COMPUESTOS QUINóNICOS ANTITUMORALES Y SUS DERIVADOS, PROCEDIMIENTO DE OBTENCIóN Y SUS APLICACIONES

SECTOR DE LA TéCNICA

La presente invención es de interés para el sector farmacéutico. Se refiere a derivados 1, 4-dioxaantracénicos,- principalmente 1, 4-antraquinónicos, de fórmula general I como inhibidores del crecimiento de células tumorales, asi como a procedimientos útiles para su preparación, a composiciones farmacéuticas que los contienen y sus aplicaciones clínicas.

ESTADO DE LA TéCNICA

Las quinonas se encuentran ampliamente distribuidas en la Naturaleza, donde son pigmentos de gran importancia y su reactividad y síntesis han sido recogidas profusamente en la literatura ^1"3 . Las quinonas presentan una interesante actividad biológica: además de su actividad antitumoral ⁴ presentan actividad antimicobacteriana ⁵ , moluscicida ⁶ , tripanocida ⁷ , antimalárica ^8"10 y antiviral ¹¹ entre otras. Entre las quinonas con mayor aplicación terapéutica se encuentran las antraciclinas que fueron aisladas a principios de los años 60 del Streptomyces peucetius, empleado para la obtención de pigmentos ⁴ ' ¹² . Se denominaron doxorubicina y daunorrubicina y demostraron ser unos fármacos anticancerosos de los más eficaces existentes, especialmente en el tratamiento de tumores sólidos.

También las 9, 10-antraquinonas son importantes antitumorales y, asi, en los años 70 la antraquinona disustituida ametantrona desarrollada en principio para ser usada como tinta de bolígrafos, demostró tener una excelente actividad antitumoral ¹³ . Por variaciones estructurales se desarrolló la mitoxantrona. Ambas 9, 10-antraquinonas demostraron tener actividad curativa frente a las lineas

celulares desarrolladas por el Instituto Nacional del Cáncer norteamericano (NCI) ¹⁴ de leucemia P388 y melanoma B16. La mitoxantrona mostró aún mejor actividad frente a carcinoma de colon 26, leucemia L1210 y, muy importante, sublineas de leucemia P388 que hablan demostrado ser resistentes a las antraciclinas. En estudios clínicos, la mitoxantrona mostró actividad frente a cáncer de mama, leucemia aguda y linfom ^' a de no-Hodgkin, además de observarse una actividad marginal frente a células cancerosas de pulmón, linfoma de Hodgkin, mieloma, cáncer de hígado, próstata, vejiga y cuello.

Por otra parte, es muy amplia la presencia del anillo epóxido en productos naturales y es también amplia la gama de actividades biológicas interesantes que presentan los sustratos que la contienen. Dentro de las quinonas ¹⁵ podemos encontrar epóxidos en estructuras simples como la de la filostina, el ácido terreico, la 2, 3-epoxi-vitamina K (sistema simple naftoquinónico que contiene algunos elementos estructurales de los compuestos descritos en esta invención) , las flagranonas, las epoxiquinomicinas o el lachnumol A y también en estructuras complejas como las de la espiroxina A, el ácido torreyánico, la palmarumicina C2, la cladospirona C o la diepoxina α. Las propiedades terapéuticas de estos compuestos van desde inhibidores de angiogénesis a actividad antihemorrágica, inhibidores NF-KB ó aplicaciones agroquimicas ¹⁵ .

En cuanto a las enfermedades cancerosas, es conocido que a pesar de todos los esfuerzos en la lucha contra el cáncer, las estadísticas siguen arrojando datos escalofriantes ¹⁶ . El mecanismo de acción de las antraciclinas en las células cancerosas sigue siendo un tema muy controvertido ¹⁷ . Los mecanismos que se barajan como posibles son ¹⁷ : 1) actuación como agentes intercalantes del ADN e inhibición de la síntesis de proteínas; 2) generación de radicales libres que causan

daños en el ADN o peroxidación de los lipidos; 3) enlace al ADN y alquilación; 4) entrecruzamientos en el ADN; 5) interferencia en la apertura del ADN o separación de las hebras de éste y actividad helicasa; 6) efectos directos en la membrana; 7) inicio de lesión sobre el ADN via la inhibición de topoisomerasa II; 8) inducción de apoptosis ¹⁸ como respuesta a la inhibición de topoisomerasa II. Como dianas moleculares más aceptadas, las quinonas suelen actuar sobre las topoisomerasas ¹⁹ (enzimas topológicas que catalizan cambios en el ADN) I ²⁰ y/o II ²¹ , la telomerasa ²² ó, descubierto más recientemente, sobre la Cdc25 ²³ , diana común a cáncer y a Alzheimer ²⁴ .

Dos de las características químicas de las quinonas explicarían estas actividades. Por un lado su actividad redox ²⁵ ' ²⁶ : las quinonas pueden entrar en un ciclo redox y ser reducidas a los correspondientes radicales semiquinona, o a la hidroquinona, generando el anión radical superóxido (O ₂ ) • Por otro lado, su potencial como aceptor de Michael ²⁵ ' ²⁷ y por tanto su capacidad de formar enlace covalente y actuar como agente alquilante de componentes celulares primordiales (proteínas, ADN) .

Conociendo la importante actividad antitumoral de ametantrona y mitoxantrona se ha investigado mucho en el desarrollo de nuevos fármacos antitumorales que porten, como motivo central, la 9, 10-antraquinona diversamente sustituida ^28" 37

Sin embargo, han sido pocos los estudios hechos con derivados de 1, 4-antraquinona (Tabla 1, compuesto 60). Desde el punto de vista químico, Fieser describió el primer derivado, la 2-hidroxi-l, 4-antraquinona, en 1928 ³⁸ , asignándole también una alta participación de su tautómero, 4- hidroxi-1, 2-orto-antraquinona. Posteriormente Zahn ³⁹ describió en 1934 unos derivados obtenidos a partir de quinizarina (1,4- dihidroxi-9, 10-antraquinona) y a los que, sin técnicas

espectroscópicas existentes, asignó la forma ana-quinónica (Figura 1, estructura a) , describiendo en ese trabajo el derivado hidroxilado y el acetilado. En 1958, Muxfeldt y Koppe ⁴⁰ basándose en los espectros de UV-visible y por comparación con la 1, 4-antraquinona (60) asignan a estos derivados la estructura b de 1, 4-antraquinona. El grupo del CSIC de Madrid ha trabajado con derivados de este tipo empleándolos como precursores sintéticos de antraciclinonas ⁴¹ . También Fariña y colaboradores han preparado 1, 4-antraquinonas que posteriormente se transformaron en 9, 10-antraquinonas de origen natural como la islandicina y digitopurpona ⁴² . Igualmente estudiaron la adición de alcoholes sencillos a 9- metoxi- y 9-hidroxi-l, 4-antraquinona ⁴³ , realizando modificaciones en el anillo A del sistema. Más tarde el grupo de Cameron también ha utilizado sintones de este tipo como precursores de antraciclinonas y otros compuestos tetraciclicos ⁴⁴ . Por último, el grupo del CSIC ha estudiado en colaboración con un grupo búlgro la interacción de algunos de estos compuestos con membranas biológicas de thylakoides, pero sin detallar su síntesis ni estudiar propiedades terapéuticas ⁴⁵ .

Es de resaltar que, a diferencia de las 9,10- antraquinonas de las que se conocen miles en la naturaleza y son importantísimos colorantes, las 1, 4-antraquinonas naturales son escasísimas, 4 compuestos hasta la fecha, y dos de ellos se han aislado de plantas del género Hedyotis ⁱ⁶ en Malasia.

En el año 2000 Perchellet et al ⁴⁷ descubrieron que la 1, 4-antraquinona (60) tiene una actividad anticancerosa comparable a la de la daunorrubicina. Este compuesto, que es comercial (Lancaster) , aunque también se puede sintetizar fácilmente a partir de quinizarina ⁴⁸ mostró, a diferencia de daunorrubicina, ser un bloqueante del transporte de nucleósidos e inductor de la fragmentación del ADN, estudiando

como linea celular L1210. Al año siguiente ⁴⁹ , ampliaron el estudio a lineas resistentes (MDR) y además de 60 investigaron la 6, 7-dicloro-l, 4-antraquinona, es decir modificada en el anillo C. En el año 2004, y cuando los estudios que se detallan en esta invención estaban ya muy avanzados, publicaron dos artículos ⁵⁰ ' ⁵¹ en el que estudiaron la actividad biológica de varias 1, 4-antraquinonas con sustituyentes en la posición 6. En el primero de ellos ⁵⁰ estudiaron fenómenos de apoptosis (actividad frente a caspasa-3, 8 y 9) de varias quinonas sustituidas en posición 6 y una de ellas bromada adicionalmente en 2 y 3. Esta resultó ser una de las menos activas en la serie de 8 compuestos estudiados. A finales de 2004 ⁵¹ publicaron los datos de variaciones estructurales en el anillo C y una en el anillo A, consistente en la introducción del grupo metilamino. La ausencia total de actividad en este compuesto y la buena actividad encontrada en los 7 compuestos modificados en el anillo C (con sustituyentes -metil, bromometil e -hidroximetil, lleva a los autores a concluir que "la modificación del anillo A de las 1, 4-antraquinonas disminuye la actividad antitumoral" ⁵¹ . Muy al contrario, esta invención demuestra, mediante la síntesis de más de 100 productos y ensayo biológico de unos 70, que las modificaciones estructurales en 2, 3, 5, 9 y 10 proporcionan compuestos con fuerte actividad antitumoral frente a 5 tipos de cánceres humanos.

Por lo tanto, en esta invención se ha llevado a cabo un estudio detallado de 1, 4-antraquinonas con sustituyentes alquilo, amino, éter, halógeno y acilo principalmente en las posiciones 2, 3, 5, 9 y 10. Algunas 2-alquil-l, 4-antraquinonas son compuestos conocidos, como la 2-metil-l, 4-antraquinona ⁵² aunque no se ha comunicado actividad terapéutica alguna pues todos los estudios existentes, realizados por Perchellet y Hua, se han descrito en el párrafo anterior. En esta invención se han

preparado numerosas alquil- y dialquil-1, 4-antraquinonas empleando metodología sintética nueva basada en la química de radicales libres.

En lo referente a halo-1, 4-antraquinonas existen precedentes de su preparación por métodos difíciles que requieren control por RMN en el caso de la cloración (para la 2, 3-dicloro-l, 4-antraquinona (4)) ⁵³ , y estos productos han sido caracterizados estructuralmente de forma incompleta. Un estudio estructural detallado ha sido también objeto de esta invención.

Entre las amino-1, 4-antraquinonas sólo se conocen dos descritas, la 2-piperidinil-l, 4-antraquinona (22) y la 2- morfolinil-1, 4-antraquinona (21), descritas por Kallmayer ⁵⁴ con un 8% de rendimiento y por Russkikh ⁵⁵ con un 67-75% de rendimiento. Nosotros hemos preparado éstas y otras semejantes por diferente método y con rendimientos medios excelentes.

En cuanto a las I ₁ 4-antraquinonas con función éter, ya se ha mencionado que la 9-metoxi-l, 4-antraquinona (61) es conocida ⁴⁰ y la 2, 3-dimetoxi-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (15) se ha descrito como producto natural ⁵⁶ .

Una variación estructural más notable en el sistema de 1, 4-antraquinona lo constituyen la formación de epóxidos, ya que se pierde la planaridad y las propiedades redox se ven notablemente alteradas. Pero se ha demostrado que la presencia de un anillo epóxido en algunas estructuras relacionadas con quinonas pueden mejorar la actividad de éstas ^57"59 .

Aguilera et al. ⁵⁹ han estudiado recientemente la citotoxicidad de 1, 4-naftoquinona, 2-alquil-l, 4-naftoquinonas, 2, 3-dialquil-l, 4-naftoquinonas y los correspondientes epóxidos basándose en el conocimiento de la actividad antitumoral de los productos naturales plumbagina (5-hidroxi-2-metil-l, 4- naftoquinona) y menadiona (2-metil-l, 4-naftoquinona, vitamina K3) y a su baja toxicidad. Los compuestos más activos que obtuvieron fueron los epóxidos: 2,3-epoxi- 1, 4-naftoquinona,

2-fenil-3-metil-2 _/ 3-epoxi-l, 4-naftoquinon y 2-fenil-2,3- epoxi-1, 4-naftoquinona, mientras que los epóxidos disustituidos en posiciones 2 y 3 con dos sustituyentes de mayor tamaño (2, 3-epoxi-2, 3-difenil-l, 4-naftoquinona y 2,3- dietil-2, 3-epoxi-l, 4-naftoquinona) resultaron bastante menos activos .

En lo referente a epóxidos de 1, 4-antraquinona, Rigaudy ⁶⁰ describió la preparación del compuesto base 75, por una ruta muy larga, sin rendimiento ni aplicación terapéutica expresa.

Por todas estas razones, a la vista de los antecedentes expuestos y por el interés potencial de los compuestos resultantes que combinen una ó varias de las caracteristicas estructurales anteriores, la invención se centra en la preparación y el estudio de los mismos.

DESCRIPCIóN DE LA INVENCIóN Descripción breve

La presente invención se basa en que los inventores han observado que compuestos de fórmula general I presentan actividad inhibidora del crecimiento de células humanas tumorales .

Un objeto de la presente invención lo constituye un compuesto útil como agente terapéutico, en adelante compuesto de la invención, de fórmula general (I) :

(I)

donde

el enlace covalente marcado como α. puede ser simple y R ¹ , R ² , R ³ y R ⁴ iguales o diferentes de H,

el enlace covalente α. puede ser simple y R ² , R ³ ser igual a - 0- dando lugar a un anillo de epóxido,

ó el enlace covalente marcado como α es doble y tanto R ² como R ⁴ están ausentes,

en los que:

R ¹ es seleccionado de -H, Ci_i ₄ alquilo sin sustituir con cadena lineal ó ramificada (con dobles ó triples enlaces) , Ci- ₁ 4 haloalquilo, C ₁ - ₁₄ hidroxialquilo, C ₁ - ₁₄ aminoalquilo, C ₁ - ₁₄ carboxialquilo (éster) , arilo, heteroarilo, -OH, OCOR ⁸ donde R ⁸ es Ci- ₁₄ alquilo lineal o ramificado, arilo ó heteroarilo, OR ⁹ (alcoxi- ó haloalcoxi-, -OCF ₃ ) , donde R ⁹ es una cadena alquilica corta, tioéter, 0-aciloxi, O-triflato, O-tosilato, halógeno (F, Cl, Br, I), -COOH, -CF ₃ , -SO ₃ H, sulfonate, -NO ₂ , N ₃ , arilo sin sustituir ó sustituido, heteroarilo saturado e insaturado, -NH2, NHR ¹⁰ , donde R ¹⁰ es una cadena alquilica de corta, ó bien cicloalquilica (sistema de aziridina, ciclobutilamina, pirrolidina, piperidina, morfolina) , ó bien R ¹⁰ es un sistema bencénico o heterociclico (pirazol, imidazol) , ó R ¹⁰ es un sistema bencílico, arilalquilico ó heterociclo-CH2- ,

R ³ es seleccionado de -H, C1- ₁ 4 alquilo sin sustituir con cadena lineal ó ramificada (con dobles ó triples enlaces), Ci- ₁₄ haloalquilo, C1-1 ₄ hidroxialquilo, Ci_ ₁₄ aminoalquilo, C ₁ - ₁₄ carboxialquilo (éster) , arilo, heteroarilo, -OH, OCOR ⁸ donde

R ⁸ es Ci- _I4 alquilo lineal o ramificado, arilo ó heteroarilo, OR ⁹ (alcoxi- ó haloalcoxi-, -OCF ₃ ) , donde R ⁹ es una cadena alquilica corta, tioéter, 0-aciloxi, O-triflato, O-tosilato, halógeno (F, Cl, Br, I), -COOH, -CF ₃ , -SO ₃ H, sulfonate, -NO ₂ , N ₃ , arilo sin sustituir ó sustituido, heteroarilo saturado e insaturado, -NH ₂ , NHR ¹⁰ , donde R ¹⁰ es una cadena alquilica de corta, ó bien cicloalquilica (sistema de aziridina, ciclobutilamina, pirrolidina, piperidina, morfolina) , ó bien R ¹⁰ es un sistema bencénico o heterociclico (pirazol, imidazol) , ó R ¹⁰ es un sistema bencilico ó heterociclo-CH2- ,

R ² si está presente es seleccionado de los mismos grupos que R ¹ y puede ser igual ó diferente que R ¹ ,

R ⁴ si está presente es seleccionado de los mismos grupos que R ³ y puede ser igual ó diferente que R ³ ,

R ⁵ y R ⁶ son independientemente H, -OH, -Oalcoxi (con cadena lineal corta), -Oaciloxi, halógeno (F, Cl, Br, I),

R ⁷ es H, sólo cuando uno ó más de los radicales restantes en (I), es decir R ¹ , R ² , R ³ , R ⁴ , R ⁵ y R ⁶ son diferentes de H, es decir no se reivindica explícitamente la 1, 4-antraquinona, donde todos los radicales en (I) son iguales a H, y el enlace α es un doble enlace, ya que se trata de un compuesto conocido y estudiado previamente,

Cuando alguno de los radicales R ^3- -R ⁶ es diferente de H, R ⁷ puede tener la naturaleza descrita en los casos anteriores mencionados para R ¹ .

o,

sus isómeros, sales farmacéuticamente aceptables, derivados solvatos, amidas, esteres y éteres.

Además, una realización particular de la invención lo constituye un compuesto de fórmula II, a titulo ilustrativo y sin que limite el alcance de la invención, perteneciente al siguiente grupo:

• 2-cloro-l, 4-antraquinona (1)

• 2-cloro-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (2)

• 2-cloro-9-metoxi-l, 4-antraquinona (3) • 2, 3-dicloro-l, 4-antraquinona (4)

• 2, 9-dicloro-10-hidroxi-l, 4-antraquinona (5)

• 2, 9-dicloro-10-metoxi-l, 4-antraquinona (6)

• 2, 3-dicloro-9-metoxi-l, 4-antraquinona (7)

• 2-bromo-l, 4-antraquinona (8) • 2-bromo-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (9)

• 2-bromo-9-metoxi-l, 4-antraquinona (10)

• 2, 3-dibromo-l, 4-antraquinona (11)

• 2, 3-dibromo-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (12)

• 2, 3-dibromo-9-metoxi-l, 4-antraquinona (13) • 2-metoxi-3-bromo~9-hidroxi-l, 4-antraquinona (14)

• 2, 3-dimetoxi-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (15)

• 2, 3-dimetoxi-l, 4-antraquinona (16)

• 2-cloro-3-metoxi-l, 4-antraquinona (17)

• 9-hidroxi-l, 4-antraquinona (58) • 9-acetoxi-l, 4-antraquinona (59)

• 1, 4-antraquinona (60)

• 9-metoxi-l, 4-antraquinona (61)

• 2-metil-l, 4-antraquinona (62)

• 2-etil-l, 4-antraquinona (63) • 2-alil-l, 4-antraquinona (64)

• 2-isopropil-l, 4-antraquinona (65)

• 2-tercbutil-l, 4-antraquinona (66)

• 2-ciclohexil-l, 4-antraquinona (67)

• 2-bencil-l, 4-antraquinona (68) • 2-p-metoxibencil-l, 4-antraquinona (69)

• 2, 3-dimetil-l, 4-antraquinona (70)

• 2, 3-dietil-l, 4-antraquinona (71)

• 2, 3-dialil-l, 4-antraquinona (72)

• 2, 3-dibencil-l, 4-antraquinona (73) • 2, 3-di-p-metoxibencil-l, 4-antraquinona (74)

• 5-acetoxi-l, 4-antraquinona (90)

• 5-hidroxi-l, 4-antraquinona (91)

• 5-nitro-l, 4-antraquinona (92)

• 5-metoxi-l, 4-antraquinona (93) • 5, 9-diacetoxi-l, 4-antraquinona (94)

• 5-acetoxi-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (95)

• 5-acetoxi-9-metoxi-l, 4-antraquinona (96)

• 5, 9-dihidroxi-l, 4-antraquinona (97)

• 5-metoxi-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (98) • 5-metoxi-9-acetoxi-l, 4-antraquinona (99)

• 5-hidroxi-9-acetoxi-l, 4-antraquinona (100)

• 5-hidroxi-9-metoxi-l, 4-antraquinona (101)

• 5, 9-dimetoxi-l, 4-antraquinona (102)

• 2-hidroxi-l, 4-antraquinona (103) • 2-metoxi-l, 4-antraquinona (104)

• 2-acetoxi-l, 4-antraquinona (105)

• 2-picolilamino-l, 4-antraquinona (18)

• 2-bencilamino-l, 4-antraquinona (19)

• 2-ciclopropilamino-l, 4-antraquinona (20) • 2-pirrolidinil-l, 4-antraquinona (21)

• 2-piperidinil-l, 4-antraquinona (22)

• 2- (3' -fluorobencil) -amino-1, 4-antraquinona (23)

• 2- (4' -clorobencil) -amino-1, 4-antraquinona (24)

• 2- (2' , 4' -diclorobencil) -amino-1, 4-antraquinona (25) • 2-aziridinil-l, 4-antraquinona (26)

• 2-morfolinil-1, 4-antraquinona (27)

• 2- (3' -clorobencil) -amino-1, 4-antraquinona (28)

• 2-bromo-3- {2 ^r -picolilamino) -1, 4-antraquinona (29)

• 2-bromo-3-bencilam.ino-l, 4-antraquinona (30) • 2-bromo-3-ciclopropilamino-l, 4-antraquinona (31)

