【발명의 명칭】

동규자 추출물을 함유하는 피부노화 또는 피부주름 개선용 화장료 조성물 【기술분야】

본 발명은 대한민국 중소기업청 지원하에 과제번호 10046945에 의해 이루어진 것으로서， 상기 과제의 연구관리전문기관은 한국산업기술진홍원， 연구사업명은 "World Class 300 프로젝트 R&D" ， 연구과제명은 "K-Cosmet ic 선도형 기능성 화장품용 피부세포 수용체 조절 기능성 신소재 발굴 및 이를 함유한 최적 피부전달기술 개발" ， 주관기관은 코스맥스 (주)， 연구기간은 2013.09.01 ~ 2017.08.31이다.

본 발명은 피부노화 또는 피부주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 동규자 추출물을 함유하는 피부노화 또는 피부주름 개선용 화장료조성물 관한 것이다.

【배경기술】

피부는 신체의 가장 바깥에 존재하는 기관으로， 외부 환경으로부터 우리 몸을보호하는 역할을수행한다. 그러나피부는 다른 기관들에 비해 외부 자극에 많이 노출되어 있어 쉽게 공격받을 수 있고， 특히 그 중에서도 얼굴 피부의 경우에는 자외선 및 공해 물질 등에 직접적으로 노출되어 있어 조기에 노화가 발생하기 쉬운 특징을 갖는다.

자외선， 대기 오염, 스트레스나 질병, 흡연 등에 의해 피부에서 나타나는 주름， 탄력 감소， 피부 쳐짐 및 건조 현상 등은 대부분 세포외기질 (extracel lular matrix) 단백질의 변화로 인해 발생하는 현상으로써， 주로 진피층에 존재하는 결합조직인 콜라겐, 엘라스틴， 히아루론산 등의 파괴가 원인으로 지목된다. 특히 이 중에서도 matrix metal loproteinases(MMPs)가 기질단백질을 분해하는 대표적인 효소로 알려져 있다. MMP는 단 한 번의 자외선 조사에 의해서도 그 활성이 현저히 증가되어 콜라겐을 비롯한 여러 기질단백질을 분해함으로써 주름 형성을 가속화한다.

이러한 자외선 노출에 의한 피부 조직의 변화에 대해 최근 새로운 인자가 주목받기 시작하였는데， Skobowiat 등의 연구에서 11β -hydroxysteroid dehydrogenase type Κΐΐβ -HSDI)이 자외선에 의한 스트레스 조절에서 핵심 역할을 수행함을 확인하였다 (Skobowiat C et al , 2013; 168(3) : 595-601) . 11β - HSD1은 스트레스 호르몬의 일종인 코르티솔 (cost i sol )을 비활성화 상태인 코르티손 (cort ison)에서 활성화상태인 코르티솔로 전환시키는 효소로써 표피와 진피에 분포하고 있는데， 자외선 조사, 특히 UVB에 의해 그 발현이 현저히 증가함이 밝혀졌다. 즉 내부의 다양한 정신적인 요인에 의한 스트레스 반웅뿐만 아니라외부 요인인 자외선， 대기 오염물질， 화학물질 등에 의해 활성 및 발현이 증가되는 물질로 피부에서의 스트레스 반웅과 밀접하게 관련되어 있어 새로운 타겟으로주목받고 있다.

그동안 주름개선을 위한 소재로는 주로 비타민 C, a -토코페를， 레티놀 및 그의 유도체 등이 화장품 및 의약품에 배합되어 이용되어 왔으나 이들은 제형에 배합되었을 경우 변취 현상이 발생하거나 화학적 안정성이 좋지 못하다는 단점이 있다.

이러한 단점을 극복하기 위해 최근 천연물 유래 물질들을 이용한 주름개선용 화장료조성물의 개발이 각광받고 있으며 이의 발굴을 필요로 한다. 동규자 (Malva vert ici l lata L. Seed)는무궁화과식물인 아욱의 여문씨를 말린 것으로 냄새는 거의 없고 부드럽고 기름기가 있으며， 맛은 달고 성질은 차다. 방광경에 작용하여 임증， 부종， 배뇨 장애， 변비, 젖의 분비가 부족한증, 노인이나허한사람들에 전통적으로사용되어 왔음이 알려져 있다.

