000 내지 5000 1收, 2000 내지

4500 1犯, 2000 내지 4000 1雄， 2000 내지 3500 2000 내지 3200 1雄， 2200 내지 5000 1收， 2200 내지 4500 1賊, 2200 내지 4000 1雄, 2200 내지 3500 1¾，

2200 내지 3200 1犯， 2500 내지 5000 1收， 2500 내지 4500 1雄, 2500 내지

4000 1犯， 2500 내지 3500 1服， 2500 내지 3200［將， 2700 내지 5000 1地， 2700 2019/221571 1»（：1^1{2019/006004

내지 4500 1雄， 2700 내지 4000 1將, 2700 내지 3500 1收， 또는 2700 내지 3200 이거나， 및/또는

(4) 베타-시토스테롤 함량이 30!¾ 이상, 501 이상, 100 이상, 150【雄 이상, 200【收 이상， 250 이상， 또는 3001犯 이상, 예컨대, 30 내지 1000 1¾， 30 내지 800 미용， 30 내지 600 11退, 30 내지 500 0促, 30 내지 400

11塔, 50 내지 1000 ， 50 내지 800 , 50 내지 600 50 내지 500

50 내지 400 ， 100 내지 1000 100 내지 800 0退, 100 내지 600 11退，

100 내지 500 1 , 100 내지 400 1犯, 150 내지 1000 離, 150 내지 800 1 ,

150 내지 600 빠, 150 내지 500 1 ， 150 내지 400 200 내지 1000 200 내지 800 1雄, 200 내지 600 1眼, 200 내지 500 1收, 200 내지 400 ［眼,

250 내지 1000 1收, 250 내지 800 1收, 250 내지 600 1犯, 250 내지 500 1雄,

250 내지 400 ， 300 내지 1000 1眼， 300 내지 800 1眼， 300 내지 600 1¾， 300내지 500 1眼, 또는 300내지 400

인 것일 수 있다.

상기 약학 조성물 내의 유효성분으로서 포함된 참당귀 추출물은 건조물, 농축물， 또는농축 건조물 형태일 수 있다.

상기 약학 조성물 내의 유효성분으로서 포함된 참당귀 추출물의 함량은 사용 형태 및 목적, 환자 상태， 증상의 종류 및 경중 등에 의하여 적절하게 조절할 수 있으며, 고형분 중량 기준으로 0.001 내지 99.9 중량%， 0.01 내지 70 중량%， 또는 0. 1 내지 50 중량%일 수 있으나， 이에 한정되지 않는다. 고형분 중량이라 함은 앞서 설명한 바와 같이 추출물에서 용매 성분을 제거한고형물의 중량을 의미한다.

상기 약학 조성물은 인간， 개, 고양이, 말， 소, 돼지， 염소， 토끼, 마우스， 래트 등을 포함하는 포유동물 또는 이로부터 분리된 세포， 조직, 또는 이의 배양물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 방식은 통상적으로 사용되는 모든 방식일 수 있으며, 예컨대， 경구 투여， 또는 정맥 투여, 근육 투여, 피하 투여， 복막내 투여， 병변 부위 (예컨대 관절) 국소 투여와 같은 비경구 투여일 수 있다 . 상기 약학 조성물은 통상의 방법에 따라산제， 과립제， 정제， 캡슐제, 현탁액, 에멀젼， 시럽， 에어로졸 등의 경구형 제형, 경피제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태의 비경구 제형 등으로 제형화하여 사용될 수 있다.

