Titre de l'invention : COMPOSITION COSMÉTIQUE ET/OU DERMATOLOGIQUE COMPRENANT AU MOINS UN

EXTRAIT DE CYLINDROTHECA FUSIFORMIS ET AU MOINS UN EXTRAIT DE DUNALIELLA SAUNA, ET SES UTILISATIONS COSMÉTIQUES

Domaine technique

La présente invention se rapporte à une composition cosmétique et/ou dermatologique comprenant au moins un extrait de Cylindrotheca fusiformis et au moins un extrait de Dunaliella Salina, ainsi qu’à une utilisation cosmétique non thérapeutique de la composition cosmétique, et à un procédé cosmétique non thérapeutique mettant en œuvre la composition cosmétique et un dispositif la comprenant.

La présente invention trouve une application dans le domaine de la cosmétique et de la dermatologie, plus particulièrement de la cosmétique cutanée.

Etat de la technique

La peau est un organe vital à part entière qui se compose de trois tissus distincts, assumant chacun différents rôles grâce à différents types cellulaires et différentes structures.

Le tissu le plus en surface, et donc le plus exposé, est l'épiderme. Cet épithélium pluristratifié (Malpighien) et kératinisé, se compose de différentes cellules associées à de nombreuses fonctions de barrière et de protection. Les cellules majoritaires sont les kératinocytes, qui se divisent dans la couche basale et entament leur différenciation jusqu’à la couche cornée (couche la plus externe), puis sont éliminés par desquamation, en 21 à 28 jours, en moyenne. Le rôle majeur de l'épiderme est d'apporter à la peau, et donc au corps humain, une première ligne de protection contre les agressions extérieures, comme les agressions physiques, chimiques, hydriques et bactériologiques. Cette protection est notamment assurée par les couches les plus différenciées et la couche cornée, connue pour ses propriétés hydrophobes, son aspect compacte et étanche. Une bonne différenciation et donc une bonne desquamation sont essentielles pour une surface lisse, homogène et régulière. L’ensemble de ces mécanismes dépend directement des capacités prolifératives des kératinocytes. Or, les stress extérieurs et l’âge altèrent les kératinocytes et ralentissent ce processus qui peut alors devenir plus long et plus irrégulier. La desquamation devenant irrégulière et/ou anarchique, des défauts de lissage et d’homogénéité de surface de la peau s’installent.

En position intermédiaire, le derme est un tissu conjonctif investi majoritairement de fibroblastes et de protéines matricielles, donnant à la peau ses qualités de compressibilité et d'élasticité connues. Les modifications de sa texture et de sa composition sont largement responsables des altérations de la peau qui surviennent au cours du vieillissement. Le relief de la couche cornée est, par ailleurs, directement conditionné par la qualité et la densité du derme qui la sous-tend. Plus que l'épiderme, dont le renouvellement est rapide et constant, le derme subit des troubles importants liés à l'âge, par le vieillissement de ses cellules et de sa matière. En vieillissant et suite aux agressions environnementales, les fibroblastes sont de moins en moins réactifs et de moins en moins prolifératifs. Les synthèses des macromolécules de la matrice ne sont plus assurées par les fibroblastes. De plus, ces macro-molécules constitutives du derme telles que les fibres de collagène, les fibres élastiques, les protéoglycanes et les glycosaminoglycanes (acide hyaluronique notamment) ont tendance à dégénérer et à se fragmenter. Ces phénomènes d'altération du tissu dermique provoquent en surface un défaut d'organisation de l'épiderme et, d'une façon plus visible et plus directe, une perte de fermeté pouvant aller jusqu'à la ptose cutanée et/ou la formation de rides.

