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Title:
COSMETIC OR PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING AN EXTRACT OF PLANTS OF GENUS FILICIUM, AND USE OF SAID EXTRACT FOR STIMULATING GLYCOSAMINOGLYCAN SYNTHESIS
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/1997/001346
Kind Code:
A1
Abstract:
A cosmetic or pharmaceutical and particularly dermatological composition including, as the active ingredient, an extract of plants of genus Filicium, and particularly an extract of plants of species Filicium decipiens, preferably in an amount of 0.0001-3 wt % based on the total weight of the final composition. Said composition has the property of stimulating the production of glycosaminoglycans in the skin, both in the dermis and in the epidermis, and may be used for skin and hair care, in particular given its moisturising activity. Said extracts may also be used for stimulating glycosaminoglycan synthesis in cell culture media, particularly keratinocyte and fibroblast culture media.

Inventors:
BONTE FREDERIC (FR)
DUMAS MARC (FR)
LAVAUD CATHERINE (FR)
MASSIOT GEORGES (FR)
Application Number:
PCT/FR1996/000998
Publication Date:
January 16, 1997
Filing Date:
June 27, 1996
Export Citation:
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Assignee:
LVMH RECH (FR)
BONTE FREDERIC (FR)
DUMAS MARC (FR)
LAVAUD CATHERINE (FR)
MASSIOT GEORGES (FR)
International Classes:
A61K8/97; A61K9/10; A61K36/00; A61K36/23; A61K36/77; A61K36/899; A61Q1/04; A61Q1/10; A61Q5/00; A61Q5/02; A61Q19/00; C07J3/00; C07J71/00; C07J73/00; C12N5/00; A61Q7/00; A61Q19/08; (IPC1-7): A61K35/78; A61K7/48; C07J63/00; C12N5/00
Other References:
M. L. DHAR ET AL.: "SCREENING OF INDIAN PLANTS FOR BIOLOGICAL ACTIVITY:PART V", INDIAN JOURNAL OF EXPERIMENTAL BIOLOGY, vol. 12, November 1974 (1974-11-01), pages 512 - 523, XP000566907
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Claims:
REVENDICATIONS
1. Composition cosmétique, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre d'ingrédient actif, un extrait de plantes du genre Filicium, en particulier de l'espèce Filicium decipiens.
2. Composition pharmaceutique, notamment dermatologique, à usage topique, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre d'ingrédient actif, un extrait de plantes du genre Filicium, en particulier de l'espèce Filicium decipiens.
3. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée parce qu'elle comprend de 0,0001 % à 3 % en poids, et en particulier de 0,001 % à 1 % en poids, de l'extrait de Filicium précité par rapport au poids total de la composition finale.
4. Composition selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ladite composition est formulée pour une application topique, en particulier une application topique cutanée incluant la peau et les muqueuses.
5. Composition selon une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend, en outre, au moins un autre principe actif en particulier choisi parmi le groupe consistant des rétinoïdes, des agents humectants ou hydratants, des vitamines, des céramides, des substances favorisant la synthèse de collagène et des acides aminés.
6. Composition selon la revendication 5, caractérisée en ce que le rétinoïde précité est choisi parmi l'acide rétinoïque et ses sels et esters, le rétinaldéhyde, et le rétinol et ses esters, tels que propionate, palmitate, acétate ; l'agent humectant ou hydratant précité est choisi parmi le glycérol, le polyéthylèneglycol et l'acide hyaluronique ; la vitamine précitée est choisie parmi la vitamine A, la vitamine C et ses dérivés, en particulier ses sels sodiques ou de magnésium, la vitamine E, la vitamine PP et les vitamines du groupe B en particulier B6 et B12 ; la substance favorisant la synthèse du collagène est choisie parmi un extrait de centella asiatica, le madécassoside, l'acide madécassique, l'acide asiatique et l'asiaticoside, et l'acide aminé est choisi parmi la serine, la thréonine, la leucine, la proline et l'hydroxyproline.
7. Composition selon l'une des revendications 1 à 6, notamment destinée au soin ou au traitement des cheveux, caractérisée en ce qu'elle contient en outre au moins une autre substance active, en une concentration efficace, choisie parmi la quinine ou ses dérivés ; un rubéfiant tel que le nicotinate de méthyle ; un surnageant de culture de fibroblastes de papilles ; un hydrolysat de kératine ; un oligoélément tel que zinc, sélénium, cuivre ; un alcaloïde bisbenzylisoquinoléique tel que l'oxyacanthine ou la cépharanthine ; un inhibiteur de 5αréductase tel que la progestérone ; l'acétate de cyprotérone, le minoxidil, l'acide azelaïque et ses dérivés ; un 4méthyl4azastéroïde, en particulier la 17— β N,Ndiéthylcarbamoyl4méthyl4aza5αandrostan3one ; ou encore un extrait de Serenoa repens.
8. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'extrait précité de Filicium, en particulier de Filicium decipiens, est un extrait d'écorce de racines, de tronc ou de tige.
9. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'extrait précité de Filicium est un extrait obtenu par extraction avec un solvant polaire, de préférence un alcool tel que le méthanol, l'éthanol, le propanol, l'isopropanol, le propylèneglycol ou le butylèneglycol ou un mélange de ces alcools ou encore un mélange hydroalcoolique.
10. Composition selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisée en ce que l'extrait précité de Filicium est un extrait enrichi en saponines.