종래에 다양한 천연물 유래 물질들을 이용한 피부노화 또는 주름개선용 화장료 조성물들에 대해서 많이 연구되어 왔으나， 본원발명의 동규자 추출물의 피부노화또는주름개선 효과에 대해서는 아직 알려진바 없다.

이에， 본 발명자들은 상기 종래기술들의 문제점들을극복하기 위하여 예의 연구노력한 결과, 동규자 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부노화 또는 피부주름 개선용 화장료 조성물의 경우, ΙΙβ -HSDl 및 MMP-1을 억제함으로써 피부노화또는 피부개션 효과를 나타낼 수 있음을 확인하고， 본 발명을 완성하게 되었다.

【발명의 상세한설명】

【기술적 과제】

따라서, 본 발명의 주된 목적은 ΙΙβ -HSDl 및 MMP-1을 억제함으로써 피부노화 또는 피부개선 효과를 갖는 동규자 추출물을 함유하는 피부노화 또는 피부주름 개선용화장료조성물을 제공하는 데 있다.

【기술적 해결방법】

본 발명의 한 양태에 따르면， 본 발명은 동규자 추출물을 유효성분으로 함유하는피부노화또는주름 개선용 화장료조성물을 제공한다.

종래에 주름 개선을 위한소재로는 주로 비타민 ⁽ ：， α -토코페를， 레티놀 및 그의 유도체 등이 화장품 및 의약품에 배합되어 이용되어 왔으나 이들은 제형에 배합되었을 경우 변취 현상이 발생하거나 화학적 안정성이 좋지 못하다는단점이 있다. 이에 본 발명자들이 주름 개선을 위한 소재로 천연물 유래 물질들을 발굴하기 위하여 연구노력한 결과， 본원발명의 동규자 추출물이 주름 개선 효과가 있는 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명에 있어서， 상기 동규자 추출물은 종래에 사용되어진 어떠한 용매로도 추출될 수 있으며， 바람직하게는 물， 친수성 유가용매 또는 이들의 흔합용매로추출될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 물， 무수 또는 함수의 메탄올， 에탄을， 프로필 알코을， 부틸 알코을， 글리세린， 프로필렌 글리콜， 부틸렌 글리콜, 또는 이들의 흔합용매로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매로 추출된 것을 특징으로 한다. 이들은 모두 친수성 알콜기 (0Η)를 가지고 있어서 유사한극성을 나타내므로용질에 대한 비슷한추출활성을나타낼 수 있다.

본 발명에 있어서， 상기 동규자 추출물은 조성물 총 중량 대비 0.01 내지 50 중량 % 포함하는 것을 특징으로 한다. 상기 범위를 벗어나는 경우에는 제형화가용이하지 않아바람직하지 못하다.

본 발명에 있어서， 상기 동규자 추출물은 ll|3 -HSDl( lli3 -hydn)xysteroid dehydrogenase type 1)을 억제함으로써 피부노화개선 효과를 나타내는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 실험예에 따르면， 본원발명의 동규자 추출물이 UVB에 의하여 증가된 ΙΙβ -HSDl를 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과로 볼 때， 본원발명의 동규자 추출물이 ΙΙβ -HSDl를 억제함으로써 피부에서의 스트레스를 완화하여 피부노화를 개선할수 있다는 것을 알수 있다 (실험예 2-3 참조) .

본 발명에 있어서， 상기 동규자 추출물은 MMP-l(Matr ix metal loproteinase-1)을 억제함으로써 주름 개선 효과를 나타내는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 실험예에 따르면， 본원발명의 동규자 추출물이 UVB에 의하여 증가된 MMP-1를 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과로 볼 때， 본원발명의 동규자추출물이 MMP-1를 억제함으로써 콜라겐과 같은 피부 단백질의 분해를 막아주름을 개선할수 있다는 것을 알수 있다 (실험예 1 참조) .

본 발명에 있어서, 상기 동규자 추출물은 procol lagen type I의 발현을 증가시킴으로써 피부노화또는주름개선 효과를 나타내는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 실험예에 따르면， 인공배양피부에 UVB를 조사한 군에서 procol lagen type I 의 함량이 감소한 반면에 UVB를 조사한 인공배양피부에 본원발명의 동규자 추출물을 처리한 군에서는 procol lagen type I의 함량이 증가한 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과로 볼 때， 본원발명의 동규자 추출물이 procol lagen type I의 발현을 증가시킴으로써 피부노화 또는 주름을 개선할수 있다는 것을 알수 있다 (실험예 4 참조) .

