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Title:
BIOMATERIAL COMPRISING CHITOSAN AND AT LEAST GLYCOSAMINOGLYCAN
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2013/166616
Kind Code:
A1
Abstract:
The invention concerns a bioabsorbable and biocompatible solid material which comprises chitosan and at least one glycosaminoglycan (GAG) or derivative thereof and optionally one or more additional active ingredients. The invention further concerns a method for preparing a biocompatible solid material by the formation of nanoparticles, and the use thereof for repairing and regenerating damaged tissues.

Inventors:
CONCHA MURRAY MIGUEL LUIS (CL)
MORENO VILLOSLADA IGNACIO (CL)
ORELLANA DONOSO SANDRA LORENA (CL)
OYARZUN AMPUERO FELIPE (CL)
VIDAL VILLA MARIA ALEJANDRA (CL)
GIACAMAN FONSECA ANNESI GISELA (CL)
PAVICIC ROJAS MARIA FRANCISCA (CL)
MORALES HERNANDEZ CARLOS (CL)
RUMINOT BASCUR MARCOS (CL)
JOFRE RIVAS SANDRA PAMELA (CL)
Application Number:
PCT/CL2012/000023
Publication Date:
November 14, 2013
Filing Date:
May 11, 2012
Export Citation:
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Assignee:
UNIV AUSTRAL DE CHILE (CL)
CONCHA MURRAY MIGUEL LUIS (CL)
MORENO VILLOSLADA IGNACIO (CL)
ORELLANA DONOSO SANDRA LORENA (CL)
OYARZUN AMPUERO FELIPE (CL)
VIDAL VILLA MARIA ALEJANDRA (CL)
GIACAMAN FONSECA ANNESI GISELA (CL)
PAVICIC ROJAS MARIA FRANCISCA (CL)
MORALES HERNANDEZ CARLOS (CL)
RUMINOT BASCUR MARCOS (CL)
JOFRE RIVAS SANDRA PAMELA (CL)
International Classes:
A61L15/22; A61L15/28; A61L15/44; A61L15/62; A61L27/16; A61L27/20; A61L27/54; A61L27/58
Domestic Patent References:
WO2007135164A12007-11-29
WO1999047186A11999-09-23
WO2009031047A22009-03-12
WO2007011416A22007-01-25
Foreign References:
EP0296078A11988-12-21
US5093319A1992-03-03
US20090068250A12009-03-12
Other References:
LIN Y C ET AL: "Synthesis and characterization of collagen/hyaluronan/chitosan composite sponges for potential biomedical applications", ACTA BIOMATERIALIA, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 5, no. 7, 1 September 2009 (2009-09-01), pages 2591 - 2600, XP026500023, ISSN: 1742-7061, [retrieved on 20090402], DOI: 10.1016/J.ACTBIO.2009.03.038
ABDELWAHED W ET AL: "Freeze-drying of nanoparticles: Formulation, process and storage considerations", ADVANCED DRUG DELIVERY REVIEWS, ELSEVIER BV, AMSTERDAM, NL, vol. 58, no. 15, 30 December 2006 (2006-12-30), pages 1688 - 1713, XP024892085, ISSN: 0169-409X, [retrieved on 20061230], DOI: 10.1016/J.ADDR.2006.09.017
SCIENCE, vol. 252, no. 5013, 1991, pages 1705 - 8
CELL, vol. 64, no. 4, 1991, pages 841 - 8
Attorney, Agent or Firm:
CAREY CARVALLO, Francisco et al. (CL)
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Claims:
REIVINDICACIONES

1. Un material sólido o semi-sólido, biocompatible y bioabsorbible, CARACTERIZADO porque comprende quitosano o un derivado de éste y al menos un glicosaminoglicano o un derivado de este y/o sus sales farmacéuticamente aceptables.

2. Un material sólido o semi-sólido, biocompatible y bioabsorbible, CARACTERIZADO porque comprende quitosano y/o un derivado de éste o sus sales farmacéuticamente aceptables, y al menos un glicosaminoglicano proveniente de condroitin sulfato, ácido hialurónico, heparán sulfato, keratán sulfato, heparina sulfato, dermatán sulfato y/o sus sales farmacéuticamente aceptables o una mezcla de estos.

3. Un material sólido o semi-sólido, biocompatible y bioabsorbible de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque comprende quitosano, sus sales o derivados en una cantidad que va desde el 10% hasta el 90% en peso con respecto al peso total del material, preferentemente entre un 40% y un 60% en peso, más preferentemente entre un 45% y un 55% en peso, y un derivado glicosaminoglicano o sus sales en una cantidad que va desde el 10% hasta el 90% en peso con respecto al peso total del material, preferentemente entre un 40% y un 60% en peso, más preferentemente entre un 45% y un 55% en peso.

4. El material de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones precedentes, CARACTERIZADO porque el glicosaminoglicano es seleccionado del grupo formado por condroitín sulfato y ácido hialurónico y mezclas de las mismas.

5. El material de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones precedentes, CARACTERIZADO porque el glicosaminoglicano es condroitín sulfato.

6. El material de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, CARACTERIZADO porque el glicosaminoglicano es ácido hialurónico.

7. El material de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones precedentes, CARACTERIZADO porque el quitosano se selecciona de sus sales de clorhidrato, carbamato, acetato, sulfato y glutamato; y donde la sal se selecciona preferentemente de clorhidrato.

8. El material de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones precedentes, CARACTERIZADO porque los glicosaminoglicanos se seleccionan de sus sales inorgánicas de sodio, potasio, magnesio, calcio, zinc, amonio, magnesio, aluminio, litio, etilendiamina, etanolamina, Ν,Ν-dialikilenetanolamina, trietanolamina, glucamina y sales de aminoácido básicos, donde la sal se selecciona preferentemente de sodio.

9. El material de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones precedentes, CARACTERIZADO porque el material además comprende flumequina y/o sulfadoxina en una cantidad de 5 a 40%, preferentemente de 15 a 30%, y más preferentemente de aproximadamente 25%.

10. Procedimiento para preparar un material sólido o semi-sólido, biocompatible y bioabsorbible de acuerdo a la reivindicación 1 , CARACTERIZADO porque comprende las etapas de:

a. preparar una suspensión acuosa de nanopartículas que comprende quitosano y al menos un glicosaminoglicanos y sus sales, seleccionados preferentemente de condroitín sulfato y/o ácido hialurónico;

b. opcionalmente incorporar uno o más principios activos;

c. congelar la suspensión nanoparticulada a una temperatura de alrededor de -200 a 0°C, más preferentemente de -80 a 0°C, más preferentemente de -60° a 0°C, más preferentemente de -40 a 0°C y más preferentemente de -20°C.

d. Liofilizar el producto obtenido en la etapa c);

e. opcionalmente comprimir el material; y

f. opcionalmente almacenarlo en un recipiente estéril.

