この明細書において、「分岐デキストリン� ��とは、通常の澱粉を公知の方法で加水分解� ��て得られる、いわゆる通常のデキストリン� ��比べて、α-1,6グルコシド結合からなる分岐� ��造の割合が高いデキストリンを指す。
 本発明における「マルトース生成アミラー� ��の酵素単位」とは、5質量%デキストリン(PDx# 2(DE=11、数平均分子量=1700、平均重合度=10):松� ��化学工業社製)水溶液を基質として、pH5.5、� ��応温度55℃の反応条件下において、1分間に1 μmolのマルトースを生成する酵素力を1単位と したものである。また、「トランスグルコシ ダーゼの酵素単位」とは、1質量%メチル-α-D-� ��ルコピラノシド水溶液を基質として、pH5.5� �反応温度55℃の反応条件下において、1分間� �1μmolのグルコースを生成する酵素力を1単位� ��したものである。

 本発明における浸透圧とは、Brix10%に調整し た水溶液を氷点降下法により、浸透圧計測器 (VOGEL OM802-D)を用いて測定した値である。本� �明の分岐デキストリンの浸透圧は好ましく� �90~300mOSMOL/kg程度、より好ましくは100~200mOSMOL/ kgである。
 この明細書において、DEとは、「〔(直接還� ��糖(ブドウ糖として表示)の質量)/(固形分の� �量)〕×100」の式で表される値で、ウイルシ� �テッターシューデル法による分析値である� �本発明の分岐デキストリンのDEは10-52、好ま� ��くは10-40である。

 本発明の分岐デキストリンは、澱粉を公知� ��方法で加水分解して得たデキストリンにマ� ��トース生成アミラーゼとα-グルコシダーゼ� ��一種であるトランスグルコシダーゼを酵素� ��位比で2:1~44:1程度、好ましくは10:1~30:1にな� �よう調整したものを同時に添加して作用さ� �ることで調製することができる。酵素単位� �が2:1~44:1の範囲から外れると、消化を受けに くく、しかも浸透圧が低いという2つの性質� �兼ね備えた分岐デキストリンを調製するこ� �が困難になる。
 具体的には、まず、澱粉を公知の方法で加� ��分解してデキストリンを得る。原料となる� ��粉は、例えば、タピオカ澱粉、甘藷澱粉、� ��鈴薯澱粉などの地下澱粉、あるいはコーン� ��ターチ、ワキシコーンスターチ、米澱粉、� ��どの地上澱粉などを利用することができる� ��デキストリンのDEは好ましくは2~20程度、さ� ��に好ましくは5~12程度がよい。DEが低すぎる� ��溶液状態で保存した時に白濁する(老化する )要因となり、反対に高すぎると最終製品の� �透圧が高くなる要因となる。
 澱粉の加水分解の方法としては、α-アミラ� ��ゼ等による酵素分解、酸分解及びそれらの� ��み合わせがあり、いずれの方法も使用でき� ��が、工程の短縮化及び生成する分岐デキス� ��リンの低粘度化という点で酸分解が好まし� ��。酸としては、シュウ酸、塩酸、等が使用� ��きるが、シュウ酸が好ましい。例えば、タ� ��オカ澱粉の30質量%水溶液に粉末シュウ酸を� ��えてpH1.8~2.0に調整し、100~130℃で40~80分程度� ��理すれば良い。

 次に、デキストリン濃度を好ましくは20~50� �量%、より好ましくは20~40質量%、pHを好まし� �は4.0~7.0、より好ましくは5.5程度に調整する� ��これに、マルトース生成アミラーゼとトラ� ��スグルコシダーゼの酵素単位比が2:1~44:1程� �、好ましくは10:1~30:1になるよう調整したも� �を適量、例えば、デキストリン水溶液100質� �部に対して好ましくは0.1~1.0質量部程度添加� ��、好ましくは50~60℃、さらに好ましくは55℃ 程度で酵素反応を好ましくは0.25~44時間、さ� �に好ましくは0.5~3.0時間行う。
 次いで、反応混合物中の酵素の失活処理を� ��う。例えば、95℃で30分間処理するか、酸を 用いてpHを3.5以下に調整してマルトース生成� ��ミラーゼとトランスグルコシダーゼの酵素� ��応を終了させる。

