ENFERMEDADES LÍSOSOMALES.

La presente invención se refiere a aminociclitoles bicíclicos y su uso para el tratamiento de enfermedades lisosomales tales como la enfermedad de Gaucher. Además en la presente invención se describe el procedimiento de síntesis de dichos compuestos.

ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR

Las enfermedades causadas por desórdenes de almacenaje lisosomal, son un tipo de enfermedades raras congénitas, causadas por desórdenes metabólicos que provocan que determinados lípidos se acaben acumulando en los lisosomas. Los síntomas de estas enfermedades, varían dependiendo del tipo de desorden, aunque se manifiestan ya en los primeros meses o años de vida de los enfermos, que suelen morir a una edad temprana. Entre los síntomas habituales, destacan retraso en el desarrollo, dificultad en los movimientos, apoplejía, demencia, sordera, ceguera, defunciones en órganos (hígado, corazón, pulmón etc.) y crecimiento óseo anormal.

Los esfingolípidos, son lípidos complejos derivados de la esfingosina, un alcohol insaturado de 18 carbonos, que son muy abundantes en las membranas biológicas y algunos son precursores de compuestos implicados en procesos de señalización celular. En algunas de las enfermedades lisosomales se produce la acumulación de esfingolípidos, debido a que las enzimas que hidrolizan estas moléculas presentan mutaciones que impiden su correcta función celular.

La enfermedad de Gaucher es una de estas enfermedades clasificadas como desórdenes de almacenaje lisosomal, caracterizada por la acumulación del esfingolípído glucosilceramida (GlcCer) en los lisosomas. La enfermedad es causada por la actividad deficiente de la enzima glucocerebrosidasa, una beta- glucosidasa que hidroliza GicCer en glucosa y ceramida, debido a que dicha enzima presenta varias formas mutadas. Los niveles celulares de la enzima mutada y plegada incorrectamente, son anormalmente bajos debido a su degradación prematura por acción de endoproteasas específicas en el retículo endoplásmíco. Durante los últimos años se han desarrollado varias estrategias terapéuticas enfocadas a la enfermedad de Gaucher. Entre ellas, el uso de chaperonas farmacológicas, que son inhibidores competitivos de la enzima diana que asisten el plegado y localización correctos de la proteína defectuosa, a concentraciones subínhibitorias, ha llegado a ser un campo de investigación muy activo (Fan, J.-Q. Trends Pharmacol. Sci. 2003, 24, 355-360).

El documento WO2009/066069, describe el uso de una serie de compuestos, que actúan como chaperonas farmacológicas de ciertas enzimas plegadas incorrectamente, para el tratamiento de enfermedades relacionadas con desórdenes en el almacenaje lisosomal.

Durante los últimos años, se ha estado trabajando en el desarrollo de nuevos aminociclitoles con aplicabilidad potencial como chaperonas farmacológicas de la enzima glucosilcerebrosidasa (Egido-Gabás, M.; Serrano, P.; Casas, J.; Llebaria, A.; Delgado, A. Org. Biomol. Chem. 2005, 3, 1 195-1201 y Egido- Gabás, M.; Canals, D.; Casas, J.; Llebaria, A.; Delgado, A., ChemMedChem 2007, 2, 992-994). Sin embargo, la exploración de la diversidad química mediante la funcionalízacíón del núcleo de aminocíclítol ha presentado ciertas limitaciones (Serrano, P.; Casas, J.; Zueco, M.; Emeric, G.; Egido-Gabás, M.; Llebaria, A.; Delgado, A. J. Comb. Chem 2007, 9, 43-52). Los resultados más prometedores surgen de la apertura regio- y estereoselectiva del conduritol B epóxído con una serie de aminas alífáticas con diferente longitud de cadena. La presencia de un anillo de triazol en la cadena lateral (Díaz, L.; Bujons, J.; Casas, J.; Llebaria, A.; Delgado, A. J. Med. Chem. 2010, 53, 5248-5255) produce un incremento en la potencia de los inhibidores. Hasta el momento, los ciclitoles obtenidos muestran una importante actividad sobre el enzima glucocerebrosidasa actuando como inhibidores del mismo, sí bien se han mostrado incapaces de actuar como chaperonas farmacológicas a bajas concentraciones, tanto en células que no presentan mutaciones en el enzima como en células procedentes de pacientes de la enfermedad de Gaucher.

Teniendo en cuenta que los desórdenes en el almacenaje lisosomal están causados por el incorrecto plegamiento o localización intracelular de las enzimas implicadas en el metabolismo de ciertos sustratos como glicolípidos y glicoproteínas, sería deseable obtener compuestos que actuaran como chaperonas farmacológicas y que fueran capaces de conseguir que estas enzimas se plegaran y localizaran correctamente, recuperando así su funcionalidad y evitando la acumulación anormal de estos sustratos en los lisosomas.

Un problema general que existe en el desarrollo de chaperonas farmacológicas, es que los compuestos obtenidos hasta el momento no poseen potencia suficiente para incrementar la actividad enzimática en células en cultivo, y por tanto, se deben dar a dosis muy altas con lo que se reduce la ventana terapéutica entre la recuperación funcional y la inhibición del enzima. La necesidad de utilizar altas concentraciones de chaperonas farmacológicas puede además inducir problemas de toxicidad y selectividad además de aumentar las actividades inespecíficas no deseadas.

Asimismo, al unirse estos compuestos en el centro activo del enzima, la recuperación funcional de glucocerebrosidasas mutadas en posiciones cercanas al centro activo de la enzima (tales como la N370S) es más probable, mientras que las mutaciones de aminoácidos lejanos al centro activo (tales como la L444P) son mas insensibles a los compuestos. Sería por tanto deseable obtener nuevos compuestos más potentes y selectivos en ensayos celulares, que actuaran a concentraciones menores, de manera selectiva y que fueran activos sobre mutaciones resistentes al rescate funcional de la actividad enzimática mediante chaperonas farmacológicas.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a una familia de compuestos de fórmula general (I), mediante los cuales se consiguen mejores eficiencias y mayores resultados frente a la enfermedad de Gaucher. Ello es debido a que con estos compuestos se consigue una mayor potenciación de la enzima β- glucocerebrosidasa (enzima directamente relacionada con la enfermedad de Gaucher) en linfoblastos, frente a compuestos ya descritos en el Estado de la Técnica llegándose a obtener resultados muy prometedores a concentraciones muy bajas (nM) en ensayos celulares, lo cual indica una mayor actividad de estos nuevos compuestos respecto a los descritos anteriormente.

Por lo tanto un primer aspecto de la presente invención se refiere compuesto de fórmula general (I)

(I) o cualquiera de sus sales, isómeros o solvatos,

donde

X y W son iguales o diferentes y se seleccionan entre -O-, -S- y un grupo -NR-i ; Y es un grupo - NR ₂ ;

Ri y R ₂ son iguales o diferentes y se seleccionan entre H, alquilo C-|-Ci ₈ , un cicloalquilo y un grupo arilo; En una realización preferida, X es O.

En otra realización preferida X es un grupo -NR^

En otra realización preferida X es un grupo -S-.

En una realización preferida, W es O.

En otra realización preferida, W es un grupo -NRi .

En otra realización preferida, W es un grupo -S-.

Según una realización preferida, Ri es H.

Según otra realización preferida, Ri es un grupo alquilo C-i-Ci ₈ , preferiblemente Cg. Este grupo alquilo puede estar sustituido por un cicloalquilo o por un grupo arilo, siendo el grupo arilo preferido un fenilo.

Según otra realización preferida, Ri es un cicloalquilo.

Según otra realización preferida, Ri es un grupo arilo, preferiblemente un fenilo. Según una realización preferida, R ₂ es H.

Según otra realización preferida, R ₂ es un grupo alquilo Crds, preferiblemente

C-6-Cg, o un grupo (CH ₂ ) ₃ Ph.

En otra realización preferida, R ₂ es un cicloalquilo.

En otra realización preferida, R ₂ es un grupo arilo, preferiblemente un fenilo.

Según otra realización preferida, el compuesto de fórmula general (I), se selecciona de entre la siguiente lista:

((±)-1 a):

{3aSñ,4Sñ,5/ ^: ?S,6Sfí,7fíS,7afíS)-2-(hexilimino)-octahidrobenzo[o (]oxazole- 4,5,6,7-tetraol; ((±)-1 b):

(3aSfí,4S ?,5fíS,6Sfí fíS7afíS)-2-(octilimino)-octahidrobenzo[d]oxazole-

4,5,6,7-tetraol; ((±)-1c):

(3aSfí,4Sfí,5ñS,6Sñ,7/ ^: ?S ₎ 7añS)-2-(nonilim¡no)-octahidrobenzo[^oxazole- 4,5,6,7-tetraol;

{(-)-1c):

(3aS,4S,5ñ,6S,7f?,7afí)-2-(nonilim¡no)-octahidrobenzo[ loxazole-4,5,6,7- tetraol;

<(-)-1d):

(3aS,4S _! 5/ ^: ?,6S,7ñ,7añ)-3-nonil-2-(nonilimino)-octahidrobenzo[c (loxazole- 4,5,6,7-tetraol;

<(±)-2c):

(3afíS,4Sfí,5fíS,6Sfí,7/ ^: ?S,7aSfí)-2-(nonilímino)-octahidrobenzo[^oxazole- 4,5,6,7-tetraol;

((+)-2c)

{3afí,4S,5fí,6SJ fí,7aS)-2-(nonil¡mino)-octahidrobenzo[o ^, joxazole-4, 5,6,7- tetraol; ((+)-2d)

{3a/ ^: ?,4S,5ñ,6S,7ñ,7aS)-3-non¡l-2-(non¡limino)-octahidr obenzo[(-/joxazole- 4,5,6,7-tetraol;

((±)-3a)

{3afíS,4Sñ,5/ ^: ?S,6Sfí,7fíS,7afíS)-2-(hexilimino)-octah¡drobenzo[ o(]oxazole- 4,5,6,7-tetraol; ((±)-3b):

(3af?S,4Sfí,5f?S,6Sfí7fíS,7afíS)-2-(octilimino)-octahidr obenzo[cloxazole- 4,5,6,7-tetraol;

{(±)-3c):

(3afíS,4Sfí,5ñS,6Sñ,7/ ^: ?S ₎ 7añS)-2-(nonilim¡no)-octahidrobenzo[^oxazole- 4,5,6,7-tetraol;

<(-)-3c):

(3afí,4S,5fí,6S7/ ^: ?,7a/ ^: ?)-2-(non¡limino)-octahidrobenzo[cjoxazole-4, 5,6,7- tetraol;

{(-)-3d):

(3añ,4S,5fí,6S,7fí,7afí)-3-nonil-2-(nonilim¡no)-octahid robenzo[cloxazole- 4,5,6,7-tetraol;

<(±)-4a):

(3aSfí,4Sfí,5fíS,6Sfí,7fíS,7aSfí)-2-(hexilimino)-octah idrobenzo[cíjoxazole- 4,5,6,7-tetraol;

((±)-4b):

{3aSfí,4Sfí,5fíS,6Sfí,7f?S,7aSfí)-2-(octílimino)-octah idrobenzo[dloxazole- 4,5,6,7-tetraol;

((±)-4c):

{3aSñ,4Sñ,5fíS,6Sfí,7fíS,7aS/ ^: ?)-2-(nonil¡mino)-octahidrobenzo[^oxazole- 4,5,6,7-tetraol;

((+)-4c):

{3aS,4S,5/ ^: ?,6S,7/ ^: ?,7aS)-2-{nonilimino)-octahidrobenzo[o(]oxazole-4,5,6, 7- tetraol; ((+Hd):

(3aS,4S,5fí,6S fí7aS)-3-nonil-2-(nonil¡mino)-octahidrobenzo[o ^, ]oxazole- 4,5,6,7-tetraol; ((-)-5c):

(3af?,4S,5R,6f?7S aS)-2-(nonilimino)-octahidro-1 H-benzo[d]imidazole-4,5,6,7- tetraol; y

<(-)-5e):

(3afí,4S,5fí,6f?7S aS)-2-(3-fenilpropilimino)-octahidro-1 H-benzo[c imidazole- 4,5,6,7-tetraol.

De manera preferida el compuesto de fórmula general (I), se selecciona de entre:

((±)-4b):

{3aSñ,4Sñ,5/ ^: ?S,6Sfí,7fíS,7aS/ ^: ?)-2-(octilimino)-octahidrobenzo[d]oxazole- 4,5,6,7-tetraol; ((±)-4c):

(3aSfí,4Sfí,5fíS,6Sfí ₎ 7ñS,7aSfí)-2-(nonilimino)-octahidrobenzo[^oxazole- 4,5,6,7-tetraol;

((+)-4c):

(3aS,4S _! 5fí,6S,7fí,7aS)-2-(nonilimino)-octahidrobenzo[c/|oxa zole-4 _! 5,6 _! 7- tetraol;

((-)-5c):

(3aft4S,5R,6f?JS7aS)-2-(nonilimino)-octahidro-1 H-benzo[cijimidazole-4,5,6,7- tetraol; y ((-)-5e):

(3af?,4S,5fí,6fí7S aS)-2-(3-fenilpropilimino)-octah¡dro-1 H-benzo[Gjimidazole- 4,5,6,7-tetraol. De manera aún más preferida el compuesto de fórmula general (I), se selecciona de entre:

<(+)-4c):

(3aS,4S,5/ ^: ?,6S,7/ ^: ?,7aS)-2-(non¡limino)-octahídrobenzo[cíjoxazole-4,5 ,6,7- tetrao I;

((-)-5c):

{3afí,4S,5fí,6fí,7S aS)-2-(nonil¡mino)-octahidro-1 H-benzo[clímidazole-4,5 _J 6,7- tetraol; y

((-)-5e):

{3a/ ^: ?,4S,5ñ,6/ ^: ?,7S ₎ 7aS)-2-(3-fen¡lpropil¡mino)-octahidro-1 H-benzo[o]imidazole- 4,5,6,7-tetraol. Según otra realización preferida comprende el compuesto de fórmula general (I) para su uso como medicamento.

Un segundo aspecto de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica, que comprende un compuesto de fórmula general (I) o sus sales, solvatos o prodrogas, junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables y al menos un transportador farmacéuticamente aceptable, adyuvante y/o vehículo.

De manera preferida, la composición farmacéutica además comprende uno o más principios activos. Según otra realización preferida, la composición farmacéutica se presenta en una forma adaptada a la administración parenteral, oral, sublingual, nasal, intratecal, bronquial, linfática, rectal, transdérmica o inhalada. Un tercer aspecto de la presente invención se refiere al uso del compuesto de fórmula general (I) o de la composición farmacéutica para la elaboración de un medicamento.

Según una realización preferida, el uso como medicamento del compuesto de fórmula general (I) o de la composición farmacéutica que lo comprende es para el tratamiento y/o prevención de una enfermedad relacionada con trastornos de tipo lisosomal.

De manera preferida el medicamento se usa para el tratamiento y/o prevención de la enfermedad de Gaucher.

Además también de manera preferida, el medicamento se presenta en una forma adaptada a la administración parenteral, oral, sublingual, nasal, intratecal, bronquial, linfática, rectal, transdérmica o inhalada.

Un cuarto aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento de síntesis del compuesto de fórmula general (I), que comprende la reacción de un compuesto de fórmula general (II) con un compuesto de fórmula general (III) ara dar el compuesto de fórmula general (I):

o cualquiera de sus sales, isómeros o solvatos,

donde;

T y Z son iguales o diferentes y se selecciona entre un grupo -OH, -SH y un grupo -NHRi.

X se selecciona entre -O-, -S- y un grupo -NRi ;

Y es un grupo - NR ₂ ;

W se selecciona entre -O-, -S- y un grupo -NR^

Ri y R ₂ son iguales o diferentes y se seleccionan entre H, alquilo C Ci ₈ , un cicloalquilo y un grupo arilo;

NCS es isoticionato.

De manera preferida, T es un grupo -OH

Según otra realización preferida, T es un grupo -NHRi.

Según otra realización preferida, T es un grupo -SH. En una realización preferida, Z es un grupo -OH

Según otra realización preferida, Z es un grupo -NHRi.

Según otra realización preferida, Z es un grupo -SH.

En una realización preferida X es -O-.

Según otra realización preferida X es un grupo -NRi;

Según otra realización preferida X es un grupo -S-;

En una realización preferida W es -O-.

