Dérivés d'azasucre, inhibiteurs d'héparanases, leur procédé de préparation, les compositions en contenant, leur utilisation.

L'invention a pour objet des dérivés d'azasucre, inhibiteurs d'héparanases, leur préparation, les compositions en contenant et leur application en thérapeutique.

Les héparanases sont des enzymes de type endoglucuronidases qui ont pour substrat des polysaccharides de la famille héparine/héparanes sulfate (HS). On connaît des héparanases de type I et II (McKenzie et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., (2000), Vol.276, p. 1170-1177). Elles hydrolysent spécifiquement des liaisons de type β-1→4 entre une unité saccharidique de type acide D-glucuronique et une unité saccharidique de type D-glucosamine et libèrent des fragments d'HS d'environ 10 à 20 unités saccharidiques (Pikas, D. S et al., J. BhI. Chem., (1998), Vol.273, p.18770-18777). Les héparanases dégradent de la même façon les chaînes polysaccharidiques des protéoglycanes contenant des héparanes sulfates (HSPGs, pour Heparan Sulfate Proteoglycans) (Vlodavsky et Friedmann, J. Clin. Invest, (2001), Vol.108, p. 341-347). Les HSPGs sont constitués d'une protéine centrale à laquelle sont liées de façon covalente des chaînes linéaires d'HS (Kjellen et al., Annu. Rev. Biochem., (1991), Vol.60, p.443-475). Les HSPGs sont des macromolécules ubiquitaires. Comme les HS, les HSPGs sont présents à la surface de nombreux types cellulaires et dans la matrice extracellulaire (ECM pour Extracellular Matrix) (Kjellen et al., (1991), ibid. ; Bernfield et al., Annu. Rev. Biochem., (1999), Vol.68, p.729-777 ; David et al., FASEB J., (1993), Vol.7. p.1023-1030 ; Lozzo et al., Annu. Rev. Biochem., (1998), Vol .67. p.609-652). La ECM, composant majeur des tissus conjonctifs des vertébrés et invertébrés, occupe l'environnement extracellulaire. Elle enveloppe les organes et entoure les endothéliums, notamment les endothéliums capillaires (Wight et al., Arteriosclerosis, (1989), Vol.9, p.1-20), jouant ainsi un rôle de maintien et de barrière de protection des organes et endothéliums (McKenzie et al., Biochem. J ; 2003 ; Vol.373 ; p.423-435). La ECM est également un modulateur clé, impliqué dans différents mécanismes cellulaires, notamment la différenciation et la réparation cellulaire (Folkman ét al., Adv. Exp. Med. Biol., (1992), Vol. 313, p. 355- 364). Des composés inhibiteurs d'héparanases ont été décrits dans l'art antérieur. Par exemple, la demande de brevet internationale WO 02/0600374 décrit des dérivés benz-1 ,3-azole, la demande de brevet internationale WO 03/074516 concerne des dérivés d'acide phtalimide carboxylique et benzoxazole, la demande de brevet internationale WO 04/013132 décrit des dérivés de furanethiazoles ou encore la demande de brevet internationale WO 04/046123 décrit des dérivés benzoxazole, benzthiazole et benzimidazole. La synthèse de dérivés d'azasucres à chaîne courte (2 motifs) dans lesquels l'atome d'azote remplace l'atome d'oxygène en position 5 a été décrite dans Takahashi et al, Chem. Lett., (1994), Vol.11 , p. 2119 ; Takahashi et al, Tetrahedron, (2001), Vol.57. p.6915-6926| Cependant, leurs activités in vivo n'a pas été identifiée.

Des dérivés d'azasucres à un seul motif, de formule suivante :

ont déjà été décrits (brevet US 6,583,158 ; Ichikawa et ah, J. Amer. Chem. Soc, (1998). VoM 20. p. 3007).

Il existe toujours une nécessité de trouver et de développer des produits présentant une bonne activité in vitro et in vivo.

II a maintenant été trouvé, de manière surprenante, que des dérivés d'azasucre de synthèse présentent une bonne activité en tant qu'inhibiteurs d'héparanases. La présente invention concerne donc de nouveaux dérivés d'azasucre, inhibiteurs d'héparanases. Ces nouveaux composés présentent une bonne activité inhibitrice d'héparanases.

L'objet de l'invention concerne les composés répondant à la formule générale (I) :

(I) dans laquelle :

R représente un atome d'hydrogène, un radical hydroxyle, un radical -OSO3", un radical -O-(Ci-C5)alkyle ou un radical -O-aralkyle ;

Z représente un radical COO" ou un radical hydroxyle

X représente un radical hydroxyle ou une unité saccharidique de formule A :

dans laquelle : — R1 représente un atome d'oxygène, permettant à A de se lier à l'unité azasucre ou à une autre unité saccharidique, — R2 représente un radical -NH2, un radial -NHCO(CrC5)alkyle, un radical -NHCOaryle, un radical -NHSO3", un radical hydroxyle, un radical -O-(Ci-C5)alkyle, un radical -O-aralkyle ou un radical -OSO3", — R3 représente un radical hydroxyle, un radical -OSO3", un radical -O-(CrC5)alkyle ou un radical -O-aralkyle, — R4 représente un radical hydroxyle, un radical -OSO3", un radical -O-(CrC5)alkyle, un radical -O-aralkyle ou une unité saccharidique de formule B :

dans laquelle : — R6 représente un atome d'oxygène, permettant à B de se lier à une autre unité saccharidique de formule A, — R7 et R8 ont la même définition que R3 tel que défini précédemment, — R9 représente un radical hydroxyle, un radical -OSO3", un radical -O-(Ci-C5)alkyle, un radical -O-aralkyle ou une unité saccharidique de formule A telle que définie précédemment, — R5 a la même définition que R3 tel que défini précédemment ;

Y représente un atome d'hydrogène, un radical (CrC5)alkyle pu une unité saccharidique de formule D

dans laquelle : — Rio, R12 et Ri3 ont respectivement les mêmes définitions que R5, R3 et R2 tels que définis précédemment, — Rn représente : • un radical (Ci-C3)alkylène permettant à D de se greffer sur l'unité azasucre ou • un atome d'oxygène permettant à D de se greffer sur une autre unité saccharidique, — R14 représente un radical -O-(CrC5)alkyle ou un radical -O-E dans laquelle E représente un radical de formule suivante :

dans laquelle : — R15 représente un radical -O-(CrC5)alkyle, un radical -O-aralkyle ou une unité saccharidique de formule D dans laquelle R11 représente un atome d'oxygène, — R16 et R17 ont la même définition que R3 tel que défini précédemment, à la condition toutefois que lorsque X et R représentent chacun un radical hydroxyle, Y ne représente pas un atome d'hydrogène, et étant entendu que le nombre d'unités saccharidiques comportées par le composé de formule (I) est compris entre 1 et 10, sous forme libre ou sous forme de sels formés avec une base ou un acide pharmaceutiquement acceptables ainsi que sous forme de solvats ou d'hydrates. Selon un de ses aspects préférés, l'invention concerne les composés de formule générale (I) :

(D

dans laquelle :

R représente un radical hydroxyle ;

Z représente un radical COO" ou un radical hydroxyle

X représente un radical hydroxyle ou une unité saccharidique de formule A

dans laquelle : — R-i représente un atome d'oxygène, — R2 représente un radical -NHCOCH3, un radical -NHSO3", un radical -OSO3", — R3 représente un radical hydroxyle ou un radical -O-(Ci-C5)alkyle, — R4 représente un radical hydroxyle, un radical -O-aralkyle ou une unité saccharidique de formule B :

dans laquelle : — R6 représente un atome d'oxygène, — R7 représente un radical -OSO3 , — R8 représente un radical hydroxyle, un radical -0-(C1-C5)BIkYIe ou un radical -O-aralkyle, — R9 représente un radical -OSO3", un radical -O-aralkyle, un radical -O-(CrC5)alkyle ou une unité saccharidique de formule A telle que définie précédemment, — R5 représente un radical -OSO3",

Y représente un atome d'hydrogène ou une unité saccharidique de formule D :

dans laquelle : — Rio a la même définition que R5 tel que défini précédemment, — R12 représente un radical hydroxyle ou un radical -OSO3", — R13 représente un radical -NHSO3", — R11 représente un radical méthylène lié à l'unité azasucre ou un atome d'oxygène lié à E, — R14 un radical -OCH3 ou un radical de formule -0-E dans laquelle E représente un radical de formule :

dans laquelle : — R15 représente une unité D dans laquelle R11 représente un atome d'oxygène permettant de lier E a D, — R16 représente un radical -OSO3"", — R17 représente un radical hydroxyle, étant entendu que le nombre d'unités saccharidiques comportées par le composé de formule (I) est compris entre 2 et 10, sous forme libres ou sous forme de sels avec une base ou un acide pharmaceutiquement acceptables ainsi que sous forme de solvats ou d'hydrates. Des composés particulièrement préférés sont des composés de formule 1 dans laquelle Y est un atome d'hydrogène.

L'invention englobe les dérivés azasucres sous leur forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables. Dans la forme acide, les fonctions -COO" et -SO3" sont respectivement sous forme -COOH et -SO3H.

Selon un de ses aspects particulièrement préférés, la présente invention concerne les composés suivant :

• (2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2- acétamido-2-désoxy-6-0-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-O- sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido- 2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α~D-gIucopyranosyl)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4- oxypipéridine-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n° 20) • (2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-N- sodium sulfonato-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1 - 4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-N- sodium sulfonato-2-désoxy-6-0-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1- 4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n°27) • (3-O-méthyl-2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)- (1-4)-(3-O-méthyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)- (1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3-carboxyIate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n°47) • (2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2,6- di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-0-sodium sulfonato-α- L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n° 69) • (4-O-propyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1- 4)-(2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipé ridine-3- carboxylate de sodium (3S, 4R1 5R)) (composé n°74). • (2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2- acétamido-2-désoxy-6-0-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-O- sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido- 2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(3-(hydroxy)-5- hydroxyméthyl-4-oxypipéridine (3R, 4R, 5R)) (composé n°123). • (4-O-phénylpropyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3-carboxylate de sodium (3S1 4R, 5R)) (composé n°124).

Dans le cadre de la présente invention : un radical (CrC5)alkyle représente un radical aliphatique, pouvant comporter de 1 à 5 atomes de carbone, saturé linéaire ou ramifié. A titre d'exemples, on peut citer les radicaux méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, terbutyle, ..., - un radical -O-aralkyle représente un groupement alkyle tel que défini ci-dessus mais substitué par un radical aromatique pouvant lui même porter des substituants. A titre d'exemple on peut citer le p-methoxy-benzyl, phénymethyl, phényléthyl, phénylpropyl, ..., un radical (CrCsJalkylène représente un groupe alkyle bivalent comportant de 1 à 3 atomes de carbone. On entend par sel pharmaceutiquement acceptable des dérivées azasucres de l'invention, un dérivé azasucre dans lequel une ou plusieurs des fonctions -COO" ou/et -SO3" sont liées de façon ionique à un cation pharmaceutiquement acceptable. Les sels préférés selon l'invention sont ceux dont le cation est choisi parmi les cations des métaux alcalins et plus préférablement encore ceux dont le cation est Na+ ou K+.

Dans son principe le procédé de préparation des composés selon l'invention utilise des synthons de base mono-, di- ou oligosaccharidiques préparés comme précédemment rapporté dans la littérature et choisis en tenant compte notamment de l'orthogonalité des groupes protecteurs. On se référera notamment à EP 300099, EP 529715, EP 621282 et EP 649854 ainsi qu'à C. van Boeckel, M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., (1993), Vol.32, p.1671 -1690. Ces synthons sont ensuite couplés les uns aux autres de façon à fournir un équivalent entièrement protégé d'un composé selon l'invention. Cet équivalent protégé est ensuite transformé en un composé selon l'invention en utilisant des procédés bien connus de l'homme de l'art.

Les composés de l'invention contenant en outre un motif azasucre (ou pipéridine substituée), leur synthèse requiert la préparation d'un précurseur de ce motif portant des groupements protecteurs compatibles avec les couplages ultérieurs à des mono-, di-, ou oligosaccharides. Les précurseurs des azasucres sont préparés selon des procédés décrits dans la littérature. On se référera en particulier à l'ouvrage « Iminosugars as Glycosidase Inhibitors », AE Stϋtz, Wiley-VCH, 1999.

Lorsque les synthons nécessaires à l'assemblage de la chaîne sont disponibles, on procède aux couplages de ces synthons entre eux. Dans les réactions de couplage évoquées, un synthon "donneur", activé sur son carbone anomère, réagit avec un synthon "accepteur", possédant au moins un hydroxyle libre.

La présente invention concerne un procédé pour la préparation des composés de formule (I) caractérisé en ce que : dans une première étape, on prépare un équivalent complètement protégé du composé (I) désiré; dans une seconde étape, les groupes chargés négativement (carboxylates, sulfonates) ainsi que les hydroxyles libres sont introduits et/ou démasqués.

La synthèse du précurseur est réalisée selon des réactions bien connues de l'homme de l'art en utilisant en particulier les méthodes de la synthèse osidique (GJ. Boons, Tetrahedron, (1996), Vol.52, p.1095-1121 ; WO98/03554 et WO99/36443) selon lesquelles un oligosaccharide donneur de liaison glycosidique est couplé avec un oligosaccharide accepteur de liaison glycosidique pour conduire à un autre oligosaccharide dont la taille est égale à la somme des tailles des deux espèces réactives. Cette séquence est répétée jusqu'à l'obtention du composé de formule (I) désiré. La structure du composé final désiré détermine la nature des entités chimiques utilisées dans les différentes étapes de la synthèse, de façon à contrôler la stéréochimie et la régiosélectivité, selon les règles bien connues de l'homme de l'art. Les composés de l'invention sont obtenus à partir de leurs précurseurs polysaccharidiques complètement protégés en utilisant, en général, l'enchaînement suivant de réactions : - Libération et substitution des fonctions devant être transformées en groupes N- et/ou O-sulfonate. - Libération des autres fonctions et assemblage éventuel des fragments entre eux, par exemple par une réaction d'amination réductrice. La libération des fonctions acides carboxyliques peut être effectuée à différents stades de ce procédé.

Les composés de l'invention peuvent naturellement être préparés en utilisant différentes stratégies connues par l'homme de l'art de la synthèse osidique et organique.

Le procédé décrit ci-dessus est le procédé préféré de l'invention. Toutefois, les composés de formule (I) peuvent être préparés par d'autres méthodes bien connues de la chimie des sucres décrites par exemple dans « Monosaccharides, Their chemistry and their rôles in natural products », P. M. Collins et RJ. Ferrier, J. Wiley & sons, 1995 et dans GJ. Boons, Tetrahedron, (1996), Vol.52, p.1095- 1121.

Les groupes protecteurs utilisés dans le procédé de préparations des composés (I) sont ceux couramment utilisés dans la chimie des sucres par exemple dans Protective Groups in Organic Synthesis, TW Greene, PGM Wuts, John Wiley & sons, New-York, 1999. Les groupes protecteurs sont avantageusement choisis par exemple parmi les groupes acétyle, halogénométhyle, benzoyle, lévulinyle, benzyle, benzyle substitué, trityle éventuellement substitué, carbamate, tétrahydropyranyle, allyle, pentenyle, ferf-butyldiméthylsilyle (tBDMS) ou triméthylsilyléthyle. Les groupes activateurs sont ceux classiquement utilisés en chimie des sucres selon par exemple G J. Boons, Tetrahedron, (1996), Vol.52, p.1095-1121. Ces groupes activateurs sont choisis par exemple parmi les imidates, les thioglycosides, les penténylglycosides, les xanthates, les phosphites ou les halogénures. Le procédé décrit ci-dessus permet d'obtenir les composés de l'invention sous forme de sels. Pour obtenir les acides correspondants, les composés de l'invention sous forme de sels, sont mis en contact avec une résine échangeuse de cations sous forme acide. Les composés de l'invention sous forme d'acides peuvent être ensuite neutralisés par une base pour obtenir le sel souhaité. Pour la préparation des sels des composés de formule (I), on peut utiliser toute base minérale ou organique, donnant avec les composés de formule (I), des sels pharmaceutiquement acceptables. On utilise de manière préférentielle comme base l'hydroxyde de sodium, de potassium, de calcium ou de magnésium. Les sels de sodium et de calcium des composés de formule (I), sont les sels préférés.

Les composés selon l'invention ont fait l'objet d'études biochimiques et pharmacologiques. Les tests qui suivent, non limitatifs, illustrent la présente invention

On définit les termes suivants :

PET : polyethylene terephtalate, AM : acetoxymethyl, DMEM : milieu de Eagle modifié par Dulbecco, EDTA : ethylenediaminetetraacetic acid, Tris : tris(hydroxyméthyl)aminomethane, AT : Antithrombine III, nkat : nanokatal = unité de mesure enzymatique (donnée par le fabriquant), représentant la quantité de substrat catalysé par unité de temps.

1. Evaluation de l'activité des inhibiteurs d'héparanases dans un système enzvmatique (détermination des Cl sn des composés selon l'invention).

L'activité de l'héparanase est mise en évidence par sa capacité à dégrader le fondaparinux . La concentration de fondaparinux est déterminée grâce à son activité anti-facteur Xa.

