Die simultane und spezifische Assoziation von mindestens zwei Liganden mit entsprechenden Rezeptoren führt zu multivalenten Wechselwirkungen zwischen zwei Einheiten, die diese Liganden bzw. Rezeptoren tragen. Derartige multivalente Wechselwirkungen sind in der Biologie sehr weit verbreitet, wobei die wechselwirkenden Einheiten Liganden, wie Oligosaccharide, Proteine, Nucleinsäuren, oder Lipide aufweisen können. Multivalente Wechselwirkungen sind gekennzeichnet durch eine Vielzahl von einzelnen schwachen monovalenten Bindungen, die in biologischen Systemen häufig gegenüber einer einzigen starken monovalenten Bindung bevorzugt sind (M. Mammen, S-K. Choi, G. M. Whitesides, Angew. Chemie, 110,2908,1998).

In biologischen Systemen werden multivalente Wechselwirkungen häufig dann ausgebildet, wenn Bindungen zwischen Einheiten mit wenig affinen Liganden und Rezeptoren ausgebildet werden. Bekannte Beispiele für Wechselwirkungen zwischen wenig affinen Liganden und Rezeptoren sind Kohlenhydrat-Protein-und Kohlenhydrat- Kohlenhydrat-Wechselwirkungen (A. Danguy, K. Kayser, N. V. Bovin, H.-J. Gabius, Trends Glycosc. Glycotech., 7,261,1995), die beispielsweise bei viralen und bakteriellen Infektionen, bei der Einleitung von Entzündungsprozessen, bei der Tumor- Metastasierung oder bei der Immunerkennung eine entscheidende Rolle spielen.

Natürliche multivalente Wechselwirkungen können insbesondere zu therapeutischen und diagnostischen Zwecken blockiert werden. Für die in-vitro Blockierung derartiger multivalenter Wechselwirkungen sind bisher sowohl monovalente als auch multivalente Inhibitoren eingesetzt worden.

Bei Derivaten von natürlichen Liganden als monovalente Inhibitoren zeigt sich in der Praxis, dass aufgrund der geringen Bindungsaffinität keine effiziente Inhibition multivalenter Wechselwirkungen erreicht werden kann. Zum Beispiel beträgt die Bindungskonstate bei der Wechselwirkung zwischen einem monovalenten Galaktosid und dem entsprechenden Lectin lediglich KD # 1004M (D. T. Connolly et al., J. Biol.

Chem., 257,939,1982). Für eine therapeutische Anwendung müssten in einem solchen Fall sehr grosse Mengen Inhibitor eingesetzt werden. Eine Behandlungsmethode mit einem solchen Inhibitor wäre somit nicht wirtschaftlich.

Als multivalente Inhibitoren sind solche, bei denen mehrere Liganden kovalent an einen niedermolekularen Träger (L. L. Kiesling, N. L. Pohl, Chemistrv & Biology, 3,71, 1996 ; G. D. Glick, P. L. Toogood, D. C. Wiley, J. J. Skehel, J. R. Knowles, J. Biol.

Chem., 266,23660,1991) oder an ein Dendrimer (D. Zanini, R. Roy, J. Org. Chem., 63,3486,1998) gebunden sind, bekannt. In diesen Fä ! ! en wird jedoch die spezifische Bindungsaffinität nur geringfügig erhöht.

Die WO 98/14215 offenbart Glucokonjugate als Inhibitoren der viralen Zelladhäsion.

Insbesondere wird die Verbindung [Neu5Acα2-6Galß1-4glcNAcß1-NHCOCH2NH- CO (CH2) 4CO- (NHCH2-CO) 3-NHCH2-] 4C offenbart. Diese Verbindung bildet jedoch in wäßriger Lösung keine Aggregate.

Ferner sind auch multivalente Inhibitoren bekannt, bei denen die aktiven Liganden an einen polymeren Träger gebunden sind. Diese Verbindungen zeigen im Vergleich zu den entsprechenden monomeren Liganden eine erhöhte Effizienz. Am Beispiel der Wechselwirkung zwischen dem Influenza-Hamagglutinin, das an Neuraminsäure- Derivate an der Zelloberfläche bindet, wurde gezeigt, wie sich die Verwendung eines multivalenten Inhibitors auf Polymer-Basis auf diese Wechselwirkung auswirkt (monovalent : KD-2 # 2 # 10-4M, nultivalent : Kid x 10' M ; A. Spaltenstein et al., J. Am.

Chem. Soc., 113,686,1991).

Trotz der verbesserten Wirksamkeit sind auch die bisher bekannten muitivalenten polymeren Inhibitoren für einen therapeutischen Einsatz nicht geeignet. Die Nachteile sind hierbei auf die verwendeten polymeren Trägermoleküle und auf deren Eigenschaften zurückzuführen.

Bei der Verwendung von Polylysin oder von sulfatierten Polysacchariden als polymere Träger treten unspezifische ionische Wechselwirkungen mit Zelloberflachenstrukturen auf.

Polyacrylamide und andere Polymere, deren Polymeranteil ausschliesslich aus C-C-Bindungen besteht, haben den entscheidenden Nachteil, dass sie im Organismus zu toxischen Metaboliten abgebaut werden.

Hochpolymere (60-70 kDa) werden nicht mehr wirkungsvoll von der Niere filtriert, wobei ihr Abbau durch die Leber durch die Bildung von toxischen Metaboliten zu Unverträglichkeiten führen kann.

In den Patentanmeldungen EP 601417 und WO 95/34673 werden Kohlenhydrat- rezeptorblocker auf Polymerbasis beschrieben, die als Gesamtmolekül und als Abbauprodukte physiologisch verträglich sind. Diese Eigenschaften werden durch die Verwendung von biodegradablen Polymeren erreicht. Für einen Einsatz als Arzneimittel haben jedoch auch diese Produkte einen grundsätzlichen Nachteil, denn Polymere sind in der Praxis keine reinen und exakt definierten Verbindungen, sondern bestehen vielmehr aus komplexen Gemischen von Verbindungen unterschiedlicher molekularer Grosse. Durch diesen Umstand wird die Anwendung (Zulassung) eines solchen polymeren Inhibitors ais Arzneimittel ausserordentlich erschwert.

Wichtig für ein Arzneimittel sind genaue Kenntnisse der Zusammenhänge zwischen der chemischen Struktur eines Wirkstoffs und seinen pharmakologischen Eigenschaften. Im Falle von Substanz-Gemischen müsste gezeigt werden, in welcher Art und Weise die Zusammensetzung eines Gemisches seine jeweiligen pharmakologischen Eigenschaften beeinflusst. Zudem muss ein Arzneimittel in seiner chemischen Zusammensetzung genau definiert sein und nachweislich in eben dieser hergestellt werden können. Beide Voraussetzung können im Fall der polymeren multivalenten lnhibitoren mit den derzeit verfügbaren synthetischen und analytischen Methoden und unter einem technisch sinnvollen Aufwand nicht erfüllt werden.

Eine weitere Gruppe von multivalenten Inhibitoren bilden Verbindungen bei denen die Liganden an die Oberfläche von Liposomen gebunden sind. Liposome haben den Nachteil, dass ihre lipophilen Bestandteile unspezifische Wechselwirkungen eingehen können, z. B. durch den Einbau in Zellmembranen.

Daher ist Aufgabe der vorliegenden Erfindung die Nachteile des Standes der Technik zu vermeiden und neue Verbindungen mit verbesserten Eigenschaften als mutivalente Inhibitoren biologischer Erkennungsprozesse bereitzustellen, wobei die Verbindungen spezifisch wirken und zur Verwendung als Arzneimittel geeignet sind.

Diese Aufgabe wird gemäß der Ansprüche gelöst mit einer Verbindung der aligemeinen Formel (I) X(B)m(I) wobei X m-wertigeEinheitstehtunddieeine B gleich oder verschieden sind und für K-R stehen, wobei K BindungoderfürA1-(A2-A3)k-spsteht,wobeieine A1 für (CH2) tY (CH :,) u steht, wobei Y für >C=O, >NH,-O-,-S-oder eine Bindung, t für eine ganze Zahl von 0 bis 6 und u für eine ganze Zahl von 0 bis 6 steht, A2 für-NHCO-,-CONH-,-OCONH-oder SCONH-steht, (CH2)r,O(CH2)r,NH(CH2)r,S(CH2)r,oder-(CHQ)-steht,A3für wobei r für eine ganze Zahl von 1 bis 6 und Q für eine substituierte oder unsubstituierte Alkyl-oder Aryl-Gruppe steht, sp für einen zweiwertigen Spacer oder eine Bindung steht, und k für eine ganze Zahl von 5 bis 100 steht, und R für Wasserstoff, einen zur spezifischen Bindung an einen Rezeptor geeigneten Liganden, ein Marker-Molekül oder eine katalytisch aktive Gruppe steht, und m mindestens 2 ist, mit der Maßgabe, dass (1) in der Verbindung mindestens ein R nicht Wasserstoff ist, (2) mindestens zwei K vorliegen, die nicht für eine Bindung stehen, und (3) X, die B und m so gewähtt sind, dass eine intermolekulare Assoziation der K in flüssiger Phase durch Bildung von Wasserstoffbrücken- Bindungen unter Ausbildung von Aggregaten, die auf der Oberfläche mehrere R präsentieren, die nicht Wasserstoff sind, möglich ist, und (4) die Molmasse des Fragments X (K) m weniger als 20.000 beträgt.

In der Verbindung der Formel (I) kann A2 auch-CO-bedeuten.

Weitere bevorzugte Ausführungsformen sind Gegenstand der Unteransprüche.

In einer bevorzugten Ausführungsform beträgt die Molasse des Fragments X (K) m weniger als 10.000, noch bevorzugter weniger als 4.000.

Durch Selbstassoziation von Verbindungen der allgemeinen Formel (I) entstehen Aggregate, die als hocheffiziente multivalente Inhibitoren biologischer Erkennungsprozesse wirken.

Bei den Verbindungen der Formel (I) sind X, die B und m so gewähit, dass eine intermolekulare Assoziation der K in flüssiger Phase, insbesondere auch unter wässrigen Bedingungen, vorzugsweise unter in vivo Bedingungen, unter Ausbildung von Aggregaten, die auf der Oberfläche mehrere R präsentieren, die nicht Wasserstoff sind, möglich ist.

Es wurde gefunden, dass durch die Ausbildung der erfindungsgemäßen Aggregate die Nachteile der bisher bekannten multivalenten Wirkstoffe vermieden werden können.

Es wurde insbesondere gefunden, dass die geringe Erhöhung der Bindungsaffinität gegenüber einem monovalenten Wirkstoff bei kovalenter Bindung mehrerer Liganden an einen niedermolekularen Träger oder an ein Dendrimer darauf zurückzuführen ist, dass solche Moleküle zwar mehrere Liganden präsentieren, diese aber nicht oder nur teilweise so angeordnet werden können, dass es zu einer thermodynamisch günstigen Wechselwirkung mit Rezeptoren kommt. Es wurde gefunden, dass die Wechselwirkung eines polyvalenten Wirkstoffs verbessert werden kann, indem die Ligandenanordnung mit der Rezeptorenanordnung dynamisch gekoppelt wird. Es wurde gefunden, dass diese dynamische Kopplung über eine intermolekulare Aggregatbildung erreicht werden kann, bei der sich spezielle Molekülbereiche des Wirkstoffs intermolekular assozieren und so eine Anpassung der Ligandenanordnung ermöglicht wird. Schließlich wurde gefunden, dass die dadurch ermög ! ichte Anpassung der Ligandenanordnung zu einer drastischen Erhöhung der Bindungsaffinität des polyvalenten Wirkstoffs führt.

Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung ermöglichen durch die Reversibilität der Aggregatbildung die polyvalente Wechselwirkung einer molekularen Einheit mit mehreren Rezeptoren unter nachträglicher Optimierung der Ligandenanordnung, wobei eine thermodynamisch günstige Anordung gefunden wird ohne dass es zu unerwünschten Nebenwirkungen, wie der Einlagerung der Verbindungen in die Zellmembran, kommt.

Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind kleine Moleküle für die eine Wirkung als Antigen nicht zu erwarten ist und auch die anderen bei polymeren polyvalenten Wirkstoffen auftretenden Nachteile vermieden werden.

Der molekulare Aufbau der Verbindungen der aligemeinen Formel (I) ist im wesentlichen gekennzeichnet durch drei Strukturmerkmale : -ein m-wertiges Fragment X, -mehrere Molekülketten K, die kovalent an das Fragment X gebunden sind, -mindestens eine terminale Gruppe R, die ein zur spezifischen Bindung an einen Rezeptor geeigneter Ligand, ein Marker-Molekül oder eine katalytisch aktive Gruppe ist.

Die Molekülketten K zeichnen sich durch eine chemische Struktur aus, die eine intermolekulare Assoziation in flüssiger Phase auch unter wässrigen, insbesondere in vivo Bedingungen unter Ausbildung von Aggregaten ermöglicht. Die Ausbildung der Aggregate beruht auf nicht-kovalenten Wechselwirkungen, wobei die nicht-kovalenten Wechselwirkungen ionische Wechselwirkungen, van der Waals-Wechselwirkungen, hydrophobe Wechselwirkungen oder bevorzugt Wasserstoffbrückenbindungen sein können. Der Aufbau von nicht-kovalenten Bindungen zwischen mehreren Verbindungen der aligemeinen Formel (I) bewirkt eine Selbstassoziation und somit die Bildung von Aggregaten.

Die Verbindungen der aligemeinen Formel (I) weisen mindestens eine terminale Gruppe R auf, die beispielsweise von einem biologisch aktiven Liganden oder einem Marker abgeleitet ist. Die terminalen Gruppen R sind kovalent an die terminalen Enden der zur Assoziation dienenden Molekülketten gebunden. Die Bindung dieser Gruppen kann direkt oder über einen Spacer geschehen. Als Spacer kann ein zweiwertiges Molekülfragment dienen, das an der intermolekularen Assoziation durch nicht- kovalente Wechselwirkungen nicht teilnimmt, sondern lediglich dazu dient, die terminalen Gruppen R zu halten. Ein solcher Spacer ist formal Teil der Molekülkette K.

Erfindungsgemäß kann K in der Formel (I) für A-A-sp stehen, wobei (CH2)tY(CH2)usteht,wobeiA1für Y für >C=O, >NH,-O-,-S-oder eine Bindung, t für eine ganze Zahl von 0 bis 6 und u für eine ganze Zahl von 0 bis 6 steht, A2 für-NHCO-,-CONH-,-OCONH-oder SCONH-steht, A3 für (CH2)r, O(CH2)r, NH(CH2)r, S (CH2) r, oder - (CHQ)-steht, wobei r für eine ganze Zahl von 1 bis 6 und Q für eine substituierte oder unsubstituierte Alkyl-oder Aryl-Gruppe steht, sp für einen zweiwertigen Spacer oder eine Bindung steht, und k für eine ganze Zahl von 5 bis 100 steht.

In der Verbindung der Formel (I) kann A2 auch-CO-bedeuten.