Au sein de la trame conjonctive, s'intercalent aussi d’autres cellules et structures, tel un important réseau circulatoire et nutritif, constitué des vaisseaux sanguins et des capillaires lymphatiques, ainsi que les annexes épidermiques : cheveux, poils, ongles, glandes pilosébacées et glandes sudoripares, qui prennent naissance dans le derme profond. Comme précédemment avec l’âge et les agressions environnementales, le fonctionnement cellulaire ralentit et les cellules endothéliales constitutives des vaisseaux sont moins jointives et moins fonctionnelles, entraînant des défauts d’irrigation et de nutrition du tégument et de ses annexes (glandes ou cheveux).

L'hypoderme, situé en profondeur et constitué en majeure partie de lobules graisseux (adipocytes), assure une fonction de support primaire, de protection mécanique et thermique, et joue aussi un rôle de stockage des réserves énergétiques rapidement mobilisables pour tous les besoins biologiques, comme par exemple le renouvellement cellulaire, la défense de l’organisme ou la contraction musculaire.

L’aspect de surface de la peau est conditionné par tous ces tissus. Dans l’épiderme, les kératinocytes se divisent (via les mitoses) dans la couche basale et entament leur différenciation jusqu’à la couche cornée puis la desquamation (c’est-à-dire leur élimination par détachement), en 21 à 28 jours, en moyenne. Un bon métabolisme des kératinocytes est essentiel pour une surface lisse, homogène et régulière. Plus en profondeur dans le derme se situe le réseau endothélial qui permet d’irriguer tout l’édifice cutané grâce à la circulation sanguine, apportant eau, nutriments et oxygène. Ce mécanisme dépend directement du bon état physiologique de l’organisme, il permet aussi de donner sa couleur vitale à la peau (teint rosé). Or, les stress extérieurs, le tabac, les UV ralentissent ce processus qui peut alors devenir plus irrégulier et endommagé : tout le réseau composé de cellules endothéliales souffre et s’altère induisant une malnutrition, déshydratation et hypoxie. En complément, la desquamation devient irrégulière et/ou anarchique. Des défauts de lissage et d’homogénéité de surface de la peau, un teint plus hétérogène ou plus jaunâtre, une déshydratation ou une sécheresse s’installent.

Ces mécanismes peuvent arriver de façon consécutive à des stress exogènes ou endogènes, et peuvent être complètement déconnectés de mécanismes liés à l’âge ; en revanche, ces derniers les accentuent.

D’un point de vue général, le processus de vieillissement est un processus généralisé consécutif à l’avancement de l’âge (vieillissement intrinsèque) ou à l’accumulation des effets dus aux agressions environnementales répétées (vieillissement extrinsèque). Pour le marché cosmétique, il convient donc de stimuler de façon biologique un ou des mécanismes impliqués dans l’aspect esthétique de la peau en lien direct ou indirect avec l’hydratation, la nutrition, l’éclat, la protection de la peau.

Le marché des produits cosmétiques est très important et les attentes des consommateurs/consommatrices sont très élevées. En termes d’anti-âge ou non, ils/elles s’orientent de plus en plus vers des produits efficaces, naturels et éco- conçus.

Par exemple, la vitamine C est très connue et a fait ses preuves. Comme les autres vitamines, elle est généralement présente dans les produits anti-âge. Même d’origine naturelle, ce composé est très instable, et nécessite donc l’ajout de conservateurs ou l’utilisation de dérivés non naturels, peu appréciés des consommateurs.

De même, les dérivés d’acide rétinoïque sont connus pour stimuler le renouvellement des kératinocytes, mais fragilisent la fonction barrière issue de la différenciation des kératinocytes et ne jouent en rien sur la détoxification cellulaire, voire même, causent des réactions inflammatoires.

De même, les réponses cosmétiques à la problématique de surface de la peau s’orientent fréquemment vers les alphahydroxyacides, comme les acides glycoliques par exemple, qui présentent une action immédiate due à leur effet desquamant. Toutefois ils peuvent entrainer des dégradations de l’épiderme et amplifier les dégâts induits les UV. De plus, il s’agit souvent d’une action limitée dans le temps qui peut occasionner un effet rebond.

