作为盐皮质激素受体拮抗剂的化合物的晶型及 其制备方法 技术领域

本发明属于医药技术领域， 具体涉及作为盐皮盾激素受体拮抗剂 化合物的晶型及其制备方法以及化合物的晶型 在制备治疗和 /或预防肾 损伤或心血管疾病的药物中的应用。 背景技术

醛固酮是一种在肾上腺皮盾合成的盐皮盾激素 ， 通过与盐皮盾激 素受体结合， 活化其受体来促进钠离子的保留和钾离子的排 泄， 对电 解盾平衡及改变动脉壁上的内皮细胞、 血管平滑肌细胞、 纤维原细胞 和动脉外膜及其介盾上的基盾的结构和功能具 有重要作用。 醛固酮水 平过高， 导致盐皮盾激素受体被异常活化， 会导致电解盾失衡及血管 损伤和纤维化等， 造成高血压等心血管疾病、 肾 /心脏 /脑等器官损伤以 及内分泌紊乱等疾病。 药物通过竟争性的与盐皮盾激素受体结合， 阻 断醛固酮与盐皮盾激素受体的结合， 来抑制醛固酮介导的损害作用， 进而减少前述疾病的发生。

式 （ 1 ) 所示的化合物 2-氯- 4- [(3S,3aR)- 3-环戊基 - 7- (4-羟基哌啶- 1- 羰基) - 3,3a,4,5-四氢- 2H-吡唑并 [3,4- f]喹啉- 2-基]苯甲腈 （在专利申请 WO2012022121 中已有描述）为醛固酮受体拮抗剂， 选择性与盐皮盾激 素受 体的亲和力较低。

WO2012022121记载了式 （ 1 ) 所示化合物的制备方法， 是通过式 ( 1 ) 所示化合物的外消旋体化合物拆分后旋干所得 ， 得到的化合物为 无定形

式 （ 1 )化合物含有两个手性中心， 为了得到单一的异构体， 本领 域技术人员通常需要进行拆分， WO2012022121 中记载的是先得到式 ( 1 ) 所示化合物的外消旋化合物后， 再进行拆分得到式 （ 1 ) 所示化 合物， 使得式 （ 1 ) 所示化合物难以在 GMP标准化车间内生产， 不利 于产业化， 且成本较大。 发明内容

在药物研发中晶型的研究非常重要， 化合物的晶型不同， 将导致 其稳定性、 溶解度等性盾的不同。 因此本发明人对式 （ 1 ) 所示化合物 的晶型进行了大量的研究， 由此确认和发明了式 （ 1 ) 化合物的晶型。

本发明人在制备式 （ 1 )化合物时， 将拆分步骤提前， 使得式 （ 1 ) 所示化合物很容易在 GMP标准车间内生产， 可以顺利实现产业化。

本发明目的之一在于提供式 （ 1 ) 化合物的晶型。

本发明目的之二在于提供式 （ 1 ) 化合物的制备方法。

本发明目的之三在于提供式（ 1 )化合物的晶型的制备方法及其相 互转化方法。

本发明的另一目的在于提供式（ 1 )化合物的晶型在预防和 /或治疗 肾损伤或心血管疾病 （包括心脏损伤、 高血压、 心力衰竭、 心肌梗塞、 心绞痛、 心脏肥大、 心肌炎、 心脏和血管纤维化、 压力感受器官功能 障碍或心律不齐） 中的应用， 及其在制备治疗和 /或预防肾损伤或心血 管疾病 （包括心脏损伤、 高血压、 心力衰竭、 心肌梗塞、 心绞痛、 心 脏肥大、 心肌炎、 心脏和血管纤维化、 压力感受器官功能障碍或心律 不齐） 的药物中的应用。

本发明的技术方案概述如下：

1.式 （ 1 ) 所示化合物 2-氯- 4- [(3S,3aR)- 3-环戊基 - 7- (4-羟基哌啶- 1- 羰基 - 3,3a,4,5-四氢- 2H-吡唑并 [3,4- f]喹啉- 2-基]苯甲腈的晶型

其特征在于， 使用 Cu- Ka辐射， 以 2Θ角度表示的 X-射线粉末衍 射， 在以下位置有特征峰：

晶型 I： 14.8。士 0.2。、 17.4。士 0.2。、 19.4。士 0.2。、 19.8。士 0.2。；

晶型 Π : 14.6。士 0.2。、 19.9。士 0.2。、 21.2。士 0.2。、 24.6。士 0.2。； 晶型 III: 15.3。士 0·2。、 19.5。士 0·2。、 20.5。士 0·2。、 25.0。士 0·2。。

2.技术方案 1 所述的化合物的晶型， 其特征在于， 使用 Cu- Ka辐 射， 以 2Θ角度表示的 X-射线粉末衍射， 在以下位置有特征峰：

晶型 I ： 14.8。士 0.2。、 16.9。士 0.2。、 17.4。士 0.2。、 19.4。士 0.2。、 19.8。士 0.2。、 26.2°±0.2°；

晶型 II： 14.6。士 0.2。、 18.0。士 0.2。、 18.7。士 0.2。、 19.9。士 0.2。、 21.2。士 0.2。、 24.6°±0.2°；

晶型 III： 10.0。士 0.2。、 15.3。士 0.2。、 15.8。士 0.2。、 19.5。士 0.2。、 20.5。士 0.2。、 25.0°±0.2°„

3.技术方案 1或 2所述的化合物的晶型， 其特征在于， 使用 Cu- Ka 辐射， 以 2Θ角度表示的 X-射线粉末衍射， 在以下位置有特征峰：

晶型 I ： 9.8。士 0·2 ^ο 、 12.9。士 0·2 ^ο 、 14.8。士 0·2 ^ο 、 15.4。士 0·2 ^ο 、 16.9。士 0·2 ^ο 、 17·4。士 0·2。、 19·4。士 0·2。、 19·8。士 0·2。、 22·6。士 0·2。、 26.2°±0.2°;