11. Composition selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisée en ce que ledit extrait contient au moins une des quatre saponines répondant aux formules développées (I, II, III, IV) cidessous : (I) : acide 3O{βDglucopyranosyl(l→2)βDglucopyranosyl}28O{[α Larabinopyranosyl(l→2)βDxylopyranosyl(l*6)][(4Oangeloyl)αL arabinopyranosyl(l*2)αLrhamnopyranosyl(l*2)]}βDglucopyranosyl gypsogénique, (II) : acide 3O{βDglucoρyranosyl(l→2)βDglucopyranosyl}280{[β Dxyiopyranosyl(l→4)(αLarabinopyranosyl(l*2))αLrhamnopyranosyl (l→2)][4Obis(3'hydroxy2'méthylbutyroyl)]}βDfucopyranosyl médicagénique, (III) : acide 3O{βDglucopyranosyl(l→2)βDglucopyranosyl}280{[α Larabinopyranosyl(l»2)βDxylopyranosyl(l→6)][(40angeloyl)αL arabinopyranosyl(l→2)αLrhamnopyranosyl(l→2)]}βDglucopyranosyl médicagénique, (IV) : acide 3OβDglucoρyranosyl 28O{[βDxylopyranosyl(l+4)(αL arabinopyranosyl(l→2))αLrhamnopyranosyl(l*2)][(4Obis(3'hydroxy 2'méthylbutyroyl)]}βDfucopyranosyl zanhique.
12. Utilisation d'un extrait de plantes du genre Filicium, en particulier de l'espèce Filicium decipiens, ledit extrait étant, de préférence, incorporé dans un excipient pharmaceutiquement ou dermatologiquement acceptable, pour la préparation d'une composition pharmaceutique ou dermatologique à usage topique ayant une activité de stimulation de la production de glycosaminoglycanes dans la peau et les muqueuses, en particulier dans le derme et dans l'epiderme.
13. Utilisation selon la revendication 12, caractérisée en ce que ladite composition est destinée à la prévention ou au traitement des peaux sèches ou déshydratées et/ou à la prévention et à la lutte contre l'apparition des vergetures et/ou à la prévention et au traitement des désordres de la croissance des cheveux.
14. Utilisation d'un extrait de plantes du genre Filicium, en particulier de l'espèce Filicium decipiens comme agent cosmétique, ledit agent étant incorporé dans une composition cosmétique.
15. Utilisation selon la revendication 14, caractérisée en ce que ladite composition favorise la rétention d'eau dans la peau et/ou présente une activité hydratante et/ou un effet tenseur atténuant le relief cutané et les ridules superficielles, contribuant à renforcer la fonction de barrière de la peau et/ou traite les effets du vieillissement cutané et/ou améliore l'aspect de la peau et/ou de la chevelure et/ou favorise la croissance des cheveux.
16. Utilisation selon la revendication 14, caractérisée en ce que ladite composition est destinée à la prévention ou au traitement des peaux sèches ou déshydratées et/ou à la prévention et à la lutte contre l'apparition des vergetures.
17. Utilisation selon l'une des revendications 12 à 16, caractérisée en ce que la composition est telle que définie dans l'une des revendications 1 à 11.
18. Procédé de traitement cosmétique de la peau, des muqueuses, telles que les lèvres, ou des phanères, en particulier des cheveux, caractérisé en ce qu'il comprend l'application topique sur les zones de la peau, des muqueuses ou du scalp à traiter, d'une composition contenant un extrait de plantes du genre Filicium, en particulier de l'espèce Filicium decipiens, présent dans ladite composition à une concentration cosmetiquement efficace.
19. Procédé selon la revendication 18, caractérisée en ce que la concentration de l'extrait de plante du genre Filicium dans la composition précitée est comprise entre 0,0001 % et 3 % en poids par rapport au poids total de ladite composition, de préférence entre de 0,001 % à 1 %, ledit extrait étant de préférence incorporé dans un excipient cosmetiquement acceptable.
20. Procédé de traitement de cellules, en particulier de fibroblastes ou de kératinocytes, en culture, pour obtenir une stimulation de la synthèse des glycosaminoglycanes, caractérisé en ce qu'il consiste à introduire dans le milieu de culture une concentration efficace d'un extrait de plantes du genre Filicium, en particulier un extrait de plantes de l'espèce de Filicium decipiens, pour obtenir la stimulation de ladite synthèse.
21. Procédé selon la revendication 20, caractérisé en ce que lesdites cellules sont traitées par un extrait de plantes du genre Filicium, en particulier un extrait de plantes de l'espèce Filicium decipiens, à une concentration comprise entre 0,3 μg/ml et 30 μg/ml de milieu de culture.
22. Procédé selon la revendication 20 ou 21, caractérisé en ce qu'on ajoute au milieu de culture au moins une substance choisie dans le groupe constitué de la glucosamine, de la galactosamine, de la Lproline et de la 4 hydroxyLproline à une concentration comprise entre 2 et 10 mM ainsi que de l'acide ascorbique ou de ses dérivés à une concentration noncytotoxique, en particulier à une concentration comprise entre 0,001 mM et 0,5 mM.
23. Utilisation du procédé selon l'une des revendications 20 à 22 pour la préparation d'une peau ou d'un derme artificiel.
24. Saponines répondant à l'une des formules suivantes : (I) : acide 3O{βDglucopyranosyl(l→2)βDglucopyranosyl}28O{[α Larabinopyranosyl(l*2)βDxylopyranosyl(l*6)][(4Oangeloyι)αL arabinopyranosyl(l→2)αLrhamnopyranosyl(l→2)]}— βDglucopyranosyl gypsogénique, (II) : acide 3O{βDglucopyranosyl(l→2)βDglucopyranosyl}28O{[β Dxylopyranosyl(l→4)(αLarabinopyranosyl(l→2))αLrhamnopyranosyl (l→2)][4Obis(3'hydroxy2'méthylbutyroyl)]}βDfucopyranosyl médicagénique, (III) : acide 3O{βDglucopyranosyl(l*2)βDglucopyranosyI}280{[α Larabinopyranosyl(l→2)βDxylopyranosyl(l→6)][(4Oangeloyl)αL arabinopyranosyl(l>2)αLrhamnopyranosyl(l→2)]}βDglucopyranosyl médicagénique, (IV) : acide 3OβDglucopyranosyl 28O{[βDxylopyranosyl(l→4)(αL arabinopyranosyl(l→2))αLrhamnopyranosyl(l*2)][(4Obis(3'hydroxy 2'méthylbutyroyl)]}βDfucopyranosyl zanhique.
Description:
Composition cosmétique ou pharmaceutique contenant un extrait de plantes du genre Filicium et utilisation dudit extrait pour stimuler la synthèse des glycosaminoglycanes