Besonders bevorzugt sind Verbindungen der allgemeinen Formel (I), wobei m für eine ganze Zahl von 2 bis 4 steht, und X für CH4-m, NH3-m, N+H4-m >P- (wenn m = 3), >P+< (wenn m = 4), >B- (wenn m = 3), eine lineare Atomgruppe C2H6-m, >CH (CH2) zCH<, >C=C<, >N-N<, >N (CH2) zN< wobei z = 2-6, wenn m = 4), eine carbocyclische Atomgruppe C6H6-m, C6H12-m, oder eine heterocyclische Atomgruppe C3N3 (wenn m = 3), C4N2 (wenn m = 4) steht.

Es ist besonders bevorzugt, dass bei einer Verbindung der allgemeinen Formel (I) mindestens 3 K vorliegen. Speziell sind Verbindungen der allgemeinen Formel (I) bevorzugt, bei denen mindestens zwei, noch bevorzugter drei R nicht Wasserstoff sind.

Wenn mehr als eine terminale Gruppe R in einer Verbindung der aligemeinen Formel (I) vorliegt, dann können diese Gruppen gleich oder verschieden sein.

Als Beispiele der für die spezifische Bindung an einen Rezeptor geeigneten Liganden, die als terminale Gruppen R der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) fungieren, seien natürlich vorkommende biologische Erkennungsstrukturen wie Mono-oder Oligosaccharide, Peptide, Mono-oder Oligonukleotide oder Nukleinbasen genannt. Es können aber auch synthetische Derivate dieser Verbindungen oder andere organische oder anorganische Verbindungen, die von biologischen Rezeptoren erkannt werden, verwendet werden. Als Liganden können ferner bekannte Verbindungen verwendet werden, die in freier Form als therapeutische Wirkstoffe zum Einsatz kommen.

Beispielhaft seien genannt : -Antitumormittel, wie z. B. Daunomycin, Doxorubicin, Vinblastin, Bleomycin ; -Antibiotika, wie z. B. Peniciline, Erythromycine, Azidamfenicol, Cephalotin und Griseofulvin ; -Antagonisten der Blutplättchenaktivierungsfaktoren ; -Leukotrien Antagonisten ; -Inhibitoren des Cyclooxygenase-Systems, wie z. B. Salicylsäureverbindungen ; -Lipoxygenase-lnhibitoren ; -Antiphlogistika, wie z. B. Indomethacin ; -Antirheumatica, wie z. B. Nifenazon ; -Therapeutische Radionuklide, wie z. B. Wismuth ; -Neuraminidase ; -Inhibitoren, wie z. B. Zanamivir.

Vorzugsweise werden Oligosaccharide verwendet, die auf Zelloberflächen als Bestandteil von Glycoproteinen, Glycolipiden oder Proteoglycanen vorkommen, sowie beliebige Teilstücke daraus.

Spezielle Oligosaccharide, die als terminale Gruppe R verwendet werden können sind wie folgt : Sialinsäure, Sialyllactose, Sialyllactosamin, Lactose, Galα1-3Gal, Gala1- <BR> <BR> <BR> Neu5Acα2-6GalNAc,SiaLeA,SiaLeX,3(Fucα1-2)Gal,GalNAcα1-3(F ucα1-2)Gal, <BR> <BR> <BR> <BR> <BR> Galα1-3Galß1-4GlcNAc,Galα1-3Galß1-4Glc,Neu5Acα2-6Galß1 -HSO3LeA,HSO3LeX, <BR> <BR> <BR> <BR> <BR> 4GIcNAc.

Außerdem sind HSO3GlcAß1-3Galß1-HSO3GlcAß1-3Gal, <BR> <BR> <BR> <BR> GaliNAcα1-3(Fucα1-2)Galß104GlcNAc,Galα1-4GlcNAcß1-3Galà Ÿ1-4Glc,GalNAcα, 3 (Fuca1-2) Galß1-4GICNAc, HSO3 (Sia) LeX, HS03 (Sia) LeA, LeY, GIcNAcß1-6 (GIcNAcß1- 3) Galß1-4Glc, GalNAcß1-4(Neu5Acα2-3)Galß1-4Glc, Mannose-6-phosphat, GaINAcßl- <BR> <BR> <BR> <BR> N-Glycolylneuraminsäure,Galα1-4Galß1-4Glc,Galα1-4GlcNAc, Oligo-Sialinsäure, 4Galß1-4GlcNAc bevorzugt.

Derivate oder Mimetika der oben genannten Mono-oder Oligosaccaride, Peptide, Mono-oder Oligonukleotide bzw. Nukleinbasen können auch verwendet werden.

Die terminalen Gruppen R können auch von Markermolekülen abgeleitet sein. Solche Markermoleküle ermöglichen den Einsatz der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) bei diagnostischen Anwendungen. Alle dem Fachmann bekannten Markermoleküle für in vitro diagnostische Testsysteme wie z. B. Biotin, Fluorescein, Rhodamin, Digoxygenin oder radioaktive Marker kommen für die Zwecke der vorliegenden Erfindung in Frage. Insbesondere dem Fachmann bekannte Marker für die in vivo Diagnose, wie radioaktive Marker, die ein gebundenes Radionuklid enthalten, z. B.

Technetium, Röntgenkontrastmittel, die z. B. eine iodierte Verbindung beinhalten, oder Kernresonanzkontrastmittel, z. B. auf Basis von Gadoliniumverbindungen seien erwähnt.

Es wird vorgeschlagen, dass in einer bevorzugten Ausführungsform die terminalen Gruppen R so gewählt werden, dass Aggregate erhalten werden, die einerseits über geeignete Liganden durch polyvalente Wechselwirkungen mit geeigneten Rezeptoren wechselwirken und andererseits Markereinheiten enthalten. Dadurch werden die polyvalenten Wechselwirkungen einer Detektion zugänglich und die Verbindungen können in einem diagnostischen Verfahren eingesetzt werden.

Die Aggregate können in diesem Fall aus Verbindungen der Formel (I) aufgebaut sein, die sowohl Liganden-als auch die Markerreste enthalten. Vorzugsweise umfasst ein solches Aggregat nur eine spezielle Verbindung der aligemeinen Formel (I). Andererseits kann ein Aggregat aber auch mehrere verschiedene Verbindungen der Formel (I) umfassen, wobei die Verbindungen entweder Liganden oder Markerreste enthalten.

Die vorliegende Erfindung stellt ferner ein Aggregat der folgenden allgemeinen Formel (II) bereit, {X(BU,(!!) wobei die X (B) m gleich oder verschieden sein können und für eine Verbindung der aligemeinen Formel (I), wie sie in einem der Ansprüche 1 bis 11 definiert ist, stehen, und n für 2 bis 100.000 steht, und wobei die X (B) m nicht-kovalent gebunden sind.

Insbesondere stellt die vorliegende Erfindung ein Aggregat mit blattartiger Struktur bereit sowie mit linearer, zyklischer, polyzyklischer, polyedrischer, kugelförmiger oder dendritischer Struktur bereit. Die Aggregate können aus zwei oder mehreren verschiedenen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) bestehen.

Die vorliegende Erfindung stellt auch Verbindungen der aligemeinen Formel (III) bereit.

Die Verbindungen der aligemeinen Formel (III) entsprechen denjenigen der Formel (II), wobei alle terminalen Gruppen R für ein Wasserstoffatom stehen. Diese Verbindungen können mit den oben beschriebenen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) eingesetzt werden, um die Eigenschaften der Aggregate zu verändern.

Speziell stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der aligemeinen Formel (III) bereit, wobei X für eine m-wertige Einheit steht und die B gleich oder verschieden sind und für K-H stehen, wobei K A1-(A2-A3),-sp steht, wobei A1 für (CH2) steht, wobei Y fi >C=O, >NH,-O-,-S-oder eine Bindung, t für eine ganze Zahl von 0 bis 6 und u für eine ganze Zahl von 0 bis 6 steht, A2 für-NHCO-,-CONH-,-OCONH-oder SCONH-steht, A3 für (CH2)r, O(CH2)r, NH(CH2)r, S (CH2) oder- (CHQ)- steht, wobei r für eine ganze Zahl von 1 bis 6 und Q für eine substituierte oder unsubstituierte Alkyl-oder Aryl-Gruppe steht, sp für einen zweiwertigen Spacer oder eine Bindung steht, und k für eine ganze Zahl von 5 bis 100 steht, und m mindestens 2 ist, mit der Maßgabe, dass (1) X, die B und m so gewählt sind, dass eine intermolekulare Assoziation der K in flüssiger Phase, insbesondere unter wässrigen Bedingungen, durch Bildung von Wasserstoffbrücken-Bindungen unter Ausbildung von Aggregaten möglich ist, und (2) die Molmasse des Fragments X (K) m weniger als 20.000, insbesondere weniger als 4000, beträgt.

In der Verbindung der Formel (III) kann A2 auch-CO-bedeuten.

In einer bevorzugten Ausführungsform steht K in der Formel (III) für A1-(A2-A3)k-sp wobei A1 für (CH2) steht, wobei Y für >C=O, >NH,-O-,-S-oder eine Bindung, t für eine ganze Zahl von 0 bis 6 und u für eine ganze Zahl von 0 bis 6 steht, -NHCO-,-CONH-,-OCONH-oderSCONH-steht,A2für A3 für (CHR)r, O(CH2)r, NH (CH2) S (CH,) oder - (CHQ)-steht, wobei r für eine ganze Zahl von 1 bis 6 und Q für eine substituierte oder unsubstituierte Alkyl-oder Aryl-Gruppe steht, sp für einen zweiwertigen Spacer oder eine Bindung steht, und k für eine ganze Zahl von 5 bis 100 steht.

Jetzt wird die Herstellung der Verbindungen der aligemeinen Formel (I) beschrieben.

Entsprechend dieser Herstellungsweise können auch die Verbindungen der Formel werden.(III)hergestellt Die Synthese der Verbindungen der aligemeinen Formel (I) wird vorteilhafterweise jeweils ausgehend von den entsprechenden Tetraminen durch sukzessive Kettenverlängerung durchgeführt (Schema 1). Hierbei werden bekannte Methoden aus der Peptid-Chemie angewendet, wobei als N-Schutzgruppe die Boc-Gruppe verwendet wird. Die Amidbindungen werden vorzugsweise mit der Aktiv-Ester-Methode gebildet.

Schema 1 [HNCHC-.[BocNH(CH2)pCONHCHz-]4C[HCHCONHCHLC-.

[H-ACmGlynNHCH2-]4C p=1 oder6, n=Obis7, m=Obis3 Die terminalen Gruppen werden vorteilhafterweise ebenfalls über die Aktiv-Ester- Methode an die gemäss Schema 1 synthetisierten Verbindungen der allgemeinen Formel (I) geknüpft (Schema 2).

Schema 2 <BR> <BR> <BR> <BR> <BR> <BR> [H-ACmGly, NHCH2-14C+ Sug-sp-ACm-Ad-ONp [Sug-sp-ACm-Ad-ACmGly, NHCH2-14C Sug-sp-= Neu5Aca2-OCH2 (p-C6H4) NHCOCH2NH- (Neu5Ac-Gab-) Neu5Aca2-O (CH2) 3NH- (Neu5Ac-Ap-) <BR> <BR> Neu5Aca2-3Galß1-4Glcß1-NHCOCH2NH- (3SL-NHCOCH2NH2-)<BR> <BR> <BR> <BR> Galα1-3Galß1-O(CH2)3NH-(Bdj-Ap-) Jetzt wird die Bildung der Aggregate in Einzelheiten und anhand der Figuren beschrieben. Es zeigen Fig. 1 ElutionsprofilederAggregate {[Neu5Ac-Gab-ACm-Ad-Glys-NHCH2-] 4C} x, HPLC, TSK-4000,0.2M NaCl ; Fig. 2 die relative Partikelgrössenverteilung des Aggregats {[Neu5Ac-Gab-Ad-AC3- G) y5-NHCH2-LC} 20°CH20 ; Fig. 3 den Einfluss der Temperatur und der Anwesenheit von Harnstoff auf die Partikelgrösse des Aggregats {[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly7-NHCH2-]4C}x Die Aggregate sind hochmolekulare nicht-kovalente Polymere, die durch Selbstassoziation von Verbindungen der allgemeinen Formel (I) entstehen (Schema 3).

Schema 3 X [A'-(A2-A3) k-sp-R] m X {X [A'-(A2-A3) k-sp-R] m} n Diese intermolekulare Assoziation verläuft spontan und führt zur Bildung von stabilen und geordneten Strukturen. Der Verlauf dieses Prozesses hängt von der molekularen Struktur der eingesetzten Verbindungen der allgemeinen Formel (I) und von den äusseren Bedingungen ab. Die Molmassen, Grosse und Formen der hierbei gebildeten Aggregate werden ebenfalls von diesen Faktoren bestimmt.

Die nicht-kovalente Natur der Bindungen zwischen den Verbindungen der allgemeinen Formel (I) bedingt die Reversibilität der Aggregatbildung und ermöglicht bei einer Veränderung der äusseren Bedingungen eine Dissoziation der Aggregate zu Verbindungen der aligemeinen Formel (I) oder ihre Umwandlung in andere Aggregate, jeweils im Sinne der Bildung der thermodynamisch stabilsten Strukturen.

Die Selbstassoziation von Verbindungen der allgemeinen Formel (I) zu Aggregaten kann sowohl in Lösungen als auch auf Oberflachen beobachtet werden.

Mittels Raster-Tunnel-Mikroskopie (STM) und Atomkraft-Mikroskopie wurde gezeigt, dass das Aggregat {[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly7-NHCH2-]4C}x auf einer Graphit-Unterlage geordnete Kettenstrukturen ausbildet. Die Bildung von Aggregaten in Lösungen kann durch Lichtstreuungs-Experimente oder Gelpermeations-Chromatographie beobachtet werden.

Die Verbindung der allgemeinen Formel (I) Neu5Ac-Gab-ACm-Ad-Gly5-NHCH2-] 4C (m=1-3) assoziert bei Raumtemperatur in wässrigen und organischen Lösungsmitteln. Die Untersuchung der in Wasser gebildeten Assoziate mittels Gelpermeations- Chromatographie zeigte die Bildung von Aggregaten mit Molekulargewichten von ca.

2000 kD, wie es in Figur 1 gezeigt wird.

Die Untersuchung der Assoziation der Verbindung der allgemeinen Formel (I) [Neu5Ac-Gab-Ad-AC3-Glys-NHCH2-] 4C in Wasser bei 20°C zeigte die Bildung von drei Typen von Aggregaten mit Partikelgrössen zwischen 25 und 2000nm (Figur 2). Beim Erwärmen der Probe auf 60°C wurde eine Abnahme des relativen Anteils der kleineren Partiel beobachtet, wobei gleichzeitig der relative Anteil der grösseren Partiel zunahm und die Gesamtanzahl der Teilchen abnahm. Eine Zunahme der Aggregat-Grosse mit der Temperatur wurde auch bei der Verbindung der allgemeinen Formel (I) (48) beobachtet. Diese Verbindung bildet in Wasser bei 60°C Teilchen mit Grosse bis zu 8000nm (Figur 3).

