【발명의 명칭】

모루신, 구와논 지 또는 상백피를 함유하는 근육 질환 예방 및 치료용 또는 근 기능 개선용 조성물

【기술분야】

본 출원은 2015년 5월 26일에 출원된 대한민국 특허출원 제 10-2015-0072738 호를 우선권으로 주장하고， 상기 명세서 전체는 본 출원의 참고문헌이다. 본 발명은 모루신, 구와논 지 또는 상백피를 함유하는 근육 질환 예방 및 치 료용 또는 근 기능 개선용 조성물에 관한 것으로， 보다 상세하게는 근 단백질 합성 에 관여하는 p-mTOR의 단백질 발현 증가， 근 단백질 분해에 관여하는 MuRF-1과 atrogin-1의 mRNA 발현 억제, 근육 분화에 관여하는 MyoD와 myogenin의 mRNA 발현 을 증가시켜 근육 질환 예방 및 치료 또는 근 기능 개선에 우수한 효과를 나타내는 모루신, 구와논 지 또는 상백피 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 및 치료용 또는 근 기능 개선용 조성물에 관한 것이다.

【배경기술】

근위축 (Muscle atrophy)이란 근육량의 점진적 감소에 의하여 발생하는 것으 로, 근육의 약화 및 퇴행을 일컫는다 (Cell, 119(7)： 907-910, 2004) . 근 위축은 비 활동， 산화적 스트레스， 만성 염증에 의해 촉진되며 근육 기능과 운동 능력을 약화 시킨다 (Clinical Nutrition, 26(5)： 524-534, 2007). 근 기능을 결정짓는 가장 중 요한 요소는 근육량이며， 이는 단백질 합성과 분해의 균형에 의해 유지된다. 근 위 축증은 단백질 분해가 합성보다 더 일어날 때 발생한다 (The International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 37(10)： 1985-1996, 2005) . 근육 크기는 근육 내에서 일어나는 동화작용 (anabolism)이나 이화작용 (catabolism)을 유도하는 세포 내 신호전달 과정 (signaling pathways)에 의해 조절 되며 근 단백질의 분해보다 합성을 유도하는 신호전달 반웅이 많이 일어날 경우 근 단백질 합성이 증가되는데， 이는 근 단백질 증가에 따른 근육 크기 증가 (hypertrophy, 근비대)나 근섬유 수 _. 증가 (hyperplasia)로 나타난다 (The Korea Journal of Sports Science, 20(3)： 1551-1561, 2011). 근 단백질 합성에 관여하는 인자들은 근 세포 내에서 phosphatidylinositol-3 kinase (PI3K)/Akt pat ay의 자극을 기점으로 다운스트림 단백질 (downstream proteins)을 인산화시킴으로써 단백질 합성을 유도한다. PI3K/Akt 신호전달에 의한 ma隱 alian target of rapamycin (mTOR)의 활성은 세포 내에서 다양한 성장 신호를 통합하는 중심 성장 신호전달 인자로 인정되고 있다. mTOR는 mRNA translation을 개시하는 두 인자, 4E-binding protein (4EBP1)과 phosphorylated 70-kDa ribosomal S6 kinase (p70S6K)를 활성화시킴으로써 근 단백 질 합성을 유도하여 근육량 증가에 기여한다 (The Korea Journal of Sports Science, 20(3): 1551-1561, 2011； The International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 43(9)： 1267-1276, 2011). 반대로 전사 인자 (transcript ion factor)인 forhead box (FoxO)가 세포질에서 핵 내로 이동하면 단백질 분해에 관여 하는 E3 ubiquitin ligase인자 atrogin-1과 MuRF-1의 발현을 증가시킨다 (Disease Models and Mechanisms, 6: 25-39， 2013). 이들의 발현량이 증가하면 근육 내의 단 백질 분해가 촉진되어 근육량이 줄어들게 된다. 따라서 mTOR의 활성 촉진과 atrogin-1과 MuRF-1 발현 억제는 근육 단백질의 양을 증가시켜 근육량을 증가시키 게 된다. 근육세포의 분화와 근육 형성은 다양한 근육 조절 인자 (muscle regulatory factors)에 의해 조절된다. 그 중， MyoD는 근육 특이 유전자의 발현을 개시하게 하 고 근육위성세포 (muscle satellite eel Is)가 근원세포 (myoblast)로 분화하는 것을 유도한다. MyoD의 활성에 의한 myogenin 발현의 유도는 근원세포의 결합 (fusion) 에 가장 중요한 요소로， 근관세포 (myotube)의 형성에 관여한다. 이와 같은 과정을 통해 형성된 근섬유는 다발을 이루어 최종적으로 근육을 형성하게 된다 (Cellular and Molecular Life Sciences, 70： 4117-4130, 2013). 상백피 (Mori Cortex Radicis)는 뽕나무과 (Moraceae)의 뽕나무속 식물 (Morus spp.)에 속하는 모러스 알바 alba) 또는 그 외의 식물들의 뿌리껍질을 건조 한 것이다. 뽕나무라고 불리우는 모러스 알바는 항비만 (Nutrition Research and Practice, 8(6)： 613-617, 2014), 항광노화 (Journal of Korea Society of Food Science and Nutrition, 42(11): 1744-1752 , 2013), 항당뇨 (Journal of Ethnopharmacology, 100(3)： 333-338, 2005) , 항산화와 미백 (Food and Chemical Toxicology, 49(4)： 785-790, 2011) 등의 활성이 보고되어 있다. 모루신 (Morusin)과 구와논 지 (kuwanon G)는 주로 상백피에서 발견되는 플라 본 ( f l avone)이다 (Mi crochemi cal Journal , 110： 731-738, 2013) . 모루신은 항균 (Journal of China Pharmaceut ical Universi ty, 45(2)： 221-226, 2014) , 항비만 (Molecule, 16(7)： 6010-6022， 2011) , 항암 (Toxicology Letters 232(2)： 490-498, 2015)의 활성을 갖는 것으로 보고되어 있다. 구와논 지는 항균 (Journal of Ethnopharmacology, 84(2-3)： 181-5 , 2003； Phytomedi cine, 11(7-8)： 666-672, 2004)의 활성을 갖는 것으로 보고되어 있다. 그러나， 본 발명의 이전에는 상백피, 모루신 또는 구와논 지의 근육 질환 예 방 및 치료 또는 근 기능 개선에 관해서는 알려진 바 없었다.

【발명의 내용】

【해결하려는 과제】

이에 본 발명자들은 우수한 근 기능 조절 활성을 가지며 안전하게 적용될 수 있는 천연물질을 탐색한 결과, 모루신 (morusin) , 구와논 지 (kuwanon G) 또는 상백 피 추출물 (Mor i Cortex Radicis extract)이 근육 질환 예방 및 치료 또는 근 기능 개선 활성이 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다. 따라서 , 본 발명의 목적은 하기 화학식 1의 화합물, 하기 화학식 2의 화합물 및 상백피 추출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다:

[화학식 1]

[화학식 2]

본 발명의 다른 목적은 상기 화학식 1의 화합물, 상기 화학식 2의 화합물 및 상백피 추출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 근 기능 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다ᅳ 본 발명의 다른 목적은 상기 화학식 1의 화합물, 상기 화학식 2의 화합물 및 상백피 추출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 근 기능 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 다른 목적은 상기 화학식 1의 화합물, 상기 화학식 2의 화합물 및 상백피 추출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 근육 질환 예방 또는 치료제 제조를 위한 용도를 제공하는 것이다. 본 발명의 다른 목적은 상기 화학식 1의 화합물， 상기 화학식 2의 화합물 및 상백피 추출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 이를 필요로 하는 개체에 유 효량으로 투여하는 것을 특징으로 하는 근육 질환 예방 또는 치료 방법을 제공하는 것이다.