晶型 II : 4.5。士 0.2。、 9.0。士 0.2。、 12.2。士 0.2。、 14.0。士 0.2。、 14.6。士 0.2。、 18.0°士 0.2 ^ο 、 18.7°±0.2°, 19.9°±0.2°, 21.2°±0.2°, 24.6°±0.2°；

晶型 III： 3.8。士 0·2 ^ο 、 10·0 ^ο 士 0·2 ^ο 、 15.3。士 0·2 ^ο 、 15.8。士 0·2 ^ο 、 17.9。士 0·2 ^ο 、 19·5 ⁰ 士 0·2 ^ο 、 20.5°±0.2°, 25.0°±0.2°, 26·0 ^ο 士 0·2 ^ο 、 27.2°±0.2°„

4.式 （1 ) 所示化合物 2-氯- 4- [(3S,3aR)- 3-环戊基 - 7- (4-羟基哌啶- 1- 羰基 - 3,3a,4,5-四氢- 2H-吡唑并 [3,4- f]喹啉- 2-基]苯甲腈的制备方法，

式 （ 1 )

其特征在于， 包括以下步骤：

( 9 ) 将 2- (3-氯- 4-氰基苯基)- 3-环戊基 - 3,3a,4,5-四氢- 2H-吡唑并 [3,4- f]喹啉- 7-羧酸乙酯手性拆分得 (3S,3aR)- 2- (3-氯- 4-氰基苯基)- 3-环 戊基- 3,3a,4,5-四氢- 2H-吡唑并 [3,4- f]喹啉- 7-羧酸乙酯；

( 10 )将 (3S,3aR)- 2- (3-氯- 4-氰基苯基)- 3-环戊基 - 3,3a,4,5-四氢- 2H- 吡唑并 [3,4- f]喹啉 -7-羧酸乙酯水解制得（3 S,3aR)-2-(3-氯- 4-氰基苯 基)- 3-环戊基 - 3,3a,4,5-四氢- 2H-吡唑并 [3,4- f]喹啉- 7-羧酸；

( 11 ) (3S,3aR)- 2- (3-氯- 4-氰基苯基)- 3-环戊基 - 3,3a,4,5-四氢- 2H-吡 唑并 [3,4- f]喹啉- 7-羧酸与 4-羟基哌啶通过缩合反应制得式（ 1 ) 所示化 合物。

5. 技术方案 4的制备方法， 还包括下述步骤之一：

将步骤 （ 1 1 )得到的式 （ 1 ) 所示化合物置于无水低级醇、 乙腈、 乙酸乙酯与乙醇的混合溶剂、 甲醇与四氢呋喃的混合溶剂、 或乙腈与 丙酮的混合溶剂中， 加热所得到的溶液直至澄清， 然后使所述溶液降 温， 将析出的固体过滤并干燥； 或者

将步骤 （ 1 1 )得到的式 （ 1 ) 所示化合物置于低级醇中使其溶解， 再将所得到的溶液滴入水中， 过滤， 和任选地真空干燥； 或者

将步骤（ 11 )得到的式（ 1 )所示化合物用水和乙腈混合溶液浆洗， 过滤， 和任选地真空干燥； 或者

将步骤（ 1 1 )得到的式（ 1 ) 所示化合物溶于丙酮中， 再将所得到 的溶液滴入正庚烷中， 过滤。

5-1. 技术方案 4或 5的制备方法，还包括在步骤（ 9 )前的步骤（ 8 ): ( 8 ) (E)- 6-环戊基亚甲基 -5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉- 2-羧酸乙酯与

2—氯— 4-肼基苯甲腈盐酸盐通过缩合反应制得 2- (3-氯- 4-氰基苯基)- 3-环 戊基- 3,3a,4,5-四氢- 2H-吡唑并 [3,4- f]喹啉- 7-羧酸乙酯。

5-2. 技术方案 5-1的制备方法，还包括在步骤（8 )前的步骤（7 )： ( 7 )2-氯- 4-肼基苯甲腈与通过盐酸成盐反应制得 2-氯- 4-肼基苯甲 腈盐酸盐。

5-3. 技术方案 5-2的制备方法，还包括在步骤（7 )前的步骤（6 )： ( 6 ) 2-氯- 4-氟苯腈与水合肼通过取代反应制得 2-氯- 4-肼基苯甲 腈。

5-4. 技术方案 5-3的制备方法，还包括在步骤（6 )前的步骤（5 )： ( 5 ) 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉- 2-羧酸乙酯与环戊基甲醛通过缩合 反应制得 (E)- 6-环戊基亚甲基- 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉 -2-羧酸乙酯。

5-5. 技术方案 5-4的制备方法，还包括在步骤（5 )前的步骤（4 )： ( 4 ) 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉- 2-甲腈通过水解和酯化反应得到 5- 氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉 -2-羧酸乙酯。

5-6. 技术方案 5- 5的制备方法，还包括在步骤（4 )前的步骤（3 )：

( 3 ) 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉- N-氧化物与 Ν,Ν-二甲氨基甲酰氯， 三甲基氰硅烷通过取代反应得到 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉 -2-甲腈。 5-7. 技术方案 5-6的制备方法， 还包括在步骤（3 )前的步骤（2 )： ( 2 ) 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉通过氧化反应得到 5-氧代- 5,6,7,8-四 氢喹啉 -N-氧化物。

5-8. 技术方案 5- 7的制备方法， 还包括在步骤（2 )前的步骤（ 1 ) : ( 1 ) 1,3-环己二酮与乙酸铵， 丙烯醛通过缩合和加成反应得到 5- 氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉。