Zu den äusseren Bedingungen, die die Bildung der Aggregate und den Verlauf der intermolekularen Assoziation bestimmen, zählen neben der Temperatur, der pH-Wert und die Art und Zusammensetzung des Lösungsmittels. Durch Lichtstreuungs- Untersuchungen wurde gezeigt, dass die Verbindung [HCI-H-Gly7-NHCH2-] 4C (22a) in Wasser bei 20°C in nicht-assoziierter Form vorliegt, jedoch durch Zugabe einer 0.8 M NaHC03-Lösung eine Selbstassoziation der Verbindung erreicht wird. Durch Zugabe von HCI kann dann anschließend die Assoziation wieder rückgängig gemacht werden (vgl. Beispiel 9).

Die Bildung von Aggregaten wird auch durch die Anwesenheit von Komponenten beeinflusst, welche mit den Verbindungen der aligemeinen Formel (I) Wechselwirkungen eingehen können. Dies können organische Moleküle sein, wie z. B.

Verbindungen der Formel (III), Harnstoff (Abbildung 3), Trifluorethanol, Methanol, Aceton oder andere organische Lösungsmittel. Es können auch andere Verbindungen der allgemeinen Formel (I) bzw. (III) sein, die für sich alleine-unter den gegebenen Bedingungen-keine Assoziate ausbilden.

Bei Verbindungen der allgemeinen Formel (I) und Aggregaten wird der Prozess der Selbstassoziation auch durch die Wechselwirkungen zwischen den Liganden und den entsprechenden Rezeptoren beinflusst. Dieser Einfluss kann z. B. darin bestehen, dass erst durch die Anwesenheit der Rezeptoren eine Assoziation von Verbindungen der allgemeinen Formel (I) hervorgerufen wird, und zwar unter Bedingungen bei denen sonst keine Assoziation dieser Verbindungen stattfinden würde. Durch die Reversibilität der Aggregatbildung ist es ebenso möglich, dass sich Aggregate in Anwesenheit von Rezeptoren unter Umlagerung oder Veränderung der Zusammensetzung so verändern, dass ein thermodynamisch günstiger Zustand des Gesamtsystems aus Aggregat und Rezeptor erreicht wird. Die Aggregate können sich daher an unterschiedliche Rezeptoranordnungen anpassen und so eine Wechselwirkung zwischen den Rezeptoren und Liganden optimieren. Diese Optimierung durch nachträgliche Anpassung der polyvalenten Wechselwirkungen stellt einen wesentlichen Vorteil gegenüber dem Stand der Technik dar.

Jetzt werden spezielle biologisch aktive Aggregate beschrieben. Durch die Selbstassoziation von Verbindungen der allgemeinen Formel (I) mit biologisch aktiven Liganden entstehen biologisch aktive Aggregate, die als hocheffektive multivalente Inhibitoren von biologischen Erkennungsprozesse wirken. Die spezifische Aktivität eines solchen Inhibitors ist abhängig von der Affinität der terminalen Gruppen R, aber auch von der"Matrix"des Aggregats, d. h. der Struktur der als Träger verwendeten Verbindung der allgemeinen Formel (I).

Die Tabellen 2 und 3 zeigen den Einfluss der Matrix-Struktur auf die Inhibition der viralen Zelladhasion von Influenza-Viren, gemessen in einem dem Fachmann bekannten Fetuin-Binding Assay. Dabei wird die Verstärkung der spezifischen Aktivität des Inhibitors um mehr als drei Grössenordnungen gegenüber der Aktivität des freien Liganden Neu5AcaBn im Falle des Aggregats {[Neu5Ac-Gab-Ad-AC3-Gly5-NHCH2- deutlich.]4C}x(44) Tabelle 1 Inhibition der viralen Zelladhäsion von Influenza Viren, Stamm A/NIB/44/90M H3N2, FBI-test, Neu5AcaBn als a Referenz-Verbindung, spezifische Aktivität pro Neu5Ac-Gruppe Inhibitor Relative Aktivität Neu5Aca-OBn 1 [Neu5Ac-Gab-Ad-Gly,-NHCH2-] 4C(n=0-5) 2 1Neu5Ac-Ap-Ad-Glyn-NHCH2-]4C(n=3-5) Neu5Ac-Gab-Ad-glyGlugly-NHCH2-]4C5 [Neu5Ac-Gab-AC-Ad-Glys-NHCH2-] 4C 15 [Neu5Ac-Gab-AC2-Ad-Glys-NHCH2-] 4C 330 [Neu5Ac-Gab-AC3-Ad-Glys-NHCH2-] 4C 1000 Neu5Ac-Gab-Ad-AC2-Gly5-NHCH2-]4C1000 [Neu5Ac-Gab-Ad-AC3-Glys-NHCH2-] 4C 2500 Tabelle 2 Inhibition der viralen Zelladhäsion von Influenza Viren Inhibition of Stamm A/Duck/Alberta/60/67 H12N5, FBI-test, 3'SL als a Referenz-Verbindung, spezifische Aktivität pro 3'SL-Gruppe AktivitätInhibitorRelative 3'SL1 [3'SL-NHCOCH2NHAd-Gly5-NHCH2-]4C20 [3'SL-NHCOCH2NH-Ad-Gly7-NHCH2-]4C200 Ein weiteres Beispiel für die Erhöhung der biologischen Aktivität eines biologischen Liganden durch seine Bindung an ein Aggregat ist die Verbindung {[Bdi-Ap-Ad-AC3- Gly5-NHCH2-]4C}x (49) als Inhibitor der Zytotoxizität von menschlichen Blutseren gegenüber der Schweinenieren-Nieren-Zellen PK15. Das Aggregat (49) zeigt eine um drei Grössenordnung höhere spezifische Aktivität als der freie Ligand Gala1-3Gal (B- disaccharid).

Verwendete Abkürzungen : Np para-Nitrophenyl NOS N-Oxysucinimidyl Boc tert-Butyloxycarbonyl AC 6-Aminocaproyl Ad 1,6-Hexandioyl Ap 3-Aminopropyl Gab 4- (Glycylamido)-benzyl Sug Kohlenhydratrest SL Sialyllactose Bn Benzyl LC Säulenchromatographie DC Dünnschichtchromatographie Jetzt wird die Erfindung anhand von Beispielen in weiteren Einzelheiten beschrieben.

Materialien und Methoden : 1H-NMR Spektren (b, ppm, TMS) wurden mit einem Spektrometer des Typs WM-500 der Firma Bruker (USA) bei 303°K aufgenommen.

Massenspektren wurden mit einem Flugzeit-Spektrometer des Typs MSBCh (Sumy, Ukraine) aufgenommen (lonisation durch Spaltprodukte von Californium-252 bei einer Beschleunigungsspannung von +15 eV).

Die Lichtstreuungs-Experimente wurden mit folgenden Geräten durchgeführt : Coultronics Coulter N4-MD (He-Ne Laser, A=632.8 nm, Messung der Streuung bei einem Winkel von 62.5° zum eintretenden Lichtstrahl), Spectra-Physics 164 (Argon Laser, A=528.7 nm und A=611.5 nm, Messung der Streuung bei einem Winkel von 90° zum eintretenden Lichtstrahl).

Kieselgel 60 (40-63 um) (Merck) wurde für Säulenchromatographie verwendet.

Sephadex der Typen LH-20, G-10, G-25 (Pharmacia, Schweden) und TSK-4000 (HPLC) wurden für Gelpermeations-Chromatographie gebraucht.

Für DC wurden Kieselgel 60 (Merck) und Kieselgel 60 Glassplatten mit Fluoreszenz- Indikator F254 (Merck) verwendet. Zur Detektion der Flecken auf den DC-Platten wurden folgende Methoden verwendet : -Erwärmen nach Besprühen mit einer 7% igen H3PO4-Lösung (Kohlenhydratverbindungen); -Erwärmen nach Besprühen mit einer 2% igen Ninhydrin-Lösung in Ethanol (Verbindungen mit primären Aminogruppen) ; -Erwarmen nach einer Verweilzeit von 10 Minuten in einer Kammer über konz.

HCI und anschliessenden Besprühen mit einer 2% igen Ninhydrin-Lösung in Ethanol (Verbindungen mit Boc-geschützten Aminogruppen) ; -Verweilzeit von 10 Minuten in einer Kammer über konz. NH3 (4-Nitrophenylester) ; -Betrachten der Platten unter UV.

Für DC wurden folgende Eluenten-Systeme verwendet : A-Toluol/Ethylacetat 2 : 1 B-Aceton/Ethylacetat/Methanol 10 : 4 : 1 C-CHC13/MeOH 7 : 1 D - CHCl3/Ethylacetat/MeOH/AcOH 9 : 3 : 2 : 0,2 E-iPrOH/Ethylacetat/H20 2 : 3 : 1 F-EtOH/NH3 (aq) 2 : 1 G-iPrOH/Ethylacetat/H20 4 : 3 : 2 H-iPrOH/Aceton/H20 4 : 3 : 2 Herstellung bekannterAusgangsverbindungen )-methan-tetrahvdrochlorid (1) wurde analog der Literatur hergestellt (E. B. Fleischer, A. E. Gebala, A. Levey, P. A.

Tasker, J. Org. Chem., 36,3042,1971).

DC : Rf=0, 6 ; Eluent-25% Ammoniak/Wasser ; Entwickler-Ninhydrin.

Schmp >300°C.

'H NMR-Spektrum in D2O (#, ppm) : 3,45 (s, CH2).

4-Nitrophenyl-trifluoracetat(2) wurde analog der Literatur hergestellt (S. Sakakibara, N. Inukai, Bull. Chem. Soc. Jap., 37,1231,1964).

Di-(4-Nitrophenyl)-adipat(3) wurde analog der Literatur hergestellt (S. Sakakibara, N. Inukai, Bull. Chem. Soc. Jap., 37,1231,1964).

#A.Rf=0,76,eluent 1H NMR-Spektrum in CDC13 (5, ppm) : 1,871 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2,666 (m, 4H, 2 COCH2), 7,255 und 8,240 (m, 8H, J23 3 9Hz, Ar).

5-acetamido-4,7,8,8-tetra-O-acetyl-Methyl[4-(tert-butylox ycarbonyl-glycilamido)benzyl 3,5-didesoxyl-α-D-glycero-D-galakto-nonulopyranosid]oat Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-Boc (4) wurde analog der Literatur hergestellt (US Patent 5,571,836,1996).

'H NMR-Spektrum (CDCig, 6, ppm) : 1,448 (s, 9H, CMe3), 1,849,1,994,2,008,2,111,2,127 (s, 5x3H, 5 Ac), 1,979 (dd, 1H, H-3ax Neu5Ac), 2,613 (dd, 1H, J4 4, 6 Hz, J 12,9 Hz, H-3eq Neu5Ac), 3,637 (s, 3H, COOCH3), 3,882 (d, 2H, J 6 Hz, COCH2NH), 4,058 (ddd, 1H, H-5 Neu5Ac), 4.074 (dd, 1H, Jgb 12,5 Hz, J8 5,9 Hz, H-9a Neu5Ac), 4,112 (dd, 1H, J5 10,6, J7 2, 3 Hz, H-6 Neu5Ac), 4,299 (dd, 1H, J9b 12,5 Hz, J8 2,7 Hz, H-9b Neu5Ac), 4,366 und 4,735 (d, 2x1H, J 12 Hz, OCH2Ar), 4,847 (ddd, 1H, J5 10 Hz, J3ax 12, 3 hz, J3eq 4, 6 Hz, H-4 Neu5Ac), 5,24 (verb., 1 H, NHBoc), 5,251 (d, 1H, J5 9,8 Hz, NH), 5,314 (dd, 1H, J6 2,3 Hz, Je 8,2 Hz, H-7 Neu5Ac), 5,424 (ddd, 1 H, H-8 Neu5Ac), 7,258 und 7,445 (d, 2x2H, J 8,4 Hz, Ar), 8,144 (verb. s, 1 H, NHAr). neu5Acα2-3Galß1-4Glcß-NHCOCH2NH2(12) wurde analog der Literatur hergestellt (L. M. Likhosherstov, O. S. Novikova, V. A.

Derevitskaja, N. K. Kochetkov, Carbohydrate Research, 146, C1-C5,1986 ; und I. D.

Manger, T. W. Rademacher, R. A. Dwek, Biochemistry, 31,10724,1992).

1H-NMR Spektrum (D2O, #, ppm) : 1,82 (dd, 1H, H-3ax Neu5Ac, J4 12 Hz), 2,06 (s, 3H, NAc), 2,79 (dd, 1 H, H-3eq Neu5Ac, J3ax 12,4 Hz, J4 4,6 Hz), 3,48 (m, 1 H, H-2 Glc, J3 9 Hz), 3,61 (dd, 1 H, H-2 Gal), 3,99 (dd, 1H, H-4 Gal), 4,14 (dd, 1H, H-3 Gal, J2 9,8 Hz, J4 3,1 Hz), 4,57 (d, 1H, H-1 Gal, J2 7,8 Hz), 5,09 (d, 1H, H-1 Glc, J2 9,3 Hz).

Gala1-3Galß-O (cH2) 3NH2 (13) wurde analog der Literatur hergestellt (E. Yu. Korchagina, N. V. Bovin, Bioorganicheskaya Khimiya, 1992,18,283, Rus).

Die Verbindungen BocGlyNOS, BocGlyGlyNOS und BocAC-ONp wurde unter Verwendung von N, N'-Dicyclohexylcarbodiimid analog der Literatur hergestellt (G. W.

Anderson, J. E. Zimmerman, F. M. Callahan, J. Amer. Chem. Soc., 86,1839,1964 ; M.

Bodanszky, V. du Vigneaud,, J. Amer. Chem. Soc., 81,5688,1959).

Beispiel1, Herstellung von Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-AC-Boc (5).

Zu 0,5mM der Verbindung (4) wurden 10Ml CHCl3 und 2ml CF3COOH zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt, mit 2ml Toluol versetzt, im Vakuum eingedampft und getrocknet. Der Rückstand wurde in 1 Oml CHCI3 gelöst und mit 1,5mM 6-N-Boc-Amino- (4-nitrophenyl)-hexanoat und 0,3mi NEt3 versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und im Vakuum eingedampft. Der erhaltene Rückstand wurde über Kieselgel chromatographiert.

Die Verbindungen Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-AC2-Boc (6) und Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab- AC3-Boc (7) wurden auf analoge Weise hergestellt (siehe Tabelle 4).

Tabelle 3 (Beispiel 1) Produkt Ausgangs-DC Säulenchromatographie Ausbeute, verbindung Eluent A, R % Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-AC-Boc (5) (4) 0.6 CHCI3/MeOH 90 35 : 1 - 10 : 1 Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-AC2-Boc (6) (5) 0.45 Aceton/Ethylacetat/MeOH 72 10:4;0.5-10:4:3 Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-AC3-Boc (7) (6) 0.25 Aceton/Ethylacetat/MeOH 70 10 : 4 : 1 - 10 : 4 : 5 (CDCl3,#,ppm):1HNMR-Spektren Ac4(OMe)Neu5Ac-Gab-AC-Boc (5) : 1,331,1,468,1,655 (m, 3CH2), 1,402 (s, 9H, CMe3), 2,264 (t, 2H, J 7,5 Hz, CH2CONHCH2CO), 3,066 (m # quadr, 2H, J 6,6 Hz, CH2NHBoc), 4,060 (d, 2H, J 5 Hz, COCH NH), 4,364 und 4,733 (d, x1H, J 12 Hz, OCH2Ar), 4,571 (verb., 1H, NHBoc), 6,521 (verb., 1H, COCH2NHCO), 7,253 und 7,460 (d, 2x2H, J 8,4 Hz, Ar), 8,547 (verb. s, 1H, NHAr).

