以下、本発明を詳細に説明する。本発明の� ��囲はこれらの説明に拘束されることはなく� ��以下の例示以外についても、本発明の趣旨� ��損なわない範囲で適宜変更し実施すること� ��できる。
 なお、本明細書は、本願優先権主張の基礎� ��なる特願2008-167823号明細書(2008年6月26日出願 )の全体を包含する。また、本明細書におい� �引用された全ての先行技術文献、並びに公� �公報、特許公報及びその他の特許文献は、� �照として本明細書に組み入れられる。

1.重合体-金属錯体複合体
 本発明は、高い血中滞留性と腫瘍組織選択� ��を有する高分子ミセルによるドラッグデリ� ��リーシステムに着目し、当該高分子ミセル� ��にMRI造影能を有する金属錯体を内包させる� ��めの、ブロック共重合体-金属錯体複合体を 提供するものである。
 本発明の重合体-金属錯体複合体は、下記一 般式(a):
   ポリ(hph)-block-ポリ(carbo)      (a)
〔式(a)中、ポリ(hph)は非荷電性親水性のポリ� ��ー鎖セグメントを表し、ポリ(carbo)は側鎖に カルボキシル基を有するポリマー鎖セグメン トを表す。なお、本発明においては、便宜上 、ポリ(hph)やポリ(carbo)等と称しているが、「 ポリ」の語には、いわゆる「オリゴ」の範疇 に入るものも包合されるものとする。〕
で示されるブロック共重合体(A)と、MRI造影能 を有する金属錯体(B)とを含んでなる重合体-� �属錯体複合体であって、該共重合体(A)中の� �リ(carbo)のカルボキシルアニオンと、該金属� ��体(B)とが、金属原子(M)を介して結合した構� ��を含むものである。

 ここで、共重合体(A)中のポリ(carbo)のカル ボキシルアニオンと、金属錯体(B)とが、金属 原子(M)を介して結合した構造とは、具体的に は、共重合体(A)中のポリ(carbo)のカルボキシ� �アニオンに金属原子(M)が結合し、かつ該金� �原子(M)に金属錯体(B)が結合した構造である� �とが好ましい。また、共重合体(A)と金属錯� �(B)とのリンカー的な役割を果たす金属原子(M )は、金属原子のみであってもよいし、金属� �子含有化合物中の金属原子であってもよく� �限定はされず、後者の例示としては、金属� �体の中心金属原子であることが好ましい。� �属錯体の中心金属原子としては、限定はさ� �ないが、例えば、抗腫瘍活性を有する金属� �体(C)の中心金属原子であることが好ましく� �この場合、MRI造影能のみならず抗腫瘍活性� �も発揮させることができる。なお、金属錯� �(C)は、限定はされないが、本発明の複合体� �高い血中安定性を発揮できるよう、ブロッ� �共重合体(A)に固定化されたものであること� �好ましい。

 共重合体(A)中、非荷電性親水性のポリマ� ��鎖セグメントであるポリ(hph)としては、限� �はされないが、例えば、ポリエチレングリ� �ール(PEG)、ポリ(2-メチル-2-オキサゾリン)、� �リ(2-エチル-2-オキサゾリン)、ポリ(2-イソプ� ��ピル-2-オキサゾリン)、ポリアクリルアミド 、ポリメタクリルアミド、ポリビニルアルコ ール、ポリアクリル酸ヒドロキシエチル及び ポリ(メタクリル酸ヒドロキシエチル)からな� ��群より選ばれる親水性ポリマーに由来する� ��のが好ましく挙げられ、中でも、ポリエチ� ��ングリコールに由来するものがより好まし� ��。

 また、共重合体(A)中、側鎖にカルボキシル� ��を有するポリマー鎖セグメントであるポリ( carbo)としては、限定はされないが、例えば、 ポリ(グルタミン酸)、ポリ(アスパラギン酸)� �ポリ(アクリル酸)、ポリ(メタクリル酸)及び� ��リ(リンゴ酸)からなる群より選ばれるアニ� �ン性ポリマーに由来するものが好ましく挙� �られ、中でも、ポリ(グルタミン酸)及びポリ (アスパラギン酸)に由来するものがより好ま� ��い。
 本発明の重合体-金属錯体複合体としては、 具体的には、下記一般式(1)又は(2)で示される もの複合体が例示できる。