• 2-bromo-3-pirrolidinil-l, 4-antraquinona (32)

• 2-bromo-3-piperidinil-l, 4-antraquinona (33)

• 2-bromo-3- (4' -fluorbencil) -amino-1, 4-antraquinona (34)

• 2-bromo-3- (4' -clorobencil) -amino-1, 4-antraquinona (35) • 2, 3-bis (pirazolil) -1, 4-antraquinona (36)

• 2- (2' , 4' -diclorobencil) -amino-3-bromo-l, 4-antraquinona (37)

• 2-imidazolil-3-bromo-l, 4-antraquinona (38)

• 2-aziridinil-3-bromo-l, 4-antraquinona (39)

• 2-bromo~3-morfolinil-1, 4-antraquinona (40) • 2- (2' -clorobencilamino) -3-bromo-l, 4-antraquinona (41)

• 2-aziridinil-3-cloro-l, 4-antraquinona (42)

• 2-cloro-3-bencilamino-l, 4-antraquinona (43)

• 2-cloro-3-ciclopropilamino-l, 4-antraquinona (44)

• 2-cloro-3-pirrolidinil-l, 4-antraquinona (45) • 2-cloro-3-piperidinil-l, 4-antraquinona (46)

• 2-cloro-3-morfolinil-l, 4-antraquinona (47)

• 2-cloro-3- (4' -clorobencil) -amino-1, 4-antraquinona (48)

• 2-cloro-3- (2' -clorobencil) -amino-1, 4-antraquinona (49)

• 2-cloro-3- (4' -fluorbencil) -amino-1, 4-antraquinona (50) • 2- (2' , 4' -diclorobencil) -amino-3-cloro-l, 4-antraquinona (51)

• 2-cloro-3- (2' -picolilamino) -1, 4-antraquinona (52)

• 2-etoxi-3-imidazolil-l, 4-antraquinona (53)

• 2, 3-bis (pirrolidinil) -1, 4-antraquinona (54)

• 2, 3-bis (piperidinil) -1, 4-antraquinona (55) • 2, 3-bis (aziridinil) -1, 4-antraquinona (56)

• 2, 3-bis (morfolinil) -1, 4-antraquinona (57)

• 2, 3-epoxi-2, 3-dihidro-l, 4-antraquinona (75)

• 2, 3~epoxi-2, 3-dihidro-9-metoxi-l, 4-antraquinona (76)

• 2, 3-epoxi-2-etil-3-hidro-l, 4-antraquinona (77) • 2, 3-epoxi-3-hidro-2-isopropil-l, 4-antraquinona (78)

• 2, 3-epoxi~3-hidro-2-tercbutil-l, 4-antraquinona (79)

• 2, 3-epoxi-2, 3-dietil-l, 4-antraquinona (80)

• 2-bencil-2, 3-epoxi-3~hidro-l, 4-antraquinona (81)

• 2, 3-epoxi-2-metil-3-hidro-l, 4-antraquinona (89) • 2, 3-diacetoxi~2, 3-dihidro-l, 4-antraquinona (82)

• 2, 3-diacetoxi~2, 3-dihidro-9-metoxi-l, 4-antraquinona (83)

• 2, 3-dipropionoxi-2, 3-dihidro-l, 4-antraquinona (84)

• 2, 3-dibutiroxi-2, 3-dihidro-l, 4-antraquinona (85)

• 2, 3-divaleroxi-2, 3-dihidro-l, 4-antraquinona (86) • 2, 3-bisisobutiroxi-2, 3-dihidro-l, 4-antraquinona (87)

• 2, 3-bistrimetilacetoxi-2, 3-dihidro-l, 4-antraquinona (88)

En otro aspecto, la invención se relaciona con una composición terapéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), junto con un vehículo inerte. En una realización particular, dicho compuesto de fórmula (I) se selecciona del grupo descrito en la Tabla I y sus mezclas, junto con, opcionalmente, uno o más vehículos inertes. Dicha composición terapéutica es particularmente útil frente a células tumorales humanas y animales, aunque no limitado a ellos. Un campo importante donde encuentran aplicación los compuestos de fórmula (I), en particular, los compuestos de la

Tabla I, es en Sanidad humana y animal. Por tanto, en una realización particular, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), junto con, opcionalmente, uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. En una realización particular, dicho compuesto de fórmula (I) se selecciona entre los compuestos incluidos en la Tabla I y sus mezclas.

Dicha composición farmacéutica puede ser utilizada para prevenir y/o tratar enfermedades tumorales humanas o animales; asi como enfermedades infecciosas provocadas por parásitos patógenos de humanos o animales y enfermedades neurodegenerativas en humanos.

Por tanto, en una realización concreta, dicha composición farmacéutica es una composición antitumoral y puede ser utilizada en el tratamiento de enfermedades tumorales humanas. En otra realización concreta, dicha composición farmacéutica es una composición antiparasitaria y puede ser utilizada en la prevención y/o el tratamiento de infecciones causadas por parásitos, por ejemplo, Tripanosoma y Leishmania. La invención también se relaciona con el empleo de un compuesto de fórmula (I) en la elaboración de un medicamento útil para el tratamiento de enfermedades tumorales humanas o animales, de enfermedades infecciosas provocadas por parásitos y neurodegenerativas. En una realización particular, dicho compuesto de fórmula (I) se selecciona de la Tabla I y sus mezclas .

Finalmente, otro objeto de la incención lo constituye un procedimiento para la elaboración de los compuestos de fórmula general (I) de la invención.

Descripción detallada

La presente invención se basa en que los inventores han observado que compuestos de fórmula general I presentan

actividad inhibidora del crecimiento de células humanas tumorales .

A continuación se describen los detalles más sobresalientes de los métodos sintéticos utilizados en la presente invención, que comprende rutas cuyas etapas oscilan entre 2 y 8, estando la mayoría de las veces comprendidas entre 3 y 5. Además los procedimientos sintéticos no requieren temperaturas muy altas ni muy bajas, tampoco condiciones potencialmente peligrosas como reacciones a alta presión, hidrogenación, ..., y en el caso de los agentes epoxidantes se pueden utilizar aquellos más benignos para el medio ambiente.

Como productos de partida para la preparación de bastantes compuestos descritos en esta invención, se sintetizaron la 9-hidroxi- (58) ³⁹ , 9-acetoxi- (59) ³⁹ ' ⁴⁰ y 9- metoxi-1, 4-antraquinona (61) ⁴⁰ de acuerdo con los métodos descritos en la bibliografía y mejorados en cuanto al uso de disolventes menos contaminantes ó peligrosos (empleo de acetato de etilo en lugar de benceno, ó diclorometano en lugar de cloroformo) .

Alquilquinonas, quinonas oxigenadas en posición 5 y derivados de 5, 9-diacetoxi-l , 4-antraquinona

Esta invención incluye la preparación de una larga serie de alquil- y dialquilquinonas (62-74) por adición del radical formado por descarboxilación oxidativa de ácidos carboxilicos a 1, 4-antraquinonas, siendo ésta una invención genuina de este trabajo que no tiene precedente en la literatura y que resulta de bajo impacto mediambiental. Aunque la metodología basada en el empleo de radicales libres ha recibido una gran atención en los últimos años ⁶¹ ' ⁶² , la inmensa mayoría de los métodos existentes para la generación de C-radicales se basa en la utilización de derivados de estaño, altamente contaminantes y tóxicos para la salud. Por el contrario, Torssell llevó a cabo adiciones de radicales a benzoquinonas, formando los mismos

por descarboxilación oxidativa de ácidos carboxilicos con persulfato amónico y nitrato de plata como catalizador ⁶³ ' ⁶⁴ . Este método es ambientalmente benigno, no requiere condiciones de alta dilución ni dispositivos para llevar a cabo la adición lenta del radical formado. Aplicando el método de Torssell ⁶⁴ a 1, 4-antraquinonas, se ha preparado una amplia serie de mono- y dialquilderivados . Los radicales elegidos fueron de naturaleza alquílica (lineal ó ramificada) , alilica, cicloalquilica y bencílica, siendo seleccionados por sus potenciales propiedades terapéuticas. Asi, la introducción del anillo de ciclohexano tiene su base en la estructura de la atovaquona ⁶⁵ , una hidroxinaftoquinona usada contra la malaria y babesiosis y que tiene ese anillo en su estructura. Los rendimientos obtenidos fueron moderados, ya que en la mayoría de los casos, junto a los productos de monoadición se aislaron las dialquilquinonas, lo que indica que la reacción de adición del radical al derivado monosustituido es más rápida que al derivado sin sustituir. Por otro lado, también se aislaron pequeñas cantidades de los correspondientes productos de reducción ó "formas leuco" que demostraron una estabilidad inusual, ya que en la serie naftoquinónica se oxidan fácilmente regenerando el sistema quinónico. En cambio, las leuco-1, 4-antraquinonas resistieron la acción de oxidantes típicos como el óxido de plata (I) . En el caso de la 2-metil- (62) y la 2, 3-dimetil-l, 4-antraquinona (70) los rendimientos obtenidos fueron muy bajos, 16 y 5% respectivamente, por lo que se recurrió al empleo de o-quinodimetanos generados in situ a partir de derivados polihalogenados geminales por eliminación con yoduro sódico (Figura 4). Atrapando este intermedio reactivo con benzoquinona, se obtuvo la 2-metil- 1, 4-antraquinona con un 52% de rendimiento. Este método, conocido como reacción de Cava ⁶⁶ , se aplicó posteriormente a la formación de derivados en posición 5, esto es, a la preparación de 5-nitro-, 5-metoxi- y 5-acetoxi-l, 4-

antraquinona ⁴¹ ' ⁴² . Por hidrólisis de esta última se obtuvo la 5-hidroxi-l, 4-antraquinona (91).

A partir de la ya conocida 5, 9-diacetoxi-l, 4-antraquinona (94) ⁴² se llevaron a cabo una serie de transformaciones selectivas: hidrólisis, metilación, acetilación, ... que se detallan en la Figura 5. De este modo se obtuvieron todas las combinaciones posibles de los diferentes sustituyentes en posiciones 5 y 9 (compuestos 94-102) que pueden comportarse selectivamente frente a la adición de nucleófilos. A modo de ejemplo, la hidrólisis selectiva del acetato en posición 9, se logró con ácido trifluoroacético y, tras hidrólisis total, la metilación selectiva en posición 5 del -OH no quelado se llevó a cabo con yoduro de metilo-carbonato potásico. En general, todas las transformaciones transcurrieron con excelente rendimiento. Sólo el compuesto 98 ha sido descrito por Danishefsky como subproducto (10% de rendimiento) en una complicada ruta que emplea benzociclobutenos ⁶⁷ .

Halo- y dihaloquinonas Las halobenzo- y halonaftoquinonas son importantes sintones para la preparación de compuestos policiclicos complejos, y ya se mencionaron anteriormente los trabajos de Cameron en este terreno ⁴⁴ . También se han utilizado para reacciones posteriores de sustitución del halógeno por distintos nucleófilos oxigenados, nitrogenados ⁶⁸ , etc. En el caso de las halo-1, 4-antraquinonas los antecedentes bibliográficos son muy escasos, con pocos detalles experimentales y, sobre todo en el caso de la cloración de la 1, 4-antraquinona, los métodos existentes ⁵³ son complicados ya que incluyen interrumpir la reacción cada 20 minutos para controlarla por RMN y el manejo del cloro gaseoso, con las posibilidades de que ocurran derrames ó una reacción incontrolada (Figura 6) . Nosotros empleando cloro a tiempos de reacción cortos hemos obtenido inicialmente el producto de

adición, la 2, 3-dicloro-2, 3-dihidro-l, 4-antraquinona, que por posterior tratamiento con base condujo limpiamente a la 2- cloro-1, 4-antraquinona (1). En cambio, al clorar a temperatura ambiente la 9-hidroxi-l, 4-antraquinona se obtuvieron mezclas de regioisómeros. Cuando la cloración se efectuó a reflujo se produjo cloración en el anillo quinónico y en el núcleo central (Figura 7). Por cloración con tiempos de reacción prolongados (hasta una semana) se obtuvo la 2, 3-dicloro-l, 4- antraquinona (4) . Este producto se pudo obtener de una forma más conveniente y este nuevo método es objeto de esta invención empleando cloruro de tionilo y no cloro gas como agente clorante. Asi el tiempo de reacción fue de 10 horas. En el caso de los productos bromados la reactividad es semejante, si bien el manejo del bromo no entraña tanto riesgo como el del cloro.

Haloéteres de quinona

Una vez obtenidas limpiamente las distintas quinonas halogenadas, se estudió su comportamiento frente a alcóxidos y en particular metóxido para ampliar la gama de sustituyentes en posiciones 2 y 3 de la quinona y además alcanzar la síntesis del producto natural 2, 3-dimetoxi-9-hidroxi-l, 4- antraquinona (15) (Figura 8). Por reacción con metóxido sódico sobre derivados dihalogenados fue posible sustituir selectivamente uno de los halógenos, pero cuando se intentó llevar a cabo la sustitución nucleófila exhaustiva sólo se obtuvieron mezclas. En el caso del derivado 9-hidroxilado, precursor del producto natural, la reacción con metóxido sódico sólo condujo a mezclas de regioisómeros, por lo que hubo que recurrir a un método más enérgico como es el empleo de fluoruro potásico-metanol-alúmina para lograr la sustitución total de los dos halógenos. Esta reacción transcurre con buen rendimiento y se reivindica como un método nuevo de la presente invención.

Al comparar los datos espectroscópicos de nuestro producto obtenido por síntesis inequívoca con el del producto natural publicado por Harrtzah ⁵⁶ se observaron discrepancias notables en el espectro de ultravioleta y de resonancia magnética nuclear. Dado que el autor nos informó de que no disponía de la muestra original, todo parece indicar que la asignación del producto natural fue realizada de forma errónea.

Síntesis de monoamino-, bromoamino- _r cloroamino- y diamino-1 _r 4-antraquinonas

Las diferentes quinonas halogenadas se sometieron a reacciones de aminación con diferentes aminas bencílicas, heterocíclicas y cicloalifáticas, obteniéndose los diferentes derivados con excelente rendimiento que así se pudieron someter a evaluación biológica.

Epoxidación de 1 _r 4-antraquinonas

La epoxidación de 1, 4-antraquinonas se ha estudiado con numerosos agentes epoxidantes: agua oxigenada, complejo-urea- peróxido de hidrógeno, hidroperóxido de tercbutilo, perborato sódico, hipoclorito sódico... e incluso lejía doméstica. El agua oxigenada es un oxidante eficaz y ambientalmente benigno, cumpliendo los requisitos de la llamada "green chemistry", por lo que se eligió para la mayor parte de las reacciones en gran escala. En general, la epoxidación de la propia 1,4- antraquinona y el 9-metoxiderivado transcurren sin problemas, formándose el epóxido con excelente rendimiento. Para el caso de quinonas 2- y 2, 3-disustituidas la reacción necesita tiempos de reacción más largos.

Apertura de epóxidos de 1 ,4-antraquinona

Se ensayó la apertura inicial con nucleófilos oxigenados como hidróxido sódico y metóxido, obteniéndose en todos los casos

la 2-hidroxi- (103) y 2-metoxi-l, 4-antraquinona (104) que ya hablan sido descritas por Fieser ³⁸ en 1928, sin datos espectroscópicos, naturalmente. Por simple acetilación se obtuvo la 2-acetoxi-l, 4-antraquinona (105) que es un producto nuevo. También se han estudiado con detalle las reacciones de apertura con anhídridos de diferentes ácidos carboxilicos

(Figura 11) . Esta reacción habla sido ensayada por Rigaudy ⁶⁰ sólo con anhídrido acético, asignando al producto de apertura la estructura de diéster de configuración relativa trans, apoyada sólo en el tradicional comportamiento de los epóxidos al carecer de datos espectroscópicos. Por el contrario, en todos los experimentos de apertura realizados en nuestro caso, que incluye también el único realizado por Rigaudy, se han observado los diésteres de configuración relativa cis, lo que se ha comprobado por experimentos bidimensionales de RMN. Se emplearon anhídridos alifáticos de cadena lineal y ramificada, en gran exceso ya que es también disolvente, y un ácido mineral fuerte. En estos diésteres vecinales la estructura quinónica se ha perdido al igual que la planaridad y constituyen derivados muy interesantes a estudiar.

Por lo tanto, un objeto de la presente invención lo constituye un compuesto útil como agente terapéutico, en adelante compuesto de la invención, de fórmula general (I):

(D

donde el enlace covalente marcado como α. puede ser simple y R ¹ , R ² ,

R ³ y R ⁴ iguales o diferentes de H,

el enlace covalente α. puede ser simple y R ² , R ³ ser igual a - 0- dando lugar a un anillo de epóxido,

ó el enlace covalente marcado como α es doble y tanto R ² como R ⁴ están ausentes,

en los que:

R ¹ es seleccionado de -H, C ₁ - ₁₄ alquilo sin sustituir con cadena lineal ó ramificada (con dobles ó triples enlaces), Ci- ₁₄ haloalquilo, C ₁ - ₁₄ hidroxialquilo, C ₁ - ₁₄ aminoalquilo, C ₁ - ₁₄ carboxialquilo (éster) , arilo, heteroarilo, -OH, OCOR ⁸ donde R ⁸ es Ci- ₁₄ alquilo lineal o ramificado, arilo ó heteroarilo, OR ⁹ (alcoxi- ó haloalcoxi-, -OCF ₃ ) , donde R ⁹ es una cadena alquilica corta, tioéter, 0-aciloxi, 0-triflato, O-tosilato, halógeno (F, Cl, Br, I), -COOH, -CF ₃ , -SO ₃ H, sulfonate, -NO ₂ , N ₃ , arilo sin sustituir ó sustituido, heteroarilo saturado e insaturado, -NH ₂ , NHR ¹⁰ , donde R ¹⁰ es una cadena alquilica de corta, ó bien cicloalquilica (sistema de aziridina, ciclobutilamina, pirrolidina, piperidina, morfolina) , ó bien R ¹⁰ es un sistema bencénico o heterociclico (pirazol, imidazol) , ó R ¹⁰ es un sistema bencilico, arilalquilico ó heterociclo-CH ₂ - ,

R ³ es seleccionado de -H, C ₁ -. ₁₄ alquilo sin sustituir con cadena lineal ó ramificada (con dobles ó triples enlaces) , Ci- 14 haloalquilo, C ₁ - ₁₄ hidroxialquilo, C1-14 aminoalquilo, Ci_i ₄ carboxialquilo (éster) , arilo, heteroarilo, -OH, OCOR ⁸ donde R ⁸ es Ci- ₁₄ alquilo lineal o ramificado, arilo ó heteroarilo,

OR ⁹ (alcoxi- ó haloalcoxi-, -OCF ₃ ) , donde R ⁹ es una cadena alquílica corta, tioéter, 0-aciloxi, O-triflato, O-tosilato, halógeno (F, Cl, Br, I), -COOH, -CF ₃ , -SO ₃ H, sulfonate, -NO ₂ , N ₃ , arilo sin sustituir ó sustituido, heteroarilo saturado e insaturado, -NH ₂ , NHR ¹⁰ , donde R ¹⁰ es una cadena alquilica de corta, ó bien cicloalquilica (sistema de aziridina, ciclobutilamina, pirrolidina, piperidina, morfolina) , ó bien R ¹⁰ es un sistema bencénico o heterociclico (pirazol, imidazol) , ó R ¹⁰ es un sistema bencílico ó heterociclo-CH2~ ,

R ² si está presente es seleccionado de los mismos grupos que R ¹ y puede ser igual ó diferente que R ¹ ,

R ⁴ si está presente es seleccionado de los mismos grupos que R ³ y puede ser igual ó diferente que R ³ ,

R ⁵ y R ⁶ son independientemente H, -OH, -Oalcoxi (con cadena lineal corta) , -Oaciloxi, halógeno (F, Cl, Br, I) ,

R ⁷ es H, sólo cuando uno ó más de los radicales restantes en (I), es decir R ¹ , R ² , R ³ , R ⁴ , R ⁵ y R ⁶ son diferentes de H, es decir no se reivindica explícitamente la 1, 4-antraquinona, donde todos los radicales en (I) son iguales a H, y el enlace α es un doble enlace, ya que se trata de un compuesto conocido y estudiado previamente,

Cuando alguno de los radicales R ^x -R ⁶ es diferente de H, R ⁷ puede tener la naturaleza descrita en los casos anteriores mencionados para R ¹ .

o, sus isómeros, sales farmacéuticamente aceptables, derivados solvatos, amidas, esteres y éteres.

Los compuestos de la presente invención representados por la fórmula (I) anteriormente descrita pueden incluir isómeros, dependiendo de la presencia de enlaces múltiples en la cadena lateral (por ejemplo, Z, E) , incluyendo isómeros ópticos o enantiómeros, dependiendo de la presencia de centros quirales, en particular en los epóxidos formados. Los isómeros, enantiómeros o diastereoisómeros individuales y las mezclas de los mismos caen dentro del alcance de la presente invención. Los enantiómeros o diastereoisómeros individuales, asi como sus mezclas, pueden separarse mediante técnicas convencionales .