11. El procedimiento de acuerdo a la reivindicación 10, CARACTERIZADO porque la etapa a) de preparar una suspensión acuosa de nanopartículas comprende:

a. proveer una solución acuosa de quitosano, la cual posee un pH en el rango de 3,8 - 6,3, preferentemente 4,5 - 5,5, preferentemente 4,8 - 5,2; b. proveer una solución acuosa que comprende al menos un glicosaminoglicano seleccionado de condroitín sulfato y ácido hialurónico, la cual posee un pH en el rango de 3,8 - 6,3, preferentemente 4,5 - 5,5, preferentemente 4,8 - 5,2; c. verter la solución acuosa de quitosano y simultáneamente verter la solución acuosa de al menos un glicosaminoglicano sobre un recipiente apropiado que contiene agua desionizada la cual posee un pH en el rango de 3,8 - 6,3, preferentemente 4,5 - 5,5, preferentemente 4,8 - 5,2, para formar así una suspensión acuosa nanoparticulada.

12. El procedimiento de acuerdo a las reivindicaciones 10 u 1 1 , CARACTERIZADO porque la preparación de la suspensión acuosa de nanopartículas comprende la etapa de verter la solución acuosa de quitosano y la solución acuosa de al menos un glicosaminoglicano sobre un recipiente apropiado que contiene agua desionizada bajo agitación magnética.

13. El procedimiento de acuerdo a las reivindicaciones 10, 11 o 12, CARACTERIZADO porque la preparación de la suspensión acuosa de nanopartículas se realiza incorporando la solución acuosa de quitosano y la solución acuosa que comprende al menos un glicosaminoglicano sobre el recipiente que contiene agua gota a gota, adicionando 0,70 - 1 ,30 mL/min, más preferentemente 0,80 - 1,20 mL/min, más preferentemente 0,80 - 1,00 mL/min, más preferentemente 0,88 mL/min de cada una de las soluciones.

14. El procedimiento de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 10 a 13, CARACTERIZADO porque la suspensión acuosa de nanopartículas comprende quitosano en una concentración entre 0,1312 a 0,918 mg/mL más preferentemente de 0,524 mg/mL aproximadamente y condroitín sulfato en una concentración entre 0,998 a 0,142 mg/mL más preferentemente de 0,56 mg/mL aproximadamente.

15. El procedimiento de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 10 a 14, CARACTERIZADO porque la suspensión acuosa de nanopartículas comprende quitosano en una concentración entre 0,1312 a 0,918 mg/mL más preferentemente de 0,524 mg/mL aproximadamente y ácido hialurónico en una concentración entre 0,116 a 0,83 mg/mL más preferentemente de 0,464 mg/mL aproximadamente.

16. El procedimiento de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 10 a 15, CARACTERIZADO porque la liofilización es llevada a cabo a una temperatura de entre -50 y -60°C, a una presión de vacío de entre 0,02 a 0,06 mbar, con tiempo de liofilización de entre 55 y 65 horas y con un tiempo de congelación a -20°C de entre 11 y 13 horas.

17. Un implante, CARACTERIZADO porque comprende el material sólido o semi-sólido, biocompatible y bioabsorbible de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 y uno o más excipientes, adyuvantes o vehículos fisiológicamente aceptables.

18. Un método para favorecer la regeneración de heridas o úlceras en humanos o animales, CARACTERIZADO porque comprende aplicar el material de acuerdo a las reivindicaciones 1 a 9 o un implante que comprende el mismo sobre el lecho de una herida abierta una o más veces, y proteger el material o el implante que comprende el mismo con un aposito.

19. Uso de un material sólido o semi-sólido, biocompatible y bioabsorbible de acuerdo a las reivindicaciones 1 -9, CARACTERIZADO porque sirve para la protección y curación de heridas o úlceras en humanos o animales.

20. Una suspensión acuosa de nanopartículas, CARACTERIZADA porque dicha composición comprende nanopartículas de quitosano o un derivado de éste y uno o más glicosaminoglicanos o un derivado de este y/o sus sales farmacéuticamente aceptables, donde las nanopartículas poseen un tamaño de 100 y 200 nm, preferentemente entre 150 y 180 nm.

21. La suspensión acuosa de nanopartículas de acuerdo a la reivindicación 20, CARACTERIZADA porque el glicosaminoglicano se selecciona de condroitín sulfato y ácido hialurónico.

22. La suspensión acuosa de nanopartículas de acuerdo a la reivindicación 20, CARACTERIZADA porque el glicosaminoglicano se selecciona de condroitín sulfato.

Description:
BIOMATERIAL QUE COMPRENDE QUITOSANO Y AL MENOS UN GLICOSAMINOGLICANO

MEMORIA DESCRIPTIVA

La presente invención se relaciona con el campo de los materiales y/o biomateriales para implantación en el cuerpo humano o animal. En forma particular, la presente invención se refiere a un material sólido o semi-sólido biocompatible y bioabsorbible que permite la regeneración de tejidos y la neovascularización en personas que han sufrido heridas.

La presente invención provee un material sólido biocompatible y bioabsorbible que comprende quitosano y al menos un glicosaminoglicano (GAG) o derivado del mismo y opcionalmente uno o más principios activos adicionales. La invención además se relaciona con un procedimiento de preparación de un material sólido biocompatible por medio de la formación de nanopartículas, y su uso en la reparación y regeneración de tejido orgánicos dañados. ANTECEDENTES

El número de pacientes con heridas crónicas de difícil tratamiento como las del pie diabético, decúbito (úlceras) o heridas debido a insuficiencia venosa o arterial, está en una tendencia ascendente a pesar de los grandes avances en medicina. Existen varias preparaciones químicas y farmacéuticas en uso para el tratamiento local de las heridas, las que están disponibles en varias formas farmacéuticas, como ungüentos, geles, yesos, películas, polvos, etc. Debido a la diversidad de las preparaciones o dispositivos para la curación de las heridas actualmente disponibles en el mercado, está claro que no existe una preparación o dispositivo universal.

Un material o dispositivo médico óptimo no sólo protege la herida de su entorno, sino también tiene varias propiedades relacionadas con su estructura y sus características mecánicas. Por lo tanto, los siguientes parámetros son importantes en el desarrollo de un dispositivo o material para

i la curación de heridas. Respecto a la herida: optimización de la adherencia, el cuidado del lecho de la herida, control de la permeabilidad de la humedad, control de la infección, seguridad, manejo del dolor; respecto a los dispositivos o materiales: adaptación física, estabilidad in situ, costo-eficiencia, estabilidad en almacenaje, facilidad de manejo por los usuarios (médicos, enfermeras y/o pacientes) y por último, la comodidad de los pacientes al usarlo.