상기 약학 조성물은 상기 참당귀 추출물 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 담체， 부형제， 및/또는 희석제 등의 2019/221571 1»（：1^1{2019/006004

보조제를 추가로 함유하는 것일 수 있다. 상기 담체， 부형제， 또는 희석제의 예로서 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스， 솔비톨， 만니톨， 자일리톨， 에리스리톨， 말티톨, 전분， 아카시아 고무， 알지네이트， 젤라틴, 칼슘 포스페이트， 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈 , 물， 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트， 탈크， 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상을 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제， 습윤제， 붕해제， 계면활성제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 희석제 또는부형제를사용할수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제， 환제， 산제， 과립제， 캡슐제, 시럽제， 분말제， 현탁제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상이 포함되며， 이러한 고형 제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제， 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트， 수크로스, 락토오스， 젤라틴 등으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도사용된다. 경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제， 유제, 시럽제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제， 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제， 보존제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액， 비수성용제， 현탁제， 유제, 동결건조제제， 좌제， 경피제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상이 포함된다. 비수성용제 , 현탁제로는 프로필렌글리콜， 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름， 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상이 사용될 수 있다.

상기 약학조성물은 약학적 유효량으로투여될 수 있다. 상기 약학적 조성물의 투여량은 제제화 방법, 투여 방식， 환자의 연령， 체중， 성, 병적 상태， 음식， 투여 시간, 투여 간격， 투여 경로， 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 투여 용량은 환자의 나이, 몸무게, 성별， 투여형태， 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 의사또는 약사의 판단에 따라 일정 시간 간격으로 1 일 1 회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다. 예컨대， 약학 조성물의 1 일 투여량은 유효성분 （참당귀 주줄물）의 고형분 중량 기준으로 0.001 내지 1000 구체적으로 0.01내지 100 보다구체적으로 0. 1 내지 20 2019/221571 1»（：1^1{2019/006004

1¾/1¾ 범위일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 1 일 투여량은 단위 용량 형태로 하나의 제제로 제제화되거나, 적절하게 분량하여 제제화되거나， 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 상기한 투여량은 평균적인 경우를 예시한 것으로서 개인적인 차이에 따라 그 투여량이 높거나낮을수 있다.

본 발명의 다른 예는 참당귀 추출물을 제조하는 단계를 포함하는, 항혈전제 또는 혈관계 질환의 예방， 치료, 및/또는 개선 효과를 갖는 조성물의 제조방법을 제공한다. 상기 참당귀 추출물을 제조하는 단계는 참당귀 뿌리를, 10 내지 80 ^° 0 , 10 내지 701：, 10 내지 60 ^° 0 , 10 내지 50ᄃ , 20 내지 80 ^° 0 , 20 내지 70 ^° 0 , 20 내지 601〕, 20 내지 50 ^° 0 , 30 내지 80

40 내지 601〕, 40 내지 55 ^° （그， 또는 40 내지 50 ^° （:에서, 1 내지 10 부피배, 2 내지 8 부피배, 또는 4 내지 6 부피배의 물 및 탄소수 1-4의 직쇄 또는 분지형 알코올 （예컨대， 에탄올）로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상， 예컨대， 90 내지 100%0八）, 92 내지 100% 八 0 , 96 내지 100%（ 八 0 , 또는 98 내지 100¾）0八 0 에탄올 수용액 （예컨대， 98% 八 0 에탄올 수용액（주정））으로 추출하는 단계를 포함하는 것일 수 있다. 추출 시간은 추출이 충분히 이루어질 수 있는 시간이면 족하고， 1시간 이상, 2시간 이상, 3시간 이상, 또는 4시간 이상， 에컨대， 1 내지 12시간, 2 내지 12시간， 3 내지 12시간， 4 내지 12시간， 1 내지 6시간, 2 내지 6시간, 3 내지 6시간， 또는 4내지 6시간정도로설정할수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 방법에 사용된 추출 과정은 통상적으로 사용되는 모든 추출 방법에 의하여 수행될 수 있으며， 예컨대， 열수 추출, 초음파 추출, 환류 추출법 등으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상의 방법에 의하여 수행될 수 있으나， 이에 한정되는 것은아니다.

또 다른 측면에 있어서， 본 발명은 참당귀 추출물을 함유하는， 항혈전용（혈소판 응집 억제용） 또는 혈관계 질환의 예방 및/또는 개선용 건강 기능성 식품을 제공한다.