Tal como aqui se utiliza, el término "derivado" incluye tanto compuestos farmacéuticamente aceptables, es decir, derivados del compuesto de fórmula (I) que pueden ser utilizados en la elaboración de un medicamento, como derivados farmacéuticamente no aceptables ya que éstos pueden ser útiles en la preparación de derivados farmacéuticamente aceptables. La naturaleza del derivado farmacéuticamente aceptable no es critica siempre y cuando sea farmacéuticamente aceptable. Asimismo, dentro del alcance de esta invención se encuentran los profármacos de los compuestos de fórmula (I). El término "profármaco" tal como aqui se utiliza incluye a cualquier compuesto derivado de un compuesto de fórmula (I) , por ejemplo, esteres, incluyendo esteres de ácidos carboxilicos, esteres de aminoácidos, esteres de fosfato, esteres de sulfonato de sales metálicas, etc., carbamatos, amidas, etc., que, cuando se administra a un individuo es capaz de proporcionar, directa o indirectamente, dicho compuesto de fórmula (I) en dicho individuo. Ventajosamente, dicho derivado es un compuesto que aumenta la biodisponibilidad del compuesto de fórmula (I) cuando se administra a un individuo o que potencia la liberación del compuesto de fórmula (I) en un compartimento biológico. La naturaleza de dicho derivado no es critica siempre y cuando

pueda ser administrado a un individuo y proporcione el compuesto de fórmula (I) en un compartimento biológico de un individuo. La preparación de dicho profármaco puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia.

Los compuestos de la invención pueden estar en forma cristalina como compuestos libres o como solvatos y se pretende que ambas formas estén dentro del alcance de la presente invención. En este sentido, el término "solvato", tal como aqui se utiliza, incluye tanto solvatos farmacéuticamente aceptables, es decir, solvatos del compuesto de fórmula (I) que pueden ser utilizados en la elaboración de un medicamento, como solvatos farmacéuticamente no aceptables, los cuales pueden ser útiles en la preparación de solvatos o sales farmacéuticamente aceptables. La naturaleza del solvato farmacéuticamente aceptable no es critica siempre y cuando sea farmacéuticamente aceptable. En una realización particular, el solvato es un hidrato. Los solvatos pueden obtenerse por métodos convencionales de solvatación bien conocidos por los técnicos en la materia.

Para su aplicación en terapia, los compuestos de fórmula (I), sus isómeros, sales, profármacos o solvatos, se encontrarán, preferentemente, en una forma farmacéuticamente aceptable o sustancialmente pura, es decir, que tiene un nivel de pureza farmacéuticamente aceptable excluyendo los aditivos farmacéuticos normales tales como diluyentes y portadores, y no incluyendo material considerado tóxico a niveles de dosificación normales. Los niveles de pureza para el principio activo son preferiblemente superiores al 50%, más preferiblemente superiores al 70%, o más preferiblemente superiores al 90%. En una realización preferida, son superiores al 95% del compuesto de fórmula (I), o de sus sales, solvatos o profármacos.

A menos que se indique lo contrario, los compuestos de la invención también incluyen compuestos que difieren sólo en la presencia de uno o más átomos isotópicamente enriquecidos. Por ejemplo, compuestos que tienen dicha estructura, a excepción de la sustitución de un hidrógeno por un deuterio por tritio, o la sustitución de un carbono por un carbono enriquecido en 13C o C o un nitrógeno enriquecido en ¹ N, están dentro del alcance de esta invención.

Un objeto particular de la presente invención lo constituye un compuesto de fórmula general (II), que constituye una subfamilia de (I), y en el que el enlace covalente D es un doble enlace y R ² y R ⁴ de (I) están ausentes

(N) y donde

R ¹ se define como en la reivindicación 1, siendo preferentemente halógeno (F, Cl, Br, I) , éter, -OR (alcoxi- ó haloalcoxi-, -OCF ₃ ) , donde R es una cadena alquilica corta, tioéter, 0-aciloxi, O-triflato, O-tosilato. R ¹ puede ser también un radical alquilo C ₁ -C ₁₄ lineal ó ramificado (con dobles ó triples enlaces) , NO2, arilo ó heteroarilo,

R ³ puede ser H ó diferente de H y preferentemente halógeno (F, Cl, Br, I), éter, -OR (alcoxi- ó haloalcoxi-, -OCF ₃ ), donde R es una cadena alquilica corta, tioéter, 0-aciloxi, O-triflato,

O-tosilato. R ¹ puede ser también un radical alquilo Ci-Ci ₄

lineal ó ramificado (con dobles ó triples enlaces) , NO _2A arilo ó heteroarilo,

R ⁵ y R ⁶ son independientemente H, -OH, -Oalcoxi (con cadena lineal corta) , -Oaciloxi, halógeno (F, Cl, Br, I) , y

R ⁷ es H, sólo cuando uno ó más de los radicales restantes en (II), es decir R ¹ , R ³ , R ⁵ y R ⁶ son diferentes de H. Cuando alguno de estos radicales es diferente de H, R ⁷ puede tener la naturaleza descrita en los casos anteriores: halógeno (F, Cl, Br, I), éter, -OR (alcoxi- ó haloalcoxi-, -OCF ₃ ), donde R es una cadena alquilica corta, tioéter, 0-aciloxi, O-triflato, 0- tosilato. R ¹ puede ser también un radical alquilo C ₁ -C14 lineal ó ramificado (con dobles ó triples enlaces), NO2, arilo ó heteroarilo.

Además, una realización particular de la invención lo constituye un compuesto de fórmula II, a titulo ilustrativo y sin que limite el alcance de la invención, perteneciente al siguiente grupo: • 2-cloro-l, 4-antraquinona (1)

• 2-cloro-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (2)

• 2-cloro-9-metoxi-l, 4-antraquinona (3)

• 2, 3-dicloro-l, 4-antraquinona (4)

• 2, 9-dicloro-10-hidroxi-l, 4-antraquinona (5) • 2, 9-dicloro-10-metoxi-l, 4-antraquinona (6)

• 2, 3-dicloro-9-metoxi-l, 4-antraquinona (7)

• 2-bromo-l, 4-antraquinona (8)

• 2-bromo-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (9)

• 2-bromo-9-metoxi-l, 4-antraquinona (10) • 2, 3-dibromo-l, 4-antraquinona (11)

• 2, 3-dibromo~9-hidroxi-l, 4-antraquinona (12)

• 2, 3-dibromo-9-metoxi-l, 4-antraquinona (13)

• 2-metoxi-3-bromo-9-hidroxi~l, 4-antraquinona (14)

• 2, 3-dimetoxi-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (15)

• 2, 3-dimetoxi-l, 4-antraquinona (16)

• 2-cloro-3-metoxi-l, 4-antraquinona (17) • 9-hidroxi-l, 4-antraquinona (58)

• 9-acetoxi-l, 4-antraquinona (59)

• 1, 4-antraquinona (60)

• 9-metoxi-l, 4-antraquinona (61)

• 2-metil-l, 4-antraquinona (62) • 2-etil-l,4-antraquinona (63)

• 2-alil-l, 4-antraquinona (64)

• 2-isopropil-l, 4-antraquinona (65)

• 2-tercbutil-l, 4-antraquinona (66)

• 2-ciclohexil-l, 4-antraquinona (67) • 2-bencil-l, 4-antraquinona (68)

• 2-p-metoxibencil-l, 4-antraquinona (69)

• 2, 3-dimetil-l, 4-antraquinona (70)

• 2, 3-dietil-l, 4-antraquinona (71)

• 2, 3-dialil-l, 4-antraquinona (72) • 2, 3-dibencil-l, 4-antraquinona (73)

• 2, 3-di-p-metoxibencil-l, 4-antraquinona (74)

• 5-acetoxi-l, 4-antraquinona (90)

• 5-hidroxi-l, 4-antraquinona (91)

• 5-nitro-l, 4-antraquinona (92) • 5-metoxi-l, 4-antraquinona (93)

• 5, 9-diacetoxi-l, 4-antraquinona (94)

• 5-acetoxi-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (95)

• 5-acetoxi-9-metoxi-l, 4-antraquinona (96)

• 5, 9-dihidroxi-l, 4-antraquinona (97) • 5-metoxi-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (98)

• 5-metoxi-9-acetoxi-l, 4-antraquinona (99)

• 5-hidroxi-9-acetoxi-l, 4-antraquinona (100)

• 5-hidroxi-9-metoxi-l, 4-antraquinona (101)

• 5, 9-dimetoxi~l, 4-antraquinona (102) • 2-hidroxi-l, 4-antraquinona (103)

• 2-metoxi-l, 4-antraquinona (104)

• 2-acetoxi-l, 4-antraquinona (105)

Otro objeto particular de la presente invención lo constituye un compuesto de fórmula general (III), que constituye una subfamilia de (I) ,

donde

R ¹ y R ³ son independientes entre si y pueden ser preferentemente H ó halógeno (F, Cl, Br, I) , ó éter, -OR (alcoxi- ó haloalcoxi-, -OCF ₃ ), ó -NH ₂ , NHR ^' , donde R ^' es una cadena alquilica de corta, ó bien cicloalquilica (sistema de aziridina, ciclobutilamina, pirrolidina, piperidina, morfolina) , ó bien R' es un sistema bencénico o heterociclico (pirazol, imidazol) , ó R es un sistema bencílico ó heterociclo-CH ₂ - ,

R ⁵ y R ⁶ son independientes entre si y pueden ser H, -OH, - Oalcoxi (con cadena lineal corta) , -Oaciloxi, halógeno (F, Cl, Br, I), y

R ⁷ es preferentemente H.

Otra realización particular de la invención lo constituye un compuesto de fórmula III, a titulo ilustrativo y sin que limite el alcance de la invención, perteneciente al siguiente grupo:

• 2-picolilamino-l, 4-antraquinona (18)

• 2-bencilamino-l, 4-antraquinona (19)

• 2-ciclopropilamino-l, 4-antraquinona (20) • 2-pirrolidinil-l, 4-antraquinona (21)

• 2-piperidinil-l, 4-antraquinona (22)

• 2- (3' -fluorobencil) -amino-1, 4-antraquinona (23)

• 2- (4' -clorobencil) -amino-1, 4-antraquinona (24)

• 2- (2' , 4' -diclorobencil) -amino-1, 4-antraquinona (25) • 2-aziridinil-l, 4-antraquinona (26)

• 2-morfolinil-l, 4-antraquinona (27)

• 2- (3' -clorobencil) -amino-1, 4-antraquinona (28)

• 2-bromo-3- (2' -picolilamino) -1, 4-antraquinona (29)

• 2-bromo-3-bencilamino-l, 4-antraquinona (30) • 2-broπιo-3-ciclopropilamino-l , 4-antraquinona ( 31 )

• 2-bromo-3-pirrolidinil-l, 4-antraquinona (32)

• 2-bromo-3-piperidinil-l, 4-antraquinona (33)

• 2-bromo-3- (4' -fluorbencil) -amino-1, 4-antraquinona (34)

• 2-bromo-3- (4' -clorobencil) -amino-1, 4-antraquinona (35) • 2, 3-bis (pirazolil) -1, 4-antraquinona (36)

• 2- (2' , 4' -diclorobencil) -amino-3-bromo-l, 4-antraquinona (37)

• 2-imidazolil-3-bromo-l, 4-antraquinona (38)

• 2-aziridinil-3-bromo-l, 4-antraquinona (39)

• 2-bromo-3-morfolinil-l, 4-antraquinona (40) • 2- (2' -clorobencilamino) -3-bromo-l, 4-antraquinona (41)

• 2-aziridinil-3-cloro-l, 4-antraquinona (42)

• 2-cloro-3-bencilamino-l, 4-antraquinona (43)

• 2-cloro-3-ciclopropilamino-l, 4-antraquinona (44)

• 2-cloro-3-pirrolidinil-l, 4-antraquinona (45)

• 2-cloro-3-piperidinil-l, 4-antraquinona (46)

• 2-cloro-3-morfolinil-l, 4-antraquinona (47)

• 2-cloro-3- (4' -clorobencil) -amino-1, 4-antraquinona (48)

• 2-cloro-3- (2' -clorobencil) -amino-1, 4-antraquinona (49)

• 2-cloro-3- (4' -fluorbencil) -amino-1, 4-antraquinona (50)

• 2- (2' , 4' -diclorobencil) -am±no-3-cloro-l, 4-antraquinona (51)

• 2-cloro-3- (2' -picolilamino) -1, 4-antraquinona (52)

• 2-etoxi-3-imidazolil-l, 4-antraquinona (53)

• 2, 3-bis (pirrolidinil) -1, 4-antraquinona (54)

• 2, 3-bis (piperidinil) -1, 4-antraquinona (55)

• 2, 3-bis (aziridinil) -1, 4-antraquinona (56)

• 2, 3-bis (morfolinil) -1, 4-antraquinona (57)

Otro objeto particular de la presente invención lo constituye un compuesto de fórmula general (IV) , que constituye una subfamilia de (I), y en el que el enlace covalente de (I) α es un enlace simple y R ² y R ⁴ de (I) están presentes :

(IV) donde

R ² , R ³ pueden ser igual a -O- dando lugar a un anillo de epóxido y en este cas,

R ¹ se define como en la reivindicación 1, siendo preferentemente halógeno (F, Cl, Br, I) , éter, -OR (alcoxi- ó haloalcoxi-, -OCF ₃ ) , donde R es una cadena alquilica corta, tioéter, 0-aciloxi, O-triflato, O-tosilato. R ¹ puede ser también un radical alquilo Ci-Ci ₄ lineal ó ramificado (con dobles ó triples enlaces) , NO2, arilo ó heteroarilo,

R ³ puede ser H ó diferente de H y preferentemente halógeno (F, Cl, Br, I), éter, -OR (alcoxi- ó haloalcoxi-, -OCF ₃ ) , donde R es una cadena alquilica corta, tioéter, 0-aciloxi, O-triflato, O-tosilato. R ¹ puede ser también un radical alquilo Ci-Ci ₄ lineal ó ramificado (con dobles ó triples enlaces) , NO ₂ , arilo ó heteroarilo,

R ⁵ y R ⁶ son independientemente H, -OH, -Oalcoxi (con cadena lineal corta) , -Oaciloxi, halógeno (F, Cl, Br, I) , y

R ⁷ es H, sólo cuando uno ó más de los radicales restantes en (II) , es decir R ¹ , R ³ , R ⁵ y R ⁶ son diferentes de H. Cuando alguno de estos radicales es diferente de H, R ⁷ puede tener la naturaleza descrita en los casos anteriores: halógeno (F, Cl, Br, I), éter, -OR (alcoxi- ó haloalcoxi-, -OCF ₃ ), donde R es una cadena alquilica corta, tioéter, 0-aciloxi, O-triflato, 0- tosilato. R ¹ puede ser también un radical alquilo Ci-Ci ₄ lineal ó ramificado (con dobles ó triples enlaces) , NO2, arilo ó heteroarilo. Otro objeto más particular de la invención lo constituye un compuesto perteneciente a la fórmula V donde R ² , R ³ son iguales a -0- dando lugar a un anillo de epóxido:

(V) donde

R y R son independientes entre si y pueden ser preferentemente H ó halógeno (F, Cl, Br, I) , ó éter, -OR

(alcoxi- ó haloalcoxi-, -OCF ₃ ), ó -NH ₂ , NHR ^' , donde R ^' es una cadena alquilica de corta, ó bien cicloalquilica (sistema de aziridina, ciclobutilamina, pirrolidina, piperidina, morfolina) , ó bien R' es un sistema bencénico o heterociclico

(pirazol, imidazol) , ó R' es un sistema bencílico ó heterociclo-CH2- . R ¹ y R ⁴ pueden ser también un radical alquilo Ci~Ci4 lineal ó ramificado (con dobles ó triples enlaces) , ó arilo ó heteroarilo,

R ⁵ y R ⁶ son independientes entre si y pueden ser H, -OH,

Oalcoxi (con cadena lineal corta) , -Oaciloxi, halógeno (F, Cl, Br, I), y

R ⁷ es preferentemente H, Otra realización particular de la invención lo constituye un compuesto de fórmula V, a titulo ilustrativo y sin que limite el alcance de la invención, perteneciente al siguiente grupo:

• 2, 3-epoxi-2, 3-dihidro-l, 4-antraquinona (75) • 2, 3-epoxi-2, 3-dihidro-9-metoxi-l, 4-antraquinona (76)

• 2, 3-epoxi-2-etil-3-hidro-l, 4-antraquinona (77)

• 2, 3-epoxi-3-hidro-2-isopropil-l, 4-antraquinona (78)

• 2, 3-epoxi-3-hidro-2-tercbutil-l, 4-antraquinona (79)

• 2, 3-epoxi-2, 3-dietil-l, 4-antraquinona (80)

• 2-bencil~2, 3-epoxi-3-hidro-l, 4-antraquinona (81)

• 2, 3-epoxi-2-metil-3-hidro-l, 4-antraquinona (89)

Otro objeto más particular de la invención lo constituye un compuesto perteneciente a la fórmula IV y de fórmula (VI) :

(Vl)

donde

R y R ⁴ son independientes entre si y pueden ser preferentemente H ó halógeno (F, Cl, Br, I), ó éter, -OR (alcoxi- ó haloalcoxi-, -OCF ₃ ) , ó -NH ₂ , NHR ^' , donde R' es una cadena alquilica de corta, ó bien cicloalquilica (sistema de aziridina, ciclobutilamina, pirrolidina, piperidina, morfolina) , ó bien R ^' es un sistema bencénico o heterociclico

(pirazol, imidazol) , ó R' es un sistema bencílico ó heterociclo-CH2- . R ¹ y R ⁴ pueden ser también un radical alquilo Ci-Ci ₄ lineal ó ramificado (con dobles ó triples enlaces) , ó arilo ó heteroarilo,

R ² y R ³ son independientes entre si y pueden ser radicales acilo, -COR ⁸ , donde R ⁸ es alquilo C _x -C ₆ lineal ó ramificado ó arilo ó heteroarilo,

R ⁵ y R ⁶ son independientes entre si y pueden ser H, -OH, Oalcoxi (con cadena lineal corta) , -Oaciloxi, halógeno (F, Cl, Br, I), y

R ⁷ es preferentemente H. Otra realización particular de la invención lo constituye un compuesto de fórmula VI, a titulo ilustrativo y sin que limite el alcance de la invención, perteneciente al siguiente grupo:

• 2, 3-diacetoxi-2, 3-dihidro-l, 4-antraquinona (82) • 2, 3-diacetoxi-2, 3-dihidro-9-metoxi-l, 4-antraquinona (83)

• 2, 3-dipropionoxi-2, 3-dihidro-l, 4-antraquinona (84)

• 2, 3-dibutiroxi-2, 3-dihidro-l, 4-antraquinona (85)

• 2, 3-divaleroxi-2, 3-dihidro-l, 4-antraquinona (86)

• 2, 3-bisisobutiroxi-2, 3-dihidro-l, 4-antraquinona (87) • 2, 3-bistrimetilacetoxi-2, 3-dihidro-l, 4-antraquinona (88)

Los compuestos de fórmula (I) tienen, en general, actividad terapéutica, y, en particular, actividad antitumoral frente a células humanas tumorales, por lo que son potencialmente útiles como antitumorales . Tal como se utiliza en esta descripción, un "antitumoral" es una sustancia quimica que detiene el crecimiento de una célula tumoral.

Por tanto, dichos compuestos de fórmula (I), en particular, los compuestos descritos en la Tabla I son potencialmente útiles como antitumorales. En una realización particular, dichos compuestos son más útiles como agentes antiparasitarios, frente a Leishmania y Tripanosoma. Asi, es ampliamente conocido que hay compuestos quinónicos activos frente a Leishmania ⁶⁹ , tripanosomiasis ⁷ , toxoplasmosis ⁷⁰ y

malaria ^8"10 (ya se ha citado el caso de la atovaquona ⁶⁵ ) . Pero las quinonas no sólo encuentran aplicación como antitumorales, sino también tienen amplio potencial en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas, en particular la enfermedad de Alzheimer. Asi, una característica principal de este proceso es que la proteina tau se agrega formando filamentos helicoidales (PHF) . Ya en 1997 se publicó que la menadiona (2- metil-1, 4-naftoquinona) inducía la desfosforilación de tau ⁷¹ y en Febrero de 2005 se ha puesto de manifiesto, tras realizar screening de una librería de 200.000 compuestos, que algunas antraquinonas naturales y las antraciclinas inhibían la agregación de tau y disolvían los PHF ⁷² . Además, ya se ha comentado anteriormente que la fosfatasa Cdc25 era una diana dual para cáncer y enfermedades neurodegenerativas ²⁴ . Aún más, los productos de reducción de las antraquinonas, esto es, las antronas, son tradicionalmente activos frente a procesos inflamatorios, como el ditranol contra la psoriasis ⁷³ . La rheina (Artrodar) es una diacetil-9, 10-antraquinona comercializada contra la artritis reumatoide ⁷⁴ . Y finalmente la aplicación de las quinonas se extiende también a los productos de interés agroquimico como herbicidas para controles de plagas ⁷⁵ e inhibidores del apetito en insectos

("antifeedant") ⁷⁶ . Por todo ello resulta evidente la gran importancia que presenta este tipo de compuestos. En consecuencia, en otro aspecto, la invención se relaciona con una composición terapéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), junto con un vehículo inerte. En una realización particular, dicho compuesto de fórmula (I) se selecciona del grupo descrito en la Tabla I y sus mezclas, junto con, opcionalmente, uno o más vehículos inertes. Dicha composición terapéutica es particularmente útil frente a células tumorales humanas y animales, aunque no limitado a ellos .

Tal como se utiliza en esta descripción, el término "inerte" significa que dicho vehículo no tiene una actividad biocida significativa.

Si se desea, dicha composición terapéutica puede contener, además, otros compuestos antitumorales, naturales, recombinantes o sintéticos, que, eventualmente, potencien la acción de dicho compuesto de fórmula (I) o bien que incrementen su espectro de acción.