Según otra realización preferida W es un grupo -NRi ;

Según otra realización preferida W es un grupo -S-;

En una realización preferida R-i es H.

En otra realización preferida Ri es alquilo C-i-C- s, preferiblemente C ₉ . Este grupo alquilo puede estar sustituido por un cicloalquilo o por un grupo arilo, siendo el grupo arilo preferido un fenilo.

Según otra realización preferida Ri es un cicloalquilo.

Según otra realización preferida Ri es un grupo preferiblemente un fenilo. Según una realización preferida R ₂ es H.

En otra realización preferida R ₂ es un grupo alquilo Ci-C-i ₈ , preferiblemente C ₆ - C _g , o un grupo (CH^Ph.

En otra realización preferida R ₂ es un cicloalquilo.

En otra realización preferida R ₂ es un grupo arilo, preferiblemente un fenilo.

En la presente invención el término "alquilo" se refiere en la presente invención a cadenas alifáticas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 18 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, í-propílo, n-butilo, tert-butilo, sec- butilo, n-pentilo, etc. Los radicales alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustítuyentes tales como halógeno, hidroxilo, azida, ácido carboxílico o un grupo sustituido o no sustituido seleccionado de entre amíno, amido, éster carboxílico, éter, tiol, acilamino o carboxamido, alcóxido, tiol, amino, acilamino, ciano, carboxilato, carboxamida, carboxiéster, arilo o heteroarilo o combinaciones de estos grupos. Cuando el grupo alquilo está sustituido, lo está preferentemente por uno o varios grupos amina, amida o éter, que a su vez pueden estar o no sustituidos por grupos alquilo, amida, cicloalquilo o éteres y estos a su vez, pueden estar igualmente sustituidos o no. El término cicloalquilo se refiere a un radical estable monocíclico o bicíclico de 3 a 10 miembros, que está saturado o parcialmente saturado, y que sólo consiste en átomos de carbono e hidrógeno, tal como ciclohexilo o adamantilo.

El término arilo se refiere, en la presente invención, a anillos aromáticos sencillos o múltiples, que tienen de entre 5 a 18 eslabones en los que se ha eliminado un protón del anillo. Preferentemente el grupo arilo tiene de 5 a 7 átomos de carbono, aún más preferiblemente es un fenilo. Los grupos arilo son por ejemplo, pero sin limitarse a fenilo, naftílo, difenilo, indenilo, fenantrilo o antracilo. Los radicales arilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustítuyentes.

Por compuestos de la invención, también nos referimos a sus sales, preferiblemente aceptables farmacéuticamente o de forma sustancialmente pura. Por sal farmacéuticamente aceptable se entiende, entre otras cosas, compuestos que tengan un nivel de pureza aceptable farmacéuticamente exceptuando aditivos farmacéuticos normalmente considerados como tales como diluyentes, vehículos y que no incluyan material que se considere tóxico en niveles de dosificación normales. Los niveles de pureza para los fármacos son preferiblemente entre un 50% y más preferiblemente un 70% y aún más preferentemente el 90%. En una realización preferente de la presente invención el nivel de pureza está alrededor del 95% de pureza respecto al compuesto de la invención o sus sales.

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de de la invención se puede preparar mediante uno o más de estos procedimientos:

(i) hacer reaccionar el compuesto de la invención con el ácido deseado

(ii) convertir una sal del compuesto de la invención en otro, mediante reacción con un ácido apropiado o mediante una columna de intercambio iónica adecuada.

Las dos reacciones se llevan a cabo típicamente en solución. La sal puede precipitar en solución y se puede recoger mediante filtración o se puede recuperar soluciones del compuesto de la invención y el ácido o base deseado, según sea apropiado. La sal puede precipitar de una solución y recogerse mediante filtración o se puede recuperar mediante evaporación del disolvente. El grado de ionización en la sal puede variar entre completamente ionizado a casi no ionizado. Sal por adición de ácidos farmacéuticamente aceptable, se refiere a aquellas sales que retienen la efectividad biológica y las propiedades de las bases libres, que no son indeseables ni biológicamente ni de otra manera, y que se forman con ácidos inorgánicos tales como, pero sin limitación, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, acido nítrico, ácido fosfórico y similares, y ácidos orgánicos tales como, pero sin limitación, ácido acético, ácido 2,2- dicloroacético, ácido adípico, ácido algínico, ácido ascórbico, ácido aspártíco, ácido benzensulfónico, ácido benzoico, ácido 4-acetamidobenzoico, ácido canfónico, ácido canfor-10-sulfónico, ácido cáprico, ácido caproico, ácido caprílico, ácido carbónico, ácido cinámico, ácido cítrico, ácido ciclámico, ácido dodecilsilfúrico, ácido etan-1 ,2disulfónico, ácido etansulfónico, ácido 2- hidroxietansulfónico, ácido fumárico, ácido galactárico, ácido gentísico, ácido glucoheptónico, ácido glucóníco, ácido glucurónico, ácido glutámico, ácido 2- oxo-glutárico, ácido glicerofosfórico, ácido glicólico, ácido hipúrico, ácido ísobutírico, ácido láctico, ácido lactobióníco, ácido láurico, ácido maleico, ácido oleico, ácido cerótico, ácido oxálico, ácido palmítico, ácido pamoico, ácido propíónico, ácido píroglutámico, ácido pirúvico, ácido salicílíco, ácido 4- aminosalicílico, ácido sebácico, ácido esteárico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido tíocíánico, ácido p-toluensulfónico, ácido trifluoroacétíco, ácido undecilénico, y similares.

"Sal por adición de bases farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellas sales que retienen la efectividad biológica y las propiedades de los ácidos libres, que no son indeseables ni biológicamente ni de otra manera. Estas sales se preparan a partir de la adición de una base inorgánica o de una base orgánica al ácido libre. Las sales derivadas de bases inorgánicas incluyen, pero sin limitación, sales de sodio, de potasio, de litio, de amonio, de calcio, de magnesio, de hierro, de zinc, de cobre, de manganeso, de aluminio y similares. Las sales derivadas de bases orgánicas incluyen, pero sin limitación, sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas que incluyen aminas sustituidas naturales, aminas cíclicas y resinas básicas de intercambio iónico, tales como amoníaco, isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamína, tripropilamina, dietanolamina, etanolamina, deanol, 2- metilaminoetanol, 2-dietilaminoetanol, diciclohexilamina, lisina, arginina, hístidína, cafeína, procalna, hidrabamína, colina, betaína, benetamina, benzatina, etilendiamina, glucosalina, metilglucamina, teobromina, trietanolamina, trometamina, purinas, piperazina, N-etilpiperidina, resinas de poliamina y similares. A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y dibujos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.

DESCRIPCIÓN DE LA FIGURA

Figura 1. Inhibición (%) sobre la β-glucocerebrosidasa humana en fibroblastos después de 24h de incubación a distintas concentraciones de inhibidor.

EJEMPLOS

A continuación se ilustra la invención mediante unos ensayos realizados, que pone de manifiesto la especificidad y efectividad de los compuestos de fórmula general (I) de la presente invención.

EJEMPLO 1. Síntesis de los compuestos de la invención.

1.1 Materiales v procedimientos

Los ciclitoles bícíclicos 1 -5 descritos en esta invención:

(±)-la-c (±)-2c (±)-3a-c

<-Mc,d (+)-2c,d

(-)-3c,d

(±)-4a-c (-)-5c,e

(+Hc,d fueron obtenidos por reacción de acoplamiento de los aminociclitoles 6-13 {Esquema 1 ) o el diaminociclitol 14 (Esquema 2) con el isotíocíanato apropiado de fórmula general R ₂ NCS. La posterior ciclación de la tiourea resultante utilizando un exceso de óxido de mercurio (II) proporcionó los precursores de isoureas y guanidínas bicíclicas correspondientes (19-22 y 25).

Los aminoalcoholes 6-8, 10 y 12 se obtuvieron a partir del epóxido de conduritol B siguiendo procedimientos reseñados anteriormente (González- Bulnes, P. y col. en Carbohydr. Res. 2007, 342, 1947-1952 y Serrano, P. y col. en J. Org. Chem. 2005, 70, 7829-7840). Los W-nonil aminoalcoholes 9, 11 y 13 se sintetizaron por aminación reductora de los correspondientes aminoalcoholes (8, 10 y 12) con el aldehido nonanal (Esquema 1 ).

(±)-15a,c (±)- 6c (±)-17a-c (±)-18a-c

(+)-15c (+)-16c,d (+)-17c (+)-18c,d

(-)-15d ( )-17d

c

(±)-19a,c (±)-20c (±)-21a-c (+)-22a-c

( )-19c,d (+)-20c,d ( )-21c,d { )-22c,d

Esquema 1. Reactivos y condiciones: a) C ₈ H ₁₇ CHO, NaBH ₃ CN, MeOH; b) RNCS, THF, 45 ^S C; c) HgO, tolueno, 1 15 ^S C; d) C ₈ H ₁₇ NCO, CH ₂ CI ₂ ; e) Tf ₂ 0, piridina, CH ₂ CI ₂ , -40 ^Q C.

Para la síntesis de la isourea (±)-19b se siguió una secuencia de reacción alternativa {Esquema 1 ). La reacción de acoplamiento del aminoalcohol (±)-6 con octilisocianato seguida del tratamiento con anhídrido trifluorometanosulfónico de la urea resultante 26 permitió obtener la isourea bicíclica (±)-19b.

24c,e

Esquema 2. Reactivos y condiciones: a) RNCS, THF, 45 ^S C; b) HgO, tolueno, 115 ^e C

El tratamiento de las isoureas 19-22 y guanidinas 25 con BCI ₃ a baja temperatura o la hidrogenólisis en presencia del catalizador de Pd(OH) ₂ permitió la obtención de los requeridos ciclitoles bicíclícos 1-5 después de la eliminación de los grupos bencilo, junto con los subproductos 27 y 28, como se describe en el Esquema 3.

(±)-20c (±)-2c

(+)-20c,d (+)-2c,d

(±)-22a-c (+)-28a-c (±)-4a-c

(-)-22c,d (+)-28c (+)-4c,d

Esquema 3. Reactivos y condiciones: a) Pd(OH) ₂ , EtOH, H ₂ (2 atm), 60 ^e C; b) BCI _3> CH ₂ CI _2> -40 ⁹ C; c) Pd/C, MeOH, H ₂ (2 atm). 1.2. Caracterización estructural.

Se realizó la caracterización estructural de los compuestos preparados y usados en esta invención mediante espectrometría de masas, rotación óptica y espectroscopia de RMN de ¹ H y ¹³ C. Se presenta a continuación algunos de los resultados: Método general para la síntesis de (+)-9, (-)-11 v (-)-13 por aminación reductora.

Una solución del aminoalcohol (+)-8, (+)-10 o (-)-12 (0.14 mmol) en metanol (5 mL) se trata sucesivamente con cianoborohidruro sódico (18 mg, 0.29 mmol), ácido acético (10 μί) y nonanal (0.16 mmol). La reacción se deja bajo atmósfera de argón y en agitación durante 4h. Pasado este tiempo, se añade agua (0.2 mL) y se evapora el disolvente. El residuo obtenido se resuspende en éter (20 mL) y se lava con agua (15 mL). La fase acuosa se extrae con éter (3 x 20 mL). Los extractos combinados se lavan con una disolución saturada de cloruro de sodio, se secan sobre sulfato de magnesio y se eliminan los disolventes a presión reducida. El crudo obtenido se purifica mediante cromatografía en columna utilizando como eluyente mezclas de hexano/acetato de etilo de polaridad creciente (de 4:1 a 3:1 ). (1 S,2S,3/?,4f?,5S,6S)-2,3,4,5-tetrabenciloxi-6-nonilaminociclo hexanol ((+)-9).

[a] « +28 (c 1 .0, CHCI ₃ ); IR (film): 31 10, 3097, 2947, 2924, 2853, 1490,

1454, 1362, 1086, 1070, 1028 ατϊ ¹ ; ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CDCI ₃ ): 0.93 (t, 3H, J=6.9 Hz), 1 .19-1 .38 (m, 12H), 1 .39-1 .47 (m, 2H), 2.40-2.49 (m, 2H), 3.24 (t, 1 H, J=3.9 Hz), 3.84 (t, 1 H, J=9.0 Hz), 3.90 (t, 1 H, J=9.1 Hz), 3.99-4.03 (m, 2H), 4.07 (t, 1 H, J=3.3 Hz), 4.62-4.91 (m, 8H), 7.27-7.41 (m, 20H); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI ₃ ): 14.3, 22.8, 27.4, 29.5, 29.71 , 29.75, 29.8, 32.0, 48.7, 58.3, 68.2, 72.7, 73.4, 75.7, 75.8, 79.6, 80.1 , 81 .7, 81 .9, 127.6-128.6, 138.4, 138.6, 139.12, 139.13. HRMS calculado para C ₄₃ H ₅ 6N0 ₅ : 666.4158 [M+H] ⁺ . Encontrado: 666.4175.

(1 fí,2S,3fí,4fí,5S,6S)-2,3,4,5-tetrabencíloxi-6-nonilamino ciclohexanol ((-)-11 )- [a] -14.5 (c 1 .0, CHCI3); IR (film): υ=3300, 3085, 3065, 3026, 2947, 2923, 2850, 1496, 1454, 1362, 1086, 1070, 1027 cm ^"1 ; ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CDCI3): 0.92 (t, 3H, J=6.8 Hz, CH ₃ ), 1 .25-1 .38 (m, 12H, 6xCH ₂ ), 1 .46-1 .55 (m, 2H, CH ₂ ), 2.76-2.88 (m, 2H, N CH ₂ ), 3.33-3.37 (m, 1 H, H-6), 3.51 -3.55 (m, 2H, H-1 , H-3), 3.59-3.61 (m, 1 H, H-5), 3.90 (dt, 1 H, J=1 .8, 9.1 Hz, H-2), 3.97 (dt, 1 H, J=2.0, 9.0 Hz, H-4), 4.65-4.97 (m, 8H, 4xPhCH20), 7.26-7.41 (m, 20H, Ph); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI ₃ ): 14.3 (CH ₃ ), 22.8 (CH ₂ ), 27.4 (CH ₂ ), 29.5 (CH ₂ ), 29.7 (CH ₂ ), 29.8 (CH ₂ ), 30.8 (CH ₂ ), 32.0 (CH ₂ ), 50.8 (NCH ₂ ), 57.7 (C6), 72.3 (C1 ), 72.6 (PhCH ₂ 0), 75.4 (PhCH ₂ 0), 75.6 (PhCH ₂ 0), 75.7 (PhCH ₂ 0), 81 .0 (C5), 81 .8 (C2), 81 .9 (C4), 83.4 (C3), 127.7-128.7 (CHar), 138.2 (Car), 138.7 (Car), 138.8 (Car). HRMS calculado para C ₄ 3H ₅₆ N0 ₅ : 666.4158 [M+H] ⁺ . Encontrado: 666.4180.

(1 S,2S ₅ 3fí,4f?,5S,6ñ)-2,3,4,5-tetrabenciloxi-6-nonilaminoci clohexanol ((-)-13).

[a] « -20.2 (c 1 ,0, CHCI ₃ ); IR (film): υ=3300, 3087, 3058, 3028, 2947, 2924, 2853, 1496, 1454, 1362, 1086, 1070, 1028 cm ^" ; ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CDCI ₃ ): 0.93 (t, 3H, J=7.0 Hz, CH ₃ ), 1 .28-1 .44 (m, 14H, 7xCH¿>), 2.41 -2.45 (m, 1 H, CH ₂ ), 2.47 (dd, 1 H, J=2.4, 10.0 Hz, H-6), 2.61 -2.66 (m, 1 H, CH ₂ ), 3.47 (dd, 1 H, J=2.8, 9.6 Hz, H-2), 3.59 (t, 1 H, J=9.4 Hz, H-4), 3.70 (t, 1 H, J=9.7 Hz, H-5), 4.08 (t, 1 H, J=9.5 Hz, H-3), 4.15 (t, 1 H, J=2.5 Hz, H-1 ), 4.61 -5.05 (m, 8H, 4xPhCH ₂ 0), 7.30-7.46 (m, 20H, Ph); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI ₃ ): 14.3 (CH ₃ ), 22.8 (CH ₂ ), 27.3 (CH ₂ ), 29.4 (CH ₂ ), 29.6 (CH ₂ ), 29.7 (CH ₂ ), 30.1 (CH ₂ ), 32.0 (CH ₂ ), 47.3 (NCH ₂ ), 60.9 (C6), 65.4 (C1 ), 72.6 (PhCH ₂ 0), 75.8 (PhCH ₂ 0), 76.1 (PhCH ₂ 0), 80.1 (C5), 81 .2 (C2), 81 .7 (C3), 85.0 (C4), 127.7-128.7 (CHar), 138.4 (Car), 138.5 (Car), 138.7 (Car), 138.9 (Car); HRMS calculado para C ₄₃ H ₅₆ N0 ₅ : 666.4158 [M+H] ⁺ . Encontrado: 666.4175.