상기 건강 기능성 식품은 일상 식사에서 결핍되기 쉬운 영양소나 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분（이하, '기능성 원료’）을 사용하여 제조한 식품으로， 건강을 유지하거나 소정의 질병 또는 증상을 예방 및/또는 개선하는데 도움을 주는 모든 식품을 의미하며， 최종 제품 형태에는 특별한 제한이 없다. 예컨대, 상기 건강 기능성 식품은 각종 2019/221571 1»（：1^1{2019/006004

식품， 음료 조성물， 식품 첨가제 등으로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 건강 기능성 식품에 함유된 참당귀 추출물의 함량은 식품의 형태, 소망하는 용도 등에 따라 적절하게 특별한 제한이 없으며, 예컨대， 전체 식품 중량의 0.001 내지 95 중량%또는 0.01 내지 90 중량%일 수 있다. 상기 건강 기능성 식품은 여러 가지 영양제， 비타민， 광물 （전해질）， 합성 풍미제 또는 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제, 중진제 （치즈， 초콜릿 등）， 펙트산또는 그의 염， 알긴산또는 그의 염， 유기산， 보호성 콜로이드 증점제, 조절제, 안정화제， 방부제， 글리세린， 알콜， 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상을 추가로 함유할 수 있다. 그밖에， 상기 건강기능성 식품, 특히 건강 기능 음료 조성물은 천연 과일 주스， 과일 쥬스 음료, 또는 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 전체 건강 기능성 식품 100 중량부 당 0.001 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이나, 이에 제한되는 것은 아니다.

【발명의 효과】

본 명세서에서 확인된 바와 같이， 참당귀 추출물은 위장장애를 유발하지 않으면서 우수한 항혈전 효과를 나타내므로， 항혈전제 또는 혈관계 질환치료제로서 유용하게 적용될 수 있다.

【도면의 간단한설명】

도 1£1 및 11） 는 인간 혈액에서의 참당귀 추출물의 항혈전 효과를 보여주는그래프이다.

도 2는 아스피린으로 위장장애를 유발시킨 마우스모델에서의 참당귀 주줄물투여시의 위장 점막모습을보여주는사진이다.

도 3은도 2에서 확인된 위장 점막의 손상정도를 정량하여 보여주는 그래프이

도 4는 세레브렉스로 위장장애를 유발시킨 마우스모델에서의 참당귀 추출물투여시의 위장점막모습을보여주는사진이다.

도 5는 도 4에서 확인된 위장 점막의 손상정도를 정량하여 보여주는 그래프이다에 아 2019/221571 1»（：1^1{2019/006004

【발명을 실시를 위한 형태】

이하에서는 실시예를 들어 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하고자 하나， 이는 예시적인 것에 불과할 뿐 본 발명의 범위를 제한하고자 함이 아니다. 아래 기재된 실시예들은 발명의 본질적인 요지를 벗어나지 않는 범위에서 변형될 수 있음은 당 업자들에게 있어 자명하다. 실시예 1： 참당귀 추출물의 제조

1.1. 참당귀 에탄올추출물의 제조

뿌리를 깨끗한 물을 이용하여 세척한 후 충분히 건조하였다. 건조된 참당귀 뿌리를과쇄하고 얻은 분말 10 에 5 부피배（500 ）의 에탄올 （98%（ 八 0 에탄올（주정））을 첨가하고, 40-60 에서 4 시간 이상 추출한 후, 111111（1 （：1'0111 61·） 필터로 여과한 여액을 원래 중량의 10%가 될 때까지 가온 농축하였다. 상기 얻어진 농축물에 결정셀룰로오스를 서서히 가하면서 계속 농축하여 완전히 건조시킨 후 분말화하여 참당귀 에탄올 추출물 분말을 제조하였다 （이하 쇼6£232라고 명명함）.