Los expertos en la técnica de curación de heridas se han familiarizado con varios dispositivos para este propósito. Por ejemplo, los geles de silicona (o aceites de silicona) son conocidos, sin embargo, se ha observado que estos geles tienen la inconveniencia de no ser biodegradables. Además, la silicona a menudo es causa de inflamación crónica, de formación de granulomas y de reacciones de hipersensibilidad retardadas. Las suspensiones de colágeno también han sido ampliamente usadas durante los últimos diez años. Sin embargo, el colágeno generalmente es de origen bovino, lo que no es deseable para la salud y generalmente está sujeto a requerimientos regulatorios adicionales.

Son también conocidos en el estado del arte los materiales basados en colágeno utilizados en aplicaciones médicas como dispositivos médicos. Al ser el colágeno un biomateriai, los materiales producidos a partir del mismo producen menos complicaciones que materiales producidos a base de compuestos sintéticos. El colágeno forma una matriz que puede utilizarse como un implante para la regeneración de tejidos, sin embargo, es sabido que las matrices de colágeno pueden producir enfermedades transmisibles graves en los seres humanos, por virus y priones.

Por otro lado, la utilidad de los derivados de quitosano biocompatibles en aplicaciones médicas ha recibido atención. Por ejemplo, la Patente US No. 5,093,319 describe el uso de películas preparadas de quitosano carboximetilado para su uso en cirugía y así prevenir la adhesión postoperatoria de tejidos blandos dañados al curarse. Se describe que los derivados de quitosano son formados en una "lámina" biodegradable que durante la cirugía se emplaza entre tejidos blandos con los cuales la adherencia es indeseable.

Desde la perspectiva de usos médicos, el quitosano ofrece varias propiedades deseables; el quitosano es conocido por ser no tóxico y biocompatible ya que durante su elaboración es procesado bajo condiciones más bien extremas, como la exposición a álcali.

Se han descrito en el estado del arte materiales o implantes fabricados a partir de matrices de quitosano, sin embargo, el quitosano puro producido como una película no correspondería a un material con propiedades regenerativas favorables.

De este modo, es deseable el desarrollo de materiales que sean biocompatibles y que puedan efectivamente ayudar al cierre de heridas y cicatrización.

Los glicosaminoglicanos son polímeros que se encuentran ampliamente distribuidos particularmente en los tejidos conectivos de los seres vivos. Pertenecen a este grupo de moléculas el condrotín sulfato, dermatán sulfato, heparán sulfato y ácido hialurónico, entre otros. Se han descrito variadas funciones para los glicosaminoglicanos en los tejidos vivos, como por ejemplo, su capacidad para interaccionar con proteoglicanos y funcionar como moléculas reguladoras de procesos celulares, capaces de guiar por quimioatracción y de unir o favorecer el aumento de las concentraciones microambientales de citoquinas, factores de crecimiento y otras proteínas solubles en la matriz.

Un ejemplo claro de esta funcionalidad es la interacción que ocurre entre el heparán sulfato y el factor de crecimiento de fibroblastos-2 (FGF-2), uno de los más potentes estimuladores de la angiogénesis. En ausencia de éste glicosaminoglicano, el FGF-2 es incapaz de estimular las células aún en presencia de receptores funcionales de FGF-2 (Science. 252(5013), 1991, 1705-8; Cell. 64(4), 1991, 841-8). Es importante destacar que el rol de los glicosaminoglicanos en el proceso dinámico de la curación de heridas se ve claramente reflejado en la fluctuante expresión de glicosaminoglicanos específicos en el lecho de la herida durante el proceso de curación. Durante la primera semana del proceso reparativo, el ácido hialurónico es el glicosaminoglicano predominante, luego es reemplazado por el condroitín sulfato y el dermatán sulfato.

Por lo tanto, es deseable proveer un material para el tratamiento de heridas o un implante que comprenda uno o más de uno de los compuestos mencionados anteriormente, que sea estable en un ambiente biológico pero que pueda biodegradarse eventualmente con el tiempo. También es deseable que dicho material mantenga su estructura sin la incorporación de agentes reticulantes o recubrimientos adicionales.

También es deseable que el material no sea derivado de proteína animal, que comprenda componentes biocompatibles, que sea estructuralmente estable después de la aplicación en el cuerpo del paciente, que tenga buenas propiedades de integración al lecho de la herida, que sea biocompatible y biodegradable, y que sea fácilmente aplicable y almacenable.

También se debe proporcionar un material que se pueda usar como sustituto para regenerar tejido, que no requiera usar materiales vivos, pues estos pueden conducir a la contaminación con patógenos.

Para esto, se provee en la presente solicitud un procedimiento de preparación de un biomaterial que se pueda usar como sustituto para regenerar tejidos, donde el método comprende la formación de nanopartículas poliméricas de quitosano y de al menos un derivado de glicosaminoglicano.

Las nanopartículas poliméricas son estructuras estables y de características homogéneas, reproducibles y modulables que se forman como consecuencia del enlazamiento de uno o más polímeros bajo condiciones estrictas y controladas. Esta interacción genera entidades físicas características, que son independientes y observables, cuyo tamaño promedio es inferior a 1 μιτι, es decir, entre 1 y 999 nm. El arte previo ha descrito procesos de preparación de nanopartículas poliméricas mediante la incorporación de agentes entrecruzantes, los cuales pueden formar enlaces de distinta naturaleza entre los componentes de las nanopartículas. Sin embargo, el uso de agentes entrecruzantes ha sido cuestionado en el estado de la técnica debido a sus potenciales efectos tóxicos. Por lo tanto, es un objetivo de la invención proporcionar un material a base de quitosano, glicosaminogíicanos y sus derivados, que sea preparado mediante un procedimiento simple, que no comprenda la adición de solventes orgánicos o condiciones experimentales extremas (pH, temperatura, etc.) o substancias auxiliares tales como agentes entrecruzantes. BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS

La figura 1 corresponde a una suspensión de nanopartículas de quitosano y condroitin sulfato. La figura 2 corresponde a una imagen de microscopía electrónica de transmisión (TEM, aumento: 42.000 X) de las nanopartículas de quitosano y condroitin sulfato en una suspensión nanoparticulada de acuerdo a la invención, la cual ha sido desarrollada mediante tinción negati va en gradillas con colodión. Los círculos rojos muestran estructuras macromoleculares en forma de mórulas de 400 nm de diámetro (promedio). La figura 3 corresponde a una imagen del material terminado de la invención y que comprende nanopartículas de quitosano y condroitin sulfato. La figura 4 corresponde a una imagen de microscopía electrónica de barrido (SEM) del material sólido. Se aprecia que este posee una estructura porosa heterogénea, con poros de 100 μπι. La figura 5 corresponde a una imagen del material sólido terminado y empacado de la invención. La figura 6a gráfica el efecto del material de la invención en el crecimiento de fibroblastos humanos. La figura 6b gráfica el efecto del material de la invención en el crecimiento de la línea de células endoteliales EA.hy926. La figura 7 muestra cierre de herida excisional en la región hemidorsal izquierda en animal experimental tratada con matriz polimérica (A izquierda y B) mientras que la herida no tratada del hemidorso derecho (A derecha y C) no revela cambios significativos de tamaño ni de profundidad. La figura 8 muestra la histopatología del cierre de la herida excisional en conejos luego de la aplicación del material sólido (figura 8.1) y sin la aplicación de éste (figura 8.2). La figura 9 representa la evaluación de la capacidad del material sólido para inducir la curación de herida en un paciente con pie diabético y amputación de ortejo. Al inicio del tratamiento se observa una herida profunda y con tejido fascelado en el lecho, (a). Progresivamente la herida se contrae y rellena con tejido granulatorio hasta cerrar el día 32, (b).