Método general para la preparación de las tioureas 15-18, 23 y 24.

A una disolución del aminoalcohol (6-13) o diamino derivado 4 (0.22 mmol) en THF (6 mL), se añade el isotíocíanato apropiado (0.44 mmol para 6-13 y 0.22 para 14). La mezcla resultante se agita a 45 -C durante 18 h y se elimina el disolvente a presión reducida. Se obtiene un aceite que se purifica por cromatografía en columna utilizando una mezcla de hexano y acetato de etilo de polaridad creciente como eluyente. 1 -hexil-3-((1 fíS,2Sfí,3fíS,4fíS,5Sfí,6fíS)-2,3,4,5-tetrabenciloxi-6 - hidroxiciclohexil)tiourea ((±)-15a). IR (film): υ=3333, 3030, 2922, 2854, 1558, 1362, 1044 cm ^"1 . HRMS calculado para C ₄₁ H ₅₁ N ₂ 0 ₅ S: 683.3519 [M+H] ⁺ . Encontrado: 683.3527.

1 -nonil-3-((1 f?S,2SR,3RS,4/?S,5S/?,6 ?S)-2,3,4,5-tetrabenciloxi-6- hidroxiciclohexil)tiourea ((±)-15c).

IR (film): υ=3313, 3092, 3031 , 2924, 2854, 1559, 1454, 1360, 1064, 1027, 697 cm ^"1 . HRMS calculado para C ₄₄ H57N ₂ 0 ₅ S: 725.3988 [M+H] ⁺ . Encontrado: 725.4000.

1 -nonil-3-((1 fí,2S,3fí,4fí,5S,6fí)-2,3,4,5-tetraben^

((+)-15c).

[a] ⁵ +29 (c 0.2, CHCI ₃ ); Los datos espectroscópicos de IR son idénticos a los

(±) ^« 15c. HRMS calculado para C ₄₄ H ₅ 7N ₂ 0 ₅ S: 725.3988 [M+H] ⁺ . Encontrado: 725.3993. 1 ,3-dinonil-1 -((1 fí,2S,3fí,4fí,5S,6fí)-2,3,4,5-tetrabenciloxi-6- hidroxiciclohexil)tiourea ((-)-15d).

[a] ^ -13.9 (c 1 .0, CHCI ₃ ); IR (film): υ=3313, 3091 , 3064, 3034, 2925, 2854, 1524, 1454, 1357, 1065, 1028, 697 cm ^"1 . HRMS calculado para C53H75N2O5S: 851 .5397 [M+H] ⁺ . Encontrado: 851.5375.

1 -nonil-3-((1 Sfí,2Sfí,3fíS,4fíS,5Sfí,6Sfí)-2,3,4,5-tetrabencíloxi- 6- hidroxiciclohexil)tiourea ((±)-16c).

IR (film): υ=3285, 3091 , 3063, 3031 , 2925, 2854, 1549, 1455, 1071 , 696 cm ^"1 . HRMS calculado para C ₄₄ H ₅₇ N ₂ 0 ₅ S: 725.3988 [M+H] ⁺ . Encontrado: 725.3990.

1 -nonil-3-((1 S,2S,3ñ,4fí,5S,6S)-2,3,4,5-tetrabenciloxi-6-hidroxiciclohe xil)tiourea ((+)-16c).

[a] ¾ ⁵ +3.1 (c 1 .0, CHCI3). Los datos espectroscópicos de IR son idénticos a los de (±)-16c. HRMS calculado para C ₄₄ H ₅ 7N ₂ 0 ₅ S: 725.3988 [M+H] ⁺ . Encontrado: 725.3991 . 1 ,3-dinonil-1 -{(1 S,2S,3ñ,4/ ^: ?,5S,6S)-2,3,4,5-tetrabenciloxi-6- hidroxiciclohexil)tiourea ((+)-16d).

[a] ^ +4.2 (c 1 .0, CHCI ₃ ). IR (film): υ=3288, 3090, 3064, 3034, 2925, 2854, 1525,

1454, 1065, 698 cm ^"1 . HRMS calculado para C53H75N2O5S: 851 .5397 [M+H] ⁺ . Encontrado: 851 .5383.

1 -hex: -3-{^ SR,2SR,3RSARS,5SR,6RS)-2,3A etrabenc \ox:\-6- hidroxiciclohexil)tiourea ((±)-17a).

IR (film): υ=3276, 3064, 3031 , 2926, 2856, 1549, 1071 , 696 cm ^"1 . HRMS calculado para C ₄ i H ₅₁ N ₂ 0 ₅ S: 683.3519 [M+H] ⁺ . Encontrado: 683.3525.

1 -octil-3-((1 Sf?,2Sf?,3fíS,4fíS,5Sfí,6fíS)-2,3,4,5-tetrabenciloxi-6- hidroxíciclohexíl)tiourea ((±)-17b).

IR (film): υ=3270, 3064, 3031 , 2925, 2855, 1549, 1071 , 696 cm ^"1 . HRMS calculado para 71 1 .3832 [M+H] ⁺ . Encontrado: 71 1 .3773.

1 -noníl-3-((1 Sfí,2Sfí,3f?S,4fíS,5Sfí,6fíS)-2,3,4,5-tetrabenciloxí-6 - hidroxiciclohexil)tiourea ((±)-17c).

IR (film): υ=3275, 3063, 3031 , 2925, 2854, 1549, 1071 , 696 cm ^"1 . HRMS calculado para 725.3988 [M+H] ⁺ . Encontrado: 725.3999.

1 -noníl-3-((1 S,2S,3fí,4fí,5S,6fí)-2,3,4,5-te^

((+)-17c).

[a] ^« +25.1 (c 1 .0, CHCI3); Los datos espectroscópicos de IR son idénticos a los de (±)-17c. HRMS calculado para C ₄₄ H ₅₇ N ₂ 0 ₅ S: 725.3988 [M+H] ⁺ . Encontrado: 725.4003.

1 ,3-dinonil-1 -((1 S,2S,3fí,4ñ,5S,6fí)-2,3,4,5-tetrabenciloxi-6- hidroxiciclohexil)tiourea ((-)-17d).

[a] ^« -8.4 (c 0.8 CHCI3); IR (film): υ=3300, 3090, 3062, 3030, 2925, 2854, 1539, 1072, 1068, 696 cm ^"1 . HRMS calculado para C53H75N2O5S: 851 .5397 [M+H] ⁺ . Encontrado: 851 .5389. 1 -heñ\-3-{^ RS,2SR,3RSARS,5SR,6SR)-2,3A etiabená\ox:\-6- hidroxiciclohexil)tiourea ((±)-18a).

IR (film): υ=3318, 3091 , 3063, 3031 , 2926, 2857, 1550, 1070, 696 cm ^"1 . HRMS calculado para C ₄₁ H5 ₁ N2O5S: 683.35 9 [M+H] ⁺ . Encontrado: 683.35 6.

1 -octil-3-((1 f?S,2Sfí,3ñS,4ñS,5Sñ,6S/ ^: ?)-2,3,4,5-tetrabenciloxi-6- hidroxíciclohexíl)tiourea ((±)-18b).

IR (film): υ=3316, 3088, 3063, 3031 , 2925, 2855, 1550, 1086, 1069, 696 cm ^"1 . HRMS calculado para C43H55N2O5S: 71 1 .3832 [M+H] ⁺ . Encontrado: 71 1 .3861 .

1 -nonil-3-((1 f?S,2Sfí,3f?S,4fíS,5Sfí,6S/¾-2,3 A5-tetrabenciloxi-6- hidroxiciclohexil)tiourea ((±)-18c).

IR (film): υ=3305, 3088, 3063, 3030, 2926, 2854, 1549, 1097, 1070, 696 cm ^-1 . HRMS calculado para C44H57N2O5S: 725.3988 [M+H] ⁺ . Encontrado: 725.4016.

1 -noníl-3-((1 fí,2S,3fí,4fí,5S,6S)-2,3,4,5-tetrabenciloxi-6-hidroxicicl ohexil)t^^

((+)- ^" ! 8c).

[a] +18.6 (c 0.6, CHCI ₃ ); Los datos espectroscópicos de IR son idénticos a los de (+)-18c. HRMS calculado para C ₄₄ H ₅ 7N ₂ 0 ₅ S: 725.3988 [M+H] ⁺ . Encontrado: 725.4008.

1 ,3-dinonil-1 -((1 f?,2S,3fí,4fí,5S,6S)-2,3,4,5-tetrabenciloxí-6- hidroxiciclohexil)tiourea ((+)-18d).

[a] ¿ ⁵ +7.7 (c 1 .0, CHCI ₃ ); IR (film): υ=3308, 3090, 3064, 3032, 2925, 2854, 1534, 1098, 1068, 696 cm ^"1 . HRMS calculado para 851 .5397 [M+H] ⁺ . Encontrado: 851 .5397.

Una mezcla de 1 -((1 fí,2S,3S,4fí,5fl,6S)-2-amino-3,4,5,6- tetrabenciloxiciclohexil)-3-noniltiourea (23c) y 1 -((1 S,2fí,3S,4fí,5fí,6S)-2-amino- 3,4,5, 6-tetrabenciloxíciclohexíl)-3-noniltiourea (24c).

HRMS calculado para C ₄₄ H ₅₈ N ₃ 0 ₄ S: 724.4148 [M+H] ⁺ . Encontrado: 724.4127. Una mezcla de 1 -((1 fí,2S,3S,4ft,5fí,6S)-2-amino-3,4,5,6- tetrabenciloxiciclohexil)-3-(3-fenilpropil)tiourea (23e) y S,2fí,3S,4fí,5fí,6S)- 2-amino-3,4,5,6-tetrabenciloxiciclohexil)-3-(3-fenilpropil)t iourea (24e).

HRMS calculado para C ₄₄ H ₅ oN ₃ 0 ₄ S: 716.3522 [M+H] ⁺ . Encontrado: 716.3539.

Preparación de 1 -octil-3-({1 flS,2S^3fíS,4ftS,5Sfí,6fíS)-2,3,4,5-tetrabenciloxi- 6-hídroxicíclohexil)urea ((±)-26).

A una disolución del aminoalcohol (±)-6 (1 15 mg, 0.21 mmol) en diclorometano {4 mL), se añade octilisocianato (73 μΙ_, 0.41 mmol). La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante 6 h y se elimina el disolvente a presión reducida. Se obtiene un aceite que se purifica por cromatografía en columna utilizando una mezcla de hexano/acetato de etilo de polaridad creciente como eluyente (de 2:1 a 1 :1 ).

IR (film): υ=3332, 3085, 3063, 3029, 2925, 2854, 1653, 1629, 1585, 1454, 1067, 1049, 695 cm ^"1 ; ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CDCI ₃ ): 0.88 (t, 3H, J=7.0 Hz), 1 .19-1.34 (m, 12H), 2.82-2.90 (m, 1 H), 2.99-3.05 (m, 1 H), 3.33-3.38 (m, 2H), 3.45-3.53 (m, 3H), 3.62 (t, 1 H, J=8.6 Hz), 4.59-4.97 (m, 8H), 7.23-7.36 (m, 20H); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI ₃ ): 14.3, 22.8, 27.0, 29.39, 29.44, 30.0, 32.0, 40.7, 57.1 , 74.1 , 75.2, 75.7, 75.9, 76.0, 80.9, 82.6, 83.7, 83.9, 127.8-128.8, 138.1 , 138.4, 138.6, 138.8, 160.5. HRMS calculado para C ₄₃ H5 ₅ N ₂ 0 ₆ : 695.4060 [M+H] ⁺ . Encontrado: 695.4044.

Método general para la preparación de las isoureas bicíclicas 19-22 y 25.

A una disolución de la tiourea (0.20 mmol) en tolueno se añadió óxido de mercurio (131 mg, 0.60 mmol, 3 equív). La mezcla de reacción se calentó a 1 15 ^e C durante 24 h bajo atmósfera de argón. Se controló la reacción por CCF y, si todavía quedaba producto de partida, se añadió HgO (3 equiv) y se calentó de nuevo la mezcla de reacción a 1 15 ⁹ C durante 24h. Pasado este tiempo, se dejó enfriar la reacción hasta temperatura ambiente, se filtró sobre Celíte y ésta se lavó varias veces con diclorometano. Se eliminaron los disolventes a presión reducida y el residuo resultante se purificó por cromatografía en columna utilizando una mezcla de hexano y acetato de etilo de polaridad creciente como eluyente.

/V-((3aS ?,4S ?,5fíS _s 6Sfí,7S/?,7afíS)-4,5 _s 6,7-tetrabenciloxi- hexahidrobenzo[í¾oxazol-2{3H)-ilideno)hexan-1 -amina ((±)-19a).

IR (film): υ=3305, 3090, 3061 , 3032, 2925, 2855, 1717, 1654, 1455, 1362, 1274, 1097, 1067, 1027, 697 cm ^"1 ; ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CDCI ₃ ): 0.91 (t, 3H, J=6.9 Hz, CH ₃ ), 1 .19-1 .38 (m, 6H, 3xCH ₂ ), 1 .55-1 .63 (m, 2H, CH ₂ ), 3.21 -3.30 (m, 2H, HCH ₂ ), 3.51 (dd, 1 H, J=10.5, 12.2 Hz, H-3a), 3.63-3.74 (m, 3H, H-4, H5, H-6), 3.84 (dd, 1 H, J=12.2, 10.3 Hz, H-7a), 3.91 -3.96 (m, 1 H, H-7), 4.70- 4.95 (m, 7H, PhCH^O), 5.14 (d, 1 H, J=1 1 .5 Hz, PhC^O), 7.21 -7.47 (m, 20H, Ph); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI ₃ ): 14.2 (CH ₃ ), 22.7 (CH ₂ ), 26.6 (CH ₂ ), 30.0 (CH ₂ ), 31 .6 (CH ₂ ), 43.1 (NCH ₂ ), 68.0 (C3a), 73.1 (2xPhCH ₂ 0), 76.1 (PhCH ₂ 0), 76.2 (PhCH ₂ 0), 80.6 (C7), 81 .4 (C4), 83.5 (C7a), 84.9 (C6 o C5), 85.8 (C6 o C5), 127.5-128.5 (CHar), 138.3 (Car), 138.5 (Car), 138.6 (Car), 138.9 (Car), 163.0 (C2). HRMS calculado para C ₄ i H ₄₉ N ₂ 0 ₅ : 649.3641 [M+H] ⁺ . Encontrado: 649.3648.

^-((SaSfí^Sfí^fíS^SfíJSfíJa^^^^J-tetrabenciloxi- hexahidrobenzo[Gdoxazol-2(3H)-¡l¡deno)nonan-1 -amina ((±)-19c).