6.如技术方案 1、 2或 3所述的式（ 1 )所示化合物的晶型 I的制备 方法， 其特征在于， 将化合物 2-氯- 4- [(3S,3aR)- 3-环戊基 - 7- (4-羟基哌啶 - 1-羰基) - 3,3a,4,5-四氢- 2H-吡唑并 [3,4- f]喹啉- 2-基]苯甲腈置于无水低 级醇、 乙腈、 乙酸乙酯与乙醇的混合溶剂、 甲醇与四氢呋喃的混合溶 剂、 或乙腈与丙酮的混合溶剂中， 加热所得到的溶液直至澄清， 然后 使所述溶液降温， 将析出的固体过滤并干燥得到化合物的晶型 I； 或 者将化合物 2-氯- 4- [(3S,3aR)- 3-环戊基 - 7- (4-羟基哌啶- 1-羰基) - 3,3a,4,5- 四氢- 2H-吡唑并 [3,4- f]喹啉- 2-基]苯甲腈溶于丙酮中， 再将所得到的溶 液滴入正庚烷中， 过滤得到晶型 I 。

7.如技术方案 1、 2或 3所述的式（ 1 )所示化合物的晶型 III的制备 方法， 其特征在于， 将化合物 2-氯- 4- [(3S,3aR)- 3-环戊基 - 7- (4-羟基哌啶 - 1-羰基) - 3,3a,4,5-四氢- 2H-吡唑并 [3,4- f]喹啉- 2-基]苯甲腈置于低级醇 中使其溶解， 再将所得到的溶液滴入水中， 过滤得到晶型 III； 或者将 化合物 2-氯- 4- [(3S,3aR)- 3-环戊基 - 7- (4-羟基哌啶 -1-羰基) - 3,3a,4,5-四氢 -2H-吡唑并 [3,4- f]喹啉- 2-基]苯甲腈用水和乙腈混合溶液浆洗， 过滤得 到晶型 III。

8.如技术方案 1、 2或 3所述的式（ 1 )所示化合物的晶型 II的制备 方法， 其特征在于， 将化合物 2-氯- 4- [(3S,3aR)- 3-环戊基 - 7- (4-羟基哌啶 - 1-羰基) - 3,3a,4,5-四氢- 2H-吡唑并 [3,4- f]喹啉- 2-基]苯甲腈置于低级醇 中使其溶解， 再将所得到的溶液滴入水中， 过滤得到晶型 III； 或者将 化合物 2-氯- 4- [(3S,3aR)- 3-环戊基 - 7- (4-羟基哌啶 -1-羰基) - 3,3a,4,5-四氢 -2H-吡唑并 [3,4- f]喹啉- 2-基]苯甲腈用水和乙腈混合溶液浆洗， 过滤得 到晶型 III； 然后再将晶型 III真空干燥得晶型 II。

在本发明中， 所述 "低级醇，， 为甲醇、 乙醇、 正丙醇等。

9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组� ��物含有技术方案 1、 2或 3所述的式 （ 1 ) 所示化合物的晶型， 和药用可接受的载体， 其中 所述晶型包括晶型 I 、 II、 III或其组合。

9-1.本发明还提供一种包括式 （ 1 ) 所示化合物的晶型 I 、 II、 III 或其组合的药物组合物。 所述药物组合物还可以包括药用可接受的载 体， 例如赋形剂、 粘合剂、 增湿剂、 崩解剂、 增稠剂等。

10. 技术方案 1、 2或 3所述的式 （ 1 ) 所示化合物的晶型在制备 治疗和 /或预防肾损伤或心血管疾病的药物中的应用� � 其中所述晶型包 括晶型 I 、 II、 III或其组合。

11. 技术方案 10的应用， 其中所述心血管疾病包括心脏损伤、 高 血压、 心力衰竭、 心肌梗塞、 心绞痛、 心脏肥大、 心肌炎、 心脏和血 管纤维化、 压力感受器官功能障碍或心律不齐。

12. 一种治疗和 /或预防肾损伤或心血管疾病的方法， 所述方法包 括给予需要其的受试者治疗有效量的技术方案 1、 2或 3所述的式（ 1 ) 所示化合物的晶型， 其中所述晶型包括晶型 I 、 II、 III或其组合。

13. 技术方案 12的方法， 其中所述心血管疾病包括心脏损伤、 高 血压、 心力衰竭、 心月几梗塞、 心绞痛、 心脏月巴大、 心月几炎、 心脏和血 管纤维化、 压力感受器官功能障碍或心律不齐。

14. 用于治疗和 /或预防肾损伤或心血管疾病的技术方案 1、 2或 3 所述的式 （ 1 ) 所示化合物的晶型， 其中所述晶型包括晶型 I 、 II、 III 或其组合。

15. 技术方案 14的应用， 其中所述心血管疾病包括心脏损伤、 高 血压、 心力衰竭、 心肌梗塞、 心绞痛、 心脏肥大、 心肌炎、 心脏和血 管纤维化、 压力感受器官功能障碍或心律不齐。

16. 式 （ 1 ) 所示化合物的晶型 I 、 II、 III及无定形在一定条件下 可以相互转化， 本发明还提供了晶型 I、 晶型 II、 晶型 III以及与无定 形之间的转化关系。

无定形在无水乙醇中重结晶制得晶型 I ；

晶型 I 、 II、 III或其组合在低级醇溶剂中溶解后旋干制得无 定形； 晶型 II在无水乙醇中重结晶制得晶型 I；

无定形溶于甲醇， 然后将溶液滴入水中制得晶型 III；

晶型 III室温干燥制得晶型 II；

晶型 I在乙腈与水的体系中浆洗制得晶型 III；

晶型 III在无水乙醇中重结晶制得晶型 I 。 附图说明

图 1 : 式 （ 1 ) 化合物晶型 I的 XRD图语；

图 2: 式 （ 1 ) 化合物晶型 II的 XRD图语；

图 3: 式 （ 1 ) 化合物晶型 III的 XRD图语；

图 4: 式 （ 1 ) 化合物晶型 I、 晶型 II、 晶型 III以及与无定形之间 的转化关系图， 其中：

1.乙醇重结晶；

2.低级醇溶解后旋干；

3.溶于甲醇， 滴入水析出；

4.低级醇溶解后旋干；

5.低级醇溶解后旋干；

6.乙醇重结晶；

7.乙腈 /水浆洗；

8.乙醇重结晶；

9.室温干燥。 具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式， 对本发明的上述内容作进 一步的详细说明。 但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限 于以 下实施例。

