本发明涉及提高抗肿瘤活性的新型喜树碱类化 合物， 以及制备这些化合 物的方法和它们的用途。 更具体地说， 涉及具有以下结构的新型喜树碱类衍 生物 (1)， 以及它们的制备方法， 和这些化合物在抗肿瘤领域中的应用。

背景技术

喜树碱 (CPT)是一种生物碱， 1966年有美国科学家 Wall由中国特有的植 物喜树中分离得到的， 喜树碱对大鼠白血病 L1210系统有显著的活性。 喜树 碱在结构上是一种含有吡啶酮结构的生物碱， 具体的结构如下所示， 化合物

在此结构中含有一个五环结构，在其结构中 E环为一个六元环的内酯环， 在内酯环上含有一个绝对构型为 S的 α羟基。 在分离出喜树碱之后， 由于其 具有良好的抗白血病 L1210活性， 引起人们很大的兴趣。

随后， 喜树碱的一系列衍生物由于其独特的生物活性 机制和良好的药物 特性， 逐步成为已经上市或处于不同的研发阶段的抗 癌新药， 如 10-羟基喜 树碱 (化合物 2)， 在中国已广泛地应用于临床； 10-羟基 -9-二甲胺基甲基喜树 碱 (化合物 3， 托泊替康 (Topotecan))于 1996年上市， 用作卵巢癌病人的二线 治疗药物； 化合物 4(SN-38)具有极好的抗肿瘤活性， 其水溶性前药伊立替康 (Irinotecan，（化合物 5)于 1994年上市， 用于结直肠癌的治疗； 2005年贝洛替 康（Belotecan, 化合物 6)在韩国获准上市， 用于治疗前列腺癌。

另外， 还有许多喜树碱类衍生物已经进入不同的临床 测试阶段， 但现有 的结构表明这些化合物的疗效均不如托泊替康 和伊立替康。 因此需要发明疗 效更好的喜树碱新型衍生物。

现有的喜树碱类药物具有内酯环不稳定的缺点 ， 其在生理条件下内酯环 将打开成为没有活性的结构形式， 带来了疗效降低， 毒性加强等严重问题， 如下反应式所示：

为解决这个问题， 有人提出了高喜树碱的解决方案， 得到的化合物 7(Diflomotecan)具有很好的抗肿瘤活性， 进入了 III期临床研究， 然而其内酯 环在生理条件下成开环形式后不能再转化回去 ， 临床失败。如下反应式所示:

(7) 因此， 还需开发内酯环稳定的喜树碱类新化合物。 发明内容

本发明的目的是寻找一类新型含有 7元内酯环的喜树碱类化合物及其药 学上可接受的盐，这种化合物具有内酯环稳定 的特点，使其具有毒副作用小、 活性强的优点。

本发明的另一目的是提供一种制备所述新型喜 树碱类化合物及其药学上 可接受的盐的方法。

本发明的另一目的是提供一种用于治疗癌症的 组合物， 该组合物包含治 疗有效量的一种或多种所述新型喜树碱类化合 物及其药学上可接受的盐以及 药学上可接受的载体。所述药学上可接受的盐 包括但不限于该化合物与盐酸、 硫酸、 磷酸、 甲磺酸、 琥珀酸、 马来酸、 富马酸、 酒石酸、 柠檬酸等的加成 ±卜 本发明的再一目的是提供一种所述喜树碱类化 合物及其药学上可接受的 盐在制备抗肿瘤药物中的应用。 更具体地， 提供了一种所述喜树碱类化合物 及其药学上可接受的盐在制备治疗结肠癌或肺 癌的药物中的应用。 按有机化合物知识，在羧基的 a位引入吸电子基团可以增加羧基的酸性， 本发明采用在高喜树碱的 20a位引入羟基、 垸氧基、 或者酯基等基团， 结果 发现这类化合物可以提高内酯环稳定性， 具有很好的抗肿瘤活性。