본 발명에 있어서， 상기 조성물은 스킨로션， 스킨소프너, 스킨토너， 아스트린젠트， 로션， 밀크로션, 모이스쳐 로션， 영양로션， 맛사지크림 , 영양크림， 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션， 에센스, 영양에센스， 팩, 비누， 클렌징품， 클렌징로션， 클렌징크림， 바디로션 및 바디클린저로 구성된 제형에서 선택된 하나 이상의 제형인 것을특징으로 한다.

【유리한효과】

이상 설명한 바와 같이， 본 발명의 동규자 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 자외선에 의해 과발현된 ΙΙβ -HSDl 및 MMP의 발현을 효과적으로 억제시킴으로써 피부에서의 스트레스를 완화하고 노화 및 주름을 개선하는 데 우수한효과를 나타낸다.

【도면의 간단한설명】

도 1은 동규자 추출물의 MMP-1 저해능을 확인한 실험 결과를 나타내는 도면이다.

도 2는동규자추출물의 ΙΙβ -HSDl 저해능을 확인한실험 결과를 나타내는 도면이다.

도 3은 인공배양피부에서 동규자 추출물의 MMP-1 저해능을 확인한 실험 결과를 나타내는 도면이다.

도 4는 인공배양피부에서 동규자 추출물의 procol lagen type I 증가능을 확인한실험 결과를 나타내는도면이다.

【발명의 실시를 위한 형태】

이하， 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로， 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다. 실시예 1: 동규자추출물의 제조

본 발명에서 사용된 동규자는 대한민국의 ^동의한방에서 구입하여 사용하였다.

동규자 100g을 취하여 별개의 용기에 넣고， 추출용매로서 70중량 % 에탄을 수용액 1L에 침적하여 72시간 동안 실온에 방치하여 추출액을 얻었다. 얻어진 추출액을 여과지를 이용하여 여과한 다음， 여액을 회전식 증발 건조기로 감압 농축하여 10.0%의 추출물을 얻었다. 상기의 얻어진 추출 흔합물을 용해제로서 DMS0(Dimethyl sul foxide)에 1 mg/ml 및 10 mg/ml의 농도로 용해시켜 이하의 실험예에 사용하였다. 실험예 1: 동규자추출물의 MMP-1 저해능평가

실시예 1의 동규자 추출물의 MMP-1 저해 효과를 평가하기 위해 사람의 섬유아세포 세포주 (Human dermal f ibroblast , Hs68)에서의 MMP-1 발현량을 측정하였다.

사람섬유아세포를 6wel l plate에 4X10의 수만큼 분주한후， 37 ^° C， 5% C0 ₂ 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후 배지를 제거하고 DPBS를 넣어준 후 UVB 비조사군을 제외한 나머지 세포군에 15mJ/cm ² 의 UVB를 조사한 뒤 동규자 추출물을 농도별로 첨가하여 24시간 동안 추가로 배양하였다. 그 후 각 샘플의 세포에서 트리졸 (RNA iso , DAKARA, 일본)을 이용하여 R A를 분리한 뒤 nanodrop을 이용하여 260nm에서 RNA를 정량한 후， 각각 ig의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다 (C1000 Thermal Cycler , Bio-Rad, 미국) . 합성된 cDNA에 타겟 단백질인 MMP-1 주형 (primer)과 시아닌 염료인 사이버그린 (SYBR Green superrais , Appl ied Biosystems , 미국)을 첨가한 흔합물을 이용하여 real ^¬ t ime PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반웅을 실시함으로써 최종적으로 MMP-1 유전자의 발현 정도를 평가하였다. 주형의 서열과 반웅 조건은 하기의 표 1과 같았으며， 유전자의 발현량은 β -act in 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다. 이에 대한결과는도 1에 나타내었다.

【표 1】

그 결과, 도면 1에 나타낸 바와 같이 UVB 조사군에서 MMP-1 발현량이 증가한 것에 반해， 동규자 추출물 처리군에서 농도 의존적으로 MMP-1 유전자 발현량이 감소함을 확인하였다. 실험예 2: 동규자추출물의 ΙΙ β -HSDl저해능 평가 실시예 1의 동규자추출물의 ΙΙβ -HSDl 저해 효과를 평가하기 위해 실험예 1에서와 동일 세포를 사용하여 동일 조건으로 실험을 진행하였다. 단지 최종적으로 실시간 중합효소 연쇄반옹을 진행하는 과정에서 MMP-1 주형을 대신하여 ΙΙβ -HSDl 주형을 사용하였다. 주형의 서열과 반웅 조건은 상기의 표 1과 같았으며, 유전자의 발현량은 β -act in 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다. 이에 대한결과는도 2에 나타내었다.