A. Matériel et méthodes L'héparanase est produit par Sanofi-Synthélabo (Labège, France). Les réactifs de dosages du facteur Xa sont commercialisés par Chromogénix (Montpellier, France).

Des concentrations croissantes d'un composé selon l'invention, inhibiteur d'héparanases (dilutions variables : de 1nM à 10 μM) sont mélangées à une concentration fixe d'héparanase (pour chaque lot, des expériences préliminaires permettent de déterminer l'activité enzymatique suffisante à la dégradation de 0,45μg/ml de fondaparinux ajouté). Après 5 minutes à 370C le mélange est mis en présence du fondaparinux et laissé 1 heure à 37°C. La réaction est arrêtée par chauffage à 95 0C pendant 5 minutes. La concentration de fondaparinux résiduelle est enfin mesurée par addition de facteur Xa et de son substrat chromogène spécifique (Réf. S2222).

Les différents mélanges sont effectués selon la procédure qui suit :

, a) Mélange réactionnel

On mélange 50 μl de tampon acétate de sodium (0.2 M, pH 4.2), avec 50 μl de fondaparinux (0.45 μg/ml) et 59 μl d'une solution d'héparanase). On incube 1 heure à 37 0C, puis 5 minutes à 95°C. On mélange ensuite 100 μl du mélange réactionnel avec 50 μl de tampon Tris 50 mM, NaC1 175 mM EDTA 75 m M, pH 14. On passe ainsi du pH 4.2 à pH 7.

L'activité anti-facteur Xa du fondaparinux est mesurée de la façon qui suit :

b) Dosage de l'activité anti-facteur Xa du fondaparinux

On mélange 100 μl de la solution obtenue à l'étape a) avec 100 μl d'AT (0.5 μ/ml). On maintient pendant 2 minutes à 370C et on ajoute ensuite 100 μl de facteur Xa (7nkat/ml). On maintient pendant 2 minutes à 37°C et on ajoute ensuite 100 μl de substrat chromogénique (Réf. : S2222) (1 mM). On maintient pendant 2 minutes à 37 0C et on ajoute ensuite 100 μl d'acide acétique (50 %). La lecture de la densité optique s'effectue à 405 nm.

Un pourcentage d'inhibition est déterminé par rapport au contrôle sans inhibiteur. Une courbe des pourcentages d'inhibition permet de calculer une Cl50. B. Résultats

Les composés selon la présente invention présentent des Cl50 comprises entre 10 nM et 10 μM. Par exemple, le composé n° 27 présente une Cl50 de 11 ± 4 nM (moyenne ± SD, faite sur deux essais)

2. Effet des inhibiteurs d'héparanases sur l'invasion des cellules tumorales HT1080

L'effet des composés de formule (I), inhibiteurs d'héparanases, a été testé in vitro sur l'invasion des cellules tumorales HT1080.

A. Matériel et méthodes :

a) Culture cellulaire:

Les cellules issues de fibrosarcomes humains, HT1080 (ATCC CCL-121 ) sont cultivées dans un milieu DMEM (Réf. : GIBCO 11960-044) contenant 5% de Sérum de Veau Fœtal, de la glutamine (2 mM) (Réf. : GIBCO 25030-024), du pyruvate de sodium (1 mM) (Réf. : GIBCO 11360-039) et des acides aminés non essentiels (1X) (Réf. : GIBCO 11140-035), sur flasks coatés collagène (Becton Dickinson 75 cm2 ; Réf. 354523), jusqu'à 50 à 80% de confluence.

b) Test d'invasion cellulaire

Les mesures d'invasion des HT1080 sont réalisées sur kit Becton Dickinson falcon HTS Fluoroblok Multiwell Insert System en plaques de 24 puits (Réf. : 351 158). Ces chambres de mesure fournissent aux cellules des conditions permettant d'évaluer leurs propriétés invasives in vitro. Le kit est composé d'une plaque associée à des inserts de culture contenant une membrane PET trouée de pores de 8 microns sur laquelle on dépose une couche uniforme de Matrigel Matrix (Becton Dickinson ; Réf. 354230). Le matrigel est une membrane basale soluble extraite de la tumeur EHS (Engelbreth-Holm-Swarm) qui, grâce à sa composition, forme en se solidifiant une structure équivalente à une membrane basale. La couche de Matrigel occlue les pores de la membrane, bloquant ainsi la migration des cellules non-invasives au travers de la membrane. Au contraire, les cellules invasives (tumorales ou non tumorales) seront capables de se détacher et d'envahir Ia couche de Matrigel avant de migrer à travers la membrane. La quantification de la migration cellulaire est réalisée par marquage à la calcéine AM (Molecular Probes C-3100). Le signal fluorescent émis est mesuré à l'aide d'un lecteur Perkin Elmer Wallac VICTOR 3 et peut être directement corré\é avec le nombre de cellules ayant envahi le gel de Matrigel. En les comparant à des contrôles effectués dans la même expérience que les produits étudiés (réponse en présence de 0% et 5 % de sérum de veau fœtal), il est possible de déterminer un pourcentage d'inhibition de l'invasion cellulaire en présence des produits.

B. Résultats

Une série de déterminations indépendantes (variant de 2 à 4, a permis de montrer qu'à une concentration comprise entre 1 nM et 10 μM, les composés selon l'invention inhibent en moyenne l'invasion cellulaire avec un pourcentage compris entre 8 et 60 %.

Par exemple, une série de quatre déterminations indépendantes a permis de montrer que 10 μM du composé n° 20 inhibent en moyenne l'invasion cellulaire avec un pourcentage égal à 40.3 ± 8.3 % (moyenne ± écart-type). De plus, le composé n° 20 a un effet dose dépendant sur l'invasion cellulaire. En effet : à une concentration de 0,3 μM, le composé n° 20 inhibe l'invasion cellulaire de 26 + 3%, - à une concentration de 1 μM, le composé n° 20 inhibe l'invasion cellulaire de 53 + 11%. Ces résultats mettent en évidence une augmentation de l'inhibition de l'invasion cellulaire en fonction de Ia dose du composé n° 20.

Les composés de formule (I) selon la présente invention présentent donc une bonne affinité pour les héparanases et présentent un effet inhibiteur des héparanases.

Il a été démontré chez les animaux et chez l'homme que l'augmentation de la sécrétion d'héparanases et la progression cancéreuse sont corrélées (Goldschmit et al., PNAS, (2002), Vol.99(15), p.10031 -10036). Par exemple, un niveau d'héparanases élevé a été détecté dans le sérum d'animaux présentant des tumeurs métastatiques (Vlodavsky et al., Isr. J. Med. Sci., (1988), Vo!.24(9-10), p.464-470) ou encore dans l'urine de patients atteints de cancer, ayant développé de nombreuses métastases (Vlodavsky ef al., Curr. Biol., (1997), VoIJ(I), p.43- 51). Des biopsies de tumeurs ont révélé la même corrélation (Vlodavsky et al., Isr. J. Med. ScL, (1988), Vol .24(9-10), p.464-470). Il existe donc une corrélation entre l'augmentation de sécrétion d'héparanases et le potentiel métastatsique des cellules tumorales (Vlodavsky ef al., Invasion Matastasis, (1994), Vol.14, p.290- 302 ; Nature Medicine, (1999), Vol.5. p. 793-802).

Les héparanases, sécrétées par les cellules tumorales, dégradent les HSPGs et HS, composants majeurs de la ECM. La ECM ainsi perforée, laisse circuler les cellules tumorales et métastasiques et permet également l'invasion de vaisseaux sanguins néoformés (angiogénèse) (Suzanne A. Eccles, Nat. Med., (1999), Vol.5(7), p.793-809). L'angiogénèse est un processus de génération de nouveaux vaisseaux capillaires à partir de vaisseaux préexistants ou par mobilisation et différentiation de cellules de la moelle osseuse. Ainsi, à la fois une prolifération incontrôlée des cellules endothéliales et une mobilisation d'angioblastes à partir de la moelle osseuse sont observées dans les processus de néo-vascularisation des tumeurs. Ainsi, les héparanases représentent des cibles pertinentes pour, les thérapies visant à inhiber les processus d'invasion de cellules cancéreuses et de métastasisation d'une part, et d'angiogénèse d'autre part. On entend par cancer (ou carcinome) toute croissance cellulaire maligne de l'épithélium, présent dans la peau mais également et surtout dans la paroi des organes ainsi que l'apparition de cellules tumorales métastasiques telles que les mélanomes, mésothéliome, lymphome, leucémie, fibrosarcome, rhabdomyosarcome, mastocytome, mais également les carcinomes touchant un tissu tels que le colon, le rectum, la prostate, les poumons, les seins, le pancréas, l'intestin, les reins, les ovaires, l'utérus, le col de l'utérus, la vessie, le foie et l'estomac. Les carcinomes infiltrent les tissus adjacents et s'étendent (métastasent) à d'autres organes distants, par exemple, foie, poumons, cerveau ou les os. Un composé possédant une activité inhibitrice des héparanases tels que les composés de l'invention peut donc être utile pour le traitement de tels cancers (Fang J et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, (2000), Vol.97(8), p. 3884-3889 ; Kondraganti et al., Cancer Res., (2000), Vol.60(24), p. 6851-6855), et notamment le cancer colorectal, de la prostate, du poumon, du sein, du pancréas, de rein, de la vessie et des ovaires. Le récepteurs p75, récepteur des molécules de la famille des neurotrophines (NT), a été identifié comme étant un marqueur représentatif du phénomène de métastasisation dans le cerveau. Il a de plus été démontré que la sécrétion de NT implique une augmentation de la sécrétion d'héparanases (Marchetti D. et al, J. CeII. Biochem., (2004), Vol.91 (1), p. 206-215). Ainsi, un composé possédant une activité inhibitrice des héparanases tels que les composés de l'invention peut donc être utile pour diminuer la métastasisation au niveau du système nerveux central en inhibant l'action de l'activation du récepteur P75 (Marchetti D. et ai, Pathol. Oncol. Res., (2003), Vol.9(3), p. 147-158 et Epub, (2003), Review ; Walch ET. et al., Int. J. Cancer, (1999), Vol.82(1), p. 112-120 ; Menter DG. et al., Invasion Metastasis, (1994-95), Vol.14(1-6), p. 372-384 ; Marchetti D. et al., Int. J. Cancer, (1993), Vol. 55(4), p. 692-699).

L'activité des héparanases sur les HSPGs de la ECM semble également être corrélée avec le déclenchement de réactions inflammatoires et auto-immunes (Vlodavsky et al., Invasion metastasis, (1994), Vol.4, p. 290-302 ; Goldschmit et al., Med. ScL, (2002), Vol.99(15), p. 10031-10036). L'interaction des plaquettes, des granulocytes, des lymphocytes B et T, des macrophages et des mastocytes avec la ECM, est associée à la dégradation des HS par les héparanases (Vlodavsky et al., Invasion Metastasis, (1992), Vol.12, p.112-127). Ainsi, un composé tel que les composés de l'invention, possédant une activité inhibitrice des héparanases, peut donc être utile pour le traitement de maladies inflammatoires, notamment les maladies inflammatoires chroniques comme l'arthrite rhumatoïde ou les IBD (Inflammatory Bowel Disease), comprenant deux formes de maladies inflammatoires chroniques de l'intestin : les UC (ulcerative colitis) et la maladie de Crohn's (CD) ou de maladies auto-immunes.

D'autres études laissent penser que les héparanases pourrait jouer un rôle dans le traitement de maladies cardiovasculaires (Journal of Pharmacological Sciences, (2004), 94, No. Supplément 1, pp. 160P, print. ; and Meeting Info.: 77th Annual Meeting of the Japanese Pharmacological Society. Osaka, Japan. March 08-10, 2004. Japanese Pharmacological Society ; and Miller, Heather Ann, Diss. Abstr. Int., (1984), B 2003, 64(5) ; Demir et al., Clin. Appl. Thromb.. Hemost, (2001), Vol.7(2), p. 131-140), telles que Ia resténose post angioplastie, des maladies liées aux complications vasculaires du diabète comme les rétinopathies diabétiques, l'athérosclérose {Atherosclerosis, (1999), Vol.145, p. 97-106 ; J. Clin. Invest, (1997), Vol.100, p. 867-874) ou encore les maladies thromboemboliques et les thromboses artérielles. Ainsi, un composé, inhibiteur d'héparanases, selon l'invention peut présenter une thérapie de choix dans ces pathologies.

Par ailleurs, les héparanases sont connues pour être impliquées dans certains cas d'insuffisance rénale où les fonctions de filtration et de réabsorption rénales peuvent être altérées (FASEB J, (2004), Vol.18. p. 252-263). Ainsi, un composé, inhibiteur d'héparanases, selon l'invention peut présenter une thérapie de choix dans telles pathologies.

Les HSPGs de la ECM, semblent également jouer un rôle de régulateurs majeurs de la croissance et de l'activation cellulaire, via la modulation de facteurs de croissance, en particulier des FGFs (Fibroblast Growth Factors). Par exemple, l'activité des héparanases implique la libération de facteurs de croissance comme les FGFs, qui stimulent notamment l'angiogénèse et favorise la progression tumorale (Bashkin et al., Biochemistry, (1989), Vol.28, p. 1737-1743). Ainsi, les héparanases représentent des cibles pertinentes pour le traitement de maladies dans lesquelles les FGFs sont impliqués.

De manière générale, les FGFs sont impliqués de façon importante par l'intermédiaire de sécrétions autocrines, paracrines ou juxtacrines dans les phénomènes de dérégulation de la stimulation de la croissance des cellules cancéreuses. De plus, les FGFs initient l'angiogénèse tumorale qui joue un rôle prépondérant à la fois sur la croissance de la tumeur mais aussi sur les phénomènes de métastasisation.

L'angiogénèse est un processus de génération de nouveaux vaisseaux capillaires à partir de vaisseaux préexistants ou par mobilisation et différentiation de cellules de la moelle osseuse. Ainsi, à la fois une prolifération incontrôlée des cellules endothéliales et une mobilisation d'angioblastes à partir de la moelle osseuse sont observées dans les processus de néo-vascularisation des tumeurs. Il a été montré in vitro et in vivo que plusieurs facteurs de croissance stimulent la prolifération endothéliale, et notamment le FGF-1 ou a-FGF et le FGF-2 ou b-FGF.

Les a-FGF et b-FGF jouent par exemple, un rôle important dans la croissance et le maintien des cellules de la prostate (DoII JA. ét al., Prostate, (2001), Vol.305. p.49- 293. Plusieurs travaux montrent la présence de a-FGF et b-FGF et de leurs récepteurs FGFRs à la fois dans les lignées tumorales humaines du sein (notamment MCF7) et dans des biopsies de tumeurs.

Les cellules de gliome produisent in vitro et in vivo du a-FGF et du b-FGF et possèdent à leur surface différents récepteurs FGFs.

Plus récemment le rôle potentiel d'agents pro angiogéniques et notamment des FGFs dans les leucémies et lymphomes a été documenté (Thomas DA. et ai., Acta Haematol, (2001), Vol.207, p.106-190).

Il existe une corrélation entre le processus d'angiogénèse de la moelle osseuse et les "extramedullar disease" dans les CML (chronic myelomonocytic leukemia).

La prolifération et la migration de cellules musculaires lisses vasculaires contribuent à l'hypertrophie intimale des artères et joue ainsi un rôle prépondérant dans l'athérosclérose et dans la resténose après angioplastie et endoarterectomie. Des études in vivo montrent, après lésion de la carotide par "balloon injury", une production locale de a-FGF et de b-FGF.

Les troubles vasculaires dus au diabète se caractérisent par une altération de la réactivité vasculaire et du flux sanguin, une hyperperméabilité, une réponse proliférative exacerbée et une augmentation des dépôts de protéines matricielles. De manière plus précise le a-FGF et le b-FGF sont présents dans les membranes pré rétiniennes de patients ayant des rétinopathies diabétiques, dans les membranes des capillaires sous jacents et dans l'humeur vitrée de malades souffrants de rétinopathies prolifératives.

L'arthrite rhumatoïde (RA) est une maladie chronique avec une étiologie inconnue. Alors qu'elle affecte de nombreux organes, la forme la plus sévère de RA est une inflammation synoviale des articulations progressive aboutissant à la destruction. L'angiogénèse semble affecter de manière importante la progression de cette pathologie. Ainsi le a-FGF et le b-FGF ont été détectés dans le tissu synovial et dans le fluide articulaire de patients atteints de RA, indiquant que ce facteur de croissance intervient dans l'initiation et / ou la progression de cette pathologie. Dans des modèles de AIA (adjuvant-induced model of arthritis) chez le rat, il a été montré que la sur-expression de b-FGF augmente la sévérité de la maladie alors qu'un anticorps neutralisant anti b-FGF bloque la progression de la RA (Yamashita et al., J.lmmunol., (2002), Vol.57, p. 168-450 ; Manabe et al., Rheumatol, (1999), Vol.20, p. 38-714).

L'angiogénèse et l'inflammation sont également des phénomènes majeurs intervenant dans les processus impliqués dans l"ostéoarthrite conduisant à une destruction de l'articulation associée à de la douleur. L'angiogénèse peut également jouer un rôle dans l'hypertrophie chondrocytaire et l'ossification contribuant ainsi aux modifications de l'articulation (Bonnet CS et a Rheumatology. (1 ) 7-16 2005).