 また、本発明の重合体-金属錯体複合体の、 他の好ましい具体例としては、下記一般式(1- a)又は(2-a)で示される複合体が挙げられる。

 上記式(1)、(2)、(1-a)及び(2-a)中、R ¹ は水素原子又は未置換若しくは置換された直 鎖若しくは分枝のC _1-12 アルキル基を表し、L ¹ 及びL ² は連結基を表し、R ² はそれぞれ独立してメチレン基又はエチレン 基を表し、R ³ はそれぞれ独立して水素原子、アミノ基の保 護基、疎水性基又は重合性基を表し、R ⁴ はヒドロキシル基又は開始剤残基を表し、
R ⁵ はそれぞれ独立して水素原子、アルカリ金属 のイオン、又は下記一般式(3)若しくは(4):
(式(3)及び(4)中、R ⁶ は金属原子又は金属錯体由来の基を表し、R ⁷ はMRI造影能を有する金属錯体由来の基を表す 。)
で示される基を表す。ここで、一般式(4)で示 される基は、結合の手を2つ有しているが、� �れは2つのR ⁵ 部分を連結する基(すなわち、2つのカルボキ� ��ルアニオンと結合する基)であることを意味 する。また、mは5~20,000(好ましくは10~5,000、よ り好ましくは40~500)の整数であり、nは2~5,000(� �ましくは5~1,000、より好ましくは10~200)の整数 である。さらに、上記式(1)及び(2)においては 、xは0~5,000(好ましくは0~1,000、より好ましく� �0~200)の整数(但し、x≦n)である。なお、上記� ��(1)及び(2)において、n-x個の繰り返し単位とx 個の繰り返し単位とは、ランダムに混在して 分布していてもよいし、ブロック状に分布し ていてもよく、限定はされない。

 上記式(1)、(2)、(1-a)及び(2-a)中の、m個の� �り返し単位の部分が、前記式(a)におけるポ� �(hph)のセグメントに相当する。また、上記式 (1)及び(2)中の、n-x個とx個の繰り返し単位の� �分、及び上記式(1-a)及び(2-a)中の、n個の繰り 返し単位の部分が、前記式(a)におけるポリ(ca rbo)のセグメントに相当する。

 R ¹ について、前述した未置換若しくは置換され た直鎖若しくは分枝のC _1-12 アルキル基としては、限定はされないが、例 えば、メチル、エチル、n-プロピル、iso-プロ ピル、n-ブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-� �ンチル、n-ヘキシル、デシル、ウンデシル等 が挙げられ、置換された場合の置換基として は、例えば、アセタール化ホルミル基、シア ノ基、ホルミル基、カルボキシル基、アミノ 基、C _1-6 アルコキシカルボニル基、C _2-7 アシルアミド基、同一もしくは異なるトリ-C _1-6 アルキルシロキシ基、シロキシ基またはシリ ルアミノ基が挙げられる。置換基がアセター ル化ホルミル基であるときは、酸性の温和な 条件下で加水分解して他の置換基であるホル ミル基(-CHO:またはアルデヒド基)に転化でき� �。このようなホルミル基、または上記カル� �キシル基もしくはアミノ基は、例えば、本� �明の複合体を生成した後に、対応する保護� �れた形態の基または部分から脱保護もしく� �転換して生じさせることができ、次いで必� �に応じ、適当な抗体もしくはその特異結合� �を有する断片(F(ab') ₂ 、F(ab)、または葉酸など)を共有結合し、そし て該複合体に標的指向性を付与するために利 用できる。このような官能基を片末端に有す るポリ(hph)セグメント(非荷電性親水性のポリ マー鎖セグメント)は、例えば、WO 96/32434、WO  96/33233、WO 97/06202に記載のブロック共重合� �のPEGセグメント部の製造法に準じて形成す� �ことができる。このように形成されるポリ(h ph)セグメントと、ポリ(carbo)セグメントとは� �前述した各ブロック共重合体の製造方法に� �じて、どのような連結様式をとることもで� �、どのような連結基で結合されていてもよ� �。該製造方法は、特に限定はされないが、� �端にアミノ基を有するポリ(hph)誘導体を用い て、そのアミノ末端から、例えば、β-ベンジ ル-L-アスパルテート及び/又はγ-ベンジル-L-� �ルタメートのN-カルボン酸無水物(NCA)を重合� ��せてブロック共重合体を合成し、その後、� ��鎖ベンジル基を他のエステル基に変換する� ��、または部分もしくは完全加水分解するこ� ��により目的のブロック共重合体を得る方法� ��挙げられる。この場合、得られた共重合体� ��構造は、一般式(1)または(1-a)の複合体を構� �する共重合体の構造となり、連結基L ¹ は、用いたポリ(hph)セグメントの末端構造に� ��来する構造となり、好ましくは-(CH ₂ ) _p -NH-である(ここで、pは1~5の整数である。)。� �た、ポリ(carbo)セグメント又はポリ(carbo)誘導 体を合成してから、予め用意したポリ(hph)セ� ��メントと結合させる方法でも、共重合体は� ��造可能である。この場合、結果的に上記の� ��法で製造したものと同一の構造となること� ��あるが、一般式(2)または(2-a)の複合体を構� �する共重合体の構造となることもあり、連� �基L ² は、限定はされないが、好ましくは-(CH ₂ ) _q -CO-である(ここで、qは1~5の整数である。)。