BREVE DESCRIPCION DEL ARTE PREVIO

El documento WO 200711416 describe un método para la preparación de una cubierta porosa de quitosano que comprende proveer una solución acuosa ácida de quitosano y un solvente que no disuelve al quitosano; y liofilizar la solución acuosa ácida, en donde el solvente se selecciona de alcoholes tales como alcoholes alifáticos, etilenglicol monoetiléter, dioxano, tetrahidrofurano, entre otros.

El documento US 2009/0068250 describe un compuesto bioabsorbible y biocompatíble para uso quirúrgico compuesto de colágeno entrecruzado con un glicosaminoglicano, donde los componentes activos se unen por medio de enlaces covalentes utilizando colágeno, funcionalizando los grupos amino y carboxilato de sus aminoácidos.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a materiales o biomateriales para uso en aplicaciones médicas como por ejemplo, un implante para reparación de tejidos biológicos y/o regeneración de tejidos biológicos. Estos biomateriales se pueden usar en cualquier área de la técnica que involucre por ejemplo, reparación de tejidos biológicos dañados o sustitución de tejidos biológicos. En una realización de la invención, el biomaterial de la invención comprende al menos una capa porosa que comprende quitosano y al menos un glicosaminoglicano.

El quitosano es un polímero lineal semisintético que se obtiene mediante la N-desacetilación de la quitina. Esto origina el copolímero compuesto por N-acetilglucosamina y glucosamina. El quitosano está representado por la siguiente estructura:

Quitosano donde "x" e "y" representan las fracciones molares de glucosamina y N-acetilglucosamina dentro del polímero, respectivamente. Concretamente las unidades de glucosamina determinan el grado de desacetilación de la molécula y que se encuentra directamente relacionado con la cantidad de cargas positivas del polímero otorgadas por los grupos amino.

Dicho grado de desacetilación, está generalmente comprendido en el rango entre 30 a 95%, preferentemente entre 55 y 90%, lo que indica que entre el 5 y el 70 %, preferentemente entre el 10 y el 45% de los grupos amino está acetilado. El quitosano usado para formar las nanopartículas de acuerdo a la invención tiene un peso molecular que va desde 2.000 hasta 2.000.000 g/mol, preferiblemente entre 2.000 y 500.000 g/mol, más preferiblemente entre 10.000 y 200.000 g/mol. Como alternativa al quitosano, un derivado de éste puede ser usado, entendiendo esto como moléculas de quitosano en que uno o más grupos y/o uno o más grupos amino han sido modificados, con el objetivo de modificar la solubilidad del polímero, la adherencia u otras propiedades.

El quitosano de acuerdo a la invención también puede encontrarse en forma de sal, la que se selecciona de entre las sales de clorhidrato, carbamato, acetato, sulfato y glutamato; donde la sal se selecciona preferentemente de clorhidrato.

En una realización de la invención, el quitosano se selecciona de clorhidrato de quitosano y tiene un peso molecular de entre 2.000 y 2.000.0000 g/mol, preferiblemente entre 2.000 y 500.000 g/mol y más preferiblemente entre 10.000 y 200.000 g/mol.

Los glicosaminoglicanos, que corresponden al segundo grupo de componentes del material o biomaterial de la invención, son polisacáridos estructurales que forman gran parte de la matriz intercelular de tejidos mesodérmicos (conjuntivo, cartílago, músculo, hueso) y que muy frecuentemente se presentan unidos a un núcleo de proteína, formando los llamados proteoglicanos. La estructura de los glicosaminoglicanos es del tipo copolímero en la que una de las unidades monoméricas es un ácido urónico mientras que la otra es un aminosacárido. Algunas de las hexosas que forman parte de estos polisacáridos presentan carga negativa, lo que da a los glicosaminoglicanos un carácter polianiónico, con elevada densidad de carga negativa.

Los glicosaminoglicanos de acuerdo a la invención se seleccionan preferentemente entre condroitín sulfato, ácido hialurónico, heparán sulfato, queratán sulfato, heparina sulfato, dermatán sulfato y una mezcla de éstos, de los cuales se seleccionan preferentemente condroitín- 6-sulfato, condroitín-4-sulfato y ácido hialurónico.

El condroitín sulfato de acuerdo a la invención es un glicosaminoglicano sulfatado. La estructura básica de esta molécula contiene entre 15 y 150 unidades básicas de N- acetilglucosamina y ácido glucurónico. La posición 2 del ácido glucorónico y/o la posición 4 y 6 de la N-acetilglucosamina se encuentran sulfatadas en diferentes tipos de condroitin sulfato. El condroitin sulfato está representado por la siguiente estructura:

Condroitin Sulfato

A pesar de que el nombre "condroitin sulfato" sugiere una sal contraionizada con grupos sulfates, éste no es el caso, pues el sulfato está covalentemente unido al azúcar. Por otro lado, debido a que la molécula posee múltiples cargas negativas a pH fisiológico, pueden estar presentes cationes en la sal de condroitin sulfato. Por consiguiente, el término condroitin sulfato también incluye sales orgánicas e inorgánicas. Generalmente estas sales son, por ejemplo, preparadas reaccionando la forma básica del compuesto con la cantidad estequiométrica de un ácido apropiado en agua, o en un solvente orgánico, o una mezcla de ambos. Ejemplos de sales inorgánicas incluyen, pero no se limitan a, sodio, potasio, calcio, zinc, amonio, magnesio, aluminio y litio. Sales orgánicas incluyen, por ejemplo, etilendiamina, etanolamina, N,N- dialikilenetanolamina, trietanolamina, glucamina y sales de aminoácido básicos.

En una realización de la invención, la sal de condroitin sulfato se selecciona de la sal de sodio y posee un peso molecular de entre 7.500 y 75.000 g/mol.

