La presente invención se refiere a macromoléculas dendríticas que contienen un esqueleto de naturaleza carbosilano y que presentan en su estructura grupos polifenólicos (GPF). Los compuestos de la invención son potentes agentes antioxidantes y captadores de radicales libres y de esta manera son útiles para su aplicación en los siguientes sectores de actividad: industria cosmética e industria farmacéutica.

ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR

El estrés oxidativo es un fenómeno celular producido por el desequilibrio entre especies prooxidantes y antioxidantes. Este término es la base de la teoría de Denham Harman, postulada en 1956, ¹ que achaca las causas del envejecimiento a las especies reactivas de oxígeno (ROS) producidas en la mitocondria. Las ROS son radicales libres oxigenados que se producen mayoritariamente en la mitocondria debido a que el 98% del 0 ₂ que llega a las células se dirige a este orgánulo. En ella, a través de la cadena de transferencia electrónica, el oxígeno es reducido con cuatro electrones y protones a agua. Sin embargo, en ciertos casos se puede dar una reducción incompleta que da lugar a la formación de radical superóxido (0 ^~ ₂ ·), peróxido de hidrógeno (H ₂ 0 ₂ ) y radical hidroxilo (ΟΗ·). ² Estos compuestos son excesivamente reactivos, produciendo mutaciones en las macromoléculas biológicas.

El daño producido por estos compuestos surge a diferentes niveles, principalmente en el ADN, los lípidos y las proteínas. En cuanto al ADN, las modificaciones que estas especies producen, conllevan problemas en la expresión de muchas proteínas entre las que destacan los complejos enzimáticos I y IV de la cadena de transferencia electrónica que provoca una disminución considerable de ATP. ³ La falta de energía, a su vez, desencadena una respuesta biológica que aumenta la cantidad de ROS producidas. Además, no sólo se producen las ROS debido a la actividad metabolica. Factores externos y ambientales como la contaminación, el tabaco y la exposición a radiaciones ionizantes, son factores de riesgo que aumentan la concentración de los radicales libres debido a los daños celulares que provocan, sobre todo, a nivel genómico.

La acumulación de estas disfunciones producidas por el estrés oxidativo se ha visto relacionada, en los últimos años, con enfermedades como el cáncer, la aterosclerosis, el párkinson o el Alzheimer. ^{4 6} Como defensa frente a la acción de estos compuestos, la célula ha desarrollado diversos mecanismos capaces de eliminar el exceso de ROS y uno de ellos es la generación de especies antioxidantes. Una forma de clasificar a estos agentes antioxidantes es, en función de la forma en la que actúan, dividiéndose en enzimáticos y no enzimáticos. Entre los primeros destacan la superóxido dismutasa, la catalasa y la glutatión peroxidasa que juntas consiguen reducir de forma completa el radical superóxido a agua. Los sistemas no enzimáticos comprenden a un número muy amplio de compuestos orgánicos capaces de reaccionar directamente con las ROS estabilizando los radicales y reduciendo su actividad. Dentro de los sistemas no enzimáticos, una de las familias más importantes son los derivados polifenólicos, los cuales se generan en el metabolismo secundario de las plantas, y pueden encontrarse de forma activa en alimentos como frutas (uvas rojas, frambuesas, arándanos, fresas...) y verduras (brócoli, tomate, pimientos, espinacas...). Además, también están muy presentes en el té, el cacao y el aceite de oliva. ^{7 8}

En los últimos años, los polifenoles, han cobrado gran interés por sus propiedades beneficiosas para la salud, por su importante capacidad antioxidante en su acción para luchar contra el estrés oxidativo producido por los radicales libres, lo que mejora el rendimiento y la protección de las células. Así, se les han atribuido efectos beneficiosos en la prevención de las alteraciones tanto funcionales como estructurales y frente al desarrollo de diversas enfermedades (cáncer, enfermedades cardiovasculares y enfermedades neurodegenerativas) asociadas a un aumento de los procesos de oxidación celular. ^{9 12}

Los polifenoles son compuestos químicos que tienen al menos un anillo aromático al que están unidos uno o más grupos hidroxilo. Existen miles de polifenoles clasificados en familias y subfamilias como las catequinas, los taninos, los flavonoides, antocianos, estilbenos, lignanos.

Además de sus increíbles capacidades antioxidantes, los polifenoles despliegan un gran potencial como antiinflamatorios inhibiendo el factor NF-Kappa-B, como antiglicanos, reduciendo el efecto dañino de los azúcares sobre las proteínas, y como potenciador de la longevidad. ¹³ Sin embargo, el principal inconveniente de utilizar polifenoles es su corta vida media y baja biodisponibilidad. ¹⁴ Por ello es necesario el desarrollo de sistemas de liberación controlada de moléculas bioactivas que actúen como transportadores a través del organismo, aportando a éstos una mayor estabilidad frente a la degradación, y facilitando su difusión a través de las barreras biológicas y, por lo tanto el acceso a las células diana. Dentro de este tipo de sistemas, los polímeros dendríticos son una nueva clase de macromoléculas que presentan propiedades bien definidas que hacen que sean materiales muy interesantes para aplicaciones en nanomedicina y nanotecnología. ^{15 18} Entre ellos se encuentran los dendrímeros de estructura monodispersa y cuya síntesis permite un elevado control de su estructura. ^{19 21}