本发明是关于喜树碱新型衍生物， 这些化合物是在高喜树碱类衍生物的 20a位引入羟基、 垸氧基、 或者酯基基团。 它们具有更好的抗肿瘤活性。 本发明所述的含有 7元内酯环的喜树碱类化合物及其药学上可接� �的盐 的具体结构如通式 (I)所示：

其中，

!^为11、 C1~C3的垸基、 乙酰基或丙酰基； 优选为 H或乙酰基；

R ₂ 为 H、 C1-C6的垸基、 C3〜C6环垸基、哌啶基、或由氨基取代的 C1~C6 的垸基； 优选为 H或 C1~C3的垸基； 更优选为 H或乙基；

为11、(：1〜 3的垸基、或由氨基取代的 C1~C6垸基；优选为 H或 C1~C3 的垸基；

! ₄ 为 11、 羟基、 或 C1~C6的垸氧基； 优选为 H、 羟基、 或 C1~C3的垸 氧基； 更优选为11、 羟基、 或甲氧基；

为11、 或 C1~C6的垸氧基； 优选为 H或 C1~C3的垸氧基； 更优选为

H;

或者， R ₄ 和 R ₅ 彼此连接形成 -OCH ₂ O-或 -OCH ₂ CH ₂ O-。

所述含有 7元内酯环的喜树碱类化合物及其药学上可接� �的盐优选为：

本发明提供了一种所述的含有 7元内酯环的喜树碱类化合物及其药学上 可接受的盐的制备方法， 该方法包括如下步骤：

其中， Rl、 R2、 R3、 R4和 R5的定义如前所述， 但 R1不为 H;

其中， 通式 IV的化合物可按照文献 1 ) The Journal of Organic Chemistry 2000， 65, 5212； 2 ) Tetrahedron 1997, 53, 10953文献所报道的方法制备。

i)在碱作用条件下， 化合物 Π与化合物 IV发生 N-垸基化反应得到化合 物 V； 碱为叔丁醇钾、 叔丁醇钠或氢化钠等， 优选为叔丁醇钾， 反应溶剂为 四氢呋喃、 二甲基甲酰胺或乙二醇二甲醚等， 优选为乙二醇二甲醚。

ii)在钯催化条件下， 化合物 V进行 Heck反应， 制得通式 I所示化合物； 其中钯催化剂为醋酸钯或氯化钯， 优选为醋酸钯； 反应需要磷配体， 可为三 苯基磷、 三 （邻甲基苯基） 磷、 三叔丁基磷或三环己基磷； 反应用碱为碳酸 钾、 醋酸钾或碳酸钠等， 优选为醋酸钾； 反应溶剂为乙腈、 二甲基甲酰胺或 甲苯， 优选为乙腈。

iii)非必须地，当 R1为乙酰基时，通式 I所示化合物水解得到化合物 1-1。 所述中间体化合物 II通过如下方法制备：

其中， Rl如前所述， 但不为 H;

起始原料化合物 8可以按照我们已申请的专利制备 (参见，中国专利申请 200910054400.X);

1)在碱的条件下， 化合物 8和溴苄或氯苄发生醚化反应， 生成化合物 9; 反应溶剂为四氢呋喃、 甲苯、 或 N，N-二甲基甲酰胺等； 反应中可采用无机碱 或有机碱， 例如， 氢化钠、 氢氧化钠、 碳酸钾、 三乙胺或二乙基异丙基胺； 优选为氢化钠； 反应温度为 0-100°C， 优选为室温；

2)化合物 9在酸的作用下， 水解制得化合物 10; 本步骤所采用的酸为稀 盐酸 (1N-12N)或者稀硫酸 (10重量％-45重量％)； 本步骤使用溶剂为甲醇、 乙 醇、异丙醇或者四氢呋喃，优先选用甲醇为溶 剂；本步骤反应温度为 20-60°C ;