IR (film): υ=3327, 3089, 3063, 3030, 2925, 2855, 1715, 1653, 1454, 1357, 1274, 1066, 1028, 697 cm ^"1 ; H RMN (δ, 500 MHz, CDCI ₃ ): 0.91 (t, 3H, J=6.9 Hz, CH ₃ ), 1 .25-1 .39 (m, 12H, 6xCH ₂ ), 1 .55-1 .63 (m, 2H, CH ₂ ), 3.23-3.32 (m, 2H, HCH ₂ ), 3.51 (dd, 1 H, J=10.5, 12.2 Hz, C-3a), 3.63-3.74 (m, 3H, H-4, H-5, H-6), 3.84 (dd, 1 H, J=12.2, 10.3 Hz, H-7a), 3.91 -3.96 (m, 1 H, H-7), 4.72-4.96 (m, 7H, PhCZ-^O), 5.15 (d, 1 H, J=1 1 .8 Hz, PhCH¿0), 7.21 -7.47 (m, 20H, Ph); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI ₃ ): 14.3 (CH ₃ ), 22.8 (CH ₂ ), 26.9 (CH ₂ ), 29.40 (CH ₂ ), 29.43 (CH ₂ ), 29.7 (CH ₂ ), 30.0 (CH ₂ ), 32.0 (CH ₂ ), 43.2 (CH ₂ ), 67.6 (C3a), 73.1 (PhCH ₂ 0), 73.2 (PhCH ₂ 0), 76.0 (PhCH ₂ 0), 76.1 (PhCH ₂ 0), 80.5 (C7), 81 .3 (C4), 83.7 (C7a), 84.7 (C5 o C6), 85.6 (C5 o C6), 127.6-128.5 (CHar), 138.2 (Car), 138.4 (Car), 138.5 (Car), 138.8 (Car), 163.0 (C2). HRMS calculado para C ₄₄ H ₅₅ N ₂ 0 ₅ : 691 .41 1 1 [M+ H] ⁺ . Encontrado: 691 .4122. /V-((3aS,4S ₎ 5/ ^: ?,6S,7S,7a/ ^: ?)-4,5,6,7-tetrabenciloxi-hexahidrobenzo[cloxazol- 2{3f/)-ilideno)nonan-1 -amina 9c).

[a]¾ ⁵ -4.6 (c 1.0, CHCI3). Los datos espectroscópicos de IR y RMN son idénticos a los de (±)-19c. HRMS calculado para C ₄₄ H ₅ 5N20 ₅ : 691.4111 [M+ H] ⁺ . Encontrado: 691.4127.

W-((3aS,4S,5f?,6S,7S,7a/ ^: )-4,5,6,7-tetrabenciloxi-3-nonil- hexahidrobenzo[d]oxazol-2(3H)-il¡deno)nonan-1 -amina 9d).

[a] ¿ ⁵ -19.6 (c 1.0, CHCI3); IR (film): υ=3089, 3066, 3030, 2924, 2854, 1708, 1454, 1356, 1066, 696 cm ^'1 ; ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CDCI3): 0.90 (dt, 6H, J=6.7, 7.1 Hz), 1.25-1.39 (m, 24H), 1.42-1.67 (m, 4H), 3.05-3.15 (m, 1H), 3.17-3.30 (m, 3H), 3.31-3.46 (m, 1H), 3.64-3.80 (m, 3H), 3.82-3.93 (m, 2H), 4.61-5.00 (m, 8H), 7.21-7.46 (m, 20H); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI3): 14.2, 22.82, 22.83, 25.9, 27.1, 27.7, 29.4, 29.5, 29.73, 29.75, 29.8, 29.9, 32.06, 32.1, 45.8, 46.7, 59.5, 73.4, 74.3, 75.59, 75.64, 78.7, 80.5, 82.2, 84.0, 85.6, 127.5-128.6, 138.0, 138.2 (2), 138.4, 154.5. HRMS calculado para C53H73N2O5: 817.5519 [M+ H] ⁺ . Encontrado: 817.5547.

W-((3afíS,4Sfí,5ñS,6S/ ^: ?,7Sñ,7aSfí)-4,5,6,7-tetrabenciloxi- hexahidrobenzo[<¾oxazol-2{3H)-ilideno)nonan-1 -amina ((±)-20c).

IR (film): υ=3330, 3082, 3064, 3024, 2926, 2854, 1670, 1559, 1087, 1067, 1027, 696 cm ^"1 ; ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CDCI3): 0.90 (t, 3H, J=6.8 Hz), 1.16-1.41 (m, 12H), 1.51-1.61 (m, 2H), 3.20-3.30 (m, 2H), 3.78-3.81 (m, 1H), 3.86-3.88 (m, 1H), 4.26-4.28 (m, 1H), 4.34-4.50 (m, 6H), 4.63 (d, 2H, J=12.2 Hz), 4.72 (d, 1H, J=12.1 Hz), 4.82 (d, 1H, J=13.2 Hz), 4.90 (d, 1H, =12.1 Hz), 7.15-7.43 (m, 20H); ³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI3): 14.3, 22.8, 26.9, 29.40, 29.45, 29.6, 29.9, 32.0, 43.0, 61.0, 72.2, 72.3, 72.4, 75.4, 77.0, 77.4, 78.2, 79.5, 127.4-128.5, 137.8, 138.0, 138.4, 138.9, 161.5. HRMS calculado para C4 ₄ H55N2O5: 691.4111 [M+H] ⁺ . Encontrado: 691.4136.

A/-((3afí,4S,5fí,6S,7S,7aS)-4,5,6,7-tetrabenciloxi-hexa hidrobenzo[cíjoxazol- 2(3H)-ilideno)nonan-1 -amina ((+)-20c). [α] ^ +4.8 (c 1 .0, CHC ); Los datos espectroscopios de IR y RMN son idénticos a los de (±)-20c. HRMS calculado para C ₄₄ H ₅₅ N ₂ 0 ₅ : 691 .41 1 1 [M+H] ⁺ . Encontrado: 691 .4091 . ^-((Safí^S^fí.eSJSJa^^^^J-tetrabenciloxÍ-S-nonil- hexahidrobenzo[d]oxazol-2(3 -/)-ilideno)nonan-1 -amina ((+)-20d).

[a] ^« +14.3 (c 1 .0, CHCI ₃ ); IR (film): υ=3082, 3065, 3029, 2925, 2854, 1709,

1455, 1087, 1065, 1027, 696 cm ^" ; H RMN (δ, 500 MHz, CDCI3): 0.81 -0.95 (m, 6H), 1 .16-1 .39 (m, 24H), 1.45-1 .61 (m, 4H), 2.96-3.07 (m, 1 H), 3.13-3.33 {m, 3H), 3.80-3.87 (m, 2H), 3.92-3.98 (m, 1 H), 3.99-4.08 (m, 1 H), 4.19-4.24 (m, 1 H), 4.31 -4.82 (m, 9H), 7.15-7.39 {m, 20H); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI ₃ ): 14.2, 22.8, 26.7, 27.3, 27.7, 29.46, 29.51 , 29.69, 29.72, 29.82, 29.84, 32.06, 32.09, 44.7, 46.6, 56.0, 72.0, 72.40, 72.43, 72.9, 74.5, 75.3, 75.5, 77.8, 127.7- 128.6, 137.8, 138.0, 138.6, 161 .5. HRMS calculado para C53H73N2O5: 817.5519 [M+H] ⁺ . Encontrado: 817.5546.

N-{{3aRSASR,5RS,6SR,7SR,7aRS)-4,5,6,7-tetrabenc\\ox\- hexahídrobenzo[d]oxazol-2(3H)-ilideno)hexan-1 -amina ((±)-21a).

IR (film): υ=3330, 3064, 3031 , 2924, 2854, 1670, 1560, 1087, 1069, 1027, 696 cm ^"1 ; ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CDCI ₃ ): 0.89 (t, 3H, ¿=7.0 Hz, CH ₃ ), 1 .21 -1 .38 (m, 6H, 3xCH ₂ ), 1 .46-1 .51 (m, 2H, CH ₂ ), 3.23 (t, 2H, ¿=7.1 Hz, NCH ₂ ), 3.57 (dd, 1 H, ¿=4.5, 10.5 Hz, H-4), 3.78-3.84 (m, 2H, H-5, H-6), 4.30 (dd, 1 H, ¿=7.0, 10.4 Hz, H-7), 4.32 (dd, 1 H, ¿=2.9, 8.9 Hz, H-3a), 4.40-4.50 (m, 2H, PhCWsO), 4.57 (dd, 1 H, ¿=7.2, 9.0 Hz, H-7a), 4.60-4.85 (m, 6H, 3xPhCH _í O), 7.25-7.41 (m, 20H, Ph); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI ₃ ): 14.2 (CH ₃ ), 22.7 (CH ₂ ), 26.5 (CH ₂ ), 29.8 (CH ₂ ), 31 .5 (CH ₂ ), 43.1 (NCH ₂ ), 62.3 (C3a), 72.2 (PhCH ₂ 0), 73.4 (PhCH ₂ 0), 73.7 (PhCH ₂ 0), 74.1 (PhCH ₂ 0), 76.4 (C5 o C6), 79.9 (C7), 81 .7 (C5 o C6), 82.3 (C4), 84.1 (C7a), 127.7-128.6 (CHar), 137.7 (Car), 138.3 (Car), 138.5 (Car), 138.6 (Car), 161 .8 (C2). HRMS calculado para C ₄₁ H ₄₉ N ₂ 0 ₅ : 649.3641 [M+H] ⁺ . Encontrado: 641 .3640. N-{{3aRSASR,5RS,6SR,7SR,7aRS)-4,5,6 -tetrabenc \ox\- hexahídrobenzo[c ]oxazol-2(3H)-ílideno)octan-1 -amina ((±)-21 b).

IR (film): υ=3330, 3082, 3064, 3031 , 2925, 2855, 1669, 1560, 1087, 1068, 1027, 696 cnr ¹ ; ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CDCI ₃ ): 0.89 (t, 3H, ¿=6.9 Hz, CH ₃ ), 1 .21 -1.39 (m, 10H, 5xCH ₂ ), 1 .49-1 .57 (m, 2H, CH ₂ ), 3.23 (t, 2H, ¿=7.1 Hz, CH ₂ ), 3.57 (dd, 1 H, ¿=4.5, 10.5 Hz, H-4), 3.76-3.84 (m, 2H, H-5, H-6), 4.30 (dd, 1 H, ¿=7.1 , 10.5 Hz, H-7), 4.32 (dd, 1 H, ¿=2.6, 9.1 Hz, H-3a), 4.40-4.50 (m, 2H, PhCHiO), 4.58 (dd, 1 H, ¿=7.6, 8.7 Hz, H-7a), 4.60-4.85 (m, 6H, 3xPhCH ₂ 0), 7.20-7.41 (m, 20H, Ph); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI ₃ ): 14.2 (CH ₃ ), 22.8 (CH ₂ ), 26.6 (CH ₂ ), 29.2 (CH ₂ ), 29.26 (CH ₂ ), 29.32 (CH ₂ ), 31 .9 (CH ₂ ), 43.1 (NCH ₂ ), 58.8 (C3a), 72.3 (PhCH ₂ 0), 73.5 (PhCH ₂ 0), 74.0 (PhCH ₂ 0), 74.1 (PhCH ₂ 0), 75.6 (C5 o C6), 78.8 (C7), 80.6 (C5 o C6), 81 .8 (C4), 85.4 (C7a), 127.9-128.7 (CHar), 137.3 (Car), 137.5 (Car), 138.1 (2xCar), 161 .9 (C2). HRMS calculado para C ₄₃ H53N ₂ 0 ₅ : 677.3954 [M+H] ⁺ . Encontrado: 677.401 1 .

/V-((3afíS,4Sfí,5fíS,6Sfí,7Sfí,7afíS)-4,5,6,7-tetra benciloxí- hexahidrobenzo[d]oxazol-2(3H)-ilideno)nonan-1 -amina ((±)-21c).

IR (film): υ=3330, 3082, 3064, 3024, 2924, 2854, 1670, 1560, 1087, 1068, 1027, 696 ατϊ ¹ ; Η RMN (δ, 500 MHz, CDCI ₃ ): 0.90 (t, 3H, ¿=6.9 Hz, CH ₃ ), 1 .19-1.39 (m, 12H, 6xCH ₂ ), 1 .48-1 .57 (m, 2H, CH ₂ ), 3.23 (t, 2H, ¿=7.1 Hz, HCH ₂ ), 3.57 (dd, 1 H, ¿=4.5,10.5 Hz, H-4), 3.78-3.85 (m, 2H, H-5, H-6), 4.31 (dd, 1 H, ¿=7.0, 10.4 Hz, H-7), 4.33 (dd, 1 H, ¿=2.2, 8.4 Hz, H-3a), 4.40-4.51 (m, 2H, PhCH¿0), 4.58 (dd, 1 H, ¿=7.6, 8.7 Hz, H-7a), 4.60-4.84 (m, 6H, 3xPhCH ₂ 0), 7.21 -7.43 (m, 20H, Ph); ¹³ C RMN (δ, 75 MHz, CDCI3): 14.2 (CH ₃ ), 22.8 (CH ₂ ), 27.0 (CH ₂ ), 29.4 (CH ₂ ), 29.5 (CH ₂ ), 29.7 (CH ₂ ), 30.0 (CH ₂ ), 32.0 (CH ₂ ), 43.3 (NCH ₂ ), 64.2 (C3a), 72.2 (PhCH ₂ 0), 73.3 (PhCH ₂ 0), 73.6 (PhCH ₂ 0), 74.1 (PhCH ₂ 0), 75.6 (C5 o C6) 80.4 (C7), 82.1 (C5 o C6), 82.5 (C4), 83.7 (C7a), 127.6-128.6 (CHar), 137.9 (Car), 138.68 (Car), 138.72 (Car), 138.9 (Car), 161 .5 (C2). HRMS calculado para C ₄₄ H ₅₅ N ₂ 0 ₅ : 691 .41 1 1 [M+H] ⁺ . Encontrado: 691 .41 14. /V-((3añ,4S,5ñ,6S,7S,7añ)-4,5,6,7-tetrabenciloxi-hexahidr obenzo[d]oxazol- 2{3H)-ilideno)nonan-1 -amina ((-)-21 c).

[α] -17.7 (c 1 .0, CHCI ₃ ). Los datos espectroscópicos de IR y RMN son idénticos a los de (±)-21c. HRMS calculado para C ₄₄ H ₅₅ N ₂ 0 ₅ : 691 .41 1 1 [M+H] ⁺ . Encontrado: 691 .41 17.

W-((3a ?,4S,5fí,6S ₅ 7S,7afl)-4,5,6,7-tetrabenciloxi-3-nonil- hexahídrobenzo[d]oxazol-2(3H)-il¡deno)nonan-1 -amina ((-)-21 d).

[a] ¿ ⁵ -25.3 (c 1 .0, CHCI ₃ ); IR (film): υ=3087, 3061 , 3030, 2925, 2852, 1706, 1452, 1359, 1068, 696 cm ^"1 ; ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CDCI ₃ ): 0.87-0.94 (m, 6H), 1 .14-1.38 (m, 24H), 1.43-1 .60 (m, 4H), 1 .97-2.1 1 (m, 1 H), 2.68-2.81 (m, 1 H), 3.24 (t, 2H, J=7.2 Hz), 3.62 (dd, 1 H, J=10.4, 4.9 Hz), 3.68 (t, 1 H, J=2.9 Hz), 3.91 (dd, 1 H, J=3.2, 4.5 Hz), 3.93-4.02 (m, 1 H), 4.19-4.28 (m, 1 H), 4.38-4.88 (m, 9H), 7.21 -7.43 (m, 20H); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI3): 14.2, 22.82, 27.5, 29.4, 29.4, 29.5, 29.7, 29.8, 29.8, 32.0, 32.1 , 43.3, 46.0, 56.5, 72.5, 73.0, 74.0, 74.4, 77.3, 80.2, 82.0, 127.8-128.7, 137.8, 138.4, 153.2. HRMS calculado para C53H73N2O5: 817.5519 [M+H] ⁺ . Encontrado: 817.5555.

W-((3aSfí,4Sfí,5ñS,6S/ ^: ?,7Sñ,7aSfí)-4,5,6,7-tetrabenciloxi- hexahidrobenzo[í¾oxazol-2(3H)-ilideno)hexan-1 -amina ((±)-22a).

IR (film): υ=3337, 3082, 3061 , 3028, 2926, 2856, 1718, 1671 , 1455, 1094, 1069, 1024, 697 cm ^"1 ; ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CDCI3): 0.86 (t, 3H, J=6.9 Hz, CH ₃ ), 1 .20-1 .34 (m, 6H, 3xCH ₂ ), 1 .43-1 .52 (m, 2H, CH ₂ ), 3.14 (t, 2H, J=7.2 Hz, HCH ₂ ), 3.74 (t, 1 H, J=5.2 Hz, H-5), 3.88 (t, 1 H, J=5.0 Hz, H-4), 3.90 (dd, 1 H, J=4.8, 8.2 Hz, H-6), 4.02 (dd, 1 H, J=3.4, 8.1 Hz, H-7), 4.23 (dd, 1 H, J=4.5, 8.7 Hz, H-3a), 4.53-4.82 (m, 9H, H-7a, 4xPhCH ₂ 0), 7.25-7.41 (m, 20H, Ph); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI3): 14.2 (CH ₃ ), 22.7 (CH ₂ ), 26.5 (CH ₂ ), 29.7 (CH ₂ ), 31 .6 (CH ₂ ), 43.1 (NCH ₂ ), 67.1 (C3a), 72.7 (PhCH ₂ 0), 72.8 (PhCH ₂ 0), 73.3 (PhCH ₂ 0), 73.7 (PhCH ₂ 0), 77.1 (C7), 78.8 (C7a), 79.6 (C4), 81 .0 (C6), 82.5 (C5), 127.6-128.5 (CHar), 138.3 (2xCar), 138.6 (2xCar), 160.9 (C2). HRMS calculado para C ₄ i H ₄₉ N ₂ 0 ₅ : 649.3641 [M+H] ⁺ . Encontrado: 649.3670. N-{{3aSRASR,5RS,6SR,7SR,7aSR)-4,5,6 -tetrabenc \ox\- hexahídrobenzo[c ]oxazol-2(3H)-ílideno)octan-1 -amina ((±)-22b).