【과제의 해결 수단】

상기한 본 발명의 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 하기 화학식 1의 화합 물, 하기 화학식 2의 화합물 및 상백피 추출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이 상을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다: [화학식 1]

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 상기 화학식 1의 화합 물， 상기 화학식 2의 화합물 및 상백피 추출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이 상을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 근 기능 개선용 식품 조성물을 제공한다. 본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 화학식 1의 화합물, 상 기 화학식 2의 화합물 및 상백피 추출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 유 효성분으로 포함하는 근 기능 개선용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합 물, 상기 화학식 2의 화합물 및 상백피 추출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이 상의 근육 질환 예방 또는 치료제 제조를 위한 용도를 제공한다. 본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 상기 화학식 1의 화합 물， 상기 화학식 2의 화합물 및 상백피 추출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이 상을 이를 필요로 하는 개체에 유효량으로 투여하는 것을 특징으로 하는 근육 질환 예방 또는 치료 방법을 제공한다. 이하 본 발명에 대해 상세히 설명한다 . 본 발명은 하기 화학식 1의 화합물, 하기 화학식 2의 화합물 및 상백피 추 출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예 방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다:

[화학식 1]

[화학식 2]

본 발명에서 상기 상백피 (Mor i Cor tex Radi ci s)는 뽕나무과 (Moraceae)의 뽕 나무속 식물 (Morus spp . )에 속하는 모러스 알바 (Morus alba) 또는 그 외의 식물들 의 뿌리껍질을 건조한 것이다. 본 발명의 일실시예에 따르면, 본 발명자들은 상백피로부터 상기 화학식 1 로 표시되는 화합물인 모루신 및 상기 화학식 2로 표시되는 화합물인 구와논 지를 분리하였고， 상기 모루신， 구와논 지 및 상백피 추출물이 근 단백질 합성에 관여하 는 p— mTOR의 단백질 발현 증가, 근 단백질 분해에 관여하는 MuRF-1과 atrogin-1의 mRNA 발현 억제， 근육 분화에 관여하는 MyoD와 myogenin의 mRNA 발현을 증가시킴에 따라, 근육량을 증대시키는데 우수한 효과가 있다는 것을 확인하였다. 상기 화학식 1의 화합물 또는 상기 화학식 2의 화합물은 식물 추출물로부터 분리 또는 합성하여 이용하거나, 시판되고 있는 화합물을 이용할 수 있다. 본 발명에서 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 화학식 2로 표시되는 화합물은 상백피 추출물로부터 분리된 것일 수 있다. 상기 화학식 1로 표시되는 화 합물 또는 화학식 2로 표시되는 화합물은 상백피에서 분리된 것일 수 있다 본 발명의 상백피 추출물은 공지의 천연물 추출방법에 의하여 추출될 수 있 다. 바람직하게는 물， 탄소수 i 내지 6개의 유기용매 및 아임계 또는 초임계 유체 로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출될 수 있다. 상기 탄소수 1 내 지 6개의 유기용매는 탄소수 1 내지 6개의 알코올 (alcohol), 아세톤 (acetone) , 에 테르 (ether), 벤젠 (benzene), 클로로포름 (chloroform) , 에틸아세테이트 (ethyl acetate), 메틸렌클로라이드 (methylene chloride), 핵산 (hexane), 시클로핵산 (cyclohexane) 및 석유에테르 (petroleum ether)로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 상백피 추출물은 건조시킨 상백피를 식품가공에 적합한 정 제수， 에탄올 및 아임계수 또는 초임계 이산화탄소를 이용하여 추출， 정제하여 얻 을 수 있거나， 초고압 추출 장치를 이용하여 추출， 정제하여 얻을 수 있으며, 또는 상백피 식물을 직접 압착하여 얻은 오일로부터 분리 정제하여 얻을 수 있다. 예를 들에 100 MPa 이상의 초고압 조건 하에서 상백피를 추출하여 추출물을 수득할 수 있다. 바람직하게는 100 MPa 내지 1000 MPa의 초고압 조건일 수 있으나, 이에 제한 되는 것은 아니다. 본 명세서에서， '근' 은 심줄， 근육， 건을 포괄적으로 지칭하고， '근 기능 ' 은 근육의 수축에 의해 힘을 발휘하는 능력을 의미하며, 근육이 저항을 이겨내기 위하여 최대한으로 수축력을 발휘할 수 있는 능력인 근력, 근육이 주어진 중량에 얼마나 오랫동안 또는 얼마나 여러 번 수축과 이완을 반복할 수 있는지를 나타내는 능력인 근지구력， 단시간 내에 강한 힘을 발휘하는 능력인 순발력을 포함한다. 이 러한 근 기능은 간이 주관하며, 근육량에 비례한다. 용어 '근 기능 개선' 은 근 기 능을 더 좋게 향상시키는 것을 말한다. 본 발명의 근육 질환 예방 및 치료용 약학 조성물은 근육 소모 또는 퇴화로 인한 근육 질환의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다. 근육 소모 및 퇴화는 유전적 요인， 후천적 요인， 노화 등을 원인으로 발생하며ᅳ 근육 소모는 근육량의 점진적 손실， 근육， 특히 골격근 또는 수의근 및 심장근육의 약화 및 퇴행을 특징으로 한 다. 이와 관련된 질환의 예로는 긴장감퇴증 (atony) , 근위축증 (muscul ar atrophy) , 근이영양증 (muscul ar dystrophy) , 근육 퇴화, 근경직증， 근디스트로피， 근위축성 축삭경화증, 근무력증, 악액질 (cachexi a) , 근육감소증 (sarcopeni a) 등을 들 수 있 으나 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 조성물은 근육량 증대 효과가 있으며, 근육은 그종류를 제한하지 않는다. 본 발명의 근육 질환 예방 및 치료용 또는 근 기능 개선용 조성물은 상백피 추출물을 단독으로 함유하거나 또는 상백피 추출물과 그의 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 추가적인 성분을 포함하게 되면 본 발명의 조성물의 근 기능 개선 효과가 더욱 증진될 수 있을 것이다. 상기 성분 추가 시에 는 복합 사용에 따른 피부 안전성， 제형화와 용이성， 유효성분들의 안정성을 고려 할 수 밌다. 본 발명에 따른 조성물은 경구 투여제， 경피투여제， 흡입투여제 등 약학적 조성물의 형태, 기능성 식품， 영양 보조제, 건강식품 및 식품 첨가제 등의 식품 조 성물 형태 또는 화장료 조성물 형태로 제조되어 체내에 투여될 수 있다. 본 발명의 상기 화학식 1의 화합물， 화학식 2의 화합물 또는 상백피 추출물 은 근육 질환 예방 및 치료 효과 또는 근 기능 개선 효과가 뛰어나다. 본 발명의 조성물은 근육량 증가 촉진 효과를 가지고， 근육은 그 종류를 제 한하지 않는다. 근육 증가는 신체 성분 중에서도 특히 근육의 성능을 향상시키는 것으로， 육체적 운동 및 지구력 향상을 통해 근육량을 증가시킬 수 있고， 근육 증 가 효과를 가지는 물질을 체내에 투여하는 방식으로 근육량을 증가시킬 수 있다. 본 발명의 상기 화학식 1와 화합물， 화학식 2의 화합물 또는 상백피 추출물 은 근육량 증가 활성이 우수하므로 약학적 조성물의 유효한 성분으로 이용될 수 있 다. 또한， 본 발명의 상기 화학식 1의 화합물, 화학식 2의 화합물 또는 상백피 추출물은 근육량 증가 활성이 우수하므로 식품 조성물의 유효한 성분으로 이용될 수 있다. 또한, 본 발명의 상기 화학식 1의 화합물， 화학식 2의 화합물 또는 상백피 추출물은 근육량 증가 활성이 우수하므로 화장료 조성물의 유효한 성분으로 이용될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 상기 화학식 1의 화합물, 화학식 2의 화합물 또는 상백피 추출물의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 용어 "약학적으로 허용 가능한" 이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때， 통상적으로 알레르기 반웅 또는 이와 유사한 반웅을 일으키지 않는 것을 말하며, 상기 염으로는 약제학적으로 허용 가능한 유리산 ( free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 바람직하다. 상기 화학식 1의 화합물， 화학식 2의 화합물 또는 상백피 추출물의 약제학 적으로 허용 가능한 염은 유기산 또는 무기산을 이용하여 형성된 산 부가염일 수 있으며, 상기 유기산은 예를 들면 포름산， 아세트산， 프로피온산, 락트산, 부티르 산， 이소부티르산, 트리플루오로아세트산, 말산， 말레산， 말론산， 푸마르산， 숙신 산， 숙신산 모노아미드, 글루탐산, 타르타르산, 옥살산, 시트르산, 글리콜산, 글루 쿠론산, 아스코르브산， 벤조산, 프탈산， 살리실산， 안트라닐산, 디클로로아세트산， 아미노옥시 아세트산, 밴젠술폰산， P-를루엔술폰산 또는 메탄술폰산을 포함한다. 무기산은 예를 들면 염산, 브름산， 황산, 인산， 질산， 탄산 또는 붕산을 포함한다. 산 부가염은 바람직하게는 염산염 또는 아세트산염 형태일 수 있으며， 보다 바람직 하게는 염산염 형태일 수 있다. 상기 언급된 산 부가염은 a) 상기 화학식 1의 화합물， 화학식 2의 화합물 또는 상백피 추출물과 산을 직접 흔합하거나， b) 이들 중 한 가지를 용매 또는 함 수 용매 중에 용해시키고 혼합시키거나 또는 c) 상기 화학식 1의 화합물， 화학식 2 의 화합물 또는 상백피 추출물을 용매 또는 수하 용매 중의 산에 위치시키고 이들 을흔합하는 일반적인 염 제조방법으로 제조된다. 위와는 별도로 추가적으로 염이 가능한 형태는 가바염, 가바펜틴염， 프레가 발린염， 니코틴산염， 아디페이트염, 헤미말론산염， 시스테인염, 아세틸시스테인염, 메티오닌염， 아르기닌염, 라이신염， 오르니틴염 또는 아스파르트산염 등이 있다. 또한， 본 발명의 근육 질환 예방 및 치료용 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대 , 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여 용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스， 전분， 셀를로스 유 도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 또한 비경구 투여 용 담체는 물， 적합한 오일， 식염수， 수성 글루코스 및 글리콜 등을 포함할 수 있 다. 