L'invention concerne essentiellement une composition cosmétique ou pharmaceutique, notamment dermatologique, comprenant comme ingrédient actif un extrait de plantes du genre Filicium, en particulier de l'espèce Filicium decipiens. L'invention concerne aussi une utilisation d'un tel extrait pour la fabrication d'une composition cosmétique ou pharmaceutique et notamment dermatologique ayant diverses activités et une méthode de traitement cosmétique. Elle concerne également une utilisation du même extrait dans des milieux de culture de cellules, en particulier, les milieux de culture de fibroblastes et de kératinocytes.

Les plantes du genre Filicium appartiennent à la famille des Sapindacées. Les plantes de l'espèce Filicium decipiens sont des arbres à feuilles alternées, pouvant atteindre jusqu'à 25 mètres de haut, que l'on trouve essentiellement en Afrique de l'hémisphère sud, en particulier en Afrique du Sud et en Tanzanie, et également en Asie tropicale, notamment en Inde.

Pour une description précise, on se reportera à l'ouvrage "Trees of South Africa" de R.B. Drummond, C.Struik publishers, Cape town, Afrique du Sud, 1981, page 54.

Une bibliographie générale de la famille des sapindacées est donnée par C. Delaude dans le Bulletin de la société royale de Liège, 1993, 62, 93-120.

Un article de Umadevi 1. et al. dans Advances in forestry research in India, 1988, 1, 217-220, décrit la richesse des feuilles de Filicium decipiens en tannins.

Par ailleurs, on notera que la littérature ne fait référence à aucune utilisation de cette plante et, en particulier, à aucune utilisation dans le domaine de la cosmétique ou de la pharmacie. Dans le cadre de la présente invention, il a été découvert de façon inattendue que des extraits de la plante du genre Filicium, en particulier les extraits de plantes de l'espèce Filicium decipiens, présentaient un intérêt précieux en cosmétique, en pharmacie, notamment en dermatologie, par la propriété de stimulation de la production de glycosaminoglycanes par les fibroblastes et les

kératinocytes, et en particulier les fibroblastes du derme , notamment du derme humain, et les kératinocytes humains.

Or, l'homme de l'art sait que les protéoglycanes, constitués pour partie de glycosaminoglycanes, sont des macromolécules complexes formées d'une partie proteique sur laquelle sont greffées par des liaisons covalentes des polymères de disaccharides dénommés glycosaminoglycanes (GAG). Ceci est en particulier décrit dans l'ouvrage de E.D. HAY ayant pour titre "Cell Biology of Extracellular Matrix", paru chez Plénum Press, New York en 1991 et dans la publication de J. E. SILBERT, ayant pour titre "Structure and Metabolism of Proteoglycans and Glycosaminoglycans", parue dans J. Invest. Dermatol.,1982, 79, pages 31s-37s.

On sait également que l'unité disaccharidique des GAG est formée d'une hexosamine (D-glucosamine ou D-galactosamine) assez souvent sulfatée alternant avec un acide uronique (D-glucuronique ou L-iduroπique). Les chaînes de GAG les plus fréquemment rencontrées au niveau de la peau sont l'acide hyaluronique, les chondroïtines-4 et -6 sulfate, le dermatane sulfate et en faible quantité l'héparine et l'héparane sulfate. Seul l'acide hyaluronique n'est pas synthétisé en liaison à une protéine centrale.

Les protéoglycanes sont présents en particulier dans tous les tissus de mammifères, y compris dans la peau et ses annexes (J.R. COUCHMAN, J. Invest. Dermatol. 1993 Jul. 101 (1 Suppl) 60S-64S). Il est maintenant admis que les protéoglycanes contribuent, par différents processus, à la croissance, à la préser¬ vation et à la réparation des tissus. Il a été montré que certains protéoglycanes sont des médiateurs de l'adhésion cellulaire et de la communication transmembranaire, tandis que d'autres interagissent avec d'autres éléments de structure de la matrice extracellulaire. Comme cela a été dit plus haut, les protéoglycanes sont constitués d'une protéine centrale à laquelle sont liées de manière covalente une ou plusieurs chaînes glycosaminoglycanes. Ainsi, les glycosaminoglycanes sont présents au niveau dermique, participant à la composition de la matrice extracellulaire et ont été trouvés liés à certains sites des fibres de collagène, comme décrit par J. E. SCOTT dans Int. J. Biol. Macromol., 1991, 13, pages 157-161. Ils ont également été identifiés entre les kératinocytes au niveau de l'epiderme comme décrit par J. G. HAGGERTY et al. dans la revue J. Invest. Dermatol., 1992, 99, pages 374- 380, 99 pages 374-380. Enfin, des glycosaminoglycanes ont été trouvés dans la matrice extracellulaire de la papille dermique du follicule pileux. Leur quantité

varie en fonction du cycle pilaire. Elle atteint un maximum durant la phase anagène correspondant à la croissance du cheveu. En ce qui concerne les protéoglycanes et les glycosaminoglycanes des follicules pileux, on pourra se reporter en particulier à la publication de J.R. COUCHMAN citée plus haut, et à celle de M. TAYLOR et al., "Glycosaminoglycan synthesis by cultured human hair follicle dermal papilla cells : comparison with non-follicular dermal fibroblasts", Brit. J. Dermatol. 1992 (May) 126 (5) 479-84. On notera qu'il a été démontré que le minoxidil, substance bien connue présentant une certaine activité sur la croissance et la repousse des cheveux, stimulait la biosynthèse des glycosaminoglycanes (Y. MORI et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1991 (Dec. 26) 642 473-5). Les observations des auteurs précédemment cités, combinées à d'autres preuves cliniques, suggèrent que les glycosaminoglycanes participent à la régulation de la croissance des cheveux.