3)化合物 10在氧化剂的作用下， 发生氧化反应制得化合物 11 ; 本步骤 使用的氧化剂为： （i)次氯酸钠、 亚氯酸钠及 2，2，6，6-四甲基哌啶氧化物 (TEMPO); 或 (ii)次氯酸钠、 亚氯酸钠及 N-甲基吗啉氧化物 (NMO)， 优先选 用 (i)为氧化体系。 本步骤使用的溶剂为饱和磷酸二氢钾的四氢呋 喃溶液、 饱 和磷酸二氢钾的叔丁醇溶液、 饱和磷酸二氢钾的乙腈溶液， 优先选用饱和磷 酸二氢钾的四氢呋喃溶液为反应溶剂； 本步骤反应温度为 20-55°C ; 4)在催化加氢体系的作用下， 化合物 11脱去苄基保护基得到化合物 12; 本步骤所述催化体系为： 采用 Pd/C或者 PtO ₂ 加氢反应脱除保护基， 优先选 用 Pd/C为金属催化剂， 溶剂为甲醇或者乙醇； 反应温度为 20-60 °C ;

5)化合物 12在酸催化下成内酯环化合物 13 ; 本步骤所述的酸为三氟醋 酸； 本步骤所使用溶剂为无水四氢呋喃、 无水二氯甲垸、 无水甲醇、 或无水 乙醇， 优选为甲醇； 本步骤反应温度为 0-40 °C ;

6)当 R1为 C1-C3垸基时，在碱的作用下，化合物 13与溴代或氯代 C1-C3 垸烃进行醚化反应， 得到化合物 III； 醚化反应采用的碱为氢化钠， 反应溶剂 为四氢呋喃或 N，N-二甲基甲酰胺等；

当 R1为乙酰基或丙酰基时， 在碱的作用下， 化合物 13与相应的酸酐或 酰氯进行酰化反应得到化合物 III； 其中， 酰化反应采用相应的酸酐或酰氯为 乙酸酐、 丙酸酐、 乙酰氯或丙酰氯， 本步骤中使用的碱为有机碱或无机碱， 其中有机碱为三乙胺、 二异丙基乙胺、 或吡啶， 无机碱选自碱金属和碱土金 属的氢氧化物中的一种或多种， 例如， 选自碳酸盐和碳酸氢盐中的一种或多 种； 其中， 优先选用有机碱为反应试剂；

7)当1^为乙酰基、 丙酰基时， 在三甲基碘硅垸、 三溴化硼、 或四氯化硅 (优先选用三甲基碘硅垸） 的作用下， 化合物 III脱去甲基得到 2-吡啶酮关 键中间体化合物 II； 使用溶剂为乙腈、 二氯甲垸， 优先选用乙腈为反应溶剂; 本步骤反应温度为 20-50°C ;

当！^为 C1~C3的垸基时，在盐酸 (1-12N)的作用下，化合物 III脱去甲基 得到制得中间体化合物 II。

本发明所涉及的化合物具有良好的抗肿瘤活性 ，在临床上可以进行口服、 静脉注射、 肌肉注射等方式应用。

具体实施方式 本发明的新型喜树碱类衍生物和制备方法在如 下实施例中更详细地叙 述， 但实施例不构成对本发明的限制。

实施例 1: 制备 4-{[(lS)-l-苄氧基】-l-[(4R)-2,2-二甲基 -[1,3】二氧戊环 -4- 基】 -丙基 }-3-苄氧基 -2-甲氧基 -吡啶 （化合物 9)

氮气保护下， 60ml无水 THF中， 2.0g化合物 8与 0.5g氢化钠先室温下 反应一段时间后， 加入 1.5ml苄溴， 加热回流 lh后， 停止反应，冷却至室温， 后加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应， 乙酸乙酯萃取， 合并有机相， 水洗， 饱 和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸 得到粗产品， 能后柱层析的 2.8g 无色液体。 产率： 87.5%.