 R ³ について、前述したアミノ基の保護基として は、例えば、ベンジルオキシカルボニル基、 t-ブチルオキシカルボニル基、アセチル基及� ��トリフルオロアセチル基等が挙げられる。� ��た、疎水性基としては、例えば、ベンジル� ��ルボニル基及びベンズヒドリルカルボニル� ��等が挙げられる。さらに、重合性基として� ��、例えば、アクリロイル及びメタクリルロ� ��ル基等が挙げられる。
 R ⁴ について、前述した開始剤残基としては、例 えば、NCA重合の開始剤となり得る脂肪族また は芳香族の1級アミン化合物残基(-NH-アルキル )等が挙げられる。
 R ⁵ について、前述したアルカリ金属のイオンと しては、例えば、ナトリウム(Na)イオン、リ� �ウム(Li)イオン及びカリウム(K)イオン等が挙� ��られる。

 また、一般式(3)及び(4)で示される基におけ� ��R ⁶ としては、例えば、白金(Pt)、銅(Cu)、金(Au)及 び鉄(Fe)の金属原子、並びに白金、銅、金又� �鉄を中心金属原子とする金属錯体由来の基� �挙げられる。ここで、当該金属錯体由来の� �としては、限定はされないが、例えば、下� �一般式(5)及び(6)で示される基が例示できる� �なお、一般式(6)で示される基については、� �ス型及びトランス型のいずれの構造のもの� �含まれる。
〔式(5)及び(6)中、Mは白金、銅、金又は鉄の� �属原子を表す。〕

 また、R ⁶ としての、当該金属錯体由来の基としては、 例えば、抗腫瘍活性を有する金属錯体由来の 基であることが好ましく、具体的には、例え ば、下記式(5-a)及び(6-a)で示される基が挙げ� �れる。ここで、式(5-a)で示される基は、ジア ミノシクロヘキサン白金(II)錯体(ダハプラチ� ��(DACH Platin: DACHPt))由来の基であり、式(6-a)� �示される基は、シスプラチン(cisplatin: CDDP)� �来の基である。なお、式(6-a)で示される基と しては、トランスプラチン由来の基も含み得 るが、抗腫瘍活性を有する金属錯体由来の基 としては、シスプラチン由来の基が選択され る。

 次いで、一般式(3)で示される基におけるR ⁷ としては、MRI造影能を有する金属錯体由来の 基であればよく、特に限定はされないが、例 えば、ガドリニウム、ユーロピウム、マンガ ン、鉄又は銅を中心金属原子とする金属錯体 由来の基が好ましく挙げられる。当該金属錯 体としては、多座配位子との金属錯体である ことが好ましく、また、当該多座配位子が、 アミノカルボン酸系若しくはリン酸系化合物 、ポルフィリン系化合物、又はデフェリオッ クスアミンBであることがより好ましい。さ� �に、多座配位子としてのアミノカルボン酸� �若しくはリン酸系化合物としては、例えば� �エチレンジアミン四酢酸、ジエチレントリ� �ミン五酢酸、ジエチレントリアミン五酢酸� �スメチルアミド、トリエチレンテトラミン� �酢酸、ベンジロキシプロピオニック五酢酸� �エチレングリコールテトラミン四酢酸、テ� �ラアザシクロドデカン四酢酸、テトラアザ� �クロドデカン三酢酸、ジヒドロキシヒドロ� �シメチルプロピルテトラアザシクロドデカ� �三酢酸、ヒドロキシプロピルテトラアザシ� �ロドデカン三酢酸、及びテトラアザシクロ� �デカン四リン酸等が好ましく挙げられ、中� �も、エチレンジアミン四酢酸、ジエチレン� �リアミン五酢酸、ジエチレントリアミン五� �酸ビスメチルアミド、テトラアザシクロド� �カン四酢酸、及びヒドロキシプロピルテト� �アザシクロドデカン三酢酸がより好ましい� �

 ここで、R ⁷ としての上記金属錯体由来の基としては、具 体的には、例えば、下記一般式(7)、(8)、(9)及 び(10)で示される基が挙げられる。
〔式(7)、(8)、(9)及び(10)中、M ¹ はガドリニウム、ユーロピウム、マンガン、 鉄又は銅の金属原子を表す。〕

 また、R ⁷ としての上記金属錯体由来の基としては、よ り具体的には、例えば、下記式(7-a)、(8-a)、(9 -a)及び(10-a)で示される基が挙げられる。

 さらに、R ⁵ としての、一般式(3)で示される基としては、 上述したR ⁶ とR ⁷ とを組み合わせた基が挙げられるが、具体的 には、下記一般式(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、( 16)、(17)及び(18)で示される基を例示すること� ��でき、より具体的には、下記式(11-a)、(12-a)� ��(13-a)、(14-a)、(15-a)、(16-a)、(17-a)及び(18-a)で� ��される基が挙げられる。

〔式(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)及び(1 8)中、M ¹ は白金、銅、金又は鉄の金属原子を表し、M ¹ はガドリニウム、ユーロピウム、マンガン、 鉄又は銅の金属原子を表す。〕

 前記一般式(1)、(2)、(1-a)及び(2-a)で示される 本発明の複合体は、R ⁵ として、上述した一般式(3)で示される基を少 なくとも一部に含むものである。一般式(3)で 示される基の割合は、限定はされないが、例 えば、前記式(1)、(2)、(1-a)及び(2-a)で示され� �本発明の複合体に含まれる合計n個のR ⁵ 中、一般式(3)で示される基が0.01%以上である� ��とが好ましく、より好ましくは0.1%以上、さ らに好ましくは1%以上である。

 本発明の重合体-金属錯体複合体の製造方 法としては、限定はされないが、前述したブ ロック共重合体(A)と、MRI造影能を有する金属 錯体(B)とを、金属原子(M)(抗腫瘍活性を有す� �金属錯体(C)などの金属錯体も含む)の存在下� ��水性媒体中にて反応させる方法が好ましい� ��反応条件としては、目的の重合体-金属錯体 複合体が得られる限り、いかなる条件を設定 してもよく、例えば、前述した一般式(1)、(2) 、(1-a)及び(2-a)に示した複合体の構成となる� �うに、共重合体(A)、金属錯体(B)及び金属原� �(M)の使用量等を、適宜設定することができ� �。なお、金属原子(M)として上記金属錯体(C)� �使用する場合は、例えば、ダハプラチンや� �スプラチンと、共重合体(A)中のカルボキシ� �基との当量比(金属錯体(C)/共重合体(A)中のカ ルボキシル基)が、1/10000以上、好ましくは1/10 00以上、さらに好ましくは1/100以上となるよ� �に、使用量を設定することが好ましい。ま� �、反応温度は、限定はされないが、例えば5~ 60℃であることが好ましい。さらに、反応溶� ��となる水性媒体としては、水(特に、脱イオ ン水)または各種無機もしくは有機緩衝剤、� �セトニトリル、ジメチルホルムアミド、エ� �ノール等の水混和有機溶媒を、本発明の複� �体の形成反応に悪影響を及ぼさない範囲で� �んでいてもよい。

 本発明の複合体の形態としては、例えば� ��ポリ(hph)のセグメント及びポリ(carbo)のセグ� ��ントをそれぞれシェル部分及びコア部分と� ��て形成されたミセル状粒子に、MRI造影能を� ��する金属錯体が内包された形態にあるもの� ��好ましく挙げられ、さらに抗腫瘍活性を有� ��る金属錯体が内包された形態にあるものが� ��り好ましい。通常、水性媒体(水性溶媒)中� �おいては、本発明の複合体は、凝集して、� �溶化した高分子ミセル状の形態を形成し得� �。ポリ(hph)のセグメントは、親水性ポリマー 鎖のセグメントであるため、ミセル粒子の表 面側のシェル部分を構成し、ポリ(carbo)のセ� �メントは疎水性ポリマー鎖のセグメントで� �るため、ミセル粒子の内部側のコア部分を� �成する。ポリ(carbo)のセグメントに結合して� ��るMRI造影能を有する金属錯体や、抗腫瘍活� ��を有する金属錯体は、コア部分を構成する� ��リ(carbo)のセグメントとともに、ミセル粒子 の内部に内包された状態となる。このような 、本発明の複合体により構成される高分子ミ セル粒子は、水性媒体中における平均分散粒 子径(動的光散乱法により測定)が、例えば、1 0nm~1μmであることが好ましく、より好ましく� ��10nm~200nmであり、さらに好ましくは20nm~50nmで ある。高分子ミセル粒子の単離及び精製は、 常法により、水性媒体中から回収することが できる。典型的な方法としては、限外濾過法 、ダイアフィルトレーション、透析方法が挙 げられる。