Les GAG, par leur propriété première de s'associer fortement à des molécules d'eau et de former des gels, assurent l'hydratation du derme et de l'epiderme. Une peau bien hydratée est gage d'une bonne apparence, d'un état physiologique et fonctionnel satisfaisant, avec notamment de bonnes propriétés mécaniques. La diminution des GAG au cours du vieillissement cutané a été montrée par de nombreux auteurs (comme par exemple : SMITH et al. dans J. Invest. Dermatol., 1962, 39, pages 347-350 ; ou FLEISCHMAJER et al. dans Biochim Biophys. Acta, 1972, 279, pages 265-275 ; ou encore par LONGAS et al. dans Carbohydr. Res., 1987, 159, pages 127-136).

Il est donc intéressant de stimuler la synthèse des glycosaminoglycanes afin notamment de rendre à une peau présentant une déficience au niveau de ses propriétés mécaniques ou de sa barrière hydrique, telle qu'une peau déshydratée ou âgée, les qualités et les propriétés d'une peau normale et jeune, ou de prévenir ou traiter les troubles de la croissance des cheveux, ou encore de restaurer ou renforcer l'éclat et la souplesse d'une chevelure.

Ainsi, la présente invention a pour but principal de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution permettant de stimuler la production de glycosaminoglycanes par les cellules cutanées, notamment les cellules cutanées humaines, telles que les fibroblastes ou les kératinocytes, production qui est particulièrement précieuse dans le cadre de la

fabrication de produits traitants cosmétiques ou pharmaceutiques et notamment dermatologiques.

La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution permettant de réaliser une bonne hydratation du tissu cutané incluant la peau et les muqueuses, une amélioration des qualités mécaniques de la peau et des phanères, un embellissement de la chevelure, ainsi qu'une prévention ou un traitement des désordres de la croissance des cheveux, d'une manière simple, fiable et peu coûteuse, utilisable à l'échelle industrielle cosmétique et pharmaceutique. Ces nouveaux problèmes techniques sont résolus pour la première fois simultanément par la présente invention.

Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention fournit une composition cosmétique, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre d'ingrédient actif un extrait de plantes du genre Filicium, en particulier de l'espèce Filicium decipiens.

Selon un deuxième aspect, l'invention fournit une composition pharmaceutique, notamment dermatologique, à usage topique, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre d'ingrédient actif un extrait de plantes du genre Filicium, en particulier de l'espèce Filicium decipiens. Selon un mode de réalisation avantageux, correspondant à ces deux aspects, cette composition comprend de 0,0001 % à 3 % en poids, et en particulier de 0,001 % à 1 % en poids, d'extrait précité de Filicium par rapport au poids total de la composition finale.

Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, la composition est formulée pour une application topique, en particulier une application topique cutanée incluant la peau et les muqueuses, pour réaliser des produits de soins cosmétiques ou dermatologiques ou des produits de maquillage traitant, tels que mascaras ou rouges à lèvres.

Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, cette composition est caractérisée en ce qu'elle comprend, en outre, au moins un principe actif, en particulier choisi parmi le groupe consistant des rétinoïdes, des agents humectants ou hydratants, des vitamines, des céramides, des substances favorisant la synthèse de collagène et des acides aminés.

Selon ce mode de réalisation particulier, la composition est avantageusement caractérisée en ce que le rétinoïde précité est choisi parmi l'acide rétinoïque et ses sels et esters, le rétinaldéhyde, et le rétinol et ses esters, tels que propionate, palmitate, acétate ; l'agent humectant ou hydratant précité est choisi parmi le glycérol, un polyethylèneglycol et l'acide hyaluronique ; la vitamine précitée est choisie parmi la vitamine A, la vitamine C et ses dérivés, en particulier ses sels sodiques ou de magnésium, la vitamine E, la vitamine PP, et les vitamines du groupe B en particulier B6 et B12 ; la substance favorisant la synthèse du collagène est choisie parmi un extrait de centella asiatica, le madécassoside, l'acide madécassique, l'acide asiatique et l'asiaticoside ; et l'acide aminé est choisi parmi la serine, la thréonine, la leucine, la proline et l'hydroxyproline.

Selon une autre variante avantageuse de l'invention, se situant plus particulièrement dans le cadre des soins ou des traitements des cheveux, la composition cosmétique ou pharmaceutique, notamment dermatologique selon l'invention, comprend en outre au moins une autre substance active, en une concentration efficace, choisie parmi la quinine ou ses dérivés ; un rubéfiant tel que le nicotinate de méthyle ; un surnageant de culture de fibroblastes de papilles, tel que décrit dans le document EP-A-272920 ; un hydrolysat de kératine ; un oligo-élément tel que zinc, sélénium, cuivre ; un alcaloïde bisbenzyliso- quinoléique tel que l'oxyacanthine ou la cépharanthine ; un inhibiteur de 5-α- réductase tel que la progestérone ; l'acétate de cyprotérone, le minoxidil, l'acide azelaïque et ses dérivés ; un 4-méthyl-4-azastéroïde, en particulier la 17-β-N,N- diéthylcarbamoyl-4-méthyl-4-aza-5-α-androstan-3-onε ; ou encore un extrait de Serenoa repens. Selon encore un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, l'extrait précité de Filicium, en particulier de Filicium decipiens, est un extrait d'écorce de racine, de tronc ou de tige.