Neu5Aca-Fragment : (s. (4)).

Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-AC2-Boc (6) : 1,280,1,338,1,447,1,482,1,582,1,655,2,107 (m, 7CH2). 1,403 (s, 9H, CMe3), 2,276 (t, 2H, J 7,2 Hz, CH2CONCH2CO), 3,060 (m # quadr, 2H, J 6,6 Hz, CH2NHBoc), 3,216 (m # quadr, 2H, J 6,4 Hz, CH2NH), 4,040 (d, 2H, J 5 Hz, COCHNH), 4,353 und 4,728 (d, 2x1 H, J 2Ar), 4, 651 (verb., 1H, NHBoc), 5,793 (t, 1H, J 5 Hz, CH2NHCO), 6,714 (verb., 1H, COCH2NHCO), 7,245 und 7,467 (d, 2x2H, J 8,4 Hz, Ar), 8,666 (verb. s, 1H, NHAr). Neu5Aca-Fragment : (s. (4)).

Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-AC3-Boc (7) : 482,1,594,1,655,2,117 (m, 11CH2), 1,401 (s, 9H, CMe3), 2,282 (t, 2H, J 7,2 Hz, CH7CONHCH2CO), 3,045 (m # quadr, 2H, J 6,6 Hz, CH2NHBoc), 3,214 (m # quadr, 4H, J 6,4 Hz, CH2NH), 4,040 (d, 2H, J 5 Hz, COCH2NH), 4,353 und 4,728 (d, 2x1 H, J 12 Hz, OCH7Ar), 4,669 (verb., 1H, NHBoc), 5,876 (t, 1H, J 5,5 Hz, CH2NHCO), 6,071 (verb., 1H, CH2NHCO), 6,940 (verb., 1H, COCH2NHCO), 7,242 und 7,483 (d, 2x2H, J 8,4 Hz, Ar), 9,033 (verb. s, 1H, NHAr). Neu5Aca-Fragment : (s. (4)).

Beispiel 2.

Herstellung von Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-AC-Ad-ONp (9).

Zu 0,5mM der Verbindung (5) wurden 10ml CHC13 und 2ml CF3COOH zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt, mit 5ml Toluol versetzt, im Vakuum eingedampft und getrocknet. Der Rückstand wurde in 15ml Tetrahydrofuran gelöst und mit 5mM der Verbindung (3) und 0,3 ml NEt3 versetzt und 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, Das überschüssige NEt3 wurde mit CH3COOH neutralisiert, und das Reaktionsgemisch eingedampft. Der Rückstand wurde in CHOC'3 gelöst, die erhaltene Lösung wurde mit Wasser gewaschen und eingedampft. Das erhaltene Gemisch wurde über eine Kieselgelsäule chromatographiert (siehe Tabelle 4).

Die Verbindungen Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-Ad-ONp (8), Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-AC2- Ad-ONp (10) und Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-AC3-Ad-ONp (11) wurden auf analoge Weise hergestellt (siehe Tabelle 4).

Tabelle 4 (Beispiel 2) Produkt Ausgangs-DC : Säulenchromatographie Ausbeut verbindung Eluent C, Rf e % Ac4(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-ONp (8) (4) 20:178CHCl3/i-PrOH Ac4(OMe)Neu5Ac-Gab-AC-Ad-ONp (9) (5) 65CHCl3/MeOH/AcOH 35 : 1 : 0.2-15 : 1 : 0.2 (6)0,48CHCl3/MeOH/AcOH60Ac4(OMe)Neu5Ac-Gab-AC2-Ad-ONp(10) 35 : 1 : 0,2-15 : 1 : 0,2 Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-AC3-Ad-ONp (11) (7) 0,43 CHC13/MeOH/AcOH 62 35 : 1 : 0,2-15 : 1 : 0,2 'H NMR-Spektren : Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-Ad-ONp (8) (CDC13, #, ppm) : 1,774 (m, 2H, CH2CH2COO), 1,843,1,984,2,00, 2,100,2,117 (s, 5x3H, 5 Ac), 1,966 (dd, 1H, H-3ax Neu5Ac), 2,335 und 2,393 (m, 2x1H, CH2CH2CONH), 2,601 (t, 2H, J 6Hz, CH2CH2COO), 2,604 (dd, 1 H, H-3eq Neu5Ac), 3,645 (s, 3H, COOCH3), 3,688 (t, 2H, J 4,7Hz, CH2CH2CONH), 4,049 (ddd, 1 H, H-5 Neu5Ac), 4,062 (dd, 1 H, J8 6_Hz, H-9a Neu5Ac), 4,074 (d, 2H, COCH2NHCO),4,111(dd,1H,J510,7,J72,3Hz,H-6Neu5Ac),4,298(dd,1H ,J9b12,5Hz,5,5hz, J8 2,9Hz, H-9b Neu5Ac), 4,343 und 4,722 (d, 2x1H J 12Hz, OCH2Ar), 4,839 (ddd, 1H, J5 10,2Hz, J3.

12,3Hz, J3eq 4,6Hz, H-4 Neu5Ac), 5,307 (dd, 1H, J8 8,4Hz, J6 2,3Hz, H-7 Neu5Ac), 5,359 (d, 1H, J5 9,7Hz, NH), 5,406 (ddd, 1H, H-8 Neu5Ac), 6,616 (t, 1H, COCH2NHCO), 7,243 und 7,450 (d, 2x2H, J 8,5Hz, p-C6H4NH), 7, 221 und 8,208 (d, 2x2H, J 9Hz, p-C6H4NO2), 8,586 (s, 1H, NHAr).

Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-AC-Ad-ONp (9) (CDC13, 6, ppm) : 1,341 (m, 2H, COCH2CH2CH2CH2CH2NH), 1,495 und 1,666 (m, 2x2H, COCH2CH2CH2CH2CH2NH), 1,729 (m, 2H, CH2CH2COO), 991, und 2,129 (s, 5x3H, 5 Ac), 1,976 (dd, 1H, H-3ax Neu5Ac), 175 (m, 2x1H, CH CH2CONH), 2,182 und 2,267 (t, 2x2H, 2 CH2CONH), 2,601 (-t, 2H, J 6,8Hz, CH2CH2COO), 2,611 (dd, 1H, J3z, 12,8, J4 4,5Hz, H-3eq Neu5Ac), 3,228 m # quadr, 2H, J 6,6Hz, CH2NHCO), 3,645 (s, 3H, COOCH3), 4,022 (d, 2H, JNH 5,4Hz, COCH2NHCO), 4,050 (ddd, 1 H, H-5 Neu5Ac), 4,065 (dd, 1 H, Je 6Hz, H-9a Neu5Ac), 4,113 (dd, 1H, J5 10, 8, J7 2, 3Hz, H-6 Neu5Ac), 4,295 (dd, 1H, J9a 12,5Hz, J8 2, 9Hz, H-9b Neu5Ac), 4,357 und 4,732 (d, 2x1H, J 12Hz, OCH2Ar), 4,848 (ddd, 1H, J5 10Hz, J3ax 12,2Hz, J3eq 4,5Hz, H-4 Neu5Ac), 5,170 (d, 1H, j5 10Hz, NH), 5,308 (dd, 1H, 8 8, 6Hz, J6 2,3Hz, H-7 Neu5Ac), 5,413 (ddd, 1H, H-8 Neu5Ac), 5,708 (t, 1H, CH2CH2NHCO), 6,483 (t, 1H, COCH2NHCO), 7,251 und 7,427 (d, 2x2H, J 8,7Hz, p-C6H NH), 7,243 und 8,224 (d, 2x2H, J 9Hz, p-C6H4NO2), 8,298 (s, 1H, NHAr).

Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-AC2-Ad-ONp (10) (D6-DMSO, 5, ppm) : 1,231,1,376,1,485 und 1,608 (m, CH2), 1,757 (dd, 1H, H-3ax Neu5Ac), 917,1,974,2,023 und 2,092 (s, 5x3H, 5 Ac), 2,570 (dd, 1 H, J3ax 12,4, J4 4, 5Hz, H-3eq Neu5Ac), 2,638 (t, 2H, J 7Hz, CH2CH2COO), 3,009 (m, 4H, 2CH2NHCO), 3,699 (s, 3H, COOCH3), 3,859 (d, 2H, JNH 5,9Hz, COCHNHCO), 3,904 (ddd, 1 H, H-5 Neu5Ac), 4,027 (dd, 1 H, J8 6,2Hz, H-9a Neu5Ac), 4,089 (dd, 1H, J5 10, 8, J7 2,6Hz, H-6 Neu5Ac), 4,235 (dd, 1H, J9a 12,4Hz, J8 3,1 Hz, H-9b Neu5Ac), 4, 322 und 4, 645 (d, 2x1H J 11,7Hz, OCH2Ar), 4,715 (ddd, 1H, J5 10Hz, J3ax 12Hz, J3eq 4,5Hz, H-4 Neu5Ac), 5,193 (dd, 1H, J8 8, 4Hz, J6 2, Hz, H-7 Neu5Ac), 5,341 (ddd, 1 H, H-8 Neu5Ac), 7,216 und 7,554 (d, 2x2H, J 8,4Hz, p-CHNH), 7,433 und 8,296 (d, 2x2H, J 9,2Hz, p-C6H4NO2), 7,674 (t, 1H, J 5,5Hz, CH2CH2NHCO), 7,706 (d, 1H, J5 9,8Hz, NH), 7,754 (t, 1H, J 5,8Hz, CH2CH2NHCO), 8,081 (t, 1H, J 5,9Hz, COCH2NHCO), 9,961 (s, 1H, NHAr).

Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-AC3-Ad-ONp (11) (D6-DMSO, #, ppm) : 1,214,1,360,1,478,1,609 (m, CH2), 2,639 (t, 2H, J 7Hz, CHCHCOO), 2,999 (m, 6H, 3CH2NHCO), 3,864 (d, 2H, JNH 5,9Hz, COCHNHCO), 4,324 und 4,645 (d, 2x1H, J 11,7Hz, OCH2Ar), 7,212 und 7,568 (d, 2x2H, J 8,4Hz, p-CHNH), 7,435 und 8,295 (d, 2x2H, J 9,2Hz, p-CH CH NHCO), 7,750 (t, 1 H, J 5,8Hz, CH2CH2NHCO), 8,122 (t, 1H, J 5,9Hz, COCH2NHCO), 10,047 (s, 1H, NHAr), Neu5Aca-Fragment : s.

(10).

Beispiel 3.

Herstellung von (14).Neu5Acα2-3Galß1-4Glcß-NHCOCH2NHCO(CH2)4COO(4-C6H4NO2 ) 119mg (0,172mM) der Verbindung (12) in 0, 5ml DMSO wurde unter Rührung zu einer Lösung von 334mg (0,86mM) der Verbindung (3) in 2ml DMF zugegeben. Das Gemisch wurde 24 Stunden bei 20°C gerührt. Nach Zugabe von 200pi AcOH wurde das Reaktionsgemisch mit 15ml Wasser verdünnt. Die Lösung wurde filtriert und das Filtrat wurde auf ein Volumen von ~2ml eingedampft. Der Rückstand wurde auf eine Sephadex LH-20 Säule (1,5x50cm) gegeben und mit MeCN/H2O (1 : 1,0,2% AcOH) eluiert. Nach Isolation wurden 140mg (14) erhalten, entsprechend einer Ausbeute von 87%. DC : Rf 0,41 (Eluent H).

'H-NMR Spektrum (D2O, #, ppm) : 1,737 (m, 1H, CH CH2CH2CO), 1,779 (dd, 1H, H-3ax Neu5Ac, J4 12,5 Hz), 2,003 (s, 3H, NAc), 2,383 (t, 1H, J 7 Hz, CH2CO), 2,733 (dd, 1H, H-3eq Neu5Ac, J3ax 12,5 Hz, J4 4,5 Hz), 3,432 (m, 1 H, H-2 Glc, J3 9 Hz), 3,556 (dd, 1 H, H-2 Gal), 3,933 (dd, 1 H, H-4 Gal), 4,090 (dd, 1 H, H-3 Gal, J2 10 Hz, J4 3 Hz), 4,499 (d, 1H, H-1 Gal, J2 8 Hz), 4,985 (d, 1H, H-1 Glc, J2 9 Hz).

Die Verbindung Neu5Ac-Gab-Ad-ONp (15) wurde auf analoge Weise ausgehend von (3) und Neu5Aca-OCH2 (p-C6H4)-NHCOCH2NH2 (US Patent 5,571,836,1996) hergestellt.

'H-NMR Spektrum (CD30D, 6, ppm) : 1,968 (dd, 1H, H-3ax Neu5Ac), 1,980 (m, 4H, CH2CH2CH2CO), 2,205 (s, 3H, NCOCH3), 2,565 und 2,874 (t, 2x2H, J 6,8 Hz, 2 CH2CO), 2,976 (dd, 1 H, J4 4,5 Hz, J3ax 13 Hz, H-3eq Neu5Ac), 3,743 (dd, 1H, J6 1,5 Hz, Je 9 Hz, H-7 Neu5Ac), 3,821 (dd, 1H, J5 10 Hz, H-6 Neu5Ac), 3,840 (dd, 1H, Jgb 12 Hz, J8 6 Hz, H-9a Neu5Ac), 3,924 (ddd, 1H, H-4 Neu5Ac), 3,978 (ddd, 1H, H-5 Neu5Ac), 4,047 (dd, 1H, J8 2 Hz, H-9b Neu5Ac), 4,083 (ddd, 1H, H-8 Neu5Ac), 4,196 (s, 2H, COCH NH), 4,653 und 4,973 (d, 2x1H, J 11 Hz, OCH2Ar), 7,474 und 7,707 (d, 2x2H, J 8,3 Hz, p- C6H NH), 7,561 und 8,467 (d, 2x2H, J 8,8 Hz, p-C6H4 nos).

Die Verbindung Galα1-3Galß-O(CH2)3NHCO(CH2)4COO(p-C6H4NO2) (16) wurde auf analoge Weise ausgehend von (3) und Galα1-3Galß-O(CH2)3NH2 (13) hergestellt.

'H-NMR Spektrum (D2O, b, ppm) : 1,78 (m, 4H, CH2CH2), 1,89 (m, 2H, CH2), 2,36 (t, 2H, CH2COO), 2,77 (m, 2H, NHCOCH2), 3,36 (m, 2H, CH2N), 3,69 (t, 1H, J3 9 Hz, 2-Galß), 3,76 (m, 1H, OCH'), 3,78 (m, 6,6'- Gala), 3,91 (dd, 1H, J3 10 Hz, 2-Gala), 4,00 (dd, 1H, 3-Gala), 4,01 (m, 1H, OCH), 4,06 (verb. d, 1H, 4- Gala), 4,20 (verb. d, 1H, 4-Galß), 4, 23 (verb. t, 1H, 5-Galα), 4,48 (d, 1H, J2 8 Hz, 1-Galß), 5,19 (d, 1H, J24 Hz, 1-Gala), 43 (d, 2x2H, J 9,5 Hz, Ar).