그 결과, 도면 2에 나타낸 바와 같이 동규자 추출물 처리군에서 MMP-1 유전자 발현량과 마찬가지로 농도 의존적으로 ΙΙβ -HSDl 유전자 발현량이 감소함을 확인하였다. 실험예 3: 인공배양피부에서 동규자추출물의 MMP-1 저해능 평가

실시예 1의 동규자 추출물의 MMP-1 저해 효과를 조직수준에서 평가하기 위해 삼차원 인공배양피부 조직인 EpiDermFT ^TM (MatTek, 미국)을 이용한 실험을 진행하였다.

표피-진피를 모두 포함하는 EpiDermFT™을 1차적으로 배양 배지에 24시간 동안 안정화시킨 후 배지를 제거하고 UVB 비조사군을 제외한 나머지 실험군에 60 mJ/cm ² 의 UVB를 조사한 뒤 동규자 추출물을 농도별로 첨가한 배지로 교체하여 48시간 동안 추가로 배양하였다. 이후 인공피부 조직을 배양한 배지를 수거하여 원심분리로 부유물을 제거하여 배지 내에 포함된 단백질의 양을 측정하는 데 사용하였다. 배양 배지 내에 포함된 MMP-1 단백질 양은 MMP-1 ELISA Ki t (EMD Mi l l ipore , 미국)를 이용하여 안내된 방법으로 측정하였다.

그 결과， 도면 3에 나타낸 바와 같이 UVB 조사군의 배양 배지 내 MMP-1 함량이 비조사군에 비해 높은 것에 반해, 동규자 추출물 처리군에서는 비조사군과 같은수준으로 MMP-1 함량이 감소함을 확인하였다. 실험예 4: 인공배양피부에서 동규자 추출물의 procol lagen type I증가능 실시예 1의 동규자 추출물의 procol lagen type I 증가 효과를 조직수준에서 평가하기 위해 실험예 3에서와 동일 조직을 사용하여 동일 조건으로 실험을 진행하였다. 단지 최종적으로 배양 배지 내의 procol lagen type I 함량을 측정하는 과정에서 Procol lagen type I C-pept ide (PIP) EIA ki t (Takara-bio Inc . , 일본)를사용하여 안내된 방법으로 측정하였다.

그 결과, 도면 4에 나타낸 바와 같이 UVB 조사군의 배양 배지 내 procol lagen type I 함량이 비조사군에 비해 적은 것에 반해， 동규자 추출물을 처리군에서는 그함량이 증가하는 것을 확인하였다. 제형예 1: 토너제의 제조

상기 실시예 1에서 얻은 추출물을 함유하는 토너제를 하기의 표 2에 나타낸 조성성분 및 조성비에 따라통상적인 방법으로 제조하였다.

【표 2]

제형예 2: 로션제의 제조

상기 실시예 1에서 얻은 추출물을 함유하는 로션제를 하기의

나타낸 조성성분 및 조성비에 따라통상적인 방법으로 제조하였다.

【표 3】

성분 함량 (중량 %)

실시예 1 1 .0

글리세린 7.0

부릴렌글라이콜 3.0

글리세릴스테아레이트 /피이지 -100스테아레이트 1 .0

플리소르베이트 60 0.5

소르비탄세스퀴올리에이트 0.5

스쿠알란 3.0

카프릴릭 /카프릭 트리글리세라이드 5.0 쉐어버터 2.0

스테아릴 알코올 0.5

스테아린산 0.5

카르복실비닐풀리머 0.2

아르기닌 0.2

방부제 미량 향료 미량 정제수 잔량 제형예 3: 크림제의 제조

상기 실시예 1에서 얻은 추출물을 함유하는 크림제를 하기의 나타난조성성분 및 조성비에 따라통상적인 방법으로 제조하였다.

【표 4】

참조문헌

(특허문헌 0001) KR 10-0825256 B

(특허문헌 0002) KR 10-1393007 B