Les IBD (inflammatory bowel disease) comprennent deux formes de maladies inflammatoires chroniques de l'intestin : les UC ( ulcerative colitis) et la maladie de Crohn's (CD). Les IBD sont caractérisées par une dysfonction immunitaire se traduisant par une production inappropriée de cytokines inflammatoires induisant l'établissement d'un système micro-vasculaire local. Cette angiogénèse d'origine inflammatoire a pour conséquence une ischémie intestinale induite par vasoconstriction. Des taux circulants et locaux de b-FGF importants ont été mesurés chez des patients atteints de ces pathologies (Kanazawa et al., American Journal of Gastroenterology, (2001), Vol.28, p. 96-822 ; Thorn et al., Scandinavian Journal of Gastroenterology, (2000), Vol.12, p. 35-408).

Un composé possédant une activité inhibitrice des héparanases tels que les composés de l'invention, peut donc être utile pour le traitement de maladies liées à un une up régulation des FGFs et/ou de leurs récepteurs.

Grâce à leur faible toxicité et leurs propriétés pharmacologiques et biologiques, les composés de la présente invention trouvent leur application dans le traitement de tout carcinome ayant un degré de vascularisation important (poumon, sein, prostate, œsophage) ou induisant des métastases (colon, estomac, mélanome) ou étant sensibles au a-FGF ou au b-FGF de manière autocrine ou enfin dans des pathologies de type lymphomes et leucémies. Ces composés représentent une thérapie de choix soit seul soit en association avec une chimiothérapie ou une radiothérapie adaptée ou en association avec un traitement par des anti- angiogènes. Les composés selon l'invention trouvent également leur application dans le traitement de maladies cardiovasculaires comme l'athérosclérose, la resténose post angioplastie dans le traitement des maladies liés aux complications apparaissant suite à la pose de prothèses endovasculaires et/ou de pontages aorto-coronariens ou de complications vasculaires du diabète comme les rétinopathies diabétiques. Les composés selon l'invention trouvent également leur application dans le traitement de maladies inflammatoires chroniques comme l'arthrite rhumatoïde ou les IBD.

Les produits selon l'invention trouvent également leur application dans le traitement de la dégénérescence maculaire. Un caractère majeur de la perte de la vision chez l'adulte est la néo-vascularisation et les hémorragies consécutives qui causent des désordres fonctionnels importants au niveau de l'oeil et qui se traduisent par une cécité précoce. Récemment, l'étude des mécanismes impliqués dans les phénomènes de néo-vascularisation oculaire a permis de mettre en évidence l'implication de facteur pro-angiogéniques dans ces pathologies.

Les composés de l'invention peuvent également être utilisés en combinaison d'un ou plusieurs traitements anticancéreux, comme les traitements chirurgicaux la radiothérapie ou en association avec des composés bloquant l'angiogenèse. Par exemple, les composés de l'invention peuvent être utilisés seuls ou en association avec un autre principe actif tel que cisplatine, cyclophosphamide, methotrexate, 5- fluorouracile, paclitaxel, docetaxel, vincristine, vinblastine, vinorelbine, doxorubicine, tamoxifène, torémifène, acétate de megestrol, anastrozole, goserelin, capecitabine et raloxifène ou des molécules ayant une activité anti- angiogénique, pour le traitement de cancer.

Selon un autre de ses aspects, la présente invention a donc pour objet une composition pharmaceutique contenant, en tant que principe actif, un composé de formule (I) sous forme libre ou sous forme de sels formés avec une base ou un acide pharmaceutiquement acceptables, selon l'invention, éventuellement en association avec un ou plusieurs excipients inertes et appropriés.

Lesdits excipients sont choisis selon la forme pharmaceutique et le mode d'administration souhaités : orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, transdermique, trans-muqueux, locale ou rectale.

Dans chaque unité de dosage, le principe actif est présent dans les quantités adaptées aux doses journalières envisagées afin d'obtenir l'effet prophylactique ou thérapeutique désiré. Chaque unité de dosage peut contenir de 0,1 à 100 mg de principe actif, de préférence 0,5 à 50 mg.

Les compositions pharmaceutiques de l'invention peuvent être destinées à l'administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, intratrachéale, topique, intranasale, transdermique, rectale, intraoculaire, vaginale. Les formes unitaires d'administration peuvent être, par exemple, des comprimés, des gélules, des granules, des poudres, des solutions ou suspensions orales ou injectables, des timbres transdermiques ("patch"), des stylos injecteurs, des suppositoires. Pour l'administration locale on peut envisager des pommades, crèmes, lotions, collyres, gels, sprays, huile. Lesdites formes unitaires sont dosées pour permettre une administration journalière de 1 à 100 mg de principe actif par kg de poids corporel, selon la forme galénique utilisée.

Pour préparer des comprimés on ajoute au principe actif, micronisé ou non, un véhicule pharmaceutique qui peut être composé de diluants, comme par exemple le lactose, la cellulose microcristalline, l'amidon, et des adjuvants de formulation comme des liants, (polyvinylpyrrolidone, hydroxypropylméthylcellulose, ...), des agents d'écoulement comme la silice, des lubrifiants comme le stéarate de magnésium, l'acide stéarique, le tribehenate de glycerol, le stéarylfumarate de sodium. Des agents mouillants ou tensioactifs tels que le laurylsulfate de sodium peuvent aussi être ajoutés. Les techniques de réalisation peuvent être la compression directe, la granulation sèche, la granulation humide ou la fusion à chaud. Les comprimés peuvent être nus, dragéifiés, par exemple par du saccharose, ou enrobés avec divers polymères ou autres matières appropriées. Il peuvent être conçus pour permettre une libération rapide, retardée ou prolongée du principe actif grâce à des matrices polymères ou à des polymères spécifiques utilisés dans l'enrobage.

Pour préparer des gélules on mélange le principe actif avec des véhicules pharmaceutiques secs (simple mélange, granulation sèche ou humide, ou fusion à chaud), liquides ou semi-solides. Les gélules peuvent être dures ou molles, pelliculées ou non, de manière à avoir une activité rapide, prolongée ou retardée (par exemple pour une forme entérique). Une composition sous forme de sirop ou d'élixir ou pour l'administration sous forme de gouttes peut contenir le principe actif conjointement à un édulcorant, de préférence acalorique, du méthylparaben ou du propylparaben comme antiseptique, un agent de sapidité et un colorant.

Les poudres et granules dispersibles dans de l'eau peuvent contenir le principe actif en mélange avec des agents de dispersion ou des agents mouillants, ou des agents dispersants comme la polyvinylpyrrolidone, de même qu'avec des édulcorants et des agents correcteurs de goût.

Pour l'administration rectale, on recourt à des suppositoires préparés avec des liants fondant à la température rectale, par exemple du beurre de cacao ou des polyéthylèneglycols.

Pour une administration parentérale, on utilise des suspensions aqueuses, des solutions salines isotoniques ou des solutions stériles injectables contenant des agents de dispersion et/ou des mouillants pharmacologiquement compatibles, par exemple le propylèneglycol ou le butylèneglycol.

Le principe actif peut être formulé également sous forme de micro capsules, éventuellement avec un ou plusieurs supports ou additifs, ou bien avec une matrice polymère ou avec une cyclodextrine (timbres transdermiques, formes à libération prolongée).

Les compositions à administration locale selon l'invention comprennent un milieu compatible avec la peau. Elles peuvent se présenter notamment sous forme de solutions aqueuses, alcooliques ou hydroalcooliques, de gels, d'émulsions eau- dans-huile ou huile-dans-eau ayant l'aspect d'une crème ou d'un gel, de micro émulsions, d'aérosols, ou encore sous forme de dispersions vésiculaires contenant des lipides ioniques et/ou non ioniques. Ces formes galéniques sont préparées selon les méthodes usuelles des domaines considérés.

Le principe actif peut être formulé également sous forme de micro capsules, éventuellement avec un ou plusieurs supports ou additifs, ou bien avec une matrice polymère ou avec une cyclodextrine (timbres transdermiques, formes à libération prolongée). Les compositions locales selon l'invention comprennent un milieu compatible avec la peau. Elles peuvent se présenter notamment sous forme de solutions aqueuses, alcooliques ou hydroalcooliques, de gels, d'émulsions eau-dans-huile ou huile-dans-eau ayant l'aspect d'une crème ou d'un gel, de micro émulsions, d'aérosols, ou encore sous forme de dispersions vésiculaires contenant des lipides ioniques et/ou non ioniques. Ces formes galéniques sont préparées selon les méthodes usuelles des domaines considérés.

Les exemples qui suivent, donnés à titre non limitatif, illustrent la préparation de composés selon la présente invention.

Abréviations utilisées dans le texte qui suit :

Ac = acétyle AII = allyle Bn = benzyle Me = méthyle Ph = phényle PMB = (4-méthoxy)benzyle PMBBr = (3-bromo-4-méthoxy)benzyle Z = benzyloxycarbonyle CCM = chromatographie sur couche mince

Les exemples qui suivent illustrent la préparation de composés selon l'invention, sans Ia limiter. Avant d'aborder la préparation de ces différents exemples, il est décrit ci-après la préparation de composés (PREPARATION) utiles à l'obtention de composés de l'invention ou à d'autres préparations. Pour les préparations et exemples qui suivent, on utilise les méthodes expérimentales suivantes :

METHODE 1 Oxydation des alcools primaires en acide, puis transformation en ester de benzyle

Du TEMPO® (0.02 équivalent molaire) et une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (4 L/mol) sont ajoutés à une solution de composé à oxyder (1 équivalent molaire) dans le tétrahydrofurane (THF) (3.5 L/mol). Après refroidissement à 0 0C, du Bromodan (2 équivalents molaire) est ajouté goutte à goutte pendant 20 min. Après 3h d'agitation magnétique le mélange réactionnel est concentré et le résidu est séché par évaporation répétée de diméthylformamide (DMF) (4.95 L/mol). Le composé brut ainsi obtenu est utilisé tel quel dans l'étape suivante. Une solution du composé précédent dans le diméthylformamide (13.1 L/mol) est traitée à température ambiante (1-15h) avec du bromure de benzyle (10 équivalents molaire), et de l'hydrogénocarbonate de potassium (5 équivalents molaire). Le mélange réactionnel est concentré puis, le résidu est dissous dans l'acétate d'éthyle (35 L/mol), lavé à l'eau, séché (sulfate de sodium), et concentré. Une chromatographie sur colonne donne l'ester de benzyle attendu.

METHODE 2 Couplage aux imidates catalysé par le triflate de ieû-butyldiméthylsilyle

Une solution de triflate de fe/f-butyldiméthylsilyle dans du dichlorométhane (0,1 M, 0,15 mole par mole d'imidate) est ajoutée, sous argon, à - 20° C, à une solution de l'imidate et de l'accepteur de glycosyle dans un mélange dichlorométhane/éther diéthylique (1:2, 22.5-45 L/mol) en présence de tamis moléculaire 4 Â. Après 10- 45 minutes (CCM), on ajoute de l'hydrogénocarbonate de sodium solide. On filtre la solution, on lave à l'eau, on sèche et on évapore à sec.

METHODE 3 Méthode de saponification des esters.

A une solution de composé à saponifier dans du tétrahydrofurane (160 L/mol) sont additionnés successivement, à -5 0C, de l'eau oxygénée (H2O2) à 30% (7.16 L/mol ester), et une solution aqueuse 0.7 N d'hydroxyde de lithium (2.3 moles par mole d'ester). Après 1h d'agitation à -5 0C, le milieu réactionnel est placé 4h à 0 0C, puis agité à température ambiante jusqu'à consommation des esters. Le brut réactionnel est alors éventuellement purifié sur colonne LH-20.

METHODE 4 Sulfonatation

On ajoute du complexe triéthylamine/trioxyde de soufre (5 moles par fonction hydroxyle) à une solution dans le diméthylformamide (QO L/mol) du composé à sulfater. Après 12 à 22 heures à 55° C1 on ajoute à 0 0C du méthanol ou une solution aqueuse de d'hydrogénocarbonate de sodium, et après 0.5-24h d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est purifié à l'aide d'une colonne LH- 20, ou de deux colonnes Sephadex® G-25 (éluées successivement par une solution aqueuse de chlorure de sodium 0,2 M, puis par de l'eau). Les fractions contenant le produit sont alors concentrées sous vide poussé pour conduire au composé désiré.

METHODE 5 Hydrogénolyse des éthers de benzyle et/ou des esters de benzyle

On laisse agiter pendant 6-16h (CCM) une solution du composé dans un mélange acide acétique glacial / eau / terf-butanol sous une atmosphère d'hydrogène (3- 15 bars) en présence de palladium sur charbon (équivalent à 0.7-3 fois la masse du composé) à 5 ou 10 %. Après filtration, on dépose la solution au sommet d'une colonne de Sephadex® G-25 éluée par du chlorure de sodium 0,2 M. On concentre les fractions contenant le produit et on dessale en utilisant la même colonne éluée par l'eau. Le composé final est obtenu après lyophilisation.

Des préparations utiles à l'obtention des composés selon l'invention sont décrites ci-dessous.

PREPARATION 1 : Synthèse du 5-(benzyloxy)-4-hydroxypïpéridine-1,3-dicarboxyIate de dibenzyle (3S, 4R, 5R) (n° 6)

Etape la : Préparation du 1-benzyl-3-(benzyloxy)-5-(hvdroxyméthyl)pipéridin-4-ol (3R, 4R. 5R) (n° 2) La synthèse du composé 1 est décrite dans T.M. Jespersen and M. Bols, Tetrahedron (1994) 50 (47), 13449-13460 et dans le brevet US 5,844,102. La synthèse du composé 2 est décrite dans le brevet WO98/50359. A une solution du composé 1 (10.8 g, 42.8 mmol) dans le méthanol (590 mL) sont ajoutés successivement du cyanoborohydrure de sodium (5.38 g, 2 équivalents molaires), puis de l'acide acétique (7.4 mL, 3 équivalents molaire) à -10 0C et une solution de benzylamine (5.1 mL, 1.1 équivalent) dans du méthanol (100 mL). Après retour à température ambiante, le mélange réactionnel est porté à 50 0C pendant 2h. Après retour à température ambiante, une solution d'hydrogénocarbonate de sodium 2% (85 mL) est additionnée. Le méthanol est concentré sous vide, puis le résidu est dilué par du dichlorométhane et la phase organique est lavée à l'eau, puis par une solution aqueuse de chlorure de sodium, séchée (Na2SO4), puis concentrée sous vide. Le résidu est engagé directement dans l'étape suivante sans purification.

Etape 1.b : Préparation du [4-(acétyloxy)-1-benzyl-5-(benzyloxy)pipéridin-3-vn acétate de méthyle (3R, 4R. 5R) (n° 3)

A une solution du composé brut 2 (10.8 g) obtenu à l'étape la dans du dichlorométhane (345 mL), sont ajoutés successivement, à 0 0C, sous argon, de la triéthylamine (13.5 mL, 2.25 équivalents molaire), de la 4-(diméthy!amino)pyridine (DMAP) (7.84 g, 1.5 équivalent), et de l'anhydride acétique (61 mL, 15 équivalents molaire). La température est maintenue à 0 0C pendant 10 min, puis le milieu réactionnel est placé à température ambiante pendant 16h. Le mélange réactionnel est alors concentré sous vide, et le résidu purifié sur gel de silice pour fournir le composé 3 (7.65g, 43%, 2 étapes). RMN 1H (CDCI3) δ 7.36-7.18 (m, 10H, Ar), 4.60-4.42 (dd, 2H, OCH2Ph), 2.02, 1.99 (2s, 6H, 2CH3CO).

Etape 1.c : Préparation du 4-(acétyloxy)-3-(acétyloxyméthyl)-5- (benzyloxy)pipéridine-i-carboχylate de benzyle (3R, 4R, 5R) (n° 4)

A une solution du composé 3 (2.31 g, 5.6 mmol) obtenu à l'étape 1.b dans le tétrahydrofurane (28 mL), est ajouté, sous argon, à -10 0C, du chlorure de benzyloxycarbonyle (2.4 mL, 3 équivalents molaire), puis le milieu réactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 18h. Le mélange réactionnel est alors concentré sous vide et le résidu est purifié sur gel de silice (1 :9 éther diéthylique - éther diisopropylique) pour conduire au composé 4 (2.14 g, 84%). Spectre de masse (ESI) m/z 478.3 [(M + Na)+].

Etape 1.d : Préparation du 3-(benzyloxy)-4-hydroxy-5-(hydroxyméthyl)pipéridine-1- carboxylate de benzyle (3R, 4R, 5R) (n° 5)

A une solution du composé 4 (1.9 g, 4.2 mmol) obtenu à l'étape 1.c, dans le dioxane (25 mL), est ajouté, à 0 0C, une solution de 0.84 M d'hydroxyde de lithium monohydràte (25 mL, 5 équivalents molaire). Le milieu réactionnel est maintenu à 0 0C pendant 5 minutes, puis est placé à température ambiante, pendant 30 min. Après neutralisation par de l'acide chlorhydrique (HCI : 3 N), le milieu réactionnel est dilué dans du dichlorométhane, lavé à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré. Le résidu est purifié sur gel de silice (3:1 acétate d'éthyle - cyclohexane), pour conduire au composé 5 (1.59 g, 90%). Spectre de masse (ESI) m/z 394.4 [(M + Na)+].