Beispiel 4.

Tetra-(N-tert.-butyloxycarbonyl-pentaglycilamidomethyl)me than [BocGly5-NHCH2-]4C(21).

1mM der Verbindung (19) (siehe Tabelle 5) wurde in 4 ml CF3COOH aufgenommen und zwei Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 4ml Toluol versetzt, im Vakuum eingedampft und getrocknet. Der Rückstand wurde in 5ml Wasser gelöst, mit 4 ml einer 2M HCI-Lösung versetzt und eingeengt. Das erhaltene Tetrahydrochlorid (19a) wurde im Vakuum getrocknet, in 0.5ml DMF suspendiert, mit 6 mM BocGlyGlyNOS und 0.5 ml NEt3 versetzt und 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingeengt und und das Produkt wurde mittels Säulenchromatographie gereinigt. Nach Trocknen im Vakuum wurde die Verbindung (21) als weißes Pulver in 69% Ausbeute erhalten (s. Tabelle 5).

Die Verbindungen (17)- (20), (22)- (25) wurden auf analoge Weise hergestellt (siehe Tabelle 5).

'H-NMR-Spektren (Für die Zuordnung der'H-NMR-Signale wurden die Glycine innerhalb der Ketten nummeriert, diese Nummerierung beginnt jeweils am N-terminalen Ende der Ketten) lBocGly-NHCH2-] 4C (17).'H-NMR Spektrum in D6-DMSO (5, ppm) : 1,366 (s, 9H, OCMe3), 2,759 (verb. d, 2H, CCH2), 3.494 (d, 2H, JNH 6 Hz, CH2 Gly), 7,368 (t, 1H, NHGly), 7,969 (verb. t, 1H, CCH2NH), Massenspektrum : 783 (M+Na).

[HCI-H-Glyz-NHCHz-] 4C (18a).'H-NMR Spektrum in D2O (5, ppm) : 2,952 (s, 2H, CCH2), 3,966 (s, 2H, (s,2H,CH2Gly).CH2Gly),4,013 [BocGly3-NHCH2-[4C (19). 1H-NMR Spektrum in D6-DMSO (b, ppm) : 1,375 (s, 9H, OCMe3), 2,690 (verb. d, 2H, JNH 6,5 Hz, CCH2), 3,586 (d, 2H, JNH 6 Hz, CH2Gly3), 3,725 (d, 2H, JNH 5, 5 Hz, CH2Gly1), 3,847 (d, 2H, JNH 5,5 Hz, CH2Gly2), 6, 976 (t, 1H, NHGly3), 7,811 (t, 1H, NHGly2), 7,975 (t, 1H, CCH2NH), 8,534 (t, 1H, NHGly1). Massenspektrum : 1239 (M+Na).

[BocGIY4-NHCH2-14C (20). 1 H-NMR Spektrum in D6-DMSO (5, ppm) : 1,374 (s, 9H, OCMe3), 2,694 (verb. d, 2H, CCH2), 3,575 (d, 2H, CH").3,707 (d, 2H, CH2Gly1), 3, 750 (d, 2H, CH).3,835 (d, 2H, CH,), 6,980 (t, 1H, NHGly4), 7, 827 (t, 1H, CCHNH), 8,048 (t, 1H, NHGly3), 8,096 (t, 1H, NHGly2), 8,590 (t, 1H, NHGly1). Massenspektrum : 1467 (M+Na).

[BocGly5-NHCH2-]4C (21). 1H-NMR Spektrum in D6-DMSO (b, ppm) : 1,380 (s, 9H, OCMe3), 2,688 (verb. d, 2H, CCH2), 3,579 (d, 2H, JNH 6 Hz, CH2Gly5), 3,718 (d, 2H, JNH 5 Hz, CH2Gly10, 3, 750 (d, 4H, JNH-5 Hz, CH'),3,840 (d, 2H, JNH 5,5 Hz, CH2Gly2), 6,974 (t, 1 H, NHm''s), 7, 770 (t, 1H, CCH2NH), 8,006 (t, 1H, NHG'Y4), 8,075 und 8,102 (t, 1H, NHGly2,3), 8, 550 (t, 1H, NHGly1). Massenspektrum : 1695 (M+Na), 1711 (M+K). lBocGly,-NHCH2-] 4C (22).'H-NMR Spektrum in D6-DMSO (5, ppm) : 1,378 (s, 9H, OCMe3), 2,688 (verb., 2H, CCH2), 3,581 (d, 2H, CH). 3,723 (verb. d, 2H, CH2Gly1), 3,751 (m, 8H, CH2 Gly3-6), 3,840 (verb. d, 2H, CH2Gly2), 6,970 (verb. t, 1H, NHGly7), 7,814 (verb. t, 1H, CCHNH), 8,018 (verb. t, 1H, NH° 8,081, 8,085,8,092 und 8,118 (m, 4H, NHGly2-5), 8, 545 (verb. t, 1H,NHGly1).

[HCI-H-AC-Glys-NHCHZ-] 4C (23a).'H-NMR Spektrum in D2O (5, ppm) : 1,446 (m, 2H, CH2), 1,689 (m, 2H, COCH2CH2), 1,724 (m, 2H, CH2CH2N), 2,398 (t, 2H, J 7,4 Hz, COCH2), 2,967 (verb. s, CCH2), 3,044 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH2N), 3,994,4,012,4,049 (x2) und 4,096 (s, 10H, 5 COCH2N).

[HCI-H-AC2-Glys-NHCHZ-], C (24a).'H-NMR Spektrum in D2O (5, ppm) : 1,336 und 1,382 (m, 4H, 2 CH2), 1,548 (m, 2H, CH2CH2N), 1,656 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 1,712 (m, 2H, CH2CH2N+), 2,283 (t, 2H, J 7,4 Hz, COCH2), 2,370 (t, 2H, J 7,4 Hz, COCH2NHCOCH), 2,955 (verb. s, CCH2), 3,031 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH2N+), 3,206 (t, 2H, J 6,6 Hz, CH2N), 3,988,4,00,4,044 (x2) und 4,091 (s, 10H, 5 COCH2N).

[HCI-H-AC3-Glys-NHCH2-] 4C (25a).'H-NMR Spektrum in D2O (5, ppm) : (m, 6H, 3 CH2), 1,551 (m, 4H, 2 CHCH2N), 1,653 (x2) und 1,689 (m, 6H, 3 COCH2CH2). 1,717 (m, 2H, CH2CH2N+), 2,270 und 2,288 (t, 4H, J 7,5 Hz, 2 COCH2), 2,376 (t, 2H, J 7,5 Hz, COCH2NHCOCH2), 2,952 (verb. s, CCH2), 3,033 (t, 2H, J 7,5 Hz, CH2N+), 3,208 (t, 4H, J 7 Hz, 2 CH2N), (x2) und 4,097 (s, 10H, 5 COCH2N).

Tabelle 5. Herstellung tetravalenter Matrizen (17)- (25) (Beispiel 4) Tabelle 5. Herstellung tetravalenter matrizen (17)-(25) (Beispiel 4) tnonrodukt Ausgangs- Carboxylat Bedingungen DC Isolierung der Produkle Ausbeute Vetbindung % Boc-Dluent Tetraliydrochlorid Rf Eluent Rf Eluent [BocGly-NHCH2-]4C (1) 6mM 0.5 D 0.72 Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingedamp ft und 78 BocGlyNOS (17)durch Kristallisation aus Trilluorme thanol nach Zugabe (17) Von CHCl3/Ethylacelat/Me OH (9/3/1) ethalten [BocGly2-NHCH2-]4C (1) 24 Stunden 0.72 F Das Produkt (18) ist sehr wenig löslich, es wurde durch 95 rühren in DMF Filtation isoliert undnach Abspaitung der Boc-Schutzgruppen (18) bei als Tetrahydrochlorid (18a) klentifiziert. Raumtemperatur [BocGly3-NHCH2-]4C (17) 6mM 0.79 Aceton/ 0.61 Das Reaktionsgemisch wurde in Vakuum eingedampft. 77 BocGlyGlyNOS MeOH/ Säulenchromalographie: Aceton/MeOH/H2O 30:1:1 # 15:1:1 (19) H2O 15:1:1 [BocGly4-NHCH2-2]4C (18) 0.48 0.55 Das Reaktion sgemisch wurde im Vakumn eingedampft 63 E Säulench/omatographie: (20) Aceton/MeOH/H2O 30:1: # 10:1: [BocGly5-NHCH2-]4C (19) 0.36 0.33 69 (21) [BocGly7-NHCH2-]4C (21) 0.67 Das Produkt 922) ist sehr wenig löslich, es wurde durch 93 Filtration iso liert und nach Abspallung der Boc- (22) Schutzguppen als Tetrahydrochlorid (22a) identiliziert [Boc-AC-Gly5-NHCH2-]4C (21) 0.38 0.22 2N HCl Die Produkle wurden nach Chromatographie über Sephadex 71 LH-20, MeCMH2-o 1:1 und nach Abspaltung der Boc- (23) Schutzgruppen als Tetrahydrochloride (23a), (24a) und (25a) idelifiziert. [Boc-AC2-Gly5-NHCH2-]4C (23) 12mM DMSO, 70°C, 0.73 G 0.1 57 BocNH(CH2)5- 72 Stunden (24) COONp [Boc-AC3-Gly5-NHCH2-]4C (24) 0.4 40 (24) Beispiel 5.

Herstellung der geschützten Tetrasialoside Herstellung von [Ac4(OMe)Neu5Acα-OCH2(p-C6H4)NHCOCH2NH-CO(CH2)4CO- (NHCH2CO)5NHCH2]4C [Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-Ad-Glys-NHCH2-] 4C (31).

1mM der Verbindung (21) (siehe Tabelle 6) wurde in 4 ml CF3COOH aufgenommen und zwei Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 4ml Toluol versetzt, im Vakuum eingedampft und getrocknet. Der Rückstand wurde in 5ml Wasser gelöst, mit 4 ml einer 2 M HCI-Lösung versetzt und eingeengt. Das erhaltene Tetrahydrochlorid (21a) wurde im Vakuum getrocknet, in 0.5ml DMF suspendiert, mit 6 mM Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-Ad-ONp (8) und 0.5 ml NEt3 versetzt und 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingeengt und und das Produkt wurde mittels Säulenchromatographie gereinigt (s. Tabelle 6). Nach Trocknen im Vakuum wurde die Verbindung (21) als farbloses amorphes Produkt in 65% Ausbeute erhalten.

Die Verbindungen (26)- (30), (32)- (36) wurden auf analoge Weise hergestellt (siehe Tabelle 6).

[Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-Ad-NHCH2-l4C (26).'H-NMR Spektrum in D6-DMSO (T, ppm) : Matrix : 1.534 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2.171 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2.891 (verb., 2H, CCH2), 3.867 (d, 2H, ArNHCOCH2), 7.674 (verb. t, 1H, CCH2NH), 8.107 (t, 1H, J 6 Hz, NHCOCH2CH2), 9.964 (s, 1H, ArNH) ; Neu5Aca2- OCH2C6H4-Fragment : 024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH3), 1.761 (dd, 1 H, J4 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J3ax 12.5 Hz, J4 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH3), 3.904 (ddd, 1H, J4 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J8 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J5 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1H, J9b 12.5 Hz, Je 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, Art), 4.711 (ddd, 1 H, H-4), 5.192 (dd, 1 H, J8 8.4 Hz, J6 2. 4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1 H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8. 6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J5 9.6 Hz, NH).

[Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-Ad-Gly-NHCH2-] 4C (27).'H-NMR Spektrum in D6-DMSO (d, ppm) : Matrix : 1.509 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2.147 und 2.231 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2.674 (verb., 2H, CCH2), 3.647 (m, 2H, Gly), 3.859 (d, 2H, ArNHCOCH2), 7.852 (verb. t, 1 H, CCH2NH), 8.100 (t, 1 H, J 6 Hz, NHCOCH2CH2), 8.453 (t, 1 H, J 6 Hz, NHGly), 9.962 (s, 1 H, ArNH). Neu5Aca2-OCH2C6H4-Fragment : 975, 2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH3), 1.761 (dd, 1 H, J412.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J3ax 12.5 Hz, J4 4. 6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH3), 3.904 (ddd, 1 H, J4 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J8 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J5 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1 H, J9b 12.5 Hz, J, 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH2), 4.711 (ddd, 1H, H-4), 5.192 (dd, 1H, J8 8.4 Hz, J6 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J5 9.6 Hz, NH).

[Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-Ad-Gly2-NHCH2-] 4C (28).'H-NMR Spektrum in D6-DMSO (b, ppm) : Matrix : 1.495 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2.150 (m, 4H, 2 COCH CH2), 2.694 (verb., 2H, CCH2), 3.716 (d, 2H, CH2GIY2), 3.818 (d, 2H, CH2Gly1), 3.865 (d, 2H, ArNHCOCH), 7.824 (verb. t, 1 H, CCH2NH), 7.993 (t, 1H, J 6 Hz, NHGly2), 8.096 (t, 1H, J 6 Hz, NHCOCH2CH2), 8.544 (t, 1H, J 6 Hz, NHGly1), 9.975 (s, 1H, ArNH).

Neu5Aca2-OCH2C6H4-Fragment : 1.677,1.918,1.975,2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH3), 1.761 (dd, 1 H, J4 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J3ax 12. 5 Hz, J4 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH3), 3.904 (ddd, 1H, J4 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1 H, JB 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J5 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1 H, Jgb 12. 5Hz, J8 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH2), 4.711 (ddd, 1 H, H-4), 5.192 (dd, 1 H, J8 8.4 Hz, J6 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1 H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 9.6Hz,NH).1H,J5 [Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-Ad-Gly3-NHCH2]4C (29). 1H-NMR Spektrum in D6-DMSO (5, ppm) : Matrix : 1.498 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2.143 und 2.158 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2.693 (verb., 2H, CCH2), 3.728 (m, 4H, 2 CH'). 3. 841 (d, 2H, CH2Gly1), 3.862 (d, 2H, ArNHCOCH2), 7.820 (verb. t, 1H, CCH2NH), 8.049 und 8.059 (t, 2H, J 5.7 Hz, NH),8.098 (t, 1H, J 5.8 Hz, NHCOCH2CH2), 8.547 (t, 1H, J 5.5 Hz, NHGly1), 9.972 (s, 1H, ArNH), Neu5Acα2-OCH2C6H4-Fragment : 1.677,1.918,1.975,2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH3), 1.761 (dd, 1 H, J4 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1 H, J3ax 12.5 Hz, J4 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH3), 3.904 (ddd, 1 H, J4 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J8 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J5 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1H, J9b 12.5 Hz, J, 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH2), 4.711 (ddd, 1 H, H-4), 5.192 (dd, 1 H, J8 8.4 Hz, J6 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1 H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J6 9.6 Hz, NH).

[Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-Ad-Gly4-NHCH2]4C (30). 1H-NMR Spektrum in D6-DMSO (d, ppm), Matrix : 1.500 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2.151 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2.688 (verb., 2H, CCH2), 3.720 (x2) und 3.753 (d, 6H, 3 CHGly2-4), 3.841 (d, 2H, CH2Gly1), 3.864 (d, 2H, ArNHCOCH2), 7.818 (verb. t, 1H, CCH2NH), 8.045 und 8.084 (x2) (t, 3H, J 6 Hz, NHGly2-4), 8.102 (t, 1H, J 6 Hz, NHCOCH2CH2), 8.555 (t, 1H, J 5.5 Hz, NHGly1), 9.980 (s, 1H, ArNH). Neu5Aca2-OCH2C6H4-Fragment : 1.677,1.918,1.975,2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH3), 1.761 (dd, 1 H, J4 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J3ax 12. 5 Hz, J4 4. 6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH3), 3.904 (ddd, 1H, J4 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J8 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J5 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1H, Jgb 12. 5 Hz, Je 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, Art), 4.711 (ddd, 1H, H-4), 5.192 (dd, 1H, J8 8.4 Hz, J6 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J5 9.6 Hz, NH).

[Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-Ad-Glys-NHCHJ4C (31).'H-NMR Spektrum in D6-DMSO (b, ppm) : Matrix : 1.502 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2.147 und 2.159 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2.688 (verb., 2H, CCH2), 3.738 (x2) und 3.765 (x2) (m, 8H, 4 CH2Gly2-5), 3.857 (d, 2H, CH2Gly1), 3.877 (d, 2H, ArNHCOCH2), 7.818 (verb. t, 1H, CCH2NH), 8.074 (m, 5H, NHCOCH2CH2, NHGly2-5), 8. 551 (t, 1H, J 6 Hz, NHGly1), 9.968 (s, 1H, ArNH). Neu5Aca2-OCH2C6H4-Fragment : (s, 15H, 5 COCH3), 1.761 (dd, 1 H, J412.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J3ax 12.5 Hz, J4 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH3), 3.904 (ddd, 1 H, J4 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1 H, J8 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1 H, J5 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1 H, J9b 12. 5 Hz, J8 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH2), 4.711 (ddd, 1 H, H-4), 5.192 (dd, 1H, J8 8.4 Hz, J6 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1 H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, Hz,NH).9.6 [Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-Ad-AC2-Gly5-NHCH2]4C (32.) 1H-NMR Spektrum in D6-DMSO (o, ppm), Matrix : 1. 224,1.366 und 1.469 (m, 12H, 6 CH2), 1.502 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2.032 und 2.121 (m, 2 COCH2), ), 2.147 und 2.159 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2.688 (verb., 2H, CCH2), 3.00 (m, 4H, 2 CH2NHCO), 3.738 (x2) und 3.765 (x2) (m, 8H, 4 CH2Gly2-5), 3.857 (d, 2H, CH2Gly1), 3.877 (d, 2H, ArNHCOCH2), 7.679 und 7.700 (verb. t, 2H, 2 NHCO), 7.818 (verb. t, 1 H, CCH2NH), 8.074 (m, 5H, NHCOCH2CH2, NHGLy2-5), 8.551 (t, 1H, J 6 Hz, NHGly1), 9.968 (s, 1H, ArNH), Neu5Acα2-OCH2C6H4-Frament : 1.677,1.918,1.975,2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH3), 1.761 (dd, 1 H, J4 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J3ax 12.5 Hz, J4 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH3), 3.904 (ddd, 1 H, J4 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1 H, J, 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1 H, J, 10. 7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1 H, J9b 12. 5 Hz, J8 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, Art), 4.711 (ddd, 1H, H-4), 5.192 (dd, 1H, J8 8. 4 Hz, J6 2. 4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1 H, J5 9.6 Hz, NH).

[Ac4 (OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-AC3-Gly5-NHCH2]4C (33). 1H-NMR Spektrum in D6-DMSO (b, ppm) ist dem Spektrum der Verbindung (32) sehr ähnlich (die Signale sind zum Teil stärker verbreitert und die Integrale der Amidocapronsäure-Gruppen sind entsprechend größer).

[Ac4(OMe)Neu5Ac-Gab-AC-Ad-Gly5-NHCH2]4 (34). 1H-nmr Spektrum in D6-DMSO (b, ppm) : Matrix : 1.250,1.382,1.465 und 1.506 (m, 10H, 5 CH2), 2.033 und 2.140 (m, 6H, 3 COCH2), 2.697 (verb., 2H, CCH2), 3.009 (m-q, 2H, J 6.4 Hz, CH2NHCO), 3.719 (x2) und 3.748 (x2) (m, 8H, 4 CH2Gly2-5), 3.843 (d, 2H, CH2Gly1), 3.862 (d, 2H, ArNHCOCH2), 4.327 und 4.648 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH2), 7.216 und 7.555 (d, 2H, J 8 Hz, Ar), 7.698 (t, 1H, NHCO), 7.818 (verb. t, 1 H, CCH2NH), 8.039,8.072,8.084 (x2), 8.110 (m, 5H, NHCOCH2CH2, NHmY2-5), 8.547 (t, 1H, NHGly1), 9.970 (s, 1H, ArNH). Neu5Acα2-OCH2C6H4-Fragment : 024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH3), 1.761 (dd, 1H, J4 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1 H, J3.12.5 Hz, J4 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH3), 3.904 (ddd, 1 H, J4 10. 3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J8 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1 H, J5 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1H, Jgb 12.5 Hz, Je 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH2), 4.711 (ddd, 1H, H-4), 5.192 (dd, 1H, J8 8.4 Hz, J6 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J5 9.6 Hz, NH).

[Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-AC2-Ad-GlyS-NHCH2j4C (35).'H-NMR Spektrum in D6-DMSO (5, ppm) : Matrix : 1.239,1.375,1.465 und 1.509 (m, CH2), 2.026 und 2.142 (m, COCH2), 2. 711 (verb., 2H, CCH2), 3.003 (m, 4H, 2 CH NHCO), 3.718 (x2) und 3.746 (x2) (m, 8H, 4 CH2Gly2-5), 3.839 (d, 2H, CH2Gly1), 3.861 (d, 2H, ArNHCOCH), 4.329 und 4.649 (d, 2H, J 11.8 Hz, Art), 7.218 und 7.561 (d, 2H, J 8 Hz, Ar), 7.681 und 7.695 (m, 2H, 2 NHCO), 7.834 (verb. t, 1H, CCH2NH), 133 (x3), 8.177 (m, 5H, NHCOCH2CH2, NHmY2-5), 8. 587 (t, 1H, NHGly1), 10.01 (s, 1H, ArNH). Neu5Acα2-OCH2C6H4-Fragment : 1.677,1.918, 1.975,2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH3), 1.761 (dd, 1 H, J4 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J3ax 12.5 Hz, J4 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH3), 3.904 (ddd, 1H, J4 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J8 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J5 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1H, Jgb 12.5 Hz, Je 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH2), 4.711 (ddd, 1H, H-4), 5.192 (dd, 1H, J8 8.4 Hz J6 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J5 9.6 Hz, NH).

[Ac4 (OMe) Neu5Ac-Gab-AC,-Ad-Glys-NHCHJ4C (36). Das'H-NMR Spektrum in D6-DMSO entspricht weitesgehend dem Spektrum der Verbindung (35), die Signale sind zum Teil stärker verbreitert. Matrix (5, ppm) : 1.239,1.375,1.465 und 1.509 (m, CH2), 2.026 und 2.142 (m, COCH2), 2.629 (verb., 2H, CCH2), 3.00 (m, 6H, 3 CH2NHCO), 3.813 (verb., 2H, CH2Gly1), 3.861 (d, 2H, ArNHCOCH2), 4.329 und 4.649 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH2), 7.218 und 7.561 (d, 2H, J 8 Hz, Ar), 7.693 (m, 3H, 3 NHCO), 7.904 (verb., 1H, CCH2NH0, 8.083 (x2), 8.158 und 8.215 (x2) (m, 5H, NHCOCH2CH2, NHGIY2-s) 8.538 (t, 1H, NHGly1). Neu5Acα2-OCH@C^H$-FRAGMENT : 1.677,1.918,1.975,2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH3), 1.761 (dd, 1 H, J412.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1 H, J3ax 12.5 Hz, J4 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH3), 3.904 (ddd, 1 H, J4 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J8 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J5 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1H, Jgb 12. 5 Hz, J8 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH2), 4.711 (ddd, 1H, H-4), 5.192 (dd, 1 H, J, 8.4 Hz, J6 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1 H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J5 9. 6 Hz, NH).

Tabelle 6. Herstellung der geschützten Tetrasialoside (26)- (36) (Beispie ! 5) Tabelle 6. Her#tellung der geschützten Tetrasialoside (26)-(36) (Beispiel 5) Endpfodukte Matrix Glycosid Bedingungen D@ Methylesterperacetat Rf Elunet [Ac4(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-NHCH2-]4C (1) 0.21 C Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingedampft; (26) LC: CHCl3/MeOH 10:1 [Ac4(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-Gly-NHCH2-]4C (17) 6 mM DMF, 24 Stunden 0.51 E Reaktionsgemisch wurde im Vakuum Rugrung ein gedampft; (27) LC: /-PrOH/EtOAc/H2O 2:5:1 [Ac4(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-Gly2-NHCH2-]4C (18) (8) unter 0.25 E Reaklionsgemisch wurde im Vakuum Raumtemperatur einge dampft; (28) LC: Acton/MeOH/H2O 20:1:1#5:1:1 [Ac4(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-Gly3-NHCH2-]4C (19) 0.23 E Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingedampft; (29) LC: Aceton/MeOH/H2O 30:1:1#10:1:1 [Ac4(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-Gly4-NHCH2-]4C (20) 0.40 G Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingedampft; (30) LC: Acton/MeOH/H2O 15:1:1#5:1:1 [Ac4(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-Gly5-NHCH2-]4C (21) 0.18 G Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingedampft; (31) LC: Acton/MeOH/H2O 20:1:1#5:1:1 [Ac4(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-AC2-Gly5-NHCH2-]4C (24) 12 mM 0.15 G Sephadex LH-20, MeCN/H2o 1:1 (32) [Ac4(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-AC3-Gly5-NHCH2-]4C (25) (8) 0.45 H (33) [Ac4(OMe)Neu5Ac-Gab-AC-Ad-Gly5-NHCH2-]4C (21) 2 mM DMSO, 70°C, 0.16 G Reaktionsgemisch wurde lyophilisiert; 72 Stunden $LC: Etuent G, dann (34) (9) /-PrOH/MeOH/EtOAc/H2O 4:3:3:3 [Ac4(OMe)Neu5Ac-Gab-AC2-Ad-gly5-NHCH2-]4C (21) 12 mM 0.11 G Reaktionsgemisch wurde lyophilisiert; (35) (10) LC: Etuent G, dann H [Ac4(OMe)Neu5Ac-Gab-AC3-Ad-Gly5-NHCH2-]4C (21) 12 mM 0.84 H (36) (11) Beispiel 6.

Herstellung der freien Tetrasialoside <BR> <BR> [Neu5Acα-OCH2(p-C6H4)NHCOCH2NH-CO(CH2)4CH-(NH(CH2)5CO)3-Her stellungvon Salz(NHCH2CO)5-NHCH2-]4C(Ammonium Neu5Ac-Gab-Ad-AC3-G Iy5-NHCH2] 4C (44).

Zu einer Lösung von 10 uM des geschützten Tetrasialosids (33) in 3mi absoluten MeOH wurden 8- µ l 2N NaOH Lösung zugegeben, nach 3 Stunden wurden nochmals 1,5 ml Wasser und 80 pl 2N NaOH Lösung zugegeben. Das Gemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt, mit 80 Nl AcOH versetzt und zur Trockne eingedampft. Das Produkt wurde mittels Gelchromatographie über Sephadex G-10 mit einer 0,05 M wässrigen NH40H-Lösung erhalten.

(siehe Tabelle 7).

Die Verbindungen (37)- (43), (45)- (47) wurden in analoger Weise erhalten (siehe Tabelle 7).

Tabelle 7 (Beispiel 6) Tetrasialoside Ausgans-DC, Eluent Ausbeute verbindung H, %% (26)0.8776[Neu5Ac-Gab-Ad-NHCH2-]4C(37) [Neu5Ac-Gab-Ad-Gly-NHCH2-]4C (38) (27) 0,82 81 [Neu5Ac-Gab-Ad-Gly2-NHCH2-]4C (39) (28) 0,81 Keine 91 [Neu5Ac-Gab-Ad-Gly3-NHCH2-]4C (40) (29) 0,77 Selbst-90 assoziaticn (30)0.7583[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly4-NHCH2-]4C(41) [NeuSAc-Gab-Ad-Glys-NHCH24C (42) (31) 0,71 83 Monomer und [Neu5Ac-Gab-Ad-AC2-Gly5-NHCH2-]4C (43) (32) Aggregat 6 87 werden getrennt eluiert; (33)Monomer:5490[Neu5Ac-Gab-Ad-AC3-Gly5-NHCH2-]4C(44) 0.6Rf= [Neu5Ac-Gab-AC-Ad-Gly5-NHCH2-]4C (45) (34) Aggregat : 12 93 0Rf# (35)9286[Neu5Ac-Gab-AC2-Ad-Gly5-NHCH2-]4C(460 [Neu5Ac-Gab-AC3-Ad-Gly5-NHCH2-]4C (47) (36) go gg * Bestimmt mittels Gelpermeations-Chromatographie [Neu5Ac-Gab-Ad-NHCH2-]4C (37). 1H-NMR Spektrum in D20 (5, ppm) : Matrix : 1,633 (m, 4H, COCH2CH2), 2,293 und 2,358 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2,943 (s, 2H, CCH2); 4,003 (s, 2H, ArNHCOCH2).

4,493 und 4,718 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH2), 7,388 (m, 4H, Ar). Neu5Aca-Fragment : 1,680 (dd, 1H, J4 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J3ax 12,5 Hz, J4 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1 H, J, 9 Hz, H- 7), 3,636 (dd, 1H, J8 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1 H, J5 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1 H, J7 1,5 Hz, JS 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1 H, H-8), 3,822 (dd, 1 H, H-5), 3,846, (dd, 1 H, Jgb 12 Hz, Je 2,3 Hz, H-9a).

[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly-NHCH2-]4C (38). 1H-NMR Spektrum in D20 (6, ppm) : Matrix : 1,622 (m, 4H, COCH2CH2), 2,340 und 2,382 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2,810 (s, 2H, CCH2), 3,847 (s, 2H, CH2Gly), 4,016 (s, 2H, ArNHCOCH). 4,492 und 4,707 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH2), 7,402 (m, 4H, Ar). Neu5Aca-Fragment : 1,680 (dd, 1 H, J, 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J3ax 12, 5 Hz, J4 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1H, J8 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1 H, J8 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H, J5 9, 8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J7 1,5 Hz, JS 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, Jgb 12 Hz, Je 2,3 Hz, H-9a).

