Le domaine de la présente invention est celui de la préparation d'un peptide cyclique à activité antiparasitaire. L'invention concerne également ce peptide en tant qu'agent antiparasitaire, par exemple dans le traitement de la toxoplasmose.

L'invention concerne également l'utilisation de ce peptide cyclique pour traiter les organes ex vivo avant transplantation.

La toxoplasmose est une maladie parasitaire dont l'agent est un protozoaire intracellulaire opportuniste, Toxoplasma gondii. Les manifestations cliniques de la maladie chez les personnes immunocompétentes sont rares. Cependant, la toxoplasmose est de plus en plus associée chez ces personnes à des lymphadénopathies, fièvres, signes neurologiques (baisse de quotient intellectuel, diminution de performances psychomotrices), atteintes oculaires, infections disséminées sévères et même atteintes neurologiques ou psychiatriques comme la schizophrénie. Chez les patients immunodéprimés (par exemple sidéens, greffés, patients présentant des problèmes hématologiques) ou chez le fœtus, Toxoplasma gondii se présente comme un pathogène opportuniste pouvant provoquer des atteintes graves.

Au cours de son cycle parasitaire, Toxoplasma gondii peut se présenter sous trois formes différentes : une forme tachyzoïte, une forme bradyzoïte et une forme oocyte. La forme chronique de la maladie est due à la forme bradyzoïte, contenue dans des kystes intracellulaires (5 à 70 μm) localisés notamment dans les cellules nerveuses et musculaires. Les kystes persistent dans ces tissus jusqu'à la mort de l'hôte. L'équilibre immunitaire hôte-parasite permet de les maintenir quiescents. Ces formes sont très résistantes et peuvent survivre plusieurs jours à température ambiante.

Un certain nombre de molécules (par exemple la pyriméthamine, la sulfadiazine et la sulfadoxine) sont présentes sur le marché. Cependant, ces molécules ont un effet contre la forme primaire tachyzoïte de la maladie. En effet, il n'existe actuellement aucun traitement contre la toxoplasmose chronique, aucun médicament n'étant à ce jour capable d'éliminer les kystes tissulaires. La seule molécule connue ayant un effet kysticide in vitro est l'atovaquone (US 5,641 ,769), l'activité kysticide de cette molécule in vivo n'ayant jamais été démontrée.

Toxoplasma gondii appartient au phylum des Apicomplexes (embranchement Apicomplexa) qui regroupe un grand nombre de parasites responsables de maladies telles que la malaria, la néosporose, la coccidiose et la cryptosporidiose. Les recherches visant à identifier de nouveaux principes actifs antiparasitaires ont permis d'identifier l'apicidine, tétrapeptide cyclique extrait du champignon Fusarium pallidoroseum. L'apicidine présente une certaine efficacité in vivo sur des souris infectées par la malaria de Plasmodium berghei (Darkin-Rattray et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996 ; Singh et al., Tetrahedron Lett. 1996). Cette molécule aurait une action inhibitrice sur l'histone déacétylase (HDAC) de Plasmodium berghei.

Il existe différentes formes d'HDAC. Les inhibiteurs d'HDAC représentent une classe de plus de 8000 composés. Ils font aujourd'hui l'objet de recherche et développement, par exem ple com me agents anticancéreux ou comme immunosuppresseur efficace et sélectif chez l'homme. La classe des inhibiteurs d'HDAC comprend notamment des dérivés naturels cycliques de type peptidique ayant montré une certaine efficacité. Parmi ceux-ci, on peut citer la chlamydocine, isolé du champignon Diheterospora chlamydospoήa et qui a montré une activité anti- cancer in vitro, et les dérivés de la chlamydocine, isolés du champignon Peniophora sp. et qui provoquent l'arrêt du cycle cellulaire chez la plante (Tani et al. Phytochem. 2003).

Un certain nombre d'inconvénients est associé à l'utilisation des composés à visée thérapeutique humaine qui dérivent de matériel biologique, comme notamment l'apicidine et la chlamydocine. Notamment, il est impossible de maîtriser la composition exacte de l'extrait, par exemple la présence de molécules associées ayant potentiellement un effet biologique non maîtrisé. En outre, se pose le problème d e l 'accessibilité dudit matériel. Se pose également le problème du coût de préparation du composé actif. Nishino et collaborateurs (Nishino et ai, Bioorg. Med. Chem, 2004) proposent plusieurs synthèses chimiques de dérivés de la chlamydocine. Chaque synthèse implique plusieurs réactions. Pour obtenir un dérivé, chaque synthèse met en œuvre une approche synthétique différente, de sorte que les synthèses proposées présentent peu de flexibilité. Un objet de la présente invention est de proposer un procédé de synthèse chimique visant à fournir des composés dont la pureté est contrôlée.

Un objet de l'invention est de proposer un procédé de préparation facile à mettre en œuvre, à partir d'intermédiaires facilement accessibles et en utilisant des produits courants. Un autre objet de la présente invention est de proposer un procédé présentant un coût de production attractif. Un autre objet de la présente invention est de proposer un inhibiteur d'HDAC actif chez le parasite et ne présentant pas ou peu d'activité chez l'homme, ainsi qu'un procédé de synthèse d'un tel inhibiteur.

Un autre objet de la présente invention est de proposer un procédé de synthèse dont le composé de départ est un intermédiaire de synthèse.

Les inventeurs se sont donc intéressés à un nouveau procédé de préparation d'un tétrapeptide cyclique à activité antiparasitaire.

Description de l'invention

Procédé

L'invention concerne donc un procédé de préparation d'un peptide cyclique de formule (I) :

caractérisé en ce que l'on fait réagir un composé intermédiaire de formule (II)

avec un carbonyle xanthate de formule (III) :

et en ce que, éventuellement dans une seconde étape, on procède à la déprotection du composé obtenu.