IR (film): υ=3330, 3088, 3063, 3030, 2926, 2855, 1719, 1672, 1454, 1093, 1069, 1028, 697 cnV ¹ ; ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CDCI ₃ ): 0.89 (t, 3H, J=7.0 Hz, CH ₃ ), 1 .19-1 .35 (m, 10H, 5xCH ₂ ), 1 .43-1 .51 (m, 2H, CH ₂ ), 3.14 (t, 2H, J=7.1 Hz, CH ₂ ), 3.73 (t, 1 H, J=5.2 Hz, H-5), 3.88 (t, 1 H, J=5.0 Hz, H-4), 3.90 {dd, 1 H, J=5.0, 8.3 Hz, H-6), 4.01 (dd, 1 H, J=3.4, 8.2 Hz, H-7), 4.23 (dd, 1 H, J=4.6, 8.7 Hz, H-3a), 4.53-4.83 (m, 9H, H-7a, 4xPhCH≤0), 7.25-7.37 (m, 20H, Ph); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI ₃ ): 14.2 (CH ₃ ), 22.8 (CH ₂ ), 26.9 (CH ₂ ), 29.4 (2xCH ₂ ), 29.8 (CH ₂ ), 31 .9 (CH ₂ ), 43.1 (NCH ₂ ), 67.2 (C3a), 72.7 (PhCH ₂ 0), 72.8 (PhCH ₂ 0), 73.3 (PhCH ₂ 0), 73.8 (PhCH ₂ 0), 77.1 (C7), 78.7 (C7a), 79.7 (C4), 81 .0 (C6), 82.5 (C5), 127.6-128.5 (CHar), 138.3 (Car), 138.58 (Car), 138.60 (Car), 160.9 (Car). HRMS calculado para C ₄₃ H53N ₂ 0 ₅ : 677.3954 [M+H] ⁺ . Encontrado: 677.3946.

/V-((3aSfí,4Sfí,5fíS,6Sfí,7Sfí,7aSfí)-4,5,6,7-tetra benciloxí- hexahidrobenzo[d]oxazol-2(3H)-ilideno)nonan-1 -amina ((±)-22c).

IR (film): υ=3330, 3086, 3063, 3030, 2926, 2854, 1718, 1671 , 1454, 1092, 1069, 1028, 696 cnf ¹ ; H RMN (δ, 500 MHz, CDCI ₃ ): 0.89 (t, 3H, J=7.0 Hz, CH ₃ ), 1 .20-1 .34 (m, 12H, 6xCH ₂ ), 1 .41 -1 .51 (m, 2H, CH ₂ ), 3.14 (t, 2H, J=7.2 Hz, HCH ₂ ), 3.73 (t, 1 H, J=5.2 Hz, H-5), 3.87 (t, 1 H, J=5.0 Hz, H-4), 3.89 (dd, 1 H, J=4.9, 8.2 Hz, H-6), 4.01 (dd, 1 H, J=3.4, 8.2 Hz, H-7), 4.22 (dd, 1 H, J=4.6, 8.7 Hz, H-3a), 4.52-4.82 (m, 9H, H-7a, 4xPhCH¿0), 7.25-7.41 (m, 20H, Ph); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI ₃ ): 14.2 (CH ₃ ), 22.8 (CH ₂ ), 26.9 (CH ₂ ), 29.37 (CH ₂ ), 29.40 (CH ₂ ), 29.6 (CH ₂ ), 29.8 (CH ₂ ), 32.0 (CH ₂ ), 43.1 (NCH ₂ ), 67.3 (C3a), 72.7 (PhCH ₂ 0), 72.8 (PhCH ₂ 0), 73.2 (PhCH ₂ 0), 73.7 (PhCH ₂ 0), 77.1 (C7), 78.7 (C7a), 79.7 (C4), 81 .0 (C6), 82.5 (C5), 127.6-128.5 (CHar), 138.3 (Car), 138.57 (Car), 138.59 (Car), 160.8 (C2). HRMS calculado para C^Hss^Os: 691 .4 1 [M+H] ⁺ . Encontrado: 691 .4120.

W-((3aS,4S,5f?,6S,7S,7aS)-4,5,6,7-tetrabenciloxi-hexahidr obenzo[^oxazol- 2(3H)-ilideno)nonan-1 -amina ((-)-22c). [α] -2.4 (c0.8, CHCI3). Los datos espectroscópicos de IR y RMN son idénticos a ios de (±)-22c. HRMS calculado para C ₄₄ H ₅ 5N20 ₅ : 691.4111 [M+H] ⁺ . Encontrado: 691.4140.

/V-((3aS,4S,5ñ,6S,7S,7aS)-4,5,6,7-tetrabenciloxi-3-non¡l- hexahidrobenzo[<¾oxazol-2(3H)-ilideno)nonan-1 -amina ((-)-22d).

[a] ^« -10.5 (c 1.0, CHCI ₃ ); IR (film): 3063, 3030, 2924, 2854, 1708, 1454, 1359, 1068, 696 crn ¹ ; ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CDCI ₃ ): 0.87-0.94 (m, 6H), 1.04-1.38 (m, 24H), 1.41-1.61 (m, 4H), 3.00-3.11 (m, 1H), 3.24-3.32 (m, 2H), 3.48-3.60 (m, 1H), 3.63 (dd, 1H, J=6.0, 7.6 Hz), 3.73-3.82 (m, 1H), 3.87 (t, 1H, J=5.8 Hz), 3.89-3.97 (m, 2H), 4.55-5.01 (m, 9H), 7.21-7.43 (m, 20H); ³ C RMN <δ, 100 MHz, CDCI ₃ ): 14.2, 22.82, 22.84, 26.8, 27.0, 29.4, 29.5, 29.67, 29.74, 29.8, 29.9, 32.06, 32.1, 43.9, 46.7, 58.9, 73.1, 73.6, 74.0, 74.1, 77.4, 80.1, 81.0, 83.5, 127.7-128.6, 138.2, 138.3, 153.2. HRMS calculado para

817.5519 [M+H] ⁺ . Encontrado: 817.5549.

A/-((3afí,4S,5fí,6/ ^: ?,7S,7aS)-4,5,6,7-tetrabenciloxi-hexahídro-1H- benzo[dpmidazol-2(3f/)-ilideno)nonan-1 -amina ((-) ^« 25c).

[a] £-21.7 (c 1.0, CHCI ₃ ); IR (film): υ=3330, 3082, 3064, 3030, 2925, 2855, 1682, 1454, 1088, 1068, 1028, 696 crn ^-1 ; ¹ H RMN {δ, 400 MHz, CDCI ₃ ): 0.88 (t, 3H, J=6.8 Hz), 1.17-1.36 (m, 12H), 1.41-1.52 (m, 2H), 3.01 (t, 2H, J=6.9 Hz), 3.56 (t, 1H, J=7.2 Hz), 3.75-3.86 {m, 4H), 4.11 (dd, 1H, J=3.8, 7.7 Hz), 4.62- 4.83 (m, 8H), 7.18-7.39 (m, 20H); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI ₃ ): 14.2, 27.8, 27.1, 29.4, 29.5, 29.7, 30.2, 32.0, 43.3, 59.9, 62.8, 73.3, 73.7, 73.9, 74.0, 77.4, 78.3, 81.7, 82.0, 83.6, 127.6-128.5, 138.66, 138.75, 138.8, 139.1, 160.7. HRMS calculado para C ₄ 4H ₅ 6N ₃ 0 ₄ : 690.4271 [M+H] ⁺ . Encontrado: 690.4284.

3-fenil-N-((3añ,4S,5ñ,6ñ,7S,7aS)-4,5,6,7-tetrabencilox i-hexahidro-1H- benzo[cdímidazol-2(3f/)-ilideno)propan-1 -amina ((-)-25e).

[a] £-16.4 (c 1.0, CHCI ₃ ); IR (film): υ=3330, 3082, 3069, 3030, 2924, 2853, 1682, 1454, 1088, 1069, 1027, 696crn ¹ ; ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CDCI ₃ ): 1.83 (p, 2H, J=7.2 Hz), 2.64 (t, 2H, J=7.7 Hz), 2.94-3.10 (m, 2H), 3.59 (t, 1H, J=6.9 Hz), 3.74-3.91 (m, 4H), 4.13 (d, 1H, J=5.2 Hz), 4.62-4.83 (m, 8H), 7.13-7.41 (m, 25H); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI ₃ ): 31 .5, 33.2, 42.7, 59.1 , 62.0, 73.4, 73.8, 73.9, 77.4, 78.0, 81 .4, 81.6, 83.4, 126.0, 127.6-128.5, 138.5, 138.6, 138.7, 139.0, 141 .6, 160.2. HRMS calculado para C ₄₄ H ₄ 8N ₃ 0 ₄ : 682.3645 [M+H] ⁺ . Encontrado: 682.3633.

N-{{3aSRASR,5RS,6SR,7SR,7aRS)-4,5,6,7- .etrabenc\\ox\- hexahídrobenzo[d]oxazol-2(3H)-il¡deno)octan-1 -amina ((±)-19b).

A una disolución de (+)-26 (130 mg, 0.19 mmol) en diclorometano (3 mL) a -40 ⁹ C bajo atmósfera de argón, se añadieron pirídína (60 μί, 0.74 mmol) y anhídrido tríflico (42 μΙ_, 0.25 mmol). La mezcla resultante se agitó a -40 ^e C durante 1 h, se diluyó con diclorometano (15 mL), se lavó con aHC0 ₃ (15 mL). La fase acuosa resultante se extrae con diclorometano (3 x 15 mL). Los extractos combinados se lavan con una disolución saturada de cloruro de sodio, se secan sobre sulfato de magnesio y se eliminan los disolventes a presión reducida. El crudo obtenido se purifica mediante cromatografía en columna utilizando como eluyente mezclas de hexano/acetato de etilo de polaridad creciente (de 10:1 a 1 :1 ).

IR (film): υ=3318, 3089, 3063, 3031 , 2924, 2854, 1707, 1654, 1454, 1357, 1065, 1027, 696 cm ^"1 ; ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CDCI ₃ ): 0.90 (t, 3H, J=6.9 Hz, CH ₃ ), 1 .17-1 .42 (m, 10H, 5xCH ₂ ), 1 .51 -1 .63 (m, 2H, CH ₂ ), 3.21 -3.30 (m, 2H, NCH ₂ ), 3.51 (dd, 1 H, J=10.5, 12.2 Hz, H-3a), 3.62-3.73 (m, 3H, H-4, H-5, H-6), 3.84 (dd, 1 H, J=12.2, 10.3 Hz, H-7a), 3.90-3.96 (m, 1 H, H-7), 4.71 -4.96 (m, 7H, PhCH¿0), 5.15 (d, 1 H, J=1 1.6 Hz, PhCH¿0), 7.21 -7.47 (m, 20H, Ph); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CDCI ₃ ): 14.2 (CH ₃ ), 22.8 (CH ₂ ), 27.0 (CH ₂ ), 29.37 (CH ₂ ), 29.43 (CH ₂ ), 30.2 (CH ₂ ), 32.0 (CH ₂ ), 43.3 (NCH ₂ ), 68.3 (C3a), 73.09 (PhCH ₂ 0), 73.14 (PhCH ₂ 0), 75.9 (PhCH ₂ 0), 76.0 (PhCH ₂ 0), 80.9 (C7), 81 .7 (C4), 83.7 (C7a), 85.0 (C6 o C5), 85.9 (C6 o C5), 127.5-128.5 (CHar), 138.5 (Car), 138.8 (Car), 138.9 (Car), 139.2 (Car), 162.9 (C2). HRMS calculado para C ₄₃ H ₅₃ N ₂ 0 ₅ : 677.3954 [M+ H] ⁺ . Encontrado: 677.3924. Método general para las reacciones de Q-desbencilación por hidroqenólisis: Síntesis de 1a-c

Una disolución de las isoureas 1a-c (0.12 mmol) en etanol (3 mL) se hidrogenó {2 atm) y 60 ^Q C en presencia de Pd(OH) ₂ al 20% (65 mg) durante 18 h. Pasado este tiempo la mezcla de reacción se filtró a través de Celite y ésta se lavó varias veces con metanol. Se eliminaron los disolventes a presión reducida obteniéndose los productos deseados.

(3aSfí,4Sfí,5fíS,6Sfí,7/ ^: ?S,7afíS)-2-(hexilimino)-octahidrobenzo[cíjoxazole- 4,5,6,7-tetraol ((±)-1a).

¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.91 (t, 3H, J=6.9 Hz), 1 .26-1 .41 (m, 6H), 1.48- 1 .58 (m, 2H), 3.10-3.16 (m, 2H), 3.20-3.32 (m, 3H), 3.42-3.46 (m, 1 H), 3.62 (dd, 1 H, J=10.3, 12.3 Hz), 3.72-3.76 (m, 1 H); ¹ H RMN (δ, 500 MHz, D ₂ 0): 0.79-0.90 (m, 3H, CH ₃ ), 1 .20-1.38 (m, 6H, 3 CH ₂ ), 1 .51 -1 .64 (m, 2H, CH ₂ ), 3.24-3.49 (m, 4H, CH ₂ , H-5, H-6), 3.71 -3.82 (m, 2H, H-4, H-3), 3.96-4.06 (m, 1 H, H-7), 4.28- 4.43 (m, 1 H, H-7a); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.4 (CH ₃ ), 23.7 (CH ₂ ), 27.6 (CH ₂ ), 30.6 (CH ₂ ), 32.7 (CH ₂ ), 43.6 (NCH ₂ ), 68.6 (C3a), 73.8 (C7), 74.8 (C4), 79.0 (C5 o C6), 80.1 (C5 o C6), 84.6 (C7a), 165.4 (C2). HRMS calculado para Ci ₃ H ₂₅ N ₂ 0 ₅ : 289.1763 [M+H] ⁺ . Encontrado: 289.1757.

(3aSfí,4Sfí,5fíS,6Sfí ₎ 7ñS,7afíS)-2-(octilimino)-octahidrobenzo[ /joxazole- 4,5,6,7-tetraol ((±)-1 b).

H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.90 (t, 3H, J=6.8 Hz, CH ₃ ), 1 .24-1 .41 (m, 10H, 5xCH ₂ ), 1 .48-1 .58 (m, 2H, CH ₂ ), 3.10-3.16 (m, 2H, CH ₂ ), 3.20-3.32 (m, 3H, H- 3a, H-5, H-6), 3.42-3.46 (m, 1 H, H-4), 3.62 (dd, 1 H, J=10.3, 12.3 Hz, H-2), 3.72- 3.76 (m, 1 H, H-7); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.5 (CH ₃ ), 23.7 (CH ₂ ), 28.0 (CH ₂ ), 30.4 (CH ₂ ), 30.5 (CH ₂ ), 30.7 (CH ₂ ), 33.0 (CH ₂ ), 43.6 (NCH ₂ ), 68.5 (C3a), 73.8 (C7), 74.8 (C4), 79.0 (C5 o C6), 80.1 (C5 o C6), 84.7 (C7a), 165.4 (C2). HRMS calculado para Ci ₅ H ₂₉ N ₂ 0 ₅ : 317.2076 [M+ H] ⁺ . Encontrado: 317.2057.