Debido a sus propiedades, los dendrímeros, pueden ser aplicados en diferentes campos de la ciencia como catálisis a nanoescala, sensores químicos, micelas unimoleculares, imitación de la función de las enzimas, encapsulación de moléculas, reconocimiento molecular, agentes de diagnóstico y también como vehículos para el transporte de genes y fármacos, la electroquímica o la cosmética, entre otros. Revisiones excelentes que incluyen todas estas aplicaciones se encuentran publicadas en la bibliografía. ^{21 27} Los dendrímeros son sistemas ideales para aumentan la solubilidad e incrementar el tiempo de vida en circulación de diversos fármacos o moléculas bioactivas, ya que atraviesan ciertos tejidos, mejorando el tránsito a través de las barreras biológicas. ^{28 29}

Recientemente, se han descrito dendrímeros que poseen grupos polifenólicos (GPF) en su estructura, que son capaces de otorgar propiedades características a la molécula dendrítica al funcionalizar su superficie, de tal forma que pueden actuar como potentes antioxidantes y captadores de radicales libres y de esta manera son útiles para su aplicación en los sectores de actividad tanto en industria cosmética como en la industria farmacéutica.

Sin embargo, no son muchos los sistemas dendríticos que contienen grupos polifenólicos terminales descritos en la bibliografía hasta la fecha. ^{30 32} De entre los distintos esqueletos dendríticos descritos en la bibliografía, los de naturaleza carbosilano han resultado ser muy interesantes debido a sus aplicaciones en biomedicina como agentes de transporte de material nucleico y/o fármacos, como agentes antibacterianos, anticancerígenos o antivirales entre otras. ^{33 37}

Los dendrímeros de naturaleza carbosilano con grupos polifenólicos en su estructura de la presente invención suponen una alternativa interesante para el uso en la industria farmacéutica y/o cosmética. DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente invención da lugar a dendrímeros de estructura carbosilano, es decir, que contienen en su estructura enlaces silicio-carbono y funcionalizados en su periferia con grupos fenólicos (mono idroxi, di idroxi o poli idroxi). Por dendrímero se entiende aquellas macromoleculas tridimensionales de construcción arborescente, de naturaleza esférica, altamente ramificadas, sintetizadas a partir de un núcleo polifuncional. Estos compuestos mejoran de forma notable las propiedades como antioxidantes, captadores de radicales libres, y anticancerígenas de los compuestos fenólicos por si solos. La invención proporciona un procedimiento para su obtención y sus usos en diferentes sectores de actividad.

Los compuestos de la invención son útiles en la industria cosmética y farmacéutica. En la industria cosmética podrán utilizarse para el tratamiento de la piel como componentes de cremas antienvejecimiento, cremas solares o como productos de belleza para el cabello. Y en la industria farmacéutica, estos compuestos podrán ser utilizados como nuevos fármacos o formulaciones que los contengan, para la prevención y tratamiento de enfermedades neurodegenerativas, tumorales, cardiovasculares además de ser utilizados como antiinflamatorios, antimicrobianos o antivirales. Un aspecto de la presente invención se refiere a un dendrímero carbosilano con grupos polifenólicos en la superficie (a partir de ahora compuesto de la invención). Por "dendrímero carbosilano" se refiere a una macromolécula ramificada con forma esférica, donde el núcleo de crecimiento del dendrímero es polifuncional, las unidades, ramas o ramificaciones de crecimiento tienen esqueleto carbosilano y la capa externa, superficie o periferia del dendrímero incorpora grupos funcionales. Esta superficie o periferia sería la correspondiente a las extremidades de las ramificaciones.

• Por "núcleo polifuncional" (Nu) se entiende en la presente invención a un elemento o compuesto polivalente enlazado de manera covalente con al menos dos ramificaciones, es decir, al menos deberá ser divalente. En una realización preferida, el núcleo es tetravalente y más preferiblemente, el núcleo es un átomo de silicio. Sin embargo, el núcleo puede ser cualquier derivado polifuncional a partir del cual sea posible hacer crecer un dendrímero de naturaleza carbosilano, de los conocidos por un experto en la materia, como por ejemplo y sin limitarse, un núcleo polifenólico, o un núcleo amino o poliamino. • Por "capa externa" se entiende una capa externa que consiste, en unidades iguales o diferentes del grupo de fórmula general I

dónde:

- Ri es una cadena alquílica, o el siguiente grupo Ri= -(CH ₂ )z-S-(CH ₂ )y- donde "z" representa un número entero que varía de 2 a 5; preferiblemente "z" es 2 o 3; "y" representa un número entero que varía de 1 a 10; preferiblemente entre 1 y 5. - Pi2 es un grupo alquilo (CrC ₄ ), preferiblemente R ₂ es un grupo metilo;

- m es un número entero que varía entre 1 y 3, preferiblemente m es 1 ;

- W es el grupo terminal polifenólico, donde al menos un grupo R ^* es un grupo hidroxilo (-OH) y el resto de grupos R ^* presentes en la molécula pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente de entre hidroxilo (-OH), hidrógeno (H), alquilo (C1 -C4) o metóxido (-OMe). Preferiblemente R ^* , son hidroxilos. Preferiblemente los grupos polifenólicos serán derivados de la vainillina, ácido gálico y ácido ferúlico.