Les groupements des composés de formules (I) et (II) ont la signification suivante : Y et Z, identiques ou différents, représentent un atome de carbone ou d'azote, Y et Z étant éventuellement reliés entre eux par une double liaison,

X représente 3 ou 4 atomes de carbone, azote et/ou oxygène, éventuellement substitués,

A représente un groupement R ⁵ _a -(N-CO) _b -R ⁶ _c B représente un groupement R ⁷ _d -(N-CO) _e -R ⁸ _f

D représente un groupement R ⁹ _g -(N-CO)h-R ¹⁰ , ou R ⁹ _g -(CO)h-R ¹⁰ , E représente un groupement R ¹¹ _r (N-CO) _k -R ¹² ι dans lesquels R ⁵ , R ⁶ , R ⁷ , R ⁸ , R ⁹ , R ¹⁰ , R ¹¹ , R ¹² , identiques ou différents, représentent un, deux ou trois atomes de carbone, azote ou oxygène, dans lesquels a, b, c, d, e, f, g, h, i, j, k et I, identiques ou différents, sont choisis parmi 0, 1 , 2 ou 3, sous réserve que le nombre d'atomes du cycle soit compris entre 12 et 16,

R représente H ; OH ; SH ; un groupe aminé ; un groupe alkyle, haloalkyle ou hétéroalkyle contenant entre 1 et 10 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un groupe alcènyle ou alcynyle contenant entre 2 à 10 atomes de carbone en chaîne l i n éa i re ou ra m ifi ée ; u n ou plusieurs groupes cycloalkyle, cycloacènyle ou cycloalcynyle contenant entre 3 à 10 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un ou plusieurs groupes aryle ou hétéroaryle contenant entre 3 à 10 atomes de carbone par cycle ; un groupe alkaryle ou aralkyle contenant entre 1 et 10 atomes de carbone, les termes aryle et alkyle ayant les définitions ci-dessus ; un groupe alkoxy, thioalkyle, sulfonylalkyle, aminoalkyle contenant entre 1 et 10 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un groupe alkoxyalkyle, alkylthioalkyle, alkylsulfonylalkyle, alkylaminoalkyle contenant entre 1 et 30 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un ou plusieurs groupes hétérocycliques contenant entre 5 et 10 atomes de carbone par cycle ;

R' représente H ou un groupement xanthate ;

R ¹ , R ² , R ³ et R ⁴ , identiques ou différents, représentent H ; OH, SH ; un groupe aminé ; un groupe alkyle, haloalkyle ou hétéroalkyle contenant entre 1 et 30 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un groupe alcènyle ou alcynyle contenant entre 2 à 30 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un ou plusieurs groupes cycloalkyle, cycloacènyle ou cycloalcynyle contenant entre 3 à 30 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un ou plusieurs groupes aryle ou hétéroaryle contenant entre 3 à 10 atomes de carbone par cycle ; un groupe alkaryle ou aralkyle contenant entre 1 et 30 atomes de carbone, les termes aryle et alkyle ayant les définitions ci-dessus ; un groupe alkoxy, thioalkyle, sulfonylalkyle, aminoalkyle contenant entre 1 et 30 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un groupe alkoxyalkyle, alkylthioalkyle, alkylsulfonylalkyle, alkylaminoalkyle contenant entre 1 et 30 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un ou plusieurs groupes hétérocycliques contenant entre 5 et 10 atomes par cycle, saturés ou insaturés, comprenant au moins un hétéroatome choisi parmi N, O et S, le ou lesdits groupes hétérocycliques pouvant être substitués, et étant liés directement ou indirectement par un radical alkylène bivalent au cycle dudit peptide.

Les groupements du composé de formule (III) ont la signification suivante :

R" représente H ; un groupe aminé ; un groupe alkyle, haloalkyle ou hétéroalkyle contenant entre 1 et 10 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un groupe alcènyle ou alcynyle contenant entre 2 à 10 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un ou plusieurs groupes cycloalkyle, cycloacènyle ou cycloalcynyle contenant entre 3 à 10 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un ou plusieurs groupes aryle ou hétéroaryle contenant entre 3 à 10 atomes de carbone par cycle ; un groupe alkaryle ou aralkyle contenant entre 1 et 10 atomes de carbone, les termes aryle et alkyle ayant les définitions ci-dessus ; un groupe alkoxy, thioalkyle, sulfonylalkyle, aminoalkyle contenant entre 1 et 10 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un groupe alkoxyalkyle, alkylthioalkyle, alkylsulfonylalkyle, alkylaminoalkyle contenant entre 1 et 10 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un ou plusieurs groupes hétérocycliques contenant entre 5 et 10 atomes de carbone par cycle ;

R'" représente H ; un groupe alkyle ou haloalkyle contenant entre 1 et 10 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée.

Selon l'invention, le terme "alkyle" désigne un radical hydrocarboné linéaire ou ramifié de 1 à 30 atomes de carbone, tel que, à titre indicatif, méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, tert-butyle, isobutyle, pentyle, hexyle, heptyle, octyle, nonyle, décyle, undécyle, dodécyle, tridécyle, tétradécyle, pentadécyle, hexadécyle, heptadécyle, octadécyle, nonadécyle ou icosyle. Le groupe alkyle ci- dessus défini peut comporter un ou plusieurs atomes d'halogène (fluor, chlore, brome ou iode). Dans ce cas, on parle de groupe "haloalkyle". Le groupe alkyle peut en outre comprendre des hétéroatomes choisis parmi P, O, N, S et Se. Dans ce cas, on parle de groupe "hétéroalkyle".

Par "alcényle", on entend une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée de 2 à 30 atomes de carbone comprenant une ou plusieurs doubles liaisons. Des exemples de groupes alcényle sont les groupes alcényle portant une seule double liaison tels que -CH-CH=CH-CH ₂ , H ₂ C=CH- (vinyle) ou H ₂ C=CH-CH ₂ - (allyle).

Par "alcynyle", on entend une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée de 2 à 30 atomes de carbone comprenant une ou plusieurs triples liaisons. Des exemples de groupes alcynyle sont les groupes alcynyle portant une seule triple liaison tel que -CH ₂ -C=. CH.

Le terme "cycloalkyle" désigne des groupements hydrocarbonés saturés qui peuvent être mono- ou polycycliques et comprennent de 3 à 10 atomes de carbone. Il s'agit, par exemple, de groupements cycloalkyle monocycliques tels que cyclopropyle, cyclobutyle, cyclopentyle, cyclohexyle, cycloheptyle, cyclooctyle, cyclononyle, cyclodécyle, cycloundécyle et cyclododécyle.

Par "cycloalcényle", on entend selon l'invention un groupe dérivé d'un groupe cycloalkyle tel que défini ci-dessus, présentant une ou plusieurs doubles liaisons, par exemple deux doubles liaisons. Il s'agit par exemple du groupement cyclohexène (une double liaison) ou cyclopenta-1 ,3-diène (deux doubles liaisons). Par "cycloalcynyle" entend selon l'invention un groupe dérivé d'un groupe cycloalkyle tel que défini ci-dessus, présentant une ou plusieurs triples liaisons, par exemple une triple liaison.

Le terme "aryle" représente un groupement hydrocarboné monocyclique ou polycyclique aromatique comprenant 3 à 10 atomes de carbone par cycle, tel que phényle ou naphtyle.