1.2. 참당귀 에탄올고온추출물의 제조

참당귀 뿌리를 깨끗한 물을 이용하여 세척한 후 충분히 건조하였다. 건조된 참당귀 뿌리를 파쇄하고 얻은 분말 10¾ 에 5 부피배（500미1）의 에탄올 （98% 八） 에탄올（주정））을 첨가하고， 약 901：에서 4 시간 이상 추출한 후, 111111（1 0'0111 61·） 필터로 여과한 여액을 원래 중량의 10%가 될 때까지 가온 농죽하였다. 상기 얻어진 농죽물에 결정셀룰로오스를 서서히 가하면서 계속 농축하여 완전히 건조시킨 후 분말화하여 고온 참당귀 에탄올 추출물 분말을 제조하였다.

1.3. 참당귀 에탄올（저농도） 추출물의 제조

참당귀 뿌리를 깨끗한 물을 이용하여 세척한 후 충분히 건조하였다. 건조된 참당귀 뿌리를 파쇄하고 얻은 분말 10½ 에 5 부피배（5001111）의

30%（ 八 0 에탄올을 첨가하고， 40~60 ^° （：에서 4 시간 이상 추출한 후, 11011（11^ 0"0111 61·） 필터로 여과한 여액을 원래 중량의 10%가 될 때까지 가온 농축하였다. 상기 얻어진 농축물에 결정셀룰로오스를 서서히 가하면서 계속 농축하여 완전히 건조시킨 후 분말화하여 참당귀 에탄올（저농도） 추출물 분말을 제조하였다. 2019/221571 1»（：1^1{2019/006004

1.4. 참당귀 열수추출물의 제조

참당귀 2kg 에 증류수 5,000ml 를 가하여 수욕조 (약 90 ^° C)에서 8시간씩 4회 추출 후, 여과하여 농축기로 용매를 증발시켜서 생약 추출물을 얻었다. 상기 얻어진 추출물을 동결건조기로 12시간동안 동결 건조하고 분말화하여 건조분말상태의 참당귀 열수 추출물 분말을준비하였다.

1.5. 참당귀 에탄올 R/T(room temperature)추출물의 제조

참당귀 뿌리를 깨끗한 물을 이용하여 세척한 후 충분히 건조하였다. 건조된 참당귀 뿌리를 파쇄하고 얻은 분말 100g 에 5 부피배 (500ml)의 에탄올 (98%( v) 에탄올 (주정))을 첨가하고, 상온 (약 25 ^° C)에서 4 시간 이상 추출한후， lum(micrometer) 필터로 여과한 여액을 원래 중량의 10%가 될 때까지 가온 농죽하였다. 상기 얻어진 농죽물에 결정셀룰로오스를 서서히 가하면서 계속 농축하여 완전히 건조시킨 후 분말화하여 고온 참당귀 에탄올 R/T추출물 분말을 제조하였다. 실시예 2： 항혈전효과시험

2.1. Ex-vi vo시험

혈소판 준비를 위하여, 인간 Platelet-rich plasma (PRP)를 Red Cross Blood Center (Seoul , Korea)로부터 입수하였다 (PRP concentration： lxlO ⁹ platelets/ml) .

혈소판분석은다음과 같이 수행하였다:

분석기기로서 Chrono-Log Co 사의 Aggregometer (Instrument: Whole blood/opt ical Lumi -Aggregometer Model 700 (CHRONCH乂) G))를 사용하였다. PPP (Platelet Poor Plasma； Red Cross Blood Center (Seoul , Korea))의 Light transmission 값을 기준 (Baseline) 값으로 하고 PRP (Platelet Rich Plasma) 응집에 의한 Light transmission 간섭 되는 최대 값을 백분율 (%)로 환산하였다. Aggregation agent로서 collagen (12.5//g/m보)를사용하였다. 혈소판 응집에 대한 각 추출물의 억제효과는 dual channel aggregometer 를 이용하여 측정하였다. Platelet-rich plasma (PRP)와 pi ate let -poor plasma (PPP)를 이용한다. 상기 준비된 PRP 360 를 큐벳에 넣고 40成의 0.25%(w/v) PEG200 (vehicle), 아스피린 (10ug/ml), 또는 각 추출물 (80ug/ml)을 넣었다. 비교를 위하여, 상기 추출물 대신， 항혈전제로 잘 알려진 아스피린 (lOug/ml), 또는 참당귀 추출물의 유효성분인 데커신 2019/221571 1»（：1^1{2019/006004