Etape 1.e : Préparation du 5-(benzyloxy)-4-hvdroχypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R) (n° 6)

Le composé 5 (3.18 g, 8.6 mmol) obtenu à l'étape 1.d, est traité selon la METHODE 1 pour conduire au composé 6 (2.92 g, 71%). Spectre de masse (ESI) m/z 476.5 [(M + Na)+].

PREPARATION 2 : Synthèse du (Benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1- 4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D«glucop yranose trichloroacétimidate) (n° 11)

10 11 Etape 2.a : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1 ,6-anhydro-2-azido-3-O-'ben2yl-2-désoxy-β-D- glucopyranose) (n° 8)

Le composé 7 sous forme 2'-0-acétylée (18.0 g, 31.48 mmol), préparé de la même manière que le composé 2'-O-benzoyIé décrit dans Y. Ichikawa et al., Tetrahedron Lett. (1986) 27 (5) 611-614, est traité selon la METHODE 1 pour conduire, après purification sur gel de silice (3:7 acétate d'éthyle - cyclohexane), au composé 8 (16.4 g, 77%). Spectre de masse (ESI) m/z 698.3 [(M + Na)+].

Etape 2.b : Préparation du (Benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1,6-di-O-acétyl-2-azido-3-O-ben zyl-2-désoxy-α,3-D- glucopyranose) (n° 9)

A une solution du composé 8 (3.74 g, 5.54 mmol) obtenu à l'étape 2. a, dans de l'anhydride acétique (52 ml_, 100 équivalents molaire), est additionné, à 0 0C, de l'acide trifluoroacétique (TFA) (4.7 mL, 11 équivalents molaire). Après retour à température ambiante, le mélange réactionnel est agité pendant 16h, puis est concentré, coévaporé au toluène, et purifié sur gel de silice (4:1 toluène-acétate d'éthyle), pour donner le composé 9 (4.33 g, 95%). Spectre de masse (ESl) m/z 842.2 [(M + Na)+].

Etape 2.c : Préparation du (Benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2 -désoxy-α,β-D- qlucopyranose) (n° 10)

A une solution du composé 9 (4.3 g, 5.24 mmol) obtenu à l'étape 2.b, dans de l'éther diéthylique (210 mL), est additionnée, à 0 0C, de la benzylamine (BnNH2) . (22 mL, 38 équivalents molaire). Après 4.5h d'agitation à température ambiante, le milieu est acidifié avec de l'HCI 1 N, puis est extrait à l'acétate d'éthyle, séché (Na2SO4), concentré, et purifié sur gel de silice (35:65 acétate d'éthyle - cyclohexane) pour conduire à 10 (3.4 g, 83%). Spectre de masse (ESI) m/z 800.2 [(M + Na)+]. Etape 2.d : Préparation du (Beπzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-Q-benzyl-2 -désoxy-α,l3-D- qlucopyranose trichloroacétimidate) (n° 11)

A une solution du composé 10 (3.38 g, 4.35 mmol) obtenu à l'étape 2.c, dans le dichlorométhane (82 mL), sont additionnés, sous argon, du carbonate de césium (Cs2CO3) (2.26 g, 1.6 équivalent molaire), puis du trichloroacétonitrile (CCI3CN) (1.74 mL, 5.0 équivalents molaire). Après 1.5h d'agitation, le mélange réactionnel est filtré, puis concentré. Le résidu est purifié sur gel de silice (3:7 acétate d'éthyle- cyclohexane) pour donner 11 (2.96 g, 74%). RMN 1H (CDCI3) δ 6.43 (d, H-1α GIc'), 5.64 (d, H-1β GIc1), 5.17 (d, IdoUA").

PREPARATION 3 : Synthèse du (3-O-benzy!-2,4-di-O-sodium suIfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodïum)-(1-4)-(2-acétamîdo-3-0-benzyl-2-désoxy-6-0-sodî urn sulfonato-α- D-glucopyranosyI)-(1-4)-(3-O-benzyl-2-O-sodium suIfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-3-O-beπzyI-2-désoxy-6- 0-sodium sulfonato-α-D-gIucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4- oxypipérïdine-1-carboxylate de benzyIe-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (n° 19)

12

15

16

17

19 sel de sodium

Etape 3.a : Préparation du (benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2 -désoxy-α-D- qlucopyranosylHI -4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 - 4)-(1 ,6-anhydro-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-β-D-qlucopyranose) (n° 12)

Le composé 11 (455 mg, 0.50 mmol) obtenu à l'étape 2.d et le composé 8 (675 mg, 1 mmol) obtenu à l'étape 2. a sont traités selon la méthode 2 pour fournir, après purification, ie composé 12 (385 mg, 54%). Spectre de masse (ESI) m/z 1457.6 [(M + Na)+]. Etape 3.b : Préparation du (benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2 -désoxy-α-D- qlucopyranosylH1-4Hbenzyl 2-0-acétyl-3-0-bβnzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1- 4M1 ,6-di-0-acétyl-2-azido-3-0-benzyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopy ranose) (n° 13)

Le composé 12 (365 mg, 0.254 mmol) obtenu à l'étape 3.a, est traité comme pour la synthèse du composé 9 (étape 2.b) pour conduire, après purification sur gel de silice (1 :1 Et2O - éther diisopropylique), à 13 (376 mg, 97%). Spectre de masse (ESI) m/z 1560.7 [(M + Na)+].

Etape 3.c : Préparation du (benzyl 2,4-di-Q-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2 -désoxy-α-D- qlucopyranosylH1-4Hbenzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1- 4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D-glucopy ranose) (h° 14)

Le composé 13 (364 mg, 0.237 mmol) obtenu à l'étape 3.b, est traité comme pour la synthèse du composé 10 (étape 2.c) pour donner, après purification sur gel de silice (7:3 Et2O-éther diisopropylique), le composé 14 (310 mg, 87%). Spectre de masse (ESI) m/z 1518.8 [(M + Na)+].

Etape 3.d : Préparation du (benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2 -désoxy-α-D- glucopyranosylH1~4Hbenzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1- 4)-(6-O-acéty[-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopy ranose trichloroacétimidate) (n° 15)

Le composé 14 (279 mg, 0.187 mmol) obtenu à l'étape 3.c, est traité comme pour la synthèse du composé 11 (étape 2.d), pour fournir, après purification sur gel de silice (1 :1 Et2O - éther diisopropylique), 15 (230 mg, 75%). Spectre de masse (ESI) m/z 1660.6 [(M + Na)+].

Etape 3.e : Préparation du (benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-f1-4)-(6-Q-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2 -désoxy-α-D- glucopyranosylH1-4Hbenzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1- 4H6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranos vP-(1-4)-(5- (benzyloxy)-4-oχypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 16) Les composés 15 (217 mg, 0.132 mmol) obtenu à l'étape 3.d, et 6 (126 mg, 0.264 mmol) obtenu à l'étape 1.e, sont traités selon la METHODE 2 pour fournir, après purification, le composé 16 (168 mg, 66%). Spectre de masse (ESI) m/z 1976.0 [(M + Na)+].

Etape 3.f : Préparation du (benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-acétamido-3-O-ben zyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranosylH1-4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1- 4)-(6-O-acétyl-2-acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qluco pyranosyl)-(1-4)-(5- (benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 17)

Le composé 16 (138.5 mg, 70.9 μmol) obtenu à l'étape 3.e, est dissous dans la pyridine (1.16 mL), puis de l'acide thioacétique (1.14 mL, 225 équivalents molaire) est ajouté à 0 0C. Le milieu réactionnel est agité 14h à. température ambiante, puis est concentré et purifié sur gel de silice (3:2 cyclohexane-acétate d'éthyle), pour conduire au composé 17 (118 mg, 84%). Spectre de masse (ESI) m/z 2007.7 [(M + Na)+].

Etape 3.q : Préparation de l'(acide 3-0-benzyl-α-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-(2- acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-( acide 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronique)-(1-4)-(2-acétamidb-3-O-benzyl-2-déso xy-α-D- qlucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-3-acid e carboxylique-1- carboxylate de benzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 18)

Le composé 17 (101 mg, 50.9 μmol) obtenu à l'étape 3.f, est traité selon la METHODE 3, puis le milieu réactionnel est acidifié avec de l'acide chlorhydrique 6N (pH 1 ), et extrait au dichlorométhane. La phase organique est lavée au sulfite de sodium (Na2SO3) 5%, puis à l'eau. Après séchage, filtration et concentration, le résidu est engagé brut dans l'étape suivante. Spectre de masse (ESI) m/z 1505.6 [(M + H)+].

Etape 3.h : Préparation du (3-Q-benzyl-2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(3-0-benzyl-2-0-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodiumHI -4)-(2-acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypip éridine-1- • carboxylate de benzyle-3-carboxylate de sodium (3S, 4R1 5R))' (n° 19)

Le composé 18 brut obtenu à l'étape 3. g, est traité d'après la METHODE 4, pour fournir le composé 19 (50 mg, 54% (2 étapes)). Spectre de masse (ESI) m/z 2014 [(M - 3Na + 3H)I.

PREPARATION 4 : Synthèse du (3-O-benzyl-2,4-di-O-sodium suIfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-O-benzyI-2-désoxy-2-N-sodium sulfonatp-6-O-sodium suIfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(3-O-benzyI-2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodïum)-(1 -4)-(3-O-benzyl-2-désoxy-2-N-sodium sulfonato-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyI)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4- oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle-3-carboxyIate de sodium (3S, 4R, 5R)) (n° 26) 16

a)

24

ι( QθBBnn h

26 sel de sodium

Etape A.a : Préparation du (acide 3-O-benzyl-α-L-idopyraπosyluronique)-(1-4)-(2- azido-3-O-beπzyl-2-désoxyr-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(aci de3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronique)-(1-4H2-azido-3-0-benzv[-2-désoxy-α-D -qlucopyraπosyl)-(1- 4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1-carboxylate de • benzyle-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (n° 24)

Le composé 16 (175 mg, 89.6 μmol) obtenu à l'étape 3.e, est traité selon la METHODE 3, puis le milieu réactionnel est acidifié avec de l'acide chlorhydrique 6N (pH 2). Le mélange est alors purifié sur colonne Sephadex® LH-20 (1 :1 dichlorométhane - éthanol), pour conduire au composé 24 (100 mg, 76%). Spectre de masse (ESI) m/z 1474.1 [(M + H)+]. Etape 4.b : Préparation du (acide 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluroniqueH1-4)-(2- am'ιno-3-0-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1-4Hacide 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronique)-(1-4)-(2-amino-3-O-benzyl-2-désoxy-α -D-qlucopyranosyl)- (1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle-3-acide carboxylique (3S, 4R, 5R)) (n° 25)

A une solution du composé 24 (35 mg) obtenu à l'étape 4. a, dans un mélange 1 :1 méthanol - tétrahydrofurane (1 ml_), est ajouté un complexe 10% Pd/C/éthylènediamine préparé selon la méthode décrite dans H. Sajiki et al., J. Org. Chem. (1998), Vol.63, p. 7990-7992) (107 mg). Le milieu est alors placé sous pression d'H2 (3 bars) à température ambiante pendant 16h. Après filtration et concentration, le brut réactionnel est remis en réaction dans les mêmes conditions, puis est purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle - pyridine - acide acétique - eau, 6:2:0.6:1 ) pour conduire au composé 25 (12 mg, 44%). Spectre de masse (ESI) m/z 1421.4 [(M + H)+].

Etape 4.c : Préparation du (3-Q-benzyl-2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-O-benzyl-2-désoxy-2-N-sodium sulfonato- 6-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(3-0-benzyl-2-0-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodiumMI -4H3-0-benzyl-2-désoxy-2-N- sodium sulfonato-6-O-sodium sulfonato-α-p-qlucopyranosyl)-(1 -4)-(5-(benzyloxy)- 4-oxypipéridine-1-carboχylate de benzyle-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (n° 26)

Le composé 25 (8.5 mg, 5.98 μmol) obtenu à l'étape 4.b, est traité d'après la méthode 4, pour fournir le composé 26 (7 mg, 56%). Spectre de masse (ESI) m/z 2133.8 [(M - H)"].

PREPARATION 5 : Synthèse du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-Iévulinoyl-3-0-méthyI-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0-(3-bromo-4-méth oxy)benzyl-3-0- méthyl-α,β-D-glucopyranose trichloroacétimîdate) (n°40)

28 29 30 31

32 33 34α

35α 36 37

38 39 40

Etape 5.a : Préparation du 1 ,6-anhvdro-4-O-(tétrahydropyran-2-yl)-2-O-(4- méthoxy)benzyl-β-D-qlucopyranose (n° 29)

A une solution du composé 28 (41 g, 180 mmol) (préparé selon H. Paulsen and W. Stenzel, Chem. Ber. (1978) 111 , 2348-57) dans l'alcool para-méthoxybenzylique (25 mL, 1.1 équivalent molaire) est ajouté, à 40 0C, du sodium (1.37 g, 0.33 équivalent molaire). Le mélange réactionnel est ensuite porté à 110 0C pendant 20 min, puis du méthanol (20 mL) est additionné à O 0C, et l'agitation est maintenue 16h à température ambiante. Après concentration, une purification sur gel de silice (3:7 acétate d'éthyle-éther diisopropylique) conduit à 29 (20.1 g, 31%). Spectre de masse (ESI) m/z 384.2 [(M + Na)+].

Etape 5.b : Préparation du 1 ,6-anhydro-4-O-(tétrahydropyran-2-yl)-2-O-(4- méthoxy)benzyl-3-O-méthyl-β-D-qlucopyranose (n° 30)

A une solution du composé 29 (13.1 g, 35.8 mmol) obtenu à l'étape 5. a, dans le diméthylformamide (107 mL) sont successivement ajoutés, à O 0C et sous atmosphère d'argon, de l'iodure de méthyle (2.67 mL) et de l'hydrure de sodium (2.68 g). Après retour à température ambiante, le mélange réactionnel est agité 16h, puis du méthanol est ajouté à 0 0C, le milieu est extrait à l'acétate d'éthyie, séché (Na2SO4), filtré, et concentré, pour donner 30 qui est directement engagé dans l'étape suivante. Spectre de masse (ESI) m/z 403.3 [(M + Na)+].

Etape 5.c : Préparation du 1 ,6-anhvdro-2-0-(4-méthoxy)benzyl-3-0-méthyl-β-D- glucopyranose (n° 31)

A une solution dans le méthanol (143 ml_) du composé brut 30 obtenu à l'étape 5.b, est ajoutée une solution méthanolique 0.25 M d'acide camphorsulfonique (CSA) (1 équivalent molaire). Après 30 min d'agitation magnétique, le milieu est dilué au dichlorométhane, puis lavé à l'eau, avec une solution aqueuse à 2% d'hydrogénocarbonate de sodium, à l'eau, séché (Na2SO4), filtré, et concentré. Une purification sur gel de silice (3:7 acétate d'éthyie - cyclohexane) conduit au composé 31 (9.0 g, 85%). . Spectre de masse (ESI) m/z 319.1 [(M + Na)+].

Etape 5.d : Préparation de l'éthyl 2-0-acétyl-4,6-0-isopropylidène-3-Q-méthyl-1- thio-α.β-L-idopyranoside (n° 33)

A une solution du composé brut 32 (1.99 g, 7.1 mmol) (préparé selon P. Duchaussoy et al., Carbohydr. Res. (1999), 317, 63-84) dans le dichlorométhane (37 inL) sont ajoutés successivement, à 0 0C, sous argon, de la triéthylamine (2.2 ml_), du DMAP (173 mg), et de l'anhydride acétique (1.34 mL). La température est maintenue à 0 0C pendant ' 10 min, puis le milieu réactionnel est placé à température ambiante pendant 16h. Le mélange réactionnel est alors concentré sous vide, et le résidu purifié sur silice (1 :1 Et2O-cyclohexane) pour fournir le composé 33 (2.1 g, 92%). Spectre de masse (ESI) m/z 343.3 [(M + Na)+].

Etape 5.e : Préparation du (2-O-acétyl-4,6-O-isopropylidène-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyl)-(1-4)-(116-anhvdro-2-0-(4-méthoxy)benzyl-3-0- méthyl-β-D- glucopyranose) (n° 34α) et du (2-0-acétyl-4,6-0-isopropylidène-3-0-méthyl-β-L- idopyranosyl)-(1-4)-(1 ,6-anhydro-2-Q-(4-méthoxy)benzyl-3-O-méthyl-β-D-. qlucopyranose) (n° 34β) A un mélange sous argon du composé 33 (1.86 g, 5.79 mmol) obtenu à l'étape 5.d, et du composé 31 (1.46 g, 4.94 mmol) obtenu à l'étape 5.c, en présence de tamis moléculaire 4 Â (2.89 g) dans du toluène (50 mL) est ajoutée, à -20 0C, une solution de /V-iodosuccinimide (1.38 g), et d'acide trifluorométhanesulfonique (63.5 μl_) dans un mélange 1 :1 de dichlorométhane - dioxane (16.5 mL). Après 45 min d'agitation, de l'hydrogénocarbonate de sodium solide est ajouté au milieu réactionnel, et après filtration, le mélange est dilué au dichlorométhane, lavé avec une solution aqueuse de thiosulfate de sodium (Na2S2O3) à 10%, et une solution aqueuse de chlorure de sodium saturée. Après séchage et concentration, le résidu est directement engagé dans l'étape suivante. Spectre de masse (ESI) m/z 577.4 [(M + Na)+].