Le terme "hétéroaryle" désigne un groupe aromatique monocyclique ou polycyclique comprenant entre 3 et 10 atomes de carbone par cycle et comprenant 1 , 2 ou 3 hétéroatomes endocycliques par cycle choisis parmi P, O, N, S et Se. Des exemples en sont les groupes furyle, thiényle, pyrrolyle, oxazolyle, isoxazolyle, thiazolyle, isothiazolyle, imidazolyle, pyrazolyle, oxadiazolyle, triazolyle, thiadiazolyle, pyridyle, pyridazinyle, pyrazinyle et triazinyle.

Par "alkaryle", on entend un groupe alkyle, substitué par un groupe aryle, ces deux groupes étant définis ci-dessus.

Par "aralkyle", on entend un groupe alkyle, substitué par un groupe aryle, ces deux groupes étant définis ci-dessus. Par "alkoxy", on entend un groupe O-alkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone, notamment méthoxy, éthoxy, propoxy et butoxy. Par "alkoxyalkyle", on entend un groupe alkyle-O-alkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone. Les groupes "thioalkyle" ou "alkylthioalkyle", "sulfonylalkyle" ou "alkylsulfonylalkyle" et "aminoalkyle" ou "alkylaminoalkyle" comportent en outre respectivement un ou plusieurs atomes de soufre, un ou plusieurs groupes sulfonyl et une ou plusieurs fonctions aminé.

Le terme "groupe hétérocyclique" désigne des cycles carbonés saturés ou insaturés, monocycliques ou polycycliques, présentant 1 , 2 ou 3 hétéroatomes endocycliques choisis parmi P, O, N, S et Se. Ce sont généralement des dérivés des groupes hétéroaryles décrits ci-dessus. Des exemples d'hétérocycles insaturés sont dihydrofuryle, dihydrothiényle, dihydropyrrolyle, pyrrolinyle, oxazolinyle, thiazolinyle, imidazolinyle, pyrazolinyle, isoxazolinyle, isothiazolinyle, oxadiazolinyle, pyranyle et les dérivés mono- insaturés de la pipéridine, du dioxane, de la pipérazine, du trithiane, de la morpholine du dithiane, de la thiomorpholine, ainsi que tétrahydropyridazinyle, tétrahydropyrimidinyle, et tétrahydrotriazinyle.

Les groupes ci-dessus définis peuvent selon l'invention être substitués par un plusieurs groupes nitro, cyano, hydroxy, carboxy, carbonyl ou amino, par un ou plusieurs halogènes ou par une ou plusieurs fonctions nitrile, cyanhydrine, aldéhyde. Selon un mode de réalisation de l'invention, le groupement R du composé de formule (I) représente H ; OH ; SH ; un groupe alkyle ou haloalkyle contenant entre 1 et 10 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un ou plusieurs groupes aryle ou hétéroaryle contenant entre 3 à 10 atomes de carbone par cycle ; un groupe alkoxy, thioalkyle, sulfonylalkyle, aminoalkyle contenant entre 1 et 10 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un ou plusieurs groupes hétérocyclique contenant entre 5 et 10 atomes de carbone par cycle.

Selon un autre mode de réalisation de l'invention, le groupement R du composé de formule (I) est choisi parmi CH ₂ CI, CH ₂ Br, CF ₃ , OH, 0-CH ₂ -C ₆ H ₆ , NHOH, CH ₂ -S-CS-O-CH ₂ CH ₃ , CH ₂ CH ₃ , CO-CH ₂ CO ₂ -CH ₂ CH ₃ , CHOH-CH ₃ ,

CH(OTBDMS)CH ₃ . Selon un autre mode de réalisation de l'invention, le groupement R' du composé de formule (I) représente H.

Selon un mode de réalisation de l'invention, le groupement R" du composé de formule (III) représente H ; un groupe alkyle ou haloalkyle contenant entre 1 et 10 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un ou plusieurs groupes aryle ou hétéroaryle contenant entre 3 à 10 atomes de carbone par cycle ; un groupe alkoxy, thioalkyle, sulfonylalkyle, aminoalkyle contenant entre 1 et 10 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; un ou plusieurs groupes hétérocyclique contenant entre 5 et 10 atomes de carbone par cycle.

Selon un mode de réalisation de l'invention, le groupement R" du composé de formule (III) est choisi parmi CH ₂ CI, CH ₂ Br, CF ₃ , 0-CH ₂ -C ₆ H ₆ , CH ₂ CH ₃ , COCH ₂ CO ₂ Et, CH(OTBDMS)CH ₃ .

Dans un mode de réalisation de l'invention, b = 1 ; e =1 ; h = 0 et k = 1.

Selon ce procédé, on peut ainsi obten ir un peptide cyclique de formule (IV) :

dans laquelle R, R', R ¹ et R ² sont tels que ci-dessus définis, par un procédé selon lequel on fait réagir un composé intermédiaire de formule (V)

avec un carbonyle xanthate de formule (III)

dans laquelle R" et R'" sont tels que ci-dessus définis, et en ce que, éventuellement dans une seconde étape, on procède à la déprotection du composé obtenu. Un exemple de peptide cyclique selon l'invention est le composé de formule (IVf) :

La présente invention concerne également un composé intermédiaire de formule (II), (V) dans lesquelles X, Y, Z, A, B, D, E, R ¹ , R ² , R ³ et R ⁴ sont tels que définis précédemment, mais aussi de formule (Vl) ou (VII), ces deux derniers composés étant représentés ci-dessous :

(Vl) (VU)

Un composé intermédiaire préféré selon l'invention répond à la formule (V) dans laquelle au moins l'un de R ¹ et R ² représente CH ₂ C≡CH. Lorsque seul l'un de R ¹ et R ² représente CH ₂ C≡CH, l'autre représente avantageusement H.

Peptides cycliques à activité antiparasitaire

L'invention concerne également un peptide cyclique à activité antiparasitaire de formule (I) :

dans laquelle X, Y, Z, A, B, D, E, R, R', R ¹ , R ² , R ³ et R ⁴ sont tel que ci-dessus définis. Un exemple de peptide cyclique pouvant être obtenu selon la présente invention est celui représenté par la formule (IV) :

dans laquelle R, R', R ¹ et R ² sont tels que ci-dessus définis.

Un autre exemple de peptide cyclique pouvant être obtenu selon la présente invention est celui représenté par la formule (IV) :

dans laquelle R, R', R ¹ et R ² sont tels que ci-dessus définis. Selon un mode de réalisation, R' représente H et/ou R ¹ et R ² représentent

CH ₃ .