（80ug/ml ; 단일화합물） 또는 데커시놀 （80ug/ml ; 단일화합물）을 사용하여 동일한실험을수행하였다.

혼합물을 aggregometer 에서 lOOOrpm, 37 ^° C 교반하면서 2분동안 배양하였다. 배양후 col lagen 12.5//g/ml 를 넣어 혈소판응집을유도하고， 6분 후 광전달의 변화를 확인하여 혈소판 응집 정도를 측정하였다. 상기 얻어진 혈소판 응집률（%）을 도 la 및 lb 에 나타내었다 （con: 미투여군）. 도 la 및 lb 에 나타낸 바와 같이， 참당귀 추출물， 특히 에탄올을 추출 용매로 한 추출물은 vehi cle 투여군 및 대조군 （미투여군）과 비교하여 혈소판 응집률이 낮게 나타났다. 특히, 참당귀 에탄올 추출물 （AGE232）은 다른 추출 조건 （추출 용매 종류， 추출 용매 농도， 및/또는 추출 온도）의 추출물과 비교하여 혈소판 응집률이 현저하게 낮은 것을 확인할 수 있으며, 기존의 항혈전제로 사용되는 아스피린 （ASA）와 동등한 정도의 혈소판 응집률을 보였을 뿐 아니라， 단일화합물인 데커신 및 데커시놀보다 현저하게 낮은 혈소판 응집률을 보였다. 이러한 효과는 참당귀 추출물, 특히 에탄올 추출물 （예컨대, AGE232）이 우수한 항혈전 효과를 가질뿐 아니라， 기존의 항혈전제로 사용되는 아스피린 （ASA）와 동등한 정도의 항혈전 효과를 가지며， 단일화합물인 데커신 및 데커시놀보다 현저하게 높은 항혈전 효과를 가짐을보여주는 것이다. 2.2. In-vivo시험

실험동물의 준비

실험동물은 영바이오에서 제공하는 5주령된 암컷 ICR 마우스를 동물실험실에서 24± 1 C 온도， 55 + 5% 습도， 및 12시간의 주야주기로 1주일간 안정화시키고실험에 사용하였다.

상기 준비된 혈전유도 마우스 모델에 대하여 Rota-rod 를 이용한 행동능력의 변화를 평가하여 참당귀 추출물의 항혈전 효과를 평가하였다. 혈전유도 마우스 모델은 다음과 같이 준비하였다. 실험용 마우스로서 안정화시킨 6주령된 ICR 마우스 （20-25g 정도）를 준비하고 Rota- rod 훈련시켜 세 번의 기준치를 만들고 회전속도 24rpm 으로 하여 회전수 300회 이상에서 낙하하지 않고 버티는 개체를 선별하였다. 상기 선별된 마우스를 처리군 별로 나누고 각각의 약물을 투여한 후（표 1 참조）, 90분 후 Col lagen（13.2//g）과 Epinephr 6（114/½）을 섞어 꼬리정맥으로 주사하여 2019/221571 1»(：1^1{2019/006004

혈전을 유도하였다. 15분 뒤 다시 Rota ^_ rod test 을 3회 반복 수행하여 (회전속도: 24rpm) , 아래의 수식으로운동능력의 차이를 분석 하였다:

보호율 (Protect ion, %) = ［(전체 개체수-죽거나 마비된 개체수)/전체 개체수］ xlOO

(전체 개체수: Rota-rod test 에서 회전속도 24rpm으로 하여 회전수

300회 이상에서 낙하하지 않고 버티는 개체의 수;