- T es un grupo ¡mino (-N=CH-); amino (-NH-CH ₂ -), amonio (- ⁺ NH ₂ -CH ₂ -) o amido (- NHCO-).

El término "alquilo" se refiere en la presente invención a cadenas alifáticas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 4 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, tert-butilo o sec-butilo, preferiblemente tiene de 1 a 3 átomos de carbono.

Los dendrímeros carbosilano de la presente invención además pueden ser catiónicos, cuando los átomos de nitrógeno de las capas externas se encuentran cuaternizados.

Por lo tanto, la presente invención no solo incluye los compuestos por sí mismos, sino cualquiera de sus sales. Preferiblemente las sales de halógenos, que se pueden seleccionar entre sales de cloruro, bromuro, ioduro; o triflato. Preferiblemente las sales son de cloruro. En una realización preferida, el dendrímero de la invención puede ser de primera, segunda o tercera generación. El término "generación" (Gn) se refiere al número de ramificaciones iterativas que son necesarias para la preparación del dendrímero.

Sin embargo, el dendrímero también puede ser de generación cero, tal y como se representa en la fórmula II:

Me

I

Nu- -Si— (R-i)— T— W donde T= N=CH; NH-CH ₂ ; NHCO,

Me Me: CH,

(II)

donde: Nu representa un núcleo polifuncional como se ha definido anteriormente, Ri se encuentra definido en la fórmula I y preferiblemente es un grupo propilo, p es un número entero que varía entre 2 y 6, preferiblemente p es 4 cuando el núcleo es de silicio; Me es un grupo metilo (CH ₃ ), W es el grupo terminal polifenolico descrito anteriormente y T queda definido en la fórmula I. A modo de ejemplo, si el núcleo es de silicio el dendrímero de fórmula (II) puede ser de fórmula (Na):

(Ha) donde: W, Ri , p y T están definidos anteriormente.

En otra realización preferida, el dendrímero es al menos de primera generación y puede representar con la siguiente fórmula general

(N i) donde: Nu representa un núcleo polifuncional como se define anteriormente; R _a , Ri y R2, son iguales o diferentes, y representan un grupo alquilo (CrC ₆ ); m es un número entero que varía entre 1 y 3 preferiblemente m es 2; W es el grupo terminal polifenolico descrito anteriormente y T queda definido en la fórmula I. Si el núcleo es de silicio el dendrímero de fórmula (III) puede ser de fórmula (Illa):

(Illa)

donde: W, R1 , R ₂ , R _a , m, p y T, están definidos anteriormente.

En otra realización preferida, el dendrímero es al menos de segunda generación y puede representar con la siguiente fórmula (IV):

(IV)

donde: Nu representa un núcleo polifuncional como se define anteriormente; R _a , Rt>, R1 , R ₂ y R3, son iguales o diferentes, y representan un grupo alquilo (CrC ₆ ) ; m y n son iguales o diferentes y son un número entero que varía entre de 1 y 3; preferiblemente m y/o n es 2; W es el grupo terminal polifenolico definido anteriormente y T queda definido en la fórmula I. Si el núcleo es de silicio el dendrímero de fórmula (IV) puede ser de fórmula (IVa):

(IVa)

donde: W, R _a , Rb, R1 , R2 y R3, m, n, p y T, están definidos anteriormente. En otra realización preferida, el dendrímero es al menos de tercera generación y se puede representar con la siguiente fórmula (V):

(V) donde: Nu representa un núcleo polifuncional como se define anteriormente; R _a , Rb, R _c , Ri , R2, Re y R4 son iguales o diferentes, y representan un grupo alquilo (CrC ₆ ) ; m, n y q son iguales o diferentes y es un número entero que varía entre 1 y 3; preferiblemente es m, n y/o q es 2; W es el grupo terminal polifenolico definido anteriormente y T queda definido en la fórmula I. Si el núcleo es de silicio el dendrímero de fórmula (V) puede ser de fórmula (Va):

(Va) donde: W, R _a , Rt>, R _c , Ri , R2, R3, R4, m, n, q, p y T, están definidos anteriormente.

En estos dendrímeros de fórmula (II), (Na), (III), (Illa), (IV), (IVa) o (V), (Va), los radicales R1 , R _a , Rb, o R _c pueden ser iguales o diferentes, y preferiblemente representan un grupo alquilo (C2-C4) , más preferiblemente son un grupo propilo. En otra realización preferida, los radicales R ₂ , R3 o R ₄ son independientes unos de otros, y representan un grupo alquilo (C1 -C4) , más preferiblemente son un grupo metilo.

Síntesis de dendrímeros esféricos con grupos polifenólicos terminales.

La síntesis de dendrímeros esféricos se lleva a cabo mediante dos rutas sintéticas dependiendo de la naturaleza del polifenol elegido para funcionalizar la superficie dendrimérica.

En general los dendrímeros que se describen en este apartado se pueden representar como Gn-(F)x, donde:

n indica el número de la generación G.

F, indica la naturaleza de los grupos funcionales situados en la periferia del dendrímero.

x denota el número de unidades terminales presentes en el dendrímero. Ruta Sintética 1 :

Reacción de aminación reductora entre el precursor polifenolico con un grupo aldehido en la estructura y un dendrímero precursor que presente grupos amino -NH ₂ terminales.