Selon un autre mode de réalisation, combiné ou non aux modes de réalisation précités, au moins l'un de R ¹ et R ² représente CH ₂ C≡CH, l'autre de R ¹ et R ² représentant H, le cas échéant. Selon encore un autre mode de réalisation, combiné ou non aux modes de réalisation précités, l'un de R ¹ et R ² représente un hétérocycle de 5 atomes choisis parmi C, N et O, ledit hétérocycle étant lié par un radical méthylène au cycle dudit peptide. Dans ce mode de réalisation, l'un des hétéroatomes est substitué par un groupement choisi parmi les acides aminés et les peptides. Selon un autre mode de réalisation, combiné ou non aux modes de réalisation précités, R représente CHOH-CH ₃ . Selon un mode de réalisation de l'invention, le peptide cyclique à activité antiparasitaire est le composé de formule (IVf) :

Selon un autre mode de réalisation, l'invention concerne un peptide cyclique ayant un effet contre la toxoplasmose, par exemple contre la forme chronique de la toxoplasmose.

Utilisations L'invention a aussi pour objet une composition pharmaceutique comprenant un peptide cyclique de l'invention tel que défini précédemment, et notamment les peptides de formule (IV), par exemple ceux plus précisément exposés et/ou illustrés ci-dessus. Le peptide cyclique constitue le ou au moins l'un des principes actifs de ladite composition. Une composition pharmaceutique de l'invention est destinée à un traitement antiparasitaire, notamment le traitement de la malaria, la toxoplasmose, la coccidiose, la cryptosporidiose ou la néosporose.

L'invention concerne également un peptide cyclique de formule (I) ou (IV) pour son utilisation dans le traitement de la malaria, la toxoplasmose, la coccidiose, la cryptosporidiose ou la néosporose.

L'invention concerne également l'utilisation du peptide cyclique de formule (I) ou (IV) pour la préparation d'un médicament pour traiter une infection par un parasite, et notamment pour traiter la malaria, la toxoplasmose, la coccidiose, la cryptosporidiose ou la néosporose. L'invention concerne aussi un peptide cyclique de l'invention pour un traitement anti-cancer, et aussi l'utilisation d'un tel peptide pour la fabrication d'un médicament destinée à traiter un cancer. Ainsi, une composition pharmaceutique anticancer comprenant un peptide de l'invention est aussi un objet de l'invention . L'analogie des peptides de l'invention avec les dérivés naturels cycliques de type peptidique connus pour leur activité anti-cancer, permet d'envisager des propriétés identiques pour les peptides de l'invention. Dans la partie des exemples qui suit, ces propriétés sont d'ailleurs démontrées pour un composé préféré de l'invention.

L'invention concerne également l'utilisation du peptide cyclique de formule (I) ou (IV) pour traiter un organe ex vivo avant transplantation.

Enfin l'invention concerne une méthode de traitement d'une infection par un parasite, et notamment la malaria , la toxoplasmose, la coccidiose, la cryptosporidiose ou la néosporose, ainsi qu'une méthode de traitement d'un cancer, ces méthodes mettant en œuvre au moins un peptide cyclique de l'invention tel que défini ci-dessus.

Exemples

1 . Préparation du composé intermédiaire de formule (Vl), notamment du composé (VII)

Vl VII

Le composé intermédiaire (Vl) a été obtenu selon le procédé ci-dessous décrit.

Schéma 1

O O 0 ^'

1 2α UCI, CuCN

UMf-

O^ O NH LiOH θ" " NH

MeO HO -^

S THF/H .0

2 Br "^ ^' O C 1h 25 ^" C

VIII IX

HN

Brièvement, un acide aminé (X) a été synthétisé à partir de (VIII) (Jackson et al., Org. Synth. 2005) suivant la méthode décrite par Kiyota et collaborateurs (Shimasaki et al., Tetrahedron 2006). Le tπpeptide (XIV) est obtenu à partir des trois acides aminés commerciaux (Xl), (XI I) et (XII I) selon une synthèse peptidique en phase liquide (Bhuiyan ét al., Bioorg. Med. Chem. 2006). Le composé (XIV) réagit avec le composé (X) pour donner le tétrapeptide (XV), qui conduit au composé intermédiaire (VII).

Préparation du composé (S)-méthyl 2-(fe/t-butoxycarbonylamino)hex-5-énoate (IX)

O

NHBoc Dans une solution de DMF anhydre (28 mL) contenant de la poudre de zinc (2 .48 g, 37.9 mmol) est injectée du 1 ,2-dibromoéthane (0.17 mL) sous argon. La solution est agitée pendant 20 min à température ambiante. Du TMSCI (50 μL) est injecté et la solution est chauffée sous agitation à 60 ⁰ C pendant 30 min. Le (R)-méthyl 2-(tert- butoxycarbonylamino)-3-iodopropanoate (VIII) (2 0 g, 6.08 mmol) dans du DMF (8 mL) est additionné goutte à goutte La solution est ensuite agitée pendant 20 min à 60 ⁰ C. Du LiCI (587 mg, 13.8 mmol) et du CuCN (619 mg, 6.9 mmol) dans du DMF (6.5 ml_) sont injectés à - 55°C et la solution est placée à 0 ⁰ C pendant 10 min. Cette dernière est replacée à - 55°C et du bromure d'allyle (1.05 ml_, 12 mmol) est injecté. Après 5 min, la solution est placée à 0 ⁰ C et agitée pendant 2 h à cette température. Le zinc qui n'a pas réagit est éliminé par filtration sur célite et le filtrat est traité par une solution saturée de NH ₄ CI. Le produit est extrait avec de l'acétate d'éthyle (EtOAc). Les phases organiques réunies sont lavées avec une solution saturée en NaCI, puis séchées sur MgSO ₄ et évaporées. Après flash chromatographie (gel de silice, 8% EtOAc/cyclohexane), le produit (IX) (1.38 g, 93%) est isolé sous forme d'huile incolore. R _f = 0.25 (10% EtOAc/cyclohexane) ; [α] ^D = +20.5 (c = 1 , CH CI ₃ ) ; IR v _max (film, CH ₂ CI ₂ ) 3358, 2978, 1745, 1716, 1518, 1453, 1366, 1249, 1 163, 914 cm ^"1 ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1.45 (s, 9H), 1.74 (m, 1 H), 1.90 (m, 1 H), 2.12 (m, 2H), 3.74 (s, 3H), 4.32 (m, 1 H), 5.00 (bd, J = 10.3 Hz, 1 H), 5.05 (bd, J = 17.0, 1 H), 5.18 (bd, J = 7.2 Hz, NH), 5.79 (m, 1 H) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 28.4 (3*CH ₃ ), 29.6 (CH ₂ ), 32.0 (CH ₂ ), 52.3 (CH ₃ ), 53.0 (CH), 79.8 (C), 1 15.7 (CH ₂ ), 137.0 (CH), 155.4 (C), 173.4 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 266 (100) [M+Na] ⁺ , 210 (43), 166 (38).