Un campo importante donde encuentran aplicación los compuestos de fórmula (I) , en particular, los compuestos de la

Tabla I, es en Sanidad humana y animal. Por tanto, en una realización particular, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula

(I) , junto con, opcionalmente, uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. En una realización particular, dicho compuesto de fórmula (I) se selecciona entre los compuestos incluidos en la Tabla I y sus mezclas.

En el sentido utilizado en esta descripción, la expresión "excipiente farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellas sustancias, o combinación de sustancias, conocidas en el sector farmacéutico, utilizadas en la elaboración de formas farmacéuticas de administración e incluye adyuvantes, sólidos o líquidos, disolventes, tensioactivos, etc.

Si se desea, dicha composición farmacéutica puede contener, además, uno o más agentes terapéuticos que, eventualmente, potencien la acción terapéutica de dicho compuesto de fórmula (I) o bien que incrementen su espectro de acción.

Dicha composición farmacéutica puede ser utilizada para prevenir y/o tratar enfermedades tumorales humanas o animales; asi como enfermedades infecciosas provocadas por parásitos patógenos de humanos o animales.

Tal como se utiliza en la presente invención el término "enfermedades tumorales" se refiere a patologías creadas por

el crecimiento de células tumorales humanas o animales, y de forma más concreta nos referimos, a titulo ilustrativo y sin que limite el alcance de la invención, al cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer de sistema nervioso central, preferentemente glioblastomas, y sarcoma.

Por tanto, en una realización concreta, dicha composición farmacéutica es una composición antitumoral y puede ser utilizada en el tratamiento de enfermedades tumorales humanas. Si se desea, dicha composición antitumoral puede contener, además, uno o más agentes antitumorales que, eventualmente, potencien la acción de dicho compuesto de fórmula (I) o bien que incrementen su espectro de acción.

En otra realización concreta, dicha composición farmacéutica es una composición antiparasitaria y puede ser utilizada en la prevención y/o el tratamiento de infecciones causadas por parásitos, por ejemplo, Tripanosoma y Leishmania. Si se desea, dicha composición antiparasitaria puede contener, además, uno o más agentes antiparasitarios que, eventualmente, potencien la acción terapéutica de dicho compuesto de fórmula (I) o bien que incrementen su espectro de acción.

El compuesto de fórmula (I) estará presente en la composición farmacéutica en una cantidad terapéuticamente eficaz, es decir, en una cantidad apropiada para ejercer su efecto terapéutico. En una realización particular, la composición farmacéutica proporcionada por esta invención, contiene entre 0,01% y 99,99% en peso de un compuesto de fórmula (I), tal como un compuesto seleccionado de la Tabla I y sus mezclas, y puede presentarse en cualquier forma farmacéutica de administración apropiada en función de la via de administración elegida, por ejemplo, oral, parenteral o tópica. Una revisión de las distintas formas farmacéuticas de administración de fármacos y de sus procedimientos de preparación puede encontrarse, por ejemplo, en el Tratado de

Farmacia Galénica, C. Fauli i Trillo, I ^a edición, 1993, Luzán 5, S.A. de Ediciones.

Por tanto, la invención también se relaciona con el empleo de un compuesto de fórmula (I) en la elaboración de un medicamento útil para el tratamiento de enfermedades tumorales humanas o animales, de enfermedades infecciosas provocadas por parásitos y neurodegenerativas. En una realización particular, dicho compuesto de fórmula (I) se selecciona de la Tabla I y sus mezclas. Asimismo, en otro aspecto, la invención también proporciona un método para prevenir y/o tratar infecciones causadas por parásitos de humanos o animales y para tratar enfermedades tumorales de humanos o animales, que comprende la etapa de administrar a un animal o a un ser humano, en necesidad de tratamiento, una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica proporcionada por esta invención.

Finalmente, otro objeto de la incención lo constituye un procedimiento para la elaboración de los compuestos de fórmula general (I) de la invención basado por las siguientes etapas, que no son necesariamente consecutivas: a) Adición del radical formado por descarboxilación oxidativa de diferentes ácidos carboxilicos a 1, 4-antraquinonas diferentemente sustituidas, para dar una amplia gama de 2- alquil- y 2, 3-dialquil-l, 4-antraquinonas . Las condiciones preferentes comprenden el uso de persulfato amónico y nitrato de plata en una mezcla de agua-dioxano, b) Generación de o-quinodimetanos a partir de derivados halogenados geminales y posterior reacción con benzoquinonas diferentemente sustituidas. Los derivados halogenados son preferentemente tri- y tetrabromuros y el o-quinodimetano se forma por reacción con yoduro sódico, c) Transformaciones químicas selectivas sobre el núcleo de 5,9- diacetoxi-1, 4-antraquinona, consistentes en hidrólisis,

alquilaciones (en particular metilaciones) , acilaciones (en particular acetilaciones) para dar lugar a una amplia gama de quinonas 5, 9-disustituidas, d) Halogenación (preferentemente cloración y bromación) selectiva de diferentes 1, 4-antraquinonas suministrando derivados monohalogenados con excelente rendimiento, e) Halogenación (preferentemente cloración y bromación) exhaustiva de diferentes 1, 4-antraquinonas mejorando, sobre todo en el caso de las cloraciones, notablemente los métodos descritos en la bibliografía, ya que no se utiliza cloro gaseoso sino cloruro de tionilo, f) Reacciones de amonolisis y aminación selectiva, consistentes en el tratamiento de monohalo- y dihalo-1,4- antraquinonas con amoniaco y aminas para dar, según las condiciones, monoamino, haloamino (sea bromo- ó cloro-) y diamino-1, 4-antraquinonas, g) Reacciones selectivas de eterificación de haloderivados por reacción con los diferentes alcóxidos en presencia ó ausencia de alúmina, h) Epoxidación de 1, 4-antraquinonas con diferentes agentes epoxidantes: ácido m-cloroperbenzoico, monoperoxiftalato de magnesio, hidroperóxido de tercbutilo, complejo urea-agua oxigenada, siendo preferibles los agentes más benignos ambientalmente como el agua oxigenada, hipoclorito sódico y lejia doméstica, e i) Apertura de los epóxidos de 1, 4-antraquinonas diferentemente sustituidas con una gran variedad de anhidridos de ácidos carboxilicos, en presencia de ácidos minerales fuertes, para dar preferentemente cis-diésteres con cadenas lineales, ramificadas y aromáticas.

DESCRIPCIóN DE LAS FIGURAS

Figura 1.- Formas ana-quinónicas y 1, 4-antraquinónicas .

Figura 2.- Síntesis de 9-hidroxi-, 9-acetoxi- y 9-metoxi-l, 4- antraquinona .

Figura 3.- Síntesis de alquil- y dialquil-1, 4-antraquinonas por adición de radicales libres. Figura 4. - Ruta de los o-quinodimetanos para la generación de 1, 4-antraquinonas .

Figura 5.- Transformaciones selectivas de 5, 9-diacetoxi-l, 4- antraquinonas (94). Figura 6.- Síntesis de mono- y dihalo-1, 4-antraquinonas Figura 7.- Cloración de 9-hidroxi-l, 4-antraquinona

Figura 8,- Haloéteres de quinona . Síntesis del producto natural 2, 3-dimetoxi~9-hidroxi-l, 4-antraquinona

Figura 9.- Síntesis de monoamino-, bromoamino-, cloroamino- y diamino-1, 4-antraquinona Figura 10.- Formación de epóxidos de 1, 4-antraquinona Figura 11.- Apertura de epóxidos de 1, 4-antraquinona Figura 12.- Actividad biológica de los compuestos de la invención en la linea celular CNIO AA a las 72 horas Figura 13.- Actividad biológica de los compuestos de la invención en la linea celular CNIO AA a las 96 horas

Figura 14- Actividad biológica de los compuestos de la invención en la linea celular PC3 a las 72 horas Figura 15.- Actividad biológica de los compuestos de la invención en la linea celular PC3 a las 96 horas Figura 16.- Actividad biológica de los compuestos de la invención en la linea celular MCF7 a las 96 h.

Figura 17.- Actividad biológica de los compuestos de la invención en la linea celular A549 y NCI-H-460 a las 96 h. Figura 18- Actividad biológica de los compuestos de la invención en la linea celular SF268 a las 96 h.

EJEMPLOS DE REALIZACIóN

Los compuestos de la presente invención representativos de la fórmula general I que se han sintetizado, y

posteriormente utilizado en los ensayos se describen en la Tabla I siguiente (el número del compuesto es identificativo del mismo a lo largo del documento de la presente invención que está indicado entre paréntesis tras el nombre del compuesto) .

Tabla 1 . Compuestos de la presente invención

Como ejemplos no limitativos se describen los siguientes: Ejemplo 1.- 2-cloro-l, 4-antraquinona (1)

Se burbujeó cloro gaseoso a una disolución de 1, 4-antraquinona

(1Og, 48mmol) en ácido acético (25OmI) y se agitó durante 30 min. a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió sobre hielo y se filtró. El sólido amarillo se lavó con agua destilada (4 x 10OmI) y se secó para dar la 2, 3-dicloro-2, 3- dihidro-1, 4-antraquinona. Este producto se agitó con acetato de sodio en cloroformo durante 12h a temperatura ambiente, se filtró y se secó para dar 1 como un sólido amarillo (12g, 43mmol, 91%); p.f. 222-223°C, pureza 99% (HPLC). λ^ (MeOH) 375, 355, 268.

Vm _ax (KBr) /can ^"1 1711, 1617, 1268, 1180, 761 ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 4.82 (s, IH, H ₃ ), 7.78 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 8.10(m, 2H, H ₅ , H ₈ ), 8.70 (s, 2H, H ₉ ó Hi ₀ ), 8.76 (s, 2H, H ₉ ó H ₁₀ ) . m/z (IE) 243, 207.

Análisis elemental calculado para Ci ₄ H ₇ ClO ₂ : C, 69.30; H, 2.91; Cl, 14.61; hallado: 68.95; H, 3.12; Cl, 13.85.

Ejemplo 2.- 2-cloro-9-hidroxi-l , 4-antraquinona y 3-cloro-9- hidroxi-1, 4-antraquinona (2)

Se burbujeó cloro gaseoso a una disolución de 9-hidroxi-l, A- antraquinona (1Og, 44.6mmol) en ácido acético (25OmI) y se agitó durante 30 min. a temperatura ambiente. La mezcla se vertió sobre hielo y se filtró. El sólido rojo se lavó con agua destilada (4 x 10OmI) y se secó para dar la 2,3-dicloro- 2, 3-dihidro-9~hidroxi-l, 4-antraquinona. Este producto se agitó con acetato de sodio en cloroformo durante 12h a temperatura ambiente, se filtró y se secó para dar una mezcla inseparable de los dos regioisómeros 2-cloro-9-hidroxi-l, 4- antraquinona y 3-cloro-9-hidroxi-l, 4-antraquinona en una proporción molar de 1:2 como sólido rojo (12g, 43 mmol, 86%).

v _max (KBr) /cm ^"1 3435, 2927, 1705, 1632, 1382, 1258, 761

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 7.25 (s, IH, H ₂ ó H ₃ ) , 7.26 (s, IH, H ₂ ó H ₃ ) , 7.75 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 7.96 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) , 8.12 (s, 2H, H ₁₀ ) , 8.22 (s, 2H, H ₁₀ ) , 8.49 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) , 13.69 (s, cambia con D ₂ O, OH), 13.58 (s, cambia con D ₂ O, IH, OH), m/z (IE) 258, 229.

Análisis elemental calculado para C ₁₄ H ₇ ClO ₃ : C, 64.99; H, 2.71;

Cl, 13.71; hallado: C, 66.15; H, 2.44; Cl, 13.85%.

Ejemplo 3.- 2-cloro-9-metoxi-l,4-antraquinona y 3-cloro-9- metoxi-1, 4-antraquinona (3)

Se agitó la mezcla de regioisómeros (2) (Ig, 4.5mmol) con yoduro de metilo (2ml) y óxido de plata (I) (5g, 22mmol) en cloroformo (2OmI) durante 24h a temperatura ambiente. Se filtró el óxido de plata y se concentró el crudo de reacción in vacuo. Se purificó por cromatografía en gel de silice empleando cloroformo como eluyente para obtener una mezcla de los dos regioisómeros (3) en proporción 1:2 como un sólido naranja (l.lg, 90%).

^ _3x (MeOH) 421, 344.

Va ₁₈ * (KBr) /cm ^"1 1666, 1611, 1580, 1419, 1342, 1289, 1256, 1090,

941.

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 7.25 (s, IH, H ₂ ó H ₃ ) , 7.26 (s, IH, H ₂ ó H ₃ ) , 7.80 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) , 7.96 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) , 8.05 (m, 2H,

H ₆ , H ₇ ) , 8.46 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ) , 8.53 (s, IH, H _i0 ) , 8.61 (s, IH,

Hi ₀ ) • m/z (IE) 272, 243.

Análisis elemental calculado para Ci ₅ HgClO ₃ : C, 66.06; H, 3.30; Cl, 13.00; hallado: C, 65.79; H, 3.15; Cl, 12.85%.

Ejemplo 4.- 2 ,3-dicloro-l , 4-antraquinona (4)

Método A. Se añadió piridina (14ml, 144mmol) a una disolución de 1, 4-antraquinona (5g, 24mmol) y SOCl ₂ (8.9ml, 120mmol) en cloroformo (20OmI) agitando a reflujo durante 1Oh. Se añadió bicarbonato sódico a la mezcla de reacción hasta pH básico y precipitó el producto como un sólido amarillo que se lavó con agua destilada (3 x 5OmI) y etanol (3 x 5OmI) y se secó para dar la 2, 3-dichloro-l, 4-antraquinona (5.3g, 19.2mmol, 80%), pureza del 99% (HPLC) . Método B. Se burbujeó cloro gaseoso a una disolución de 1,4- antraquinona (5g, 24mmol) en ácido acético (25OmI) durante 5 min. agitando a reflujo. Se continuó la agitación durante otros 20 min. y se repitió el burbujeo de cloro durante otros 5 min. Se repitió este proceso hasta completa desaparición del producto de partida, comprobada por cromatografía en gel de silicede capa fina. El proceso duró entre 5 y 7 dias. La mezcla de reacción se vertió en agua y se filtró el producto, lavándolo con agua destilada (3 x 5OmI) y etanol (3 x 3OmI) y secándolo para obtener 4 como cristales planos amarillos (5.85g, 20mmol, 80%), p.f. 299-301°C; pureza del 99% (HPLC). A _1113x (MeOH) 232 (4.74), 287 (4.38), 421 (3.38). V _aax (KBr) /cm ^"1 1675, 1617, 1285, 1216, 859, 761.

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 7.78 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 8.10 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ), 8.76 (s, 2H, H ₉ , Hi ₀ ) . m/z (IE) 276, 241, 213.

Análisis elemental calculado para Ci ₄ HeCl ₂ O ₂ : C, 66.65; H, 2.17; Cl, 25.59; hallado: C, 59.89; H, 2.60; Cl, 25.81%.

Ejemplo 5.- 3 , 10-dicloro-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (5) Se burbujeó cloro gaseoso a una disolución de 9-hidroxi-l, 4- antraquinona (4g, 17.9mmol) en ácido acético (10OmI) durante 3h agitando a reflujo. La mezcla de reacción se vertió sobre agua y se filtró el producto. El sólido obtenido fue

cromatografiado para dar 5 (4.1g, 15mmol, 83%), p.f. 241- 243°C; pureza del 99% (HPLC) .

V _1n ^ (KBr) /cπf ¹ 3043, 1671, 1655, 1624, 1582, 1729, 1157, 931, 755 ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 7.90 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 8.56 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ), 8.74 (s, 2H, H ₉ ó H ₁₀ ), 8.78 (s, 2H, H ₉ ó H ₁₀ ), 14.82 (s, cambia con D ₂ O, IH) . m/z (IE) 292, 257.

Análisis elemental calculado para Ci ₄ H ₆ Cl ₂ O ₃ : C, 57.34; H, 2.06; Cl, 25.59; hallado: C, 57.21; H, 2.60; Cl, 25.81%.

Ejemplo 6.- 3, 10-dicloro-9-metoxi-l ,4-antraquinona (6)

Se agitó la 3, 10-dicloro-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (5) (2g, 6.8minol) con yoduro de metilo (2ml) y óxido de plata (I) (5g, 22mmol) en cloroformo (4OmI) durante 24h a temperatura ambiente. Se filtró el óxido de plata y se concentró el crudo de reacción al vacio. Se purificó por cromatografia en gel de sílice empleando cloroformo como eluyente para dar el producto 6 como un sólido naranja (1.82g, 0.6mmol, 90%), p.f. 147- 149°C; pureza del 99% (HPLC) . v _max (KBr) /can ^"1 1676, 1648, 1615, 1488, 1395, 1332, 1332, 1244, 1098, 947, 939, 761

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 4.09 (s, 3H, OCH ₃ ), 7.19 (s, IH, H ₂ ), 7.84 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 8.70 (m, IH, H ₅ ó H ₈ ) , 8.71 (m, IH, H ₅ ó H ₈ ) .

Ejemplo 7.- 2 ,3-dicloro-9-metoxi-l , 4-antraquinona (7)

Se añadió piridina (14ml, 144mmol) a una disolución de 9- metoxi-1, 4-antraquinona (5g, 21mmol) y SOCl ₂ (8.9ml, 120mmol) en cloroformo (10OmI) agitando a reflujo durante 1Oh. La mezcla de reacción se vertió sobre agua y se añadió bicarbonato sódico hasta pH básico. Se extrajo con cloroformo

(3 x 10OmI) y se secó con sulfato sódico. El residuo fue

concentrado in vacuo y cromatografiado para dar 7 (130mg, 0.42ItImOl, 2 %), p.f. 231-232°C, pureza del 99% (HPLC). λ^ (MeOH) 440, 292. IeTl, 1262, 1098, 948, 755. ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 4.12 (s, 3H, OCH ₃ ) , 7.75 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ) , 8.05 (m, IH, H ₅ ó H ₈ ) , 8.40 (m, IH, H ₅ ó H ₈ ) , 8.56 (s, IH,

Hio) •

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 63.4, 117.0, 125.0, 127.2, 127.8, 130.4, 130.5, 130.9, 131.9, 135.7, 143.3, 146.2, 160.9, 174.0, 176.4. m/z (IE) 306, 277, 241.

Análisis elemental calculado para Ci ₅ H ₈ Cl ₂ O ₃ : C, 58.63; H, 2.60; Cl, 23.09; hallado: C, 58.55; H, 2.30; Cl, 23.22%.

Ejemplo 8.- 2-bromo-l ,4-antraquinona (8)

Se añadió bromo (2.52ml, 49 mmol) a una disolución de 1,4- antraquinona (1Og, 48mmol) en ácido acético (15OmI) y se agitó durante 30 min. a temperatura ambiente. La mezcla se vertió sobre hielo y se filtró. El sólido amarillo se lavó con agua destilada (4 x 5OmI) para dar la 2, 3-dibromo-2, 3-dihidro-l, 4- antraquinona . Este producto se agitó a reflujo en etanol (100 mi) durante 2h para dar 8 como cristales amarillo-dorados (12g, 44mmol, 92%) p.f. 227-228°C; pureza 99% (HPLC). pureza del 99% (HPLC) . K _∞ (MeOH) 414, 283, 229.

V _1113x (KBr)ZCm ^"1 1674, 1616, 1269, 888, 758.

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 7.56 (s, IH, H ₃ ) , 7.78 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ) , 8.10 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) , 8.68 (s, IH, H ₉ ó H ₁₀ ) , 8.72 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) • m/z (IE) 286, 207.

Análisis elemental calculado para Ci ₄ H ₇ BrO ₂ : C, 58.54; H, 2.44; Br, 27.83; hallado: C, 58.61; H, 2.70; Br, 28.31%.

Ejemplo 9.- 2-bromo-9-hidroxi-l ,4~antraquinona (9)

Se añadió bromo (3.1ml, 62 mmol) a una disolución de 9- hidroxi-1, 4-antraquinona (1Og, 31.6mmol) en ácido acético

(15OmI) y se agitó durante 30 min. a temperatura ambiente. La mezcla se vertió sobre hielo y se filtró. El sólido amarillo se lavó con agua destilada (4 x 5OmI) para dar la 2,3-dibromo-

2, 3-dihidro-9-hidroxi-l, 4-antraquinona como un sólido amarillo. Este producto se agitó a reflujo en etanol (100 mi) durante 2h para dar 9 como cristales amarillo-dorados (12g, 44 mmol, 92%) p.f. 128-129°C, pureza 98% (HPLC). K _ax (MeOH) 480, 288.

Vm _a xíKBrϊ/cm ^"1 3467, 1665, 1579, 1257, 758.

¹ H-NMR δ 7.56 (s, IH, H ₃ ), 7.70 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 7.91 (m, IH, H ₅ ó H ₈ ), 8.19 (s, IH, Hi ₀ ), 8.45 (m, IH, H ₅ ó H ₈ ), 13.56 (s, cambia con D ₂ O, IH, OH) .

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 107.5, 122.7, 125.2, 127.4, 130.8, 131.7, 131.8, 136.0, 140.6, 141.6, 142.4, 163.4, 181.3, 181.9. m/z (IE) 302, 240. Análisis elemental calculado para Ci ₄ H ₇ BrO ₃ : C, 55.48; H, 2.33; Br, 26.36; hallado: C, 54.98; H, 3.09; Br, 26.22%.