 マルトース生成アミラーゼとしては市販品� ��使用でき、例えばビオザイムML(アマノエン� ��イム社製)やβ-アミラーゼ#1500S(ナガセケム� �ックス社製)はβ-マルトース生成アミラーゼ( β-アミラーゼ)であり、ビオザイムL(アマノエ ンザイム社製)はα-マルトース生成アミラー� �である。この内、ビオザイムLは老化安定性� ��優れた分岐デキストリンを生成するという� ��で好ましい。また、トランスグルコシダー� ��としては同様に市販品が使用でき、トラン� ��グルコシダーゼL「アマノ」(アマノエンザ� �ム社製)やトランスグルコシダーゼL-500(ジェ� ��ンコア協和社製)などがある。
 以上の酵素反応では、必要に応じてα-アミ� ��ーゼを同時に添加して作用させてもよいし� ��反応終了後に作用させてもよい。また、こ� ��らの酵素反応は遊離の酵素であっても、固� ��化された酵素であってもよい。固定化酵素� ��場合、反応方法はバッチ式及び連続式のい� ��れでもよい。固定化方法としては、担体結� ��法、包括法あるいは架橋法など、公知の方� ��を利用することができる。

 最後に、活性炭処理、珪藻土ろ過、イオ� ��交換樹脂等を用いた公知の方法で脱塩し、� ��縮後噴霧乾燥により粉末品とするか、70質� �%程度に濃縮して液状品とする。さらに、上� ��酵素反応液をクロマト分離装置や膜分離装� ��を用いて分画処理を行ない、浸透圧を上昇� ��せる低分子成分を必要最小限になるまで分� ��除去してもよい。

 このようにして得られる分岐デキストリン� ��、分子内に分岐構造及び/又は直鎖構造を有 する澱粉分解物(デキストリン)の非還元末端� ��、グルコース又はイソマルトオリゴ糖がα-1 ,6グルコシド結合で結合した構造を有し、且� ��DEが10-52である。そして、浸透圧が、好まし くは70~300mOSMOL/kg程度、より好ましくは100~200mO SMOL/kgである。
 さらに、非還元末端にグルコース又はイソ� ��ルトオリゴ糖がα-1,6グルコシド結合で結合� ��たグルコース、すなわち「→6)-Glcp-(1→」の 割合が、好ましくは5質量%以上、さらに好ま� ��くは8質量%以上、特に好ましくは10~30質量%� �あり、内部の分岐構造を有するグルコース� �すなわち「→4,6)-Glcp-(1→」の割合が、好ま� �くは5~13質量%、さらに好ましくは6~10質量%で� ��る。
 これらの結合の割合は、Hakomoriのメチル化� �を改変したCiucanuらの方法(Carbohydr. Res., 1984,  131, 209-217)により、確認できる。
 この分岐デキストリンは、消化吸収が緩や� ��で、従って低GIであり、しかも浸透圧が低� �ので、糖尿病対応栄養補給剤、ダイエット� �品、エネルギー補給食品及び栄養補助食品� �糖質源など、広範な医療食品及び食品分野� �の応用が期待できる。
 本発明の分岐デキストリンは、そのままの� ��態で上記栄養補給剤、食品として使用でき� ��が、好ましくは、経腸栄養剤、食事代替飲� ��、持続型エネルギー補給剤、ゼリー等に好� ��しくは10~50質量%、さらに好ましくは20~40質� �%程度含有させることが適当である。
 また、本発明の分岐デキストリンを経腸栄� ��剤、食事代替飲料、持続型エネルギー補給� ��、ゼリー等の前記飲食品、栄養補給剤に使� ��する場合、他の機能性食品素材、例えば難� ��化性デキストリンと併用すれば、その効果� ��一層高めることが期待できる。

 以下に実施例及び試験例を挙げて本発明を� ��体的に説明するが、本発明は以下の実施例� ��限定されるものではない。
 まず、β-アミラーゼとトランスグルコシダ� ��ゼの単位比が分岐デキストリンの性質、す� ��わち、消化を受けにくく、しかも浸透圧が� ��いという性質に及ぼす影響を調べるため、� ��施例1~3及び比較例1~4では、表1に示した酵素 単位比で分岐デキストリンを調製した。