Préparation de l'acide (S)-2-(fe/f-butoxycarbonylamino)hex-5-énoique (X) Dans une solution de THF/H ₂ O (1 :1 , 35 mL) contenant le produit (IX) (1 g, 4.1 mmol) est additionné en une portion LiOH. H ₂ O (432 mg, 10.3 mmol). Le mélange est agité pendant 1 h à température ambiante. Le solvant est ensuite évaporé puis une solution 5% H ₃ PO ₄ dans l'eau est additionnée jusqu'à l'obtention d'un pH = 3. Le produit est ensuite extrait avec de TEtOAc, séché (MgSO ₄ ), puis évaporé. Après purification, le produit (X) (840 mg, 89%) est isolé sous forme de laque incolore.

O

HO' NHBoc

P r é p a r a t i o n d u ( 3S,9S,14af?)-9-benzyl-3-(but-3-ényl)-6,6-diméthyl décahvdropyrrolo[1 ,2-a1[1 ,4,7,101tétraazacvclododécine-1 ,4,7,10-tétraone (VII) A une solution de tripeptide H-Aib-L-Phe-D-Pro-Of-Bu (XIV) (1.38 g, 3.42 mmol) et de méthyl (S)-2-(benzyloxycarbonylamino)-5-hexenoate (X) (784 mg, 3.42 mmol) dans du DMF anhydre (7 ml) sont additionnés de I ¹ HOBt-H ₂ O (525 mg, 3.45 mmol), du DCC (850 mg, 4.12 mmol) et de la triéthyl aminé (0.5 mL) sous argon. La solution est agitée à température ambiante pendant 18 h. Le DMF est évaporé et le résidu est dilué dans de l'EtOAc. Cette phase est lavée avec une solution aqueuse d'acide citrique 10%, une solution aqueuse de sodium carbonate 4% et une solution aqueuse saturée NaCI. La phase organique est séchée (MgSO ₄ ) et évaporée. Après flash chromatographie (gel de silice, 1.5 % MeOH/CH ₂ CI ₂ ), le tétrapeptide (XV) (1.58 g, 75%) est obtenu sous forme de laque incolore. R _f = 0.09 (2% MeOH/CH ₂ CI ₂ ); LRMS (ESI+) m/z (%) 637 (100) [M+Na] ⁺ , 615 (20) [M+H] ⁺ ; SMHR (ESI+) : m/z calculée POUr C ₃₃ H ₅₀ N ₄ O ₇ Na 637.3577, trouvée 637.3567. Le tétrapeptide (XV) (1 .57 g, 2.55 mmol) est dissous dans de l'acide trifluoroacétique (7 mL) à 0 ⁰ C et la solution est agitée pendant 3 h à cette température. Après évaporation, le produit est précipité dans de l'éther sec pour donner après filtration un sel déprotégé (1 .08 g, 74%). Ce dernier (900 mg, 1 .57 mmol) est repris dans du DMF anhydre (140 mL). De l'HATU (666 mg, 1.75 mmol) et du diisopropyl éthyl aminé (0.81 mL) sont ajoutés en cinq portions sur un intervalle de 30 min sous forte agitation. L'agitation est poursuivie pendant 1 h à température ambiante. Le DMF est évaporé et I' EtOAc est ajouté. Après lavage avec une solution aqueuse d'acide citrique 10%, suivi d'une solution aqueuse de sodium carbonate 4%, la phase organique est séchée (MgSO ₄ ) et évaporée. Après flash chromatographie (gel de silice, 1 % MeOH/CH ₂ CI ₂ ), le cyclotétrapeptide (VII) (512 mg, 74%) est isolé sous forme de solide blanc. R _f = 0.17 (40% EtOAc/cyclohexane) ; [α] ^D = -1 10 (c = 0.84, CHCI ₃ ) ; IR v _max (thin film, CH ₂ CI ₂ ) 3303, 2930, 1678, 1663, 1630, 1663, 1529, 1427, 1251 , 1181 , 913 cm ^"1 ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1.31 (s, 3H), 1 .67-1.82 (m, 6H), 1.92 (m, 1 H), 2.09 (m, 2H), 2.16 (m, 1 H), 2.30 (m, 1 H), 2.94 (dd, J = 13.5, 5.8 Hz, 1 H), 3.19-3.28 (m, 2H), 3.86 (m, 1 H), 4.30 (ddd, J = 10.1 , 7.5, 7.5 Hz, 1 H), 4.66 (m, 1 H), 4.97 (m, 1 H), 5.00 (m, 1 H), 5.17 (ddd, J = 10.1 , 10.0, 5.8 Hz, 1 H), 5.78 (ddt, J = 16.8, 10.2, 6.6 Hz, 1 H), 6.18 (s, NH), 7.16-7.28 (m, 5H, NH), 7.61 (d, J = 10.1 Hz, NH) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 23.4 (CH ₃ ), 24.6 (CH ₂ ), 24.8 (CH ₂ ), 26.3 (CH ₃ ), 28.2 (CH ₂ ), 29.6 (CH ₂ ), 35.7 (CH ₂ ), 46.7 (CH ₂ ), 53.2 (CH), 53.7 (CH), 57.6 (CH), 58.5 (C), 1 15.5 (CH ₂ ), 126.5 (CH), 128.4 (2xCH), 128.9 (2xCH), 136.9 (C, CH), 171.5 (C), 172.6 (C), 174.2 (C), 175.4 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 463 (100) [M+Na] ⁺ ; SMHR (ESI+) : m/z calculée pour C ₂₄ H ₃₂ N ₄ O ₄ Na 463.2321 , trouvée 463.2316.

2. Préparation des carbonyles xanthates de formule Tel que cela est représenté dans le schéma 2 ci-dessous, les produits (XVI _3-9 ) réagissent avec du potassium d'éthyl xanthate pour donner les carbonyles xanthates

Schéma 2

XVIa : W=CI ; R"= CH ₂ CI INa : R"= CH ₂ CI (Litt)

XVIb : W=Br ; R"= CF ₃ INb : R"= CF ₃ (Litt)

XVIc : W=CI ; R"= OBn INc : R"= OBn (68%; purifié par distillation)

XVId : W=Br ; R"= CH ₂ CH ₃ INd : R"= CH ₂ CH ₃ (63%; purifié par distillation) XVIe : W=CI ; R"= COCH ₂ COEt INe : R"= COCH ₂ COEt (67%; purifié par distillation) XVIf : W=CI ; R"= CH(OTBDMS)CH ₃ (Configuration S)

IMf : R"= CH ₂ CI (96%; purifié par chromatographie) XVIf : W=CI ; R"= CH(OTBDMS)CH ₃ (Configuration R)

INg : R"= CH ₂ CI (96%; purifié par chromatographie) Procédure type pour la préparation des composés intermédiaires (III), exemple avec le benzyl 2-(éthoxycarbonothioylthio)acétate (NIc)

A une solution de benzyl 2-chloroacetate 1 c (2.76 g, 15 mmol) dans l'acétone (50 ml_) est ajouté à O ⁰ C une solution d'éthyl xanthate de potassium (2.6 g, 16 mmol) dans l'acétone (50 ml_). La solution est agitée pendant 4 h à température ambiante. L'acétone est évaporée et CH ₂ CI ₂ est ajouté. La phase organique est lavée par une solution saturée de NaCI. La phase organique est séchée (MgSO ₄ ) et évaporée. Le produit est distillé par Kugelrohr (13 mbar, 180-200 ⁰ C) pour donner (NIc) (2.74 g, 68%) sous forme d'une huile jaune claire. Dans le cas de (MIf) et (NIg), une chromatographie classique est effectuée.