{3aSfí,4Sfí,5fíS,6Sfí,7f?S,7afíS)-2-(nonilímino)-oc tahidrobenzo[^oxazole- 4,5,6,7-tetraol ((±)-1c). ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.92 (t, 3H, J=6.9 Hz, CH ₃ ), 1 .24-1 .41 (m, 12H, 6xCH ₂ ), 1 .50-1 .60 (m, 2H, CH ₂ ), 3.15-3.19 (m, 2H, CH ₂ ), 3.20-3.36 (m, 3H, H- 3a, H-5, H-6), 3.44-3.52 (m, 1 H, H-4), 3.70-3.80 (m, 2H, H-2, H-7); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.5 (CH ₃ ), 23.7 (CH ₂ ), 27.9 (CH ₂ ), 30.4 (CH ₂ ), 30.5 (CH ₂ ), 30.6 (CH ₂ ), 30.7 (CH ₂ ), 33.1 (CH ₂ ), 43.7 (NCH ₂ ), 68.1 (C3a), 73.7 (C7), 74.6 (C4), 79.0 (C5 o C6), 80.1 (C5 o C6), 84.8 (C7a), 165.5 (C2). HRMS calculado para Ci ₆ H ₃₁ N ₂ O ₅ : 331 .2233 [M+ H] ⁺ . Encontrado: 331 .2223.

(3aS,4S,5fí,6S,7fí,7afí)-2-(nonilímino)-octahidrobenz o[d]oxazole-4,5,6,7-tetraol ((-He).

[α - 7 (c 0.5, MeOH); Los datos espectroscópicos de IR y RMN son idénticos a los de (±)-1c. HRMS calculado para C ₁₆ H ₃ iN ₂ 0 ₅ : 331 .2233 [M+H] ⁺ . Encontrado: 331 .2217. Método general para las reacciones de O-desbencilación con BC½: Síntesis de 1d, 2c,d, 27a-d, 3a-c, 28a-c, 4a-d, 5c,e

Una disolución de las ísoureas o guanidinas O-bencilados (0.12 mmol) en diclorometano anhidro (10 mL) bajo atmósfera de argón a -78 ^S C se trató con 10 equivalentes de una disolución 1 M de tricloruro de boro en n-heptano. La mezcla de reacción se deja a -78 ^Q C durante 2 h y a -40 ^e C durante 5h. A continuación, se vuelve a enfriar a -78 ⁹ C y se adicionan, gota a gota, 2 mL de metanol. Se eliminan los disolventes a presión reducida y el crudo obtenido se purifica por cromatografía en columna sobre sílica gel utilizando como eluyente una mezcla de diclorometano/metanol de polaridad creciente (de 15:1 a 8:1 ) ó se precipita en AcOEt.

(3aS,4S,5/ ^: ?,6S,7/ ^: ?,7a/ ^: ?)-3-nonil-2-(nonilimino)-octahidrobenzo[(-/joxazole- 4,5,6,7-tetraol ((-)-1d).

[a] £ -12 (c 1 .0, MeOH); ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.90 (t, 6H, J=6.5 Hz), 1 .22-1.43 (m, 24H), 1 .56-1 .81 (m, 4H), 3.35 (t, 2H, J=6.0 Hz), 3.41 (t, 2H, J=7.1 Hz), 3.51 -3.70 (m, 2H), 3.71 -3.84 (m, 2H), 3.85-3.94 (m, 1 H), 4.28 (t, 1 H, J=10.5 Hz); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.4, 23.7, 27.6, 28.1 , 30.3, 30.4, 30.57, 30.62, 33.0, 44.5, 45.7, 63.5, 72.3, 72.9, 78.2, 79.6, 85.5, 163.5. HRMS calculado para C25H ₄₉ N ₂ 0 ₅ : 457.3641 [M+ H] ⁺ . Encontrado: 457.3643.

{3afíS,4Sfí,5fíS,6Sfí,7f?S,7aSfí)-2-(nonilimino)-oct ahidrobenzo[^oxazole- 4,5,6,7-tetraol ((±)-2c).

¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.90 (t, 3H, J=6.9 Hz), 1.23-1.43 (m, 12H), 1.59-1.68 (m, 2H), 3.21-3.33 (m, 2H), 3.93-3.96 (m, 1H), 4.02-4.05 (m, 1H), 4.33-4.37 (m, 1H), 4.41-4.45 (m, 1H), 4.56 (d, 1 H, J=12.8 Hz), 5.15 (d, 1H, J=12.0 Hz); ¹ H RMN (δ, 500 MHz, D ₂ 0): 0.88 (t, 3H, J=6.9 Hz, CH ₃ ), 1.15-1.43 (m, 12H, 6xCH ₂ ), 1.57-1.71 (m, 2H, CH ₂ ), 3.27-3.47 (m, 2H, CH ₂ ), 4.02-4.06 (m, 1H, H-5), 4.11-4.15 (m, 1H, H-6), 4.42-4.48 (m, 1H, H-4), 4.52 (d, 1H, J=14.2 Hz, H-3a), 4.55-4.60 (m, 1H, H-7), 5.11 (d, 1H, J=12.9 Hz, H-7a); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.4 (CH ₃ ), 23.7 (CH ₂ ), 27.6 (CH ₂ ), 30.2 (2xCH ₂ ), 30.3 (CH ₂ ), 30.5 (CH ₂ ), 33.0 (CH ₂ ), 44.0 (NCH ₂ ), 56.7 (C3a), 71.1 (C7), 71.9 (C4), 75.3 (C5), 76.4 (C6), 84.5 (C7a), 164.4 (C2). HRMS calculado para C ₆ H ₃ iN ₂ 0 ₅ : 331.2233 [M+H] ⁺ . Encontrado: 331.2229.

(3afí,4S,5fí,6S,7fí,7aS)-2-(nonilímino)-octahidrobenz o[dloxazole-4,5,6,7-tetraol (W-2c).

[a]^+8.8 (c 1.0, MeOH); Los datos espectroscopios de IR y RMN son idénticos a los de (±)-2c. HRMS calculado para C ₆ H ₃₁ N ₂ 0 ₅ : 331.2233 [M+H] ⁺ . Encontrado: 331.2220.

(3afí,4S,5fí,6S,7fí,7aS)-3-nonil-2-(nonilímino)-octah idrobenzo[cjoxazole- 4,5,6,7-tetraol ((+)-2d).

[α] £+12.5 (c 1.0, MeOH); ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.83-0.94 (m, 6H), 1.21-1.44 (m, 24H), 1.59-1.75 (m, 4H), 3.38-3.56 (m, 4H), 3.96-4.00 (m, 1H), 4.04-4.09 {m, 1H), 4.35-4.39 (m, 1H), 4.45-4.50 (m, 1H), 4.53 (dd, 1H, J=2.2, 13.3 Hz), 5.15 (dd, 1H, J=2.3, 13.2 Hz); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.4, 23.7, 27.6, 27.8, 30.26, 30.32, 30.39, 30.44, 30.56, 30.58, 33.0, 44.1, 44.4, 59.0, 70.7, 71.1, 75.2, 76.5, 83.4, 162.6. HRMS calculado para C ₂₅ H ₄₉ N ₂ O ₅ : 457.3641 [M+H] ⁺ . Encontrado: 457.3626. (3afíS,4Sfí,5Sfí,6Sfí,7/ ^: ?S ₎ 7afíS)-4-(bencilox¡)-2-(hexilimino)- octahidrobenzo[ajoxazole-5,6,7-triol ((±)-27a).

¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.89 (t, 3H, J=6.9 Hz, CH ₃ ), 1 .19-1 .36 (m, 6H, 3xCH ₂ ), 1 .45-1 .55 (m, 2H, CH ₂ ), 3.15-3.25 (m, 2H, NCH ₂ ), 3.38 (dd, 1 H, J=5.7, 10.6 Hz, H-6), 3.66 (t, 1 H, J=3.3 Hz, H-4), 3.91 (dd, 1 H, J=3.5, 5.5 Hz, H-5), 4.09 (dd, 1 H, J=7.1 , 10.6 Hz, H-7), 4.48 (dd, 1 H, J=3.3, 8.5 Hz, H-3a), 4.56 (d, 1 H, J=1 1 .6 Hz, PhC½0), 4.81 (d, 1 H, J=1 1 .5 Hz, PhC/^O), 4.85-4.90 (m, 1 H, H-7a), 7.25-7.38 (m, 5H, Ph); ³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.3 (CH ₃ ), 23.6 (CH ₂ ), 27.3 (CH ₂ ), 32.5 (CH ₂ ), 44.0 (NCH ₂ ), 57.7 (C3a), 72.4 (C7), 73.7 (PhCH ₂ 0), 74.4 (C5), 75.9 (C6), 80.6 (C4), 87.9 (C7a), 128.6 (CHar), 128.9 (CHar), 129.5 (CHar), 139.2 (Car), 163.5 (C2). HRMS calculado para C20H31N2O5: 379.2233 [M+H] ⁺ . Encontrado: 379.2240.

(3añS,4Sfí,5ñS,6Sñ,7fíS,7añS)-2-(hexilimino)-octahi drobenzo[cloxazole- 4,5,6,7-tetraol ((±)-3a).

¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.92 (t, 3H, J=6.8 Hz, CH ₃ ), 1 .25-1 .44 (m, 6H, 3xCH ₂ ), 1 .56-1 .66 (m, 2H, CH ₂ ), 3.26-3.34 (m, 3H, NCH ₂ , H-6), 3.66 (t, 1 H, J=5.6 Hz, H-5), 3.76-3.80 (m, 1 H, H-7), 4.00-4.05 (m, 1 H, H-4), 4.42-4.43 (m, 1 H, H-3a), 4.87-4.95 (m, 1 H, H-7a); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.4 (CH ₃ ), 23.7 (CH ₂ ), 27.6 (CH ₂ ), 30.2 (CH ₂ ), 32.9 (CH ₂ ), 44.0 (NCH ₂ ), 58.7 (C3a), 71 .7 (C4), 72.9 (C6), 75.6 (C5), 76.5 (C7), 87.8 (C7a), 163.4 (C2). HRMS calculado para C ₃ H ₂₅ N ₂ 0 ₅ : 289.1763 [M+H] ⁺ . Encontrado: 289.1764.

(3af?S,4Sfí,5Sf?,6Sfí,7fíS,7a/ ^: ?S)-4-(benciloxi)-2-(octilimino)- octahidrobenzo[c joxazole-5,6,7-tríol ((±)-27b).

¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.90 (t, 3H, J=7.0 Hz, CH ₃ ), 1 .20-1 .36 (m, 10H, 5xCH ₂ ), 1 .45-1 .55 (m, 2H, CH ₂ ), 3.1 5-3.25 (m, 2H, HCH ₂ ), 3.38 (dd, 1 H, J=5.6, 10.6 Hz, H-6), 3.68 (t, 1 H, J=2.9 Hz, H-4), 3.91 (dd, 1 H, J=3.4, 5.5 Hz, H-5), 4.1 1 (dd, 1 H, J=7.1 , 10.5 Hz, H-7), 4.50 (dd, 1 H, J=2A, 8.4 Hz, H-3a), 4.56 (d, 1 H, J=1 1 .5 Hz, PhCA/gO), 4.82 (d, 1 H, J=1 1 .5 Hz, PhCH^O), 4.85-4.90 (m, 1 H, H-7a), 7.25-7.38 (m, 5H, Ph); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.4 (CH ₃ ), 23.7 (CH ₂ ), 27.6 (CH ₂ ), 30.2 (CH ₂ ), 30.3 (CH ₂ ), 32.9 (2xCH ₂ ), 44.0 (NCH ₂ ), 57.2 (C3a), 72.3 (C7), 73.7 (PhCH ₂ 0), 74.3 (C5), 75.9 (C6), 80.5 (C4), 88.2 (C7a), 128.6 (CHar), 128.9 (CHar), 129.5 (CHar), 139.2 (Car), 163.5 (C2). HRMS calculado para C22H35N2O5: 407.2546 [M+H] ⁺ . Encontrado: 407.2539 (3añS,4Sfí,5ñS,6Sñ,7fíS,7añS)-2-(octilimino)-octahidro benzo[c|oxazole- 4,5,6,7-tetraol ((±)-3b).

¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.91 (t, 3H, J=6.9 Hz, CH ₃ ), 1.23-1.44 (m, 10H, 5xCH ₂ ), 1.56-1.68 (m, 2H, CH ₂ ), 3.26-3.34 (m, 3H, NCH ₂ , H-6), 3.67 (t, 1H, J=5.5 Hz, H-5), 3.81 (t, 1H, J=4.2 Hz, H-7), 4.04 (dd, 1H, J=7.2, 9.9 Hz, H-4), 4.44 (d, 1H, J=5.7 Hz, H-3a), 4.87-4.95 (m, 1H, H-7a); H RMN (δ, 500 MHz, D ₂ 0): 0.88 (t, 3H, J=6.7 Hz, CH ₃ ), 1.19-1.41 (m, 10H, 5xCH ₂ ), 1.57-1.66 (m, 2H, CH ₂ ), 3.29-3.38 (m, 2H, CH ₂ ), 3.39-3.45 (m, 1H, H-6), 3.65 (t, 1H, J=8.3 Hz, H-5), 3.86 (dd, 1H, J=7.7, 10.0 Hz, H-7), 3.93 (dd, 1H, J=4.6, 8.1 Hz, H-4), 4.57 (dd, 1H, J=4.9, 7.1 Hz, H-3a), 4.95-5.05 (m, 1H, H-7a); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.4 (CH ₃ ), 23.7 (CH ₂ ), 27.6 (CH ₂ ), 30.2 (2xCH ₂ ), 30.3 (CH ₂ ), 32.9 (CH ₂ ), 44.0 (NCH ₂ ), 58.7 (C3a), 71.7 (C4), 72.9 (C6), 75.6 (C5), 76.5 (C7), 87.8 (C7a), 163.4 (C2). HRMS calculado para C^g^Os: 317.2076 [M+H] ⁺ . Encontrado: 317.2045. (3afíS,4Sfí,5Sf?,6Sfí,7fíS,7afíS)-4-(benciloxi)-2-(non� �limino)- octahidrobenzo[c|oxazole-5,6,7-triol ((±)-27c).

¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.90 (t, 3H, J=6.5 Hz, CH ₃ ), 1.17-1.41 (m, 12H, 6xCH ₂ ), 1.45-1.55 (m, 2H, CH ₂ ), 3.15-3.26 (m, 2H, NCH ₂ ), 3.40 (dd, 1H, J=5.6, 10.4 Hz, H-6), 3.66-3.73 (m, 1H, H-4), 3.88-3.94 (m, 1H, H-5), 4.11 (dd, 1H, J=7.1, 10.3 Hz, H-7), 4.50 (d, 1H, J=8.6 Hz, H-3a), 4.57 (d, 1H, J=11.5 Hz, PhCZ-^O), 4.82 (d, 1H, J 1.5 Hz, PhCH^O), 4.91 (t, 1H, J=7.6 Hz, H-7a), 7.25- 7.42 (m, 5H, Ph); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.4 (CH ₃ ), 23.7 (CH ₂ ), 27.6 (CH ₂ ), 30.2 (2xCH ₂ ), 30.3 (CH ₂ ), 33.0 (2xCH ₂ ), 44.0 (NCH ₂ ), 57.2 (C3a), 72.3 (C7), 73.7 (PhCH ₂ 0), 74.3 (C5), 75.9 (C6), 80.5 (C4), 88.2 (C7a), 128.6 (CHar), 128.9 (CHar), 129.5 (CHar), 139.2 (Car), 163.5 (C2). HRMS calculado para C23H37N2O5: 421.2702 [M+H] ⁺ . Encontrado: 421.2698. (3afíS,4Sfí,5ñS,6Sñ,7/ ^: ?S ₎ 7añS)-2-(nonilim¡no)-octahidrobenzo[^oxazole- 4,5,6,7-tetraol ((±)-3c).

¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.90 (t, 3H, J=6.9 Hz, CH ₃ ), 1.22-1.44 (m, 12H, 6xCH ₂ ), 1.55-1.68 (m, 2H, CH ₂ ), 3.26-3.34 (m, 3H, CH ₂ , H-6), 3.68 (t, 1H, J=5.0 Hz, H-5), 3.81 (t, 1H, J=4.2 Hz, H-7), 4.05 (dd, 1H, J=7.6, 9.4 Hz, H-4), 4.44 {d, 1H, J=5.7 Hz, H-3a), 4.87-4.95 (m, 1H, H-7a); ¹³ C RMN {δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.4 (CH ₃ ), 23.7 (CH ₂ ), 27.6 (CH ₂ ), 30.3 (CH ₂ ), 30.4 (CH ₂ ), 30.6 (C ₂ ), 33.0 (2xCH ₂ ), 44.0 (NCH ₂ ), 58.7 (C3a), 71.7 (C4), 72.8 (C6), 75.6 (C5), 76.5 (C7), 87.8 (C7a), 163.4 (C2). HRMS calculado para Ci ₆ H ₃ iN ₂ 0 ₅ : 331.2233 [M+H] ⁺ . Encontrado: 331.2214.