実施例1(β-アミラーゼとトランスグルコシダ� ��ゼの単位比が分岐デキストリンの性質に及� ��す影響)
 デキストリン(PDX#1:松谷化学工業社製/DE=8)150 gを緩衝溶液(0.1Mリン酸緩衝液 (pH5.5))150gに溶� ��し、β-アミラーゼ(ビオザイムML:アマノエン ザイム社製)95単位およびトランスグルコシダ ーゼ(トランスグルコシダーゼL「アマノ」:ア マノエンザイム社製)45単位を同時に添加して 酵素単位比が2:1の条件とし、55℃で反応を開� ��させた。反応開始から90分後及び180分後に� �部をサンプリングし、それぞれ95℃で15分間� ��持して反応を停止させた。それぞれ珪藻土� ��過及び両性イオン交換樹脂(オルガノ社製)� �用いて脱塩し、浸透圧がそれぞれ108mOSMOL/kg� �び181mOSMOL/kgの分岐デキストリンを得た(DEは� �れぞれ15.3及び24.9)。

試験例1(in vitro消化性試験)
 得られた分岐デキストリンに対してin vitro� ��化性試験を行った。
 本発明におけるin vitro消化性試験とは、生� ��内における糖質消化性の模擬試験であり、E nglystら(European Journal of Clinical Nutrition、1992� ��46S33~S50)の方法に基づいた変法で、糖質(本� �明ではデキストリン)が酵素混合溶液(ブタ膵 臓アミラーゼおよびラット小腸粘膜酵素)に� �って分解を受けて放出されるグルコース量� �経時的に測定する試験である。
 使用するブタ膵臓アミラーゼはRoche社製(1923 0U/ml)を用いた。また、ラット小腸粘膜酵素は Sigma社製のラット小腸アセトンパウダーを以� ��の通りに調製して用いた。すなわち、ラッ� ��小腸アセトンパウダー1.2gを45mM Bis-Tris・Cl  Buffer(pH6.6)/0.9mMCaCl ₂  15mlで懸濁し、ホモジナイズした後、3000rpm� �10分遠心分離し、その上清をラット小腸粘膜 酵素の粗酵素液とした。粗酵素液の活性は26m Mマルトース溶液において1分間に1mmolのマル� �ースを分解する活性を1Uとして算出した。

 被検物質を緩衝溶液(45mM Bis-Tris・Cl Buffer(pH 6.6)/0.9mMCaCl ₂ )に溶解し、0.24質量%の被検物質溶液を調製し た。被検物質は、コントロールとして一般的 なデキストリン(TK-16:松谷化学工業社製/DE=18)� ��実施例1で得られた浸透圧が108mOSMOL/kgと181mOS MOL/kgの分岐デキストリンを使用した。これら の被検物質溶液2.5mlをそれぞれ試験管にとり� ��37℃の恒温槽で10分間加温したのち、酵素混 合溶液(ブタ膵臓アミラーゼ(384.6U/ml)50μl+ラッ ト小腸粘膜酵素(6.0U/ml)140μl+緩衝溶液310μl)0.5m lをそれぞれ添加し、よく混合して反応を開� �した。反応開始後15秒、10分、30分、1時間、1 .5時間、2時間、3時間、4時間、6時間後に反応 溶液200μlと0.5M過塩素酸50μlをそれぞれ混合し て反応を停止した。これらの反応停止溶液の グルコース濃度を、グルコースCIIテストワコ ー(和光純薬工業社製)を用いて定量した。図1 に示す結果から、実施例1で得られた分岐デ� �ストリンは2品共にTK-16に比べ、ブタ膵臓ア� �ラーゼとラット小腸粘膜酵素によって分解� �受けにくく、ゆっくり消化されることが確� �された。

実施例2(β-アミラーゼとトランスグルコシダ� ��ゼの単位比が分岐デキストリンの性質に及� ��す影響)
 デキストリン(PDX#1:松谷化学工業社製/DE=8)150 gを緩衝溶液(0.1Mリン酸緩衝液 (pH5.5))150gに溶� ��し、β-アミラーゼ(ビオザイムML:アマノエン ザイム社製)950単位およびトランスグルコシ� �ーゼ(トランスグルコシダーゼL「アマノ」:� �マノエンザイム社製)45単位を同時に添加し� �酵素単位比が21:1の条件とし、55℃で反応を� �始させた。反応開始から30分後及び180分後に 一部をサンプリングし、それぞれ95℃で15分� �保持して反応を停止させた。それぞれ珪藻� �濾過及び両性イオン交換樹脂(オルガノ社製) を用いて脱塩し、浸透圧がそれぞれ105mOSMOL/kg 及び189mOSMOL/kgの分岐デキストリンを得た(DEは それぞれ14.9及び26.9)。
 得られた分岐デキストリンに対して試験例1 と同様のin vitro消化性試験を行った。図2に� �す結果から、実施例2で得られた分岐デキス� ��リンは2品共にTK-16に比べ、ブタ膵臓アミラ� ��ゼとラット小腸粘膜酵素によって分解を受� ��にくく、ゆっくり消化されることが確認さ� ��た。