1HNM (CDCl ₃ )(ppm)0.87(3H,t),1.35(6H,s),2.20(lH,m),2.31(lH,m),3.87 (l H,t),3.96 (3H,s), 3.99 (ΙΗ,ΐ), 4.45(2H,s), 4.88(lH,d), 4.68(2H, t)， 4·80(1Η， t)， 4.88(lH,d), 7.12(lH,d), 7.12-7.34(10H，m)，8.10(lH，d)。

实施例 2: 制备 (2R,3S)-3-苄氧基 -3-(3-苄基甲氧基 -2-甲氧基 -吡啶 -4-基) - 戊烷 -1， 2-二醇 (化合物 10)

室温下， 把化合物 9溶于 50ml甲醇中， 然后滴加入 6ml的 3N盐酸， 室 温下继续反应一段时间后， 停止反应， 旋蒸掉甲醇后， 乙酸乙酯萃取， 合并 乙酸乙酯， 水洗， 饱和食盐水洗， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 旋蒸得粘稠状固 体 2.1g， 产率 92.1%。

1HNM (CDC1 ₃ ) (ppm) 0.90 (3H,t), 2.16 (lH,m), 2.30(lH,s, br)， 2.45 (lH,m), 3.31(lH, m)， 3.54(lH,m), 3.93 (3H,s), 3.99(1H, s， br)， 4.11 (lH,m), 4.35(lH,d), 4.44(lH,d), 4.53(1H, d)， 4·67(1Η， d)， 4·74(1Η， d)， 4.96(lH,d), 6.88(lH,d), 7.26-7.42(10H, m), 8.09(lH，d)。

实施例 3:制备 (2S,3S)-3-苄氧基 -3-(3-苄氧基甲基 -2-甲氧基 -吡啶 -4-基) -2- 羟基 -戊酸 (化合物 11) 化合物 10(13.37g)溶于 65ml的饱和磷酸二氢钾的乙腈溶液中，室温下� � 体系中加入 5.6g亚氯酸钠， 1.3g 2,2,6,6-0甲基哌啶氧化物以及 2.6ml次氯酸 钠水溶液， 反应 3-4h后， 倒入 120ml水中， 二氯甲垸萃取， 合并有机相， 水 洗， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤旋蒸得 12.1g粗产品， 无需纯 化， 直接投入下步反应中， 产率 98.5%。

1HNM (CDC1 ₃ ) (ppm) 0.88(3H,t), 2.42(1H, m)， 2.63(lH,s), 3.93 (3H,s), 4.20(2H, m)， 4.55(3H, m)， 4·77(1Η， d)， 4.92(lH,d), 6.88(lH,d), 7.26-7.42(10 H， m)， 8.09(lH，d)。

实施例 4:制备 (2S,3S)-2,3-二羟基 -3-(3^甲基 -2-甲氧基 -吡啶 -4-基) -戊酸 (化合物 12)

上步反应的产物（12.2g)溶于 120ml无水甲醇中， 加入 1.3g Pd/C(10%)， 室温常压下加氢反应 12h， 过滤， 滤饼用甲醇洗涤 2-3次， 合并溶液， 旋蒸 得粗产品 6.6g， 产率： 90%， 无需纯化， 直接投入下步反应中。

1HNM (CDC1 ₃ ) (ppm) 0.88(3H,t), 1.85(2H,m), 2.32(lH,s), 2.42(1H, s)， 2.63(lH,s), 3.93 (3H,s), 4.66(1H, m)， 4.80(2H,s), 6.72(lH，d)，7.98(lH，d)。

实施例 5： 制备 (5S,6R)-5-乙基 -5,6-二羟基 -1-甲氧基 -5,9-二氢 -6H-8-氧杂 - ² -氮杂 -苯并环庚埽 - ⁷ -酮（化合物 I ³ )

上步反应的产物 （6.6g) 溶于 100ml甲醇中， 向体系中加入 4ml三氟乙 酸， 室温下反应 24h， 旋蒸， 得粗产品 6.5g， 无需纯化， 直接投入下步反应 中。