R _f = 0.21 (5% EtOAc/cyclohexane) ; IR v _max (film) 2982, 1740, 1615, 1498, 1455, 1376, 1232, 1 150 cm ^"1 ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1.35 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 3.93 (s, 2H), 4.58 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 5.18 (s, 2H), 7.32-7.36 (m, 5H). RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 13.7 (CH ₃ ), 37.9 (CH ₂ ), 67.6 (CH ₂ ), 70.7 (CH ₂ ), 128.3 (CH), 128.4 (2 ^χ CH), 128.6 (2 ^χ CH), 135.3 (C), 167.8 (C), 212.4 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 293 (100) [M+Na] ⁺ .

Préparation du O-éthyl S-2-oxobutyl carbonodithioate (I I Id)

s Produit (NId), purifié par distillation (Kugelrohr, 2.2 mbar, 100 ⁰ C), Rdt% = 63% (huile jaune claire) ; IR v _max (film) 2980, 1729, 1717, 1457, 1376, 1224, 1 1 13, 1052 cm ^"1 ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1 .1 1 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 2.65 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.00 (s, 2H), 4.63 (q, J = 7.1 Hz, 2H) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 7.97 (CH ₃ ), 13.9 (CH ₃ ), 35.4 (CH ₂ ), 45.3 (CH ₂ ), 71.0 (CH ₂ ), 204.1 (C), 213.6 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 215 (100) [M+Na] ⁺ .

Préparation de l'éthyl 4-(éthoxycarbonothioylthio)-3-oxobutanoate (NIe)

Produit (NIe), purifié par distillation (Kugelrohr, 2.2 mbar, 150 ⁰ C), Rdt% = 67% (huile jaune claire) ; IR v _max (film) 2983, 1745, 1616, 1376, 1225, 1 1 13, 1048 cm ^"1 ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 3.65 (s, 2H), 4.12 (s, 2H), 4.20 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.64 (q, J = IA Hz, 2H) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 13.8 (CH ₃ ), 14.2 (CH ₃ ), 45.5 (CH ₂ ), 48.3 (CH ₂ ), 61.8 (CH ₂ ), 71.2 (CH ₂ ), 166.9 (C), 196.3 (C), 213.0 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 273 (100) [M+Na] ⁺ .

Préparation du (f?)-S-3-(te/f-butyldiméthylsilyloxy)-2-oxobutyl O-éthyl carbonodithioate (NIf)

Produit (MIf), purifié par flash chromatography (5% éther/cyclohexane), Rdt% = 96% (huile jaune claire) ; R _f = 0.25 (4% éther/cyclohexane) ; [α] ^D = -7.3 (c = 1.15, CHCI ₃ ) ; IR v _max (film) 2955, 2931 , 1735, 1728, 1363, 1224, 1 1 12, 1051 , 836 cm ^"1 ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 0.13 (s, 3H), 0.14 (s, 3H), 0.95 (s, 9H), 1.37 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.41 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 4.28 (d, J = 17.9 Hz, 1 H), 4.35 (d, J = 17.9 Hz, 1 H), 4.62 (q, J = 7.1 Hz, 2H) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm -4.9 (CH ₃ ), -4.4 (CH ₃ ), 13.9 (CH ₃ ), 18.1 (C), 21.0 (CH ₃ ), 25.9 (2*CH ₃ ), 42.8 (CH ₂ ), 70.6 (CH ₂ ), 75.0 (CH), 205.7 (C), 213.6 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 345 (100) [M+Na] ⁺ , 323 (5).

Préparation du (S)-S-3-(fe/f-butyldiméthylsilyloxy)-2-oxobutyl O-éthyl carbonodithioate (MIq)

Produit (MIg), purifié par flash chromatographie (5% éther/cyclohexane), Rdt% = 94% (huile jaune claire) ; R _f = 0.25 (4% éther/cyclohexane) ; [α] ^D = +7.4 (c = 1 .2, CHCI ₃ ) ; IR v _max (film) 2955, 2931 , 1735, 1728, 1363, 1224, 1 1 12, 1051 , 836 cm ^"1 ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 0.13 (s, 3H), 0.14 (s, 3H), 0.95 (s, 9H), 1.37 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.41 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 4.28 (d, J = 17.9 Hz, 1 H), 4.35 (d, J = 17.9 Hz, 1 H), 4.62 (q, J = 7.1 Hz, 2H) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm -4.9 (CH ₃ ), -4.4 (CH ₃ ), 13.9 (CH ₃ ), 18.1 (C), 21.0 (CH ₃ ), 25.9 (2*CH ₃ ), 42.8 (CH ₂ ), 70.6 (CH ₂ ), 75.0 (CH), 205.7 (C), 213.6 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 345 (100) [M+Na] ⁺ , 323 (8). 3. Procédé de préparation de peptides cycliques de formule (IV)

Schéma 3 isopropanol

A partir du composé intermédiaire de formule (Vl), les conditions radicalaires ont été appliquées avec différents carbonyles xanthates (III) pour installer le groupement carbonyle en position 8 (voir le schéma 3 ci-dessus). Après chauffage dans le 1 ,2- dichloroéthane en présence de carbonyle xanthate (III) et de lauroyl peroxide (initiateur radicalaire), le composé (IV) dans lequel R ¹ et R ² sont CH ₃ et R' est un xanthate sont obtenus avec des rendements allant de 65 à 95%. La fonction xanthate résultante est ensuite éliminée en présence de lauroyl peroxide chauffé dans l'isopropanol pour donner les peptides cycliques de formule (IV) dans lesquels R ¹ et R ² sont CH ₃ et R' représente H (60-75%).

Ces deux étapes peuvent être également réalisées en une seule étape (en « one pot »). Dans ce cas, on évapore le 1 ,2-dichloroéthane pour le substituer avec de l'isopropanol puis on ajoute du lauroyl peroxide. Dans ces conditions, les peptides cycliques de formule (IV) dans lesquels R' représente H sont obtenus à partir du composé intermédiaire (Vl) avec des rendements globaux allant de 48 à 52%.