実施例3(β-アミラーゼとトランスグルコシダ� ��ゼの単位比が分岐デキストリンの性質に及� ��す影響)
 デキストリン(PDX#1:松谷化学工業社製/DE=8)150 gを緩衝溶液(0.1Mリン酸緩衝液 (pH5.5))150gに溶� ��し、β-アミラーゼ(ビオザイムML:アマノエン ザイム社製)1782単位およびトランスグルコシ� ��ーゼ(トランスグルコシダーゼL「アマノ」:� ��マノエンザイム社製)40.5単位を同時に添加� �て酵素単位比が44:1の条件とし、55℃で反応� �開始させた。反応開始から15分後及び90分後� ��一部をサンプリングし、それぞれ95℃で15分 間保持して反応を停止させた。それぞれ珪藻 土濾過及び両性イオン交換樹脂(オルガノ社� �)を用いて脱塩し、浸透圧がそれぞれ103mOSMOL/ kg及び178mOSMOL/kgの分岐デキストリンを得た(DE� ��それぞれ13.1及び23.8)。
 得られた分岐デキストリンに対して試験例1 と同様のin vitro消化性試験を行った。図3に� �す結果から、実施例3で反応90分後に得られ� �浸透圧178mOSMOL/kgの分岐デキストリンはTK-16に 比べ、ブタ膵臓アミラーゼとラット小腸粘膜 酵素によって分解を受けにくく、ゆっくり消 化されることが確認された。一方、浸透圧103 mOSMOL/kgの分岐デキストリンはコントロールで あるTK-16とほぼ同様であった。

比較例1(β-アミラーゼとトランスグルコシダ� ��ゼの単位比が分岐デキストリンの性質に及� ��す影響)
 デキストリン(PDX#1:松谷化学工業社製/DE=8)150 gを緩衝溶液(0.1Mリン酸緩衝液 (pH5.5))150gに溶� ��し、トランスグルコシダーゼ(トランスグル コシダーゼL「アマノ」:アマノエンザイム社� ��)のみを54単位添加し、55℃で反応を開始さ� �た。反応開始から60分後及び480分後に一部を サンプリングし、それぞれ95℃で15分間保持� �て反応を停止させた。それぞれ珪藻土濾過� �び両性イオン交換樹脂(オルガノ社製)を用い て脱塩し、浸透圧が106mOSMOL/kgと179mOSMOL/kgの分 岐デキストリンを得た(DEはそれぞれ14.6及び26 .8)。
 得られた分岐デキストリンに対して試験例1 と同様のin vitro消化性試験を行った。図4に� �す結果から、比較例1で得られた分岐デキス� ��リンはコントロールであるTK-16とほぼ同様� �あることが確認された。

比較例2(β-アミラーゼとトランスグルコシダ� ��ゼの単位比が分岐デキストリンの性質に及� ��す影響)
 デキストリン(PDX#1:松谷化学工業社製/DE=8)150 gを緩衝溶液(0.1Mリン酸緩衝液 (pH5.5))150gに溶� ��し、β-アミラーゼ(ビオザイムML:アマノエン ザイム社製)2970単位およびトランスグルコシ� ��ーゼ(トランスグルコシダーゼL「アマノ」:� ��マノエンザイム社製)22.5単位を同時に添加� �て酵素単位比が132:1の条件とし、55℃で反応� ��開始させた。反応開始から15分後及び60分後 に一部をサンプリングし、それぞれ95℃で15� �間保持して反応を停止させた。それぞれ珪� �土濾過及び両性イオン交換樹脂(オルガノ社� ��)を用いて脱塩し、浸透圧がそれぞれ124mOSMOL /kg及び184mOSMOL/kgの分岐デキストリンを得た(DE はそれぞれ17.1及び26.1)。
 得られた分岐デキストリンに対して試験例1 と同様のin vitro消化性試験を行った。図5に� �す結果から、比較例2で得られた分岐デキス� ��リンはコントロールであるTK-16とほぼ同様� �あることが確認された。