Ejemplo 10.- 2-bromo-9-metoxi-l , 4-antraquinona (10)

Se agitó la 2-bromo-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (9) (2g, 6.6mmol) con yoduro de metilo (2ml) y óxido de plata (I) (5g, 22mmol) en cloroformo (40ml) durante 24h a temperatura ambiente. Se filtró el óxido de plata y se concentró el crudo de reacción al vacio. Se purificó por cromatografía en gel de sílice empleando cloroformo como eluyente para dar el producto 10 como un sólido naranja (1.96g, 6.2mmol, 94%), p.f. 165- 166°C; pureza 99% (HPLC) . K _ax (MeOH) 425, 285. V _max (KBr) /can ^"1 1669, 1611, 1421, 1399, 1339, 1251, 751.

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 4.05 (s, 3H, OCH ₃ ) , 7.55 (s, IH, H ₃ ) , 7.74 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ) , 8.03 (m, IH, H ₅ ó H ₈ ) , 8.40 (m, IH, H ₅ ó H ₈ ) , 8.42 (s, IH, H ₁₀ ) .

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 62.0, 117.1, 124.9, 125.8, 129.9, 130.5, 130.6, 131.7, 135.7, 140.2, 143.4, 143.5, 160.6, 176.0, 182.0. m/z (IE) 316, 302, 289.

Análisis elemental calculado para Ci ₅ HgBrOs: C, 56.78; H, 2.84; Br, 25.20; hallado: C, 56.55; H, 2.50; Br, 25.33%.

Ejemplo 11.- 2 ,3-dibromo-1 ,4-antraquinona (11)

Se añadió bromo (4.44ml, 86 iranol) a una disolución de 1,4- antraquinona (6g, 28.8mmol) en ácido acético (25OmI) y se agitó durante 30 min. a temperatura ambiente y luego a reflujo durante 3h. La mezcla se vertió sobre hielo y se filtró. El sólido obtenido se lavó con agua destilada (3 x 5OmI) y etanol (3 x 5OmI) y se secó para dar 11 como un sólido amarillo- dorado (9g, 25.9mmol, 90%), p.f. 247-248°C; pureza del 98% (HPLC) . 7^ _x (MeOH) 234 (4.76), 289 (4.43), 302 (4.40), 409 (3.80). Vmax (KBr) /can ^'1 1669, 1615, 1275, 1045, 758.

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 7.74 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 8.11 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ), 8.75 (s, 2H, H ₉ , H ₁₀ ) . m/z (IE) 366, 287, 257. Análisis elemental calculado para Ci ₄ H ₆ Br ₂ O ₂ : C, 58.74; H, 2.10; Br, 43.66; hallado: C, 58.71; H, 2.31; Br, 43.80%.

Ejemplo 12.- 2 ,3-dibromo-9-hidroxi-l , 4-antraquinona (12)

Se añadió bromo (4.44ml, 86 mmol) a una disolución de 9- hidroxi-1, 4-antraquinona (1Og, 26.3mmol) en ácido acético (15OmI) y se agitó durante 30 min. a temperatura ambiente y luego a reflujo durante 4h. La mezcla se vertió sobre hielo y se filtró, lavándolo con etanol varias veces. El sólido

obtenido se recristalizó de cloroformo para dar 12 como cristales de color rojo brillante (8.6g, 22.6mmol, 87%), p.f. 273-274°C; pureza 98% (HPLC) . λ _max (MeOH) 238 (4.63), 285 (4.28), 467 (3.86). V _1n ^ (KBr) /cπf ¹ 3458, 1667, 1619, 1545, 1264, 1193, 851, 767.

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 7.75 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 7.98 (d, IH, H ₅ ó H ₈ ), 8.23 (s, IH, Hi ₀ ), 8.48 (d, IH, H ₅ ó H ₈ ), 13.47 (s, cambia con D ₂ O, IH, OH) .

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 107.2, 116.4, 124.9, 125.2, 125.6, 127.6, 130.1, 130.7, 132.1, 135.7, 144.5, 163.9, 175.1, 179.9. m/z (IE) 382, 303, 273.

Análisis elemental calculado para Ci ₄ H ₆ Br ₂ O ₃ : C, 44.02; H, 1.58; Br, 41.83; hallado: C, 43.65; H, 1.80; Br, 41.59%.

Ejemplo 13.- 2 , 3-dibromo-9-metoxi-l, 4-antraquinona (13)

Se agitó la 2, 3-dibromo-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (12) (2g, 5.3mmol) con yoduro de metilo (2ml) y óxido de plata (I) (5g, 22mmol) en cloroformo (4OmI) durante 24h a temperatura ambiente. Se filtró el óxido de plata y se concentró el crudo de reacción al vacio. Se purificó por cromatografía en gel de silice empleando cloroformo como eluyente para dar el producto 13 como un sólido rojo (1.88g, 4.77mmol, 90%), p.f. 224-225°C; pureza 99% (HPLC) . K _∞ (MeOH) 440, 292. V _a13x (KBr) /cπf ^x 1668, 1651, 1612, 1254, 1091, 942, 755.

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 4.04 (s, 3H, OCH ₃ ), 7.73 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 8.05 (m, IH, H ₅ ó H ₈ ) , 8.41 (m, IH, H ₅ ó H ₈ ) , 8.55 (s, IH,

Hio) •

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75MHz) δ 63.4, 116.8, 125.0, 127.5, 127.6, 130.3, 130.5, 130.9, 131.8, 135.6, 142.1, 146.0, 161.0, 173.9, 175.9. m/z (IE) 396, 379, 367, 317, 287.

Análisis elemental calculado para Ci ₅ HsB^Os: C, 43.98; H, 1.57; Br, 40.36; hallado: C, 43.65; H, 1.80; Br, 40.61%.

Ejemplo 14.- 2-bromo-3-metoxi-9-hidroxi-l,4-antraquinona y 3- bromo-2-metoxi-9-hidroxi-l,4-antraquinona (14)

Se añadió una disolución de sodio (53mg, 2.3mmol) en metanol seco (recién destilado, 2ml) a una disolución de 2, 3-dibromo- 9-hidroxi-l, 4-anthraquinona (13) (400mg, 1.05iranol) en metanol seco (recién destilado, 2OmI) agitando a temperatura ambiente durante 30min. La mezcla de reacción se vertió sobre agua y se neutralizó con ácido clorhídrico IM. Se extrajo con cloroformo (3 x 3OmI) y las fases orgánicas combinadas se secaron, evaporando el disolvente in vacuo. El residuo fue cromatografiado empleando cloroformo como eluyente para dar 14 como un sólido naranja (305mg, 87%), p.f. 169-170°C. λ _max (MeOH) 238 (4.65), 282 (4.30), 450 (3.94). v _max (KBr) /cm ^"1 3435, 1653, 1558, 1258, 1067, 788, 760. ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 4.32 (s, 3H, OCH ₃ ), 7.71 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 7.92, (d, IH, H ₅ , H ₈ ), 8.12 (s, IH, H ₁₀ ), 8.44 (d, IH, H ₅ , H ₈ ), 13.47 (s, cambia con D ₂ O, IH, OH).

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 62.1, 107.8, 123.2, 124.9, 125.1,

126.0, 127.6, 129.4, 130.5, 131.8, 135.9, 160.0, 163.5, 177.7,

182.8. m/z (IE) 332, 253, 238, 223, 195. Análisis elemental calculado para Ci ₅ H ₉ BrO ₄ : C, 54.05; H, 2.70; Cl, 23.99; hallado: C, 53.98, H, 2.53%.

Ejemplo 15.- 2 , 3-dimetoxi-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (15)

Se añadió óxido de aluminio (2g) y fluoruro de potasio (Ig) a una disolución de 2, 3~dibromo-9-hidroxi-l, 4-anthraquinona (13) (Ig, 2.62mmol) en metanol (recién destilado, 80ml) agitando a reflujo durante 12h. La mezcla de reacción se vertió sobre agua destilada, se neutralizó con ácido clorhídrico IM y se

extrajo con cloroformo (4 x 2OmI) . Las fases orgánicas combinadas fueron secadas y el disolvente evapordao Ln vacuo. El residuo fue cromatografiado en gel de silice empleando cloroformo como eluyente para dar 15 como un sólido naranja (βOOmg, 81%), p.f. 164-16β°C.

A^ _ax (MeOH) 233 (4.68), 285 (4.34), 288 (4.71), 456 (3.90). ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 500MHz) δ 4.31 (s, 3H, OCH ₃ ), 4.32 (s, 3H, OCH ₃ ), 7.71 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 7.92, (d, IH, H ₅ ó H ₈ ), 8.12 (s, IH, Hi ₀ ), 8.42 (d, IH, H ₅ ó H ₈ ), 13.52 (s, cambia con D ₂ O, IH, OH) .

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 62.1, 107.8, 123.2, 124.9, 125.1,

126.0, 127.6, 129.4, 130.5, 131.8, 135.8, 160.0, 163.5, 177.8,

182.8. m/z (IE) 284, 269, 255, 213. Análisis elemental calculado para Ci ₆ Hχ ₂ θ ₅ : C, 67.61; H, 4.23; hallado: C, 67.78; H, 4.02.

Ejemplo 16.- 2-cloro-3-metoxi-l,4-antraquinona (16)

Se añadió una disolución de sodio (33mg, 1.44mmol) en metanol seco (recién destilado, ImI) a una disolución de 2,3-dicloro- 1, 4-antraquinona (4) (400mg, 1.44mmol) en metanol seco (recién destilado, 2OmI) agitando a temperatura ambiente durante 24h. La mezcla de reacción se vertió sobre agua y se neutralizó con ácido clorhídrico IM. Se extrajo con cloroformo (4 x 25ml) y las fases orgánicas combinadas se secaron, evaporando el disolvente Ln vacuo. El residuo fue cromatografiado empleando cloroformo como eluyente para dar 16 como un sólido amarillo (280mg, 57%), p.f. 198-200 ⁰ C; pureza del 99% (HPLC). V _ax (MeOH) 230 (4.92), 285 (4.72), 288 (4.71 ), 410 (3.61). v _max (KBr) /cπf ¹ 1669, 1616, 1586, 1458, 1266, 875, 756.

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 4.35 (s, 3H, OCH ₃ ), 7.72 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 8.08 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ), 8.66 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ), 8.70 (s, IH, H ₉ ó Hαo) •

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 62.3, 127.6, 127.8, 129.8, 130.1, 130.2, 130.4, 130.6, 135.2, 135.4, 158.5, 178.7, 179.7. m/z (IE) 272, 243, 207.

Análisis elemental calculado para Ci ₅ H ₉ ClO ₃ : C, 66.07; H, 3.33; Cl, 13.00; hallado: Cl, 12.87.

Procedimiento general para la sintesis de 2-amino-

1,4. antraquinonas

Se añadieron 4 eq. de la amina correspondiente a una disolución de 2-bromo-l, 4-antraquinona (0.5g, 1.75mmol, leq. ) en cloroformo (2OmI) agitando a temperatura ambiente durante 2-12h. El crudo de reacción se concentró in vacuo y luego se cromatografió empleando cloroformo o una mezcla de cloroformo- acetato de etilo como eluyente para dar la 2-amino-l, 4- antraquinona con rendimientos del 70-95%.

Ejemplo 17. - 2- (2 ' , 4 ' -diclorobencil) -amino-1 , 4-antraquinona (25)

P.f. 266-267°C, pureza del 99% (HPLC). λ _max (MeOH) 410, 308, 295.

V _Xa3x (KBr)ZCm ^"1 3435, 3314, 1673(-CH=O), 1603, 1507, 1265, 1219,

756.

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 4.54 (d, 2H, CH ₂ Ar) , 5.88 (s, IH, H ₃ ) ,

6.40 (s, ancho, IH, NH) , 7.28 (s, 2H, Ar) , 7.50 (s, IH, Ar) , 7.70 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ) , 8.08 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) , 8.64 (s, IH, H ₉ ó

H ₁₀ ) , 8.68 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) . m/z (IE) 381, 264, 246, 254.

Análisis elemental calculado para C ₂ IHi ₃ Cl ₂ NO ₂ : C, 65.99; H,

3.43; Cl, 18.55; N, 3.66; hallado: C, 60.97; H, 3.55; Cl, 18.33; N, 3.42.

Ejemplo 18.- 2-aziridinil-l , 4-antraquinona (26)

P.f. 181-182°C, pureza del 99% (HPLC).

7^ _3x (MeOH) 407 , 298 . v _max (KBr) /cπf ¹ 3467, 3323, 1675 (-CH=O) , 1586, 1575, 1493, 753. ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 2.25 (s, 4H, CH ₂ NCH ₂ ), 6.40 (s, IH, H ₃ ), 7.70 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 8.10 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ), 8.68 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ), 8.72 (s, IH, H ₉ ó H ₁₀ ) . m/z (IE) 249, 234, 222.

Análisis elemental calculado para Ci ₆ Hi ₁ NO ₂ : C, 77.11; H, 4.45; N, 5.62; hallado: C, 76.98; H, 5.35; N, 5.62.

Procedimiento general para la sintesis de 2-amino-3-bromo-l, 4- antraguinonas

Se añadieron 4 eq. de la amina correspondiente a una disolución de 2, 3-dibromo-l, 4-antraquinona (11) (0.5g, 1.37mmol, leq. ) en cloroformo (2OmI) agitando a temperatura ambiente durante 2-24h. El crudo de reacción se concentró in vacuo y luego se cromatografió empleando cloroformo como eluyente para dar la 2-amino-3-bromo-l, 4-antraquinona con rendimientos del 60-95%.

Procedimiento general para la sintesis de 2 ,3-diamino-l , 4- antraquinonas

Una disolución de 2, 3-dibromo-l, 4-antraquinona (11) (0.5g, 1.37mmol, leq.) en la amina correspondiente (empleada como disolvente) se agitó a reflujo durante 4h. El crudo de reacción se concentró in vacuo y luego se cromatografió empleando cloroformo como eluyente para dar la 2,3-diamino- 1, 4-antraquinona con rendimientos del 70-85%.

Ejemplo 19.- 2-bromo-3-picolilamino-l, 4-antraquinona (29) Rendimiento 93%, p.f. 195-196°C; pureza del 97% (HPLC).

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 5.27 (d, 2H, NCH ₂ ), 7.60 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 8.00 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ), 8.03 (m, IH, Ar), 8.61 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) , 8.64 (s, IH, H ₉ ó H _xo ) , 8.67 (s, IH, Ar).

m/z (IE) 394, 313.

Ejemplo 20.- 2-bromo-3-bencilamino-l, 4-antraquinona (30)

Rendimiento 66%, p.f. 177-178°C; pureza del 99%. V _113x (KBr) /can ^"1 3726, 1476, 1583, 1567, 1295, 1188, 760.

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 30OMHz) δ 7.38 (m, 5H, Ar) , 7.60 (m, 2H, H ₆ ,

H ₇ ) , 8.00 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) , 8.62 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) , 8.64 (s, IH,

H ₉ ó Hi ₀ ) .

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 49.9, 127.1, 128.1, 128.3, 128.5, 128.6, 129.2, 129.5, 129.6, 130.1, 130.3, 130.4, 130.4, 130.5,

130.8, 134.5, 136.0, 138.3, 147.9, 176.7, 179.8. m/z (IE) 391, 312.

Análisis elemental calculado para C ₂ iHi ₄ BrNO ₂ : C, 64.30; H,

3.60; Br, 20.37; N, 3.57; hallado: C, 64.12; H, 3.51; Br, 20.71; N, 3.57.

Ejemplo 21.- 2-bromo-3-piperidinil-l,4-antraquinona (33)

Rendimiento 63%, p.f. 266-267°C; pureza del 91% (HPLC) . v _max (KBr) /can ^"1 2935, 1669, 1615, 1552, 1277, 761. ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 1.80 (m, 6H, Ar) , 3.58 (m, 4H, Ar) ,

7.65 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ) , 8.00 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) , 8.62 (s, IH, H ₉ ó

H ₁₀ ) , 8.65 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) .

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 24.1, 26.8, 53.4, 118.4, 127.5,

128.3, 128.6, 129.0, 129.4, 129.5, 129.9, 134.5, 135.1, 154.7, 178.0, 181.5. m/z (IE) 369, 290.

Análisis elemental calculado para Ci ₉ Hi ₆ BrNO ₂ : C, 61.64; H,

4.36; Br, 21.58; N, 3.78; hallado: C, 60.78; H, 3.97; Br,

21.91; N, 3.93.

Ejemplo 22.- 2-bromo-3- (4 ' -fluorobencil) -amino-1, 4- antraquinona (34)

Rendimiento 62%, p.f. 202-203°C; pureza del 99% (HPLC).

V _max (KBr) /can ^"1 3277, 1676, 1582, 1509, 1296, 1188, 756. ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 7.07 (m, 2H, Ar) , 7.32 (m, 2H, Ar) , 7.60 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ) , 8.00 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) , 8.61 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) , 8.65 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) . ¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 48.5, 76.7, 115.6, 116.1, 126.6, 127.9, 128.9, 129.1, 129.4, 129.5, 130.0, 130.0, 130.1, 133.7, 134.2, 135.6, 161.2, 163.7, 176.4, 179.4. m/z (IE) 409, 330.

Análisis elemental calculado para C _2I Hi ₃ BrFNO ₂ : C, 61.48; H, 3.19; Br, 19.48; F, 4.63; N, 3.61; hallado: C, 61.41; H, 3.02; N, 3.63.

Ejemplo 23.- 2-bromo-3- (4 ' -clorobencil) -amino-1 , 4-antraquinona (35) Rendimiento 62%, p.f. 202-203 ⁰ C; pureza del 95% (HPLC).

V ₁ Oa _x (KBr)ZCaIi ^'1 3427, 3293, 1672, 1586, 1569, 1515, 1300, 1254,

757.

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 7.29-7.39 (m, 4H, Ar) , 7.60 (m, 2H,

H ₆ , H ₇ ) , 8.00 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) , 8.61 (s, IH, H ₉ ó H ₁₀ ) , 8.65 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) .

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 49.0, 128.3, 129.4, 129.6, 129.6,

129.9, 130.4, 130.5, 134.3, 134.6, 136.0, 136.9, 147.8, 176.8,

179.9. m/z (IE) 427, 346. Análisis elemental calculado para C ₂₁ Hi ₃ BrClNO ₂ : C, 59.11; H,

3.07; Br, 18.73; Cl, 8.31; N, 3.28; hallado: C, 63.73; H,

3.28; N, 3.68.

Ejemplo 24.- 2 , 3-bis (pirazolil) -1,4-antraquinona (36) P.f. 286-288°C; pureza del 97% (HPLC) .

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 6.48 (m, 2H, Ar) , 7.57 (d, 2H, Ar) , 7.79 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ) , 7.92 (d, 2H, Ar) , 8.14 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) , 8.78 (s, IH, H ₉ , H ₁₀ ) .

m/z (IE) 340 , 233 .

Análisis elemental calculado para C2 ₀ H ₁ 2N ₄ O ₂ : C, 70.58; H, 3.55; N, 16.46; hallado: C, 69.99; H, 7.58; N, 16.25.

Ejemplo 25.- 2- (2 ' , 4 ' -diclorobencil) -amino-3-bromo-l ,4- antraquinona (37)

Rendimiento 85%, p.f. 203-204°C; pureza del 97% (HPLC).

V _max (KBr) /cπf ¹ 1673, 1630, 1590, 1489, 1428, 882.

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 7.25-7.43 (m, 3H, Ar), 7.60 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 8.00 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ), 8.61 (s, IH, H ₉ ó H ₁₀ ), 8.64 (s,

IH, H ₉ ó Hi ₀ ) . m/z (IE) 461, 380, 344.

Análisis elemental calculado para C ₂ IHi ₂ BrCl ₂ NO ₂ : C, 54.70; H,

2.62; Br, 17.33; Cl, 15.38; N, 3.04; hallado: C, 54.25; H, 3.57; N, 4.27.

Ejemplo 27.- 2-aziridinil-3-bromo-l, 4-antraquinona (39)

Rendimiento 70%, p.f. 215-21β°C; pureza del 97% (HPLC). 1674, 1664, 1560, 1274, 761. ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 2.64 (s, 4H, NCH ₂ CH ₂ ), 7.60 (m, 2H,

H ₆ , H ₇ ), 8.00 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ), 8.54 (s, IH, H ₉ ó H ₁₀ ), 8.62 (s,

IH, H ₉ ó H ₁₀ ) .

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 30.8, 122.7, 127.3, 127.4, 129.3,

129.4, 129.6, 129.8, 130.0, 134.5, 135.0, 156.0, 177.1, 178.5. m/z (IE) 329, 300, 248, 221.

Análisis elemental calculado para Ci ₆ Hi ₀ BrNO ₂ : C, 58.56; H,

3.07; Br, 24.35; N, 4.27; hallado: C, 58.39; H, 3.03; Br,

24.61; N, 4.45.

Ejemplo 28.- 2-bromo-3-morfolinil-l, 4-antraquinona (40)

Rendimiento 79%, p.f. 172-173°C; pureza del 97% (HPLC). V _1113x (KBr)ZCm ^"1 3436, 1672, 1616, 1277, 991, 752.

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 3.68-3.90 (m, 8H, NCH ₂ CH ₂ ), 7.60 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 8.00 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ), 8.54 (s, IH, H ₉ ó H ₁₀ ), 8.62 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) • m/z (IE) 371, 314, 292, 207. Análisis elemental calculado para Ci _S Hi ₄ BrNOs: C, 58.08; H, 3.79; Br, 21.47; N, 3.76; hallado: C, 50.98; H, 3.66; N, 3.71.