또한, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아 황산수소나트륨， 아황산나트륨 또는 아스코 s브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드， 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄을이 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다 (Remington ' s Pharmaceut i cal Sci ences , 19th ed . , Mack Pub 1 i sh i ng Company , Easton, PA, 1995) . 본 발명의 약학 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투 여할 수 있다. 예를 들어， 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구적인 투여 방법으로는 이어 ί 제한되는 것은 아니나， 정맥내， 근육내, 동맥내, 골수내， 경막내, 심장내， 경피， 피하， 복강내, 비강내， 장관， 국소， 설하 또는 직장내 투여일 수 있 다. 본 발명의 약학 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화 할 수 있다. 제형화할 경우에는 하나 이상의 완 충제 (예를 들어， 식염수 또는 PBS) , 항산화제， 정균제, 킬레이트화제 (예를 들어, EDTA 또는 글루타치온)， 층진제, 증량제， 결합제, 아쥬반트 (예를 들어， 알루미늄 하이드록사이드)， 현탁제， 농후제 습윤제， 붕해제 또는 계면활성제, 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제， 환제, 산제, 과립제， 액제, 겔제， 시 럽제, 슬러리제， 현탁액 또는 캡슐제 등이 포함되며， 이러한 고형제제는 본 발명의 약학 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면， 전분 (옥수수 전분， 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분 등 포함)， 칼슘카보네이트 (ca l cium carbonate) , 수크로스 (sucrose) , 락토오스 ( l actose) , 텍스트로오스， 솔비를， 만니틀， 자일리틀, 에리스 리를 말티를， 샐를로즈， 메틸 샐를로즈， 나트륨 카르복시메틸샐를로오즈 및 하이드 록시프로필메틸-샐를로즈 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 예컨대, 활성성 분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 흔합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다. 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된 다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제， 유제 또는 시럽제 등이 해당되 는데 흔히 사용되는 단순 회석제인 물 또는 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형 제， 예를 들면 습윤제， 감미제， 방향제 또는 보존제 등이 포함될 수 있다. 또한， 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈， 한천， 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있으며, 항웅집제, 윤활제， 습윤제, 향료, 유 화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다. 비경구적으로 투여하는 경우 본 발명의 약학 조성물은 적합한 비경구용 담 체와 함께 주사제 , 경피 투여제 및 비강 흡입제의 형태로 당 업계에 공지된 방법에 따라 제형화될 수 있다. 상기 주사제의 경우에는 반드시 멸균되어야 하며 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염으로부터 보호되어야 한다. 주사제의 경우 적합한 담 체의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 물, 에탄올， 폴리올 (예를 들어， 글리세를, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등)， 이들의 혼합물 및 /또는 식물유를 포함하는 용매 또는 분산매질일 수 있다. 보다 바람직하게는， 적합한 담체로는 행 크스 용액, 링거 용액， 트리에탄을 아민이 함유된 PBS (phosphate buf fered sal ine) 또는 주사용 멸균수, 10% 에탄올， 40% 프로필렌 글리콜 및 5% 덱스트로즈 와 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 상기 주사쎄를 미생물 오염으로부터 보호 하기 위해서는 파라벤， 클로로부탄올， 페놀 소르빈산, 티메로살 등과 같은 다양한 항균제 및 항진균제를 추가로 포함할 수 있다. 또한， 상기 주사제는 대부분의 경우 당 또는 나트륨 클로라이드와 같은 등장화제를 추가로 포함할 수 있다. 경피 투여제의 경우 연고제， 크림제， 로션제, 겔제， 외용액제， 파스타제, 리니멘트제 , 에어를제 등의 형태가 포함된다. 상기에서 '경피 투여 ' 는 약학 조성 물을 국소적으로 피부에 투여하여 약학 조성물에 함유된 유효한 양의 활성성분이 피부 내로 전달되는 것을 의미한다. 흡입 투여제의 경우， 본 발명에 따라 사용되는 화합물은 적합한 추진제, 예 를 들면， 디클로로플루오로메탄， 트리클로로플루오로메탄， 디클로로테트라플루오로 에탄， 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체를 사용하여, 가압 팩 또는 연무기로부터 에어로졸 스프레이 형태로 편리하게 전달 할 수 있다. 가압 에어로졸의 경우， 투약 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브를 제공하여 결정할 수 있다. 예를 들면， 흡입기 또는 취입기에 사용되는 젤라틴 캡슐 및 카트리지는 화합물, 및 락토즈 또는 전분 과 같은 적합한 분말 기제의 분말 흔합물을 함유하도록 제형화할 수 있다. 비경구 투여용 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌 (Remington ' s Pharmaceut i cal Sci ence , 15th Edi t ion, 1975. Mack Publ i shing Com any , East on , Pennsylvani a 18042， Chapter 87： Bl aug, Seymour)에 기재되어 있다. 본 발명의 근육 질환 예방 및 치료용 약학 조성물은 상기 화학식 1의 화합 물， 화학식 2의 화합물 및 상백피 추출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 유효량으로 포함할 때 바람직한 근육 질환 예방 및 치료 효과를 제공할 수 있다. 본 명세서에서, '유효량 ¹ 이라 함은 음성 대조군에 비해 그 이상의 반응을 나타내는 양을 말하며 바람직하게는 근 기능을 향상시키기에 층분한 양을 말한다. 본 발명의 약학 조성물에 상기 화학식 1의 화합물， 화학식 2의 화합물 또는 상백피 추출물이 0.01 내지 99.99% 포함될 수 있으며， 잔량은 약학적으로 허용 가능한 담체가 차지 할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물에 포함되는 상기 화학식 1의 화합물， 화학식 2 의 화합물 또는 상백피 추출물의 유효량은 조성물이 제품화되는 형태 등에 따라 달 라질 것이다. 본 발명의 약학 조성물의 총 유효량은 단일 투여량 (singl e dose)으로 환자 에게 투여될 수 있으며， 다중 투여량 (mul t iple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치 료 방법 ( fract ionated treatment protocol )에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약 학 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다. 비경구 투여 시는 상기 화학식 1의 화합물, 화학식 2의 화합물 또는 상백피 추출물을 기준으로 하루에 체중 1 kg당 바람직하게 0.이 내지 50 rag, 더 바람직하게는 0. 1 내지 30 nig 의 양으로 투여되도록， 그리고 경구 투여시는 상기 화학식 1의 화합물, 화학식 2의 화합물 또는 상백피 추출물을 기준으로 하루에 체중 1 kg당 바람직하게 0.01 내지 100 mg, 더 바람직하게는 0.01 내지 10 mg의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나 누어 투여할 수 있다. 그러나 상기 상기 화학식 1의 화합물， 화학식 2의 화합물 또 는 상백피 추출물의 용량은 약학 조성물의 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환 자의 연령， 체중， 건강 상태， 성별， 질환의 중증도， 식이 및 배설율 등 다양한 요 인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량이 결정되는 것이므로， 이러한 점을 고려 할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 상기 화학식 1의 화합물， 화학식 2 의 화합물 또는 상백피 추출물을 근육 질환 예방 및 치료를 위한 특정한 용도에 따 른 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형， 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다. 본 발명의 근육 질환 예방 및 치료용 약학 조성물은 단독으로 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 또는 생물학적 반응조절제를 사용하는 방법 들과 병용하여 사용할 수 있다. ^' 본 발명의 근육 질환 예방 및 치료용 약학 조성물은 또한 상기 화학식 1의 화합물， 화학식 2의 화합물 또는 상백피 추출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이 상을 유효성분으로 포함하는 외용제의 제형으로 제공할 수 있다. 본 발명의 근육 질환 예방 및 치료용 약학 조성물을 피부외용제로 사용하는 경우， 추가로 지방 물질, 유기 용매， 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화 제， 현탁화제， 안정화제, 발포제 ( foaming agent ) , 방향제， 계면활성계, 물， 이온형 유화제 , 비이은형 유화제 , 층전제， 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제， 보존제， 비타 민， 차단제， 습윤화제, 필수 오일， 염료， 안료， 친수성 활성제， 친유성 활성제 또 는 지질 소낭 등 피부 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피 부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분 들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다. 본 발명의 근육 질환 예방 및 치료용 약학 조성물이 피부 외용제로 제공될 경우， 이에 제한되는 것은 아니나, 연고， 패취， 겔， 크림 또는 분무제 등의 제형일 수 있다. 본 발명은 또한 하기 화학식 1의 화합물, 하기 화학식 2의 화합물 및 상백피 추출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 근 기능 개선용 식품 조성물을 제공한다:

[화학식 1]

[화학식 2]

본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품 (functional food) , 영양 보조제 (nutritional supplement) , 건강식품 (health food) , 식품 첨가제 (food additives) 및 사료 등의 모든 형태를 포함하며， 인간 또는 가축을 비롯한 동물을 취식대상으 로 한다. 상기 유형의 식품 조성물은 당 업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양 한 형태로 제조할 수 있다. 상기 유형의 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다. 일반 식품으로는 이에 한정되지 않지만 음료 (알콜성 음료 포함)， 과실 및 그의 가공식품 (예: 과일통조림， 병조림 , 잼， 마아말레이드 등)， 어 류， 육류 및 그 가공식품 (예: 햄， 소시지 콘비이프 등)ᅳ 빵류 및 면류 (예: 우동, 메밀국수， 라면， 스파게이트， 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크 쿠키， 엿, 유제품 (예: 버터, 치이즈 등)， 식용식물 유지， 마아가린， 식물성 단백질， 레토르트 식품， 냉동식품， 각종 조미료 (예: 된장， 간장， 소스 등) 등에 상기 화학식 1의 화합물， 화학식 2의 화합물 또는 상백피 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한， 영양보 조제로는 이에 한정되지 않지만 캡슐， 타블렛, 환 둥에 상백피 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한， 건강기능식품으로는 이에 한정되지 않지만 예를 들면, 상기 상백피 추출물 자체를 차， 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용 (건강음료)할 수 있도록 액상화, 과립화， 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한， 상기 상백피 추출물을 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조 하여 사용할 수 있다. 또한， 상백파 추출물과 근육 질환 예방 및 근 기능 개선 효 과가 있다고 알려진 공지의 활성 성분과 함께 흔합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다. 본 발명의 근육 질환 예방 및 근 기능 개선용 조성물이 건강음료 조성물로 이용되는 경우， 상기 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또 는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포 도당， 과당과 같은 모노사카라이드; 말토스， 슈크로스와 같은 디사카라이드; 덱스 트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드; 자일리톨， 소르비틀， 에리트리틀 둥의 당알콜일 수 있다. 감미제는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제; 사카린， 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물 의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL 당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게 는와 0.02 〜 0.03 g 이다. 상기 화학식 1의 화합물， 화학식 2의 화합물 또는 상백피 추출물은 근육 질 환 예방 및 근 기능 개선용 식품 조성물의 유효성분으로 함유될 수 있는데, 그 양 은 근육 질환 예방 및 근 기능 개선용 작용을 달성하기에 유효한 양으로 특별히 한 정되는 것은 아니나， 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 100 중량 ¾>인 것이 바람직하다. 본 발명의 식품 조성물은 상기 화학식 1의 화합물， 화학식 2의 화합물 또는 상백피 추출물과 함께 근육 질환 예방 및 근 기능 개선용 조성물에 효과가 있 는 것으로 알려진 다른 활성 성분과 함께 흔합하여 제조될 수 있다. 상기 외에 본 발명의 건강식품은 여러 가지 영양제 , 비타민， 전해질， 풍미 제， 착색제， 펙트산， 펙트산의 염， 알긴산， 알긴산의 염， 유기산， 보호성 콜로이드 증점제 _P H 조절제， 안정화제， 방부제, 글리세린， 알코올 또는 탄산화제 등을 함유 할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강식품은 천연 과일주스, 과일주스 음료 또는 야 채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 흔 합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0. 1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다. 본 발명은 또한 하기 화학식 1의 화합물， 하기 화학식 2의 화합물 및 상백피 추출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 근 기능 개 선용 화장료 조성물을 제공한다:

[화학식 1]

[화학식 2]

본 발명의 화장료 조성물은 상기 화학식 1의 화합물, 화학식 2의 화합물 및 상백피 추출물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 유효성분으로 함유하며 피부학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 기초 화장품 조성물 (화장수, 크림， 에센 스, 클렌징 폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제， 팩， 보디오일) , 색조 화장품 조성물 (화운데이션， 립스틱， 마스카라， 메이크업 베이스)， 두발 제품 조성물 (샴푸， 린스， 헤어컨디셔너， 헤어젤) 및 비누 등의 형태로 제조될 수 있다. 상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어， 피부연화제， 피부 침 투 증강제， 착색제, 방향제， 유화제， 농화제 및 용매를 포함할 수 있다. 또한， 향 료, 색소, 살균제， 산화방지게, 방부제 및 보습제 둥을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제， 무기염류， 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다. 예를 들면， 본 발명의 화장료 조성물로 세안제 및 비누를 제조하는 경우에는 통상 의 세안제 및 비누 베이스에 상기 상백피 추출물을 첨가하여 용이하게 제조할 수 있다. 크림을 제조하는 경우에는 일반적인 수중유적형 (0/W)의 크림베이스에 상백피 추출물 또는 이의 염을 첨가하여 제조할 수 있다. 여기에 향료， 킬레이트제， 색소, 산화방지제， 방부제 등과 물성개선을 목적으로 한 단백질， 미네랄, 비타민 등 합성 또는 천연소재를 추가로 첨가할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 상기 화학식 1의 화합물， 화학식 2의 화합물 또는 상백피 추출물의 함량은 이에 한정되지 않지만 전체 조성물 총중량에 대하여 0.001 내지 10 중량 %인 것이 바람직하고， 0.01 내지 5중량 %인 것이 더욱 바 람직하다. 상기 함량이 0.0이중량 % 미만에서는 목적하는 항노화 또는 주름개선 효 과를 기대할 수 없고， 10중량 % 초과에서는 안전성 또는 제형상의 제조에 어려움이 있을 수 있다. 본 발명은 하기 화학식 1의 화합물， 하기 화학식 2의 화합물 및 상백피 추 출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 근육 질환 예방 또는 치료제 제조를 위한 용도를 제공한다:

[화학식 1]

[화학식 2]

본 발명은 또한 하기 화학식 1의 화합물， 하기 화학식 2의 화합물 및 상백피 추출물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 이를 필요로 하는 개체에 유효량으 로 투여하는 것을 특징으로 하는 근육 질환 예방 또는 치료 방법을 제공한다:

[화학식 1]

[화학식 2]

본 발명의 상기 '유효량' 이란 개체에게 투여하였을 때， 감염성 염증질환 의 개선， 치료 및 예방 효과를 나타내는 양을 말하며, 상기 '개체' 란 동물， 바람 직하게는 포유동물， 특히 인간， 가축을 포함하는 동물일 수 있으며, 동물에서 유래 한 세포， 조직， 기관 등일 수도 있다. 상기 개체는 치료가 필요한 환자 (pat i ent ) 또는 가축일 수 있다. 【발명의 효과】

본 발명에 따른 모루신 (morus in) , 구와논 지 (l wanon G)， 또는 상백피 추출 물 (mor i cortex radi ci s extract )은 근 단백질 합성에 관여하는 p-mTOR의 단백질 발현 증가， 근 단백질 분해에 관여하는 MuRF-1과 atrogin-1의 mRNA 발현 억제, 근 육 분화에 관여하는 MyoD와 myogenin의 mRNA 발현을 증가시킴에 따라， 근육량을 증 대시키는데 우수한 효과가 있다. 또한, 본 발명은 천연물이므로 부작용 없이 안전 하게 사용될 수 있어， 의약품, 식품 또는 화장품으로 사용될 수 있다.

【도면의 간단한 설명】

도 1은 L6 근육세포에서， 모루신， 구와논 지 , 상백피 열수 추출물, 또는 상 백피 에탄을 추출물의 처리에 따른 p— raTOR의 단백질 발현을 측정한 결과를 보여준 다.

도 2는 L6 근육세포에서, 모루신 처리에 따른 p-4EBPl과 p-p70S6K의 단백질 발현을 측정한 결과를 보여준다.

도 3은 L6 근육세포에서, 구와논 지 처리에 따른 P-4EBP1과 p-p70S6K의 단백 질 발현을 측정한 결과를 보여준다.

도 4는 L6 근육세포에서, 상백피 핵산 추출물， 에틸아세테이트 추출물， 에탄 올 추출물, 열수 추출물 처리에 따른 p-p70S6K의 단백질 발현을 측정한 결과를 보 여준다.

도 5는 L6 근육세포에서, 모루신 처리에 따른 MyoD와 myognin의 mRNA 발현을 측정한 결과를 보여준다.

도 6은 L6 근육세포에서， 구와논 지 처리에 따른 MyoD와 myognin의 mRNA 발 현을 측정한 결과를 보여준다.

도 7은 L6 근육세포에서, 상백피 핵산 추출물， 에틸아세테이트 추출물， 에탄 을 추출물， 열수 추출물 처리에 따른 MyoD와 myognin의 mRNA 발현을 측정한 결과를 보여준다.