Etape 5.f : Préparation du (2-0-acétyl-3-0-méthyl-α-L-idopyranosyl)-(1-4)-(1 ,6- anhvdro-2-Q-(4-méthoxy)benzyl-3-O-méthyl-β-D-qlucopyranos e) (n° 35α), et (2-O- acétyl-3-O-méthyl-β-L-idopyranosyl)-(1-4)-(1 ,6-anhvdro-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3- O-méthyl-β-D-glucopyranose) (n° 35β)

A une solution du composé mélange 34α et 34β obtenu à l'étape 5.e, dans du dichloro-1 ,2-éthane (12 mL), est ajouté de l'acide acétique à 70% (55 mL). Le mélange est chauffé à 60 0C pendant 50 min, puis concentré sous vide, et le résidu obtenu est purifié sur gel de silice (3:2 toluène - acétone) pour conduire au composé 35α (1.56 g, 61%, deux étapes), et au composé 35β (0.36 g, 14%, deux étapes). Spectre de masse (ESI) m/z 537.5 [(M + Na)+].

Etape 5. g : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1 ,6-anhvdro-2-0,-(3-bromo-4-méthoxy)benzyl-3-Q- méthyl-β-D-qlucopyranose) (n° 36)

Le composé 35α (0.975 g, 1.89 mmol) obtenu à l'étape 5f, est traité selon la METHODE 1 pour donner, après purification sur gel de silice (1 :1 acétate d'éthyle- cyclohexane), le composé 36 (1.09 g, 83%). RMN 1H (CDCI3) δ 7.54-6.86 (m, 8H, Ar). Etape 5.h : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyluronateH1-4)-(1 ,6-anhvdro-2-Q-(3-bromo-4-méthoxy)benzyl-3-O- méthyl-β-D-qlucopyranose) (n° 37)

A une solution sous argon du composé 36 (1.09 g, 1.56 mmol) obtenu à l'étape 5. g, dans le dioxane (35 ml_) sont ajoutés successivement du DMAP (43 mg, 0.2 équivalent molaire), de l'hydrochlorure de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3- éthylcarbodiimide (EDCI) (0.675 g, 2 équivalents molaire.), et de l'acide lévulinique (0.361 mL, 2 équivalents molaire.), et après 16h d'agitation, Ie milieu réactionnel est lavé successivement par une solution d'hydrogénosulfate de potassium (KHSO4) 10%, de l'eau, d'hydrogénocarbonate de sodium à 2%, puis la solution est séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée pour donner un résidu qui est purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle - dichlorométhane 2:3) conduisant au composé 37 (1.07 g, 86%). Spectre de masse (ESI) m/z 819.4 [(M + Na)+].

Etape 5.i : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1 ,6-di-O-acétyl-2-Q-(3-bromo-4-méthoxy)benzyl-3-O- méthyl-α,β-D-qlucopyranose) (n° 38)

Le composé 37 (1.07 g, 1.34 mmol) obtenu à l'étape 5.h, est traité comme pour la synthèse du composé 9 (étape 2.b), pour donner, après purification sur gel de silice (acétate d'éthyle - dichlorométhane 2:3), le composé 38 (1.04 g, 87%). Spectre de masse (ESI) m/z 921.4 [(M + Na)+].

Etape 5.i : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0-(3-bromo-4-méth oxy)benzyl-3-0- méthyl-α,β-D-qlucopyranόse) (n° 39)

Le composé 38 (1.04 g, 1.16 mmol) obtenu à l'étape 5.i, est traité comme pour la synthèse du composé 10 (étape 2.c), pour fournir, après purification sur gel de silice (acétate d'éthyle-dichlorométhane 1:1), le composé 39 (740 mg, 74%). Spectre de masse (ESI) m/z 877.3 [(M + Na)+].

Etape 5.k : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-Q-lévulinoyl-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0-(3-bromo-4-méth oxy)benzyl-3-0- méthyl-α,β-D-qlucopyranose trichloroacétimidate) (n° 40) Le composé 39 (740 mg, 860 μmol) obtenu à l'étape 5.j, est traité comme pour la synthèse du composé 11 pour donner, après purification sur gel de silice (acétate d'éthyle - dichlorométhane 3:7), le composé 40 (714 mg, 83%). RMN 1H (CDCI3) δ 6.39 (d, H-1α GIc1), 5.76 (d, H-1β GIc1)..

PREPARATION 6 : Synthèse du (3-O-méthyl-2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(3-O-méthyl-2,6-dî-O-sodîum sulfonato-α-D-glucopyranosyl)- (1 -4)-(3-O-méthyI-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1 -4)-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-(5- (benzyloxy)-4-oxypîpéridîne-1-carboxylate de benzyle-3-carboxyIate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n° 46)

41 42

43

NZ

44

Etape 6.a : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-4-O-lévuliπoyl-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0-(3-bromo-4-méth oxy)benzyl-3-0- méthyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(5-('beπzyloxy)-4-oxypip éridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 41)

Un mélange du composé 40 (94 mg, 0.094 mmol, 1.0 équivalent molaire) obtenu à l'étape 5.k, et du composé 6 (111 mg, 0.234 mmol, 2.5 équivalent molaire) obtenu à l'étape le, est traité selon la METHODE 2 pour conduire, après purification sur colonne Sephadex®' LH-20, puis sur gel de silice (dichlorométhane - acétate d'éthyle 9:1), au composé 41 (62 mg, 50%). Spectre de masse (ESI) m/z 1336.5 [(M + Na)+].

Etape 6.b : Préparation du (berizyl 2-O-acétyl-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-O-(3-bromo-4-méth oxy)benzyl-3-O- méthyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oχypipà ©ridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 42)

A une solution du composé 41 (60 mg, 45.7 μmol) obtenu à l'étape 6. a, dans un mélange1 :2 toluène/éthanol (9 mL) est ajouté de l'acétate d'hydrazine (21 mg, 10 équivalents molaire). Après 3h d'agitation magnétique, le mélange est concentré sous vide et le résidu est dilué au dichlorométhane, lavé avec une solution d'hydrogénocarbonate de sodium 2%, à l'eau, et la phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée, puis concentrée. Le résidu est purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 3:2) pour donner le composé 42 (48 mg, 88%). Spectre de masse (ESI) m/z 1238.5 [(M + Na)+].

Etape 6.c : Préparation du (benzyl 2-0-acétyl-4-0-lévulinoyl-3-0-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0-f3-bromo-4-méth oxy)benzyl-3-0- méthyl-α-D-g[ucopyranosyl)-(1-4Hbenzyl 2-O-acétyl-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-O-(3-bromo-4-méth oxy)benzyl-3-O- méthyl-α-D-qlucopyranosyO-d^Vfδ-fbenzyloxyM-oxypipéridin e-i ^-dicarboxylate de dibenzyle (3S. 4R, 5R)) (n° 43)

Un mélange du composé 40 (197.7 mg, 197.7 μmol, 1.14 équivalent molaire) obtenu à l'étape 5.k, et du composé 42 (210.5 mg, 173.2 μmol, 1.0 molequiv.) obtenu à l'étape 6.b, est traité selon la méthode 2 pour conduire, après purification sur colonne Sephadex® LH-20, puis sur gel de silice (toluène - acétone 1 :1 ), au composé 43 (176 mg, 50%). Spectre de masse (ESI) m/z 2075.0 [(M + Na)+].

Etape 6.d : Préparation du (benzyl 2-0-acétyl-4-Q-lévulinoyl-3-0-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-3-O-méthyl-α-D-qlu copyranosyl)-(1-4)- (benzyl 2-O-acétyl-3-O-méthyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O -acétyl-3-O- méthyl-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipé ridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R. 5R)) (n° 44)

A une solution du composé 43 (69 mg, 33.6 μmol) obtenu à l'étape 6.c, dans l'acétonitrile (3 mL), est ajouté, à 0 0C et sous atmosphère d'argon, de tétrachlorure zirconium (ZrCI4) (39 mg, 5 équivalents molaire). Après 45min d'agitation à température ambiante, le mélange est concentré sous vide, et le résidu est dilué par de l'acétate d'éthyle, lavé à l'eau, et après séchage, filtration et concentration, le résidu est purifié sur gel de silice (3:7 acétone - toluène) pour donner le composé 44 (52 mg, 89%). Spectre de masse (ESI) m/z 1676.7 [(M + Na)+].

Etape 6.e : Préparation du (acide 3-O-méthyl-α-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-(3- O-méthyl-α-D-glucopyranosylH1-4)-(acide 3-O-méthyl-α-L-idopyranosyluronique)- (1-4M3-O-rnéthyl-α-D-qlucopyranosylH1-4)-(5-(benzyloxy)-4- oxypipéridine-1- carboxylate de benzyle-3-acide carboxylique (3S; 4R, 5R)) (n° 45)

Le composé 44 (18 mg, 11 μmol) obtenu à l'étape 6.d, est traité selon la METHODE 3 pour conduire, après purification, au composé 45 (5.8 mg, 47%) pouvant être partiellement estérifié sur les groupements acide carboxylique. Spectre de masse (ESl) m/z 1118.4 [(M + H)+].

Etape 6.f : Préparation du (3-O-méthyl-2,4-di-Q-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sodium sulfonato-α-p- qlucopyranosyl)-(1-4)-(3-0-méthyl-2-0-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-Q-méthyl-2,6-di-0-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-π-4)- (5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle-3-carboxylate de sodium (3S, 4R. 5R)) (n° 46)

Le composé 45 (7 mg, 6.26 μmol) obtenu à l'étape 6.e, est traité selon la METHODE 4 pour donner, après purification, le composé 46 (10 mg, 77%) pouvant être partiellement estérifié sur les groupements acide carboxylique. Spectre de masse (ESI) m/z 1897.0 [(M + Na - H)+].

PREPARATION 7 : Synthèse du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-O-(4-méthoxy)benz yl-3-O-benzyl- α,β-D-glucopyranose trichloroacétimidate) (n° 57)

50 51 52

Etape 7.a : Préparation du 1 ,6-anhvdro-4-O-(tétrahvdropyran-2-yl)-2-O-(4- méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-β-D-glucopyranose (n° 48)

A une solution de 29 (19.96 g, 54.5 mmol) obtenu à l'étape 5. a, dans le DMF (300 mL) est ajouté, à O 0C, du bromure de benzyle (5.1 mL), puis de l'hydrure de sodium (4.6 g). A la fin de l'addition, le mélange est placé à température ambiante pendant 16h, puis du méthanol (18 mL) est additionné à O 0C, et après 1 h d'agitation à température ambiante, le milieu est dilué à l'acétate d'éthyle (600 mL), lavé à l'eau (300 mL), séché (Na2SO4), filtré, et concentré. Le résidu est purifié par chromatographie flash (5:95 acétate d'éthyle - éther diisopropylique), pour fournir 48 (20.6 g, 83%). Spectre de masse (ESI) m/z 479.3 [(M + Na)+].

Etape 7.b : Préparation du 1 ,6-anhvdro-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-β-D- glucopyranose (n° 49)

Le composé 48 (20.6 g, 45.2 mmol) obtenu à l'étape 7:a, est traité comme pour la synthèse du composé 31 (étape 5.c), pour conduire, après purification sur silice (3:7 acétate d'éthyle - cyclohexane), à 49 (14.4 g, 86%). Spectre de masse (ESI) m/z 395.4 [(M + Na)+].

Etape 7.c : Préparation du (2-Q-acétyl-4,6-0-isopropylidène-3-0-benzyl-α,β-L- idopyranosylH1-4H1 ,6-anhydro-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-β-D- glucopyranόse) (n° 51)

Le composé 50 (préparé selon (a méthode décrite par C. Tabeur et al. pour le dérivé 2-O-benzoylé, Carbohydr.Res. (1996), 281 , 253-276) (16.91 g, 42.6 mmol) et le composé 49 (14.44 g, 38.8 mmol) obtenu à l'étape 7.b, sont mis à réagir comme pour la synthèse de 34 (étape 5.e), pour conduire, après purification sur silice (15:85 acétate d'éthyle - éther diisopropylique) au composé 51 (17.05g, 62% (56% alpha-L)). Spectre de masse (ESI) m/z 729.3 [(M + Na)+].

Etape 7.d : Préparation du (2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyl)-(1-4)-(1 ,6- anhydro-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-β-D-glucopyranose ) (n° 52)

Le composé 51 (12.38, 17.51 mmol) obtenu à l'étape 5.c, est traité comme pour la synthèse de 35 (étape 5.f) pour fournir, après purification sur silice (4:1 toluene- acétone), 52 (10.85 g, 93%). Spectre de masse (ESI) m/z 689.3 [(M + Na)+].

Etape 7.e : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1,6-anhydro-2-O-(4-méthoxy)benz yl-3-O-benzyl-β-D- qlucopyranose) (n° 53)

Le composé 52 (10.85 g, 16.27 mmol) obtenu à l'étape 7.d, est traité selon la METHODE 1 pour conduire, après purification sur silice (3:7 acétone - cyclohexane), à 53 (8.44 g, 61 %). Spectre de masse (ESI) m/z 793.3 [(M + Na)+].

Etape 7.f : Préparation du (Benzyl 2-0-acétyl-3-Q-benzyl-4-Q-lévulinoyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1 ,6-anhvdro-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-β-D- qlucopyranose) (n° 54) Le composé 53 (3.2 g, 3.77 mmol) obtenu à l'étape 7.e, est traité comme pour la synthèse de 37 (étape 5.h), pour fournir 54 (3.17 g, 89%) après purification sur silice (acétone-toluène 1 :4).

Spectre de masse (ESI) m/z 891.3 [(M + Na)+].

Etape 7.g : Préparation du (Benzyl 2-Q-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1 ,6-di-0-acétyl-2-0-(4-méthoxy)benzyl-3-0-benzyl- α.β-D-qlucopyranose) (n° 55)

Le composé 54 (1.45 g, 1.53 mmol) obtenu à l'étape 7.f, est traité comme pour la synthèse de 9 mais à 0 0C pendant 1 h pour conduire, après purification sur silice (toluène - acétone 85:15), à 55 (1.25 g, 78%).

Spectre de masse (ESI) m/z 993.3 [(M + Na)+].

Etape 7. h : Synthèse du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0-(4-méthoxy)benz yl-3-0-benzyl-α,β-D- glucopyranose) (n° 56)

Le composé 55 obtenu à l'étape 7.g, est traité comme pour la synthèse de 10 (étape 2.c), pour conduire, après purification sur silice (éther diéthylique - dichlorométhane 25:75), à 56 (429 mg, 56%).

Spectre de masse (ESI) m/z 951.3 [(M + Na)+].

Etape 7.i : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-Q-lévulinoyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronateH1-4H6-O-acétyl-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3 -O-benzyl-α,β-D- glucopyranose trichloroacétimidate) (n° 57)

Le composé 56 (429 mg, 426 μmol) obtenu à l'étape 7.h, est traité comme pour la synthèse de 11 (étape 2.d) pour fournir, après purification sur silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 1 :1), le dérivé 57 (396 mg, 80%).

RMN 1H (CDCI3) δ 6.45 (d, H-1α), 5.89 (d, H-1β).

PREPARATION 8 : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L- îdopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0"(4-méthoxy)ben zyl-3-0-benzyl- α,β-D-glucopyranose trichloroacétimidate) (n° 62)

Etape 8.a : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyloxycarbonyl-3-O-benzyl-α- L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(116-anriydro-2-O-(4-méthoxy)b enzyl-3-Q-benzyl-β-D- qlucopyranose) (n° 58)

A une solution de 53 (0.800 g, 0.9414 mmol) obtenu à l'étape 7.e, dans le THF (9.4 ml_) sont ajoutés, à 0 0C et sous atmosphère d'argon, de la pyridine (759 μl_, 9.41 mmol), du DMAP (115 mg, 0.94 mmol), et du chloroformate d'allyle (995 μl_, 9.41 mmol) en solution dans du THF (2.35 ml_). L'agitation est maintenue pendant la nuit, puis le mélange réactionnel est dilué à l'acétate d'éthyle, lavé au KHSO4 à 10%, à l'hydrogénocarbonate de sodium 2%, à l'eau, séché (Na2SO4) , filtré, et concentré. Le résidu est purifié par chromatographie flash (1 :9 acétone - toluène), pour fournir 58 (0.809 g, 92%). Spectre de masse (ESI) m/z 877.3 [(M + Na)+].