Selon encore un autre mode de réalisation avantageux, l'extrait précité de Filicium est un extrait obtenu par extraction avec un solvant polaire ou un mélange de solvants polaires. De préférence, on utilisera un alcool tel que le méthanol, l'éthanol, le propanol, l'isopropanol, le propylèneglycol ou le butylèneglycol, ou un mélange de ces alcools ou encore un mélange hydro¬ alcoolique.

Dans ce cadre, les procédures d'extraction classiques bien connues de l'homme de l'art peuvent être utilisées. En particulier, l'extraction peut être réalisée sur le matériau broyé, de préférence une poudre d'écorce de racine obtenue par broyage, que l'on introduit dans le solvant d'extraction, de préférence constitué par le solvant ou le mélange de solvants polaires précités. L'extraction peut être renouvelée plusieurs fois jusqu'à épuisement du matériau, conformément aux procédés bien connus de l'homme de l'art. L'extraction peut être réalisée à la température ambiante, ou à chaud et notamment au reflux du solvant. La proportion en poids entre le solvant et le matériau à extraire peut varier dans de larges limites et par exemple être comprise entre 1 : 1 et 10 : 1.

Selon encore un autre mode de réalisation avantageux, l'extrait précité de Filicium est un extrait enrichi en sapoπines.

L'enrichissement de l'extrait en saponines peut être obtenu au moyen de tout procédé connu de l'homme de l'art, en particulier par précipitation de l'extrait au moyen de l'acétone en milieu alcoolique, de préférence en milieu méthanolique.

On choisira, de façon particulièrement avantageuse, un extrait contenant au moins une des quatre saponines répondant aux formules développées (I, II, III, IV) ci-dessous :

(I) : acide 3-O-{β-D-glucopyranosyl(l→2)-β-D-glucopyranosyl}28-O-{[ - L-arabinopyranosyl(l-*2)-β-D-xylopyranosyl(l→6)][(4-O-ang eloyl)-α-L- arabinopyranosyl(l→2)-α-L-rhamnopyranosyl(l-*2)]}- β-D-glucopyranosyl gypsogénique.

(II) : acide 3-O-{β-D-glucopyranosyl(l-*2)-β-D-glucopyranosyl}28-0-{[β - D-xylopyranosyl(l→4)(α-L-arabinopyranosyl(l→2))-α-L-rh amnoρyranosyl- (l-*2)][4-O-bis(3'-hydroxy-2'-méthyl-butyroyl)]}-β-D-fucop yranosyl médicagénique.

(III) : acide 3-O-{β-D-glucopyranosyl(l-*2)-β-D-glucopyranosyl}28-O-{[α - L-arabinopyranosyl(l-*2)-β-D-xylopyranosyl(l-*6)][(4-O-ange loyl)-α-L- arabinopyranosyl(l→2)-α-L-rhamnopyranosyl(l-*2)]}-β-D-gl ucopyranosyl médicagénique.

(IV) : acide 3-O-β-D-glucopyranosyl 28-O-{[β-D-xylopyranosyl(l→4)(α-L- arabinopyranosyl(l-*2))-α-L-rharmιopyranos-yl(l-*2)][(4-O- bis(3'-hydroxy-

2'-méthyl-butyroyl)]}-β-D-fucopyranosyl zanhique.

Ces quatre saponines, qui constituent des produits nouveaux isolés pour la première fois, ont pu être isolées par chromatographie sur colonne et identifiées par RMN et spectroscopie de masse dans l'extrait obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 1 du présent mémoire.

Selon un autre aspect, l'invention concerne également l'utilisation d'un extrait de plantes du genre Filicium, en particulier de l'espèce Filicium decipiens, ledit extrait étant de préférence incorporé dans un excipient cosmetiquement ou pharmaceutiquement acceptable, pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique et notamment dermatologique, en particulier ayant une activité de stimulation de la production de glycosaminoglycanes dans la peau et les muqueuses, en particulier dans le derme et dans l'epiderme, favorisant la rétention d'eau dans la peau, présentant une activité hydratante, un effet tenseur atténuant le relief cutané et les ridules superficielles, contribuant à renforcer la fonction de barrière de la peau, destinée notamment à la prévention ou au traitement des peaux sèches ou déshydratées, au traitement des effets du vieillissement cutané, à la prévention et à la lutte contre l'apparition des vergetures, à l' amélioration de l'aspect de la peau et de la chevelure, à la prévention et au traitement des désordres de croissance des cheveux.

Dans les applications du domaine pharmaceutique ou dermatologique, à usage topique, les compositions de l'invention sont destinées à la prévention ou au traitement des peaux sèches ou déshydratées et/ou à la prévention et à la lutte contre l'apparition des vergetures et/ou à la prévention et au traitement des désordres des cheveux.

Divers modes de réalisation dans le cadre de cette utilisation résultent clairement de la description précédente qui a été faite relativement à la composition, ainsi que de la description suivante et notamment en relation avec les exemples.

Selon un autre aspect, la présente invention couvre encore un procédé de traitement cosmétique de la peau, des muqueuses, telles que les lèvres, ou des phanères, en particulier des cheveux, caractérisé en ce qu'il comprend l'application topique sur les zones de la peau, des muqueuses ou du scalp à traiter, d'une

composition contenant un extrait de plantes du genre Filicium, en particulier de l'espèce Filicium decipiens, présent dans ladite composition à une concentration cosmetiquement efficace .

Divers modes de réalisation de ce procédé résultent également clairement de la description précédente, ainsi que de la description suivante, notamment en relation avec les exemples. En particulier, la concentration de l'extrait de plantes précité dans la composition est comprise entre 0,0001 % et 3 % en poids, notamment entre 0,001 % et 1 % en poids, par rapport au poids total de ladite composition, ledit extrait étant de préférence incorporé dans un excipient cosmetiquement acceptable.