도 8은 L6 근육세포에서, 모루신 처리에 따른 atrogin-1과 MuRF— 1의 mRNA 발 현을 측정한 결과를 보여준다.

도 9는 L6 근육세포에서, 구와논 지 처리에 따른 atrogin-1과 MuRF-1의 mRNA 발현을 측정한 결과를 보여준다.

도 10은 L6 근육세포에서， 상백피 핵산 추출물， 에틸아세테이트 추출물， 에 탄올 추출물 열수 추출물 처리에 따른 atrogin-1과 MuRF-1의 mRNA 발현을 측정한 결과를 보여준다.

【발명을 실시하기 위한 구체적인 내용】

이하 본 발명을 실시 예를 통하여 보다 상세하게 설명한다 .

단， 하기 실시 예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실 시 예에 한정되는 것은 아니다. 참조예 1: 모루신 (morusin)의 물질 정보

명칭： Morusin; 2- ( 2 , 4-D i hydr oxypheny 1 ) -5-hydr oxy-8 , 8-d i me t hy 1 -3- ( 3- methyl -2-buten- 1-y 1 ) -4H , 8H-benzo [ 1 , 2-b： 3 , 4一 b ' ]di pyr an-4-one

CAS No.： 62596-29-6 참조예 2: 구와논 지 G wanon G)의 물질 정보

명칭: kuwanon G; 8- [ ( IS , 5R , 6S ) -6- ( 2 , -D i hydr oxybenzoy 1 ) -5- ( 2 , 4- di hydr oxypheny 1 ) -3-me t hy 1 -2~cy c 1 ohexen-l-y 1 ]-2-(2,4-di hyd r oxy pheny 1 )-5,7- d i hydr oxyᅳ 3ᅳ ( 3-me thyl-2-but en- 1-yl )-4H-chromen-4-one

CAS No.： 75629-19-5

<실시예 1>

상백피 추출물의 체조 <1-1>상백피 메탄올추출물의 제조

건조된 상백피를 믹서로 분쇄한 다음， 분쇄한 상백피 시료 100 g을 100% 메 탄올 1 L에 넣고 24시간 상온에서 3회 반복하여 추출하였다. 추출된 시료는 와트만 (Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축 하여 용매성분을 제거한 후 상백피 메탄올 추출물을 얻었다.

<1-2>상백피 에탄을추출물의 제조

건조된 상백피를 믹서로 분쇄한 다음， 분쇄한 상백피 시료 100 g을 100% 에 탄을 1 L에 넣고 24시간 상은에서 3회 반복하여 추출하였다. 추출된 시료는 와트만 (Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고， 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축 하여 용매성분을 제거한 후 상백피 에탄을 추출물을 얻었다.

<1-3>상백피 에틸아세테이트추출물의 제조

건조된 상백피를 믹서로 분쇄한 다음， 분쇄한 상백피 시료 100 g을 100% 에 틸아세테이트 1 L에 넣고 24시간 상온에서 3회 반복하여 추출하였다. 추출된 시료 는 와트만 (Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축 기로 농축하여 용매성분을 제거한 후 상백피 에틸아세테이트 추출물을 얻었다.

<1-4>상백피 핵산추출물의 제조

건조된 상백피를 믹서로 분쇄한 다음， 분쇄한 상백피 시료 100 g을 10OT 핵 산 1 L에 넣고 24시간 상온에서 3회 반복하여 추출하였다. 추출된 시료는 와트만 (Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고， 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축 하여 용매성분을 제거한 후 상백피 핵산 추출물을 얻었다.

<1-5>상백피 열수추출물의 제조

건조된 상백피를 믹서로 분쇄한 다음， 분쇄한 상백피 시료 100 g을 물 1 L에 넣고 80 °C에서 2시간 교반하면서 추출하였다. 추출된 시료는 와트만 (Whatman ) 2번 여과지로 감압여과하고， 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거한 후 상백피 열수 추출물을 얻었다.

<1-6>상백피 초고압추출물의 제조 건조된 상백피를 믹서로 분쇄한 다음， 분쇄한 상백피 시료 1 g과 18% 에탄을 76 mL을 폴리에틸렌 (polyethylene) 팩에 넣고 밀봉한 후 초고압 추출장치 (Frescal MFP-7000; Mitsubishi Heavy Industries, Tokyo, Japan)를 이용하여 추출하였다. 초고압 추출 조건은 추출압력이 320 MPa, 추출시간은 5 min 이였다 . 추출된 시료는 와트만 (Whatman) 2번 여과지로 여과하고, 여과된 추출액을 진공 희전 농축기로 농 축하여 용매성분을 제거함으로써 상백피 초고압 추출물을 얻었다.

<1-7>상백피 초임계 유체 추출물의 제조

건조된 상백피를 믹서로 분쇄 한 다음, 분쇄한 상백피 시료 1 g을 시료 카트 리지에 층전하고 초임계 유체 추출 장치 (SFX 3560, Isco Inc. , Lincoln, E, USA) 를 이용하여 추출하였다. 초임계 유체 추출 조건은 추출 압력이 40 MPa, 추출 온도 는 50°C , 초임계 이산화탄소의 유속은 60 mL/min, 추출 시간은 60 min이었다. 초임 계 유체 추출이 완료되면， 추출 장치의 압력을 낮춰 초임계 유체 상태를 해제하여 상백피 초임계 유체 추출물을 얻었다.

<1-8>상백피 아임계 유체 추출물의 제조

건조된 상백피를 믹서로 분쇄 한 다음, 분쇄한 상백피 시료 1 g을 증류수 10 mL에 넣고 아임계 유체 추출 장치 (DI0NEX Accelerated Solvent Extractor 100,

DI0NEX co. , USA)를 이용하여 추출하였다. 아임계 유체 추출 조건은 2.5 MPa, 추출 온도 15CTC, 추출 시간 15분의 조건하에서 아임계 추출을 수행하였다. 추출된 시료 는 와트만 2번 여과지로 여과하고， 여과된 추출액을 -40°C에서 동결 건조하여 상백 피 아임계 유체 추출물을 얻었다.

<실시예 2>

모루신 . 구와논지의 분리 <2-1>모루신의 분리

건조된 상백피를 믹서로 분쇄한 다음， 분쇄한 상백피 시료 100 g을 100% 에 탄올 1 L에 넣고 24시간 상온에서 3회 반복하여 추출하였다. 추출된 시료는 와트만 (Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고， 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축 하여 상백피 에탄올 추출물을 얻었다. 에탄올 추출물을 실리카 겔 (si lica gel ; 70- 230mesh, Merck & Co. , Whitehouse Station, NJ, USA)로 층진시킨 컬럼에 적재한 후, 핵산, 에틸아세테이트， 메탄을로 흔합한 용매시스템을 이용하여 분취하였다. 상기 분취 순서에 따라 8개의 하부 분획물로 나누었다. 두 번째 분획물을 다시 진 공회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거하였다. RP-18로 층진된 컬럼에 농축액 을 적재한 후， 물, 메탄올, 아세토나이트릴로 흔합한 용매시스템을 이용하여 분취 하였다. 상기 분취순서에 따라서 5개의 하부 분획물로 나누었다. 그 중 5번의 분획 물에서 하기 화학식 1의 화합물인 모투신을 분리 및 정제하였다:

[화학식 1]

<2-2> 구와논 지의 분리

건조된 상백피를 믹서로 분쇄한 다음， 분쇄한 상백피 시료 100 g을 100% 에 탄을 1L에 넣고 24시간 상온에서 3회 반복하여 추출하였다. 추출된 시료는 와트만 (Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고， 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축 하여 상백피 에탄을 추출물을 얻었다. 에탄을 추출물을 실리카 겔 (s i l i ca gel ! 70-

230mesh , Merck & Co . , Whi tehouse Stat i on , NJ , USA)로 층진시킨 컬럼에 적재한 후, 핵산， 에틸아세테이트， 메탄올로 혼합한 용매시스템을 이용하여 분취하였다. 상기 분취 순서에 따라 8개의 하부 분획물로 나누었다ᅳ 여섯번째 분획물을 다시 진 공회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거하였다. RP-18로 층진된 컬럼에 농축액 을 적재한 후， 물， 메탄올， 아세토나이트릴로 흔합한 용매시스템을 이용하여 분취 하였다. 상기 분취순서에 따라서 6개의 하부 분획물로 나누었다. 그 중 3번의 분획 물에서 하기 화학식 ₂ 의 화합물인 구와논 지를 분리 및 정제하였다:

<실시예 3>

모루신 . 구와논 지 또는 상백피에 의하 근육생성활성

근육세포인 L6 myoblast (ATCC, Manassas, VA, USA)를 10% fetal bovine serum (FBS; Hyc 1 one , Logan , UT, USA)가 함유된 Dulbecco' s modified Eagle's