El ácido hialurónico de acuerdo a la invención es un glicosaminóglicano carboxilado compuesto por cadenas de carbohidratos que contienen aproximadamente 50000 disacáridos de N-acetilglucosamina y ácido glucurónico. El ácido hialurónico está representado por la siguiente estructura:

Ácido hialurónico

El ácido hialurónico permite retener grandes cantidades de agua y adopta una conformación extendida en disolución, por lo que facilita la migración y la función celular durante la regeneración tisular y además actúa como soporte y lubricante. Estas propiedades se consiguen gracias al gran número de grupos OH y de cargas negativas de esta molécula, lo que permite, por el establecimiento de fuerzas de repulsión, que se conserven relativamente separadas entre sí las cadenas de carbohidratos. La actividad biológica del ácido hialurónico se ve influenciada por el tamaño de la cadena polimérica. Ejemplo de esto, es que moléculas de ácido hialurónico de menor peso molecular presentan actividad proangiogénica y actúan como ligando del receptor CD40 que se expresa en la membrana celular de las células endoteliales.

En una realización particular, el ácido hialurónico se encuentra en forma de sal, la cual se selecciona de entre sal de sodio, de potasio, de magnesio, de calcio y de zinc. De forma preferida la sal de ácido hialurónico es sódica.

En una realización de la invención, la sal de ácido hialurónico se selecciona de la sal de sodio y posee un peso molecular de entre 3.000 y 200.000 g/mol.

En una realización de la invención, el material comprende quitosano y cohdroitín sulfato. En otra realización de la invención, el material comprende quitosano y ácido hialurónico. En otra realización de la invención, el material comprende quitosano, condroitín sulfato y ácido hialurónico.

El material de la invención comprende quitosano sus sales o derivados en una cantidad que va desde el 10% hasta el 90% en peso con respecto al peso total del material, preferentemente entre un 40% y un 60% en peso con respecto al peso total del material, más preferentemente entre un 45% y un 55% en peso con respecto al peso total del material, y al menos un derivado glicosaminoglicano adicional o sus sales en una cantidad que va desde el 10% hasta el 90% en peso con respecto al peso total del material, preferentemente entre un 40% y un 60% en peso con respecto al peso total del material, más preferentemente entre un 45% y un 55% en peso con respecto al peso total del material, donde al menos un derivado glicosaminoglicano adicional o sus sales se selecciona de condroitín sulfato, ácido hialurónico, heparán sulfato, keratán sulfato, heparina sulfato, dermatán sulfato o una mezcla de estos.

Todos los porcentajes, a menos que se indique lo contrario, se refieren a porcentajes en peso. El material de la invención puede comprender principios activos adicionales tales como: péptidos, proteínas, compuestos sacarídicos, fármacos de bajo peso molecular, compuestos de ácidos nucleicos y nucleótidos o bien combinaciones de los mismos.

En una realización alternativa, el material de la invención además comprende azul de meíileno, lo que permite que el material sea aplicado directamente sobre un tejido de interés para tratar afecciones como el cáncer, y las infecciones en general, siendo de particular interés las infecciones causadas por hongos. El material de la invención permite controlar el estado de agregación del principio activo, modulando así su eficacia terapéutica. El azul de metileno se encuentra presente en el material de la invención en porcentajes de masa total del material que varían entre el 0.05% y el 5% y el preferentemente entre y 0.05% y 2.5%. En una realización alternativa, el material de la invención además comprende compuestos antibióticos, los que permiten que el material sea aplicado directamente sobre un tejido de interés para tratar infecciones bacterianas. De acuerdo a esto, se prefieren los compuestos flumequina y/o sulfadoxina, los cuales se encuentran presente en el material de la invención en porcentajes de masa total del material que varían entre el 5% y el 40%, preferentemente entre 15% y 30% , preferentemente alrededor de 25%.

En una realización de la invención, el material de la invención puede ser moldeado para adaptarse a los requerimientos de forma y profundidad de la herida a tratar.

En una realización preferida, el material de la invención es preparado a partir de una solución acuosa de quitosano y una solución acuosa que comprende el o los glicosaminoglicanos, las cuales se incorporan simultáneamente sobre un recipiente que contiene agua, formando una suspensión nanoparticulada, la cual es posteriormente congelada y liofilizada.

En una realización preferida, el material de la invención es preparado a partir de una solución acuosa de quitosano y de una solución acuosa que comprende condroitín sulfato, las cuales se incorporan simultáneamente sobre un recipiente que contiene agua, formando una suspensión nanoparticulada, la cual es posteriormente congelada y liofilizada.

En una realización preferida, el material de la invención es preparado a partir de una solución acuosa de quitosano y de una solución acuosa que comprende ácido hialurónico, los cuales se incorporan simultáneamente sobre un recipiente que contiene agua, formando una suspensión nanoparticulada, la cual es posteriormente congelada y liofilizada.

En una realización preferida, el material de la invención es preparado a partir de una solución acuosa de quitosano y de una solución acuosa que comprende condroitin sulfato y ácido hialurónico, los cuales se incorporan simultáneamente sobre un recipiente que contiene agua, formando una suspensión nanoparticulada, la cual es posteriormente congelada y liofilizada. En el caso que el material de la invención comprenda más de un glicosaminoglicano, en el procedimiento de preparación de éstos también pueden incorporarse sobre el agua en una única solución que comprenda los compuestos seleccionados. En una realización preferida, el tamaño de las nanopartículas formadas por la adición de quitosano y al menos un glicosaminoglicano sobre agua desionizada poseen un tamaño menor a 1 μιη, preferentemente entre 100 y 500 nm, preferentemente entre 150 y 180 nm.

El procedimiento para la preparación del material de la invención comprende la formación de nanopartículas entre los componentes activos que lo comprenden. Las nanopartículas de quitosano más al menos un glicosaminoglicano adicional se caracterizan porque han sido formadas mediante la nanoprecipitación conjunta entre el quitosano, y al menos un glicosaminoglicano debido principalmente a las interacciones electrostáticas entre los constituyentes, formando enlaces iónicos.

Las nanopartículas de la invención no se encuentran entrecruzadas por reticulantes de bajo peso molecular, tales como aldehidos y otros aditivos que reaccionan con los componentes generando enlaces covalentes y otros tales como tripolifosfato y otros aditivos que reaccionan con los componentes formando enlaces iónicos.

El procedimiento para preparar el material sólido o semisólido como se ha definido anteriormente en la presente invención, comprende las etapas de:

a) preparar una suspensión acuosa nanoparticulada que comprende quitosano y/o sus derivados y/o sus sales y al menos un glicosaminoglicano y/o sus derivados y/o sus sales, los cuales se seleccionan preferentemente de condroitín sulfato y/o ácido hialurónico y opcionalmente incorporar uno o más principios activos;

b) congelar la suspensión nanoparticulada obtenida en la etapa a)

c) remover el solvente, preferentemente por medio de liofilización; d) opcionalmente moldear y/o comprimir el material y/o esterilizar el material; y e) opcionalmente almacenarlo en un recipiente estéril.