Enfin, selon un autre aspect, la présente invention couvre encore un procédé de traitement thérapeutique de la peau, des muqueuses, ou des phanères, en particulier des cheveux, caractérisé en ce qu'il comprend l'application topique sur les zones de la peau, des muqueuses ou du scalp à traiter d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un extrait de plantes du genre Filicium, en particulier de l'espèce Filicium decipiens.

Divers modes de réalisation de ce procédé de traitement thérapeutique apparaissent clairement pour un homme de l'art, également de la description précédente ainsi que de la description suivante et notamment en référence aux exemples. Dans le cadre du traitement thérapeutique, le praticien sait généralement adapter la dose à appliquer en fonction de la condition à traiter. Cependant, en général on appliquera de 0,0001 % et 3 % en poids, notamment entre 0,001 % et 1 % en poids, de l'extrait de Filicium précité inclus dans un excipient pharmaceutiquement acceptable formant ainsi une composition pharmaceutique, ledit pourcentage en poids dudit extrait étant donné par rapport au poids total de la composition finale.

Comme il a été indiqué précédemment, l'invention est basée sur la découverte inattendue qu'un extrait de plantes du genre Filicium stimule la production de glycosaminoglycanes par des cellules de la peau, en particulier par des fibroblastes et des kératinocytes, en étant ainsi particulièrement utile pour la fabrication de produits traitants cosmétiques ou pharmaceutiques et notamment dermatologiques.

Ainsi, l'invention concerne également l'utilisation d'un extrait de plantes du genre Filicium en particulier de l'espèce Filicium decipiens comme

agent cosmétique. Cet agent permet notamment de stimuler la production des glycosaminoglycanes par les fibroblastes et les kératinocytes, en particulier les fibroblastes du derme, notamment du derme humain et les kératinocytes humains. Il peut être incorporé dans une composition cosmétique qui favorise la rétention d'eau dans la peau et/ou présente une activité hydratante et/ou un effet tenseur atténuant le relief cutané et les ridules superficielles, contribuant à renforcer la fonction de barrière de la peau et/ou traite les effets du vieillissement cutané et/ou améliore l'aspect de la peau et/ou de la chevelure et/ou favorise la croissance des cheveux. Cette composition peut également être destinée à la prévention ou au traitement des peaux sèches ou déshydratées et/ou à la prévention et à la lutte contre l'apparition des vergetures.

Ce même agent sera également utilisable comme agent thérapeutique notamment en dermatologie. Dans ces deux types d'applications, l'homme de l'art comprend aisément que diverses formes de formulation peuvent être réalisées. En outre, il est apparent qu'une des formes les plus utilisées est une forme topique adaptée pour être appliquée sur le tissu cutané incluant la peau et les muqueuses externes ou internes. Les formulations topiques appropriées incluent sans limitation, des émulsions, des crèmes, des laits, des baumes, des gels, des lotions, des ovules, ainsi que des compositions de maquillage traitantes telles que mascaras, rouges à lèvres, ces divers types de formulation étant bien connus de l'homme de l'art.

Enfin, selon un dernier aspect, la présente invention concerne également un procédé de traitement de cellules, en particulier de fibroblastes ou de kératinocytes, en culture, par une concentration efficace d'un extrait de plante du genre Filicium, en particulier de l'espèce Filicium decipiens pour obtenir une stimulation de la synthèse des glycosaminoglycanes.

Ainsi, dans le cadre par exemple de la préparation de peau artificielle, en particulier de derme artificiel, par culture de cellules, selon les techniques bien connues de l'homme de l'art, on obtient grâce au procédé de l'invention une peau ou un derme artificiel de très bonne qualité, particulièrement en ce qui concerne les propriétés biomécaniques.

Suivant une variante préférée de mise en oeuvre du procédé précité, on traite la culture de cellule avec un extrait de plante du genre Filicium, en particulier

de l'espèce Filicium decipiens, à une concentration comprise entre 0,3 μg/ml et 30 μg/ml de milieu de culture.

Suivant une autre variante avantageuse, le milieu de culture comprend, en outre, une ou plusieurs parmi les substances suivantes : glucosamine, galactos- amine, L-proline et 4-hydroxy-L-proline, lesdites substances pouvant être chacune présentes à une concentration comprise entre 2 et 10 mM, ou bien encore, le milieu de culture peut contenir de l'acide ascorbique ou l'un de ses dérivés à une concentration non-cytotoxique, en particulier comprise entre 0,001 mM et 0,5 mM. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaissent clairement à l'homme de l'art, également à partir de la description explicative qui va suivre, faite en référence à plusieurs exemples de réalisation donnés simplement à titre d'illustration, et qui ne sauraient donc en aucune façon limiter la portée de l'invention. Dans les exemples les pourcentages sont indiqués en poids, sauf indication contraire.

Exemple 1 :

Préparation d'un extrait d'écorce de racines de Filicium decipiens (extrait II).

De l'écorce de racine de la plante a été récoltée en Afrique du Sud. On fait macérer 54 g de cette écorce de racine, préalablement séchée et réduite en poudre pendant 1 h 30 dans 500 ml de méthanol. On porte à ébullition pendant 3 heures puis après refroidissement on filtre. Le filtrat (8,3 g) est séché, repris par 100 ml de méthanol puis on ajoute à la solution méthanolique 500 ml d'acétone. Il se forme un précipité que l'on sépare par filtration. Le précipité est séché sur un solide déshydratant tel que la potasse (0,847 g). On purifie ensuite ce précipté par dialyse pendant 4 jours contre 5 ml d'eau, puis on lyophilise. On obtient ainsi 242 mg d'un extrait lyophilisé selon l'invention, dénommé extrait II, enrichi en saponines, qui sera ensuite utilisé dans les essais décrits ci-après.