Media (DMEM; Hyclone)와 함께 6-웰 플레이트에 2 X 10 ⁵ cell/mL이 되도록 넣었다. 세포밀도가 약 80-85%가 되었을 때, 웰에 있는 배지를 제거하고 2% horse serum (HS; Hyclone)가 함유된 DMEM (Hyclone)에 상기 실시예 1-2에서 제조한 상백피 에 탄올 추출물 (20 μ g/mL) , 1-5에서 제조한 상백피 열수 추출물 (20 yg/mL)과 상기 실시예 2에서 분리 및 정제한 모루신 (5 μΜ), 구와논 지 (5 μΜ)을 녹인 후， 세포에 처리하여 myotube 분화를 유도하였다. 이 때， 시료 대신 0.01% DMS0를 처리한 군을 대조군으로 하였다. 이 과정을 2일간 6일 동안 진행하여 분화시킨 후， proteinase inhibitor cocktail이 포함된 NP-40 완층용액 (ELPIS-Biotech, Dae j eon, Korea)으로 용해시켰다. 완층용액에 용해된 세포를 1.5 mL 튜브 (tube)로 옮겨 13,000rpm으로 10분간 원심분리하여 상등액만을 취하였다. 상등액을 브래드포드 (Bradford, Bio- Rad Laboratories Inc. , Hercules, CA, USA)법을 이용하여 정량하였다. 정량된 단 백질을 5분간 끓인 후 10% SDS-PAGE로 전기영동하여 분리하였으며， 분리된 단백질 들을 니트로셀를로스 막으로 전달하였다. p-mT0R 1차 항체 (Cell signaling technology, Beverly, MA, USA)를 2.5% bovine serum albumin (BSA)에 1:1000의 비 율로 희석하여 니트로샐를로스 막에 전달된 단백질과 20시간 동안 상온에서 반웅시 켰다. 1차 항체를 반웅시킨 다음 Tris-buffer Saline Tween20 (TBST)를 이용하여 니트로셀를로스 막을 10분간 3회 세척하였다. 세척 후， 1차 항체를 인지하는 horseradish peroxidase가 접합된 ant i -rabbit 2차 항체 (Bethyl Laboratories, Inc. , Montgomery, TA, USA)를 2.5% BSA에 1:5000이 되도록 희석하여 니트로샐를로 스 막과 2시간 동안 상온에서 반응시켰으며， TBST를 이용하여 10분씩 3회에 걸쳐 세척하였다 . Protein band는 ECL western blotting detection reagents (Amersham, Tokyo, Japan)를 사용하여 발색하였으며， G;B0X EF imaging system (Syngene, Cambridge, UK)을 이용하여 발색된 Protein band를 확인하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다. 그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이 상백피 에탄올 추출물， 상백피 열수 추출 물， 모루신， 구와논 지의 처리에 의해 L6 근육세포에서 ρ-mTOR의 발현량이 증가한 것을 확인할 수 있었다. 이는 본 발명의 상백피 에탄을 추출물, 상백피 열수 추출 물， 모루신， 구와논 지가 근육세포 내에서 근육 생성을 증가시키는 능력이 우수하 다는 것을 의미한다.

<실시예 4>

L6 근육세포에서 모루신의 mRNA translation촉 ᅵ 활성

상기 실시예 2-1에서 제조한 모루신을 0.1과 1 μΜ의 농도로 상기 실시예 3 과 동일한 방법으로 실험을 진행하였다. p-mT0R 1차 항체 대신 mRNA translation 과정에 관여하는 p-p70S6K 및 p-4EBPl 1차 항체 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA)를 처리하여 protein band를 확인하였다. 그 결과， 도 2에 나타낸 바와 같이 모루신을 처리함에 따라 L6 근육세포에서 mRNA translation 과정에 관여하는 p-p70S6K 및 ρ 4£ΒΡ1의 단백질 발현양이 증가한 것을 확인할 수 있다. 이는 본 발명의 모루신이 근육세포 내에서 근육 생성을 위한 mRNA translation 과정을 촉진시키는 것을 의미한다.

<실시예 5>

L6 근육세포에서 구와논 지의 mRNA translation 촉진 활성

상기 실시예 2-2에서 제조한 구와논 지를 1과 5 μΜ의 농도로 상기 실시예 3 과 동일한 방법으로 실험을 진행하였다. p-mT0R 1차 항체 대신 mRNA translation 과정에 관여하는 p-p70S6K 및 p-4EBPl 1차 항체 (Santa Cruz Biotechnology)를 처리 하여 protein band를 확인하였다. 그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이 구와논 지를 처리함에 따라 L6 근육세포 에서 mRNA translation 과정에 관여하는 p-p70S6K 및 ρ-4ΕΒΡ1의 단백질 발현양이 증가한 것을 확인할 수 있다. 이는 본 발명의 구와논 지가 근육세포 내에서 근육 생성을 위한 mRNA translation 과정을 촉진시키는 것을 의미한다.

<실시예 6>

L6근육세포에서 상백피 추출물의 mRNA translation촉 1 활성

상기 실시예 1-2 내지 1-5에서 제조한 상백피 핵산 추출물， 에틸아세테이트 추출물， 에탄을 추출물， 열수 추출물을 15 yg/mL의 농도로 상기 실시예 3과 동일 한 방법으로 실험을 진행하였다. p-mTOR 1차 항체 대신 mRNA translation 과정에 관여하는 p-p70S6 1차 항체 (Santa Cruz Biotechnology)를 처리하여 protein band를 확인하였다. 그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이 상백피 핵산 추출물， 에틸아세테이트 추 출물， 에탄을 추출물, 열수 추출물을 처리함에 따라 L6 근육세포에서 mRNA translation 과정에 관여하는 p-p70S6K의 단백질 발현양이 증가한 것을 확인할 수 있다ᅳ 이는 본 발명의 상백피 핵산 추출물, 에틸아세테이트 추출물， 에탄올 추출 물, 열수 추출물이 근육세포 내에서 근육 생성을 위한 mRNA ^' translation 과정을 촉 진시키는 것을 의미한다.

<실시예 7>

모루시의 근육분화 활성

근육세포인 L6 myoblast (ATCC)를 10% FBS (Hyclone)가 함유된 DMEM (Hyclone)과 함께 6-웰 플레이트에 2 X 10 ⁵ cell/mL이 되도록 넣었다. 세포밀도가 약 80~85%가 되었을 때， 웰에 있는 배지를 제거하고 2% HS (Hyclone)가 함유된 DMEM (Hyclone)에 상기 실시예 2-1에서 제조한 모루신을 0.1과 1 μΜ의 농도로 녹 인 후, 세포에 처리하여 myotube 분화를 유도하였다. 이 때 , 시료 대신 0.01% DMS0 를 처리한 군을 대조군으로 하였다. 이 과정을 2일간 6일 동안 진행하여 분화시킨 후, TRIz이시약 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 총 RNA를 분리하였다. 분리한 총 RNA는 나노드랍 (NanoDrop 1000； Thermo Fisher Scientific Inc., MA, USA)을 이용하여 정량하였다. 정량된 16 iiL의 RNA를 Reverse Transcriptase Premix (ELPIS-Biotecli)와 PCR 기계 (Gene Amp PCR System 2700； Applied Biosys terns, MA, USA)를 이용하여 42 ^° C 55분， 70 ^° C 15분의 조건에서 cDNA로 합성하 였다. 16 yL의 생성된 cDNA 중 4 μ L의 cDNA, 하기의 특정 프라이머 (B meer, Dae j eon, Korea) 그리고 PCR preraix (ELPIS-Biotech)로 95 ^° C에서 30초, 60 ^° C에서 1 분， 72 ^° C에서 1분을 30번 반복하여 PCR을 수행하였다.

MyoD

Forward primer: 5 ' -TTTCGACTCACCAGACCTGC-3 '(서열번호 1)

Reverse primer： 5'-CAGAGCCTGCAGACCTTCAA-3' (서열번호 2)

Myogenin

Forward primer: 5'-TTTCGCACCTGATGGACCTG-3' (서열번호 3)

Reverse primer: 5'-CTTTCTTGAGCCTGCGCTTC-3' (서열번호 4) β -Act in:

Forward primer: 5 ' -AGCCATGTACGTAGCCATCC-3' 서열번호 5)

Reverse primer: 5 ' -CTCTCAGCTGTGGTGCTGAA-3' 서열번호 6)

PCR 결과 증폭된 cDNA를 1.5% agarose gel로 전기영동하여 분리하였으며， G;B0X EF imaging system (Syngene)을 이용하여 cDNA band를 확인하였다. 그 결과 를 도 5에 나타내었다. 그 결과， 도 5에 나타낸 바와 같이 모루신을 처리함에 따라 L6 근육세포에서 MyoD 및 myogenin의 mRNA 발현이 증가함을 알 수 있었다. 이는 본 발명의 모투신이 근육세포 내에서 근육 분화를 촉진하는 능력이 우수하다는 것을 의미한다.