实施例 1 2-氯 - 4- [(3 & 3aW)- 3-环戊基 -7- (4-羟基哌啶 -1-羰 基)- 3,3a,4,5-四氢- 2//-吡唑并 [3,4- |喹啉- 2-基]苯甲腈的制备

1、 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉 （01 ) 的制备

反应方程式：

投 2个平行反应：

在 100 L的反应釜中， 加入 45 L甲苯， 搅拌下加入 1,3-环己二酮 15 kg, 加热至固体溶解， 加入乙酸铵 24 kg, 加热至回流， 反应 12 h, 冷却至 0°C , 分批緩慢加入丙烯醛共 15 kg, 緩慢升温至回流， 反应 12 h, 冷却， 分层， 下层用甲苯洗涤 2次 （5 Lx2 ) , 合并甲苯与上层溶 液， 旋蒸， 共得 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉粗品 7.4 kg, 黑色液体， 产率 18.8%。

2、 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉- N-氧化物 ( 02 ) 的制备

反应方程式：

实验操作如下： 将 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉粗品 7.4 kg投入 100 L 的反应釜中， 补加二氯甲烷至总量为 50 L, 降温至 - 10°C , 分批加入间 氯过氧苯甲酸共 13 kg, 加入完毕， 室温搅拌反应 20 h, 抽滤， 滤饼用 二氯甲烷洗涤 2 次， 与滤液合并， 用饱和石 代石 酸钠溶液洗涤至 化 钾淀粉试纸不显蓝色， 有机相用无水硫酸钠干燥， 得溶液 50 L, 不经 处理直接投入下一步反应。

3、 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉- 2-甲腈 ( 03 ) 的制备

反应方程式：

在 100 L的反应釜中，加入上步得到的 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉- Ν- 氧化物溶液 50 L, 加入三甲基氰硅烷 10 kg,緩慢加入 Ν,Ν-二甲氨基甲 酰氯 11 kg, 室温搅拌反应 48 h, 搅拌下緩慢分批加入饱和氢氧化钠水 溶液调节 pH至 8〜9, 分层， 萃取， 水相用二氯甲烷洗涤 3次（8 Lx3 ) , 合并有机相， 用水洗涤 1次（20 L ) , 有机相用无水 A 酸钠干燥， 过滤， 旋蒸， 得约 8 L红黑色液体， 冷却， 乙醇结晶， 得 5-氧代- 5,6,7,8-四氢 喹啉- 2-甲腈 930 g, 产率 10.7% (以 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉为原料计 算） 。

4、 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉- 2-羧酸乙酯 ( 05 ) 的制备

反应方程式：

投 3个平行反应：

在 2 L的圆底烧瓶中， 加入 800 mL无水乙醇和 5-氧代- 5,6,7,8-四 氢喹啉 -2-甲腈 280 g, 冰浴下加入浓盐酸 400 mL, 升温回流反应 16 h, 冷却， 旋蒸， 加入 1 L无水乙醇， 冷却至 0°C , 滴加氯化亚砜 200 mL, 升温至回流反应 10 h, 旋蒸， 粗品加入二氯甲烷溶解， 用碳酸氢钠水 溶液调节 pH至碱性， 分层， 水相用二氯甲烷萃取 3次， 合并有机相， 干燥， 旋蒸， 共得 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉- 2-羧酸乙酯 875 g, 产率 8.18%。

5、 （ )- 6-环戊基亚甲基 -5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉- 2-羧酸乙酯 （07 ) 的制备

反应方程式:

投 3个平行反应：

在 2 L的单口瓶中，加入 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉 -2-羧酸乙酯 291 g 和 450 mL乙醇， -20 °〇冰浴中加入环戊基甲醛 213 mL, 搅拌 lO min, 緩慢加入吡咯烷 110 mL, N ₂ 置换 3次， 室温避光反应 8 h, -20 °〇冰 浴中静置 2 h, 抽滤， 固体用冰乙醇洗涤， 干燥， 共得 (E)- 6-环戊基亚 甲基- 5-氧代- 5,6,7,8-四氢喹啉- 2-羧酸乙酯 862 g, 产率 72.3%。

6、 2-氯- 4-肼基苯甲腈盐酸盐 （08 ) 的制备

反应方程式：

08

在 100 L的反应釜中， 加入 40 L乙醇和 2-氯- 4氟苯腈 7 kg, 加入 水合肼 4 L, 加热回流反应 5 h, 冷却， 离心， 固体投入到 100 L的反 应釜中， 加入 40 L无水乙醇， 緩' I"曼加入浓盐酸 7.5 L, 加热回流反应 2 h, 离心， 干燥， 得 2-氯- 4-肼基苯甲腈盐酸盐 7 kg, 收率 76.2%。

7、 2- (3-氯- 4-氰基苯基)- 3-环戊基 - 3,3a,4,5-四氢- 2//-吡唑并 [3,4- |喹 啉— 7—羧酸乙酯 （09 ) 的制备

投 4个平行反应：

在 2 L的单口瓶中， 加入 6-环戊基亚甲基 -5-氧代- 5,6,7,8-四氢 喹啉- 2-羧酸乙酯 215.5 g、 2-氯- 4-肼基苯甲腈盐酸盐 191 g和 900 mL 乙醇， N ₂ 置换 3次， 80°C避光回流反应 9 h, 冷却至室温， - 20°C冰浴 中静置 2 h, 抽滤， 固体用冰乙醇、 乙醚分别洗涤， 干燥， 共得 2- (3- 氯- 4-氰基苯基)- 3-环戊基 -3,3a,4,5-四氢- 2//-吡唑并 [3,4-/]喹啉- 7-羧酸乙 酯 1026 g, 产率 79.3%。