Exemple 2 :

Préparation d'un extrait d'écorce de racines de Filicium decipiens (extrait I2Y

On part de 100 g de poudre d'écorces de racines de la plante que l'on met dans 1,5 litre de méthanol. On porte à reflux pendant 1 h. On procède à l'épuisement de la drogue végétale 3 fois de suite avec du solvant neuf. On

regroupe les trois filtrats, on concentre à l'évaporateur rotatif jusqu'à obtention d'un extrait sec 12 selon l'invention.

Exemple 3 :

Mise en évidence de l'activité de stimulation de la production de glycosamino¬ glycanes par des fibroblastes humains, avec l'extrait II de l'exemple 1.

On décrit ci-dessous le test utilisé pour mettre en évidence une activité de stimulation de la production de GAG par des fibroblastes. Ce test in vitro est, par ailleurs, reconnu fiable et significatif pour l'homme de métier.

Principe de l'essai :

On utilise des fibroblastes de derme humain que l'on incube avec de la glucosamine tritiée avec ou sans le produit à tester. Puis, sur les surnageants de culture, on sépare par hydrolyse enzymatique, au moyen de la pronase, la partie proteique des protéoglycanes formés pour isoler les GAG (ayant incorporé la glucosamine radiomarquée) que l'on précipite au moyen de chlorure de cetylpyridinium, en abrégé dénommé CPC. On procède ensuite au comptage de la radioactivité des précipités des cultures traitées et des cultures témoins, qui est proportionnelle à la quantité de GAG synthétisés.

Mise en évidence de l'activité :

Des fibroblastes provenant d'une plastie mammaire d'une femme de 35 ans sont préparés à partir du derme microdisséqué, comme précédemment décrit par R. I. FRESHNEY dans l'ouvrage "Culture of Animal Cells ; a manual of basic technique" édité par A. R. LISS, New York, 1983, pages 104-106. On ensemence les puits de culture d'une boîte multipuits à raison de 10 000 fibroblastes par puits et on met en culture pendant 24 h à 37 * C dans un milieu de culture E 199 C (Gibco) contenant 10 % de sérum de veau foetal.

Au bout de 24 h, le milieu est retiré et remplacé par 100 microlitres de milieu E 199 C sans sérum et contenant le produit à tester, à savoir, dans le cas présent, l'extrait II selon l'invention, solubilisé dans l'eau, ou la même quantité d'eau dans le cas des cultures "témoins", et 4 μCi de glucosamine tritiée, disponible dans le commerce sous la référence TRK 398 chez Amersham, France. On laisse incuber 48 h à 37 * C. Les surnageants sont alors regroupés par 2 et transférés dans

des tubes Eppendorf à vis. Chaque tube contient de ce fait du surnageant issu de la culture d'une quantité initiale de 20.000 cellules. A chacun des tubes on ajoute 200 μl d'une solution à 0,2 mg / ml de pronase, disponible dans le commerce chez Sigma, France, sous la référence P5147, en solution dans du PBS contenant 0,02 % d'azide de sodium. On laisse agir une nuit à 37 * C. La pronase est alors inactivée en plongeant les tubes dans de l'eau bouillante pendant 5 minutes.

Après refroidissement à température ambiante, on ajoute à cette solution de GAG radiomarqués 40 μl d'une solution aqueuse d'un mélange 1/1/1 d'acide hyaluronique, de dermatan sulfate, de chondroïtine sulfate à 8 mg / ml, puis on coprécipite l'ensemble de ces glycosaminoglycanes par 40 μl d'une solution à 100 mg / ml de CPC disponible dans le commerce chez Sigma, France, sous la référence C 9002. Après agitation, on incube 30 minutes à température ambiante. On centrifuge le précipité, on aspire le surnageant et on remet le culot en suspension avec 400 μl d'une solution de CPC à 10 mg / ml. On agite 5 minutes. On solubilise le culot dans 500 μl de méthanol, que l'on transfère ensuite dans des fioles à scintillation contenant 10 ml de liquide scintillant. On compte la radioactivité de chaque fiole à l'aide d'un compteur à scintillations du type "Bêta 1" de la société Kontron, France.

Parallèlement, on évalue la cytotoxicité du produit à tester sur les cellules par un test au sel de tétrazolium dénommé en abrégé XTT, tel que décrits par ROEHM N. W. et al. dans la revue Journal of Immunological Methods, 1991, 142, pages 257-265. Ce test mesure la viabilité cellulaire.

Comme cela a été dit plus haut, la quantité de GAG sécrétés par les cellules en culture est proportionnelle à la radioactivité observée. Les résultats d'activité de l'extrait II selon l'invention sont présentés au tableau ci-après. Les concentrations de l'extrait ont été choisies de telle sorte qu'elles ne modifient pas la viabilité cellulaire.

L'activité de l'extrait, exprimée en pourcentage, est calculée selon la formule suivante :

q-qo

A = x 100 qo

dans laquelle :

A : représente l'activité exprimée en pourcentage, qθ : représente la quantité de GAG radioactifs sécrétés dans les cultures témoin, exprimée en cpm, q : représente la quantité de GAG radioactifs sécrétés dans les cultures traitées par l'extrait selon l'invention, exprimée en cpm.

Enfin, les valeurs de radioactivité obtenue avec les cultures traitées sont comparées à celles des témoins par le test "t" de Student en séries non- appariées, afin de conclure sur la question de savoir si les augmentations de radio¬ activité observées, donc les augmentations de la synthèse des GAG, sont significatives au seuil p = 0,05.

Tableau de résultats

S : significatif

Le tableau ci-dessus démontre de façon claire que l'extrait II, objet de l'invention, stimule de manière significative la production des GAG totaux par des fibroblastes dermiques humains.

De ce fait, les extraits de l'invention, obtenus à partir de la plante du genre Filicium, constituent des ingrédients actifs précieux pour la fabrication de produits traitants cosmétiques ou pharmaceutiques, notamment dermatologiques.

Dans ce cadre, diverses formulations de produits cosmétiques, pharmaceutiques, notamment dermatologiques vont maintenant être données à titre d'illustration, sans caractère limitatif.