Ejemplo 29.- 2- (2 ' -clorobencil) -amino-3-bromo-l,4-antraquinona (41) Rendimiento 60%, p.f. 212-214°C; pureza del 97% (HPLC).

V _n13x (KBr)ZCm ^"1 3436, 1672, 1616, 1277, 991, 752.

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 3.68-3.90 (m, 8H, NCH ₂ ), 7.60 (m, 2H,

H ₆ , H ₇ ), 8.00 (na, 2H, H ₅ , H ₈ ), 8.54 (s, IH, H ₉ ó H _i0 ) , 8.62 (s,

IH, H ₉ ó Hi ₀ ) • ¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 52.2, 120.0, 127.3, 128.0, 128.9,

129.3, 129.7, 129.7, 130.0, 130.4, 134.6, 135.1, 153.5, 178.0,

181.2. m/z (IE) 371, 314, 292, 207.

Análisis elemental calculado para C ₂ χHi ₃ ClBrNO ₂ : C, 59.11; H, 3.07; N, 3.28; hallado: C, 59.40, H, 2.96. N, 3.55.

Procedimiento general para la sintesis de 2-amino-3-cloro-l,4- antraquinonas

Se añadieron 2 eq. de la amina correspondiente a una disolución de 2, 3-dicloro-l, 4-antraquinona (4) (0.5g, l.δmmol, leq. ) en cloroformo (2OmI) agitando a temperatura ambiente durante 2-24h. El crudo de reacción se concentró in vacuo y luego se cromatografió empleando cloroformo como eluyente para dar la 2-amino-3-cloro-l, 4-antraquinona con rendimientos del 60-90%.

Ejemplo 30.- 2-aziridinil-3-cloro-l,4-antraquinona (42)

P.f. 213-214°C; pureza del 98% (HPLC).

v _max (KBr) /can ^"1 3435, 3000, 1676 (-CH=O) , 1564, 1278, 756. ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 2.61 (s, 4H, NCH ₂ CH ₂ ) , 7.65 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ) , 8.02 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) , 8.61 (s, IH, H ₉ ó H ₁₀ ) , 8.63 (s, IH, H ₉ ó H ₁₀ ) . ¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 30.1, 127.4, 127.8, 128.9, 129.1, 129.5, 129.5, 129.5, 129.8, 130.1, 130.1, 134.6, 135.1, 153.7, 177.2, 179.0. m/z (IE) 283, 248, 221.

Análisis elemental calculado para C ₁₆ H ₁₀ CINO ₂ : C, 67.75; H, 3.55; Cl, 12.50; N, 4.94; hallado: C, 66.98; H, 3.47; Cl, 12.66; N, 4.94.

Ejemplo 31.- 2-cloro-3-bencilamino-l , 4-antraquinona (43)

P.f. 202-203°C; pureza del 94% (HPLC) . V _a3x (KBr) /cm ^"1 3276, 1674 (-CH=O) , 1586, 1296, 761.

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 5.09 (s, 2H, NCH ₂ ) , 7.37 (m, 5H, Ar) ,

7.68 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ) , 8.02 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) , 8.62 (s, IH, H ₉ ó

Hi ₀ ) , 8.65 (s, IH, H ₉ ó H ₁₀ ) .

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 48.9, 126.6, 126.7, 127.7, 128.0, 128.3, 128.6, 129.0, 129.1, 129.7, 129.8, 130.0, 130.0, 130.1,

134.1, 135.6, 137.9, 145.2, 176.7, 179.8. m/z (IE) 347, 312.

Análisis elemental calculado para C ₂ IHi ₄ ClNO ₂ : C, 72.52; H,

4.06; Cl, 10.19; N, 4.03; hallado: C, 72.24; H, 4.01; Cl, 19.42; N, 4.17.

Ejemplo 32.- 2-cloro-3-pirrolidinil-l, 4-antraquinona (45)

P.f. 158-159°C; pureza del 96% (HPLC). v _max (KBr) /cm ^"1 2974, 1674(-CH=O), 1613, 1531, 1272, 762. ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 1.96 (m, 4H, CH ₂ CH ₂ ), 4.02 (m, 4H, CH ₂ NCH ₂ ), 7.60 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 8.00 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ), 8.42 (s, IH, H ₉ ó H ₁₀ ), 8.57 (s, IH, H ₉ ó H ₁₀ ).

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 25.7, 54.1, 113.6, 127.5, 128.3, 128.4, 128.7, 128.7, 129.3, 129.8, 129.8, 134.1, 135.3, 150.7, 176.9, 182.5. m/z (IE) 311, 276, 207. Análisis elemental calculado para Ci ₇ Hi ₂ ClNO ₂ : C, 69.35; H, 4.53; Cl, 11.37; N, 4.49; hallado: C, 69.50; H, 4.51; Cl, 13,75; N, 3.75.

Ejemplo 33.- 2-cloro-3-piperidinil-l , 4-antraquinona (46) P.f. 166-167°C; pureza del 96% (HPLC).

V ₁ ^ (KBr) /cm ^"1 2974, 1674(-CH-O), 1613, 1531, 1272, 762.

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 1.76 (m, 6H, CH ₂ CH ₂ CH ₂ ), 3.58 (m, 4H,

CH ₂ NCH ₂ ), 7.60 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 8.00 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ), 8.42 (s,

IH, H ₉ ó Hi ₀ ) , 8.57 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) . ¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 24.2, 26.9, 124.4, 127.9, 128.3,

128.4, 129.0, 129.4, 129.5, 129.9, 130.0, 134.5, 135.1, 152.0,

177.9, 181.7 m/z (IE) 325, 290, 260, 207.

Análisis elemental calculado para C19H16CINO2: C, 70.05; H, 4.95; Cl, 10.88; N, 4.30; hallado: C, 80.94; H, 5.15; N, 4.96.

Ejemplo 34.- 2-cloro-3-morfolinil-l , 4-antraquinona (47)

P.f. 197-198°C; pureza del 97% (HPLC).

V _n ^ (KBr) /cm ^"1 3436, 2855, 1673(-CH=O), 1559, 1281, 993, 752. ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 3.67 (t, 4H, NCH ₂ ), 3.89 (t, 4H, OCH ₂ ),

7.60 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 8.00 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ), 8.42 (s, IH, H ₉ ó

H ₁₀ ), 8.57 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) .

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 125.4, 127.7, 128.1, 128.6, 129.3,

129.6, 129.7, 130.0, 130.0, 134.6, 135.1, 150.8, 177.8, 181.4. m/z (IE) 327, 292, 270, 207.

Análisis elemental calculado para C _I8 H _I4 CINO _S : C, 65.96; H,

4.31; Cl, 10.82; N, 4.27; hallado: C, 64.91; H, 4.23; N, 4.29.

Ejemplo 35.- 2-cloro-3- (4 ' -clorobencil) -amino-1 , 4-antraquinona (48)

P.f. 240-241°C; pureza del 88% (HPLC) .

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 5.07 (d, 2H, NCH ₂ ) , 6.33 (s, IH, NH) , 7.68 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ) , 8.02 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) , 8.60 (s, IH, H ₉ ó

Hi ₀ ) , 8.64 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) .

Análisis elemental calculado para C ₂₁ H ₁₃ CI ₂ NO ₂ : C, 65.94; H,

3.43; Cl, 18.55; N, 3.66; hallado: C, 65.87. H, 3.24; Cl,

21.04; N, 4.29.

Ejemplo 36. - 2-cloro-3- (2 ' -clorobencil) -amino-1 , 4-antraquinona

(49)

P.f. 213-214°C; pureza del 91% (HPLC).

V _n ^ _x (KBr) /cπf ¹ 3302, 1671(-CH=O) , 1587, 1303, 755. ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 5.07 (d, 2H, NCH ₂ ) , 7.31 (m, 2H, Ar) ,

7.42 (m, 2H, Ar) , 7.68 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ) , 8.02 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) ,

8.60 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) , 8.64 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) .

Análisis elemental calculado para C ₂ IHi ₃ Cl ₂ NO ₂ : C, 65.94; H,

3.43; Cl, 18.55; N, 3.66; hallado: C, 65.95; H, 3.19; N, 3.93.

Ejemplo 37.- 2-cloro-3- (4 ' -fluorbencil) -amino-1 , 4-antraquinona

(50)

P.f. 204-206°C; pureza del 95% (HPLC).

¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 5.07 (d, 2H, NCH ₂ ) , 6.33 (s, ancho, IH, NH) , 7.01 (m, 2H, Ar) , 7.34 (m, 2H, Ar) , 7.68 (m, 2H, H ₆ ,

H ₇ ) , 8.02 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) , 8.60 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) , 8.64 (s, IH,

H ₉ ó H10 ) •

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 48.3, 115.8, 116.1, 126.6, 128.3,

128.7, 129.2, 129.4, 129.5, 129.9, 130.0, 130.0, 130.1, 133.7, 134.2, 135.7, 145.1, 160.8, 164.1, 176.7, 179.9. m/z (IE) 365, 329.

Análisis elemental calculado para C ₂ IHi ₃ ClFNO ₂ : C, 68.95; H,

3.58; N, 3.83; hallado: C, 70.96; H, 3.49; N, 4.08.

Ejemplo 38.- 2-cloro-3- (2 ' -picolilamino) -1,4-antraquinona (52)

P.f. 213-214°C; pureza del 96% (HPLC).

V _max íKBrJ/cm ^"1 3434, 3260, 1671(-CH=O), 1587, 1290, 752 ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 5.22 (d, 2H, NCH ₂ ) , 7.20 (m, 2H, Ar) ,

7.66 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ) , 7.71 (t, IH, NH) , 8.01 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ) ,

8.58 (s/ IH, H ₉ ó Hi ₀ ) , 8.62 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) , 8.64 (m, 2H,

Ar) .

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 48.3, 115.8, 116.1, 126.6, 128.3, 128.7, 129.2, 129.4, 129.5, 129.9, 130.0, 130.0, 130.1, 133.7,

134.2, 135.7, 145.1, 160.8, 164.1, 176.7, 179.9. m/z (IE) 347, 330, 312, 294, 254.

Análisis elemental calculado para C _2O Hi ₄ ClN ₂ O ₂ : C, 68.87; H,

3.76; Cl, 10.16; N, 8.03; hallado: C, 68.57. H, 3.69; Cl, 3.80; N, 9.68.

Ejemplo 39.- 2-etoxi-3-imidazolil-l, 4-antraquinona (53)

P.f. 189-190°C.

V _1Oax (KBr) /cm ^"1 1668, 1655, 1312, 1240, 761. ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 300MHz) δ 1.32 (m, 3H, CH ₃ ) , 4.48 (m, 2H, OCH ₂ ) ,

7.32 (m, 2H, Ar) , 7.79 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ) , 7.86 (s, IH, Ar) , 8.14

(m, 2H, H ₅ , H ₈ ) , 8.66 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) , 8.69 (s, IH, H ₉ ó Hi ₀ ) .

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 15.7, 70.7, 120.8, 127.0, 127.4,

128.5, 128.7, 129.4, 129.4, 129.9, 130.1, 130.3, 134.9, 135.2, 138.9, 153.4, 179.8, 180.9. m/z (IE) 347, 330, 312, 294, 254.

Análisis elemental calculado para C ₂₀ H ₁₄ CIN ₂ O ₂ : C, 68.87; H,

3.76; Cl, 10.16; N, 8.03; hallado: C, 68.57. H, 3.69; Cl,

3.80; N, 9.68.

Ejemplo 40.- 9-acetoxi-l , 4-antraquinona (59)

Se calienta a 70°C con fuerte agitación magnética una suspensión de 2g de 9-hidroxi-l, 4-antraquinona (58) en lOml de

anhídrido acético y llml de piridina. La suspensión cambia del color rojo inicial a marrón oscuro, separándose del medio de reacción un sólido naranja. Al cabo de 20 minutos se deja enfriar y se filtra el precipitado, lavándolo después con agua. Se seca y se obtienen 1.95g (82%).

El producto recristaliza de benceno-hexano dando escamas amarillas de p.f. 200-202°C (d. ) ; p.f. bibl 200 ⁰ C (d. ) . Ka _x (CHCl ₃ ) 251 (4.12), 288 (4.13), 299 (4.22), 323h (3.51), 415 (3.75). V _1113x (nujol) /cm ^"1 3072 (d, C-H aromático), 1772 (f, C=O éster fenólico), 1672 y 1661 (f, C=O quinona) , 1612 (f) , 1587 (d) , 1571 (m,C=C aromático), 1290, 1196, 1163, 1101 y 1075 (f, C- 0) , 858 (f) , 817 (m) , 766 (f) . ¹ H-RMN (CDCl ₃ , 100 MHz) δ 6.91 y 6.98 (2H, sistema AB JlO.4Hz, H ₂ , H ₃ ), 7.59 - 7.86 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ), 7.96 - 8.29 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 8.56 (s, IH, H ₁₀ )

¹³ C-RMN (CDCl ₃ , 25 MHz) δ 183.7 (C ₄ ), 183.1 (C ₁ ), 168.7 (CH ₃ COO), 147.7 (C ₉ ), 141.1 (C ₃ ), 138.4 (C ₂ ), 135.3 (Ci _Oa ) , 130.0 (C _4a , C ₅ , C ₆ , C ₇ ), 128.5 (s, C ₈ J , 126.9 (C ₁₀ ), 123.6 (C ₈ ), 117.8 (C _9a ), 21.1 (CH ₃ CO) m/z (IE) 266 (3, M ⁺ ), 224 (100, M ~. CH ₂ ^" . CO), 196 (6).

Ejemplo 41.- 1 , 4-antraquinona (60)

En un matraz de tres bocas provisto de agitación magnética, refrigerante de reflujo y entrada de Argón se suspenden 4g

(16.7mmol) de quinizarina en 10OmI de metanol. Se añaden poco a poco, y con fuerte agitación, 4.5g (llδmmol) de borohidruro sódico, de manera que la temperatura de la mezcla de reacción no sobrepase los 15-20 ⁰ C. Después de dos horas, la disolución se vierte sobre 10OmI ácido acético glacial y finalmente sobre

500ml de agua. Se filtra el precipitado marrón aparecido y, una vez seco, se purifica por cromatografía en columna seca de gel de silice (CHCl ₃ ) obteniéndose asi 2.8g (81%) de la 1,4-

antraquinona. El producto se recristaliza de benceno-hexano (agujas amarillas), p.f. 222°C-223°C; p.f. bibl . 220-222°C. λ _max (CHCl ₃ ) 250 (4.12), 27βh (3.88), 289 (4.14), 300 (4.22), 319h (3.52) , 414 (3.68) . v _max (mijol) /can ^"1 3060 (d, C-H aromático), 1677 (f, C=O quinona) , 1609 y 1591 (m, C=C aromático), 1307 (f) , 1146 y 1062 (m) , 857 y 771 (f)

¹ H-RMN (CDCl ₃ , 100 MHz) δ 7.08 (s, 2H, H ₂ , H ₃ ), 7.94 - 8.31 (m, 2H, H ₅ , H ₈ ), 7.52 - 7.87 (m, 2H, H ₆ , H ₇ ), 8.64 (s,2H, H ₉ y Hi ₀ ) ¹³ C-RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 184.3 (C ₁ y C ₄ ), 139.8 (C ₂ y C ₃ ), 134.6 (C _8a y ClO _a ), 130.0 (C ₅ y C ₈ ), 129.3 (C ₆ y C ₇ ), 128.6 (C ₉ y Ci ₀ ), 128.2 (C _4a y C ₉ J . m/z (IE) 208 (100, M ⁺ ), 180 (24, M ^" CO) .

Ejemplo 42.- 9-metoxi-l, 4-antraquinona (61)

Se disuelven 5g de 9-hidroxi-l, 4-antraquinona en 300ml de cloroformo recién destilado sobre K ₂ CO ₃ . Después se añaden 15ml de yoduro de metilo y 5g de óxido de plata (I), y la mezcla, protegida de la luz, se calienta a reflujo suave con agitación magnética. Al cabo de 6h se añaden 1OmI de yoduro de metilo y 3g de óxido de plata (I) y después de otras 15h, Ig de óxido de plata (I) y 5ml de yoduro de metilo. Al cabo de 32 horas de reacción se deja enfriar y se filtra el óxido de plata, lavándolo repetidas veces con cloroformo. Una vez evaporado el disolvente, se obtiene un sólido anaranjado que se tritura con 70ml de metanol, recogiéndose por filtración 4,5g de 9-metoxi-l, 4-antraquinona (61) pura. El residuo de las aguas madres se filtra por una columna corta de gel de sílice (CHCl ₃ ), obteniéndose 0.7g adicionales de 61. Rendimiento 98%. Se recristaliza de benceno-hexano (agujas amarillo anaranjadas) o de etanol (agujas naranjas), p.f. 185-18β°C; p.f. bibl. 184°C.

λ^ (CHCl ₃ ) 246 (4.22), 26Oh (4.01), 289h (4.03), 300 (4.09),

324h (3.51) , 424 (3.73) .

Vm _ax (nujoD/cπf ¹ 3071 (d, C-H aromático) , 1672 y 1656 (f, C=O quinona) , 1615 (f ) , 1582 (m, C=C aromático) , 1306 (f ) , 1287 (f, a, C-O) , 1160 (m) , 1116, 1079, 1011, 855, 821 y 761(f)

¹ H-RMN (CDCl ₃ , 100 MHz) δ 6.99 (s, 2H, H ₂ , H ₃ ) , 7.88 - 8.15 (m,

IH, H ₅ ) . 8.28 - 8.55 (m, IH, H ₈ ) , 7.55-7.88 (m, 2H, H ₆ y H ₇ ) ,

8.43 (s, Hi ₀ ) , 4.11 (s, CH ₃ O) .

¹³ C-RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 184.3 (C ₄ ) , 183.4 (Ci) , 159.1 (C ₉ ) , 141.6 (C ₃ ) , 137.8 (C ₂ ) , 135,5 (Ci _Oa ) , 131.6 (C _4a ) , 130.1 (C ₅ ) ,

129.9 (C ₆ ó C ₇ ) , 129.5 (C _8a ) , 125.1 (C ₈ ) , 124.6 (C ₁₀ ) , 118.3

(C ₉ J , 62.9 (CH ₃ O) . m/z (IE) 238 (100, M ⁺ ) , 224 (5) , 221 (13, M ~ OH) , 209 (43, M

CHO) .

Ejemplo 43.- 2-metil-l, 4-antraquinona (62)

A una disolución de α, α, α' , α' -tetrabromo-o-xileno (4.372 g, lOmmol, leq. ) y toluquinona (2.519 g, 20mmol, 2.2eq.) en DMF (7OmI) se añadió yoduro sódico (10 g, 66.7mmol, 6.7eq.) y se agitó a 70°C protegido de la luz y en atmósfera de argón. Se hicieron tres adiciones más de toluquinona (750mg) cada dos horas y se agitó manteniendo la temperatura durante otras 14h. Se vertió sobre hielo y se añadió bisulfito sódico. Se filtró y se lavó con agua para obtener el producto que luego fue cromatografiado en gel de silice, empleando cloroformo como eluyente (1.152 g, 52%).

Recristalización de acetato de etilo dio la antraquinona como agujas de color naranja, p.f. 196-8°C; pureza del 99%, (HPLC). ^ _ax (CHCl ₃ ) 409 (4.00), 298 (4.47), 286 (4.42), 268 (4.50). V _max (KBr) /can ^"1 1667 (C=O), 1616 (C=C arom. ) .

¹ H RMN (CDCl ₃ , 300 MHz) δ 2.22 (d, 3 H, J 1.5Hz, CH ₃ ), 6.90 (q, 1 H, J 1.5Hz, H ₃ ), 7.61~7.67 (m, 2 H, H ₆ , H ₇ ), 7.99~8.03 (m, 2 H, H ₅ , H ₈ ), 8.53 (s, 1 H, H ₉ ), 8.56 (s, 1 H, H ₁₀ ).

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 16.7 (CH ₃ ), 128.3 (C ₉ ), 128.8, 128.7 (C ₉ . ,C ₉ -), 128.8 (C _í o), 129.3, 129.3 (C ₆ , C ₇ ), 130.0, 130.1 (C ₅ , C ₈ ), 134.6, 134.7 (C ₁₀ ., C ₁₀ -) , 137.1 (C ₃ ), 149.6 (C ₂ ), 184.5 (Ci) , 185.1 (C ₄ ) . m/z (IE) 222 (100%, M ⁺ ), 207 (3, M ⁺ - CH ₃ ).

Procedimiento general para la adición de radicales a quinonas

A una disolución de liranol del sustrato en 50ml de una mezcla de acetonitrilo-agua, 2:1, se añaden 4 equivalentes del ácido correspondiente y se agita a reflujo. A continuación se añade el nitrato de plata (0.4 equivalentes) y se continúa la agitación hasta completa disolución. Se burbujea argón a través de la disolución. Sólo entonces se inicia la adición lenta de persulfato amónico (2eq. ) en agua (5ml) , a través de un embudo de adición, que se prolonga durante una hora aproximadamente. Se continúa la agitación a reflujo hasta desaparición completa del sustrato de partida comprobada por cromatografía de capa fina. La mezcla de reacción se enfria a temperatura ambiente y se añade agua. Se extrae con cloroformo (3 x 2OmI) y la fase orgánica se lava con bicarbonato sódico

(2OmI) , agua (3 x 2OmI) y con disolución saturada de cloruro sódico (2OmI) . Se seca sobre sulfato sódico y se evapora el disolvente para dar el crudo de reacción. Los productos de la reacción se separan por cromatografía en gel de silice, empleando cloroformo como eluyente.