8、（3 & 3aW)- 2- (3-氯- 4-氰基苯基)- 3-环戊基 - 3,3a,4,5-四氢- 2//-吡唑并 [3,4- |喹啉- 7-羧酸乙酯 （12 ) 的制备

将 2- (3-氯- 4-氰基苯基)- 3-环戊基 - 3,3a,4,5-四氢- 2//-吡唑并 [3,4- |喹 啉—7—羧酸乙酯用 SFC (超临界流体色语仪）拆分， 有两个光学异构体， 分离收集第一个组分为（3 & 3aW)- 2- (3-氯- 4-氰基苯基）- 3-环戊基 - 3,3a,4,5-四氢- 2//-吡唑并 [3,4-/]喹啉- 7-羧酸乙酯；

拆分条件：

仪器： SFC ( Novasep 30-50 )

制备柱： Chiralpak IA, 20 μιη, 5x25 cm

流动相： A相为超临界 C0 ₂ , B相为二氯甲烷：四氢呋喃:二乙醇胺 =50:50:0.1 ( vol:vol:vol ) , A:B=50:50 ( vohvol )

流速 150 g/min

检测波长： 465 nm

样品配置：取 2- (3-氯- 4-氰基苯基)- 3-环戊基 - 3,3a,4,5-四氢- 2//-吡唑 并 [3,4- |喹啉- 7-羧酸乙酯 1025 g, 添加二氯甲烷超声溶解， 滤过， 得浓 度约为 50 mg/mL的样品溶液。

用 SFC拆分， 收集第一个出峰异构体样品即为（3 & 3aW)- 2- (3-氯- 4- 氰基苯基)- 3-环戊基 -3,3a,4,5-四氢- 2//-吡唑并 [3,4-/]喹啉- 7-羧酸乙酯 601.58 g。 9、（3&3& -2-(3-氯-4-氰基苯基)-3-环戊基-3,3^4,5-四氢-2//-吡 唑并 [3,4- 喹啉- 7-羧酸（ 13 ) 的制备

反应方程式： COOCH ₂ CH ₃ 氢氧化钠

四氢呋喃、 甲醇，

室温

在 20 L的反应釜中， 加入 (3 & 3aW)- 2- (3-氯- 4-氰基苯基)- 3-环戊基 - 3,3a,4,5-四氢- 2//-吡唑并 [3,4-/]喹啉- 7-羧酸乙酯 1066 g、 4 L四氢呋喃 和 2 L甲醇， - 10°C搅拌 10 min, 緩' I"曼加入溶有氢氧化钠 192 g的水溶 液 1.2 L, 室温反应 4 h, 旋去约一半溶剂， 用稀盐酸调 pH至 3〜4, 抽 滤， 固体用冰甲醇和乙醚分别洗涤， 干燥， 得 (3 & 3aW)- 2- (3-氯- 4-氰基 苯基) 3—环戊基 3,3a,4,5-四氢- 2//-吡唑并 [3,4- |喹啉- 7-羧酸 867 g, 产率 86.7%。

10、 2-氯- 4- [(3 & 3aW)- 3-环戊基 - 7- (4-羟基哌啶- 1-羰基) - 3,3a,4,5-四氢 -2//-吡唑并 [3,4- 喹啉- 2-基]苯甲腈 （式（1)化合物） 的制备

反应方程式：

在 5 L 的反应瓶中， 加入 (3 & 3aW)- 2- (3-氯- 4-氰基苯基)- 3-环戊基 - 3,3a,4,5-四氢- 2//-吡唑并 [3,4-/]喹啉- 7-羧酸 380 g、 900 mL二氯甲烷和 360 mL N,N-二甲基甲酰胺， 搅拌下加入三乙胺 380 mL, 降温至 - 10°C , 继续搅拌 10 min,加入溶有 4-羟基哌啶 137 g的二氯甲烷溶液 700 mL, 搅拌 5 min, 加入 2- (7-偶氮苯并三氮唑)- A v yV-四甲基脲六氟磷酸酯 ( HATU ) 380 g, 室温反应 3 h, 补加 2- (7-偶氮苯并三氮唑)- A v W- 四甲基脲六氟磷酸酯 50 g,反应 1 h,旋蒸除去二氯甲烷和部分三乙胺， 将剩余溶液滴入 10倍量水中， 有固体析出， 抽滤， 固体用 2 L二氯甲 烷溶解， 用 2 L水洗涤 1次， 水相用 500 mL二氯甲烷反萃 1次， 合并 有机相， 干燥， 旋干得式 （ 1 ) 固体 290 g, 产率 63.7%。

分子式： C ₂₈ H ₃ 。C1N ₅ 0 ₂ 盾语 ( M+H ) ： 504

^! H-NMR (CDC1 ₃ , 400 MHz): δ 8.375-8.395 (IH, d), 7.423-7.474 (2H, m), 7.264-7.276 (IH, d), 6.968-6.995 (IH, dd), 4.641-4.678 (IH, dd), 4.17-4.21 (IH, m), 3.99 (IH, s), 3.76-3.79 (IH, m), 3.515 (IH, m), 3.41-3.44 (IH, m), 3.230-3.322 (2H, m), 2.995 (IH, m), 2.321-2.352 (IH, m), 2.10-2.15 (2H, m), 1.978-2.089 (2H, m), 1.863-1.895 (IH, m), 1.758-1.777 (IH, m), 1.433-1.663 (7H, m), 1.221-1.352 (2H, m)。 实施例 2

2-氯 - 4- [(3 & 3a ?)- 3-环戊基 -7- (4-羟基哌啶- 1 -羰基）- 3,3a,4,5-四氢 -2//-吡唑并 [3,4- 喹啉- 2-基]苯甲腈晶型 I的制备（ 1 )