[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly2-NHCH2-]4C (39). 1H-NMR Spektrum in D2O (#, ppm) : Matrix : 1,626 (m, 4H, COCH2CH2), 2,341 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2,831 (s, 2H, CCH2), 3,894 und 3,991 (s, 4H, 2 CH2Gly1.2), 4,022 (s, 2H, ArNHCOCH2). 4, 492 und 4,719 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH2), 7,402 (m, 4H, Ar). Neu5Aca- Fragment : 1,680 (dd, 1 H, J4 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J3ax 12,5 Hz, J4 4,6 Hz, H- 3eq), 3,598 (dd, 1h, Ja 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1 H, Je 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H, J5 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J7 1,5Hz J5 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1 H, J9b 12 Hz, J8 2,3 Hz, H-9a).

[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly3-NHCH2-l4C (40).'H-NMR Spektrum in D2O (b, ppm) : Matrix : 1,631 (m, 4H, COCH2CH2), 2,344 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2,857 (s, 2H, CCH2), 3,912,3,931 und 4,024 (s, 6H, 3 CHGly1- 3), 4,029 (s, 2H, ArNHCOCH2). 4,500 und 4,725 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH2), 7,408 (m, 4H, Ar). Neu5Aca- Fragment : 1,680 (dd, 1 H, J4 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J3ax 12,5 Hz, J4 4,6 Hz, H- 3eq), 3,598 (dd, 1 H, Je 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1 H, J8 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1 H, J5 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H,J7 1,5 Hz, J510,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, Jgb 12 Hz, J8 2,3 Hz, H-9a).

[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly4-NHCH2-l4C (41).'H-NMR Spektrum in D2O (b, ppm) : Matrix : 1,636 (m, 4H, COCH2CH2), 2,350 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2,864 (s, 2H, CCH2), 3,912,3,934,3,968 und 4,025 (s, 8H, 4 CH2Gly1-4), 4,032 (s, 2H, ArNHCOCH2). 4,497 und 4,725 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH2), 7,408 (m, 4H, Ar).

Neu5Aca-Fragment : 1,680 (dd, 1 H, J412 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J3ax 12,5 Hz, J4 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1 H, Je 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1 H, Je 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1 H, J5 9,8 Hz, H- 4), 3,728 (dd, 1H, J7 1,5 Hz, J5 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, Hz,J82,3Hz,H-9a).J9b12 [Neu5Ac-Gab-Ad-Gly5-NHCH2-]4C (42). 1H-NMR Spektrum in D2O (5, ppm) : Matrix : 1,638 (m, 4H, COCH2CH), 2,355 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2, 878 (s, 2H, CCH2), 3,921,3,933,3,974 (x2) und 4,032 (s, 10H, 5 CH2Gly1-5), 4,036 (s, 2H, ArNHCOCH). 4,502 und 4,724 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH2), 7,410 (m, 4H, Ar). Neu5Aca-Fragment : 1,680 (dd, 1H, J4 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J3ax 12,5 Hz, J4 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1 H, Js 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1 H, Js 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1 H, J5 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J7 1,5 Hz, JS 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, Jgb 12 Hz, J8 2,3 Hz, H-9a).

[Neu5Ac-Gab-Ad-AC2-Gly5-NHCH2-]4C (43). 1H-NMR Spektrum in D2O (b, ppm) : Matrix : 476 und 1,567 (m, 12H, 6 CH2), 1,623 (m, 4H, COCH2CH2CH2CH2CO), 2, 179 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH2CO), 2,245 und 2,367 (m, 4H, COCH CH2CH2CH2CO), 2,299 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH2CO), 2,882 (s, 2H, CCH2), 3,133 (m, 4H, 2 CH2N), 3,928,3,940,3,987 (x2) und 4,043 (x2) (s, 12H, 6 COCH2N), 4,502 und 4,730 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH2), 7,418 (m, 4H, Ar). Neu5Aca-Fragment : 1,680 (dd, 1H, J412 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J3ax 12,5 Hz, J4 4, 6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1 H, J8 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1H, J6 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1 H, J, 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1 H, J, 1,5 Hz, J5 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1 H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1 H, Jgb 12 Hz, Jg 2,3 Hz, H-9a).

Aggregat [Neu5Ac-Gab-Ad-AC3-Gly5-NHCH2-]4C (44). 1H-NMR Spektrum in D2O ist dem Spektrum der Verbindung (43) sehr ähnlich, Matrix (#, ppm) : 1,283,1,476,1,570 (m, 18H, 9 CH2), 2,178 und 2,189 (t, 2x2H, J 7,4 Hz, 2 CH2CO), 2,301 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH2CO), 3,135 (m, 6H, 3 CH2N), 3,987 (x2) und 4,043 (x2) (s, 12H, 6 COCH2N). 4,502 und 4,730 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH2), 7,418 (m, 4H, Ar).

Neu5Aca-Fragment : 1,680 (dd, 1 H, J4 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1 H, J3ax 12, 5 Hz, J4 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1 H, J8 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1 H, J8 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1 H, J5 9,8 Hz, H- 4), 3,728 (dd, 1H, J7 1,5 Hz, J5 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, Jgb 12 Hz, J8 2, 3 Hz, H-9a).

[Neu5Ac-Gab-AC-Ad-Glys-NHCHZ], C (45).'H-NMR Spektrum in D20 (b, ppm) : Matrix : 1,334 (m, 2H, CH2), 1,504 (m, 2H, CH2CH2NH), 1,569 (m, 4H, COCH2CH2CH2CH2CO), 1,625 (m, 2H, CH2CH2CO), 2,207 und 2,313 (m, 4H, COCH2CH2CH2CH2CO), 2,344 (t, 2H, J 7 Hz, CH2CO), 2,885 (s, 2H, CCH2), 3,156 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH2N), 3,984,4,037 und 4,042 (s, 12H, 6 COCH2N), 4,506 und 4,729 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH2), 7,420 (m, 4H, Ar). Neu5Aca-Fragment : 1,680 (dd, 1 H, J4 12 Hz, H- 3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J3ax 12, 5 Hz, J4 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1 H, J8 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1 H, J, 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1 H, J5 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1 H, J7 1,5 Hz, JS 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, Jgb 12 Hz, J, 2,3 Hz, H-9a).

Aggregat [Neu5Ac-Gab-AC2-Ad-Gly5-NHCH2-]4C (46). 1H-NMR Spektrum in D2O (b, ppm) : Matrix : 1,268,1,504 und 1,630 (m, 12H, 6 CH2), 1,572 (m, 4H, COCH2CHCH2CH2CO), 2,185 (t, 2H, J 7 Hz, CH2CO), 2,212 und 2,315 (m, 4H, COCH2CH2CH2CH2CO), 2,349 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH2CO), 2,898 (s, 2H, CCH2), 3,130 und 3,158 (t, 2x2H, J 7,4 Hz, 2 CH2N), 3,934,3,945,3,987 (x2), 4,039 und 4,045 (s, 12H, 6 COCH2N), 4,509 und 4,725 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH2), 7,422 (m, 4H, Ar). Neu5Aca-Fragment : 1,680 (dd, 1 H, J4 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J3ax 12,5 Hz, J4 4, 6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1H, J8 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1H, J8 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H. J59. 8Hz. H-4), 3,728 (dd, 1H, J7 1, 5 Hz, J5 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, Jgb 12 Hz, Je 2,3 Hz, H-9a).

Aggregat [Neu5Ac-Gab-AC3-Ad-Gly5-NHCH2-]4C (47). Das 1H-NMR Spektrum in D20 ist dem Spektrum der Verbindung (46) sehr ähnlich, die Signale sind zum Teil stärker verbreitert.

Matrix (b, ppm) : 1,276,1,461 und 1,630 (m, 18H, 9 CH2), 2,186 (t, 2x2H, J 7 Hz, 2 CH2CO), 2,349 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH2CO), 3,132 (m, 6H, 3 CH2N), 3,934,3,945,3,987 (x2), 4,039 und 4,045 (s, 12H, 6 COCH2N), 4,509 und 4,725 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH2), 7,422 (m, 4H, Ar).

Neu5Aca-Fragment : 1,680 (dd, 1 H, J4 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J3ax 12, 5 Hz, J4 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1 H, J, 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1 H, J8 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H. Js9. 8Hz, H- 4), 3,728 (dd, 1H, J7 1,5 Hz, J5 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, Jgb 12 Hz, J8 2,3 Hz, H-9a.

Beispiel 7.

Herstellung des Aggregats {[Ne5aCα-OCH2(p-C6H4)NHCOCH2NH-CO(CH2)4CO- (NHCH2CO)7-NHCH2-]4C}x(Ammonium-Salz) {[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly7-NHCH2-]4C}x(48).

6,1 mg, (3, 25µM) des Tetrahydrochlorids (22a), hergestellt wie im Beispiel 4 beschrieben, wurden in 0,5 ml Wasser mit 18,8 mg (26 uM) der lyophilisierten Verbindung (15) versetzt. Der pH des Reaktionsgemisches wurde mit 1M NaHCO3- Lösung auf pH=8 gestellt. Die Reaktionslösung wurde 3 Tage bei Raumtemperatur gerührt, wobei der pH durch Zugabe von 1M NaHCO3-Lösung auf pH=8 gehalten wurde. Das Reaktionsgemisch wurde über eine Sephadex LH-20 Saute mit einer 0,05 M wässrigen NH4OH-Lösung getrennt. Nach Einengen und Trocknen im Vakuum wurden 9,6mg des Produkts (48) erhalten, entsprechend einer Ausbeute von 71 %.

'H-NMR Spektrum (D20, b, ppm) : Matrix : 1,638 (m, 4H, COCH2CH2), 2,358 (m, 4H, 2 COCH2CH2), 2,878 (s, 2H, CCH2), 3,918,3,938,3,978 (x4) und 4,034 (s, 14H, 7 CH2Gly1-7), 4,037 (s, 2H, ArNHCOCH). 4,498 und 4,718 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH2), 7,408 (m, 4H, Ar). Neu5Aca-Fragment : 1,680 (dd, 1H, J4 12 Hz, H- 3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J3ax 12,5 Hz, J4 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1H, J8 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1 H, J, 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1 H, J5 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J7 1,5 Hz, J5 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, J9b 12 Hz, J, 2,3 Hz, H-9a).

Beispiel 8.

Herstellung von Aggregaten Herstellung von {Galα1-3Galß1-O(CH2)3NH0CO(CH2)4CO-(NH(CH2)5CO)3- (NHCH2CO)5-NHCH2-]4C}x {[Ndi-Ap-Ad-AC3-Gly5-NHCH2-4]C}x(49).

Zu einer Suspension von 5,6mg (2uM) des Tetrahydrochlorids (25a), hergestellt wie im Beispiel 4 beschrieben, in 0,5ml DMSO wurden 15,6mg (16) und 5 µl Et3N zugegeben.

Die Reaktionslösung wurde 3 Tage bei 40°C gerührt. Nach Zugabe von 0,2ml konz.

NH4OH-Lösung wurde das Reaktionsgemisch 30 Minuten gerührt und über eine Sephadex LH-20 Säule mit MeCN/H20 1 : 1 getrennt. Nach Einengen und Trocknen im Vakuum wurden 6.4mg des Produkts (49) erhalten, entsprechend einer Ausbeute von 69%.

'H-NMR Spektrum (D2O/CD3OD 2 :1, #, ppm) : 1,374,1,562 und 1,645 (m, CH2), 1,883 (m, 2H, OCH2CH CH2N), 2,265 (t, 4H, J 7.5 Hz, 2 CH2CO), 2,292 (m, 4H, 2 CH2CO), 2,377 (t, 2H, J 7.5 Hz, CH2CO), 2,955 (verb. s, CCH2), 3,213 (t, 6H, 3 CH2N), 3,348 (m, 2H, OCH2CH2CH2N), 3,697 (dd, 1H, H-2 Gals), 3,756 (m, OCHCH2CH2N), 3,910 (dd, 1H, J3 10 Hz, H-2 Gala), 046 und 4,097 (s, 10H, 5 COCH2N), 4,205 (d, 1 H, J3 3 Hz, H-4 Gals), 4,255 (m, 1 H, H-5 Gala), 4,462 (d, 1 H, J2 8 Hz, H-1 Gal (3), 5,184 (d, 1H, J2 4 Hz, H-1 Gala).

Herstellung von {[Neu5Acα2-3Galß1-4Glcß1-NHCOCH2NH-CO(CH2)4CO-(NHCH2CO)5- NHCH2-]4C}x {[3'SL-NHCOCH2NH-Ad-Gly5-NHCH2-]4C}x(50) wurde ausgehend von (21a) und (14) analog zur Verbindung (49) hergestellt.

DC : Rf 0.52 (Methanol/Acetonitril/Wasser 6 : 6 : 3). Ausbeute 65%.

'H-NMR Spektrum (D2O, 6, ppm) : 1,622 (m, 4H, CH2CH2CH2CO), 1,797 (dd, 1H, J4 12 Hz, H-3ax Neu5Ac), 2,017 (s, 3H, COCH3), 2,342 (m, 4H, 2 CH2CO), 2,744 (dd, 1H, J3ax 12.5 Hz, J4 4.6 Hz, H-3eq Neu5Ac), 2,895 (verb. s, CCH2), 3,452 (dd, 1H, H-2 GLCß), 3,568 (dd, 1 H, J3 10 Hz, H-2 Gals), 3,954, 3,992 und 4,041 (s, 12H, 6 COCH2N), 4, 105 (dd, 1H,J2 10 Hz, J4 3 Hz, H-3 Galß), 4,523 (d, 1 H, J2 8 Hz, H-1 Galß), 5,005 (d, 1H, J2 9 Hz, H-1 Glcß).

Herstellung von {[Neu5Acα2-3Galß1-4Glcß1-NHCOCH2NH-CO(CH2)4CO-(NHCH2CO)7- NHCH2} x {[3'SL-NHCOCH2NH-Ad=GLy7-NHCH2-]4C}x(51) wurde ausgehend von (22a) und (14) analog zur Verbindung (48) hergestellt.

Ausbeute 78%.

'H-NMR Spektrum (D20,6, ppm) : 1,622 (m, 4H, CH2CH2CH2CO), 1,797 (dd, 1H, J4 12 Hz, H-3ax Neu5Ac), 2,017 (s, 3H, COCH3), 2,342 (m, 4H, 2 CH2CO), 2,744 (dd, 1 H, J3a, 12.5 Hz, J4 4.6 Hz, H-3, q Neu5Ac), 2,895 (verb. s, CCH2), 3,452 (dd, 1H, H-2 Glcß), 3,568 (dd, 1 H, J3 10 Hz, H-2 Galß), 3,954, 3,992 und 4,041 (s, 16H, 8 COCH2N), 4,105 (dd, 1H, J2 10 Hz, J4 3 Hz, H-3 Gals), 4,523 (d, 1H, J2 8 Hz, H-1 Galß), 5,005 (d, 1H, J2 9 Hz, H-1 Glu).

Beispiel 9 Induktion der Selbstassoziation von [HCI-H-Gly7-NHCH2] 4C (22a).

Die Untersuchung der Lichtstreuung einer 50 mM Lösung der Verbindung (22a) in Wasser wurde mit einem Spectra-Physics 164 Argon Laser (Plasma Linien A=528.7 and 611.5 nm) durchgeführt, die Streuung wurde in einem Winkel von 90° zum eintretenden Lichtstrahl gemessen. Die hierbei bestimmte Teilchengrösse betrug <2.5 nm. Zu dieser Lösung wurden 50, ul einer 0.8 M NaHCO3-Lösung zugegeben. Die Lichtstreuung wurde, wie oben beschrieben, vermessen, die hierbei bestimmte durchschnittliche Teilchengrösse betrug 200-400 nm.