{3a/?,4S,5S,6SJRJa/?)-4-(benciloxi)-2-(nonilimino)-octahi drobenzo[.joxazole- 5,6,7-triol ((-)-27c).

[a] ^« -4.5 (c 1.0, MeOH); Los datos espectroscópicos de RMN son idénticos a los de (±)-27c. HRMS calculado para C ₂₃ H ₃ 7N ₂ 0 ₅ : 421.2702 [M+H] ⁺ . Encontrado: 421.2689.

{3afí,4S,5ñ,6S,7ñ,7afí)-2-(nonilimino)-octahidrobenzo [cloxazole-4,5,6,7-tetraol {(-)-3c).

[a] ^« -29.6 (c 0.6, MeOH); Los datos espectroscópicos de RMN son idénticos a los de (±)-3c. HRMS calculado para Ci ₆ H ₃ iN ₂ O ₅ : 331.2233 [M+H] ⁺ . Encontrado: 331.2235.

{3afí,4S,5S,6S,7fí,7a/ ^: ?)-4-(benciloxi)-3-nonil-2-(nonilímino)- octahidrobenzo[cí|oxazole-5,6,7-triol ((-)-27d).

[a] ^« -1l.4 (d.O, MeOH); ¹ H RMN {δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.90 (t, 6H, J=6.5 Hz),

1.21-1.37 (m, 24H), 1.47-1.63 (m, 4H), 2.86-2.94 (m, 1H), 3.26-3.36 (m, 3H), 3.42 (dd, 1H, J=5.1, 10.9 Hz), 3.78-3.81 (m, 1H), 4.02-4.07 (m, 1H), 4.20 (dd, 1H, J=7.1, 10.8 Hz), 4.44 (d, 1H, J=11.4 Hz), 4.48 (dd, 1H, J=2.8, 8.9 Hz), 4.81 (d, 1H, J=11.4 Hz), 4.90 (t, 1H, J=7.9 Hz), 7.27-7.42 (m, 5H); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.4, 23.7, 27.5, 27.8, 30.24, 30.26, 30.30, 30.34, 30.48, 30.53, 30.56, 32.97, 32.99, 43.8, 44.3, 59.6, 71.8, 72.8, 73.8, 76.1, 77.7, 87.2, 129.32, 129.35 (2), 129.7 (2), 138.7, 161.5. HRMS calculado para C32H55N2O5: 547.4111 [M+H] ⁺ . Encontrado: 547.4135.

{3afí,4S,5fí,6S,7fí,7afí)-3-nonil-2-(nonilímino)-oct ahidrobenzo[cloxazole- 4,5,6,7-tetraol ((-)-3d).

[a] ^« -15.2 (d.O, MeOH); ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.90 (t, 6H, J=6.3 Hz),

1.19-1.45 (m, 24H), 1.57-1.79 (m, 4H), 3.34-3.41 (m, 4H), 3.47-3.55 (m, 1H), 3.77-3.83 (m, 1H), 3.91-3.96 (m, 1H), 4.25 (dd, 1H, J=7.3, 10.6 Hz), 4.41 (d, 1H, J=8.7 Hz), 4.89 (t, 1H, J=8.0 Hz); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.4, 23.7, 27.5, 27.7, 27.8, 30.27, 30.33, 30.5, 30.6, 33.0, 44.0, 44.3, 60.5, 70.2, 72.0, 76.3, 77.8, 87.1, 161.6. HRMS calculado para C25H49N2O5: 457.3641 [M+H] ⁺ . Encontrado: 457.3624.

{3aSfí,4Sfí,5Sfí,6Sfí,7f?S,7aSfí)-4-(benciloxi)-2-(h exilimino)- octah¡drobenzo[ ]oxazole-5,6,7-triol ((±)-28a).

¹ H RMN {δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.92 (t, 3H, J=6.8 Hz, CH ₃ ), 1.29-1.39 {m, 6H, 3xCH ₂ ), 1.55-1.60 (m, 2H, CH ₂ ), 3.21 (dt, 2H, J=1.9, 6.8 Hz, NCH ₂ ), 3.61-3.67 (m, 3H, H-4, H-5, H-6), 3.97 (dd, 1H, J=3.6, 7.4 Hz, H-7), 4.14 (dd, J=5.8, 7.7 Hz, H-3a), 4.74 (d, 1H, J=11.4 Hz, PhOW^O), 4.84 (d, 1H, J=11.4 Hz, PhCH¿0), 4.95-5.01 (m, 1H, H-7a), 7.26-7.43 (m, 5H, Ph); ¹ H RMN (δ, 500 MHz, D ₂ 0): 0.93 (t, 3H, J=6.8 Hz, CH ₃ ), 1.31-1.43 (m, 6H, 3xCH ₂ ), 1.58-1.67 (m, 2H, CH ₂ ), 3.21-3.31 (m, 2H, HCH ₂ ), 3.65 (t, 1H, J=7.9 Hz, H-4), 3.69 (t, 1H, J=8.4 Hz, H- 5), 3.73 (t, 1H, J=8.3 Hz, H-6), 4.08 (dd, 1H, J=3.7, 9.1 Hz, H-7), 4.21 (t, 1H, J=6.6 Hz, H-3a), 4.86 (d, 1H, J=11.3 Hz, PhCH≤0), 4.93 (d, 1H, J=11.3 Hz, PhCHsO), 5.10-5.16 (m, 1H, H-7 a), 7.46-7.58 (m, 5H, Ph); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD3OD): 14.4 (CH ₃ ), 23.6 (CH ₂ ), 27.4 (CH ₂ ), 30.2 (CH ₂ ), 32.6 (CH ₂ ), 43.8 (NCH ₂ ), 62.5 (C3a), 71.1 (C7), 74.3 (C6), 75.3 (C5), 76.5 (PhCH ₂ 0), 82.7 (C4), 84.2 (C7a), 128.7 (CHar), 129.1 (CHar), 129.3 (CHar), 139.7 (Car), 163.4 (C2). HRMS calculado para C20H31N2O5: 379.2233 [M+H] ⁺ . Encontrado: 379.2214.

(3aSfí,4Sfí,5fíS,6Sfí,7ñS,7aSfí)-2-(hexilim¡no)-oc tahidrobenzo[cloxazole- 4,5,6,7-tetraol ((±)-4a). ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.92 (t, 3H, J=6.7 Hz, CW ₃ ), 1.25-1.44 {m, 6H, 3xCH ₂ ), 1.55-1.66 (m, 2H, CH ₂ ), 3.23-3.33 (m, 2H, CH ₂ ), 3.34-3.38 (m, 1H, H- 5), 3.66 (t, 1H, J=6.1 Hz, H-6), 3.81 (dd, 1H, J=7.5, 9.0 Hz, H-4), 3.95-4.05 (m, 1H, H-7), 4.09-4.12 (m, 1H, H-3a), 5.11-5.24 (m, 1H, H-7a); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.3 (CH ₃ ), 23.6 (CH ₂ ), 27.3 (CH ₂ ), 32.5 (CH ₂ ), 44.0 (NCH ₂ ), 61.5 (C3a), 71.4 (C7), 74.5 (C6), 75.8 (C5), 76.6 (C4), 84.5 (C7a), 163.2 (C2). HRMS calculado para C ₁₃ H ₂₅ N ₂ 0 ₅ : 289.1763 [M+H] ⁺ . Encontrado: 289.1739.

(3aSfí,4Sfí,5Sfí _! 6Sfí,7/ ^: ?S,7aSfí)-4-(benciloxi)-2-(octilímino)- octahidrobenzo[cf|oxazole-5,6,7-triol ((±)-28b).

¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.91 (t, 3H, J=6.8 Hz, CH ₃ ), 1.24-1.53 (m, 10H, 5xCH ₂ ), 1.52-1.65 (m, 2H, CH ₂ ), 3.24 (t, 2H, J=7.0 Hz, HCH ₂ ), 3.64-3.71 (m, 3H, H-4, H-5, H-6), 3.98 (dd, 1H, J=3.6, 7.2 Hz, H-7), 4.16-4.22 (m, 1H, H-3a), 4.75 (d, 1H, J=11.5 Hz, PhCH^O), 4.86 (d, 1H, J=11.4 Hz, PhCH≤0), 4.99-5.06 (m, 1H, H-7a), 7.26-7.43 (m, 5H, Ph); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.4 {CH ₃ ), 23.7 (CH ₂ ), 27.7 (CH ₂ ), 30.1 (CH ₂ ), 30.33 (CH ₂ ), 30.35 (CH ₂ ), 33.0 (CH ₂ ), 43.8 (NCH ₂ ), 61.8 (C3a), 71.0 (C7), 74.3 (C6), 75.5 (C5), 76.5 (PhCH ₂ 0), 82.3 (C4), 84.4 (C7a), 128.7 (CHar), 129.1 (CHar), 129.3 (CHar), 139.7 (Car), 163.4 (C2). HRMS calculado para C ₂₂ H ₃₅ N ₂ 0 ₅ : 407.2546 [M+H] ⁺ . Encontrado: 407.2544.

(3aSfí,4Sfí,5fíS,6Sfí,7f?S,7aSfí)-2-(octílimino)-oc tahidrobenzo[dloxazole- 4,5,6,7-tetraol ((±)-4b).

¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.91 (t, 3H, J=7.0 Hz, CH ₃ ), 1.24-1.42 (m, 10H, 5xCH ₂ ), 1.55-1.66 (m, 2H, CH ₂ ), 3.19-3.30 (m, 2H, CH ₂ ), 3.35 (dd, 1H, J=6.0, 9.2 Hz, H-5), 3.65 (t, 1H, J=6.1 Hz, H-6), 3.80 (dd, 1H, J=7.5, 9.0 Hz, H-4), 3.95-4.02 (m, 1H, H-7), 4.09 (t, 1H, J=7.7 Hz, H-3a), 5.11-5.21 (m, 1H, H-7a); ¹ H RMN (δ, 500 MHz, D ₂ 0): 0.88 (t, 3H, J=6.9 Hz, CH ₃ ), 1.24-1.40 (m, 10H, 5xCH ₂ ), 1.58-1.68 (m, 2H, CH ₂ ), 3.27-3.38 (m, 2H, HCH ₂ ), 3.40-3.44 (t, 1H, J=9.1 Hz, H-5), 3.61 (dd, 1H, J=8.0, 9.6 Hz, H-4), 3.64 (t, 1H, J=9.0 Hz, H-6), 4.05 (dd, 1H, J=4.3, 9.3 Hz, H-7), 4.12 (t, 1H, J=7.5 Hz, H-3a), 5.14-5.23 (m, 1H, H-7a); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.5 (CH ₃ ), 23.7 (CH ₂ ), 27.6 (CH ₂ ), 30.3 (CH ₂ ), 30.4 (CH ₂ ), 33.0 (CH ₂ ), 44.0 (NCH ₂ ), 61 .5 (C3a), 71 .5 (C7), 74.5 (C6), 75.9 (C5), 76.6 (C4), 84.6 (C7a), 163.3 (C2). HRMS calculado para C ₁ 5H29N2O5: 317.2076 [M+H] ⁺ . Encontrado: 317.2046. (3aSfí,4Sfí,5Sñ _! 6Sñ,7fíS,7aS/ ^: ?)-4-(benciloxi)-2-(nonilim¡no)- octahidrobenzo[cfjoxazole-5,6,7-triol ((±)-28c).

¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.90 (t, 3H, J=7.0 Hz, CH ₃ ), 1 .20-1 .39 (m, 12H, 6xCH ₂ ), 1 .54-1 .63 (m, 2H, CH ₂ ), 3.22 (t, 2H, J=7.0 Hz, HCH ₂ ), 3.61 -3.67 (m, 3H, H-4, H-5, H-6), 3.98 (dd, 1 H, J=3.6, 7.1 Hz, H-7), 4.14-4.20 (m, 1 H, H-3a), 4.74 (d, 1 H, J=1 1 .4 Hz, PhCH^O), 4.85 (d, 1 H, J=1 1 .4 Hz, PhCH≤0), 4.95-5.05 (m, 1 H, H-7a), 7.26-7.43 (m, 5H, Ph); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.4 (CH ₃ ), 23.7 (CH ₂ ), 27.7 (CH ₂ ), 30.2 {CH ₂ ), 30.39 (CH ₂ ), 30.42 (CH ₂ ), 30.6 (CH ₂ ), 33.0 (CH ₂ ), 43.8 (NCH ₂ ), 62.0 (C3a), 71 .0 (C7), 74.3 (C6), 75.4 (C5), 76.5 (PhCH ₂ 0), 82.5 (C4), 84.3 (C7a), 128.7 (CHar), 129.1 (CHar), 129.3 (CHar), 139.7 (Car), 163.4 (C2). HRMS calculado para C ₂₃ H37N ₂ 0 ₅ : 421 .2702 [M+H] ⁺ . Encontrado: 421 .2682.

(3aSfí,4Sfí,5fíS,6Sfí,7/ ^: ?S,7aSfí)-2-(nonilímino)-octahidrobenzo[^oxazole- 4,5,6,7-tetraol ((±)-4c)

1 H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.90 (t, 3H, J=6.9 Hz, CH ₃ ), 1 .25-1 .42 (m, 12H, 6xCH ₂ ), 1 .57-1 .65 (m, 2H, CH ₂ ), 3.25-3.30 (m, 2H, NCH ₂ ), 3.34-3.38 (m, 1 H, H- 5), 3.66 (t, 1 H, J=6.0 Hz, H-6), 3.81 (t, 1 H, J=8.3 Hz, H-4), 3.97-4.04 (m, 1 H, H- 7), 4.09-4.14 (m, 1 H, H-3a), 5.13-5.24 (m, 1 H, H-7a); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.4 (CH ₃ ), 23.7 (CH ₂ ), 27.6 (CH ₂ ), 30.3 (CH ₂ ), 30.4 (CH ₂ ), 30.6 (CH ₂ ), 33.0 (CH ₂ ), 44.0 (NCH ₂ ), 61 .4 (C3a), 71 .4 (C7), 74.5 (C6), 75.8 (C5), 76.5 (C4), 84.5 (C7a), 163.2 (C2). HRMS calculado para Ci ₆ H ₃ iN ₂ 0 ₅ : 331 .2233 [M+H] ⁺ . Encontrado: 331 .2223.

(3aS,4S,5S,6S,7fí,7aS)-4-(benciloxi)-2-(nonilimino)-octa hidrobenzo[d]oxazole- 5,6,7-triol ((+)-28c). [α ⁵ +10.7 (c 0.9, MeOH); Los datos espectroscópicos de RMN son idénticos a los de (±)-28c. HRMS calculado para C23H37 2O5: 421.2702 [M+H] ⁺ . Encontrado: 421.2704. {3aS,4S,5/ ^: ?,6S,7/ ^: ?,7aS)-2-{nonilimino)-octahidrobenzo[o(]oxazole-4,5,6, 7-tetraol <(+)-4c).

[α] ^« +16.2 (c 0.9, MeOH); Los datos espectroscópicos de RMN son idénticos a los de (±)-4c. HRMS calculado para C16H31N2O5: 331.2233 [M+H] ⁺ . Encontrado: 331.2235.

{3aS,4S,5/ ^: ?,6S,7fí,7aS)-3-nonil-2-(nonilimíno)-octahídrobenzo [ |oxazoie- 4,5,6,7-tetraol ((+)-4d).

[aj¾'+8.4 (c 1.0, MeOH); ¹ H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.90 (t, 6H, J=6.8 Hz), 1.23-1.42 (m, 24H), 1.57-1.83 (m, 4H), 3.31-3.34 (m, 1H), 3.36-3.44 (m, 2H), 3.53-3.62 (m, 2H), 3.64 (t, 1H, J=5.9 Hz), 3.95 (dd, 1H, J=7.5, 9.6 Hz), 3.98 {dd, 1H, J=3.8, 5.4 Hz), 4.17 (t, 1H, J=7.9 Hz), 5.16 (dd, 1H, J=3.4, 8.4 Hz); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.4, 23.7, 27.5, 27.6, 30.32, 30.34, 30.56, 30.58, 33.0, 44.3, 45.0, 64.0, 71.8, 73.1, 75.8, 76.6, 83.0, 161.1. HRMS calculado para C-25H ₄ 9N ₂ O ₅ : 457.3641 [M+H] ⁺ . Encontrado: 457.3658.