实施例 6: 制备 (5S,6R)-5-乙基 -5-羟基 -1-甲氧基 -7-氧杂 -5,6,7,9-四氢 -8- 氧杂 -2-氮杂 -苯并环庚埽 -6-基乙酸酯（结构式 III， CH ₃ CO )

化合物 13(8.5g)、 对二甲氨基吡啶 (0.82g)、 三乙胺 (8.4ml)溶于 100ml无 水二氯甲垸中， 冰水下冷却至 0°C后， 向体系中慢慢滴入乙酰氯 (4.4ml)， 滴 完后移至室温下反应 2h， 然后向体系中加入 50ml饱和氯化铵水溶液， 分液， 水层用二氯甲垸萃取 2-3次， 合并二氯甲垸， 水洗， 饱和食盐水洗涤， 无水 硫酸钠干燥， 过滤， 旋蒸， 得粗产品 10g， 柱层析 (石油醚： 乙酸乙酯 =2:1) 得白色固体 4.5g， 产率 53%。

1HNM (CDC1 ₃ ) (ppm) 0.88(3H,t), 2.08(lH,m), 2.18(lH,m), 2.29(3H, s)， 2.91(lH,s), 3.98 (3H,s), 5.23(2H, d)， 5.74(2H,d), 7.20(lH，d)，8.20(lH，d)。

实施例 7：制备 (5S,6R)-5-乙基 -5 ¾基-1,7-二氧杂 -1,2,5,6,7,9-六氢 -8-氧杂 -2-氮杂 -苯并环庚埽 -6-基乙酸酯（结构式 II， C¾CO )

实施例 6所得化合物 (4.5g)溶于 100ml无水乙腈中， 加入 4.6g碘化钠， 室温下向体系中慢慢滴入 3.9ml四甲基氯硅垸， 现场形成三甲基碘硅垸。 加 完后继续反应 4h，然后倒入 100ml水中， 二氯甲垸萃取 4-5次， 合并有机相， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤旋蒸得淡黄色固体， 柱层析 (二氯甲 垸： 甲醇 =50:1)得白色固体 2.1g， 产率： 52%。

1HNM (DMSO-D ⁶ ) (ppm) 0.63(3H,t), 1.81(lH,m), 2.08(lH,m), 2.19(3H, s)， 5.30(1H, d), 5.50(1H, d), 5·88(1Η， s)， 6·01(1Η， s)， 6.37(1H, d), 7.39(lH,d), 11.81(1H, s)。

实施例 8： 制备 (20S, 20aR)-20a-乙蹴氧基髙喜树碱 (化合物 ysb-1) 制备（5S,6R)-2-(2-溴 -喹啉 -3-基甲基 )-5-乙基 -5-羟基 -1,7-二氧杂 -1,2,5,6,7,9-六氢 -8-氧杂 -2-氮杂 -苯并环庚烯 -6-基乙酸酯： 氮气氛围下， 0.26g 实施例 7所得化合物分散于 30ml无水乙二醇二甲醚中，室温下滴入 1M叔丁 醇钾的四氢呋喃溶于， 滴完后继续反应 30min， 然后加入 0.29g2-溴 -3-溴甲基 喹啉，体系升温回流反应 6h，冷却至室温，加入 10ml水， 1N稀盐酸调 PH=2-3， 二氯甲垸萃取 3-4次， 合并有机相， 水洗， 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干 。％09 ^