Zu dieser Lösung wurden 50, kil einer 0.8 M HCI zugegeben, und die Probe mittels Lichtstreuung, wie oben beschrieben, untersucht. Die hierbei bestimmte Teilchengrösse betrug < 2.5 nm.

Beispiel 10 Inhibition der viralen Zell-Adhäsion von Influenza-Viren Die spezifischen Bindungskonstanten der Inhibitor-Virus-Komplexe wurden mitteis eines Fetuin-Binding-Assay, wie in der Literatur beschrieben, bestimmt (US Patent 5,571,836,1996 ; PCT WO 98/14215).

Tabelle 8, Beispiel 10 Influenza virus A/NIB/44/90M H3N2 Inhibitor Verbindung Nr. Kd, fjM Neu5Aca-OBn100 [Neu5Ac-Gab-Ad-Glyn-NHCH2-] 4C (n=0-5) (38)- (42)-50 Neu5Ac-Gab-Ad-gly7-NHCH2-]4c (48) 0.1 [Neu5Ac-Ap-Ad-Glyn-NHCH2-] 4C (n=0-3) 200 [Neu5Ac-Gab-AC-Ad-Glys-NHCH2) 4C (45) 7 _ ç (46) 0.3 [Neu5Ac-Gab-AC3-Ad-Glys-NHCH2-] 4C (47) 0.1 [Neu5Ac-Gab-Ad-AC2-Glys-NHCH2-] 4C (43) 0.1 [Neu5Ac-Gab-Ad-AC3-Glys-N HC H2-] 4C (44) 0. 04 Influenza virus A/Duck/Alberta/60/67 H12N5 3'SL 20 [3'SL-NHCOCH2NH-Ad-Glys-NHCH2-] QC (50) 1 0.13'SL-NHCOCH2NH-Ad-Gly7-NHCH2-]4c(51) Beispiel 11 Inhibition der Complement-abhängigen Zytotoxizität von menschlichen Blutseren gegenüber PK 15 Zellen durch das Aggregat {[Bdi-Ap-Ad-AC3-Gly5-NHCH2-]4C}x (49) Verdünnungsserien des B-Disaccharides Gala1-3Gal und des Aggregats {[Bd,-Ap-Ad- AC3-Gly5-NHCH2-]4C}x (49) mit menschlichem Blutserum wurden über Nacht bei 4°C inkubiert, und die Inhibition der Zytotoxizität wurde, wie in der Literatur beschrieben, nachgewiesen (R. Rieben, E. von Allmen, E. Y. Korchagina, U. E. Nydegger, F. A. Neethling, M. Kujundzic, E. Koren, N. V. Bovin, D. K. C. Cooper, Xenotransplantation, 2,98,1995). Nach Zugabe der Complement-Bestandteile in Form von 10% Kaninchen-Serum (Sigma) wurden die Proben 10 Minuten lang mit auf Terasaki- Platten gezogenen PK15-Zellen inkubiert. Anschliessend wurden die Zellen gewaschen und mit einem Zytotoxizitätskit ("live/dead"viability/cytotoxicity kit, Molecular Probes, Eugene, OR, USA) angefärbt. Durch Messung der Fluoreszenz- ! ntensitäten wurden die lebend/tod-Anteile bestimmt. Die Inhibition der Zytotoxizität wurde im Vergleich zu einer Serum-Probe, der keine Inhibitoren zugesetzt waren, berechnet. Bei folgenden Konzentrationen (berechnet als molare Konzentration der B-Disaccharid-Einheiten) wurde eine Inhibition der Zytotoxizität um 50% erreicht : 200µMGalα1-3Gal(B-Disaccharide) {[Bdi-Ap-Ad-AC3-Gly5-NHCH2-]4C}x Aggregat (49) 0.5 uM Beispiel 12 Die divalenten Matrizen der Formel [HCI-H-Glyr,-NHCH2CH2-12 (n = 2,4) wurden ausgehend von 1,4-Diaminobutan analog der Synthese in Beispiel 4 hergestellt.

Herstellung von 1.4-(hexaglycilamido)-butan[HCl#H-Gly6-NHCH2CH2-]2(52).- Zu einer Lösung von 30 mg der Verbindung [HCI-H-GIy4-NHCH2CH2-] 2 (48.6 uM) in 0.5 ml DMSO wurden 48 mg BocGiyGlyNOS (146 uM) und 0.1 ml Et3N zugegeben.

Das Reaktionsgemisch wurde 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, wobei sich ein Niederschlag bildete. Nach Zugabe von 1 ml Wasser wurde der Niederschlag durch Zentrifugation abgetrennt, dreimal in jeweils 1ml MeOH suspendiert und nochmals abzentrifugiert. Nach Trocknen im Vakuum wurde der Rückstand mit 0.5 m ! Triftuoressigsäure versetzt. Nach zwei Stunden wurden zweimal jeweils 3 mi Toluol zugegeben und die Lösung eingeengt. Der Rückstand wurde in Wasser gelöst und nach Zugabe von 0.1 mi einer 2 M HCI-Lösung bis zur Trockne eingedampft. Das Produkt wurde mittels Gelchromatographie über eine Sephadex LH-20 Säuie (1x30 cm) mit einer 50% igen wässrigen Acetonitril-Lösung erhalten.

Nach Gefriertrocknung der Produktfraktion erhielt man 26 mg (63%) der Verbindung (52).

'H-NMR Spektrum in D2O (#, ppm) : 1,455 (m, 4H, CH2CH2CH2CH2), 3,172 (m, 4H, 2CH2N), 3,856, 3, 960,3,975 und 4,028 (s, 2H, COCH2N).

Das {[neu5Acα-OCH2(p-C6H4)NHCOCH2NH-CO(CH2)4CO-(NHCH2CO)6- {[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly6-NHCH2CH2-]2}x(53)NHCH2CH2-]2}x(Ammonium -Salz) wurde analog der Verbindung (48) in Beispiel 7 hergestellt.

Ausbeute 72%.

'H-NMR Spektrum in D2O (S, ppm) : Matrix : 1,470 (m, 4H, CH2CH2CH2CH2), 1,649 (m, 4H, COCH2CH2), 2,363 (m, 4H, 2COCH2CH2), 3.181 (m, 4H, 2CH2N), 3,869, 3,941,3,962,3,977 (x3) und 4.045 (s, 2H, COCH2N), 4,505 und 4,727 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH2), 7,415 (m, 4H, Ar). Neu5Aca-Fragment : 1,680 (dd, 1 H, J, 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1 H, J3,12,5 Hz, J4 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1 H, Js 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1 H, J8 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1 H, J5 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1 H, J, 1,5 Hz, JS 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1 H, H-8), 3,822 (dd, 1 H, H-5), 3,846, (dd, 1 H, J9b 12 Hz, Je 2,3 Hz, H-9a).

Beispiel 13 Herstellung von NeuAcα2-7Galß1-4GlcNAcß-O(CH2)3NH-CO(CH2)4COO(p-C6H4NO2) 6'SLN-Ap-Ad-ONp (52).

Zu einer Lösung von 28 mg (38 µmol) der Verbindung 6'SLN-O (CH2) 3NH2 in 400 uL DMSO wurde eine Lösung von 65 mg (195 µmol) Di- (4-Nitrophenyl)-adipat (3) in 300 uL DMF zugegeben. Das Gemisch wurde 16 Stunden bei 20°C gerührt. Nach Zugabe von 5ml H20 und 0,1 ml AcOH wurde der Überschuss (3) abfiltriert. Das Filtrat wurde auf ein geringes Volumen von ca. 1 ml eingeengt und mittels Gelpermeations- Chromatographie über Sephadex LH-20 aufgetrennt (MeCN/H2O/AcOH 1 : 1 : 0,005).

Ausbeute (52) - 71%. DC : RfO, 46 (i-PrOH/Aceton/H20 4 : 3 : 2).

'H-NMR Spektrum (D2O, 5, ppm) : 1,641 (m, 6H, 2 COCH2CH2 und OCH2CH2), 1,674 (dd, 1H, H-3-ax Neu5Ac), 1,930 und 1,958 (s, 2x3H, 2 COCH3, Neu5Ac und GlcNAc), 2,218 (t, 2H, NCOCH2), 2,559 (dd, 1 H, J3ax, 13Hz, J4 4,7 Hz, H-3eq Neu5Ac), 2,646 (m, 2H, CH2COOAr), 3,090 und 3,190 (m, 2x1H,, NCH2), 3,42-3,94 (21 H, Ãœberlagerung der Kohlenhydrat-Signale und OCH2), 4,328 (d, 1 H, J2 8 Hz, H-1 Gal), 4,419 (d, 1H, J2 8 Hz, H-1 GIcNAc), 7,291 und 8,256 (d, 2x2H, J 8,3 Hz, Ar).

Herstellung von [6'SLN-Ap-Ad-Gly,-NHCH2] 4C (53) Zu einer Lösung von 5 mg (2,7 µmol) des Tetrahydrochlorids [HCL Gly7-NHCH2-] 4C (22a) in 500 uL H2O wurden 15 mg (16,2 µmol) der Verbindung NeuAcα2-6Galß1- 4GIcNAcß-O (CH2) 3NH-CO (CH2) 4COO (p-C6H4NO2) (52) zugegeben.

Der pH-Wert der erhaltenen Lösung wurde durch tropfenweise Zugabe von 1M NaHCO3-Lösung auf pH-8 eingestellt. Das Reaktionsgemisch wurde 3 Tage bei Raumtemperatur gerührt und mittels Gelpermeations-Chromatographie (G10,0,05 M NH3) aufgetrennt.

Ausbeute (53) 34%, DC : Rif-0 (i-PrOH/Aceton/H20 4 : 3 : 2).

'H-NMR Spektrum (D2O, #, ppm) : Matrix : 1,628 (m, 4H, COCH2CH2), 1,789 (m, 2H, OCH2CH2), 2,275 und 2,373 (m, 2x2H, 2 COCH2CH2), 2,935 (s, 2H, CCH2), 3,197 und 3,279 (m, 2x1H, NCH2), 3,971,3,990,4,026 (x3) und 4,077 (x2) (s, 14H, 7 CH-').

Kohlenhydrat-Signale : 1,730 (dd, 1H, H-3ax Neu5Ac), 2,049 und 2,078 (s, 2x3H, 2 COCH3, Neu5Ac und GIcNAc), 2,693 (dd, 1H, J3ax 12,4 Hz, J4 4,6 Hz, H-3eq Neu5Ac), 3,54-3,96 (21 H, Ãœberlagerung der Kohlenhydrat-Signale und OCH2), 4,468 (d, 1H, J2 8Hz, H-1 Gal), 4,562 (d, 1H, J2 8 Hz, H-1 GIcNAc).

Die Verbindung [6'SLN-Ap-Ad-AC2-Gly5-NHCHJ4C (54) wurde auf analoge Weise ausgehend vom Tetrahydrochlorid [HCI-H-AC2-Gly5-NHCH2] 4C (24a) und NeuAca2- 6Galß1-4GlcNAcß-O (CH2) 3NH-CO (CH2) 4COO (p-C6H4NO2) (52) hergestellt.

Ausbeute (54)-63%. DC : Rif-0 (i-PrOH/Aceton/H2O 4 : 3 : 2).

'H-NMR Spektrum in D20 (#, ppm) : Matrix : 1,341,1,524 und 1,631 (m, 12H, 6 CH2), 1,599 (m, 4H, COCH2CH2CH2CH2CO), 1,785 (m, 2H, OCH2CH2), 2,238 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH2CO), 2,260 (m, 4H, COCH2CH2CH2CH2CO), 2,349 (t, 2H, J 7,5 Hz, CH2CO), 2,929 (s, 2H, CCH2), 3,182 (breit. t, 4H, J 6,6 Hz, 2 CH2N), 3,195 und 3,275 (m, 2x1H, NCH2), 3,979,4,022 (x3) und 4,073 (s, 10H, 5 COCH2N). Kohlenhydrat-Signale : siehe (53).

Tabelle 9, Beispiel 13 Inhibition derviralen Zeit-Adhasion von Influenza-Viren ; Stamm A/NIB/H1 N1/89M, FBI- text [siehe Tabelle 1], 6'SLN als Referenz-Verbindung. Inhibitor Verbindung Nr. Relative Aktivität 6'SLN 1 [Neu5Ac-Gab-Ad-Gly,- (48) < 0,2 NHCH2-] 4C [6'SLN-Ap-Ad-Gly7- (53) 100 NHCH2] 4C [6'SLN-Ap-Ad-AC2-Gly5- (54) 1000 NHCH2]4C Vergteichsbeispie) 1 Die aus Beispiel 7 der WO 98/14215 bekannte Verbindung der Formel <BR> <BR> <BR> <BR> {Neu5Acα2-6Galß1-4GlcNAcß1-NHCOCH2NH-CO(CH2)4CO-(NHCH2CO) 3-NHCH2- } 4C bildet keine erfindungsgemäßen Aggregate, wie mit folgenden Methoden gezeigt wurde : 1. Dünnschichtchromatographisch iäßt sich unter folgenden Bedingungen nur eine einzige Verbindung, und zwar des Monomeren, beobachten. Spuren von Aggregaten fehlen völlig : Silikagel 60 TLC Platten, Katalognr. 1.05724, Merck ; Eluens : i-PrOH/Aceton/H20 4 : 3 : 2 ; Beobachtung : Verschwelung nach Eintauchen in 7% H3PO4.

2. Das 1H NMR Spektrum (Bruker 500 MHz, D20,300 K) der Verbindung zeigt keine Linienverbreiterung, die charakteristisch Glycoperptidaggregate.für 3. Laserlichtstreuungsexperimente (Coulter Submicron Model N4MD, He-Ne Laser, 1 632,8) der Verbindung in wäßrigen Lösungen ergeben keine Hinweise auf die Bildung von Aggregaten.

4. Mit Gel-Permeations-HPLC (TSK-4000 Saule, 0.2 M NaCI) wird nur ein Peak beobachtet, der dem Molekulargewicht des Monomeren entspricht.

5. Die Aktivität dieser Verbindung bei der Inhibierung von Influenzaviren (A/NIB/23/89M H1 N1, A/NIB/44/90M H3N2, B/NIB/15/89M, FBI-Test) ist vergleichbar mit derjenigen von 6 SLN Trisaccharid, während typische assoziierte Glycopeptide, wie beispielsweise das Gly7 Analogon) um Zehnerpotenzen aktiver sind.

Es ist somit klar, dass die aus dem Stand der Technik bekannte Verbindung von denjenigen Verbindungen der vorliegenden Erfindung grundlegend verschieden ist.

Der nachgewiese funktionelle Unterschied beruht auf dem strukturellen Unterschied des Fragments K, dass zu einer intermolekularen Assoziation nicht geeignet ist, weil die Anzahl der zur Bildung von Wasserstoffbrücken geeigneten Kettensegmente zu gering ist.