En una realización preferida, la suspensión acuosa de nanopartículas a) se forma por medio de: i) proveer una solución acuosa de quitosano, la cual posee un pH en el rango de 3,8 - 6,3, preferentemente 4,5 - 5,5, preferentemente 4,8 - 5,2

ii) proveer una solución ácuosa de condroitín sulfato y/o una solución acuosa de ácido hialurónico, la cual posee un pH en el rango de 3,8 - 6,3, preferentemente 4,5 - 5,5, preferentemente 4,8 - 5,2

iii) verter la solución acuosa de quitosano y simultáneamente verter la solución acuosa de condroitín sulfato y/o la solución acuosa de ácido hialurónico sobre un recipiente apropiado que contiene agua desionizada la cual posee un pH en el rango de 3,8 - 6,3, preferentemente 4,5 - 5,5, preferentemente 4,8 - 5,2, para formar así una nanosuspensióri acuosa.

En una realización, la etapa iii) se realiza bajo agitación magnética y a una temperatura en el rango de 0-100, preferentemente entre 15-25°C.

En una realización, la incorporación del condroitín sulfato y/ó ácido ' hialurónico, según corresponda, sobre el recipiente que contiene agua desionizada, se puede realizar previa mezcla de las soluciones que contienen estos componentes.

En una realización, la incorporación de las soluciones de quitosano, condroitín sulfato y ácido hialurónico, según corresponda, sobre el recipiente que contiene agua desionizada, se realiza gota a gota. De acuerdo a la invención, la expresión "gota a gota" representa adicionar un volumen de aproximadamente entre 0,70 - 1,30 mL/min, más preferentemente 0,80 - 1,20 mL/min, más preferentemente 0,80 - 1,00 mL/min, más preferentemente 0,88 mL/min. En una realización alternativa, la incorporación del compuesto catiónico sulfadoxina en el material de la invención se realiza incorporando el mismo bajo agitación a la solución de quitosano que posteriormente se adicionará simultáneamente con la solución que contiene uno o más glicosaminoglicanos sobre el recipiente que contiene agua desionizada.

En una realización alternativa, la incorporación del compuesto aniónico flumequina sulfadoxina en el material de la invención se realiza incorporando el mismo bajo agitación a la solución del glicosaminoglicano que posteriormente se adicionará simultáneamente con la solución que contiene quitosano sobre el recipiente que contiene agua desionizada.

En una realización, la etapa b) de congelación se realiza mediante métodos conocidos en el estado del arte para llegar a una temperatura de -200 a 0°C, preferentemente de -80 a 0°C, preferentemente de -30 a 0°C y más preferentemente de -20°C.

La composición congelada es liofilizada utilizando procedimientos rutinarios de la técnica. La temperatura de sublimación y la presión utilizada dependen de las condiciones experimentales en que se trabaje. Temperaturas preferidas fluctúan entre -40 y -70° C en condiciones de presión de entre 0,01 a 0,1 mBar, preferentemente entre 0,02 y 0,06 mBar.

El tiempo requerido para liofilizar depende de la cantidad de material a preparar, los tiempos preferidos de liofilización varían entre 30 y 90 horas, preferentemente entre 25 y 35 horas.

En una realización, la suspensión nanoparticulada comprende quitosano y condroitín sulfato en las siguientes concentraciones.

Quitosano en una concentración entre 0,1312 a 0,918 mg/mL aproximadamente, más preferentemente de 0,524 mg/mL aproximadamente.

Condroitín sulfato en una concentración entre 0,998 a 0,142 mg/mL aproximadamente, más preferentemente de 0,56 mg/mL. En una realización, la suspensión nanoparticulada comprende quitosano y ácido hialurónico en las siguientes concentraciones:

Quitosano en una concentración entre 0,1312 mg/mL a 0,918 mg/mL, más preferentemente de 0,524 mg/mL.

Acido hialurónico en una concentración entre 0,1 16 mg/mL a 0,83 mg/mL, más preferentemente de 0,464 mg/mL aproximadamente.

En una realización, la suspensión nanoparticulada comprende quitosano, condroitín sulfato y ácido hialurónico en las siguientes concentraciones:

Quitosano en una concentración entre 0,1312 mg/mL a 0,918 mg/mL aproximadamente, más preferentemente de 0,524 mg/mL aproximadamente.

Condroitín sulfato en una concentración de 0,294 mg/mL aproximadamente.

Acido hialurónico en una concentración de 0,232 mg/mL aproximadamente.

En una realización, la suspensión nanoparticulada comprende quitosano, condroitín sulfato y sulfadoxina, en las siguientes concentraciones:

Quitosano en una concentración de 0,118 mg/mL aproximadamente.

Condroitín sulfato en una concentración de 0,252 mg/mL aproximadamente.

Sulfadoxina en una concentración de 0,155 mg/mL aproximadamente.

En una realización, la suspensión nanoparticulada comprende quitosano, ácido hialurónico y fiumequina, en las siguientes concentraciones:

Quitosano en una concentración de 0,118 mg/mL aproximadamente.

Acido hialurónico en una concentración de 0,417 mg/mL aproximadamente.

Fiumequina en una concentración de 0, 131 mg/mL aproximadamente

En una realización preferida, la suspensión acuosa de nanopartículas que comprende quitosano y condroitín sulfato, posee un pH entre 4,0 y 6,0 más preferentemente de aproximadamente 5,0. En una realización preferida, la suspensión acuosa de nanopartículas que comprende quitosano y ácido hialurónico, posee un pH entre 4,0 y 6,0 más preferentemente de aproximadamente 5,0. En una realización preferida, la suspensión acuosa de nanopartículas que comprende quitosano, condroitín sulfato y ácido hialurónico, posee un pH entre 4,0 y 6,0 más preferentemente de aproximadamente 5,0.

La invención además provee un implante para uso humano o animal que comprende un material de acuerdo a la invención y uno o más excipientes, adyuvantes o vehículos fisiológicamente aceptables.

En una realización de la invención, el implante de la invención puede ser moldeado para cumplir con los requerimientos puntuales del paciente a tratar. El implante de acuerdo a la invención puede ser comprimido para aumentar su densidad. La compresión puede ser lograda mediante una prensa o dispositivos apropiados para alcanzar el grado de compresión o de grosor deseado. En una realización de la invención, se pueden proveer implantes que comprenden múltiples capas del material de acuerdo a la invención, las que se pueden formar mediante la superposición de una serie de capas de material comprimido.

La invención además provee un procedimiento para favorecer la regeneración de heridas o úlceras en humanos o animales, que comprende aplicar el material de la invención o un implante sobre el lecho de la herida una o más veces, y opcionalmente proteger el material sólido o el implante que comprende el mismo. El material de la invención no requiere ser retirado del lecho de la herida puesto que, luego de su aplicación, éste se adhiere integrándose rápidamente al tejido.