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£86£L0/Zl0Z l3/13d Z OAV ¾NM (500 MHz, DMSO-D ₆ ): 0.7 l(t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.85(m, 1H)， 2.30(m, 1H)， 5.25(m, 4H)， 5.39(d, J = 14.5 Hz, 1H)， 5.68(d, J = 15.0 Hz, 1H)， 5.82(s, 1H)， 7.42(s, 1H)， 7.72(m, 1H)， 7.87(m, 1H)， 8.13(d, J = 8.0 Hz, 1H)， 8.18(d, J= 8.0 Hz, 1H)， 8.69(s, 1H)， ppm; ¹³ C NM (300 MHz, DMSO-D ₆ ): 8.65, 31.96, 50.42, 60.52, 68.75, 77.32, 99.66, 123.32, 127.55, 127.90, 128.46, 128.90, 129.81 , 130.30, 131.47, 144.51 , 147.87, 152.56, 153.93, 158.92, 173.15, ppm; HRMS (ESI): m/z calcd for C ₂₁ H ₁₉ N ₂ O ₅ [M+H] 379.1288, found 379.1266.

实施例 10: 制备 (20S,20aR)-10-甲氧基 -20a-乙蹴氧基髙喜树碱 (化合物 ysb-3)

操作同实施例 8，以 2-溴 -3-溴甲基 -6-甲氧基喹啉代替 2-溴 -3-溴甲基喹啉 为原料， 得化合物 ysb-3， 淡黄色固体， 产率 55%

¹ 丽 MR (500 MHz, DMSO-D ₆ ): 0.68(t, J = 7.5 Hz, 3H), 2.0 l (m, 1H)， 2.19(m, 1H)， 2.23(s, 3H), 3.95(s, 3H), 5.30(s, 2H), 5.53(d, J = 15.2 Hz, 1H)， 5.68(d, J = 15.4 Hz, 1H)， 6.03(s, 1H)， 6.29(s, 1H)， 7.42(s, 1H)， 7.88(m, 1H)， 8.13(d, J= 8.2 Hz, 1H)， 8.18(d, J = 8.5 Hz, 1H)， 8.70(s, 1H)， ppm; ¹³ C NMR (300 MHz, DMSO-D ₆ ): 8.61, 20.42, 32.07, 50.53, 55.54, 60.87, 70.49, 76.26, 79.12, 98.43, 106.26, 122.50, 122.98, 129.44, 129.98, 130.25, 130.36, 143.97, 145.18, 153.16, 158.16, 158.86, 167.76, 169.78, ppm; HRMS (ESI): m/z calcd for C ₂₄ H ₂₃ N ₂ O7 [M+H] 451.1500 found 451.1502.

实施例 11: 制备 (20S,20aR)-10-甲氧基 -20a ¾基髙喜树碱 (化合物 ysb-4) 操作同实施例 9， 以化合物 ysb-3代替化合物 ysb-1 为原料，得到化合物 ysb-4 , 淡黄色固体， 产率 58%

1HNM (500 MHz, DMSO-D ₆ ): 0.72(t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.88(m, 1H)， 2.30(m, 1H)， 3.95(s, 3H), 5.26(m, 4H)， 5.39(d, J = 14.5 Hz, 1H)， 5.68(d, J = 15.0 Hz, 1H)， 5.82(s, 1H)， 7.42(s, 1H)， 7.87(m, 1H)， 8.13(d, J = 8.0 Hz, 1H)， 8.18(d, J = 8.0 Hz, 1H)， 8.69(s, 1H)， ppm; ¹³ C NM (300 MHz, DMSO-D ₆ ): 8.29, 31.90, 50.10, 55.49, 60.43, 68.98, 76.99, 98.76, 106.24, 122.43, 122.53, 129.15, 129.65, 129.89, 130.15, 143.85, 144.54, 149.97, 153.72, 157.98, 158.73, 172.70, ppm; HRMS (ESI): m/z calcd for C ₂₂ H ₂ N ₂ NaO ₆ [M+Na] 431.1214, found 431.1286.

实施例 12： 制备 (20S,20aR)-9,10-(l,3-二氧戊环) -20a-乙蹴氧基髙喜树碱 (化合物 ysb-5).