Il reste donc un réel besoin de trouver de nouvelles compositions et/ou composés d’origine naturelle, permettant d’améliorer l’aspect et les qualités de surface de la peau, notamment pour des effets d’hydratation, anti-âge, apaisants et permettant de prévenir et lutter contre les effets de la pollution.

Description de l’invention

La présente invention a précisément pour but de répondre à ces besoins et inconvénients de l’art antérieur. Les inventeurs sont les tout premiers à associer un extrait de Cylindrotheca fusiformis et un extrait de Dunaliella Salina, permettant précisément de répondre efficacement aux besoins précités.

Les inventeurs de la présente ont mis en évidence des propriétés de l’association qui n’avaient jamais été décrites ou suggérées dans l’art antérieur. En effet, de manière surprenante, les inventeurs ont mis en évidence que l’association des extraits de de Cylindrotheca fusiformis et de Dunaliella Salina possède une action cosmétique.

Les inventeurs ont notamment mis en évidence un effet de l’association d’extraits de Cylindrotheca fusiformis et de Dunaliella Salina sur l’amélioration de l’aspect et des qualités de surface de la peau, notamment pour des effets d’hydratation, anti-âge, apaisants et permettant de prévenir et lutter contre les effets de la pollution.

De manière surprenante, les inventeurs ont en outre mis en évidence une synergie des extraits de Cylindrotheca fusiformis et de Dunaliella Salina pour les effets cosmétiques mentionnés.

Les inventeurs ont également mis en évidence une synergie des extraits de Cylindrotheca fusiformis, de Dunaliella Salina et de Tetraselmis Suecica pour les effets cosmétiques mentionnés.

Ainsi, un premier objet de l’invention se rapporte à une composition cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un extrait de Cylindrotheca fusiformis et au moins un extrait de Dunaliella Salina.

Avantageusement, la composition de l’invention peut comprendre en outre au moins un extrait de Tetraselmis Suecica.

Dunaliella salina est une microalgue verte halophile, appartenant à la classe des Chlorophytes, qui se développe spontanément et préférentiellement dans les milieux lagunaires très salés.

Cylindrotheca fusiformis est une diatomée marine vivant dans les environnements intertidaux.

Tetraselmis suecica est une microalgue verte halophile, appartenant à la classe des Chlorodendrophytes. Les microalgues Cylindrotheca fusiformis, Dunaliella Salina et Tetraselmis Suecica peuvent être obtenues par tout procédé connu de l’homme du métier, par exemple par culture et extraction de microalgues à l’aide d’une photobioréacteur, selon un processus totalement durable. La culture des algues peut par exemple être réalisée dans un milieu approprié, durant le temps nécessaire pour atteindre une concentration en microalgues comprise entre 50000 et 1000000 cellules par ml. La culture est par exemple ensuite centrifugée pour récolter les microalgues. La pâte de microalgues obtenue peut être modifiée par éclatement des cellules de microalgues, puis élimination des débris membranaires par toute technique séparative appropriée, comme la centrifugation et/ou la filtration, et/ou par action d'un solvant afin d'obtenir un enrichissement en certains constituants de l'algue en même temps que l'élimination de constituants inutiles ou indésirables dans l'application envisagée. De manière préférée selon l’invention, les extraits sont des extraits liquides de microalgues obtenus de préférence après culture des microalgues, centrifugation et broyage du culot. Ces extraits peuvent être hydrosolubles et/ou liposolubles.

On entend par « composition cosmétique », dans la présente invention, toute composition à visée cosmétique, c’est à dire esthétique, pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain, par exemple l'épiderme, les systèmes pileux et capillaires, les organes externes, les dents et les muqueuses externes. Avantageusement, une composition cosmétique permet, exclusivement ou principalement, de les protéger, parfumer, maintenir en bon état, modifier leur aspect ou en corriger les défauts superficiels. Notamment, une composition cosmétique peut comprendre un véhicule cosmétiquement acceptable.