<실시예 8>

구와논 지의 근육분화 활성

상기 실시예 7에서와 동일한 방법으로 근육세포인 L6 myoblast (ATCC)를 배 양한 후, 2% HS (Hyclone)가 함유된 DMEM (Hyclone)에 상기 실시예 22에서 분리 및 정제한 구와논 지를 1과 5 μΜ의 농도로 녹인 후을 녹인 후， 세포에 처리하여 myotube 분화를 유도하였다. 이 때, 시료 대신 으 01% DMS0를 처리한 군을 대조군으 로 하였다. 이 과정을 2일간 6일 동안 진행하여 분화시킨 후 실시예 7과 동일한 방 법으로 RT-PCR을 수행하였다. 그 결과， 도 6에 나타낸 바와 같이 구와논 지를 처리함에 따라 L6 근육세포 에서 MyoD 및 myogenin의 mRNA 발현이 증가함을 알 수 있었다. 이는 본 발명의 구 와논 지가 근육세포 내에서 근육 분화를 촉진하는 능력이 우수하다는 것을 의미한 다.

<실시예 9>

상백피 추출물의 근육분화 활성

상기 실시예 7에서와 동일한 방법으로 근육세포인 L6 myoblast (ATCC)를 배 양한 후， 2% HS (Hyclone)가 함유된 DMEM (Hyclone)에 상기 실시예 1—2 내지 1-5에 서 제조한 상백피 핵산 추출물, 에틸아세테이트 추출물, 에탄올 추출물, 열수 추출 물을 15 yg/mL의 농도로 녹인 후, 세포에 처리하여 myotube 분화를 유도하였다. 이 때， 시료 대신 0.01% DMS0를 처리한 군을 대조군으로 하였다. 이 과정을 2일간 6일 동안 진행하여 분화시킨 후 실시예 7과 동일한 방법으로 RT-PCR을 수행하였다. 그 결과, 도 7에 나타낸 바와 같이 상백피 핵산 추출물, 에틸아세테이트 추 출물, 에탄을 추출물, 열수 추출물을 처리함에 따라 L6 근육세포에서 MyoD 및 myogenin의 mRNA 발현이 증가함을 알 수 있었다. 이는 본 발명의 상백피 추출물이 근육세포 내에서 근육 분화를 촉진하는 능력이 우수하다는 것을 의미한다.

<실시예 10>

모루신의 근 단백질 분해 억제 활성

근육세포인 L6 myoblast (ATCC)를 1(» FBS (Hyclone)가 함유된 DMEM (Hyclone)과 함께 6—웰 플레이트에 2 X 10 ⁵ cell/mL이 되도록 넣었다. 세포밀도가 약 80~85%가 되었을 때， 웰에 있는 배지를 제거하고 2% HS (Hyclone )7} 함유된 DMEM (Hyclone)을 세포에 처리하여 myotube 분화를 유도하였다. 2일에 한 번씩 새 로운 배지로 교체하여 총 6일 동안 분화를 진행하였다. 분화 후， 50 ng/mL tumor necrosis factor alph (TNF- a ; PeproTech, Rocky Hills, NJ, USA)가 함유된 DMEM (Hyclone)에 상기 실시예 2-1에서 제조한 모루신을 0.1과 1 μΜ의 농도로 녹인 후, 세포에 처리하였다. 6시간 후， TRIz 시약 (Invitrogen)을 사용하여 총 RNA를 분리 하였다. 분리한 총 RNA는 나노드랍 (NanoDrop 1000； Thermo Fisher Scientific Inc.)을 이용하여 정량하였다. 정량된 16 iiL의 RNA를 Reverse Transcriptase Premix (ELPIS-Biotech)와 PCR 기계 (Gene Amp PCR System 2700； Appl i ed Bi osystems)를 이용하여 42 ^° C 55분， 70 ^° C 15분의 조건에서 cDNA로 합성하였다. 16 의 생성된 cDNA 중 4 y L의 cDNA, 하기의 특정 프라이머 (Bi oneer ) 그리고 PCR premi x (ELPIS-Bi otech)로 95 ^° C에서 30초， 60 ^° C에서 1분， 72 ^° C에서 1분을 30번 반 복하여 PCR을 수행하였다.

Atrogin-1

Forward pr imer： 5 ' -CCCTGAGTGGCATCGCCCAA-3 ' (서열번호 7)

Reverse pr imer： 5 ' -AGGTCCCGCCCATCGCTCA-3 ' (서열번호 8 )

MuRF-1

Forward pr imer： 5 ' -GAAATGCTATGCAGAACCTG-3 ' (서열번호 9 )

Reverse pr imer： 5 ' -ATTCCTGCTTGTAGATGTCG-3 ' (서열번호 10 )

β -Act in :

Forward pr imer： 5 ' -AGCCATGTACGTAGCCATCC-3' 서열번호 11)

Reverse pr imer： 5 ' -CTCTCAGCTGTGGTGCTGAA-3' 서열번호 12)

PCR 결과 증폭된 cDNA를 1.5% agarose gel로 전기영동하여 분리하였으며， G ;B0X EF imaging system (Syngene)을 이용하여 cDNA band를 확인하였다. 그 결과를 도 8에 나타내었다. 그 결과 , 도 8에 나타낸 바와 같이 모루신을 처리함에 따라 L6 근육세포에서 atrogin-1 및 MuRF-1의 mRNA 발현이 감소함을 알 수 있었다. 이는 본 발명의 모루 신이 근육세포 내에서 근 단백질 분해를 억제하는 능력이 우수하다는 것을 의미한 다.

<실시예 11>

구와논 지의 근 단백질 분해 억제 활성

상기 실시예 10에서와 동일한 방법으로 근육세포를 2% HS (Hyclone)가 함유 된 DMEM (Hyc lone)을 처리하여 myotube 분화 후, 50 ng/mL TNF- a (PeproTech)가 함유된 DMEM (Hyclone)에 상기 실시예 22에서 분리 및 정제한 구와논 지를 1과 5 μ Μ의 농도로 녹인 후， 실시예 10과 동일한 방법으로 RT— PCR을 수행하였다. 그 결과, 도 9에 나타낸 바와 같이 구와논 지를 처리함에 따라 L6 근육세포 에서 atrogin-1 및 MuRF-1의 mRNA 발현이 감소함을 알 수 있었다. 이는 본 발명의 구와논 지가 근육세포 내에서 근 단백질 분해를 억제하는 능력이 우수하다는 것을 의미한다.

<실시예 12>

상백피 추출물의 근 다백짐 분해 억체 훨얘

상기 실시예 10에서와 동일한 방법으로 근육세포를 2% HS (Hyclone)가 함유 된 DMEM (Hyc lone)을 처리하여 myotube 분화 후, 50 ng/mL TNF- α (PeproTech)가 함유된 DMEM (Hyclone)에 상기 실시예 1-2 내지 1—5에서 제조한 상백피 핵산 추출 물， 에틸아세테이트 추출물, 에탄을 추출물, 열수 추출물을 10 y g/mL의 농도로 녹 인 후 실시예 10과 동일한 방법으로 RT-PCR을 수행하였다. 그 결과, 도 10에 나타낸 바와 같이 상백피 핵산 추출물， 에틸아세테이트 추 출물, 에탄올 추출물， 열수 추출물을 처리함에 따라 L6 근육세포에서 atrogin—l 및 MiiRF-1의 mRNA 발현이 감소함을 알 수 있었다. 이는 본 발명의 상백피가 근육세포 내에서 근 단백질 분해를 억제하는 능력이 우수하다는 것을 의미한다.

<실시예 13>

상백피 고압 추출물에 의하 근육생성활성

상기 실시예 1-6에서 제조한 상백피 초고압 추출물, 실시예 1-7에서 제조한 상백피 초임계 유체 추출물， 실시예 1-8에서 제조한 상백피 아임계 유체 추출물을 20 ppni 농도로 상기 실시예 3과 동일한 방법으로 근육 세포에 처리하였다. ECL 웨 스턴 블롯 검줄 시약 (western blot t ing detect i on reagents ; Amersham , Tokyo , Japan)을 사용하여 p-mT0R 단백질 밴드를 발색하였으며， G;B0X EF imaging system (Syngene , Cambr idge , UK)을 이용하여 발색된 단백질 밴드의 dens i ty를 측정하였 다. 이 때 대조군 단백질 밴드의 dens i ty를 100%로 하여， 시료를 처리한 실험군의 상대적인 단백질 밴드의 dens i ty를 백분율 (%)로 나타내었다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다. 【표 1】

상백피룐압추 f :물의 _P - R단 질발현:량증가효과

상기 표 1에 나타낸 바와 같이 상백피 초고압 추출물， 초임계 유체 추출물, 아임계유체 추출물은 근기능 개선에 관여하는 주요 유전자 p-mTOR의 단백질 발현량 을 증가시킴을 알 수 있었다.