Procédé de préparation de peptides cycliques de formule (IV), exemple avec le S-1 -((3S.9S.14aft)-9-benzyl-6,6-diméthyl-1 ,4,7, 10-tétraoxotétradécahvdropyrroloπ ,2- aiH ,4,7, 101tétraazacvclododécin-3-yl)-7-chloro-6-oxoheptan-3-v I O-éthyl carbonodithioate (IVa)

Le peptide cyclique (IVa) correspond au peptide cyclique de formule (IV) dans lequel R représente CH ₂ CI, R ¹ et R ² sont CH ₃ et R' est un xanthate.

Le cyclotétrapeptide (Vl) (75 mg, 0.17 mmol) et le carbonyl xanthate (NIa) (72 mg, 0.34 mmol) dans du 1 ,2-dichloroéthane (0.3 mL) sont chauffés à reflux pendant 30 min sous argon. 7 mg de dilauroyl peroxide (DLP) sont ajoutés tous les 2 h (5 à 7 fois en tout). Au bout de 8 à 18 h à reflux (réaction suivie par CCM), le solvant est évaporé et le produit directement purifié par flash chromatographie sur gel de silice (pour (IVa), 40% EtOAc/cyclohexane) pour donner (IVa) (72 mg, 65%) sous forme d'une laque incolore. R _f = 0.16 (40% EtOAc/cyclohexane) ; IR v _max (film) 3302, 2925, 1734, 1678, 1663, 1628, 1525, 1435, 1390, 1217, 1 1 1 1 , 1048 cm ^"1 ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1.35 (s, 3H), 1.43 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.62-1.96 (m, 10H), 2.07-2.23 (m, 2H), 2.32 (m, 1 H), 2.76 (m, 2H), 2.95 (dd, J = 13.5, 5.7 Hz, 1 H), 3.23 (m, 1 H), 3.26 (dd, J = 13.5, 10.2 Hz, 1 H), 3.76 (m, 1 H), 3.86 (m, 1 H), 4.08 (s, 2H), 4.22 (m, 1 H), 4.65 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.66 (m, 1 H), 5.17 (m, 1 H), 5.92 (s, NH), 7.15 (bd, J = 10.1 Hz, NH), 7.19- 7.32 (m, 5H), 7.47 (bd, J = 10.1 Hz, NH) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 14.0 (CH ₃ ), 23.7 (CH ₃ ), 24.9 (CH ₂ ), 25.2 (CH ₂ ), 26.7 (CH ₃ ), 28.0 (CH ₂ ), 29.9 (CH ₂ ), 31.1 (CH ₂ ), 36.0 (CH ₂ ), 37.0 (CH ₂ ), 47.2 (CH ₂ ), 48.4 (CH ₂ ), 50.7 (CH), 53.6 (CH), 54.3 (CH), 58.0 (CH), 59.0 (C), 70.5 (CH ₂ ), 126.9 (CH), 128.8 (2xCH), 129.2 (2xCH), 137.2 (C), 172.1 (C), 173.1 (C), 174.1 (C),175.7 (C), 202.0 (C), 214.3 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 675 (100) [M+Na] ⁺ , 653 (32); SMHR (ESI+) : m/z calculée pour C ₃₀ H _4I N ₄ O ₆ CINaS ₂ 675.2054, trouvée 675.2053.

P ré p a ra t i o n d u b e n zy l 6-((3S,9S,14af?)-9-benzyl-6,6-dimethyl-1 ,4,7,10- tetraoxotetradecahvdropyrrolo[1 ,2-aïï1 ,4,7,101tetraazacvclododecin-3-yl)-4- (ethoxycarbonothioylthio)hexanoate (IVc)

Suivant la procédure décrite ci-dessus, produit (IVc), purifié par flash chromatographie (1% MeOH/CH ₂ CI ₂ ), Rdt% = 90% ; R _f = 0.06 (1% MeOH/CH ₂ CI ₂ ) ; IR v _max (film) 3308, 2940, 1734, 1681, 1663, 1629, 1525, 1454, 1436, 1215, 1111, 1049, 910 cm ^"1 ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1.34 (s, 3H), 1.41 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.65-1.81 (m, 8H), 1.86-2.00 (m, 2H), 2.05-2.26 (m, 2H), 2.32 (m, 1H), 2.52 (m, 2H), 2.95 (dd, J= 13.5, 5.7 Hz, 1H), 3.23 (m, 1H), 3.26 (dd, J= 13.5, 10.1 Hz, 1H), 3.79 (m, 1H), 3.86 (m, 1H), 4.21 (m, 1 H), 4.62 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.66 (m, 1 H), 5.12 (s, 2H), 5.17 (m, 1 H), 5.92 (s, NH), 7.13 (bd, J= 10.2 Hz, NH), 7.19-7.39 (m, 10H), 7.47 (bd, J= 10.2 Hz, NH) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 13.8 (CH ₃ ), 23.5 (CH ₃ ), 24.7 (CH ₂ ), 25.0 (CH ₂ ), 26.2 (CH ₂ ), 26.5 (CH ₃ ), 29.2 (CH ₂ ), 30.6 (CH ₂ ), 31.5 (CH ₂ ), 35.8 (CH ₂ ), 47.0 (CH ₂ ), 50.4 (CH), 53.4 (CH), 54.1 (CH), 57.8 (CH), 58.8 (C), 66.4 (CH ₂ ), 70.1 (CH ₂ ), 126.7 (CH), 128.3 (2xCH), 128.6 (2*CH ), 128.7 (2xCH), 129.0 (2xCH), 135.8 (C), 137.0 (C), 171.9 (C), 172.7 (C), 172.8 (C), 173.9 (C), 175.6 (C), 213.9 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 733 (100) [M+Na] ⁺ , 711 (46), 463 (25) ; SMHR (ESI+) : m/z calculée pour C ₃₆ H ₄₆ N ₄ O ₇ NaS ₂ 733.2706, trouvée 733.2709. P répa ration d u S-(/?V1-((3S.9S.14a/?)-9-benzyl-6.6-diméthyl-1.4.7.10- tétraoxotétradécahvdropyrrolo[1,2-a1[1 ,4,7,101tétraazacvclododécin-3-yl)-7-(te/f- butyldiméthylsilyloxy)-6-oxooctan-3-yl O-éthyl carbonodithioate (IVf)