En una realización preferida del procedimiento de la invención, la reacción se lleva a cabo en presencia de un disolvente orgánico, preferentemente THF, en dos pasos:

Reacción de condensación entre el precursor polifenolico y el dendrímero esférico de partida en presencia de un agente deshidratante, preferiblemente MgS0 ₄ (esquema 1 ). Reducción del enlace ¡mino formado en el paso anterior con un agente reductor, preferentemente LiAIH ₄ , en presencia de un disolvente orgánico, preferiblemente THF y a 0 ^e C (esquema 1 ).

n=0 = > m=4

n = l = > m=8 n=0 = > m = 4 (1 ) n = 0 = > m=4 (3) n = l = > m = 8 (2) n = l = > m = 8 (4)

-esquema 1 -

Los compuestos de naturaleza iónica, se obtienen por cuaternización de los grupos amino presentes en las estructuras con una disolución de cloruro de hidrógeno en THF (esquema 2).

n=0 => m=4 (3) n=0 => m=4 (5)

n = l => m = 8 (4) n = l => m = 8 (6)

-esquema 2-

Ruta Sintética 2:

Formación de un enlace amido entre un dendrímero precursor con grupos amino terminales y un derivado polifenolico con un grupo ácido como sustituyente. La reacción se lleva a cabo en microondas.

En una realización preferida del procedimiento de la invención, la reacción se lleva con ácido gálico y en presencia de un disolvente orgánico, preferentemente THF, y el agente acoplante hexafluorofosfato de 2-(1 -H-benzotriazol-1 -il)-1 ,1 ,3,3-tetrametiluronio (HBTU). La reacción se lleva a cabo en microondas a 75 ^e C y 40W. El tiempo de reacción depende de la generación de dendrímero a sintetizar. En una realización preferida de la invención el tiempo de reacción para un dendrímero de primera generación son 30 min.

-esquema 3- DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Figura 1. Estructuras de los dendrímeros G0-[Si(CH ₂ ) ₃ N=Ph(OMe)(OH)] ₄ (1), G1 - [Si(CH ₂ ) ₃ NHPh(OMe)(OH)] ₈ (2) y G1 -[Si(CH ₂ ) ₃ NH ₂ ⁺ Ph(OMe)(OH) Cl] ₈ (5)

EJEMPLOS:

Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo ilustrativo, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención. Síntesis de G0-[Si(CH ₂ ) ₃ N=Ph(OMe)(OH)]4 (1 )

Sobre 0.264 g de G0-[NH ₂ ]4 (0.40 mmol) en THF seco primeramente se adicionó MgS0 ₄ activado, para después añadir 0.268 g de vainillina (1 .76 mmol). Se dejó en agitación constante durante un día, a temperatura ambiente y atmósfera inerte. Más tarde se filtró para eliminar el MgS0 ₄ y se llevó a sequedad. El producto 1 , figura 1 , se obtuvo como un aceite de color amarillo anaranjado (175 mg; Rdto = 86.9%).

¹ H-RMN (CDCI3): 8.1 1 (s, 4H, N=CH); 7.40 (s, 4H, (CH ₃ 0)C¡pso-CArH); 7.05 (s, 4H, (HO)Cipso-CArH-CArH); 6.90 (s, 4H, (HO)Cipso-CArH); 3.85 (s, 12H, Cipso-OCH ₃ ); 3.53 (t, 8H, CH^N=CH); 1 .64 (m, 8H, CH ₂ CH2CH ₂ N); 1 .25 (m, 8H, SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ Si); 0.49 (t, 24H, SiCH2CH ₂ CH2SiCH2CH ₂ ); -0.07 (s, 24H, Si(CH ₃ ) ₂ ); (Cipso-OH) no se observa. ¹³ C- RMN (MeOD): 161 .0 (N=CH); 147.5 (Cipso-OH + Cipso-OCH ₃ ); 124.6 (HCAr-CArH- Cipso-CH=N); 1 14.1 ((HO)Cipso-HCAr-CArH); 107.3 (HCAr-C¡pso-OCH ₃ ); 60.1 (CH ₂ - N=CH); 53.2 (Cipso-OCH ₃ ); 23.4 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ N); 18.1 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ SiCH ₂ CH ₂ ); 16.9 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ SiCH ₂ CH ₂ ); 15.5 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ SiCH ₂ CH ₂ ); 10.7 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ SiCH ₂ CH ₂ ); -3.1 (Si(CH ₃ ) ₂ ); (C/pso-CH=N) no se observa.

Análisis elemental (C64H104N4O8SÍ5) : Teórico: %C: 64.17; %H: 8.75; %N: 4.68. Experimental: %C: 63.57; %H: 8.53; %N: 4.46.