Dans le cadre de la présente invention, on entend par « composition dermatologique » toute composition à visée dermatologique, c’est à dire une composition pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain, pour un traitement de la peau, des muqueuses et des phanères, par exemple des ongles, des cheveux, et/ou des poils. Notamment, une composition dermatologique peut comprendre un véhicule dermatologiquement acceptable.

Par « véhicule cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptable », on entend un véhicule adapté pour une utilisation en contact avec des cellules humaines cutanées, en particulier les cellules de l’épiderme, sans toxicité, irritation, réponse allergique indue et similaire, et proportionné à un rapport avantage/risque raisonnable. Le véhicule cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptable peut être choisi parmi l’eau, l’allantoïne, la glycérine, le méthylpropanediol, cette liste n’étant pas limitative.

La composition de l’invention peut comprendre un pourcentage en poids d’au moins un extrait de Cylindrotheca fusiformis permettant l’obtention des effets cosmétiques mentionnés ci-avant. De préférence, le pourcentage en poids de l’extrait de Cylindrotheca fusiformis peut être compris entre 0,0001 et 10% en poids par rapport au poids total de la composition. Il peut s’agir par exemple de 0,01 à 5 %, ou de 0,01 à 3 %, ou de 0,01 à 2 %, ou de 0,01 à 1 %, ou de 0,1 à 3 %, ou de 0,1 à 1 %, ou de 0,05 à 5%, en poids par rapport au poids total de la composition.

La composition de l’invention peut comprendre un pourcentage en poids d’au moins un extrait de Dunaliella Salina permettant l’obtention des effets cosmétiques mentionnés ci-avant. De préférence, le pourcentage en poids de l’extrait de Dunaliella Salina peut être compris entre 0,0001 et 10% en poids par rapport au poids total de la composition. Il peut s’agir par exemple de 0,01 à 5 %, ou de 0,01 à 3 %, ou de 0,01 à 2 %, ou de 0,01 à 1 %, ou de 0,1 à 3 %, ou de 0,1 à 1 %, ou de 0,05 à 5%, en poids par rapport au poids total de la composition.

Le cas échéant, la composition de l’invention peut comprendre un pourcentage en poids d’au moins un extrait de Tetraselmis Suecica permettant l’obtention des effets cosmétiques mentionnés ci-avant. De préférence, le pourcentage en poids de l’extrait de Tetraselmis Suecica peut être compris entre 0,0001 et 10% en poids par rapport au poids total de la composition. Il peut s’agir par exemple de 0,01 à 5 %, ou de 0,01 à 3 %, ou de 0,01 à 2 %, ou de 0,01 à 1 %, ou de 0,1 à 3 %, ou de 0,1 à 1 %, ou de 0,05 à 5%, en poids par rapport au poids total de la composition.

La composition cosmétique de l’invention peut par exemple être une association comprenant les deux microalgues que sont Cylindrotheca fusiformis et Dunaliella Salina, dans un rapport compris entre 0,1 et 5,0, par exemple entre 0,2 et 4, ou entre 0,5 et 2. De manière avantageuse, les extraits de Cylindrotheca fusiformis et de Dunaliella Salina peuvent être présents avec un rapport de 1 ,0 (c’est-à-dire une unité de Cylindrotheca fusiformis pour une unité de Dunaliella Salina). Par exemple, la composition de l’invention peut comprendre environ 0,01 % en poids de chacune de ces microalgues. Alternativement, la cosmétique de l’invention peut par exemple être une association comprenant les trois microalgues que sont Cylindrotheca fusiformis, Dunaliella Salina et Tetraselmis Suecica, dans un rapport (entre l’extrait de Cylindrotheca fusiformis ou de Dunaliella Salina et l’extrait de Tetraselmis Suecica) compris entre 0,1 et 5,0, par exemple entre 0,2 et 4, ou entre 0,5 et 2. De manière avantageuse, les extraits de Cylindrotheca fusiformis ou de Dunaliella Salina et de Tetraselmis Suecica peuvent être présents avec un rapport de 0,2 (c’est-à-dire une unité de Cylindrotheca fusiformis ou de Dunaliella Salina pour cinq unités de Tetraselmis Suecica). Par exemple, la composition de l’invention peut comprendre environ 0,01 % en poids de chacune des microalgues Cylindrotheca fusiformis et Dunaliella Salina et environ 0,05% de Tetraselmis Suecica.