将实施例 1制备所得式（ 1 )所示化合物 1 g, 置于 3 mL无水乙醇 中， 加热至 80°C , 直至溶液澄清， 然后緩慢降温至室温， 有大量固体 析出， 过滤， 用无水乙醇淋洗三遍， 将得到的固体放置于真空干燥箱 中 60°C真空干燥 12 h, 获得晶型 I。 晶型 I的 X-射线粉末衍射（XRD ) 图语如图 1中所示， 其中主要参数如下：

2Θ角 d值 强度

单位： 度（ 单位： 埃 单位：％

实施例 3

2-氯 - 4- [(3 & 3aW)- 3-环戊基 -7- (4-羟基哌啶- 1 -羰基）- 3,3a,4，5-四氢 -2/ -吡唑并 [3,4- 喹啉- 2-基]苯甲腈晶型 I的制备（2 )

将实施例 1制备所得式（ 1 )所示化合物 146 mg, 80°C溶于 50 mL 乙腈中， 后緩慢降温至室温， 搅拌过夜， 过滤， 得晶型 I。 实施例 4

2-氯 - 4- [(3 & 3aW)- 3-环戊基 -7- (4-羟基哌啶 - 1 -羰基 )- 3,3a,4,5-四氢 -2//-吡唑并 [3,4- ]喹啉- 2-基]苯甲腈晶型 I的制备（3 )

将实施例 1制备所得式 （ 1 ) 所示化合物 200 mg, 置于 100 mL圆 底烧瓶中， 加 10 mL乙酸乙酯， 78 °C回流仍不溶解， 后加入 0.5 mL乙 醇后 80°C搅拌， 迅速溶解， 緩慢降温至室温， 2天后过滤， 得晶型 I。 实施例 5

2-氯 - 4- [(3 & 3a ?)- 3-环戊基 -7- (4-羟基哌啶- 1 -羰基）- 3,3a,4,5-四氢 -2//-吡唑并 [3,4- 喹啉- 2-基]苯甲腈晶型 I的制备（4 )

将实施例 1制备所得式 （ 1 ) 所示化合物 100 mg, 置于 100 mL圆 底烧瓶中， 加 3 mL丙酮， 溶解， 滴入 20 mL正庚烷中， 析出固体， 过 滤， 得晶型 I。 实施例 6

2-氯 - 4- [(3 & 3a ?)- 3-环戊基 -7- (4-羟基哌啶- 1 -羰基）- 3,3a,4,5-四氢 -2//-吡唑并 [3,4- 喹啉- 2-基]苯甲腈晶型 I的制备（ 5 )

将实施例 1制备所得式 （ 1 ) 所示化合物 100 mg, 置于 100 mL圆 底烧瓶中，取 1 mL甲醇与 1 mL四氢呋喃制成甲醇:四氢呋喃 =1 :1的混 合溶剂， 取 0.5 mL混合溶剂加入到圆底烧瓶中， 60 ！：加热搅拌溶解， 后緩慢降至室温， 析出固体， 过滤， 得晶型 I。 实施例 7

2-氯 - 4- [(3 & 3a ?)- 3-环戊基 -7- (4-羟基哌啶- 1 -羰基）- 3,3a,4,5-四氢 -2//-吡唑并 [3,4- 喹啉- 2-基]苯甲腈晶型 I的制备（6 )

将实施例 1制备所得式 （ 1 ) 所示化合物 100 mg, 置于 100 mL圆 底烧瓶中，取 5 mL乙腈与 5 mL丙酮配制成乙腈：丙酮 =1 :1的混合溶剂， 取 3.5 mL混合溶剂加入到圆底烧瓶中， 60 °C加热搅拌溶解，后緩慢降 至室温， 析出固体， 过滤， 得晶型 I。 实施例 8

2-氯 - 4- [(3 & 3aW)- 3-环戊基 -7- (4-羟基哌啶- 1 -羰基）- 3,3a,4,5-四氢

-2//-吡唑并 [3,4- 喹啉- 2-基]苯甲腈晶型 III的制备（ 1 )

将实施例 1制备所得式（ 1 )所示化合物 200 mg置于 4 mL甲醇中， 80°C溶解， 将该溶液反滴入 40 mL水中， 过滤得到晶型 III。 晶型 III的 X-射线粉末衍射 （XRD ) 图语如图 3中所示 其中主要 参数如下：

2Θ角 d值 强度

单位： 度 （° ) 单位： 埃 单位：％

3.845 22.96100 44.0

6.712 13.15849 5.8

7.697 11.47721 9.4

9.023 9.79324 8.1

9,970 8.86513 56.2

11.600 7.62276 17.7

12.610 7.01426 14,0

14.179 6.24137 23.1

15.266 5.79922 85.5

15.804 5.60313 49.9

16.834 5.26242 37.2

17.664 5 01696 39.5

19.455 4.55904 100.0

20.552 4.31804 85.1

21.124 4.20247 14.3

22.123 4.01479 27.4

22.972 3.86842 31.8

24.109 3.68836 33.2

25.055 3.55133 77.9

26.033 3 42005 46.2

27.241

3.27104 47.3

28.408 17.9

3.13930

29.946 19.7

2.98146

30.949 17.5

2.88708

32.306 21.4

2.76887

32.997 12 5

2.71244

33.935 14.0

2.63952

34.882 18.4

2.57004

35.381 11.6

36.952 2.53492 13.1

38.563 2 43069 10.5

39.280 2.33273 12.5

40.396 2.29184 13 2

41.806 2.23102 12.4

2.15901 实施例 9

2-氯 - 4- [(3 & 3a ?)- 3-环戊基 -7- (4-羟基哌啶- 1 -羰基）- 3,3a,4,5-四氢 -2//-吡唑并 [3,4- 喹啉- 2-基]苯甲腈晶型 III的制备（ 2 )

将实施例 1制备所得式 （ 1 ) 所示化合物 100 mg置于 10 mL离心 管中，取 10 mL水和 1 mL乙腈配制成水：乙腈 =10:1的混合溶液，取 8 mL 水与乙腈的混合溶液加入离心管中， 搅拌浆洗， 过滤得到晶型 III。 实施例 10 2-氯 - 4- [(3 & 3a ?)- 3-环戊基 -7- (4-羟基哌啶- 1 -羰基）- 3,3a,4,5-四氢