Ejemplo 44.- 2-etil-l , 4-antraquinona (63)

Rendimiento: 33%. Recristalización de acetato de etilo-hexano dio la antraquinona como agujas de color naranja, p.f. 137- 139°C; pureza del 99%, (HPLC) .

Ka _x (CHCl ₃ ) 410 (3.42), 365 (3.63), 297 (4.14), 270 (4.66). Vmax (KBr) /cirf ¹ 1664 (C=O), 1615 (C=C arom. ) .

¹ H RMN (CDCl ₃ , 300 MHz) δ 1.22 (t, 3 H, J 7.5Hz, CH ₃ ) , 2.64 (q, 2 H, J 7.5Hz, CH ₂ ) , 6.84 (d, 1 H, J 1.4Hz, H ₃ ) , 7.62~7.64 (m, 2 H, H ₅ , H ₈ ) , 7.98~7.99 (m, 2 H, H ₆ , H ₇ ) , 8.51 (s, 1 H, H ₉ ) , 8.54 (s, 1 H, H ₁₀ ) . ¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 11.8 (CH ₃ ) , 22.8 (CH ₂ ) , 128.2 (C ₉ ) , 128.6 (C _CU at) , 128.7 (C _cuat ) , 128.8 (Ci ₀ ) , 129.2, 129.3 (C ₆ , C ₇ ) , 130.0, 130.1 (C ₅ , C ₈ ) , 134.6, 134.7 (C _cuat ) , 135.3 (C ₃ ) , 154.5 (C ₂ ) , 184.7 (C ₄ ) , 184.8 (Ci) . m/z (IE) 236 (100%, M ⁺ ) , 208 (24, M ⁺ ~ . Et + H) . Análisis elemental calculado para Ci ₆ Hi ₂ O ₂ : C, 81.34; H, 5.12%; hallado: C, 80.97; H, 5.30%.

Ejemplo 45.- 2-tercbutil-l, 4-antraquinona (66)

Rendimiento: 20%. Recristalización de acetato de etilo dio la antraquinona como agujas de color naranja, p.f. 152-4 °C; pureza del 98%, (HPLC) . X _103x (CHCl ₃ ) 406 (3.82) , 298 (4.36) , 285 (2.30) , 268 (4.34) .

Vma _x (KBr) /can ^"1 1663 (C=O) , 1620 (C=C arom. ) .

¹ H RMN (CDCl ₃ , 300 MHz) δ 1.40 (s, 9 H, C(CH ₃ ) ₃ ) , 6.92 (s, 1 H, H ₃ ) , 7.59~7.63 (m, 2 H, H ₆ , H ₇ ) , 7.97~ 8.00 (m, 2 H, H ₅ ,

H ₈ ) , 8.49 (s, 1 H, H ₉ ) , 8.53 (s, 1 H, Hi ₀ ) . ¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 29.10 (3 x Me) , 35.86 (Ci ₅ ) , 127.65

(C ₉ ) , 128.19 (C ₉ -) , 129.11 (Ci ₀ ) , 129.14, 129.19 (C ₆ , C ₇ ) ,

129.88 (C ₉ O , 129.95, 130.00 (C ₅ , C ₈ ) , 134.46 (C _í o») , 134.89 (CioO , 135.30 (C ₃ ) , 159.67 (C ₂ ) , 184.41 (C ₄ ) , 185.44 (Ci) . m/z (ES) 265 [M ⁺ + 1] , 287 [M ⁺ + 23] .

Análisis elemental calculado para Ci ₈ Hi ₆ O ₂ : C, 81.79; H, 6.10%; hallado: C, 81.48; H, 5.98%.

Ejemplo 46.- 2-p-metoxibencil-l , 4-antraquinona (69)

Rendimiento: 16%. Pureza del 84%, (HPLC).

¹ H RMN (CDCl ₃ , 500 MHz) δ 3.80 (d, 3 H, J 1.6Hz, CH ₃ ), 3.89 (s,

2 H, CH ₂ ), 6.68 (q, 1 H, J 1.4Hz, H ₃ ), 6.89 (dd, 2 H, J 8.5,

1.4Hz, H ₀ -p _h ) , 7.33 (d, 2 H, J 8.5Hz, H _m _ _Ph ) , 7.62~7.70 (m, 2 H, H ₆ , H ₇ ) , 8.00~8.04 (m, 2 H, H ₅ , H ₈ ) , 8.57 (s, 1 H, H ₉ ) , 8.63 (s, 1 H, H ₉ ) . m/z (IE) 328 (100%, M ⁺ ) , 297 (39, M ⁺ - OCH ₃ ) .

Procedimiento general para la epox±dac±ón de quinonas

A una disolución de la 1, 4-antraquinona correspondiente

(linmol) en tetrahidrofurano (3OmI) se añade agua oxigenada al

33% (3ml, 30eq. ) , carbonato potásico (152mg, l.leq.) y se agita a temperatura ambiente hasta completa desaparición del producto de partida comprobada por capa fina. Se añade agua

(3OmI) y se extrae con cloroformo (3 x 2OmI) . Las fases orgánicas combinadas se lavan con agua (3 x 3OmI) y disolución saturada de cloruro sódico (3OmI) , se secan con sulfato de sodio anhidro y se evapora el disolvente ín vacuo para dar el crudo de reacción. La purificación se lleva a cabo por cromatografía en gel de sílice, empleando cloroformo como eluyente.

Ejemplo 47.- 2 ,3-epoxi-2 ,3-dihidro-l, 4-antraquinona (75)

Rendimiento: 80%. Recristalización de acetona dio el epóxido como agujas cortas color rosa pálido, p.f. 164-6°C; pureza del

100%, (HPLC) .

K _B ^ (MeOH) 222 (4.52) , 273 (4.73) , 370 (3.69) . v _max (KBr) /cm ^"1 1692 (C=O) , 1620 (C=C arom. ) , 1289 (C-O) .

¹ H RMN (CDCl ₃ , 300 MHz) δ 4.06 (s, 2 H, H ₂ , H ₃ ) , 7.67 (dd,

2 H, J 6.2, 3.1Hz, H ₆ , H ₇ ) , 8.00 (dd, 2 H, J 6.2, 3.1Hz, H ₅ ,

H ₈ ) , 8.50 (s, 2 H, H ₉ , H ₁₀ ) .

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 56.0 (C ₂ , C ₃ ) , 127.9 (C ₉ ., C ₉ ") , 129.4 (C ₉ , C ₁₀ ), 129.6 (C ₆ , C ₇ ) , 129.9 (C ₅ , C ₈ ) , 135.2 (C ₁₁ , C ₁₂ ) ,

190.7 (C ₁ , C ₄ ) • m/z (IE) 224 (100%, M ⁺ ) , 196 (35, M ⁺ - CO) , 155 (94, M ⁺ -

C ₃ HO ₂ ) .

Análisis elemental calculado para Ci ₄ H ₈ O ₃ : C, 75.00; H, 3.60%; hallado: C, 74,71; H, 3.91%.

Ejemplo 48.- 2 , 3-epoxi-2,3-dihidro-9-metoxi-l, 4-antraquinona (76)

Rendimiento: 84%. Recristalización de acetona dio el epóxido como pequeños cubos de color amarillo pálido, p.f. 123-124°C; pureza del 100%, (HPLC) .

V ₁ ^ (KBr) /cπf ¹ 1687 (C=O) , 1617 (C=C arom. ) , 1267 (C-O) . λ _tt a _x (MeOH) 225 (4.46) , 274 (4.53) , 372 (3.71) .

¹ H RMN (CDCl ₃ , 300 MHz) δ 4.05 (s, 2 H, H ₂ , H ₃ ) , 4.07 (s, 3 H,

OMe) , 7.64~7.71 (m, 2 H, H ₆ , H ₇ ) , 7.9β~7.99 (m, 1 H, H ₅ ) , 8.26

(s, 1 H, Hi ₀ ) , 8.32~8.36 (1 H, m, H ₈ ) .

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 56.2 (C ₃ ) , 56.4 (C ₂ ) , 63.8 (OMe) , 117.9 (Ci ₃ ) , 124.3 (C ₈ ) , 124.8 (Ci ₀ ) , 128.9 (Ci ₂ ) , 129.4 (C ₅ ) ,

129.8 (C ₇ ) , 130.0 (C ₆ ) , 131.5 (Ci ₄ ) , 135.7 (Cn) , 159.0 (C ₉ ) ,

190.7 (C ₄ ) , 191.2 (Ci) . m/z (IE) 254 (83%, M ⁺ ), 225 (50%, M ⁺ - CO - H ⁺ ), 197 (35, M ⁺ -

2 x CO - H ⁺ ) , 183 (32, M ⁺ - 2 x CO - Me) , 155 (59, M ⁺ - 3 x CO - Me) , 126 (100) .

Análisis elemental calculado para Ci ₅ Hi ₀ O ₄ : C, 70.9, H, 4.0%; hallado: C, 68.71; H, 3.80%.

Ejemplo 49.- 2,3-epoxi-2-etil-3-hidro-l,4-antraquinona (77) Rendimiento: 85%. Recristalización de etanol dio el epóxido como agujas blancas, p.f. 120 - 122°C; pureza del 97%, (HPLC). λ^ _ax (MeOH) 375 (3.76), 359 (3.64), 278 (4.79).

V _1Uax (KBr)ZCm ^"1 1694 (C=O) , 1620 (C=C arom.) , 1279 (C-O) .

¹ H RMN (CDCl ₃ , 300 MHz) δ 1.08 (t, 3 H, J 7.6Hz, CH ₃ ) , 2.02 (dq, 1 H, J 14.8, 7.6Hz, CH _A H _B CH ₃ ) , 2.02 (dq, I H, J 14.8,

7.6Hz, CH _A H _B CH ₃ ) , 3.89 (s, 1 H, H ₃ ) , 7.59~7.65 (m, 2 H, H ₆ , H ₇ ) ,

7.93~8.00 (m, 2 H, H ₅ , H ₈ ) , 8.43 (s, 1 H, H ₉ ) , 8.48 (s, 1 H,

Hi ₀ ) •

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 8.5 (CH ₂ CH ₃ ), 21.4 (CH ₂ CH ₃ ), 60.4 (C ₃ ), 65.3 (C ₂ ), 128.2 (C _cuat ) , 128.8 (C ₉ ), 129.4 (C ₁₀ ), 129.5, 129.5 (C ₆ , C ₇ ), 129.7, 129.8 (C ₅ , C ₈ ), 134.9, 135.2 (C ₁₀ ., C ₁₀ -), 191.7 191.9 (C ₁ , C ₄ ) . m/z (IE) 252 (75%, M ⁺ ), 237 (12, M ⁺ - Me), 223 (100, M ⁺ - Et), 209 (30, M ⁺ - Et - O + 2 H ⁺ ) .

Ejemplo 50.- cis-2 ,3-diacetoxi-2 ,3-dihidro-l ,4-antraquinona (74) A una suspensión de 2, 3-epoxi-2, 3-dihidro-l, 4-antraquinona

(246mg, l.lmmol, leq. ) en anhídrido acético (5ml) se añadió ácido sulfúrico concentrado (0.4ml, 6.4πunol, 5.8eq.) y se agitó a temperatura ambiente durante 1.5h. Se vertió sobre hielo y se filtró el sólido obtenido, lavándolo con agua hasta pH neutro. Se recristalizó de etanol para obtener el producto como finas fibras blancas (323 mg, 90%), p.f. 222-224°C; pureza del 100%, (HPLC) .

K _3x (MeOH) 217 (4.69), 233 (4.51), 257 (4.43), 340 (4.23). v _max (KBr) /cm ^"1 1752 (COO), 1704 (C=O), 1618 (C=C arom. ) , 1238 (C-O) .

¹ H RMN (CDCl ₃ , 300 MHz) δ 2.30 (s, 6 H, OCOMe), 6.04 (s, 2 H, H ₂ , H ₃ ), 7.76 (dd, 2 H, J 6.2, 3.3Hz, H ₆ , H ₇ ), 8.11 (dd, 2 H, J 6.2, 3.3Hz, H ₅ , H ₈ ), 8.70 (s, 2 H, H ₉ , H _i0 ) . ¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 20.5 (Me), 74.5 (C ₂ , C ₃ ), 128.7 (Ci ₃ , C ₁₄ ), 129.9 (C ₉ , C ₁₀ ), 130.1 (C ₅ , C ₈ ), 130.2 (C ₆ , C ₇ ), 135.4 (C ₁₁ , Ci ₂ ), 169.7 (COO), 188.5 (Ci, C ₄ ). m/z (IE) 326 (33%, M ⁺ ), 255 (37, M ⁺ - COCOCH ₃ + H ⁺ ), 224 (76, M ⁺ - OAc - Ac) , 196 (100, M ⁺ - COCOCH ₃ - OAc) .

Ejemplo 52.- 2 ,3-epoxi-3-hidro-2-metil-l, 4-antraquinona (89)

Rendimiento: 89%. Recristalización de etanol dio el epóxido como agujas blancas, p.f. 190-192°C; pureza del 99.4%, (HPLC).

ta _ax (MeOH) 375 (3.71) , 358 (3.56) , 295h (3.90) , 278 (4.73) , 27Oh (3.25) . v _max (KBr) /can ^"1 1696 (C=O) , 1618 (C=C) , 1270 (C-O) . ¹ H RMN (CDCl ₃ , 300 MHz) δ 1.78 (s, 3 H, Me) , 3.91 (s, 1 H, H ₃ ) , 7.66~7.69 (m, 2 H, H ₆ , H ₇ ) , 8.01~8.03 (m, 2 H, H ₅ , H ₈ ) , 8.49 (s, 1 H, H ₉ ) , 8.54 (s, 1 H, Hi ₀ ) .

¹³ C RMN (CDCl ₃ , 75 MHz) δ 15.1 (CH ₃ ) , 62.4 (C ₃ ) , 128.5 (C _cuat ) , 128.6 (C _ouat ) , 129.2 (C ₉ ), 129.7, 129.8 (C ₆ , C ₇ ) , 129.8 (Ci ₀ ) , 130.0 (C ₅ , C ₈ ) , 135.3, 135.5 (Ci ₀ ', Ci ₀ -) , 191.9 (C ₄ ) , 192.0 (C ₁ ) . m/z (IE) 238 (100, M ⁺ ) , 223 (69, M ⁺ - Me) .

Ejemplo 53.- 5-hidroxi-l,4-antraquinona (91)

Se obtiene como subproducto en la reacción de formación de 5- acetoxi-1, 4-antroquinona (90). La muestra analítica de 91 se prepara filtrando por columna de gel de silice (CHCl ₃ -AcOEt 9:1) el producto de la reacción obtenido anteriormente. Se elimina el eluyente y se tritura el sólido con un poco de éter. Se filtra y se seca a 0,5mmHg. Polvo de color rojo, de p.f. > 310 ⁰ C λ _max (CHCl ₃ ) 251 (4.75), 294 (3.83), 305 (3.88), 328h (3.65), 349h (3.34) , 460 (3.78) . v _max (nujol) /can ^'1 3390 (d, 0-H fenol), 1668 (f, C=O quinona) , 1618 y 1305 (f) , 1288, 1135 y 1055 (m, C-O), 969 (d) , 846 y 755 (m).

¹ H-RMN (CDCl ₃ , 100 MHz) (acetona-d ₆ ) δ 7.10 (s, 2H en C ₂ , C ₃ ) , 7.17 (dd, J 7.0, J 1.5Hz, H ₆ ) , 7.42 - 7.82 (m, H ₇ , H ₈ ) , 8.52 (s, H ₉ ) , 9.00 (s, Hi ₀ ) , 9.80 (s, a, OH intercambia con D ₂ O) . (DMSO-d ₆ ) δ 7.12 (s, H ₂ H ₃ ) , 7.14 (m, H ₆ ) , 7.45-7.78 (m, H ₇ , H ₈ ) , 8.48 (s, H ₉ ) , 8.79 (s, IH, Hi ₀ ) . m/z (IE) 224 (100, M ⁺ ) , 196 (11, M ~.CO) .

Análisis elemental calculado para Ci ₄ H ₈ O ₃ : C, 75.30; H, 3.73; hallado: C, 75.00; H, 3.60.

La estructura de la 5-hidroxi-l, 4-antraquinona (91) se comprobó también por vía química, hidrolizando la 5-acetoxi- 1, 4-antraquinona (90) con ácido clorhídrico en dioxano.

Ejemplo 54.- 5-metoxi~l,4-antraquinona (93)

Se disuelven 90mg (0.4mmol) de 5-hidroxi-l, 4-antraquinona (91) en 50ml de acetona seca y se agregan 70mg (0.51mmol) de carbonato potásico y 5ml de yoduro de metilo. La suspensión formada se somete a reflujo suave con agitación magnética. A los 30 minutos la mezcla se enfría, se filtran las sales potásicas y se elimina el disolvente obteniéndose un sólido que se filtra por una columna corta de gel de sílice (CHCI ₃ ) . Una vez evaporado el eluyente, se obtienen 80mg (84%) de 93 que recristaliza en benceno-hexano en forma de agujas naranjas, p.f. 268-270°C (d. ) λ _na* (CHCl ₃ ) 251 (4.70), 292 (3.86), 303 (3.92), 324h (3.70), 349h (3.29) , 448 (3.76) .

V _max (nujolj/cπf ¹ 3069 (d, C-H aromático); 1672 (f, C=O quinona) ; 1618 (f); 1601 y 1573 (m, C=C aromático); 1304 y 1273 (f,C-O); 1148 y 1012 (m, C-O); 850; 792 y 750 (m) .

¹ H-RMN (CDCl ₃ , 100 MHz) δ 4,06 (s, 3H, CH ₃ O), 6.92 - 7.02 (m, IH, H ₆ ), 7.05 (s, 2H, H ₂ , H ₃ ), 7.55 - 7.67 (m, 2H, H ₇ , H ₈ ), 8.54 (s, IH, H ₉ ), 9.07 (s, IH, H ₁₀ ). m/z (IE) 238 (100, M ⁺ ), 223 (15,ItI-CH ₃ ) , 195 (34). Análisis elemental calculado para C ₁₅ Hi ₀ O ₃ : C, 75.63; H, 4.23, hallado: C, 75.53; H, 3.97.

Ejemplo 55.- 5-acetoxi-9-hidroxi-l , 4-antraquinona (95)

Método A (a partir de 5, 9-diacetoxi-l, 4-antraquinona (94)): Se introducen en un matraz provisto de agitación magnética y enfriando exteriormente con baño de hielo, 4,54g de 5,9- diacetoxi-1, 4-antraquinona (94) y se añaden 70ml de ácido trifluoracético comercial. Una vez que cesa la reacción

exotérmica se retira el baño, dejando que el proceso transcurra a temperatura ambiente. La reacción se controla por cromatografía de capa fina (CH ₃ Cl: AcOEt, 8:1). A los 75 minutos de reacción se añaden 5ml de ácido trifluoracético y cuando ya no queda producto de partida, a las 3 horas de reacción, se vierte la mezcla sobre 11 de agua-hielo y se recoge por filtración el precipitado. Se lava repetidas veces con agua y se seca, asi se obtienen 3,9g (99%) del producto

(95) que recristaliza de etanol-heptano en forma de agujas rojo anaranjadas de p.f. 179-180 ⁰ C.

Método B (a partir de 5, 9-dihidroxi-l, 4-antraquinona (97)): Se disuelven 800mg de 5, 9-dihidroxi-l, 4-antraquinona (97) en 250ml de acetona con 0,5ml de piridina y se añaden, con fuerte agitación magnética y durante una hora, 25ml de anhídrido acético. Al cabo de dos horas se observa en cromatografía por capa fina (CHCl ₃ : AcOEt, 4:1) que se ha consumido todo el producto de partida apareciendo un nuevo producto naranja de mayor Rf que 97 y una pequeña cantidad de 5, 9-diacetoxi-l, 4- antraquinona (94) . La mezcla de reacción se vierte sobre 11 de agua salada-hielo y se filtra el precipitado rojo. Este producto se purifica por cromatografía en columna a baja presión (CHCl ₃ : AcOEt, 10:1). Asi se obtienen 650mg (70%) de 95.

K _BX (CHCl ₃ ) 247 (4.54), 288 (3.77), 298 (3.79), 323h (3.65), 342h (3.30) , 477 (3.86) .

Vm _a x (nujolj/cπf ¹ 3072 (d, C-H aromático), 1767 (f, C=O éster fenólico) , 1669 (f, C=O quinona) , 1645 (f, C=O quinona quelada), 1619 (f) , 1592 (f, C=C aromático), 1301 y 1216 (f) , 1206 y 1093 (f, C-O), 1027, 856, 823 y 809 (m) . ¹ H-RMN (CDCl ₃ , 100 MHz) δ 2.48 (s, 3H, CH ₃ OO), 6.98 (s, 2H, H ₂ , H ₃ ), 7.47 (dd, J 7.9, 1.5Hz, IH, H ₆ ), 7,65 (dd, J 7.9, 7.8Hz, IH, H ₇ ), 8.34 (ddd, J 7.8, 1.5, 0.8Hz, IH, H ₈ ), 8.10 (d, J 0.8Hz, IH, H ₁₀ ), 13.72 (s, IH, en OH, se intercambia con D ₂ O).

m/z (IE) 282 (36, M ⁺ ), 240 (200, M ~. CH ₂ CO), 212 (35). Análisis elemental calculado para Ci ₆ Hi ₀ O ₅ : C, 68,09; H, 3.57; hallado: C, 67,91; H, 3.84.