La composition cosmétique ou dermatologique de l’invention peut être obtenue par tout procédé approprié connu de l’homme du métier pour la fabrication d’une composition cosmétique ou dermatologique. Il peut s’agir, par exemple d’un simple mélange. Il peut s’agir également, par exemple, d’un procédé comprenant une étape d’incorporation d’une phase interne dans une phase externe au moyen d'un émulseur, par exemple d'une turbine de type rotor-stator. Il peut s’agir également par exemple d’un procédé utilisant la Température d'inversion de Phase (TIP), ce procédé étant classiquement utilisé par l'homme de l'art pour obtenir des émulsions huile dans eau dont les gouttelettes dispersées sont particulièrement fines, par exemple avec un diamètre de 0,1 à 1 pm.

La composition cosmétique ou dermatologique de la présente invention peut se trouver sous toute forme appropriée pour une application cosmétique ou dermatologique. Avantageusement, la composition est une composition à usage topique.

Il peut s’agir par exemple d’une composition sous une forme choisie dans le groupe comprenant une émulsion huile dans eau, ou eau dans huile, ou un mélange de ces émulsions.

Selon l’invention, la composition peut notamment être sous une forme choisie parmi une crème, un onguent, une huile, un lait, une pommade, une solution, une poudre, un gel, un sérum, un baume, un beurre, une lotion, une suspension, un shampooing, un savon ou une émulsion qui peut être rincée ou non rincée. Par exemple, la poudre peut être une poudre libre ou une poudre compressée, par exemple sous forme de granulés, de pastilles, éventuellement à diluer, ou encore sous la forme d’une poudre compacte. La composition cosmétique ou dermatologique peut par exemple se trouver sous une forme choisie dans le groupe comprenant un gel aqueux ou hydroalcoolique, une crème aqueuse ou hydroalcoolique et une lotion aqueuse ou hydroalcoolique. Ces formulations utilisables pour la mise en œuvre de la présente invention sont connues dans l’état de la technique par les formulateurs. Dans ces exemples de composition, il suffit d’ajouter l’association des huiles essentielles de la présente invention pour obtenir une composition conforme à la présente invention.

L’association d’extraits de microalgues de la présente invention peut être utilisée dans une composition cosmétique ou dermatologique seule ou en combinaison avec une ou plusieurs autres substances ou ingrédients actifs ou inactifs cosmétiquement ou dermatologiquement. Les substances ou ingrédients inactifs sont ceux qui n’agissent pas cosmétiquement ou dermatologiquement. Il s’agit des éléments de la composition permettant notamment d’accompagner l’extrait, de constituer une formulation particulière, de conserver l’extrait actif dans le temps, etc. Il peut s’agir en outre de tout produit de base pouvant se trouver dans les compositions cosmétiques ou dermatologiques classiques. Par opposition, les substances ou ingrédients actifs sont ceux qui dans l’application cosmétique ou dermatologique visée ont une action esthétique et/ou médicale. Il peut s’agir par exemple d’au moins un autre extrait choisi dans le groupe comprenant les extraits de plantes, les extraits d’algues et les extraits de microalgues autres que ceux déjà cités précédemment.

Un autre objet de l’invention se rapporte à une utilisation cosmétique non- thérapeutique d’une association ou d’une composition cosmétique telle que définie ci- avant.