La invención además se refiere a un dispositivo médico o kit médico que comprende el material de la invención, junto con un instructivo de uso o de aplicación. Los ejemplos de realización que siguen, con el apoyo de las figuras adjuntas, tienen por objeto ilustrar la invención pero no son en ningún caso limitativos.

EJEMPLOS

Ejemplo 1: Preparación y caracterización del material.

a) Preparación de suspensión nanoparticulada

Muestra 1

A 10 mL de agua desionizada a pH 5.0, se agrega bajo agitación magnética, simultáneamente y gota a gota 1 mL de una solución de cloruro de quitosano (2,36 mg) con un porcentaje de desacetilación de 86%, disuelto en agua desionizada y 1 mL de una solución de condroitín sulfato (2,52 mg) disuelto en agua desionizada. Cada una de las soluciones de cloruro de quitosano y de condroitín sulfato son incorporadas sobre el agua desionizada en una tasa de adición de 0,88 mL/minuto aproximadamente en forma simulténa. A medida que se mezclan las soluciones de quitosano y condroitín sulfato en el volumen de agua, se forma una suspensión nanoparticulada de color blanquecino producto de la formación de los nanosistemas (ver figura

1).

Muestra 2

A 10 mL de agua desionizada a pH 5.0, se agrega bajo agitación magnética, simultáneamente y gota a gota 2 mL de una solución de cloruro de quitosano (4,72 mg) con un porcentaje de desacetilación de 86% disuelto en agua desionizada y 2 mL de una solución de condroitín sulfato (5,04 mg) disuelto en agua desionizada. Cada una de las soluciones de cloruro de quitosano y de condroitín sulfato son incorporadas sobre el agua desionizada en una tasa de adición de 0,88 mL/minuto en forma simulténa. A medida que se mezclan las soluciones de quitosano y condroitín sulfato en el volumen de agua, se forma una suspensión nanoparticulada de color blanquecino producto de la formación de los nanosistemas.

Muestra 3

A 10 mL de agua desionizada a pH 5.0, se agrega bajo agitación magnética, simultáneamente y gota a gota 3 mL de una solución de cloruro de quitosano (7,08 mg) con un porcentaje de desacetilación de 86% disuelto en agua desionizada y 3 mL de una solución de condroitín sulfato (7,56 mg) disuelto en agua desionizada. Cada una de las soluciones de cloruro de quitosano y de condroitín sulfato son incorporadas sobre el agua desionizada en una tasa de adición de 0,88 mL/minuto en forma simulténa. A medida que se mezclan las soluciones de quitosano y condroitín sulfato en el volumen de agua, se forma una suspensión nanoparticulada de color blanquecino producto de la formación de los nanosistemas.

Muestra 4

A 10 mL de agua desionizada, se agrega bajo agitación magnética, simultáneamente y gota a gota 4 mL de una solución de cloruro de quitosano (9,44 mg) con un porcentaje de desacetilación de 86% disuelto en agua desionizada y 4 mL de una solución de condroitín sulfato (10,08 mg) disuelto en agua desionizada. Cada una de las soluciones de cloruro de quitosano y de condroitín sulfato son incorporadas sobre el agua desionizada en una tasa de adición de 0,88 mL/minuto en forma simulténa. A medida que se mezclan las soluciones de quitosano y condroitín sulfato en el volumen de agua, se forma una suspensión nanoparticulada de color blanquecino producto de la formación de los nanosistemas.

Tabla I: Cantidades de quitosano y condroitín sulfato incorporadas para la formación de la suspensión nanoparticulada.

1 1 2,36 2,52 134

2 2 4,72 5,04 168

3 3 7,08 7,56 193

4 4 9,44 10,08 204

Como se puede apreciar en la Tabla I, independientemente del volumen utilizado en la formulación, los sistemas obtenidos presentan tamaño nanométrico.

Muestra 5

A 10 mL de agua desionizada a pH 5.0, se agrega bajo agitación magnética, simultáneamente y gota a gota 4 mL de una solución de cloruro de quitosano (9,44 mg) con un porcentaje de desacetilación de 86% di suelto en agua desionizada y 4 mL de una solución que contiene ácido hialurónico (16,68 mg) disuelto en agua desionizada. Cada una de las soluciones de cloruro de quitosano y de ácido hialurónico fueron incorporadas sobre el agua desionizada en una tasa de adición de 0,88 mL/minuto en forma simulténa. A medida que se mezclan las soluciones de quitosano y condroitín sulfato-ácido hialurónico en el volumen de agua, se forma una suspensión nanoparticulada de color blanquecino producto de la formación de los nanosistemas.

Muestra 6

A 10 mL de agua desionizada a pH 5,0, se agrega bajo agitación magnética, simultáneamente y gota a gota 4 mL de una solución de cloruro de quitosano (9,44 mg) con un porcentaje de desacetilación de 86% disuelto en agua desionizada y 4 mL de una solución que contiene condroitín sulfato (5,29 mg) y ácido hialurónico (4,18 mg) disuelto en agua desionizada. Cada una de las soluciones de cloruro de quitosano y de condroitín sulfato-ácido hialurónico fueron incorporadas sobre el agua desionizada en una tasa de adición de 0,88 mL/minuto en forma simulténa. A medida que se mezclan las soluciones de quitosano y condroitín sulfato-ácido hialurónico en el volumen de agua, se forma una suspensión nanoparticulada de color blanquecino producto de la formación de los nanosistemas.

Muestra 7

A 10 mL de agua desionizada a pH 5,0, se agrega bajo agitación magnética, simultáneamente y gota a gota 4 mL de una solución de cloruro de quitosano (2,12 mg) con un porcentaje de desacetilación de 86% disuelto en agua desionizada y 4 mL de una solución que contiene ácido hialurónico (7,51 mg) y flumequina (2,36 mg) disueltos en agua desionizada. Cada una de las soluciones de cloruro de quitosano y de ácido hialurónico-flumequina fueron incorporadas sobre el agua desionizada en una tasa de adición de 0,88 mL/minuto en forma simulténa. A medida que se mezclan las soluciones de quitosano y condroitín sulfato-ácido hialurónico en el volumen de agua, se forma una suspensión nanoparticulada de color blanquecino producto de la formación de los nanosistemas.