Ejemplo 56.- 5-acetoxi-9-metoxi-l,4-antraquinona (96)

Se disuelven 3.9Og de 5-acetoxi-9-hidroxi-l, 4-antraquinona (95) en 200ml de cloroformo destilado sobre carbonato potásico y se añaden 5g de óxido de plata (I) y 25ml de yoduro de metilo. La suspensión se calienta a 40 ⁰ C con agitación magnética y al cabo de 8 horas se adicionan Ig de óxido de plata (I) y 1OmI de yoduro de metilo. A las 22 horas de reacción, la suspensión se deja enfriar y se filtran las sales de plata, lavándolas con abundante cloroformo. Se evapora el disolvente y se obtiene un sólido amarillo que se recristaliza de etanol, obteniéndose 3.89g de 5-acetoxi-9-metoxi-l, 4- antraquinona (96) en forma de agujas amarillas, p.f. 179- 180°C.

A^ _113x (CHCl ₃ ) 248 (4.26), 289 (4.03), 300 (4.08), 332h (3.46), 425 (3.78) . v _max (nujoD/cm ^"1 3059 (d, C-H aromático); 1756 (f, C=O éster fenólico) ; 1671 y 1662 (f, C=O quinona) ; 1613 (m) ; 1283 (f) ; 1211 (f,a, C-O); 1091 (m) ; 1026 (f, C-O); 863, 828 y 750 (m) . ¹ H-RMN (CDCl ₃ , 100 MHz) δ 2.50 (s, 3H, CH ₃ OO), 4.07 (s, 3H, CH ₃ O), 6.96 (s, 2H, H ₂ , H ₃ ), 7.46 (dd, J 7.7, 1.3 Hz, IH, H ₆ ), 7.67 (dd, J 8.1, 7.7Hz, IH, H ₇ ), 8.27 (ddd, J 8.1, 1.3, 0.8Hz, IH, H ₈ ), 8.45 (d, J 0.8Hz, IH, Hi ₀ ). m/z (IE) 296 (12, M ⁺ ), 254 (100, M ^" .CH ₂ CO), 225 (37).

Análisis elemental calculado para Ci ₇ Hi ₂ O ₅ : C, 68.92; H, 4.08; hallado:C, 69.15; H, 4.34.

Ejemplo 57.- 9-hidroxi-5-metoxi-l,4-antraquinona (98)

Se calienta a 40-45°C, con agitación magnética, una disolución de 400mg (1.67mmol) de 5, 9-dihidroxi-l, 4-antraquinona (97) en

10OmI de acetona y se añaden 115mg (0.83mmol) de carbonato potásico y 5ml de yoduro de metilo. El curso de la reacción se controla por cromatografía en capa fina (CHCl ₃ - AcOEt, 4:1). Al cabo de 19 horas se agregan 50mg (0.3βmmol) de carbonato potásico y 3ml de yoduro de metilo, y a las 25 horas de reacción se añaden 20mg (0.14mmol) de carbonato potásico y ImI de yoduro de metilo. A las 43 horas de reacción ha desaparecido el producto de partida y se observa un producto mayoritario de color rojo y un subproducto de color naranja. La mezcla de reacción se deja enfriar y se vierte sobre un 11 de agua-hielo. El precipitado rojo se filtra y, una vez seco, se separa por cromatografía en capa preparativa (CHCl ₃ ) , recogiéndose de la franja de mayor R _f 323mg (76 %) de 9- hidroxi-5-metoxi-l, 4-antraquinona (98). La muestra analítica del producto 98 se prepara pasándolo por una columna corta de gel de sílice (CHCl ₃ ) y, una vez evaporado el eluyente, triturando el producto rojo obtenido con un poco de éter, p.f. 243-245°C (d.) ^ _3x (CHCl ₃ ) 250 (4.58), 324 (3.69), 349h (3.30), 502 (3.93). V _1113x (nujolj/cπf ¹ 3066 (d, C-H aromático), 1667 (f, C=O quinona) , 1638 (f, C=O quinona quelada) , 1587 (f, C=C aromático), 1576 (m) , 1501 (f,), 1303 (f) , 1266; 1095 y 1054

(f, C-O) , 859, 813 y 752 (f) .

¹ H-RMN (CDCl ₃ , 100 MHz) δ 4.03 (s, 3H, CH ₃ O), 7.00 (s, 2H, H ₂ , H ₃ ), 7.07 (dd, J 7.8, 0.8Hz, IH, H ₆ ), 7.59 (dd, J 8.5, 7.8Hz, IH, H ₇ ), 8.04 (ddd, J 8.5, 0.8, 0.8Hz, IH, H ₈ ), 8.54 (d, J 0.8Hz, IH, Hi ₀ ) , 13.73 (s, IH, OH, se intercambia con D ₂ O). m/z (IE) 254 (100, M ⁺ ), 239 (42, M ~.CH ₃ ), 211 (33). Análisis elemental calculado para C ₁₅ H10O4 : C, 70.87; H, 3.96; H, 4.08; hallado: C, 71.16; H, 3.78.

El subproducto de esta reacción se identificó posteriormente como el éter dimetilico (102) .

Ejemplo 58.- 9-acetoxi-5-inetoxi-l ,4-antraquinona (99)

Método A (a partir de 9-acetoxi-5-hidroxi-l, 4-antraquinona (100)) :

Se disuelven 200mg (0.71mmol) de 100 en lOOml de acetona y se añaden lOOmg (0.72mmol) de carbonato potásico y 5ml de yoduro de metilo. La mezcla se calienta a 40°C con agitación magnética y el curso de la reacción se controla por cromatografía en capa fina (CHCI ₃ - AcOEt, 4:1). A las cinco horas ya no que producto de partida, se enfria la mezcla de reacción, se filtran las sales potásicas y se evapora el disolvente. El residuo se purifica por cromatografía en capa preparativa (CHCl ₃ - AcOEt, 10:1). Se recoge la banda de color naranja, obteniéndose 198mg (94%) de 9-acetoxi-5-metoxi-l, 4- antraquinona (99) . Se recristaliza de etanol en forma de agujas de color naranja, p.f. 214-216°C.

Método B (a partir de 9-hidroxi-5-metoxi-l, 4-antraquinona (98)) :

Se agita a temperatura ambiente una disolución de 23mg de 98 en 1OmI de acetona, con 5ml de anhídrido acético y 0. ImI de piridina. Al cabo de 24 horas todo el producto 98 se ha consumido. La mezcla de reacción se vierte sobre 250ml de agua-hielo y se extrae con cloroformo. La fase orgánica se lava, se seca (Na ₂ SO,^) y se evapora el disolvente. El producto se purifica por cromatografía en capa preparativa (CHCI ₃ - AcOEt, 10:1) y se obtienen 26mg (97%) del producto 99.

X _n3x (CHCl ₃ ) 250 (4.69), 290 (3.80), 302 (3.86), 32Oh (3.74), 349h (3.42) , 450 (3.79) . v _max (nujol) /can ^"1 3089 (d, C-H aromático), 1760 (f,a, C=O éster fenólico) , 1670 (f, C=O quinona) , 1614 (f) , 1574 y 1497 (m, C=C aromático), 1295; 1258 y 1212 (f, C-O), 1091 y 1052 (f,a, C-O) , 859, 816 y 807 (f) .

¹ H-RMN (CDCl ₃ , 100 MHz) δ 2,58 (s, 3H, CH ₃ OO), 4.04 (s, 3H, CH ₃ O), sistema AB (δ _A =7,00; δ _B =6,90; J 10.5Hz, 2H, en H ₂ , H ₃ ),

7 . 02 (dd, J 6 . 3 , 2 . 3Hz ) , 7 . 49-7 . 78 (m, 2H, H ₇ , H ₈ ) , 9 . 01 (d, J 0 . 6Hz , IH, H ₁₀ ) . m/z (IE) 296 (β, M ⁺ ), 254 (100, M ^" .CH ₂ CO), 239 (43), 211 (24) . Análisis elemental calculado para Ci ₇ Hi ₂ O ₅ : C, 68.92; H, 4,08; hallado: C. 68.72; H, 3.75.

Ejemplo 59.- 9-acetoxi-5-hidroxi-l, 4-antraquinona (100)

Se disuelven lOOmg de 5, 9-diacetoxi-l, 4-antraquinona (94) en 1OmI de dioxano y se añaden, con agitación magnética y a temperatura ambiente, 5ml de agua y 5ml de ácido clorhídrico concentrado. La mezcla de reacción se enfria exteriormente con baño de agua hasta que se alcanza de nuevo la temperatura ambiente. Al cabo de 2 horas, la mezcla de reacción se vierte sobre agua-hielo y se extrae con cloroformo. La fase orgánica se lava con agua y se después se seca sobre sulfato sódico. El residuo obtenido después de evaporar el disolvente se disuelve en acetona y se separa por cromatografía en capa preparativa (CHCl ₃ - AcOEt, 10:1). Se recuperan 40 mg de 94 sin reaccionar y 34 mg (40%, descontando el producto de partida recuperado, 64%) de 9-acetoxi-5-hidroxi-l, 4-antraquinona (100), cuyas características físicas y espectroscópicas coinciden con las anteriormente descritas. Se aisla también una pequeña cantidad de subproducto violeta que se caracteriza como la 5,9- dihidroxi-1, 4-antraquinona (97), por comparación con una muestra autentica.

Ejemplo 60.- 5, 9-dimetoxi-l, 4-antraquinona (102)

Método A (a partir de 9- hidroxi-5-metoxi-l, 4-antraquinona (98)):

Se disuelven 150mg (0.59mmol) de 98 en 50ml de cloroformo y se añaden 200mg (0.86mmol) de óxido de plata (I) recientemente preparado y 1OmI de yoduro de metilo. La suspensión se agita magnéticamente a 35-40°C y al cabo de dos dias se observa por

cromatografía en capa fina (CHCl ₃ - AcOEt, 10:1) que ha desaparecido el producto de partida. La suspensión se deja enfriar y se filtran las sales de plata, lavándolas bien con cloroformo. Se evapora el disolvente y el residuo se filtra por una columna corta de gel de sílice (CHCl ₃ - AcOEt, 10:1) para eliminar el producto de retención. Una vez evaporado el eluyente se obtienen 150mg (95%) de 5, 9-dimetoxi-l, 4- antraquinona (102) que recristaliza de benceno-hexano en forma de agujas de color naranja, p.f. 172-173°C Método B (a partir de 5, 9-dihidroxi-l, 4-antraquinona (97)):

Se disuelven lOOmg (0.42mmol) de 97 en 50ml de acetona y se añaden 50mg (0.36mmol) de carbonato potásico y 5ml de yoduro de metileno. La suspensión se calienta a 40°C con agitación magnética y a las 19 horas se filtran las sales inorgánicas y se elimina el disolvente. El residuo se separa por cromatografía en capa preparativa (CHCl ₃ - AcOEt, 10:1) y se obtienen 54mg (48%) de 102.

K _ax (CHCl ₃ ) 250 (4.70), 296 (3.77), 303 (3.82), 32Oh (3.73),

349h (3.39) , 456 (3.82) . V _n ^ _x (nujol) /can ^"1 3040 (d, C-H aromático), 1669 y 1660 (f,a,

C=O quinona) , 1614 (f), 1573 (d) 1498 (m, C=C aromático),

1295; 1277 y 1267 (f, C-O), 1093 (f,a, C-O), 1056 y 1020 (f) ,

858 (m) , 826 y 806 (f) , 757 (m) .

¹ H-RMN (CDCl ₃ , 100 MHz) δ 4.03 (s, 3H, CH ₃ O), 4.06 (s, 3H, CH ₃ O), 6.95 (s, 2H, H ₂ , H ₃ ), 6.99 (dd, J 7.6, 0,7Hz, IH, H ₆ ),

7.59 (dd, J 8.2, 7.6Hz, IH, H ₇ ), 7.93 (ddd, J 8.2, 0.7, 0,6Hz,

IH, H ₈ ), 8.86 (d, J 0.6Hz, IH, Hi ₀ ). m/z (IE) 268 (100, M ⁺ ), 253 (24, M ~.CH ₃ ), 239 (35, M ~ CHO),

237 (23, M ~ CH ₃ O), 225 (15). Análisis elemental calculado para C ₁₆ H ₁₂ O ₄ : C, 71.64; H,

4.51;H, 4.08; hallado: C, 71.76; H, 4.79.

Ejemplo 61.- Ensayos de actividad biológica de los compuestos de la invención

Los compuestos obtenidos, cuya pureza fue evaluada previamente por HPLC demostrando ser superior al 97%, fueron sometidos a evaluación biológica para determinar su actividad frente a seis lineas celulares de cáncer: cáncer de mama (MCF- 7), cáncer de pulmón de células no pequeñas (NCI-H-460), carcinoma humano de pulmón (A-549) , próstata (PC-3), sistema nervioso central de glioblastoma (SF-268) y sarcoma, concretamente leiomiosarcoma (CNIO AA) . Estas lineas proceden de repositorios comerciales como en el caso de MCF-7, NCI-H- 460, A-549 ó SF-268 (para referencia ver por ejemplo la información adjunta en http: //dtp. nci . nih. gov/branches/btb/ivclsp. html y http: //dtp. nci . nih. gov/mtargets/madownload. html, o las referencias Alley et al (Alley, M. C, Scudiero, D.A., Monks, P.A., Hursey, M. L., Czerwinski, M. J., Fine, D. L., Abbott, B. J., Mayo, J. G., Shoemaker, R. H., and Boyd, M. R. Feasibility of Drug Screening with Panels of Human Tumor CeIl Lines üsing a Microculture Tetrazolium Assay. Cáncer Research 48: 589-601, 1988), Grever et al (Grever, M. R., Schepartz, S.A., and Chabner, B.A.. The National Cáncer Institute: Cáncer Drug Discovery and Development Program. Seminars in Oncology, VoI. 19, No. 6, pp 622-638, 1992) y Boyd et al (Boyd, M. R., and Paull, K. D. Some Practical Considerations and Applications of the National Cáncer Institute In Vitro Anticancer Drug

Discovery Screen. Drug Development Research 34: 91-109, 1995).

La linea CNIO AA se generó en el CNIO a partir de una muestra tumoral fresca y ha sido parcialmente caracterizada en la referencia (C. Blanco, V. Moneo, L. Romero, B. Pequeño, J. F. M. Leal, J. Fominaya, J. Velasco and A. Carnero. Inhibition of PI3K synergise with Gemcitabine in low passaged tumor cell lines correlating with bax traslocation to mitochondria. (Anti Cáncer Drugs 2005) .

Como ensayo de actividad biológica se han realizado ensayos citotóxicos que consisten en la medida de la viabilidad celular in vitro cuando las células están sometidas a tratamiento con los compuestos químicos objeto de estudio. Los compuestos que disminuyan la viabilidad celular de lineas tumorales con respecto a controles de las mismas células sin tratar, cultivadas en las mismas condiciones, serán considerados como candidatos de poseer un posible efecto antitumoral . Los ensayos citotóxicos de los compuestos de la invención fueron realizados en placas de 96 pocilios. Células creciendo en frascos de cultivo fueron tripsinizadas a 90% de confluencia, células fueron contadas en hemocitómetro y diluidas con medio de cultivo para ajustar la concentración de células al numero de células requeridas a 0.2 mi (volumen requerido por cada pocilio) . Las células se sembraron en las placas de 96 pocilios a la densidad adecuada para cada tipo celular dependiendo de su tamaño, entre 1000 y 4000 células por pocilio. Laa células se incubaron durante 24 horas en esterilidad a 37° C y 5% CO2 antes de añadir los compuestos.

Los compuestos se pesaron y disolvieron en DMSO a una concentración de 2 mM (200 x de la concentración final en ensayo que será de 10 microM) . Estas concentraciones se eligieron para que el DMSO en cultivo no supere el 0.5% antes de añadir los compuestos, el medio de cultivo es eliminado y añadidos 200 microlitros de medio fresco. 1 microlitro de solución de compuesto fue añadido por pocilio automáticamente con un sistema robotizado Beckman FX 96 tip para alcanzar la concentración final de cada droga que será de 10 microM. Cada concentración es ensayada en triplicado. Un grupo de pocilios es dejado como control no tratado o añadiendo disolvente (DMSO) solo. Otro control es fijado en otras placas antes de añadir los compuestos (Control dia 0) . Tras añadir los compuestos las placas con los ensayos celulares se incubaron

por 72 horas en ambiente estéril a 37°C y 5% CO ₂ . Tras la incubación el medio fue eliminado, las células lavadas con PBS dos veces y fijadas con 0.5% glutaraldehido durante 30 minutos. Tras el fijado las células fueron lavadas dos veces con PBS y teñidas con cristal violeta al 0.5% en PBS durante 30 minutos. Entonces el cristal violeta es eliminado y las células lavadas extensivamente. Tras el lavado el cristal violeta es disuelto en 15% ácido acético en agua y la absorbancia medida con un filtro de 595 A. Los valores crudos obtenidos de la medición fueron procesados de la siguiente forma en el programa Excell: Se hizo la media de cada ensayo por triplicado. Las células tratadas con DMSO únicamente se consideraron el 100% del crecimiento celular durante las 72 horas. Para garantizar que las células se hablan comportado correctamente estos valores se compararon a los obtenidos de los controles de células no tratadas (no debe haber variaciones superiores al 10-20%) y a los controles a dia 0 (valores a dia 0 deben ser 2-4 veces menores a los valores controles, dependiendo de la velocidad de duplicación de la linea celular) . Los valores de cada ensayo se refirieron al control de crecimiento 100% y representados gráficamente.

De los compuestos analizados algunos resultaron tener un buen efecto citotóxico en las condiciones del ensayo en todas las lineas celulares de distintos tumores ensayadas, mientras que otros resultaron ser más activos en una u otra linea dependiendo del tipo celular. De los compuestos ensayados, presentaron una buena actividad citotóxica general los compuestos 1 al 17, 20, 21, 26, 27, 30, 31, 34 al 44, 46 al 51, 53, 54, 59, 63 al 69 y 73, todos ellos con una buena respuesta citotóxica a 10 micromolar, en general inferior al 40% de supervivencia celular, indicando que su IC ₅₀ esté probablemente en el rango de 1-10 micromolar. Estos compuestos fueron probablemente más activos en células procedentes de

tejidos epiteliales de próstata o mama o glioblastoma. Sin embargo, no todos los compuestos fueron iguamente potentes. Los compuestos 2 y 4 fueron menos activos en SF268, mientras que los compuestos 4, 11, 16, 20, 21, 30, 38, 45, 47, 49, 50, 51 y 53 fueron menos activos en PC3 y MCF7. En esta última linea los compuestos 2, 7, 13 y 40 también fueron algo menos activos. Por el contrario los compuestos ^' número 19, 55, 59 y 73 fueron más activos en estas lineas que en CNIO AA ó A549. Los compuestos número 60 y 1 presentaron actividad diferencial en A549, siendo una probable base para actividad citotóxica especifica. El compuesto 1 no fue activo, siendo la única linea que no presentó mortalidad bajo este compuesto. Por el contrario, la linea A549 fue muy sensible al compuesto número 60. Estos datos pueden presentar el inicio de una especificidad en la sensibilidad o resistencia de los distintos tumores.

Desde el punto de vista estructural, se observa que entre los compuestos de la primera familia, las quinonas halogenadas son muy activas frente a la gran mayoría de lineas celulares y esto sucede para mono- y dihaloderivados . En lo referente a alquilquinonas se comprobó que la actividad de las quinonas inicialmente preparadas era bastante interesante, aunque no se logró mejorar con sustituyentes alquilo en las posiciones 2 y 3. En lo referente a aminoderivados algunos compuestos son muy activos como los que contienen cadenas de aziridina (lo que sugiere un efecto alquilante) ó 2,4- diclorobencilderivados, un sustituyente clásico en química médica. Esto echa por tierra la conclusión, extraída de la preparación de muy pocos compuestos, de Perchellet y Hua ⁵¹ en el sentido de que las posiciones 2 y 3 del sistema quinónico eran intocables pues tenian un efecto letal sobre la actividad. Resulta obvio a partir de los compuestos de la invención que dichas posiciones 2 y 3 y la 9 de la quinona son

susceptibles de funcionalización y conducen a resultados muy prometedores .

Como conclusiones generales podemos señalar que la presencia de la función fenólica en la posición 9 de la antraquinona hizo desaparecer la actividad de nuestros compuestos en todas las líneas celulares probadas. El éter metílico o la ausencia de sustituyentes en esta posición conviertieron a estas antraquinonas en productos con actividad muy interesante in vitro. La presencia de sustituyentes alquilo en la posición 2 o en posiciones 2 y 3 disminuyó la actividad en la mayor parte de los casos. Es posible que esto se deba a que en las quinonas disustituídas resulta imposible la reacción de adición de nucleófilos presentes en el medio biológico como el glutatión, uno de los modos de actividad anticancerosa de estos productos.

Algunos de los epóxidos formados presentaron actividad excelente, igual que algunos de los productos de apertura de éstos. Los epóxidos de las quinonas sin sustituir en las posiciones 2 y 3 fueron muy activos frente a casi todas las líneas celulares, excepto la de cáncer de pulmón NCI-H-460. La 2-etil-l, 4-antraquinona también mostró una fuerte actividad en algunas de las líneas, pero no así el resto de epóxidos de quinonas alquiladas.

Los productos de apertura cis del epóxido resultaron también muy activos en el caso del diacetato, pero los que contenían cadenas laterales más largas o ramificadas perdieron esta actividad.

Las quinonas monosustituídas en la posición 2 con funciones oxigenadas no mostraron actividad prácticamente en ningún caso, excepto la 2-metoxi-l, 4-antraquinona que resultó moderadamente activa frente a cáncer humano de pulmón (A-549) y frente a sarcoma (AA) .

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