-2//-吡唑并 [3,4- 喹啉- 2-基]苯甲腈晶型 II的制备

将实施例 8制备的晶型 III室温下真空干燥 12 h获得晶型 II。

晶型 II的 X-射线粉末衍射 （XRD ) 图语如图 2中所示， 其中主要 参数如下：

2Θ角 d值 强度

单位 .： 度（o ) 单位： 埃 单位：(

3.574 24 70236 4.9

4.451 19.83656 56.2

7.515 11.75417 5.7

8 478 10.42104 28.0

9.002 9.81527 44.9

10.638 8.30970 23.2

12.216 7,23974 32.2

13.542 6.53344 20.0

14.049 6.29880 38.1

14 607 6.05934 90.9

16.422 5.39356 31.3

17.123 5.17422 26.2

17.992 4.92615 56.8

18.695 4.74270 57.7

19 873 4.46396 100.0

21.230 4.18168 68.6

22.819 3.89399 28.9

24.589 3.61751 60.0

25 769 3.45445 26.8

26 520 3 35833 31.3

27,023 3.29690 28.0

28.447 3.13509 21.9

30.037 2.97262 10.2

30.853 2 89580 6.8

32.143 2.78249 7.7

34.206 2.61925 6.2

35.439 2.53088 5.7

36.144 2 48317 6.6

39.188 2.29700 6.6

40.726 2.21373 4.9

42.424 2, 12895 6.5

43.393 2,08364 6.2 实验例 1

本发明化合物晶型 I的稳定性

供试品：

式 （ 1 ) 所示化合物晶型 I： 通过实施例 2制得；

影响因素试验考察条件：

y j温试验：

①将式（ 1 )所示化合物晶型 I平铺于干燥洁净表面 中， 在 60°C 条件下放置 10天， 分别于第 5天和第 10天取样， 测定有关物盾及式 ( 1 ) 所示化合物的含量， 与 0天的样品进行比较；

②将式 （ 1 ) 所示化合物晶型 I内层用药用低密度聚乙烯袋、 外套 聚酯 /铝 /聚乙烯药品包装用复合膜密封包装，在 60 °C条件下放置 10天， 分别于第 5天和第 10天取样， 测定有关物盾及式 （ 1 ) 所示化合物的 含量， 与 0天的样品进行比较。

高湿试验： 将式（ 1 )所示化合物晶型 I平铺于干燥洁净表面 i中， 在 25°C、RH90% ± 5%条件下放置 10天，分别于第 5天和第 10天取样， 测定有关物盾及式 （ 1 ) 所示化合物的含量， 与 0天的样品进行比较。

光照试验： 将式（ 1 )所示化合物晶型 I平铺于干燥洁净表面 i中， 置光照箱内， 于照度为 4500 Lx ± 500 Lx条件下放置 10天， 分别于第 5天和第 10天取样， 测定有关物盾及式 （ 1 ) 所示化合物的含量， 与 0 天的样品进行比较。

含量： 按照中国药典 2010版附录 V D高效液相色语法， 釆用外标 法进行测定。

有关物盾： 按照中国药典 2010版附录 V D高效液相色语法， 釆用 面积归一化法进行测定。

试验结果： 见下表 1。

表 1 式 （ 1 ) 所示化合物晶型 I的影响因素试验考察结果

0 99.5 0.54

5 98.9 0.82

60°C -①

10 98.1 0.97

5 99.7 0.58

60°C -②

10 99.0 0.60

5 99.1 0.56

RH90%±5%

10 99.0 0.56

5 98.1 1.2

4500Lx±500Lx

10 97.0 2.0

本发明人对式 （ 1 ) 所示化合物的晶型 I的稳定性进行了考察， 由 试验结果可知， 式 （ 1 ) 所示化合物的晶型 I在高温、 高湿和光照的条 件下， 有关物盾 、 式 （ 1 ) 所示化合物的含量基本没有变化， 晶型 I的 稳定性优于无定形， 表明式 （ 1 ) 所示化合物的晶型 I具有较高的稳定 性， 便于药品的制备、 储存和运输， 更利于保证药物使用的有效性和 安全性。 实验例 2

本发明化合物晶型 II的稳定性

供试品：

式 （ 1 ) 所示化合物晶型 II： 通过实施例 4制得；

影响因素试验考察条件：

高温试验：

①将式 （ 1 ) 所示化合物晶型 II平铺于干燥洁净表面 中， 在 60 °C条件下放置 10天， 于第 10天取样， 测定有关物盾及式 （ 1 ) 所示化 合物的含量， 与 0天的样品进行比较；

②将式（ 1 )所示化合物晶型 II内层用药用低密度聚乙烯袋、 外套 聚酯 /铝 /聚乙烯药品包装用复合膜密封包装，在 60°C条件下放置 10天， 于第 10天取样， 测定有关物盾及式 （ 1 ) 所示化合物的含量， 与 0天 的样品进行比较。

高湿试验： 将式（ 1 )所示化合物晶型 II平铺于干燥洁净表面 i中， 在 25°C、 RH90% ± 5%条件下放置 10天， 于第 10天取样， 测定有关物 盾及式 （ 1 ) 所示化合物的含量， 与 0天的样品进行比较。

光照试验： 将式（ 1 )所示化合物晶型 II平铺于干燥洁净表面 i中， 置光照箱内， 于照度为 5000 Lx 士 500 Lx条件下放置 10天， 于第 10 天取样， 测定有关物盾及式 （ 1 ) 所示化合物的含量， 与 0天的样品进 行比较。