Etape 8.b : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1 ,6-anhvdro-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-β-D- qlucopyranose) (n° 59)

A une solution dans du THF (6 mL) du composé 58 (0.805 g, 0.862 mmol) obtenu à l'étape 8.a, sont additionnés successivement du palladium diacétate (3.9 mg, 0.017 mmoi) et de Ia triphénylphosphine (22.6 mg, 0.086 mmol), sous atmosphère d'argon. La température du mélange est portée à 90 0C pendant 15 min, puis le milieu est concentré sous vide et purifié sur silice (15:85 acétone - toluène) pour conduire à 59 (0.587 g, 66%). Spectre de masse (ESI) m/z 833.4 [(M + Na)+]. Etape 8.c : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-aHyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1 ,6-di-O-acétyl-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl- α,3-D-plucopyranose) (n° 60)

Le composé 59 (0.587 g, 0.660 mmol) obtenu à l'étape 8.b, est traité comme pour la synthèse du composé 55 (étape 7.g), pour fournir, après purification sur silice (9:1 acétone - toluène), 60 (0.37 g, 57%) Spectre de masse (ESI) m/z 936.4 [(M + Na)+].

Etape 8.d : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0-(4-méthoxy)benz vi-3-0-benzyl-α,β-D- qlucopyranose) (n° 61)

Le composé 60 obtenu à l'étape 8.c, est traité comme pour la synthèse de 10 (étape 2.c), pour conduire, après purification sur silice (cyclohexane-acétate d'éthyle 2:3), à 61 (240 mg, 70%). Spectre de masse (ESI) m/z 893.4 [(M + Na)+].

Etape 8.e : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-O-(4-méthoxy)benz yl-3-O-benzyi-α1β-D- qlucopyranose trichloroacétimidate) (n° 62)

Le composé 61 (234 mg, 246 μmol) obtenu à l'étape 8.d, est traité comme pour la synthèse de 11 (étape 2.d), pour fournir, après purification sur silice (86:14 acétone - toluène), le dérivé 62 (249 mg, 93%). RMN 1H (CDCI3) δ 6.40 (d, H-1α), 5.81 (d, H-1 β).

Les synthèses des PREPARATIONS 9 et 10 peuvent être schématisées comme suit :

PREPARATION 9 : Synthèse du (3-O-benzyl-2,4-di-O-sodium sυlfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(3-O-benzyl-2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)- (1-4)-(3-O-benzyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1 -4)-(3-O-benzyI-2,6-di«O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyI)-(1 -4)-(5- (benzyloxy)-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (n° 68)

Etape 9. a : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-beπzyl-α-L- idopyranosyluronate')-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0-(-4-méthoxy)be πzyl-3-0-ben2yl-α-D- glucopyranosyl)-(1-4H5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1,3-dica rboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 63) Le composé 57 (396 mg, 0.34 mmol) obtenu à i'étape 7.i, et le composé 6 (405 mg, 0.85 mmol) obtenu à l'étape le, sont traités selon la METHODE 2 pour conduire, après purification, à 63 (369 mg, 73%). RMN 1H (CDCI3) δ 5.29 (d, H-1 GIc"), 5.13 (d, H-1 IdoUA1").

Etape 9.b : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-O-( 4-méthoxy)benzyl-3-Q-benzyl-α-D- qlucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 64)

Le composé 63 (372 mg, 0.254 mmol) obtenu à l'étape 9. a, est traité comme pour la synthèse de 42 (étape 6.b), pour fournir, après purification sur silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 2:3), le composé 64 (301 mg, 87%). RMN 1H (CDCI3) δ 5.29 (d, H-1 GIc"), 5.10 (d, H-1 IdoUA1"), 3.97 (dd, H-4 IdoUA1").

Etape 9. c : Préparation du fbenzyl 2-O-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétvk2-0-(4-méthoxy)benzy l-3-0-,benzyl-α-D- qlucopyranosyl)-(1-4)-(benzyl 2-0-acétyl-3-0-benzyl-c^L-idopyranosyluronate)-(1- 4)-(6-O-acétyl-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-α-D-gluco pyranosyl)-(1-4)-(5- (benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 65)

Les composés 57 (124 mg, 0.108 mmol) obtenu à l'étape 7.i, et 64 (150 mg, 0.110 mmol) obtenu à l'étape 9.b, sont traités selon la METHODE 2 pour conduire, après purification, à 65 (90 mg, 35%). RMN 1H (CDCI3) δ 5.28 (d, H-1 GIc"), 5.16 (d, H-1 IdoUA1"), 5.13 (d, H-1 ldoUAv), 4.74 (d, H-1 Glclv).

Etape 9.d : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-3-0-benzyl-α-D-qluc opyranosyl)-(1-4)- (benzyl 2-0-acétyl-3-0-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0- acétyl-3-0- benzyl-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipér idine-1 ,3-dicarboχylate de dibenzyle (3S, 4R. 5R)) (n° 66) Le composé 65 (45 mg, 0.19 mmol) obtenu à l'étape 9.c, est traité comme pour la synthèse de 44 (étape 6.d), pour fournir, après purification sur silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 3:2), le composé 66 (34 mg, 91%). Spectre de masse (ESI) m/z 1982.0 [(M + Na)+].

Etape 9.e : Préparation de l'facide 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-(3- O-benzyl-α-D-qlucopyranosvP-(1-4Hacide 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronique)- (1 -4)-(3-O-benzyl-α-D-qlucopyranosyl)-(1 -4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 - carboxylate de benzyle-3-acide carboxylique (3S, 4R, 5R)) (n° 67)

Le composé 66 (25 mg, 12.8 μmol) obtenu à l'étape 9.d, est traité selon la METHODE 3. Le mélange réactionnel est acidifié par de l'acide chlorhydrique 6N (pH 2), puis déposé sur colonne de LH-20 (100 mL) équilibrée dans un mélange 9:1 DMF/eau. Les fractions contenant le produit sont ensuite concentrées et purifiées sur silice (dichlorométhane - méthanol 7:3) pour fournir 67 (10.4 mg, 59%) pouvant être partiellement estérifié sur les groupements acides carboxylique. Spectre de masse (ESI) m/z 1422.7 [(M + H)+].

Etape 9i : Préparation du (3-O-benzyl-2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-O-benzyl-2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D- qlucopyranosyl)-(1-4)-(3-0-benzyl-2-0-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodiumH1-4H3-0-benzyl-2,6-di-Q-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)- f5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle-3-carboxylate de sodium (3S. 4R, 5R)) (n° 68)

Le composé 67 (10.4 mg, 9 μmol) obtenu à l'étape 9.e, est traité selon la METHODE 4 pour fournir 68 qui est engagé directement dans l'étape suivante.

PREPARATION 10 : Synthèse du (4-O-allyl-3-O-benzyl-2-O-sodïυm sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-O-benzyl-2,6-di-O-sodium sulfonato- α-D-gIucopyranosyl)-(1-4)-(3-O-benzyl-2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-O-benzyl-2,6-di-O-sodium sulfonato- α-D-gIucopyranosy[)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridîne- 1 -carboxylate de benzyle-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (n°73) Etape 10.q : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl'-2-O-(4-méthoxy)ben zyl-3-O-beπzyl-α-D- qlucopyraπosyl)-(1 -4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 - 4)-(6-O-acétyl-2-Q-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-α-D-qluco pyranosyl)-(1-4)-(5- (benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R1 5R)) (n°70)

Le composé 62 (244 mg, 0.223 mmol) obtenu à l'étape δ.e et le composé 64 (138 mg, 0.101 mmol) obtenu à l'étape 9.b, sont traités selon la METHODE 2 pour conduire, après purification, à 70 (100 mg, 43%). RMN 1H (CDCI3) δ 5.28 (d, H-1 GIc"), 5.25 (d, H-1 ldoUAv), 5.16 (d, H-1 IdoUA111), 4.72 (d, H-1 Glcιv).

Etape 1O.h : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-3-O-benzyl-α-D-qluc opyranosyl)-(1-4)- (benzyl 2-O-acétyl-3-Q-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-Q- acétyl-3-O- benzyl-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipér idine-1 ,3-dicarboχylate de dibenzyle (3S.4R, 5R)) (n° 71)

Le composé 70 (92 mg, 40.0 μmol) obtenu à l'étape 10. g, est traité comme pour la synthèse du composé 44 (étape 6.d), pour fournir, après purification sur silice (acétone - toluène 17:83), le composé 71 (44 mg, 59%). Spectre de masse (ESI) m/z 1924.0 [(M + Na)+].

Etape 1O.i : Préparation du (acide 4-0-allyl-3-0-benzyl-α-L-idopyranosyluronique)- (1-4)-(3-O-benzyl-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(acide 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronique)-(1-4)-(3-0-benzyl-α-D-qlucopyranosyl) -(1-4)-(5-(benzyloxy)- 4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle-3-acide carboxylique (3S, 4R, 5R)) (n°72)

Le composé 71 (41 mg, 21.6 μmol) obtenu à l'étape 10. h, est traité selon la méthode 3. Le mélange réactionnel est déposé sur colonne de LH-20 (210 mL) équilibrée dans un mélange 1:1 dichlorométhane - éthanol. Les fractions contenant le produit sont ensuite concentrées et purifiées sur silice pour fournir 72 (30.3 mg, 96%) pouvant être partiellement estérifié sur les groupements acides carboxylique Spectre de masse (ESI) m/z 1462.4 [(M + H)+].

Etape 10.j : Préparation du (4-Q-allyl-3-O-benzyl-2-Q-sodiunn sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodiumH1-4H3-O-benzyl-2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-(3-0-beπzyl-2-Q-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodiumH1-4)-(3-O-benzyl-2,6-di-O-sodium su[fonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)- (5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle-3-carboxylate de sodium (3S.4R. 5R)) (n°73)

Le composé 72 (10.0 mg, 6.44 μmol) obtenu à l'étape 10.i, est traité selon la méthode 4 pour fournir 73 qui est engagé directement dans l'étape suivante.

PREPARATION 11 : Synthèse du méthyl (2-N-sodïum suIfonato-2,4-didésoxy-4-formyl-3,6-di-O- sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(sodium 2-O-sodïum sulfonato- α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(2-N-sodium sulfonato-2-désoxy-6-O-sodîum suIfonato-α-D-glucopyranoside) (n° 89)

86 se! de sodium

87 sel de sodium

89 sel de sodium

Etape 11.a : Préparation du 1 ,6:2,3-di-anhydro-4-désoxy-4-(prop-1-ène-1-yl)-β-D- mannopyranose (n° 76)

A une solution d'époxyde 75 (1.2 g, 7.14 mmol) (préparé selon AG Kelly and JS Roberts, J. Chem. Soc, Chem. Commun., (1980), Vol.288) dans de l'éthanol (56.5 mL), est ajouté, sous argon, du trichlorure de rhodium monohydraté (202 mg, 0.15 équivalent molaire). Après 1 h25 d'agitation à 75 0C, le milieu réactionnel est versé sur 250 mL d'eau glacée, puis après 5 min d'agitation, le produit est extrait à l'éther diéthylique, séché (Na2SO4), et concentré. Le résidu est ensuite purifié sur silice (éther diisopropylique - cyclohexane 45:55) et les fractions contenant Ie composé 76 sont partiellement concentrées (76 est volatile). RMN 1H (CDCI3) δ 3.42 (dd, H-2), 3.00 (dd, H-3), 2.64 (dd, H-4).

Etape 11.b : Préparation du 1 ,6-anhvdro-2-azido-2,4-didésoxy-4-(prop-1-ène-1-yl)- β-D-qlucopyranose (n° 77)

Le composé 76 obtenu à l'étape 11. a est dissous dans un mélange diméthylformamide - eau (40 mL, 4:1 ), puis de l'azoture de sodium (7.0 g) est ajouté, et le mélange est porté à reflux pendant 10.5h. Le milieu réactionnel est ensuite extrait à l'acétate d'éthyle, lavé à l'eau puis par une solution aqueuse de chlorure de sodium saturé, séché (Na2SO4), concentré et purifié sur gel de silice pour donner le composé 77 (674 mg, 48%). RMN 1H (CDCI3) δ 5.8-5.6 (m, 2H, CH=CH).

Etape 11.c : Préparation du 1 ,3,6-tri-O-acétyl-2-azido-2,4-didésoxy-4-(prop-1-ène- 1 -vP-ccβ-D-qlucopyranose (n° 78)

Le composé 77 (3.5 g, 16.57 mmol) obtenu à l'étape 11.b, est traité comme pour la synthèse du composé 9 (étape 2.b) pour conduire, après purification, au composé 78 (5.88 g, 100%). Spectre de masse (ESI) m/z 378 [(M + Na)+].

Etape 11.d : Préparation du 3,6-di-Q-acétyl-2-azido-2,4-didésoxy~4-(prop-1-ène-1- yl)-α,β-D-qlucopyranose (n° 79)

A une solution du composé 78 (5.88 g, 16.5 mmol) obtenu à l'étape 11.c, dans le tétrahydrofurane (140 mL) est ajoutée de l'éthanolamine (4.0 mL, 4 équivalents molaire), à 0 0C. Après 16h à +4 0C, le milieu est dilué à l'acétate d'éthyle, acidifié (HCI 1 N), lavé à l'eau, séché (Na2SO4), et concentré pour conduire, après purification, au composé 79 (4.66 g, 90%). Spectre de masse (ESI) m/z 336 [(M + Na)+].

Etape 11.e : Préparation du 3,6-di-O-acétyl-2-azido-2,4-didésoxy-4-(prop-1-ène-1- yl)-α,β-D-qlucopyranose trichloroacétimidate (n° 80)

A une solution du composé 79 (4.66 g, 14.9 mmol) obtenu à l'étape 11.d, dans du dichlorométhane (285 mL) est ajouté, sous argon, du carbonate de potassium (K2CO3) (3.34 g, 1.6 équivalent molaire), puis du CCI3CN (7.6 mL, 5 équivalents molaires). Après 17h d'agitation magnétique, le mélange réactionnel est filtré, concentré et purifié sur silice pour donner le composé 80 (5.65 g, 83%). RMN 1H (CDCI3) δ 8.77 (s, NH (isomère α)), 5.70 (dd, H-3), 2.64 (d, H-1β).

Etape 11.f : Préparation du méthyl (3,6-di-O-acétyl-2-azido-2,4-didésoxy-4-(prop~ 1 -ène-1 -yl)-α-D-qlucopyranosvO-(1 -4)-(méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-3-O-benzyl-2-benzylo xycarbonylamino-2- désoxy-α-D-glucopyranoside) (n° 82)

Le composé 80 (5.65 g, 12.3 mmol) obtenu à l'étape 11.e, et le composé 81 (préparé selon J.C. Jacquinet et al., Carbohydr. Res. 130 (1984), 221-241) (11.54 g, 1.2 équivalent molaire) sont mis à réagir selon la METHODE 2 pour conduire après purification, au composé 82 (9.39 g, 71 %). Spectre de masse (ESI) m/z 1077.5 [(M + H)+].

Etape 11.g : Préparation du méthyl (3,6-di-O-acéty[-2-azido-2,4-didésoxy-4-(1 ,2- dihydroxypropyl)-α-D-qlucopyranosylH1-4Hméthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-3-0-benzyl-2-benzylo xycarbonylamino-2- désoxy-α-D-qlucopyranoside) (n° 83)

A une solution du composé 82 (513 mg, 0.476 mmol) obtenu à l'étape 11.f, dans un mélange 1 :1 tétrahydrofurane - dichlorométhane (8 ml_) sont ajoutés de la N- méthylmorpholine N-oxide monohydrate (NMO) (1.11 g, 20 équivalents molaire) et du tétraoxyde d'osmium (OsO4) 4% à dans l'eau (8.35 mL, 1 équivalent molaire). Après 3 jours d'agitation à température ambiante, un mélange 1 :1 de dichlorométhane - eau est ajouté, ainsi qu'une solution à 37.5% d'hydrogénosulfite de sodium (NaHSO3), et l'agitation est maintenue 30 min supplémentaires. Le mélange réactionnel est extrait au dichlorométhane, purifié sur silice, et la fraction contenant du produit de départ est remise à réagir dans les conditions ci-dessus jusqu'à consommation complète. Après purification, on obtient finalement Ie composé 83 (293 mg, 66%). Spectre de masse (ESI) m/z 1111.4 [(M + H)+].

Etape 11.h : Préparation du méthyl (3.6-di-O-acétyl-2-azido-2.4-didésoxy-4-(5- méthyl^-phénvI-I.S-dioxolan^-vO-α-D-qlucopyranosylHI^Vfmà ©thyl 2-O-acétyl-3- O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-Q-acétyl-3-Q-be nzyl-2- benzyloxycarbonylamino-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside) (n° 84) A une solution du composé 83 (518 mg, 0.466 mmol) obtenu à l'étape 11. g, dans l'acétonitrile sont ajoutés, sous argon, du CSA (21.6 mg, 0.2 molequiv), et du benzylidène diméthylacétal (160 μL, 2.3 équivalents molaire). Après 1 h30 d'agitation, le milieu est neutralisé avec de la triéthylamine, concentré à sec, puis purifié sur silice pour donner le composé 84 (454 mg, 74%). Spectre de masse (ESI) m/z 1199.5 [(M + H)+].