操作同例 8， 以 2-溴 -3-溴甲基 -6 7-(1 3-二氧戊环) -喹啉代替 2-溴 -3-溴甲 基喹啉为原料， 得到化合物 ysb-5， 淡黄色固体， 产率 61%

¹ 丽 MR (500 MHz, DMSO-D ₆ ): 0.68(t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.99(m, 1H)， 2.17(m, 1H)， 2.22(s, 3H), 5.22(s, 2H), 5.50(d, J = 15.1 Hz, 1H)， 5.68(d, J = 15.4 Hz, 1H)， 6.01(s, 1H)， 6.26(s, 1H)， 6.28(s, 2H), 7.30(s, 1H)， 7.51 (d, J = 6.6 Hz, 1H)， 8.46(s, 1H)， ppm; ¹³ C NMR (300 MHz, DMSO-D ₆ ): 8.61 , 20.42, 32.07, 50.47, 60.88, 70.49, 76.42, 98.28, 101.53, 103.06, 104.68, 122.24, 125.60, 128.40, 130.10, 145.32, 146.50, 148.61, 149.81 , 151.30, 153.15, 158.85, 167.77, 169.78, ppm; HRMS (ESI): m/z calcd for C ₂₄ H ₂₁ N ₂ O ₈ [M+H] 465.1292, found 465.1280.

实施例 13：制备 (20S,20aR)-9,10-(1.3-二氧戊环) -20a 基髙喜树碱 (化合 物 sb-6)

操作同例 9， 以化合物 ysb-5代替 ysb-1为原料， 得到化合物 ysb-6， 淡 黄色固体， 产率 56%

1HNM (500 MHz, DMSO-D ₆ ): 0.70(t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.83(m, 1H)， 2.30(m, 1H)， 5.23(m, 4H)， 5.36(d, J = 15.2 Hz, 1H)， 5.58(d, J = 15.0 Hz, 1H)， 5.78(s, 1H)， 6.28(s, 2H), 7.30(s, 1H)， 7.50(d, J = 6.6 Hz, 2H), 8.46(s, 1H)， ppm; HRMS (ESI): m/z calcd for C ₂₂ H ₁₈ N ₂ NaO ₇ [M+Na] 445.1006, found 445.1017. 实施例 14： 制备 (20S,20aR)-9,10-(1.4-二氧六环) -20a-乙蹴氧基髙喜树碱 (化合物 ysb-7)

操作同例 8， 以 2-溴 -3-溴甲基 -6 7-(1 4-二氧六环) -喹啉代替 2-溴 -3-溴甲 基喹啉为原料， 得到化合物 ysb-7， 淡黄色固体， 产率 58%

1HNM (500 MHz, DMSO-D ₆ ): 0.68(t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.99(m, 1H)， 2.18(m, 1H)， 2.22(s, 3H), 4.43(s, 4H)， 5.21(s, 2H), 5.50(d, J = 15.1 Hz, 1H)， 5.68(d, J= 15.4 Hz, 1H)， 6.01(s, 1H)， 6.25(s, 1H)， 7.32(s, 1H)， 7.54(d, J= 2.1 Hz, 2H), 8.45(s, 1H)， ppm; ¹³ C NM (300 MHz, DMSO-D ₆ ): 8.75, 20.55, 32.20, 50.53, 54.94, 61.02, 64.35, 70.63, 76.40, 98.77, 112.16, 113.04, 122.61 , 113.04, 122.61 , 124.24, 128.03, 129.72, 144.50, 145.38, 147.61, 150.59, 153.34, 159.03, 168.00, 170.02, ppm; H MS (ESI): m/z calcd for C ₂₅ H ₂₃ N ₂ O ₈ [M+H] 479.1449, found 479.1469.