Avantageusement, l’utilisation cosmétique non thérapeutique peut avoir pour effet une amélioration de l’hydratation de la peau, du cuir chevelu et/ou des muqueuses, et/ou une action anti-âge de la peau, et/ou une action de lutte et/ou de prévention des effets de la pollution sur la peau, du cuir chevelu et/ou des muqueuses et/ou une action apaisante de la peau et/ou des muqueuses sensibles et/ou réactives. On entend par « muqueuse », au sens de la présente invention, notamment les muqueuses externes comme les lèvres.

L’action cosmétique vise notamment à améliorer l’esthétisme de la peau. Il s’agit donc d’une action purement esthétique, à l’exclusion de toute action thérapeutique, permettant d’améliorer l’aspect de surface de la peau, et/ou de ses annexes et/ou des muqueuses, notamment pour présenter, à terme, un aspect plus esthétique, régulier et/ou homogène.

Avantageusement, l’action d’hydratation peut être liée en totalité ou en partie à une amélioration de la fonction barrière protectrice de la peau, du cuir chevelu et/ou des muqueuses. Sans vouloir être lié par un mécanisme d’action, ces actions/effets peuvent être dus notamment à une action sur la différenciation des kératinocytes épidermiques et/ou à une augmentation de l’expression de la filaggrine par les kératinocytes.

Avantageusement, l’action apaisante peut être une atténuation des rougeurs diffuses, et/ou une amélioration du teint et/ou du grain de peau et /ou de la luminosité de la peau, et/ou une diminution des sensations de tiraillements, de picotements, de chaleur diffuse, d’irritabilité. Sans vouloir être lié par un mécanisme d’action, ces actions/effets peuvent être dus notamment à une diminution de l’expression de médiateurs proinflammatoires par les kératinocytes épidermiques.

Avantageusement, l’action anti-âge peut être une action de prévention des effets visibles du vieillissement de la peau, notamment le relâchement et/ou la perte de fermeté et/ou la perte d’élasticité et/ou la formation des rides, de préférence avant que les effets du vieillissement ne soient visibles. Sans vouloir être lié par un mécanisme d’action, ces actions/effets peuvent être dus notamment à une action d’inhibition de l’expression des matrix métalloprotéases et/ou une action d’augmentation de la synthèse d’acide hyaluronique.

Avantageusement, l’action de lutte et/ou de prévention des effets de la pollution atmosphérique sur la peau, le cuir chevelu et/ou les muqueuses peut être au moins une action choisie parmi une amélioration de la souplesse cutanée, de l’éclat de la peau, une diminution de la desquamation cutanée. Sans vouloir être lié par un mécanisme d’action, ces actions/effets peuvent être dus notamment à une action anti- oxydante ou de diminution de l’expression de médiateurs pro-inflammatoires ou d’inhibition de l’expression des matrix métalloprotéases.

Comme indiqué précédemment, l’utilisation de la composition cosmétique peut se faire sous une forme choisie parmi une crème, un onguent, une huile, un lait, une pommade, une solution, une poudre, un gel, un sérum, un baume, un beurre, une lotion, une suspension, un shampooing, un savon ou une émulsion qui peut être rincée ou non rincée.

Un autre objet de l’invention se rapporte à un procédé de soin cosmétique non thérapeutique pour améliorer l’aspect de la peau, comprenant une application sur la peau, le cuir chevelu et/ou les muqueuses d’une composition cosmétique telle que décrite précédemment. Le procédé cosmétique non thérapeutique de l’invention est donc un procédé de soin esthétique de la surface de la peau.

Avantageusement, le procédé cosmétique non thérapeutique peut permettre d’améliorer l’aspect de la peau, et/ou d’améliorer l’hydratation de la peau, du cuir chevelu et/ou des muqueuses, et/ou peut avoir une action anti-âge de la peau, et/ou permettre de lutter et prévenir les effets de la pollution sur la peau, le cuir chevelu et/ou les muqueuses.

Dans le cadre des procédés cosmétiques selon l’invention, l’utilisation s’entend d’une utilisation non-thérapeutique, par exemple pour le traitement des peaux normales. Dans la présente, on entend par « peaux normales », des peaux ne présentant pas un état pathologique.