比較例3(β-アミラーゼとトランスグルコシダ� ��ゼの単位比が分岐デキストリンの性質に及� ��す影響)
 デキストリン(PDX#1:松谷化学工業社製/DE=8)150 gを緩衝溶液(0.1Mリン酸緩衝液 (pH5.5))150gに溶� ��し、β-アミラーゼ(ビオザイムML:アマノエン ザイム社製)2970単位およびトランスグルコシ� ��ーゼ(トランスグルコシダーゼL「アマノ」:� ��マノエンザイム社製)9単位を同時に添加し� �酵素単位比が330:1の条件とし、55℃で反応を� ��始させた。反応開始から15分後及び75分後に 一部をサンプリングし、それぞれ95℃で15分� �保持して反応を停止させた。それぞれ珪藻� �濾過及び両性イオン交換樹脂(オルガノ社製) を用いて脱塩し、浸透圧がそれぞれ125mOSMOL/kg 及び191mOSMOL/kgの分岐デキストリンを得た(DEは それぞれ17.0及び27.4)。
 得られた分岐デキストリンに対して試験例1 と同様のin vitro消化性試験を行った。図6に� �す結果から、比較例3で得られた分岐デキス� ��リンはコントロールであるTK-16とほぼ同様� �あることが確認された。

比較例4(β-アミラーゼとトランスグルコシダ� ��ゼの単位比が分岐デキストリンの性質に及� ��す影響)
 デキストリン(PDX#1:松谷化学工業社製/DE=8)150 gを緩衝溶液(0.1Mリン酸緩衝液 (pH5.5))150gに溶� ��し、β-アミラーゼ(ビオザイムML:アマノエン ザイム社製)4930.2単位およびトランスグルコ� �ダーゼ(トランスグルコシダーゼL「アマノ」 :アマノエンザイム社製)7.47単位を同時に添加 して酵素単位比が660:1の条件とし、55℃で反� �を開始させた。反応開始から15分後及び45分� ��に一部をサンプリングし、それぞれ95℃で15 分間保持して反応を停止させた。それぞれ珪 藻土濾過及び両性イオン交換樹脂(オルガノ� �製)を用いて脱塩し、浸透圧がそれぞれ143mOSM OL/kg及び194mOSMOL/kgの分岐デキストリン液状品� ��得た(DEはそれぞれ19.9及び29.6)。
 得られた分岐デキストリンに対して試験例1 と同様のin vitro消化性試験を行った。図7に� �す結果から、比較例4で得られた分岐デキス� ��リンはコントロールであるTK-16とほぼ同様� �あることが確認された。
 以上の実施例1~3及び比較例1~4で得られた分� ��デキストリンについて行ったin vitro消化性� ��験より得られた消化性の評価結果を表2にま とめた。

*:β-アミラーゼ **:トランスグルコシダーゼ
 表2より、β-アミラーゼとトランスグルコシ ダーゼの酵素単位比が2:1~44:1の範囲では、消� ��を受けにくく、しかも浸透圧が低いという2 つの性質を兼ね備えた分岐デキストリンを得 ることができるが、酵素単位比が2:1~44:1の範� ��外では同様の分岐デキストリンを得ること� ��できないことが確認された。

実施例4(基質濃度が分岐デキストリンの性質� ��及ぼす影響および反応効率に及ぼす影響)
 基質となるデキストリン(PDX#1:松谷化学工業 社製/DE=8)150gを、それぞれ基質濃度が20質量%� �30質量%、40質量%、50質量%、60質量%になるよ� �に緩衝溶液(0.1Mリン酸緩衝液 (pH5.5))を用い� �溶解し、それぞれにβ-アミラーゼ(ビオザイ� ��ML:アマノエンザイム社製)950単位およびトラ ンスグルコシダーゼ(トランスグルコシダー� �L「アマノ」:アマノエンザイム社製)45単位を 同時に添加して酵素単位比が21:1の条件とし� �55℃で反応を開始した。各基質濃度における 反応時間と得られた分岐デキストリンの浸透 圧及びDEを表3に示す。

 表3に示す条件で得られた分岐デキストリン に対して試験例1と同様のin vitro消化性試験� �行った。図8に示す結果から、得られた分岐� ��キストリンは何れの基質濃度条件であって� ��、TK-16に比べ、ブタ膵臓アミラーゼとラッ� �小腸粘膜酵素によって分解を受けにくく、� �じ程度にゆっくり消化されることが確認さ� �た。
 表3と図8の結果より、何れの基質濃度にお� �ても、消化を受けにくく、しかも浸透圧が� �いという2つの性質を兼ね備えた分岐デキス� ��リンを製造できることが確認された。また� ��基質濃度が低いほど、反応時間が短く、反� ��効率が良いことが確認された。