Masas: [M+H] ⁺ = 1 197.69 urna; [M+2H] ^+2/2 = 599.34 urna. Síntesis de G1 -[Si(CH ₂ ) ₃ N=Ph(OMe)(OH)]8 (2)

El compuesto 2 ha sido preparado siguiendo un procedimiento análogo al descrito para la síntesis del compuesto 1 , partiendo de G1-[NH ₂ ] ₈ (0.230 g; 0.14 mmol), vainillina (0.170 g; 1 .12 mmol) y MgS0 ₄ . De esta forma se obtiene el compuesto 2 como un aceite naranja (183 mg; Rdto = 91 .1 %). ¹ H-RMN (CDCI3): 8.1 1 (s, 8H, N=CH); 7.40 (s, 8H, (CH ₃ 0)Cipso-CArH) ; 7.05 (s, 8H, (HO)Cipso-CArH-CArH); 6.88 (s, 8H, (HO)Cipso-CArH); 3.82 (s, 24H, Cipso-OCH ₃ ) ; 3.53 (t, 1 6H, CH^N=CH); 1 .64 (m, 16H, CH ₂ CH2CH ₂ N); 1 .26 (m, 16H, SiCH ₂ CH2CH ₂ Si); 0.49 (t, 48H, SiCH2CH ₂ CH2SiCH2CH2); -0.08 (s, 48H, Si(CH ₃ ) ₂ ) ; (Cipso-OH) no se observa. ¹³ C-RMN (CDCI3): 1 60.8 (N= CH); 1 27.5 (C/pso-CH=N); 1 23.9 ((HO)Cipso-H CAr-CArH); 1 14.4 (HCAr-CA/H-Cipso-CH=N); 1 08.7 (H CAr-Cipso-OCH ₃ ) ; 64.9 (CH ₂ -N=CH) ; 56.1 (Cipso-OCH ₃ ); 25.5 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ N) ; 20.0 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ SiCH ₂ CH ₂ ) ; 18.8 ((CH ₃ )Si(CH ₂ CH ₂ CH ₂ Si-) ₃ ; 1 8.4 ((CH ₃ )(CH ₂ CH ₂ CH ₂ Si)Si(CH ₂ CH ₂ CH ₂ Si-) ; 17.7 ((CH ₃ ) ₂ SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ SiCH ₂ CH ₂ ); 13.0 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ Si(CH ₃ )) ; -3.3 (Si(CH ₃ ) ₂ ) ; -5 ((CH ₂ CH ₂ CH ₂ ) ₃ Si(CH ₃ )). (Cipso-OH), (C/pso-OCH ₃ ) y ((CH ₃ ) ₂ S¡ CH ₂ CH ₂ CH ₂ N) no se observan. Análisis elemental (Ci44H ₂₄ 4N ₈ Oi6Sii ₃ ) : Teórico: %C: 63.85; %H: 9.08; %N: 4.14. Experimental: %C: 62.33; %H: 8.95; %N: 4.80.

Síntesis de G0-[Si(CH ₂ ) ₃ NHPh(OMe)(OH)] ₄ (3)

Una disolución de 200 mg del dendrímero de generación 0 (1 ) (1 .64 x 1 0-4 mol en 50 mL de THF se mantiene en agitación en un baño de agua/hielo y se añaden 0.30 mL de una disolución comercial de LiAIH ₄ 2.4 M en THF (7.1 5 x 10 ^~4 mol) gota a gota. Tras media hora, se retira el baño y se mantiene la mezcla a temperatura ambiente hasta completar la hora de reacción. Una vez terminada, se elimina el disolvente por evaporación en una línea de vacío, se añaden 30 mL de diclorometano, se introduce el matraz en hielo, y se adiciona la misma cantidad de agua para llevar a cabo la hidrólisis. La fase orgánica se extrae tres veces con 30 mL de agua, se seca con MgS0 ₄ anhidro y posteriormente se evapora el disolvente en el rotavapor. De este modo, se obtiene el compuesto 3 como un sólido naranja (1 75 mg ; Rdto = 86.9%).

¹ H-RMN (CDCI3) : δ = -0.12 (s, 24H, Si(CH ₃ ) ₂ ), 0.49 (m, 24H, SiCH^C^CH^Si Ci¾CH ₂ ), 1 .23 (m, 8H, SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ Si), 1 .47 (m, 8H, CH ₂ CH2CH ₂ NH), 2.59 (t, 8H, CH ₂ CH ₂ NH), 3.69 (s, 8H, NHCH ₂ Ph), 3.78 (s, 12H, ArOCH ₃ ), 6.75 (s ancho, 8H, C _Ar H), 6.87 (s, 4H, CA _Í H). ¹³ C-RMN (CDCI3): δ = -3.5 (Si(CH ₃ ) ₂ ), 12.7 (Si CH ₂ CH ₂ CH ₂ Si CH ₂ CH ₂ ), 1 7.4 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ SiCH ₂ CH ₂ ), 1 8.5 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ SiCH ₂ CH ₂ ), 20.0 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ Si CH ₂ CH ₂ ), 23.2 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ NH), 51 .6 (CH ₂ NHCH ₂ ), 53.0 (NH CH ₂ Ph), 55.6 (C _Ar -OCH ₃ ), 1 1 1 .6 { CAM) , 1 14.8 { CAM) , 121 .4 { CA ), 1 29.1 (Cp _S oCH ₂ NH), 145.7 (C^OH), 147.3 (C/p _S0 OCH ₃ ). Espectrometría de masas: [M+H] ⁺ = 1205.74 urna. Análisis elemental (C ₆ 4Hi i ₂ N40 ₈ S¡5) : C, 63.74; H, 9.36; N, 4.65; Exp. : C, 63.02; H, 9.17; N, 4.48.