实施例 15：制备 (20S,20aR)-9,10-(l,4-二氧六环) -20a ¾基髙喜树碱 (化合 物 sb-8)

操作同例 9， 以化合物 ysb-7代替 ysb-1为原料， 得到化合物 ysb-8， 淡 黄色固体， 产率 57%

1HNM (500 MHz, DMSO-D ₆ ): 0.70(t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.83(m, 1H)， 2.30(m, 1H)， 4.43(s, 4H)， 5.24(m, 4H)， 5.37(d, J = 15.2 Hz, 1H)， 5.58(d, J = 15.0 Hz, 1H)， 5.79(s, 1H)， 7.32(s, 1H)， 7.50(d, J = 3.3 Hz, 2H), 8.45(s, 1H)， ppm; HRMS (ESI): m/z calcd for C ₂₃ H ₂₁ N ₂ O ₇ [M+H] 437.1343, found 437.1344.

实施例 16：制备 (20S,20aR)-10 ¾¾-7-乙基 -20a-乙蹴氧基髙喜树碱 (化合 物 sb-9)

操作同例 8， 以 2-溴 -3-溴甲基 -4-乙基 -6-羟基-喹啉代替 2-溴 -3-溴甲基喹 啉为原料， 得到化合物 ysb-9， 淡黄色固体， 产率 40% ¾NM (500 MHz, DMSO-D ₆ ): 0.68(t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.30(t, J = 10.0 Hz, 3H), 1.88(m, 2H), 2.22(s, 3H), 3.09(q, J = 10.0 Hz, 2H), 5.21(s, 2H), 5.50(d, J = 15.1 Hz, 1H)， 5.68(d, J = 15.4 Hz, 1H)， 6.01(s, 1H)， 6.25(s, 1H)， 7.32(s, 1H)， 7.43(m, 1H)， 7.54(d, J= 2.1 Hz, 2H), 8.45(s, 1H)， 10.3(s, 1H)， ppm;

实施例 17： 制备 (20S,20aR)-10羟基 -7-乙基 -20a 基髙喜树碱 (化合物 ysb-10)

操作同例 9， 以化合物 ysb-9代替 ysb-1为原料， 得到化合物 ysb-10， 淡 黄色固体， 产率 56%。

¹ 丽 MR (500 MHz, DMSO-D ₆ ): 0.68(t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.30(t, J = 10.0 Hz, 3H), 1.88(m, 2H), 3.09(q, J = 10.0 Hz, 2H), 5.21(s, 2H), 5.50(d, J = 15.1 Hz, 1H)，

5.68(d, J = 15.4 Hz, 1H)， 5.78(s, 1H)， 6.01(s, 1H)， 6.25(s, 1H)， 7.32(s, 1H)， 7.43(m, 1H)， 7.54(d, J= 2.1 Hz, 2H), 8.45(s, 1H)， 10.1(s, 1H)， ppm;

实验实施例 18. 抗肿瘤活性测试：

所有化合物的细胞毒活性测试都在相应的肿瘤 细胞株上进行， 每 100 的培养液中有 6000〜10000个肿瘤细胞， 置于 96 孔板中 （Falcon, CA)。 肿 瘤细胞分成三份，用梯度浓度的药物处理，在 37 °C下培养 72 h，采用 SRB 法 测试。 50 %的肿瘤细胞生长抑制时药物的浓度即 IC50 使用量效曲线来计算 的。

表 1. 对 HCT-1 16和 A549细胞的生长抑制活性

Ysb-2 49.3±15.0 16.8±4.2

Ysb-3 八 。。 4.4±1.0 4.7±1.1

Ysb-4 10.6±6.2 4.8±3.6

工。~ 〇

Ysb-5 2.1±0.3 1.2±0.7

Ysb-6 3.1±0.7 3.1±1.6

Ysb-7 4.9±4.1 4.6±2.9

Ysb-8 3.4±1.2 2.9±1.3

Ysb-9 133.4±18.7 225.7±15.8

Ysb-10 366±213 30.3±18.4

10-HCPT 31.2±8.2 33.6±17.8

SN-38 40.8±5.8 30.4±11.5

CPT 22.9±12.0 33.8±13.9

上表显示了本发明所述的化合物对 HCT-116和 A549等肿瘤细胞抑制率 非常高， 表现出了很好的抗肿瘤活性。