実施例5(酵素添加量が分岐デキストリンの性� ��に及ぼす影響)
 デキストリン(PDX#1:松谷化学工業社製/DE=8)125 gを緩衝溶液(0.1Mリン酸緩衝液(pH5.5))125gに溶解 し、表4の条件1、2に示した単位の酵素(β-ア� �ラーゼとトランスグルコシダーゼの酵素単� �比はいずれも21:1であるが添加量が違う)をそ れぞれ同時に添加し、55℃で反応を開始させ� ��。条件1は反応開始から44時間後及び条件2は 反応開始から2.5時間後に一部をサンプリング し、それぞれ95℃で15分間保持して反応を停� �させた。それぞれ珪藻土濾過及び両性イオ� �交換樹脂(オルガノ社製)を用いて脱塩し、浸 透圧がそれぞれ188mOSMOL/kgと193mOSMOL/kgの分岐デ キストリン液状品を得た(DEはそれぞれ27.6及� �28.3)。

*:ビオザイムML:アマノエンザイム社製
**:トランスグルコシダーゼL「アマノ」:アマ� ��エンザイム社製

 表4に示す反応条件で得られた分岐デキスト リンに対して試験例1と同様のin vitro消化性� �験を行った。図9に示す結果から、得られた� ��岐デキストリンは何れの酵素添加量であっ� ��も、TK-16に比べ、ブタ膵臓アミラーゼとラ� �ト小腸粘膜酵素によって分解を受けにくく� �同じ程度にゆっくり消化されることが確認� �れた。
 しかし、酵素単位比を同じにして酵素添加� ��を減らすと、所望の浸透圧の分岐デキスト� ��ンの生成に要する時間が増加することが確� ��された。

実施例6(マルトース生成アミラーゼの種類が� ��岐デキストリンの性質に及ぼす影響)
 デキストリン(PDX#1:松谷化学工業社製/DE=8)125 gを緩衝溶液(0.1Mリン酸緩衝液 (pH5.5))125gに溶� ��し、表5の条件1、2に示した酵素(マルトース 生成アミラーゼは950単位、トランスグルコシ ダーゼは45単位、すなわちそれぞれの単位比� ��21:1になるように)を同時に添加し、55℃で反 応を開始させた。条件1、2共に反応開始から1 .5時間後、それぞれ95℃で15分間保持して反応 を停止させた。それぞれ珪藻土濾過及び両性 イオン交換樹脂(オルガノ社製)を用いて脱塩� ��、浸透圧がそれぞれ143mOSMOL/kgと145mOSMOL/kgの� ��岐デキストリン液状品を得た(DEはそれぞれ2 1.2及び21.2)。

*ビオザイムML(アマノエンザイム社製)
**ビオザイムL(アマノエンザイム社製)
***トランスグルコシダーゼL「アマノ」(アマ� ��エンザイム社製)
 表5の反応条件で得られた分岐デキストリン に対して試験例1と同様のin vitro消化性試験� �行った。図10に示す結果から、得られた分岐 デキストリンは何れの条件であっても、TK-16� ��比べ、ブタ膵臓アミラーゼとラット小腸粘� ��酵素によって分解を受けにくく、同じ程度� ��ゆっくり消化されることが確認された。

(老化安定性試験)
 次に、実施例6で得られた表5の分岐デキス� �リン溶液に対して「老化安定性試験」を行� �た。本発明における「老化安定性試験」と� �、Brix50%に調整した溶液を-20度にて冷凍した� ��、室温で解凍し、Brix30に調整した後、分光� ��度計にて溶液の濁度(OD720nm、1cmセル換算)を� ��定する。この操作を、溶液の濁度が上昇す� ��まで、あるいは5回繰り返して溶液の濁度を 測定する方法である。この方法では、老化安 定性が悪いデキストリンは5回繰り返す前に� �液の濁度が上昇するが、老化安定性が良い� �キストリンは5回繰り返しても溶液の濁度は� ��昇しないことで評価される。老化安定性試� ��の結果を表6に示した。表6の結果より、条� �2のα‐マルトース生成アミラーゼを作用さ� �て得られた分岐デキストリンの方が老化安� �性に優れていることが確認された。