Síntesis de G1 -[Si(CH ₂ ) ₃ NHPh(OMe)(OH)] ₈ (4) El compuesto 4, figura 1, ha sido preparado siguiendo un procedimiento análogo al descrito para la síntesis del dendrímero 3, partiendo de 200 mg del precursor 2 (7.38 x 10 ^-5 mol) y 0.27 ml_ de LiAIH ₄ 2.4 M en THF (6.50 x 10 ^-4 mol). De esta forma se obtiene el compuesto 4 como un aceite naranja (168 mg; Rdto = 83.5%).

¹ H-RMN (CDCI ₃ ): δ = -0.12 (s, 48H, Si(CH ₃ ) ₂ ), 0.04 (s, 24H, CH ₂ S¡(CH ₃ )CH ₂ ), 0.49 (m, 48H, SÍCH2CH2CH2SÍCH2CH2), 1.25 (m, 16H, SÍCH2CH2CH2SÍ), 1.47 (m, 16H, CH ₂ CH2CH ₂ NH), 2.59 (t, 16H, CH ₂ CH ₂ NH), 3.66 (s, 16H, NHCH ₂ Ph), 3.69 (s, 24H, ArOCH ₃ ), 4.76 (s, 8H, C _Ar OH), 6.70 (s ancho, 16H, C _Ar H), 6.82 (s, 8H, C _Ar H). ¹³ C-RMN (CDCI3): δ = -5.0 ((CH2CH2CH2) ₃ Si(CH ₃ )), -3.4 (Si(CH ₃ ) ₂ ), 12.8 (SiCH2CH ₂ CH ₂ Si(CH3)), 17.6 ((CH ₃ )2SiCH2CH2CH2SiCH ₂ CH2), 18.4 ((CH3)(CH ₂ CH ₂ CH2 Si)Si(CH ₂ CH ₂ CH ₂ Si-), 18.8 ((CH ₃ )Si(CH2CH2CH ₂ Si-)3, 20.0 (SÍCH2CH2CH2SÍCH2CH2), 23.9 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ NH), 52.4 (CH2NHCH2), 53.6 (NHCH ₂ Ph), 55.6 (C _A r-OCH ₃ ), 111.3 {CAM), 114.9 {CAM), 121.0 {CAM), 131.0 (CpsoCH ₂ NH), 145.4 (C _ipS oOH), 147.3 (C _ipS oOCH ₃ ). Espectrometría de masas: [M+2H] ²⁺ = 1362.85 urna. Análisis elemental (CmH soNsOieS s): C, 63.47; H, 9.62; N, 4.11 ; Exp.: C, 62.66; H, 8.79; N, 3.7

Síntesis de G0-[Si(CH ₂ )3NH ₂ ⁺ Ph(OMe)(OH)CI-]4 (5)

A una disolución de 100 mg del compuesto 3 (8.29 x 10 ^~5 mol) en 10 ml_ de diclorometano se añaden 0.18 mLde una disolución de HCI 2 M en Et2Ü (3.55 x 10 ^~4 mol) manteniendo el matraz en un baño de hielo. De esta forma aparece un precipitado naranja aceitoso. Se retira el sobrenadante y el disolvente se termina de eliminar por evaporación en un rotavapor. Como resultado se obtiene el compuesto 5 como un sólido anaranjado (110 mg; Rdto = 98.1%).

¹ H-RMN (CD3OD): δ = 0.04 (s, 24H, Si(CH ₃ ) ₂ ), 0.65 (m, 24H, SiCHaChfeC/feSi Ci¾CH ₂ ), 1.41 (m, 8H, SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ Si), 1.76 (m, 8H, 3.01 (t, 8H, CH ₂ CH ₂ NH), 3.91 (s, 12H, ArOCH ₃ ), 4.14 (s, 8H, NHCH ₂ Ph), 6.86 (d, 1H, C _Ar H), 6.99 (d, 1H, C _Ar H), 7.21 (s, 1H, C _Ar H). ¹³ C-RMN (CD ₃ OD): δ = -3.3 (Si(CH ₃ ) ₂ ), 13.2 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ Si CH2CH2), 18.5 (SÍCH2CH2CH2SÍCH2CH2), 19.8 (SÍCH2CH2CH2SÍCH2CH2), 20.8 (SÍCH2CH2CH2SÍ CH2CH2), 21.9 (SÍCH2CH2CH2NH), 51.2 (CH2NHCH2), 52.2 (NHCH ₂ Ph), 56.6 (C _Ar -OCH ₃ ), 114.5 {CAM), 116.5 {CAM), 123.5 {CAM), 124.2 (C/ _S0 CH2NH), 148.8 { psoOH), 149.3 (C/p _S0 OCH ₃ ). Análisis elemental (C64H1K3CI4N4O8SÍ5): C, 56.86; H, 8.65; N, 4.14; Exp.: C, 56.42; H, 8.62; N, 3.89.

Síntesis de G1-[Si(CH ₂ )3NH ₂ ⁺ Ph(OMe)(OH)CI-]8 (6) El compuesto 6, figura 1 , ha sido preparado siguiendo un procedimiento similar al descrito para 5, partiendo de 100 mg del dendrímero 4 (3.67 x 1 0 ^~5 mol) y 0.16 mL de HCI 2 M en Et ₂ 0 (3.23 x 1 0 ^~4 mol). De esta forma se obtiene el compuesto 6 como un sólido naranja (108 mg; Rdto = 97.6%).