<실시예 14>

동물모델에서 근육량증가효과확인

5 주령된 Wi star rat을 1주간 적웅시키고 TNF- α 100 ng/g을 2주간 공급하 여 근위축을 유도시킨 다음， 체중을 기초로 무작위적으로 군을 배치하여 각각 8마 리씩 총 5군으로 나누어 실험에 이용하였다. 실험군으로는 실시예 1-2에서 제조한 상백피 에탄을 추출물 500 mg/kg체중, 실시예 1-5에서 제조한 상백피 열수 추출물 500 nig/kg체중， 실시예 2-1에서 제조한 모루신 300 mg/kg체중， 실시예 2-2에서 제 조한 구와논 지 300 mg/kg체중의 농도로 0.25% 카르복시메틸샐를로오스 (carboxymethyl cel lulose)에 현탁하여 1일 1회씩 8주간 일정한 시간에 투여하였다. 이때， 대조군으로는 실험군이 섭취하는 동일한 양의 0.25% 카르복시메틸셀를로오스 에 TNF- α를 투여한 군을 사용하였다.

8주간 시료를 투여한 후 오른쪽 종아리 아래 근육을 절제하여 mi crobal ance (Mett ler PE160 , USA)로 무게를 측정하였다. 그 결과， 표 2에 나타난 바와 같이, 상백피 에탄올 추출물， 상백피 열수 추출물, 모루신, 구와논 지를 투여한 군에서 근육의 무게가 대조군과 비교하여 각각 유의적 (p<() .01)으로 20.78¾>， 17.35% , 23.97% , 22.60% 증가하였다. 이와 같은 결과는 본 발명의 상백피 추출물과 이로부 터 분리된 모루신과 구와논 지가 근육량 증대에 효율적으로 작용하고 있음을 의미 한다. 【표 2】

^리물질 별：종아리 근^부게

이하， 본 발명에 따른 상기 실시예 1 내지 2의 모루신， 구와논 지 또는 상 백피 추출물을 유효성분으로 함유하는 의약품， 식품 또는 화장품의 제조예를 설명 하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다. 상기 근육 질환 예방 및 치료 또는 근 기능 개선 효과가 우수한 모루신, 구와논 지 또는 상백피 추출물을 가지고 하기와 같은 조성성분 및 조성비에 따라 제조예 1 내 지 3의 의약품， 식품 또는 화장료 조성물을 통상적인 방법에 따라서 제조하였다.

<제조예 1> 의약품

<1-1>산제 상기 실시예 1 내지 2의 모루신， 구와논 지 또는 상백피 추출물 50 mg, 결 정셀를로오즈 2 g을 흔합한 후 통상의 산제 제조방법에 따라서 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<1-2> 정제

상기 실시예 1 내지 2의 모루신， 구와논 지 또는 상백피 추출물 50 mg, 결 정셀를로오즈 400 mg, 스테아린산 마그네슴 5 mg을 혼합한 후 통상의 정제 제조방 법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<1-3> 캡슐제

상기 실시예 1 내지 2의 모루신， 구와논 지 또는 상백피 추출물 30 mg, 유 청단백질 100 mg, 결정셀를로오즈 400 mg, 스테아린산 마그네슘 6 mg을 흔합한 후 통상의 캡슐제 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 층전하여 캡슐제를 제조하였다.

<1-4>주사제

통상의 주사제 제조방법에 따라 활성성분을 주사용 증류수에 용해하고 pH를 약 7.5로 조절한 다음 상기 실시예 2의 모루신 또는 구와논 지 100 rag , 주사용 증 류수， pH 조절제를 혼합하여 2 mL용량의 앰플에 층진하고 멸균시켜서 주사제를 제 조하였다.

<제조예 2>식품

<2-1>건강식품의 제조

상기 실시예 1 내지 2의 모루신， 구와논 지 또는 상백피 추출물 1000 mg, 비타민 A 아세테이트 70 ug, 비타민 E 1.0 mg, 비타민 B1 0. 13 mg , 비타민 B2 0. 15 mg, 비타민 B6 0.5 mg, 비타민 B12 0.2 ug, 비타민 C 10 mg, 비오틴 10 ug, 니코틴 산아미드 1.7 mg, 엽산 50 ug, 판토텐산 칼슘 0.5 mg , 황산제 1철 1 .75 mg, 산화아 연 0.82 mg, 탄산마그네슴 25.3 mg, 제 1인산칼륨 15 mg , 제 2인산칼슴 55 mg, 구연 산칼륨 90 mg, 탄산칼슴 100 mg, 염화마그네슘 24.8 mg를 흔합하여 제조할 수 있으 며, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며， 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할수 있다.

<2-2>건강음료의 제조

상기 실시예 1 내지 2의 모루신， 구와논 지 또는 상백피 추출물 1000 mg, 구연산 1000 mg , 을리고당 100 g, 매실농축액 2 g, 타우린 1 g에 정제수를 가하여 전체 900 mL 통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음， 약 1시 간동안 85에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L용기에 취득 하여 밀봉 멸균한 뒤 넁장보관한 다음 건강음료 조성물 제조에 사용할 수 있다.

<2-3>츄잉껌

껌 베이스 20 중량 %， 설탕 76.9 중량 %， 향료 1 증량 ¹ o 및 물 2 중량 % 와 상 기 실시예 1 내지 2의 모루신， 구와논 지 또는 상백피 추출물 0. 1 중량 %를 배합하 여 통상의 방법으로 츄잉 ¾을 제조하였다. <2-4>캔디

설탕 60 중량 물엿 39.8 중량 % 및 향료 0. 1 중량 ¾와 상기 실시예 1 내지

2의 모루신， 구와논 지 또는 상백피 추출물 0. 1 중량 %를 배합하여 통상의 방법으로 캔디를 제조하였다.

<2-5>비스켓

박력 1급 25.59 중량 %， 중력 1급 22.22 중량 %, 정백당 4.80 중량 %， 식염

0.73 중량% , 포도당 0.78 중량 %， 팜쇼트닝 11.78 중량 ¾， 암모늄 1.54 중량 %, 중조 0. 17 중량 중아황산나트륨 0. 16 중량 %， 쌀가루 1.45 중량 %， 비타민 B 0.0001 중 량%， 밀크향 0.04 중량 %， 물 20.6998 중량 %， 전지분유 1. 16 중량 ¾>, 대용분유 0.29 중량 %, 제 1인산칼슘 0.03 중량 %， 살포염 0.29 중량 ¾ 및 분무유 7.27 중량 %와 상기 실시예 1 내지 2의 모루신， 구와논 지 또는 상백피 추출물 중량 ¾를 배합하여 통상 의 방법으로 비스켓을 제조하였다.

<제조예 3>화장품

<3-1> 영양화장수 (밀크로션)

상기 실시예 1 내지 2의 모루신， 구와논 지 또는 상백피 추출물을 하기 표 3 의 영양화장수 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 영양화장수를 제조하였 다.

【표 3】

<3-2>유연화장수 (스킨로션)

상기 실시예 1 내지 2의 모루신, 구와논 지 또는 상백피 추출물을 하가 표 4 의 유연화장수 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 유연화장수를 제조하였 다.

【표 4】

<3-3> 영양크림

상기 실시예 1 내지 2의 모루신， 구와논 지 또는 상백피 추출물을 하기 표 5 의 영양크림 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 영양크림을 제조하였다. 【표 5】

<3-4>마사지크림

상기 실시예 1 내지 2의 모루신， 구와논 지 또는 상백피 추출물을 하기 표 6 의 마사지크림 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 마사지크림을 제조하였 다.

【표 6】 제조예 3-4

배합성분

(증량 ¾)

모루신:， 구와논 지 ¾는 상백피 추출물 1.0; ^:

τιλ - e H 10.0

폴리솔베이 S 60 1.5

PEG 60 경화피마자유 2.0

솔비탄세스퀴올레이 S 0.8

유동파라핀 40.；0

스쿠알란 5.0

카프릴릭 /카프릭트리글리세라이드 4.0

글리세린 5.0

부틸렌:글리콜 3.0

프로필렌글리클 3.G

리에탄을아민 0.2

방부제 , 색소. 향료 적：량

정제수 to 100 <3-5> 팩

상기 실시예 1 내지 2의 모루신， 구와논 지 또는 상백피 추출물을 하기 표 7 의 팩 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 팩을 제조하였다.

【표 7】

<3-6> 젤

상기 실시예 1 내지 2의 모루신, 구와논 지 또는 상백피 추출물을 하기 표 8 의 젤 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 젤을 제조하였다.

【표 8】

제조예 3¾

배함성분

(증량 %)

모루신 , 구와는지 또는 상백피 ^출물: 0,5

에틸렌디아믿초산다토륨 0.05

글리세린 5.0

카르복시:비닐플리더 0.3

에탄을 5.0

PEG 60 경화파마자^ 0,5

트리에탄을아민 0.3

방부제， 색소, 향료 적¾

정제쑤 to 100