実施例7(原料となるデキストリンのDEが分岐� �キストリンの性質に及ぼす影響)
 タピオカ澱粉を表7に示す公知の分解方法で 分解し、表7に示すDEまで分解したデキストリ ン125gを緩衝溶液(0.1Mリン酸緩衝液 (pH5.5))125g� ��溶解し、それぞれにα-マルトース生成アミ� ��ーゼ(ビオザイムL:アマノエンザイム社製)950 単位およびトランスグルコシダーゼ(トラン� �グルコシダーゼL「アマノ」:アマノエンザイ ム社製)45単位、すなわち酵素単位比が21:1に� �るように調製したものを同時に添加し、表7� ��示した時間作用させ、95℃で15分間保持して 反応を停止させた。それぞれ珪藻土濾過及び 両性イオン交換樹脂(オルガノ社製)を用いて� ��塩し、表7に示した浸透圧の分岐デキストリ ン液状品を得た。

 表7に示す条件で得られた分岐デキストリン に対して試験例1と同様のin vitro消化性試験� �行った。図11に示す結果から、得られた分岐 デキストリンは何れの条件であっても、TK-16� ��比べ、ブタ膵臓アミラーゼとラット小腸粘� ��酵素によって分解を受けにくく、同じ程度� ��ゆっくり消化されることが確認された。
 次に、得られた表7の分岐デキストリン溶液 に対して実施例6と同様の老化安定性試験を� �った。表8の結果より、いずれの条件であっ� ��も分岐デキストリンの老化安定性は良いこ� ��が確認された。

(粘度測定)
 実施例7で得られた表7の分岐デキストリン� �液に対して「粘度」を測定した。本発明に� �ける「粘度」とは、VISCOMETER MODEL BMにより� �下の条件で測定する。濃度:30質量%、測定温� ��:30℃、回転数:60rpm、ホールド時間:30秒。
 表9の結果より、条件4でDE11.9まで分解した� �料を用いて得られた分岐デキストリンが最� �粘度が低いことが確認された。

実施例8(低DEの分岐デキストリンの調製及び� �の性質)
 タピオカ澱粉を公知の分解方法で分解して� ��られたDE=5.2のデキストリン135gを緩衝溶液(0. 1Mリン酸緩衝液 (pH5.5))265gに溶解し、α-マル� �ース生成アミラーゼ(ビオザイムL:アマノエ� �ザイム社製)210単位およびトランスグルコシ� ��ーゼ(トランスグルコシダーゼL「アマノ」:� ��マノエンザイム社製)10単位、すなわち酵素� ��位比が21:1になるように調製したものを同時 に添加して反応を開始させた。15、30、45、90� ��び135分後、それぞれ50gを採取して95℃で15分 間保持して反応を停止させた。それぞれ珪藻 土濾過及び両性イオン交換樹脂(オルガノ社� �)を用いて脱塩し、浸透圧がそれぞれ53、61、 73、101及び141mOSMOL/kgの分岐デキストリン液状� ��を得た(DEはそれぞれ8.3、9.5、10.9、14.4及び20 .0)。
得られた分岐デキストリンに対して試験例1� �同様のin vitro消化性試験を行った。図12に示 す結果から、DE=10.9以上の分岐デキストリン� �、TK-16に比べ、ブタ膵臓アミラーゼとラット 小腸粘膜酵素によって分解を受けにくく、ゆ っくり消化されることが確認された。一方、 DE=9.5以下の分岐デキストリンはコントロール であるTK-16とほぼ同様であることが確認され� ��。

実施例9(分岐デキストリンの分岐度分析)
 本発明により製造したデキストリンの結合� ��式を測定するため、Ciucanuらの方法に従って メチル化分析を行った。実施例7の条件4で調� ��した浸透圧が140mOSMOL/kgの分岐デキストリン( DE=20.7)、同条件で18時間反応させて調製した24 4mOSMOL/kgの分岐デキストリン(DE=37.2)、及びデ� �ストリン(TK-16:松谷化学工業社製/DE=18)のメチ ル化分析の結果を表10に示す。この結果より� ��本発明の製造方法で調製された分岐デキス� ��リンはデキストリンに対し、分岐構造であ� ��1→6結合を持つグルコース「→6)-Glcp-(1→」� ��び「→4,6)-Glcp-(1→」の内、「→4,6)-Glcp-(1→� ��の割合が増加していた。さらに、デキスト� ��ンには全く含まれない「→6)-Glcp-(1→」(非� �元末端に1,6結合で結合したグルコース)が新� ��に形成されていた。