죽거나마비된 개체수: Rota-rod test에서 회전속도 24rpm으로 하여 회전수 150회 이하에서 낙하한개체의 수)

상기 얻어진 보호율을 아래의 표 1에 나타내었다:

［표 1］

표 1에 나타난 바와 같이， 참당귀 추출물은 대조군과 비교하여 우수한 보호율을 보였으며， 특히 참당귀 에탄올 추출물 (AGE232)은 다른 추출 조건의 추출물과 비교하여 현저하게 우수한 보호율을 보였을 뿐 아니라， 기존의 항혈전제로 사용되는 아스피린 및 단일화합물인 데커신 및 데커시놀과 비교하여 동등 이상의 보호율을보였다. 실시예 3.위장장애 억제 실험 (In-vivo)

실험동물

Male ICR mi ce , 케이지 당 5마리， 실온 (22±0.5 ^° C ) , 밤낮 12시간 주기 조건으로사육.

물, 음식은무제한급여하고, 최소실험 2시간전 동물을실험에 적응 시키고 var i at ion을줄이기 위해 l ight phase ( 10 : 00-17 : 00)에 진행. 2019/221571 1»（：1^1{2019/006004

처리군별로 syringe 를 이용하여 아래와 같이 시험 약물을 매일 1회씩 5일간 경구 투여 하였다 (ASA (Aspirin) 및 세레브렉스 (Celebrex)는 위장장애 유발을 위하여 사용됨):

실험 동물 처리

ASA 300 또는 Cel 300： Aspirin™ (ASA, Bayer AG) 300mg/kg 또는

Celebrex™ (Cel , Pfizer) 300mg/kg, 5일 연속투여 ;

Con: control；

AGE232 1000： 참당귀 추출물 AGE232 lOOOmg/kg, 5일 연속투여 ;

ASA+AGE232 또는 Cel+AGE232： 참당귀 추출물 AGE232 1000mg/kg 및 Aspirin™ (ASA) 300mg/kg 또는 Celebrex™ (Cel ) 300mg/kg 병용 투여, 5일 연속투여 ;

Decursin 300： decursin 300mg/kg, 5일 연속투여 ;

ASA+Decursin 또는 Cel+Decursin： co-administered, dercursin 300mg/kg및 Aspirin™ (ASA) 300mg/kg또는 Celebrex™ (Cel ) 300mg/kg 병용 투여 , 5일 연속투여 ;

Decursinol 300： decursinol 300mg/kg , 5일 연속투여 ;

ASA+Decursinol 또는 Cel+Decursinol : dercursinol 300mg/kg 및 Aspirin™ (ASA) 300mg/kg 또는 Celebrex™ (Cel ) 300mg/kg 병용 투여, 5일 연속투여 .

해부 및 위 점막관찰

경추탈골 시킨 후 즉시 위를 꺼내 greater curvature 를 따라 열고 cork plate에 전개시켰다. 안쪽 면을 iced cold saline로 행구어 피 등을 닦아낸 후， 위 내벽을 고해상도의 현미경 등을 사용하여 관찰하여, 그 결과를 도 2 (아스피린 투여 위장장애 유발군) 및 도 4 (세레브렉스 투여 위장장애 유발군)에 나타내었다.

위 손상의 정략적 측정을 위하여, 다음의 방법으로 위점막 병병률 등급 (Ulcer index (UI))을측정하였다:

( I ) 점성출혈과 erosions 부위가 < Iran: 위 점막부종, 충혈， 하나의 출혈이 존재;

(II) erosions 부위가 1_3·: 위 점막하 출혈이 작은 위 점막미란 (erosion)과동반된 경우;

(EH) erosions부위가 > 3mm： 출혈이 일어난 가장자리가심한 미란과 동반, 침식성 손상이나 궤양이 존재 . 2019/221571 1»（：1^1{2019/006004

Ul cer index (UI ) : ( 1 * n * ( I ) ) + (2 * n * ( II ) ) + (3 * n * (EO ) / number of animal s (고 은 I， I I， 및 I I I 기준에 해당하는 개체의 수를 의미함)

상기 방법을 사용하여 도 2 및 도 4의 결과에 대하여 얻어진 Ul cer index (UI )를 도 3 (aspi r in(ASA) 투여 위장장애 유발군) 및 도 5 (cel ecoxib(cel ) 투여 위장장애 유발군)에 각각나타내었다.