Muestra 8

A 10 mL de agua desionizada a pH 5,0, se agrega bajo agitación magnética, simultáneamente y gota a gota 4 mL de una solución de cloruro de quitosano (2,12 mg) con un porcentaje de desacetilación de 86% disuelto y sulfadoxina (2,79mg) en agua desionizada y 4 mL de una solución que contiene ácido hialurónico (4,54 mg) disuelto en agua desionizada. Cada una de las soluciones de cloruro de quitosano-sulfadoxina y de ácido hialurónico fueron incorporadas sobre el agua desionizada en una tasa de adición de 0,88 mL/minuto en forma simulténa. A medida que se mezclan las soluciones de quitosano y condroitín sulfato-ácido hialurónico en el volumen de agua, se forma una suspensión nanoparticulada de color blanquecino producto de la formación de los nanosistemas.

b) La suspensión nanoparticulada de acuerdo a la muestra 4 es congelada a una temperatura de -20°C utilizando un congelador por 12 horas.

c) Liofilización La composición congelada de acuerdo a la etapa b) que comprende nanopartículas es liofüizada de modo de obtener el material bajo las siguientes condiciones: temperatura condensador -50/- 60°C, vacío 0.02/0.06 mbar, tiempo de liofilización para 20 muestras -60 h.

La Figura 3 muestra la apariencia física del material liofilizado (muestra 4) en donde se puede apreciar que el material posee una estructura esponjosa y uniforme; también se puede apreciar que, a pesar de su muy bajo contenido en masa (aproximadamente 20 mg), se forma una estructura de un tamaño fácilmente manipulable (aproximadamente 2,5 cm de diámetro y aproximadamente 1 cm de alto).

En la Figura 4 se provee una imagen que representa la microestructura del material sólido, donde se observa que está formado por elementos fibrilares que dan origen a una malla tridimensional en la que se aprecian poros de tamaño heterogéneo.

En la figura 5, se evidencia que la compresibilidad del material sólido permite su fácil empaque, manipulación y transporte. Ejemplo 2: Capacidad del material para inducir la proliferación celular in vitro.

Una suspensión nanoparticulada es preparada de acuerdo al Ejemplo 1, muestra 4. Se toman 1 ,200 de dicha suspensión nanoparticulada y se vierten sobre una placa Elisa de 96 pocilios, ésta se liofiliza de modo de obtener un material sólido de tamaño adecuado (0,6 cm de diámetro) para ser depositado durante 5 días en placas de cultivo de 24 pocilios que contienen fibroblastos humanos (20000 células por pocilio) y una línea celular endotelial (EA.hy926, 20000 células por pocilio).

El material sólido ha sido evaluado, in vitro, en su capacidad para mantener un crecimiento adecuado de fibroblastos (ver figura 6a) y células endoteliales (ver figura 6b). En ambas figuras se puede apreciar que el material permite un perfil de crecimiento comparable con el correspondiente al crecimiento celular en la monocapa (control) que corresponde a un control positivo estándar altamente efectivo. Este resultado demuestra que el material no es tóxico y que facilíta la proliferación de manera comparable o igual al correspondiente control (monocapa).

Ejemplo 3: Evaluación de cierre de herida luego de la aplicación del material sólido en un modelo de heridas quirúrgicas abiertas en conejos. ,

Un material es elaborado de acuerdo a la muestra 4 del Ejemplo 1. En el modelo animal utilizado, en este caso conejo, se efectuaron heridas abiertas de espesor completo de piel del dorso, produciéndose una herida de forma circular de 1,5 cm de diámetro. Una vez extraída la piel y el tejido subcutáneo, se aplicó el material sólido (por una vez) sobre el lecho de la herida del hemidorso izquierdo (7 A, B) y se comparó el cierre sin la aplicación del material sólido en el hemidorso derecho (7A y C).

Ejemplo 4: Análisis histopatológico en un modelo de herida abierta en conejos luego de la aplicación del material sólido.

Un material es elaborado de acuerdo a la muestra 4 del Ejemplo 1. En el modelo animal (correspondiente a conejo) se realizaron heridas abiertas circulares de piel completa, de 1,5 cm de diámetro, donde se extrajo piel y tejido subcutáneo y luego se aplicó material sólido (por una vez) sobre el lecho de la herida (figura 8.1) y se comparó la histopatología del tejido con la de un control en donde no se aplicó el material (figura 8.2) luego de 14 días.

En la herida tratada (figuras 8.1 A y B) se observa por debajo de la costra (Sb) cierre de la epidérmis (Ep) y en la dermis tejido cicatricial con proliferación de fibroblastos, deposito de colágeno, vasos de neoformación (flechas) e infiltrado leucocitario residual (asterisco). Figura A, barra = ΙΟΟμιη. Figura B, barra= 500 μπι.

En la herida no tratada (figuras 8.2 A y B) se observa por debajo de costra (Sb) ulceración epidérmica con bordes de regeneración incompletos (flechas). En la dermis, edema abundante (estrella), infiltración leucocitaria (puntas de flechas), degeneración del colágeno y necrosis tisular (asterisco).

Ejemplo 5: Evaluación de la capacidad del material sólido para inducir el cierre de úlceras de las extremidades inferiores en pacientes diabéticos.

Un material es elaborado de acuerdo a la muestra 1 del Ejemplo 1. El material sólido es colocado sobre la herida, previamente desinfectada siguiendo protocolos clínicos estándares. Luego de su aplicación, la herida es cubierta con apositos usados comúnmente en el protocolo de curación avanzada de heridas según procedimiento estándar de curación de úlceras crónicas.

En la figura 9a se puede apreciar el aspecto de la herida antes de iniciarse el tratamiento, mientras que en la figura 9b se aprecia el aspecto de la herida una vez finalizado éste. Como se evidencia en la figura b, la herida cierra completamente luego de 32 días de tratamiento.

En los nanosistemas de la invención no se requiere el uso de agentes reticulantes que usualmente se utilizan en el estado del arte para aumentar la interacción entre los componentes y formar sistemas estables. La técnica utilizada evita la necesidad de estos agentes y aprovecha la presencia de los numerosos grupos funcionales con carga negativa del condroitín sulfato y del ácido hialurónico, lo que justifica su alta afinidad iónica por los grupos positivos del quitosano favoreciendo la formación de las nanopartículas estables. Esta ventaja técnica simplifica su elaboración y disminuye la necesidad de otros excipientes auxiliares que pueden comprometer la seguridad del vehículo y/o la del paciente.

Los técnicos especializados en la técnica apreciarán que la invención descrita aquí es susceptible de introducir variaciones y modificaciones distintas a las descritas específicamente. Se comprenderá que la invención incluye todas las mencionadas variaciones y modificaciones que puedan caer dentro de su espíritu y alcance. La invención incluye también todas las etapas, características, composiciones y compuestos referidos o indicados en esta memoria técnica, individual o colectivamente, y cualquiera y todas las combinaciones de cualquiera dos o más de las mencionadas etapas o funciones.

A través de esta memoria descriptiva y de las reivindicaciones que siguen, a menos que el contexto se refiera a lo contrario, la palabra "comprender", y variaciones tales como "comprende" y "comprendiendo", se entenderán como que implican la inclusión de una característica o etapa constatada o grupos de características o etapas, pero no la exclusión de cualquier otra característica o etapa o grupo de características o etapas.