Etape 11.i : Préparation du méthyl (2-azido-2,4-didésoxy-4-(5-méthyl-2-phényl- 1 ,3-dioxolan-4-yl)-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-(acide 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronique)-(1-4)-(3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonyla mino-2-désoxy-α-D- qlucopyranoside) (n° 85)

Le composé 84 (215 mg, 0.18 mmol) obtenu à l'étape 11. h, est traité selon la méthode 3. Après 16h d'agitation magnétique à température ambiante, le milieu est dilué au méthanol (12.5 ml_), puis une solution aqueuse de soude 4N (11.5 ml_) est ajoutée à 0 0C. Le mélange est agité 4h à 0 0C, acidifié (pH 5) par de l'acide chlorhydrique 6N, puis est extrait au dichlorométhane, lavé au Na2SO3 5%, et enfin au chlorure de sodium saturé. Après séchage et concentration, Ie résidu est purifié sur silice pour conduire au composé 85 (157 mg, 86%). Spectre de masse (ESI) m/z 1017.3 [(M + H)+].

Etape 11.i : Préparation du méthyl (2-azido-2,4-didésoxy-4-(5-méthyl-2-phény[-1,3- dioxolan-4-yl)-3,6-di-Q-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-(sodium 3-O- benzyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronateH1-4)-(3-O-benzyl-2- benzyloxycarbonylamino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranoside) (n° 86)

Le composé 85 (160 mg, 0.157 mmol) obtenu à l'étape 11.i, est traité selon la METHODE 4 pour fournir le composé 86 (215 mg, 95%). Spectre de masse (ES!) m/z 689.1 [(M + H - 3Na)2"].

Etape 11.k : Préparation du méthyl (2-amino-2,4-didésoxy-4-(1 ,2- dihvdroxypropyl)-3,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosvP-(1 -4)-(sodium 2- O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4H2-amino-2-désoxy-6 -O-sodiurn sulfonato-α-D-qlucopyranoside) (n° 87) Le composé 86 (210 mg, 0.145 mmol) obtenu à l'étape 11.j est traité selon la. méthode 5 sans acide acétique pour donner le composé 87 (108 mg, 73%). Si nécessaire, la réaction est reconduite plusieurs fois jusqu'à disparition totale des protons benzyliques par RMN. Spectre de masse (ESI) m/z 996.1 [(M + H - Na)"].

Etape 11.1 : Préparation du méthyl (2-N-sodium sulfonato-2,4-didésoxy-4-(1 ,2- dihydroxypropyl)-3,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(sodium 2- Q-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronaté)-(1 -4H2-N-sodium sulfonato-2- désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranoside) (n° 88)

 une solution du composé 87 (106 mg, 0.104 mmol) obtenu à l'étape 11.k, dans l'eau (7 mL), est ajouté, à 0 0C, du complexe pyridine.SO3 (662 mg, 4.16 mmol) tout en maintenant le pH à 9.3 avec de Ia soude 1 N. La température est ensuite remontée à température ambiante, le milieu réactionnel est agité 16h en maintenant le pH à 9.3, puis est purifié sur une colonne de gel Sephadex® G-25 équilibrée par une solution de chlorure de sodium 0.2 M.Après rassemblement des fractions contenant le produit et concentration, le résidu est purifié par la même colonne Sephadex® G-25 éluée à l'eau, pour donner le composé 88 (116 mg, 91%). Spectre de masse (ESI) m/z 1199.8 [(M + H - Na)-].

Etape 11.m : Préparation du méthyl (2-N-sodium sulfonato-2,4-didésoxy-4-formyl- 3,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosylH1-4)-(sodium 2-Q-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronateH1-4H2-N-sodium sulfonato-2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-α-D-glucopyranoside) (n° 89)

Du périodate de sodium (22.1 mg, 1.1 équivalent molaire) est ajouté à une solution du composé 88 (115 mg, 94 μmol) obtenu à l'étape 11.1, dans l'eau (1.9 mL). Après 1h d'agitation magnétique, le milieu réactionnel est purifié sur une colonne de gel Sephadex® G-15 équilibrée en eau pour conduire au composé 89 (107 mg, 96%).

PREPARATION 12 : Synthèse du (2-acétamido-3,4-dî-O-benzyl-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α- D-glucopyranosyI)-(1 -4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 -carboxylate de benzyIe-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (n° 97)

93 94 95

sodium

96 97

Etape 12. a : Préparation du (6-O-acétyl-2-azido-3,4-di-O-beπzyl-2-désoxy-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3-dicarboχylate de dibenzyle (3S. 4R, 5R)) (n° 94)

Le composé 93 (préparé selon R. Verduyn et al., Recl. Trav. Chim. Pays-Bas, 109 (1990), 12, 591) (361 mg, 0.631 mmol) et le composé 6 (200 mg, 0.421 mmol) obtenu à l'étape le, sont traités selon la méthode 2 pour fournir, après purification, le composé 94 (224 mg, 60%). Spectre de masse (ESI) m/z 885.4 [(M.+ H)+].

Etape 12.b : Préparation du (6-0-acétyl-2-acétamido-3.4-di-0-benzyl-2-désoxy-α- D-glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1.3- dicarboxylate de dibenzyle (3S. 4R, 5R)) (n° 95)

Le composé 94 (56.3 mg, 63.6 μmol) obtenu à l'étape 12. a, est traité comme pour la synthèse de 17 (étape 3.f), pour conduire au composé 95 (54.5 mg, 95%). Spectre de masse (ESI) m/z 901.2 [(M + H)+].

Etape 12.c : Préparation du (2-acétamido-3.4-di-O-benzyl-2-désoxy-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-f5-(benzyloχy)-4-oxypipéridine-1-car boxylate de benzyle-3- acide carboxyliαue (3S. 4R, 5R)) (n° 96) Le composé 95 (101 mg, 50.9 μmol) obtenu à l'étape 12.b, est traité selon la METHODE 3. Le résidu est engagé brut dans l'étape suivante.

Etape 12.d : Préparation du (2-acétamido-3,4-di-O-benzyl-2-désoxy-6-Q-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosvO-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipà ©ridine-1-carboxylate de benzyle-3-carboxylate de sodium- (3S, 4R, 5R)) (n° 97)

Le composé 96 brut obtenu à l'étape 12.c, est traité d'après la METHODE 4, pour fournir le composé 97 (35 mg, 88% (2 étapes)), pouvant être partiellement estérifié sur la fonction acide carboxylique. Spectre de masse (ESI) m/z 847.2 [(M - H)-].

PREPARATION 13 : Synthèse du 3-(benzyloxy)-5-[(benzyloxy)méthyl]-4-hydroxypipéridine-1 - carboxylate de benzyle (3R, 4R, 5R) (n° 100)

5 99 100

Etape 13.a : Préparation du 8-(benzyloxy)-2-phényltétrahvdro-4H-[1 ,31dioxinor5,4- c1pyridine-6(5H)-carboxylate de benzyle (4aR, 8R, 8aR) (n° 99)

A une solution du composé 5 (250 mg, 0.67 mmol) dans l'acétonitrile (13.4 mL) est ajouté de l'acide camphorsulfonique (31 mg, 0.2 moléquiv) puis du benzaldéhyde diméthylacétal (0.23 mL, 2.3 moléquiv). Après 1h d'agitation magnétique à température ambiante, le milieu réactionnel est neutralisé par de la triéthylamine, concentré, et purifié sur gel de silice (15:85 acétate d'éthyle - cyclohexane) pour fournir le composé 99 (281 mg, 91%). Spectre de masse (ESI) m/z 482.2 [(M + Na)+].

Etape 13.b : Préparation du 3-(benzyloxy)-5-[(benzyloχy)méthyll-4- hydroxypipéridine-1-carboxylate de benzyle (3R, 4R1 5R) (n° 100)

A une solution du composé 99 (141 mg, 0.31 mmol) obtenu à l'étape 13. a dans du dichlorométhane (1.2 mL), sont ajoutés successivement, à 0 0C, sous argon, du triéthylsilâne (0.20 mL, 4 équivalents molaire), de l'acide trifluoroacétlque (0.09 mL, 4 équivalents molaire), et de l'anhydride trifluoroacétique (3 μ!_, 0.07 équivalents molaire). La température est maintenue à 0 0C pendant 5 min, puis le milieu réactionnel est placé à température ambiante pendant 3.5 h. Le mélange réactionnel est alors neutralisé par une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium, à l'eau, et la phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée, et concentrée sous vide. Le résidu est purifié sur gel de silice pour fournir le composé 100 (76 mg, 54%). Spectre de masse (ESI) m/z 462.3 [(M + H)+].

PREPARATION 14 :

Synthèse du (3-O-benzyl-2,4-di-O-sodium suIfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodïum)-(1-4)-(2-acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α- D-gIucopyranosyI)-(1 -4)-(3-O-benzyl-2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-6- O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(3-(benzyloxy)-5- [(benzyIoxy)méthyl]-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle (3R, 4R, 5R)) (n° 104)

104 sel de sodium Etape 14.a : Préparation du (benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-azido-3-0-benzyl-2 -désoxy-α-D- qlucopyranosyl)-(1 -4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 - 4)-(6-Q-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyran osyl)-(3-(benzyloxy)-5- r(benzyloxy)méthyll-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle (3R1 4R, 5R)) (n° 101)

Les composés 15 (123 mg, 0.075 mmol) et 100 (69 mg, 0.149 mmol) sont traités selon Ia METHODE 2 pour fournir, après purification, le composé 101 (117 mg, 80%). Rapport α/β 55/45. Spectre de masse (ESI) m/z 1962 [(M + Na)+].

Etape 14.b : Préparation du (benzyl ∑Λ-di-O-acétyl-S-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-acétamido-3-O-ben zyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranosyl)-(1 -4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 - 4)-(6-Q-acétyl-2-acétamido-3-Q-benzyl-2-désoxy-α-D-qluco pyranosyl)-(1-4)-(3- (benzyloxy)-5-r(benzyloxy)méthvn-4-oxypipéridine-1-carboxy late de benzyle (3R1 4R^R]) (n° 102)

Le composé 101 (117 mg, 60 μmol) est dissous dans la pyridine (1 mL), puis de l'acide thioacétique (1 mL, 225 équivalents molaire) est ajouté à 0 0C. Le milieu réactionnel est agité 17 h à température ambiante, puis est concentré et purifié sur gel de silice (4:96 éthanol - toluène), pour conduire au composé 102 (50 mg, 42%). Spectre de masse (ESI) m/z 1971.9 [(M + H)+].

Etape 14. c : Préparation de l'acide 3-0-benzyl-α-L-idopyranosyluronique-(1-4)-(2- acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1-4)-(ac ide 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronique)-(1-4)-(2-acétamido-3-O-benzyl-2-déso xy-α-D- qlucopyranosyl)-(1-4)-(3-(benzyloxy)-5-r(benzyloxy)méthvn-4 -oχypipéridine-1- carboxylate de benzyle (3R1 4R, 5R)) (n° 103)

Le composé 102 (50 mg, 25 μmol) est traité selon la METHODE 3 pour conduire au dérivé 103. Spectre de masse (ESI) m/z 1581.7 [(M + H)+]. Etape 14.d : Préparation du (3-O-benzyl-2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-3-0-benzyl-2-désoxy-6-0- sodium su[fonato-α-D-qlucopyranosylH1-4)-(3-0-benzyl-2-Q-sodium sulfonato-α- L-idopyranosvIuronate de sodium)-(1 -4)-(2-acétamido-3-Q-benzyl-2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(3-(benzyloxy)-5-r(benz yloxy)méthyll- 4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle (3R, 4R, 5R)) (n° 104)

Le composé 103 est traité d'après la METHODE 4, pour fournir le composé 104 (43 mg, 80% (2 étapes)). Spectre de masse (ESI) m/z 2134.3 [(M - Na)I.

PREPARATION 15 : Synthèse du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2 -désoxy-α,β-D- glucopyranose trîchloroacétimïdate) (n° 114)

114 113

Etape 15.a Préparation du (4,6-O-isopropylidène-3-O-benzyl-2-O-(4- méthoxy)benzyl-α-L-idopyranosylH1-4H1,6-anhydro-2-azido-3- -O-benzyl-2- désoxy-β-D-glucopyranose) (n° 106)

A une solution du composé 105 (63.2 g, 111 mmol) (préparé selon C.A.A. van Boeckel ef al., J. Carbohydrate Chemistry (1985) 4 (3), 293-321) dans du DMF (445 ml_) est ajouté, à O 0C et sous argon, du NaH (6.93 g, 1.3 équivalent molaire) puis du chlorure de para-méthoxybenzyle (24 mL, 1.6 équivalent molaire). Après 2 h d'agitation magnétique, du méthanol est additionné (9 mL), le milieu réactionnel est concentré sous vide, le brut réactionnel est dilué à l'acétate d'éthyle, lavé à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré. Le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 15:85) pour fournir 106. Spectre de masse (ESI) m/z 707.3 [(M + NH4)+]. Etape 15.b : Préparation du (3-O-benzyl-2-CH4-méthoxy)benzyl-α-L- idopyranosylH1-4H1 ,6-anhydro-2-azido-3-Q-benzyl-2-désoxy-β-D-qlucopyranose) (n° 107)

Le composé 106 obtenu à l'étape précédente est mis en présence d'acide acétique à 80% dans l'eau. Après 15 h d'agitation magnétique, le mélange réactionnel est refroidi par de la glace, dilué (dichlorométhane) et neutralisé à l'hydrogénocarbonate de sodium. La phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 3:7) pour fournir 107 (63.2 g, 88%, 2 étapes). Spectre de masse (ESI) m/z 672.3 [(M + Na)+].

Etape 15.c : Préparation du (3-Q-benzyl-6-O-ferf-butyldiméthylsilyl-2-O-(4- méthoxy)benzyl-α-L-idopyranosyl)-(1-4)-(1 ,6-anhydro-2-azido-3-0-benzyl-2- désoxy-β-D-qlucopyranose) (n° 108)

Le composé 107 (64.2 g) est mis en solution dans du dichlorométhane (200 mL). A 0 0C et sous argon, sont additionnés successivement de la triéthylamine (30.3 mL, 2.2 équivalents molaire), du 4-diméthylaminopyridine (1.21 g, 0.1 équivalent molaire), et du chlorure de ferf-butyldiméthylsilyle (17.04 g, 1.1 équivalent molaire). Après 4 h d'agitation magnétique, 10% de chlorure de terf-butyldiméthylsilyle sont rajoutés, et après une heure, le milieu réactionnel est dilué par du dichlorométhane, lavé à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré. Le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 15:85) pour fournir 108. Spectre de masse (ESI) m/z 786.3 [(M + Na)+].

Etape 15.d : Préparation du (3-O-benzyl-6-O-fe/if-butyldiméthylsilyl-2-Q-(4- méthoxy)benzyl-4-0-phénylpropyl-α-L-idopyranosyl)-(1-4)-( 1,6-anhydro-2-azido-3- O-benzyl-2-désoxy-B-D-qlucopyranose) (n° 109)

A une solution du composé 108 dans du diméthylformamide (485 mL) est ajouté, à 0 0C et sous argon, du bromure de phénylpropyle (74 mL, 5 équivalents molaire) puis du NaH (7 g, 1.5 équivalent molaire). Après 5.5 h d'agitation magnétique, du méthanol est additionné (50 mL), le milieu réactionnel est concentré sous vide, le brut réactionnel est dilué à l'acétate d'éthyle, lavé à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré. Le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyie - cyclohexane 15:85) pour fournir 109 (49.3 g, 58%, 2 étapes). Spectre de masse (ESI) m/z 904.3 [(M + Na)+].

Etape 15.e-f : Préparation du (2-O-acétyl-3-O-benzyl-6-O-ferf-butyldirnéthylsilyl-4- 0-phénylpropyl-α-L-idopyranosyl)-(1-4)-(1,6-anhvdro-2-azid o-3-0-benzyl-2-désoxy- β-D-glucopyranose) (n° 110)

A une solution de 109 (49.3 g, 55.9 mmoi) dans du dichlorométhane (2.2 L) est ajouté de l'eau (112 mL) puis, à 0 0C, du DDQ (19.03 g, 1.5 équivalent molaire). Après 3 h d'agitation à 0 0C, une solution d'hydrogénocarbonate de sodium est additionnée. La phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le résidu obtenu est dissous dans de la pyridine (335 mL), puis de l'anhydride acétique (28 mL) et du 4-diméthylaminopyridine (682 mg) sont additionnés. Après 16 h d'agitation magnétique, le mélange réactionnel est concentré sous vide et le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 15:85) pour fournir 110 (34.4 g, 77%, 2 étapes). Spectre de masse (ESI) m/z 826.4 [(M + Na)+].

Etape 15.q-h : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-Q-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronateH1-4H1,6-anhydro-2-azido-3-0-benzyl-2-dé soxy-3-D- glucopyranose) (n° 111)

A une solution de 110 (25.17 g, 31.3 mmol) dans l'acétone (1.46 L) est ajoutée, à 0 0C, une solution aqueuse 3.5 M d'acide sulfurique (45 mL) contenant de l'anhydride chromique (10 g). Après 3 h d'agitation magnétique à 0 0C, le milieu réactionnel est dilué au dichlorométhane, lavé à l'eau, séché, filtré et concentré pour fournir un brut réactionnel qui est engagé directement dans l'étape suivante. Le résidu précédemment obtenu est mis en solution dans du diméthylformamide (230 mL) et de l'hydrogénocarbonate de potassium (16.7 g, 5 équivalents molaires) ainsi que du bromure de benzyie (39.8 mL, 10 équivalents molaires) sont additionnés. Le mélange réactionnel est agité 16 h à température ambiante, puis est dilué à l'acétate d'éthyle, lavé à l'eau, séché, filtré, concentré et purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle - toluène 1 :4) pour fournir le composé 111 (22.6 g, 91%, 2 étapes). Spectre de masse (ESl) mfz 811.3 [(M + NH4)+].