도 2 내지 도 5에 나타난 바와 같이， (1) ASA 300 또는 Ce l 300와 ASA+AGE232 또는 Cel+AGE232의 결과를 비교할 때， 아스피린 또는 세레브렉스에 의하여 유발된 위장장애 (위출혈)이 참당귀 추출물을 함께 투여하는 경우 현저하게 감소함과， (2) 아스피린 또는 세레브렉스와 참당귀 추출물의 병용투여시, 단일화합물안 데커신 및 데커사놀과의 병용투여시와 비교하여， 아스피린 또는 세레브렉스가 유발하는 위장장애 (위출혈)가 현저하게 감소함을 확인할수 있다. 실시예 4. 각추출물간의 유효성분 분석 (HPLC)

＜검액의 조제＞

5 종류의 시료 (참당귀 물 추출물, 참당귀 에탄올 고온 추출물, 참당귀 30% 에탄올 추출물， 참당귀 에탄올 추출물 (AGE232) , 또는 참당귀 에탄올 R/T 추출물) lg 을 정확히 취하여 50ml 정용플라스크에 넣은 후 약 30 ml 메탄올 (100%)을 넣어 용해시킨 다음， 표선까지 메탄올로 채워서 여과한 후 검액으로 한다. 시료의 종류 및 분석항목에 따라 희석 정도를 달리하여 검액을 제조하였다.

＜표준액의 조제 ñ

데커시놀 표준품 (순도 98% 이상) 10mg， 데커신 표준품 (순도 98% 이상) 5mg, 데커신 안젤레이트 표준품 (순도 98% 이상) 5mg을 취하여 25ml 플라스크에 넣은 후 100% 메탄올을 넣어 용해시킨 다음, 메탄올로 표선을 채워서 표준액으로 한다. 이 표준용액으로부터 12.5 - 25 - 50 - 100 - 200 lig/ml 농도의 표준용액을 제조하여 검량선의 측정에 이용하였다.

＜HPLC조작조건＞

검액 및 표준액을 가지고 아래 액체크로마토그래피 조작조건에 따라 시험하여 데커신, 데커시놀, 데커시놀 안젤레이트의 함량을 계산하였다: 컬 럼 : Cadenza CW C18 , (150*4.6mm, 3，) 또는 이와동등한컬럼 ; 검출기 : .자외선 분광광도계 (검출파장 330nm) ; 2019/221571 1»(：1^1{2019/006004

유 속 : 0.71111/분;

이동상 : 라 %） , 이 !；!'오 1 %） ,

0-5111111（20, , 5-& !1（20 40, ， 6-22111111（40 55, ， 22-2¾ （55 80, , 23_2¾ 11 （80, , 25-2¾ （20, ;

시료주입량 : 10成.

＜결과 ñ

상기 얻어진 각 추출물의 성분 분석 결과를 아래의 표 2에 나타내었다.

【표 2]

참당귀의 추출 용매 및 추출 방법에 따른주요성분의 분석 결과

표 2에서와 같이， 참당귀 추출물은 데커신， 데커시놀 안젤레이트, 노다케닌 어0（1 611 ）, 및 베타-시토스테롤과 같은 유효성분의 함량（중량 기준）이 비교적 높은 수준이며, 특히 참당귀 에탄올 추출물（ 6표232）의 상기 유효성분 함량이 현저하게 높은 것을 확인할수 있다.