含量： 按照中国药典 2010版附录 V D高效液相色语法， 釆用外标 法进行测定。

有关物盾： 按照中国药典 2010版附录 V D高效液相色语法， 釆用 面积归一化法进行测定。

试验结果： 见下表 2。 表 2 式 （ 1 ) 所示化合物晶型 II的影响因素试验考察结果

式（ 1 )所示化合物的

实验条件 天 有关物盾 ( % ) 含量 （％ )

0 96.2 2.6

60°C -① 10 96.2 2.8

60°C -② 10 97.1 2.7

RH90%±5% 10 96.9 2.6

5000Lx±500Lx 10 95.5 2.8 本发明人对式（ 1 )所示化合物的晶型 II的稳定性进行了考察， 由 试验结果可知， 式（ 1 )所示化合物的晶型 II在高温、 高湿和光照的条 件下， 有关物盾、 式（ 1 ) 所示化合物的含量基本没有变化， 晶型 II的 稳定性优于无定形， 表明式（ 1 )所示化合物的晶型 II具有较高的稳定 性， 便于药品的制备、 储存和运输， 更利于保证药物使用的有效性和 安全性。 实险例 3

本发明化合物晶型 I对高盐诱导的 Dahl盐敏感 （Dahl/ss ) 大鼠的 器官保护和降压作用

供试品及配制：

本发明化合物晶型 I的固体分散体 （本发明化合物晶型 I:PVPK30 =1 :8 (w/w) ) ： 本发明化合物晶型 I的固体分散体用适量的灭菌注射用 水配制浓度为 0.03、 0.10、 0.30、 1.00 mg/mL的混悬液， 每天临用前配 制。

动物分组及造模：

实验动物： 雄性 8-9周龄的 SPF级 （无特定病原体级） Dahl/ss大 鼠（购自 HARLAN LABORATORIES, INC. , 由北京维通利华试验动物 有限公司代购） ， 正常检疫 1周后， 体征状况良好的入选本实验。

Dahl/ss大鼠根据给药前检测血压随机分为 6组：

正常对照组 （η=10 ) ,

模型组 （4%NaCl, η=12 ) ,

本发明化合物晶型 I治疗组， 4组： 0.3 mg/kg/day剂量组 （ n=l 1 ) 、

1 mg/kg/day剂量组 （ n=l 1 ) 、

3 mg/kg/day剂量组 （ n=l 1 ) 、

10 mg/kg/day剂量组 （ n=l 1 ) ,

n为大鼠只数。 实验方法:

釆用含 4%NaCl的 AIN- 93G试验动物饲料诱导 Dahl/ss大鼠高血压 肾病模型评价本发明化合物晶型 I的体内药效活性。

在实验开始前 1周， 釆用夹尾法血压检测方法进行两次血压监测， 使大鼠适应血压监测操作。 实验开始前监测血压一次， 作为实验给药 前的基础血压值。 大鼠根据给药前检测血压随机分组。 第二天开始造 模， 将含 4%NaCl的 AIN-93G试验动物饲料用做饲料， 动物自由进食 和饮水， 持续 42天。

正常对照组给予 AIN- 93G饲料， 模型组及本发明化合物晶型 I治 疗组的各剂量组给予含 4%NaCl的 AIN- 93G饲料。

本发明化合物晶型 I治疗组分别给予本发明化合物晶型 I 0.3、 1、

3、 10 mg/kg/day, 每天灌胃给药两次， 每次灌胃体积为 5 mL/kg。 模型 组与正常对照组给予等量的灭菌注射用水。

血压 （收缩压， 简称 SBP )检测： 每周测量 1次血压， 连续 6周， 分析各组血压变化情况。

肾脏、 心脏病理检测： 试险结束后， 无痛方式处死大鼠， 摘取双 侧肾脏、 心脏。 肾脏用苏木精 -伊红（HE ) 染色， 评价肾脏损伤。 心脏 测量心脏左心室壁厚度， 评价心脏损伤。

实验结果：

降压作用： 由此看出， 本发明化合物晶型 I在该模型上表现出明显 的降压作用， 并呈现一定的量效关系， 见表 3。 表 3 SBP ( mmHg, 平均值 ±标准差）

组别 给药前 给药后 （第 41天） 正常对照组 139.3±13.4 149.4士 9.6

模型组 139.9士 10.7 183.0士 12.8*

本发明化合物晶型 I 0.3 mg/kg/day 140·8±9·6 166.5±10.2* ^#

本发明化合物晶型 1 1 mg/kg/day 140.9士 9.5 148.7士 9·6 ^#

本发明化合物晶型 I 3 mg/kg/day 141.0士 9.4 141.6士 8·0 ^#

本发明化合物晶型 1 10 mg/kg/day 141.2士 9.2 141.2士 9·6 ^#

V<0.05, 与正常对照组相比； ^# /?<0.05 , 与模型组相比。

肾脏和心脏保护： 根据肾损伤评分结果， 本发明化合物晶型 I治疗 组在保护肾脏损伤方面有显著的疗效， 见表 4。 与模型组比较， 本发明 化合物晶型 I显著降低左心室壁厚度， 见表 4。 表 4对肾脏损和心脏损伤的保护作用

肾脏损伤评分 心脏左心室壁厚度 (平均值 ±标准差）（ cm,平均值 ±标准差） 正常对照组 0.93士 0.079 0.401士 0.014 模型组 2.05±0.091* 0.410士 0.026 本发明化合物晶型 I 0.3 mg/kg/day 2.02±0.268* 0.392士 0.024 本发明化合物晶型 1 1 mg/kg/day 1.25士 0·428 ^# 0.383士 0.017 ^# 本发明化合物晶型 I 3 mg/kg/day 1.84士 0.596* 0.381士 0.026 ^# 本发明化合物晶型 1 10 mg/kg/day 1.71 ±0.719* 0.383士 0.019 ^#

V<0.05, 与正常对照组相比； ^# /?<0.05 , 与模型组相比。

在高盐诱导的 Dhal/ss大鼠高血压及肾病模型中， 本发明化合物晶 型 I表现出明显的降压作用和肾损伤保护的作用� �