Exemple 4 : Gel hydratant :

- Extrait d'écorces II, exemple 1 0,5 g

- Ethanol 5 g - Glycérol 4 g

- Carbopol 940 ® 1,3 g

- Eau + conservateurs qsp 100 g

On dissout l'extrait II dans l'éthanol puis on ajoute le glycérol et une partie de l'eau, la partie restante étant utilisée pour former un gel avec le Carbopol 940®. Ensuite, on réalise le mélange de la solution et du gel, conformément aux techniques de formulation de gel bien connues de l'homme de l'art.

Ce gel peut être utilisé 2 fois par jour pendant 3 semaines sur le visage et sur le corps. Après traitement, la peau retrouve une hydratation normale, son élasticité et son éclat.

Exemple 5 :

Crème de soin du buste :

Cette crème présente la composition suivante : - Extrait d'écorces 12 0,1 g

- Palmitate de rétinol 0,03 g

- Extrait de centella asiatica 0,1 g

- Phosphate d'ascorbyle (sel de magnésium) 0,05 g

- Glycérol 3 g - Particules de nylon 2 g

(Orgasol 2002 UD Nat cos disponible chez Atochem, France)

- Excipient émulsionné + conservateurs et parfums qsp 100 g

On dissout les extraits d'écorces 12 et de centella asiatica dans l'excipient puis on ajoute les autres composants jusqu'à homogénéité de l'ensemble.

Cette crème peut être utilisée deux fois par jour pendant plusieurs semaines, par application topique sur le buste. Après traitement, le buste retrouve son élasticité, sa fermeté et son éclat.

Exemple 6 :

Crème de soin destinée à prévenir et lutter contre l'apparition des rides :

On utilise une composition présentant les ingrédients suivants :

- Extrait II 1 g - Extrait d'hamamélis 2 g

- Glycérine 4 g

- Glycocéramides de blé 0,2 g

- Protéines de pois 2 g

- Acide malique 0,1 g - Excipient émulsionné qsp 100 g

On dissout les extraits II et d'hamamélis dans l'excipient émulsionné puis on ajoute les autres ingrédients jusqu'à homogénéité de l'ensemble.

On obtient ainsi une crème qui peut être utilisée localement, par application topique en massant jusqu'à pénétration complète. Ce traitement, qui peut être prolongé plusieurs semaines, permet de prévenir et de lutter efficacement contre l'apparition des rides et ridules.

Exemple 7 :

Mascara anti-desséchant : On utilise une composition comprenant les ingrédients actifs suivants :

- Extrait II 0,15 g

- Acide hyaluronique 0,1 g

- Cire de carnauba 1 g

- Lanoline 4 g - Palmitate d'isopropyle 2 g

- Cire d'abeille 8 g

- Ozokérite 6 g

- Solution à 4 % de silicate de magnésium 12,5 g

- Gomme de cellulose 0,7 g - Oxyde de fer noir 10 g

- Morpholine 1,6 g

- Copolymere de méthacryloléthylbétaine/ méthacrylate (Amersette®, Amerchol Co., USA) 12 g

- Eau + conservateurs qsp 100 g

Ce mascara est préparé selon les techniques classiques de l'homme de l'art, l'extrait II est introduit dans la phase aqueuse jusqu'à dissolution complète.

Ce mascara représente une bonne adhérence sur le cil. D'autre part, on observera que l'acide hyaluronique renforce l'activité hydratante de l'extrait II de l'invention, ce qui permet de maintenir les fibres de kératine des cils bien hydratées.

Exemple 8 :

Baume traitant pour les lèyres : On prépare une composition comprenant les ingrédients actifs suivants :

- Extrait II, exemple 1 0,1 g

- Stéraramide 20 g

- Méthylglucose dioléate 14 g - Méthylglucose sesquistéarate 6 g

- Méthylglucose polyoxyéthylène (Glucam E10 ®,

Amerchol Co., USA) 15 g

- Huile minérale 4 g

- Pigment 12 g - PEG 10 méthylglucose sesquistéarate 2,5 g

- Eau + conservateurs qsp 100 g

Ce baume est préparé de manière classique dans les règles de l'art, l'extrait II est inclus dans la phase aqueuse. Ce baume appliqué sur les lèvres permet de réaliser une bonne hydratation de celles-ci.

Exemple 9 :

Lotion capillaire "anti-chute" On prépare une lotion comprenant les ingrédients actifs suivants :

- Extrait 12, exemple 2 0,1 g

- Ceraphyl 60® 0,08 g

- Cremophor RH40® 0,4 g

- Alcool éthylique 32 g

- Excipient aqueux parfumé qsp 100 g

Cette lotion est utilisée en massages du cuir chevelu, de préférence le matin. En agissant sur la synthèse des glycosaminoglycanes au niveau de la papille du follicule pileux, cette lotion contribue à retarder la chute des cheveux.

Exemple 10 :

Lotion capillaire "anti-chute"

On prépare une lotion ayant la même composition que celle décrite à l'exemple 9, si ce n'est qu'elle contient en outre 0,1 g de cépharanthine pour 100 g de composition finale.

Exemple 11 : Shampooing traitant On prépare une composition pour shampooing comprenant les ingrédients suivants :

- Extrait II, exemple 1 0,1 g

- Diéthanolamine de coprah 2 g

- Lauryléther sulfate de sodium 0,5 g - Alkylglucoside 15 g

- Parahydroxybenzoate de méthyle 0,5 g

- Excipient qsp 100 g

L'invention comprend tous les moyens constituant des équivalents techniques des moyens décrits ainsi que leurs diverses combinaisons. En particulier, l'invention couvre toute caractéristique qui apparaît être nouvelle par rapport à un état de la technique quelconque, à partir de la description et des revendications prises dans leur ensemble.