※例えば、「→4)-Glcp-(1→」は1,4位でグルコ� �ド結合していたグルコースを示す。

実施例10(分岐デキストリンのヒトにおける消 化性試験)
 健常成人男女11名(平均年齢34.3±1.1歳)には試 験前日午後9時以降水以外の飲食を禁止した� �実施例7の条件4で調製した浸透圧が140mOSMOL/kg の分岐デキストリン又はデキストリン(グリ� �ターP:松谷化学工業社製/DE=15)各50gを水200mLに 溶解して試料とし、試験当日午前9時に摂取� �せた。試料摂取前、摂取30、60、90、及び120� �後にそれぞれ指先からヘマトクリット管へ� �血し、血清グルコース濃度を測定した。
 試料摂取前の血糖値を0として、摂取後の血 糖値の上昇量を図13に示し、その曲線下面積( AUC)を図14に示した。分岐デキストリン摂取後 の血糖値上昇量はデキストリンに比べて少な い傾向にあった。分岐デキストリンのAUCは、 t検定においてデキストリンより有意に低く� �デキストリンのAUCを100とした場合の分岐デ� �ストリンのAUC、すなわちグリセミックイン� �ックス(GI)は78であった。これより分岐デキ� �トリンはデキストリンよりもヒトでの消化� �収が緩やかであることが明らかとなった。� �の結果より、分岐デキストリンは低GIが求め られる食品(糖尿病患者の栄養補給剤、ダイ� �ット食品、エネルギー補給飲料、栄養補助� �品など)への利用が可能であると考えられた� ��また、消化吸収が緩やかであることから、� ��ネルギー持続型食品(ダイエット食品、スポ ーツドリンクなど)への利用が可能であると� �えられた。

実施例11(腹持ち試験)
 被験者は健常成人男女10名(平均年齢33.8±1.1� ��)とし、試験前日午後9時以降水以外の飲食� �禁止した。試験当日、被験者は朝食を摂ら� �い状態で安静の保てる試験室に集合させた� �実施例7の条件4で調製した浸透圧が140mOSMOL/kg の分岐デキストリンまたはデキストリン(グ� �スターP:松谷化学工業社製/DE=15)各50gを水200mL に溶解し、午前9時に被験者に摂取させた。� �取前、および摂取3時間後まで30分おきに空� �感を以下の5段階にて評価させた。
スコア5:空腹感を感じない
スコア4:少し空腹感を感じる
スコア3:空腹を感じる
スコア2:強く空腹を感じる
スコア1:空腹で耐えられない
 空腹感の評価結果を図15に示した。図15より 、分岐デキストリンはデキストリンよりも長 い時間空腹感が少なく、腹持ちが良いという 結果が得られた。これより、分岐デキストリ ンは腹持ち感やエネルギー持続が求められる 食品(糖尿病患者の栄養補給剤、ダイエット� �品、エネルギー補給飲料、栄養補助食品な� �)への利用が可能である。

実施例12(経腸栄養剤の調製)
 表11の処方に従って実施例2の浸透圧が105mOSM OL/kgの分岐デキストリンを含む経腸栄養剤を� ��製し、良好な製品を得た。

実施例13(食事代替飲料の調製)
 表12の処方に従って実施例2の浸透圧が105mOSM OL/kgの分岐デキストリンを含む食事代替用の� ��料を調製し、良好な製品を得た。

*1 築野食品工業株式会社製
*2 旭化成株式会社製(アビセルCL‐611S)
*3 三菱化学フーズ株式会社製(シュガーエス� ��ルP‐1670)
*4 武田薬品工業株式会社製(新バイリッチWS� �7L)
*5 高田香料株式会社製(カスタードバニラエ� ��センスT‐484)

実施例14(エネルギー飲料の調製)
 表13の処方に従って実施例2の浸透圧が105mOSM OL/kgの分岐デキストリンを含むエネルギー飲� ��を調製し、良好な製品を得た。

* 高田香料株式会社製(グレープフルーツエ� �センス#2261)

実施例15(ゼリーの調製)
 表14の処方に従って実施例2の浸透圧が105mOSM OL/kgの分岐デキストリンを含むゼリーを調製� ��、良好な製品を得た。

*1 大日本製薬株式会社製(ケルコゲル)
*2 雄山商事株式会社製
*3 高田香料株式会社製(マスカットエッセン� ��#50631)