D’une manière générale, toute utilisation cosmétique et tout procédé cosmétique selon l’invention sont respectivement des utilisations cosmétiques non- thérapeutiques et procédés cosmétiques non-thérapeutiques.

Un autre objet de l’invention se rapporte à un dispositif se présentant sous une forme choisie parmi un pot, un flacon-pompe, une lingette, un masque, un dispositif transdermique, un patch, un spray, une capsule ou une gélule, le dispositif comprenant une composition selon telle que définie ci-avant.

D’autres avantages pourront encore apparaître à l’homme du métier à la lecture des exemples ci-dessous, donnés à titre illustratif. EXEMPLES

Exemple 1 : Préparation des extraits de Cylindrotheca fusiformis, Dunaliella Salina et Tetraselmis Suecica

Les algues unicellulaires Tetraselmis Suecica (prasinophycées/chlorodendrales/chlorodendracées), Cylindrotheca fusiformis, Dunaliella Salina sont cultivées dans un milieu d’eau de mer.

Lorsque la concentration en algue dans le milieu est suffisante, la culture est arrêtée et est alors centrifugée pour récolter les algues. La pâte d'algues obtenue est ensuite standardisée par redispersion dans le milieu de culture. Cette dispersion est modifiée par éclatement des cellules au moyen d'un homogenéiseur à haute pression APV. Une nouvelle centrifugation permet l'élimination des débris membranaires des algues éclatées. Le broyât cellulaire, après APV, est repris dans de l’eau de mer et stabilisé (sorbate/benzoate/acide chlorhydrique ou acide citrique).

Exemple 2 : Effet des extraits de Cylindrotheca fusiformis, Dunaliella Salina et Tetraselmis Suecica, et de leurs associations, sur l’expression de la filaggrine

Des kératinocytes ont été ensemencés dans des plaques 96 puits et cultivés en milieu de culture pendant 192 heures avec un renouvellement du milieu de culture après 24 et 96 heures. Le milieu a ensuite été remplacé par du milieu contenant ou non (témoin) : (1) soit une composition de Cylindrotheca fusiformis à 0,01 % en poids, soit une composition de Dunaliella Salina à 0,01 % en poids, soit une composition de Tetraselmis Suecica à 0,05% en poids, ou

(2) l’association Cylindrotheca fusiformis 0,01 % + Dunaliella Salina à 0,01% ou l’association Cylindrotheca fusiformis 0,01% + Dunaliella Salina à 0,01 % + Tetraselmis Suecica à 0,05%, ou

(3) la référence (CaCl2 à 1 ,5 mM), et les cellules ont été incubées pendant 72 heures.

Toutes les conditions expérimentales ont été réalisées en n = 3.

Les cellules ont ensuite été rincées avec une solution de PBS, fixées et perméabilisées. Les cellules ont été marquées à l'aide d'un anticorps primaire spécifique (Anti-filaggrine). L'anticorps primaire a ensuite été révélé à l'aide d'un anticorps secondaire fluorescent approprié (GAM-Alexa 488) et, en parallèle, les noyaux cellulaires ont été coloré à l'aide de la solution Hoechst 33258 (bisbenzimide). L'acquisition des images (5 photos/puits) a été réalisée avec un INCell Analyzer™ 2200 (GE Healthcare, objectif x20). Le marquage a été quantifié par la mesure de l'intensité de fluorescence et normalisé par rapport au nombre total de cellules (Intégration des données numériques avec la Developer Toolbox 1 .5, logiciel GE Healthcare).

[Table 1]

Les extraits de Cylindrotheca fusiformis, Dunaliella Salina et Tetraselmis Suecica seuls ne donnent pas de résultats significatifs, c’est-à-dire qu’aucun effet sur l’expression de la filaggrine ne peut être mesuré.