2.MRI造影用及び/又は抗腫瘍用組成物
 本発明においては、前述した重合体-金属錯 体複合体を含むことを特徴とする、MRI造影用 組成物及び/又は抗腫瘍用組成物(医薬組成物) が提供される。本発明の組成物は、MRI造影に よる癌(悪性腫瘍)の検出・診断手段、及び/又 は癌(悪性腫瘍)の治療手段として使用するこ� ��ができる。腫瘍の種類は、限定はされず、� ��知の各種癌種を挙げることができる。
 本発明の組成物において、前述した重合体- 金属錯体複合体の含有割合は、限定はされず 、MRI造影の効果や抗腫瘍効果を勘案して適宜 設定することができる。

 本発明の組成物は、ヒト、マウス、ラット� ��ウサギ、ブタ、イヌ、ネコ等の各種動物に� ��用することができ、限定はされない。被験� ��物への投与方法は、通常、点滴静注などの� ��経口用法が採用され、投与量、投与回数及� ��投与期間などの各条件は、被験動物の種類� ��び状態のほか、組成物の使用目的に応じて� ��適宜設定することができる。例えば、抗腫� ��用効果を得ることを目的として、ヒトに静� ��内投与をする場合の用量は、実験動物また� ��ボランティアによる小実験を行い、それら� ��結果を考慮して、さらには患者の状態を考� ��して専門医が決定するのが好ましく、限定� ��されないが、一般には、1日1回、1.0~1,000 mg/ m ² (患者の体表面積)とすることができ、また、1 0~200 mg/m ² (患者の体表面積)を1日1回、数日間連続投与� �、一定期間休薬するか、あるいは、50~500 mg/ m ² (患者の体表面積)を1日1回投与した後、数日� �休薬する等、投与スケジュールにより、適� �な用量を選択することができる。

 本発明の組成物は、MRI造影用及び/又は抗腫 瘍用といった用途を勘案し、薬剤製造上一般 に用いられる賦形材、充填材、増量剤、結合 剤、湿潤剤、崩壊剤、潤滑剤、界面活性剤、 分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、防腐 剤、矯味矯臭剤、無痛化剤、安定化剤及び等 張化剤等を適宜選択して使用することができ る。
 本発明においては、被験動物の体内に本発� ��の重合体-金属錯体複合体、又は上記本発明 の組成物を投与することを特徴とする、腫瘍 検出用MRI造影方法を提供することができる。 また同様に、本発明においては、被験動物の 体内に本発明の重合体-金属錯体複合体、又� �上記本発明の組成物を投与することを特徴� �する、癌の治療方法を提供することができ� �。

3.MRI造影用及び/又は抗腫瘍用キット
 本発明のMRI造影用及び/又は抗腫瘍用キット は、前述した重合体-金属錯体複合体を含む� �とを特徴とする。当該キットは、腫瘍検出� �MRI造影方法や、癌の治療方法等に好ましく� �いることができる。
 当該キットにおいて、本発明の重合体-金属 錯体複合体(高分子ミセル粒子状の形態もの� �の含む)の保存状態は、限定はされず、その� ��定性(保存性)及び使用容易性等を考慮して� �溶液状又は粉末状等の状態を選択できる。
 本発明のキットは、前記重合体-金属錯体複 合体以外に他の構成要素を含んでいてもよい 。他の構成要素としては、限定はされないが 、例えば、各種バッファー、防腐剤、分散剤 、安定化剤、及び使用説明書(使用マニュア� �)等を挙げることができる。

 以下に、実施例を挙げて本発明をより具体� ��に説明するが、本発明はこれらに限定され� ��ものではない。