{3afí,4S,5fí,6fí,7S,7aS)-2-(nonilímino)-octahidro-1H- benzo[cimidazole-4,5,6,7- tetraol ((-)-5c).

[aj ^« -14.5 (d.O, MeOH); H RMN {δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 0.90 (t, 3H, J=6.8 Hz), 1.22-1.42 (m, 12H), 1.55-1.64 (m, 2H), 3.17-3.28 (m, 3H), 3.42-3.56 (m, 2H), 3.71-3.83 (m, 2H), 4.15-4.27 (m, 1H); ¹ H RMN (δ, 500 MHz, D ₂ O): 1.05 (t, 3H, J=6.9 Hz, CH ₃ ), 1.40-1.56 (m, 12H, 6xCH ₂ ), 1.73-1.83 (m, 2H, CH ₂ ), 3.44 (t, 2H, J=6.9 Hz, CH ₂ ), 3.52 (t, 1H, J=9.6 Hz, H-5), 3.71 (dd, 1H, J=8.6, 9.5 Hz, H-4), 3.76 (t, 1H, J=9.3 Hz, H-6), 4.02 (t, 1H, J=7.3 Hz, H-3a), 4.07 (dd, 1H, J=4.9, 9.3 Hz, H-7), 4.47 (t, 1H, J=5.3 Hz, H-7a); ¹³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 14.4 (CH ₃ ), 23.6 (CH ₂ ), 27.6 (CH ₂ ), 30.2 (CH ₂ ), 30.3 (2xCH ₂ ), 30.5 (CH ₂ ), 33.0 (CH ₂ ), 44.0 (NCH ₂ ), 60.0 (C3a), 60.9 (C7a), 71.6 (C7), 74.9 (C6), 75.2 (C5), 76.1 (C4), 160.9 (C2). HRMS calculado para Ci ₆ H ₃₂ N ₃ 0 ₄ : 330.2393 [M+H] ⁺ . Encontrado: 330.2386.

{3afí,4S,5fí,6fí,7S,7aS)-2-(3-fen¡lpropilímino)-octa hidro-1 H-benzo[d]innidazole- 4,5,6,7-tetraol ((-)-5e).

[aj « -8.2 (c 1 .0, MeOH); H RMN (δ, 500 MHz, CD ₃ OD): 1 .90-1 .96 (m, 2H), 2.70

(t, 2H, J=7.7 Hz), 3.18-3.30 (m, 3H), 3.47-3.59 (m, 2H), 3.73-3.83 (m, 2H), 4.1 7- 4.26 (m, 1 H), 7.14-7.34 (m, 5H); ¹ H RMN (δ, 500 MHz, D ₂ 0): 2.1 1 -2.17 (m, 2H), 2.91 (t, 2H, J=7.3 Hz), 3.45 (t, 2H, J=6.7 Hz), 3.50 (t, 1 H, J=9.7 Hz), 3.66 (t, 1 H, J=9.0 Hz), 3.73 (t, 1 H, J=9.0 Hz), 3.98 (t, 1 H, J=7.3 Hz), 4.04 (dd, 1 H, J=4.9, 8.8 Hz), 4.38-4.48 (m, 1 H), 7.42-7.63 (m, 5H); ³ C RMN (δ, 100 MHz, CD ₃ OD): 31 .8, 33.6, 43.4, 60.0, 60.9, 71 .6, 75.0, 75.2, 76.1 , 127.2, 129.39, 129.42, 129.6, 142.3, 160.9. HRMS calculado para C ₁₆ H ₂₄ N ₃ 0 ₄ : 322.1767 [M+H] ⁺ . Encontrado: 322.1771 .

EJEMPLO 2. Ensayos biológicos.

2.1 . Actividad inhibidora sobre qlicosidasas y Glucosilceramida Sintasa (GCS). Se estudió la selectividad de los compuestos 1 -5 y los subproductos 27-28 sobre la β-glucocerebrosidasa (GCase), sobre un panel de glícosidasas comercialmente disponibles y se determinó la actividad sobre la Glucosilceramida Sintasa en homogeneizados de células A549 como se describe en Egido-Gabás, M. y col. en Org. Biomol. Chem. 2005, 3, 1 195-1201 . Se recoge un resumen de los datos de inhibición (% actividad o los valores de IC ₅₀ ) en la Tabla 1 .

Con la excepción de las isoureas 1 a, 1 d, 2c-d, 3a-d y 4d (con valores de IC50 superiores a 1 .9 μΜ), los compuestos 1 -5 resultaron ser unos inhibidores muy potentes de la GCase, con valores de IC ₅₀ del orden de nanomolar. Las isoureas 1 d-4d presentaron una menor inhibición sobre esta enzima que las correspondientes isoureas 1 c-4c. Como era de esperar, los subproductos 27 y 28, que tienen uno de los grupos hidroxilo protegido en forma de éter bencílico resultaron ser peores inhibidores que las correspondientes isoureas con todos los grupos hidroxilo desprotegidos. Es destacable que ninguno de los compuestos mencionados arriba presentó una actividad significativa sobre la a- galactosidasa a 100 μΜ.

Las isoureas bícíclicas 3a-c resultaron ser inhibidores de las a-glucosidasas testadas, con valores de IC50 entre 0.6 y 0.9 μΜ para la α-glucosidasa de levadura de panadero y entre 6 y 34 μΜ para la α-glucosidasa de arroz. Sin embargo, estos compuestos mostraron menos de un 6% de inhibición de la ct- glucosídasa lísosomal humana en fibroblastos después de 24 h de incubación a 50 μΜ.

Por otro lado, las isoureas 4a-c y las guanidinas 5c,e resultaron ser inhibidores tanto de la β-glucosidasa de almendra como de la β-galactosidasa de hígado bovino con valores de IC50 del orden de μΜ e incluso nM. Por el contrario, estos compuestos no inhibieron significativamente la β-galactosidasa lisosomal humana en fibroblastos después de 24 h de incubación a 50 μΜ. Cabe destacar que únicamente la isourea 2d y los subproductos 27c,d y 28c mostraron una moderada inhibición (entre un 64% y un 90%) sobre la Glucosilceramída Sintasa a 250 μΜ, indicando esto una selectividad hacia la enzima hídrolítica.

a-glucosidasa

a-g!ucosidasa β-glucosidasa β-galactosidasa

GCase (levadura de GCS

(arroz) (almendra) (hígado bovino) panadero)

% actividad

Inhibidor ΙΟ ₅₀ /μΜ IC ₅₀ /^M IC ₅₀ ΙμΜ IC ₅₀ /juM IC ₅₀ ΙμΜ

(250 μΜ)

(±)-1a 6.44 NI NI NI NI NI

(±)-1b 0.60 NI NI NI 15% ^1D1 NI

(±)-1c 0.22 NI NI NI NI NI

(-)-1c 0.12 NI NI 40% ^1O) 58% ^lD1 NI

(-)-1d 11.1 NI NI NI NI 41%

(±)-2c 2.9 NI NI NI 63% ^tDi 43%

(+)-2c 1.86 NI NI NI NI 57%

( ₊ )-2d 60 NI NI NI 65% ^lD| 10% ^1C1

(±)-3a 12.9 0.9 33.9 NI 48% ^lDi NI

(±)-3b 2.46 0.8 22.9 NI 16% ^tDi NI

(±)-3c 0.71 0.8 12.9 NI 15% ^1D1 NI

( ^■ )-3c 6.00 0.6 6.3 NI 53% ^lD| 65%

{-)-3d 10.4 NI NI NI NI 65% ^lcJ

(±)-4a 0.098 NI NI 15.7 0.14 56%

(±)-4b 0.017 NI NI 9.2 0.04 NI

(±)-4c 0.009 NI NI 9.8 0.02 NI

(+)-4c 0.008 NI NI 6.9 0.01 NI

(+)-4d 6.8 NI NI NI NI 41%

(-)-5c 0.012 52% ^1K| NI 60% ^lD1 0.06 NI

(-)-5e 0.045 31 % ^lDJ NI 5.2 0.18 NI

(±)-27a 64.4 NI NI NI NI NI

(±)-27b 6.36 41% ^1D) NI NI NI NI

(±)-27c 1.34 1.9 36.2 NI 27% ^1D1 NI

(-)-27c 17.3 57 NI NI NI 33%

(-)-27d 157.4 NI NI NI NI 36% ^1C1

(±)-28a 3.88 46% ^1D) NI NI 51% ^tDi NI

(±)-28b 0.74 NI NI NI 19% ^tDi NI

(±)-28c 1.74 NI NI NI 26%' ^D) NI

(+)-28c 0.35 NI ¹⁰¹ NI NI 3.7 33%

Tabla 1. Actividad inhibidora sobre glicosidasas ^íal y Glucosilceramida Sintasa (GCS). [a] Ninguno de los compuestos mostró actividad frente a la enzima a- galactosidasa (grano café verde), [b] % actividad a 100 μΜ. [c] No se detectó inhibición a 50 μΜ. [d] NI: No se detectó inhibición a 100 μΜ para a- glucosidasa, β-glucosidasa, a-galactosídasa, β-galactosídasa y a 250 μΜ para GCS.

2.2 Actividad inhibidora de algunos de los compuestos sobre la β- qlucocerebrosidasa humana en fibroblastos Para estudiar la inhibición de los ciclitoles 1 -5 sobre la enzima β- glucocerebrosidasa humana, se incubaron fibroblastos durante 24h en ausencia o presencia de los inhibidores a 50 μΜ y se empleó un "ensayo de enzima intacta" descrito por Sawkar y col. (Sawkar, A. R.; Cheng, W. C; Beutler, E.; Wong, C. H.; Balch, W. E.; Kelly, J. W. Proc. Nati. Acad. Sci. U S A 2002, 99, 15428-15433) para determinar la actividad enzimátíca medíante la adición del sustrato (β-D-glucopíranósído de 4-metílumbeliferilo) a células intactas seguido de la cuantificación de la 4-metilumbeliferona liberada. Previamente se estudiaron la citotoxicidad de los inhibidores. Las isoureas 1d- 4d presentaron cierta citotoxicidad, con valores de LD ₅₀ entre 13 y 15 μΜ, por lo que fueron testados a 5 μΜ. Sin embargo, el resto de compuestos no presentaron citotoxicidad a concentraciones inferiores a 300 μΜ.

Como era de esperar, la capacidad inhibidora aumenta con la lipofilia de la cadena en cada una de las seríes. Los /V-noníl derivados (+)-2c y (-)-3c mostraron moderada inhibición (33% y 46%, respectivamente) a 50 μΜ, mientras que la isourea ( ^« )-1 c presentó una fuerte inhibición (87%) a la misma concentración.

Las isoureas 1 b-c, 3c, 4a-c y las guanidinas 5c,e que mostraron mas de un 46% de inhibición a 50 μΜ, fueron también testadas a concentraciones más bajas. Es destacable que las isoureas 4b-c y las guanidinas 5c,e mostraron potente inhibición de la β-glucocerebrosidasa humana a concentraciones orden de nM

Se recoge un resumen de la inhibición (%) sobre la β-glucocerebrosidasa humana en la Figura 1 .

2.3. Potenciación in vitro de la actividad de la β-glucocerebrosidasa en linfoblastos de pacientes de Gaucher con las mutaciones N370S o L444P en presencia de algunas chaperonas farmacológicas.

Se determinaron las actividades de la β-glucocerebrosídasa en lisados celulares después de incubar los linfoblastos en presencia o en ausencia de concentraciones crecientes de los compuestos 1c-5c y 5e durante 3 días en placas de 12 pocilios. Después de lavar el pellet con PBS, se resuspendió en agua y se lísó mediante sonicación. Brevemente, se incubaron a 37 ^S C 10 μΙ_ del homogeneizado con 50 μΙ_ del sustrato β-D-glucopiranósido de 4- metilumbeliferilo (6 mM) en tampón citrato-fosfato 0.1 M, pH 5.2 suplementado con taurocolato de sodio (0,25%) y Tritón X-100 (0.1 %). Se dejó reaccionar durante 2 h y se paró la incubación añadiendo 150 μΙ_ de tampón glicina- hidróxido de sodio 0.2 M (pH 10.6). Se determinó la 4-metilumbeliferona liberada mediante fluorometría (excitación 355 nm; emisión 460 nm). La proteína fue cuantificada medíante el kit de ensayo de proteína Micro BCA (Pierce, Thermo Scientific). En la Tabla 2 se indican las concentraciones de los compuestos a las que se observó un mayor incremento de la actividad sobre la β-glucocerebrosidasa en linfoblastos de pacientes de Gaucher con las mutaciones N370S o L444P. Los ciclitoles testados demostraron un impacto significativo sobre la potenciación de la actividad enzímática, especialmente frente a la mutación N370S. La actividad de la β-glucocerebrosidasa en Usados obtenidos a partir de linfoblastos de pacientes de Gaucher con las mutaciones N370S se incrementó hasta 2.1 veces en el caso más favorable (isourea (+)-4c). Sin embargo, se observó un débil incremento en la actividad residual hasta 1 .5 veces para la mutación L444P en el caso más favorable (isourea (+)-4c).

El compuesto 1c, a pesar de ser un buen inhibidor de la β-glucocerebrosidasa, resultó ser la peor chaperona farmacológica frente a las mutaciones N370S y L444P, con elevaciones de actividad residual de 1.4 y 1 .1 veces, respectivamente, a una concentración 1 μΜ. Por el contrario, el resto de compuestos incrementaron la actividad más de 1 .7 y 1 .3 veces a alguna concentración testada frente a las mutaciones N370S y L444P, respectivamente. Las isoureas 2c y 3c a concentraciones del orden de μΜ (10 o 5 μΜ) fueron eficaces frente a la mutación N370S, con elevaciones de actividad residual entre 1 .7 y 1 .8 veces, mientras que los compuestos (+)-4c, (-)-5c y (-)-5e incrementaron la actividad residual entre 1 .7 y 2.1 veces a concentraciones del orden de nM (entre 50 y 200 nM). Es destacable que estos tres últimos compuestos resultaron ser los más eficaces de las series frente a las mutaciones N370S y L444P, con elevaciones de la actividad residual alrededor de 1 .4 veces a una concentración de 10 nM en las dos mutaciones. Los resultados anteriores apoyan el concepto terapéutico de los solicitantes que los potentes inhibidores cíclitoles con estructura bicíclica pueden servir como chaperonas farmacológicas eficaces para potenciar la actividad enzimática muíante de pacientes con enfermedad de Gaucher.

Chaperona N370S L444P farmacológica (concentración) ¹⁸¹ (concentración) ¹³¹

(-)--lc 1.4 ±0.1 (1 μΜ) 1.1 ±0.1 (1 μΜ)

(+)-2c 1.710.2 (10μΜ) 1.3 ±0.1 (1 μΜ)

(±)-3c 1.7 ±0.1 (5μΜ) ND ^tDJ

(-)-3c 1.8 ±0.1 (10 μΜ) 1.4 ±0.1 (0.1 μΜ)

(±)-4c 1.7 ±0.1 (0.2 Μ) D ^[b¡

(+)-4c 2.1 ±0.1 (0.2 μΜ) 1.5 ±0.1 (0.01 μΜ)

(")-5c 1.8 ±0.1 (0.1 μΜ) 1.4 ±0.1 (0.01 μΜ)

(-)-5e 1.9 ±0.1 (0.05 μΜ) 1.4 ±0.1 (0.01 μΜ)

Tabla 2. Potenciaciones de actividad sobre la β-glucocerebrosidasa en linfoblastos de pacientes de Gaucher con las mutaciones N370S o L444P en presencia de algunas chaperonas farmacológicas.

[a] Se incubaron los linfoblastos de pacientes de Gaucher con las mutaciones N370S y L444P durante 3 días con las chaperonas farmacológicas antes de determinar la actividad. Se presentan los valores observados para el mayor incremento de la actividad residual de la β-glucocerebrosidasa. Los datos entre paréntesis corresponden a las concentraciones de las chaperonas farmacológicas, [b] ND: No determinado.