Par contre, les résultats montrent un effet synergique de l’association Cylindrotheca fusiformis + Dunaliella Salina et de l’association Cylindrotheca fusiformis + Dunaliella Salina + Tetraselmis Suecica sur l’expression de la filaggrine. Exemple 3 : Effet des extraits de Cylindrotheca fusiformis, Dunaliella Salina et Tetraselmis Suecica, et de leur association, sur l’expression génétique après exposition à la pollution urbaine

Des kératinocytes ont été ensemencés dans des plaques 24 puits et cultivés en milieu de culture pendant 24 heures. Le milieu a ensuite été remplacé par du milieu contenant ou non (témoin intoxiqué) :

(1 ) soit une composition de Cylindrotheca fusiformis à 0,01 % en poids, soit une composition de Dunaliella Salina à 0,01 % en poids, soit une composition de Tetraselmis Suecica à 0,05% en poids, ou

(2) l’association Cylindrotheca fusiformis 0,01 % + Dunaliella Salina à 0,01 % + Tetraselmis Suecica à 0,05%, et les cellules ont été pré-incubées pendant 24 heures.

Après pré-incubation, les traitements ont été renouvelés et les cellules ont été intoxiquées avec la poussière urbaine 1649b (Servilab), testée à 0,5 mg/ml. Les cellules ont ensuite été incubées pendant 24 heures. En parallèle, un contrôle non intoxiqué a été réalisé. Toutes les conditions expérimentales ont été réalisées en n=3. A la fin de l'incubation, les cellules ont été lavées dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) et immédiatement congelées à -80°C.

L'expression de marqueurs connus pour voir leur expression augmentée après une exposition à la pollution a été analysée par la méthode RT-qPCR sur les ARN totaux extraits des monocouches cellulaires de chaque condition expérimentale (avant extraction des ARN, les réplicats de la même condition expérimentale ont été regroupés).

L'analyse des transcrits a été réalisée en n=2 à l'aide d'une puce PCR ("mQPA- OX.STRESS-64") dédiée à la recherche et adaptée au format 'screening' (Marker qPCR array ou 'mQPA' conçu par Bioalternatives) et ciblant 64 gènes sélectionnés pour leur importance dans la détoxification.

[Table 2]

Les résultats montrent un effet synergique de l’association Cylindrotheca fusiformis +

Dunaliella Salina + Tetraselmis Suecica sur la diminution de l’expression des marqueurs de l’exposition à la pollution.

Exemple 4 des extraits de Cylindrotheca fusiformis et Dunaliella Salina, et de leur association, sur la synthèse d’acide hyaluronique

Des fibroblastes ont été ensemencés dans des plaques 96 puits et cultivés en milieu de culture pendant 24 heures. Le milieu a ensuite été remplacé par du milieu de dosage contenant ou non (témoin) les composés à tester, les combinaisons ou la référence (TGF-0, testé à 10 ng/ml) et les cellules ont été incubées pendant 72 heures. A la fin de l'incubation les surnageants de culture ont été collectés pour la quantification de l'acide hyaluronique.

L'acide hyaluronique libéré dans les surnageants de culture a été dosé à l'aide d'un kit ELISA spécifique selon les instructions du fournisseur (R&D Systems, ref.

DY3614).

[Table 3]

Les résultats montrent un effet amélioré de l’association Cylindrotheca fusiformis + Dunaliella Salina par rapport aux extraits seuls.

Exemple 5 : exemple de composition de soin du visage de type Crème

Les pourcentages sont donnés en masse par rapport à la masse totale de la composition. [Table 4]

Exemple 6 : exemple de composition de soin du visage de type Crème

Les pourcentages sont donnés en masse par rapport à la masse totale de la composition.

[Table 5] Exemple 7 : exemple de composition de soin du visage de type sérum

Les pourcentages sont donnés en masse par rapport à la masse totale de la composition.

[Table 6]

Exemple 8 : exemple de composition de soin du visage de type sérum

Les pourcentages sont donnés en masse par rapport à la masse totale de la composition.

[Table 7]