Etape 15.i : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-Q-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1 ,6-di-0-acétyl-2-azido-3-Q-benzyl-2-désoxy-α,β-D- qlucopyranose) (n° 112)

A une solution du composé 111 (1.11 g, 1.39 mmol) dans de l'anhydride acétique (13.2 mL, 100 équivalents molaire), est additionné, à 0 0C, de l'acide trifluoroacétique (TFA) (1.14 mL, 11 équivalents molaire). Après retour à température ambiante, le mélange réactionnel est agité pendant 3.5 h, puis est concentré, coévaporé au toluène, et purifié sur gel de silice (85:15 toluène - acétate d'éthyle), pour donner le composé 112 (1.15 g, 93%). Spectre de masse (ESI) m/z 918.3 [(M + Na)+].

Etape 15.j : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-Q-benzyl-4-O-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-azido-3-0-benzyl-2 -désoxy-α,3-D- glucopyranose) (n° 113)

A une solution du composé 112 (1.13 g, 1.26 mmol) dans de l'éther diéthylique (51 mL), est additionnée, à 0 0C, de la benzylamine (BnNH2) (5.25 mL, 38 équivalents molaire). Après 5h15 d'agitation à température ambiante, le milieu est acidifié avec de l'HCI 1N, puis est extrait à l'éther diéthylique, séché (Na2SO4), concentré, et purifié sur gel de silice (35:65 acétate d'éthyle - cyclohexane) pour conduire à 113 (0.97 g, 90%). Spectre de masse (ESI) m/z 854.3 [(M + H)+].

Etape 15.k : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronateH1-4H6-0-acétyl-2-azido-3-Q-benzyl-2-dé soxy-α,3-D- qlucopyranose trichloroacétimidate) (n° 114)

A une solution du composé 113 (0.95 g, 1.12 mmol) dans le dichlorométhane (21.2 mL), sont additionnés, sous argon, du carbonate de césium (Cs2CO3) (0.583 g, 1.6 équivalent molaire), puis du trichloroacétonitrile (CCI3CN) (0.56 mL, 5.0 équivalents molaire). Après 35 min d'agitation, le mélange réactionnel est filtré, puis concentré. Le résidu est purifié sur gel de silice (25:75 acétate d'éthyle - cyclohexane) pour donner 114 (995 mg, 90%). Spectre de masse (ESI) m/z 1021.5 [(M + Na)+].

PREPARATION 16 : Synthèse du (benzyf 3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-2-O-sodïum sulfonato-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(2-acétamido-3-O-benzyl-2-désox y-6-O-sodium sulfonato-α-D-gIucopyranosyl)-(1 -4)-(benzyI 3-O-benzyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(2-acétamfdo-3-O- benzyl-2-désoxy- 6-O-sodïum sulfonato-α-D-gIucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4- oxypipérîdine-1,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 122)

122 sel de sodium

Etape 16.a : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-beπzyl-4-Q-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-azido-3-0-benzyl-2 -désoxy-α-D- glucopyranosylH1-4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyraπosyluronate)-(1- 4)-(1,6-anhvdro-2-azido-3-O-beπzyl-2-désoxy-β-D-qlucopyra nose) (n° 115) Le composé 114 (990 mg, 0.99 mmol) et le composé 8 (1.15 g, 1.7 mmol) sont traités selon la méthode 2 pour fournir, après purification, le composé 115 (623 mg, 42%). Spectre de masse (ESI) m/z 1533.8 [(M + Na)+].

Etape 16.b : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-azido-3-0-benzyl-2 -désoxy-«-D- glucopyranosyl)-(1-4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1- 4)-(1,6-di-O-acét,yl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D-g lucopyranose) (n° 116)

Le composé 115 (590 mg, 0.39 mmol) est traité comme pour la synthèse du composé 112 pour conduire, après purification sur gel de silice (7:3 cyclohexane - acétate d'éthyle), à 116 (609 mg, 97%). Spectre de masse (ESI) m/z 1636.2 [(M + Na)+].

Etape 16.c : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2 -désoxy-α-D- qlucopyranosylHI -4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 - 4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopy ranose) (n° 117)

Le composé 116 (592 mg, 0.367 mmol) est traité comme pour la synthèse du composé 113 pour donner, après purification sur gel de silice (65:35 cyclohexane - acétate d'éthyle), Ie composé 117 (530 mg, 92%). Spectre de masse (ESI) m/z 1593.9 [(M + Na)+].

Etape 16.d : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-Q-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2 -désoxy-α-D- glucopyranosvQ-(1-4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1- 4)-(6-O-acétvI-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopy ranose trichloroacétimidate) (n° 118)

Le composé 117 (511 mg, 0.325 mmol) est traité comme pour Ia synthèse du composé 114 pour fournir, après purification sur gel de silice (7:3 cyclohexane - acétate d'éthyle), 118 (495 mg, 89%). Analyse élémentaire calculée pour C85H90CI3N7O25: C, 59.49 ; H, 5.29 ; N, 5.71. Trouvée : C, 59.49 ; H, 5.50 ; N, 5.48.

Etape 16.e : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2 -désoxy-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(benzyl 2-Q-acétvi-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 - 4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyran osyl)-(1-4)-(5- (benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 119)

Les composés 118 (479 mg, 0.279 mmol) et 6 (255 mg, 0.536 mmol), sont traités selon la METHODE 2 pour fournir, après purification, le composé 119 (375 mg, 66%). Analyse élémentaire calculée pour Ci11HiI7N7O30: C, 59.49 ; H, 5.29 ; N, 5.71. Trouvée : C, 59.49 ; H, 5.50 ; N, 5.48.

Etape 16.f : Préparation du fbenzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-acétamido-3-O-ben zyl-2-désoxy-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 - 4)-(6-0-acétyl-2-acétamido-3-0-benzyl-2-désoxy-α-D-qluco pyranosyl)-(1-4)-(5- (benzyloxy)-4-oxypipéridι'ne-1 ,3^di'carboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 120)

Le composé 119 (180 mg, 88.7 μmol) est dissous dans la pyridine (1.4 mL), puis de l'acide thioacétique (1.4 mL, 225 équivalents molaire) est ajouté à 0 0C. Le milieu réactionnel est agité 17h à température ambiante, puis est concentré et purifié sur gel de silice (4:1 toluène - acétone), pour conduire au composé 120 (153 mg, 84%). Spectre de masse (ESI) m/z 2084.8 [(M + Na)+].

Etape 16.q : Préparation du (benzyl 3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(2-acétamido-3-0-benzyl-2-désox y-α-D- glucopyranosylH 1 -4)-(benzyl 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4H2- acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-( 5-(benzyloxy)-4- oxypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S1 4R, 5R)) (n° 121) Le composé 120 (190 mg, 93.6 μmol) est traité selon la METHODE 3. Le polyol obtenu est dissous dans du diméthylformamide (4.4 mL), et de l'hydrogénocarbonate de potassium (85 mg, 10 équivalents molaire) ainsi que du bromure de benzyle (202 μL, 20 équivalents molaire) sont additionnés à 0 0C. Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 16 h, puis purifié sur colonne LH-20. Une purification sur gel de silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 2:3) permet d'obtenir 121 (108 mg, 62% (2 étapes)). Spectre de masse (ESI) m/z 1884.2 [(M + Na)+].

Etape 16.h : Préparation du (benzyl 3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(2-acétamido-3-O- benzyl-2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosvD-d -4)-(benzyl 3-O-benzyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(2-acétamido-3-0- benzyl-2-désoxy-6-0- sodium sulfonato-α-D-glucopyranosylH1 -4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3- dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R. 5R)) (n° 122)

Le composé 121 (41 mg, 21.6 μmol) est traité d'après la METHODE 4, pour fournir le composé 122 (49 mg, 99%). Spectre de masse (ESI) m/z 2301.0 [(M - H)"].

Les exemples qui suivent illustrent la préparation de composés de l'invention sans la limiter. Les spectres de masse et R.M.N. confirment les structures des composés obtenus.

EXEMPLE 1 : Synthèse du (2,4-di-O-sodium suIfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- gIucopyranosyl)-(1-4)-(2-O-sodium suIfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(5-(hydroxy)-4-oxypïpéridine-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n° 20)

20 sel de sodium

Le composé 19 de la PREPARATION 3 (50 mg, 24.02 μmol) est traité selon la méthode 5 pour conduire au composé 20 (26 mg, 72%). RMN 1H (D2O) δ 5.23 (d, H-1 GIc"), 5.13 (d, H-1 IdoUA1"), 5.10 (d, H-1 ldoUAv), 5.09 (d, H-1 Glcιv), 3.62, 3.04, 2.64, 2.47 (4m, 4H, H-2, H-21, H-6, H-61 pip1).

EXEMPLE 2 : Synthèse du 2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3-carbox yIate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n° 21)

(selde sodium) 21

Le composé 97 de la PREPARATION 12 est traité selon la méthode 5 pour conduire au composé 21. RMN 1H (D2O) δ 5.21 (d, H-1 GIc"), 3.40, 3.40, 3.40, 3.10 (4m, 4H, H-2, H-2', H-6, H-6' pip1).

EXEMPLE 3 : Synthèse du (2,4-di-O-sodium sulfonato-oc-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium suIfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipérïdine-3-carboxylate de sodium (3S5 4R, 5R)) (composé n° 22 )

(sel de sodium)

22

De la même manière a été préparé le composé 22. RMN 1H (D2O) δ 5.19 (d, H-1 GIc"), 5.15 (d, H-1 IdoUA1"), 3.27, 3.23, 3.09, 2.89 (4m, 4H, H-2, H-21, H-6, H-61 pip1).

EXEMPLE 4 : Synthèse du (2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodîum sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(2-O-sodium suIfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-0-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéιïdine-3-carboxylate de sodium (3S ,4R, 5R)) (Composé n°23 )

(seldesodium)

23

De la même manière a été préparé le composé 23. RMN 1H (D2O) δ 5.26 (d, H-1 GIc"), 5.14 (d, H-1 IdoUA1"), 5.09 (d, H-1 Glciv).

EXEMPLE 5 : Synthèse du (2,4-di-O-sodîum sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-N-sodium sulfonato-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- g!ucopyranosyl)-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-N-sod!um sulfonato-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3-carbox ylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n°27)

(sel de sodium)

27

Le composé 26 de la PREPARATION 4 (7.0 mg, 3.28 μmol) est traité selon la méthode 5 pour conduire au composé 27 (2.9 mg, 55%). RMN 1H (D2O) δ 5.53 (d, H-1 GIc"), 5.44 (d, H-1 Glclv), 5.23 (d, H-1 IdoUA1"), 5.21 (d, H-1 ldoUAv), 3.09, 3.07, 2.58, 2.44 (4m, 4H, H-2, H-21, H-6, H-61 pip1).

EXEMPLE 6 : Synthèse du (3-O-méthyl-2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sodium suIfonato-α-D-glucopyranosyl)- (1-4)-(3-O-méthyI-2-O-sodium suIfόnato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1-4)-(3-O-méthyl-2,6-dî-O-sodium sulfonato-α-D-gIucopyranosyl)-(1-4)-(5- (hydroxy)-4-oxypipérldine-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n°47)

(sel de sodium)

47

Le composé 46 de la PREPARATION 6 est traité selon la méthode 5 pour donner, après purification, le composé 47 (5 mg, 57%). Spectre de masse (ESI) m/z 1650.9 [(M - Na + H)"].

EXEMPLE 7 : Synthèse du (2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodîum)-(1-4)-(2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-O- sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2,6-di-O-sodium su(fonato-α-D-glucopyranosyI)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipé ridine-3- carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n° 69)

69 sel de sodium

Le composé brut 68 de la PREPARATION 9, est traité selon la METHODE 5 pour fournir 69 (3.8 mg, 25%, deux étapes).

RMN 1H (D2O) δ 5.62 (d, H-1 Glclv), 5.52 (d, H-1 GIc"), 5.21 (d, H-1 ldoUAv), 4.99 (d, H-1 IdollA1").

EXEMPLE 8 : Synthèse du (4-O-propyl-2-O-sodium suIfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2,6-di-O-sodium su!fonato-α-D-glucopyranosyI)-(1-4)-(2-O- sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2,6-di-O-sodium suIfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipé ridine-3- carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n°74)

74 sel de sodium

Le composé brut 73 de la PREPARATION 10, est traité selon la METHODE 5 pour fournir 74 (6.0 mg, 62%, deux étapes).

RMN 1H (D2O) δ 5.68 (d, H-1 Glclv), 5.55 (d, H-1 GIc"), 5.21 (d, H-1 ldoUAv), 5.18 (d, H-1 IdoUA1"). EXEMPLE 9 : Synthèse du méthyl (2,4-di-O-sodium suIfonato-α-L-îdopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium suIfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(5-hydroxy-4-oxypipéridin-1 -yl-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R))-(1-4)-(2-N-sodium sulfonato-2,4-didésoxy-4-methyl-3,6- di-O-sodium suIfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(sodium 2-O-sodium sulfonato-α-L-îdopyranosyluronate)-(1-4)-(2-N-sodium sulfonato-2-désoxy-6- O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranoside) (composé n° 90)

90 sel de sodium

A une solution du composé 89 (24 mg, 26.9 μmol) de la PREPARATION 11 , et du composé 22 (61 mg, 1.9 équivalent molaire) de l'EXEMPLE 3 dans du tampon phosphate (pH 7) est ajouté, à O 0C, du cyanoborohydrure de sodium (4.4 mg, 2.4 molequiv). Après 8h d'agitation à O 0C, le milieu réactionnel est placé à température ambiante pendant 16h, puis purifié successivement sur une colonne de gel Sephadex® G-25 éluée par du chlorure de sodium 0.2 M suivi de la même colonne Sephadex® G-25 éluée à l'eau pour donner le composé 90 (17 mg, 31%). Spectre de masse (ESI) m/z 2029.3 [(M + H - Na)"].

EXEMPLE 10 : Synthèse du méthyl (2,4-di-O-sodium suIfonato-α-L-Jdopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-(5-hydroxy-4-oxypipéridin-1-yl~3-carb oxyIate de sodium (3S, 4R, 5R))-(1-4)-(2-N-sodium sulfonato-2,4-didésoxy-4-methyl-6-0- sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(sodium 2-0-sodium sulfonato- α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(2-N-sodium sulfonato-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranoside) (composé n° 91)

91 sel de sodium

De la même manière a été préparé le composé 91. Spectre de masse (ESI) m/z 1927.1 [(M + H - Na)'].

EXEMPLE 11 : Synthèse du méthyl (5-hydroxy-4-oxypipéridin-1-yl-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R))-(1-4)-(2-N-sodium sulfonato-2,4-didésoxy-4-methyl-3,6-di-O- sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(sodium 2-O-sodium sulfonato- α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(2-N-sodium suIfonato-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranoside) (composé n° 92)

92 sel de sodium

De la même manière a été préparé le composé 92. Spectre de masse (ES!) m/z 1321.1 [(M + H - Na)"].

EXEMPLE 12 : Préparation du (2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- gIucopyranosyl)-(1-4)-(5-hydroxy-4-oxypipéridin-1-méthyl-3 -carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n° 98)

98 sel de sodium Le composé 97 de la PREPARATION 12 (20 mg, 21.3 μmol), est traité selon la METHODE 5 dans un mélange 3:1 :1 méthanol - acide acétique - eau sous courant d'hydrogène pour conduire au composé 98 (6.0 mg, 57%). Spectre de masse (ESI) m/z 456.8 [(M - H)I

EXEMPLE 13 : Synthèse du (2,4-di-O-sodium suIfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-0-sodium sulfonato-α-D- gIucopyranosyl)-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-0-sodium suIfonato-α-D- glucopyranosyI)-(1-4)-(5-(hydroxy)-3-hydroxyméthyI-4-oxypip éridine-(3R, 4R, 5R)) (composé n° 123)

l£-° sel de sodium

Le composé 104 (41 mg, 19 μmol) est traité selon la méthode 5 pour conduire au composé 123 (10.7 mg, 38%). RMN 1H (D2O) δ 5.28 (d, H-1 GIc"), 5.20 (d, H-1 IdoUA1"), 5.17 (d, H-1 ldoUAv), 5.15 (d, H-1 Glcιv), 3.21 , 3.19, 2.68, 2.59 (4m, 4H, H-2, H-2\ H-6, H-61 pip1).

EXEMPLE 14 : Synthèse du (4-O-phénylpropyI-2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium suIfonato-α-D-glucopyranosyI)-(1 -4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipé ridine-3- carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n° 124)

124

sel de sodium

Le composé 122 est traité selon la méthode 5 pour conduire au composé 124. RMN 1H (D2O) δ 5.28 (d, H-1 GIc"), "5.21 (d, H-1 ldoUAv), 5.16 (d, H-1 IdoUA1"), 5.16 (d, H-1 Glcιv), 3.23, 3.20, 2.93, 2.75 (4m, 4H, H-2, H-21, H-6, H-61 pip').