¹ H-RMN (CD ₃ OD) : δ = 0.00 (s, 48H, Si(CH ₃ ) ₂ ), 0.05 (s, 24H, CH ₂ Si(CH ₃ )CH ₂ ), 0.65 (m, 48H, SiCH2CH ₂ CH2SiCH2CH ₂ ), 1 .43 (m, 1 6H, SiCH ₂ CH2CH ₂ Si), 1 .77 (m, 16H, CH ₂ CH2CH ₂ NH), 3.01 (t, 16H, CH ₂ CH ₂ NH), 3.92 (s, 24H, ArOCH ₃ ), 4.14 (s, 16H, NHCH ₂ Ph), 4.76 (s, 8H, C _AR OH), 6.88 (s ancho, 16H, C _AR H), 7.00 (s ancho, 8H, C _AR H), 7.23 (s ancho, 8H, C _Ar H). ¹³ C-RMN (CD ₃ OD) : δ = -4.7 ((CH2CH2CH2) ₃ Si(CH ₃ )), -3.0 (Si(CH ₃ ) ₂ ), 1 3.3 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ Si(CH ₃ )), 1 9.7 ((CH ₃ ) ₂ SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ SiCH ₂ CH ₂ ), 1 9.9 ((CH ₃ )(CH ₂ CH ₂ CH ₂ Si)Si(CH ₂ CH ₂ CH ₂ Si-), 20.0 ((CH ₃ )Si(CH ₂ CH ₂ CH ₂ Si-) ₃ , 20.9 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ SiCH ₂ CH ₂ ), 21 .9 (SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ NH), 51 .2 (CH ₂ NHCH ₂ ), 53.3 (NH CH ₂ Ph), 56.6 (C _Ar -OCH ₃ ), 1 14.6 ( CAM), 1 1 6.5 ( CAM), 123.5 ( CAM) , 124.2 ( C _pS oCH ₂ UH), 148.8 ( psoOH), 149.2 (C/p _S0 OCH ₃ ). Análisis elemental (Ci ₄ 4H ₂₆ 8Cl8N ₈ Oi6Sii ₃ ): C, 57.34; H, 8.96; N, 3.71 ; Exp.: C, 56.79; H, 8.98; N, 3.44.

CAPACIDAD ANTIOXIDANTE Y ANTITUMORAL DE LOS DENDRÍMEROS DE LA INVENCIÓN

Ensayos de capacidad antioxidante

Como ejemplos de la capacidad antioxidante que presentan algunos compuestos de la presente invención, se detallan los métodos de determinación empleados y los resultados obtenidos para algunos de los compuestos. Ensayo ABTS

Ensayo de decoloración con el radical catiónico ABTS* ⁺ : se fundamenta en la cuantificación de la decoloración del radical ABTS* ⁺ , debido a la interacción con especies donantes de hidrógeno o de electrones. ^{38, 39} El radical catiónico ABTS* ⁺ es un cromóforo que absorbe a una longitud de onda de 734 nm y se genera por una reacción de oxidación del ABTS (2,2'-azino-bis- (3-etil benzotiazolin-6-sulfonato de amonio) con persulfato de potasio. Las mediciones se realizaron a una longitud de onda de 734 nm. En la evaluación se utilizaron 1 0 μΙ_ de una disolución 3 mM del compuesto a medir y 990 μΙ_ de la solución del radical ABTS* ⁺ . A los 30 min de reacción a temperatura ambiente y en la oscuridad, se leyó el cambio en la absorbancia respecto a la referencia del reactivo, a una longitud de onda de 734 nm. La referencia del reactivo consistió en una solución del radical ABTS* ⁺ con el solvente de la muestra. Transcurrido el tiempo de reacción, se mide la absorbancia de las disoluciones y se calculan los porcentajes de inhibición mediante la ecuación:

¾ nhibicién = X 100

Ensayo DPPH.

Ensayo de decoloración del catión radical oc-oc-difenil-B-picrilhidrazilo (DPPH-): para cuantificar la capacidad captadora de radicales libres se determina el grado de decoloración que provoca el agente antioxidante a una solución metanólica de DPPH mediante el método de Brand-Williams, con algunas modificaciones. ⁴⁰

Para este ensayo, se prepara un control por duplicado añadiendo 50μΙ_ de la disolución 0,1 mM del radical DPPH y 50μΙ_ de MeOH. Las muestras se preparan igual que el control pero sustituyendo los 50μΙ_ de MeOH por 1 ,66μΙ_ de la disolución de los compuestos (3mM) y 48,33μΙ_ de MeOH para que el antioxidante se encuentre a una concentración de 50μΜ igual que el radical. Una vez añadidos los compuestos sobre el radical, las mezclas se mantienen 30 minutos en oscuridad a temperatura ambiente. Transcurrido el tiempo de reacción, se mide la absorbancia de las disoluciones a 517,00nm y se calculan los porcentajes de inhibición mediante la ecuación:

¾ínkibíc én = x 100

Tabla 1. Resultados de actividad antioxidante de los compuestos 1 -6

PROPIEDADES ANTIOXIDANTES

Compuesto Cantidad de grupos fenólicos por molécula radical scavenging (%) [OH]= 50 μΜ

DPPH ABTS

1 4 31 ,9 71 ,2

2 8 34 84,6

3 4 58 96,6

4 8 50,5 88,4

5 4 13,1 87,9

6 8 20,5 60,3

Vainillina 1 0 58 Los resultados obtenidos por ambos métodos muestran que los derivados polifenólicos (1 -6) poseen mayor actividad antioxidante que la vainillina libre, ya que una menor concentración molar de grupos fenólicos da lugar a mayores inhibiciones. Entre ellos, los compuestos que presentan el enlace amino y el grupo amonio, preparados en este trabajo, resultan poseer mayor actividad que aquellos con enlace ¡mino, susceptibles de sufrir hidrólisis. También cabe destacar que, en los compuestos 1 -6, se observa un aumento en la capacidad antioxidante al aumentar la generación.

Ensayos de actividad antitumoral

Los ensayos de actividad antitumoral se llevaron a cabo en las líneas celulares humanas PC3, que corresponden al cáncer de próstata, y la línea Hela, que corresponde al cáncer de cuello uterino. La técnica empleada para determinar la citotoxicidad fue un ensayo MMT. Los resultados obtenidos demuestran que la vainillina por sí sola no presenta actividad antitumoral en ninguna de las dos líneas ensayadas, mientras que cuando se encuentra presente en las estructuras dendríticas, la citotoxicidad mostrada es bastante elevada (tabla 2). En ambas líneas celulares, se observa que el dendrímero de primera generación es el que presenta mayor capacidad antitumoral.

Tabla 2. Resultados de actividad antitumoral de los compuestos 3-6

Compuesto Cantidad de grupos fenólicos por molécula IC50 ^a g/mL ± SD

HeLa Pc3

3 4 3.3±0.4 3.9110.27

4 8 5.6±1 .5 0.8810.20

5 4 3.5410.03 2.3510.82

6 8 3.810.4 2.3910.53

Vainillina 1 + 100 + 100

APLICACIÓN INDUSTRIAL

Los usos de estos compuestos se basan en sus propiedades antioxidantes y por tanto pueden tener aplicación en la industria farmacéutica y/o cosmética.

En el campo de la biomedicina, los compuestos de la invención actuarán como agentes antioxidantes, ya que pueden proteger los productos que son particularmente sensibles a la oxidación. Además, pueden ser utilizados como agentes terapéuticos "per se". En el sentido utilizado, el término "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad de la composición calculada para producir el efecto deseado y, en general, vendrá determinada, entre otras causas, por las características propias de la composición, la edad, estado y antecedentes del paciente, la severidad de la enfermedad, y de la ruta y frecuencia de la administración.

Otro aspecto de la presente invención se refiere al potencial uso de estos compuestos como agentes antioxidantes para la preparación de composiciones con aplicaciones en cosmética tales como cuidado de la piel o productos de maquillaje, en máscaras de pestañas, cejas, cremas anti-edad, sombras de ojos, coloretes, delineador de ojos; o como constituyentes de lociones, cremas y leches de limpieza.

Cuando la composición cosmética según la invención se utiliza para la protección de los cabellos, la misma se puede presentar en forma de champús, de lociones, de geles o de composiciones para el aclarado, para aplicar antes o después del champú, antes o después de una coloración o decoloración, o antes, durante o después de tratamiento de permanente o de desrizado. La misma puede también presentarse en forma de lociones o de geles para el peinado o tratantes, de lociones o geles para el estirado (brushing) o el rizado, de lacas para cabellos, de composiciones de permanente o de desrizado, o de composiciones de coloración o de decoloración de los cabellos.

Cuando la composición de la invención puede utilizarse como producto de maquillaje de las pestañas, de las cejas o de la piel, la misma se presentaría por ejemplo en forma de cremas de tratamiento de la epidermis, de maquillajes de fondo, de barras de labios, de sombras de ojos para párpados, de coloretes, de delineadores (denominados también "eye-liners") o de máscaras.

Cuando la composición de la invención es una composición farmacéutica, puede ser una composición sólida o líquida, útil para la administración oral, parenteral o rectal o para tratamiento tópico.

Las composiciones farmacéuticas sólidas útiles para administración oral pueden ser polvos, cápsulas, comprimidos, comprimidos recubiertos de una película o microcápsulas; y pueden contener excipiente(s). Las composiciones farmacéuticas líquidas para administración oral son soluciones, suspensiones o emulsiones (leche o crema). Las composiciones farmacéuticas para administración parenteral son generalmente soluciones estériles de los agentes activos. Los compuestos de la invención se pueden utilizar solos o en combinación con uno o más compuestos de la invención, o en combinación con uno o más fármacos diferentes (o en cualquier combinación de los mismos). En general la formulación llevará asociada la presencia de uno o más excipientes farmacológicamente aceptables. El término excipiente se usa en la presente invención para describir cualquier ingrediente diferente del (de los) compuesto(s) de la invención. La elección del excipiente dependerá en gran grado de factores tales como medio de administración, efecto del excipiente en la solubilidad y la naturaleza de la forma de dosificación.

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