Suivant la procédure décrite ci-dessus, produit (IVf), purifié par flash chromatographie (0.8% MeOH/CH ₂ CI ₂ ), Rdt% = 96% ; R _f = 0.1 (1% MeOH/CH ₂ CI ₂ ) ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 0.07 (s, 6H), 0.91 (s, 9H), 1.28 (m, 3H), 1.34 (s, 3H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.62-1.88 (m, 9H), 1.92-2.11 (m, 2H), 2.18 (m, 1H), 2.33 (m, 1H), 2.76 (m, 2H), 2.96 (dd, J= 13.5, 5.7 Hz, 1H), 3.23 (m, 1H), 3.27 (dd, J= 13.5, 10.1 Hz, 1H), 3.77 (m, 1H), 3.86 (m, 1H), 4.14 (q, J = 6.7 Hz, 1H), 4.22 (m, 1H), 4.63 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.66 (m, 1H), 5.17 (m, 1H), 5.96 (s, NH), 7.15 (d, J = 10.1 Hz, NH), 7.18-7.30 (m, 5H), 7.51 (bd, J = 10.1 Hz, NH) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm -4.8 (CH ₃ ), -4.5 (CH ₃ ), 14.0 (CH ₃ ), 18.2 (CH ₃ ), 23.7 (CH ₃ ), 24.9 (CH ₂ ), 25.2 (CH ₂ ), 25.9 (3*CH ₃ ), 26.4 (CH ₂ ), 26.7 (CH ₂ ), 27.6 (CH ₂ ), 31.4 (CH ₂ ), 34.5 (CH ₂ ), 36.0 (CH ₂ ), 47.2 (CH ₂ ), 51.1 (CH), 53.6 (CH), 54.3 (CH), 58.0 (CH), 59.0 (C), 70.2 (CH ₂ ), 75.0 (CH), 126.9 (CH), 128.8 (2xCH), 129.2 (2xCH), 137.2 (C), 172.1 (C), 173.0 (C), 174.1 (C), 175.8 (C), 213.5 (C), 214.4 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 785 (90) [M+Na] ⁺ , 763 (70), 413 (100) ; SMHR (ESI+) : m/z calculée pour C ₃₇ H ₅₈ N ₄ O ₇ NaSiS ₂ 785.3414, trouvée 785.3407.

P répa ration d u S-(S)-1-((3S,9S,14a/?)-9-benzyl-6,6-diméthyl-1 ,4,7,10- tétraoxotétradécahvdropyrrolo[1,2-a1[1 ,4,7,101tétraazacvclododécin-3-yl)-7-(te/f- butyldiméthylsilyloxy)-6-oxooctan-3-yl O-éthyl carbonodithioate (IVg)

Suivant la procédure décrite ci-dessus, produit (IVg), purifié par flash chromatographie (0.8% MeOH/CH ₂ CI ₂ ), Rdt% = 95% ; R _f = 0.1 (1 % MeOH/CH ₂ CI ₂ ) ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 0.07 (s, 6H), 0.91 (s, 9H), 1.26 (m, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.60-1.86 (m, 9H), 1.90-2.08 (m, 2H), 2.17 (m, 1 H), 2.33 (m, 1 H), 2.76 (m, 2H), 2.95 (dd, J = 13.5, 5.7 Hz, 1 H), 3.23 (m, 1 H), 3.26 (dd, J = 13.5, 10.1 Hz, 1 H), 3.77 (m, 1 H), 3.86 (m, 1 H), 4.13 (q, J = 6.7 Hz, 1 H), 4.24 (m, 1 H), 4.63 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.67 (m, 1 H), 5.17 (m, 1 H), 6.00 (bs, NH), 7.15 (d, J = 10.1 Hz, NH), 7.18-7.30 (m, 5H), 7.50 (bd, J = 10.1 Hz, NH) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm -4.9 (CH ₃ ), -4.5 (CH ₃ ), 14.0 (CH ₃ ), 18.2 (CH ₃ ), 23.7 (CH ₃ ), 24.9 (CH ₂ ), 25.2 (CH ₂ ), 25.9 (3*CH ₃ ), 26.4 (CH ₂ ), 26.6 (CH ₃ ), 27.6 (CH ₂ ), 31 .2 (CH ₂ ), 34.4 (CH ₂ ), 36.0 (CH ₂ ), 47.1 (CH ₂ ), 51 .0 (CH), 53.6 (CH), 54.5 (CH), 58.0 (CH), 59.0 (C), 70.2 (CH ₂ ), 75.0 (CH), 126.9 (CH), 128.8 (2xCH), 129.2 (2xCH), 137.2 (C), 172.0 (C), 173.0 (C), 174.1 (C), 175.8 (C), 213.6 (C), 214.3 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 785 (100) [M+Na] ⁺ , 763 (30) ; SMHR (ESI+) : m/z calculée pour C ₃₇ H ₅₈ N ₄ O ₇ NaSiS ₂ 785.3414, trouvée 785.3431.

Procédure générale pour obtenir (IV) à partir de (IV) (approche en deux étapes), exemple avec le

(3S,9S,14af?)-9-benzyl-3-(7-chloro-6-oxoheptyl)-6,6-dimé thyldécahvdropyrroloπ ,2- a1[1 ,4,7,101tétraazacyclododécine-1 ,4,7,10-tétraone (IVa)

Le peptide cyclique (IVa) correspond au peptide cyclique de formule (IV) dans lequel R représente CH ₂ CI, R ¹ et R ² sont CH ₃ et R' représente H. En outre, deux liaisons ont une configuration définie.

Le peptide cyclique (IVa) (12 mg, 0.018 mmol) dans de l'isopropanol (1 mL) est chauffé à reflux pendant 5 h en présence de DLP (11 mg, 0.027 mmol). Après évaporation et flash chromatographie (gel de silice, 30% EtOAc/cyclohexane), le produit (IVa) (9 mg, 92%) est obtenu sous forme de laque incolore. R _f = 0.07 (40% EtOAc/cyclohexane) ; [α] ^D = -80 (c = 1.0, CHCI ₃ ) ; IR v _max (film) 3304, 2928, 1733, 1678, 1663, 1628, 1525, 1434, 1390, 1179 cm ^"1 ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1.29-1.34 (m, 7H), 1.63 (m, 2H), 1.69-1.87 (m, 7H), 2.17 (m, 1H), 2.32 (m, 1H), 2.56 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.95 (dd, J= 13.5, 5.7 Hz, 1H), 3.21 (dd, J= 10.0, 7.0 Hz, 1H), 3.26 (dd, J = 13.5, 10.0 Hz, 1H), 3.86 (m, 1H), 4.07 (s, 2H), 4.19 (ddd, J = 10.2, 7.6, 7.6 Hz, 1H), 4.67 (m, 1H), 5.16 (ddd, J= 10.1, 10.0, 5.7 Hz, 1H), 5.95 (s, NH), 7.11 (bd, J = 10.1 Hz, NH), 7.19-7.29 (m, 5H), 7.51 (bd, J = 10.1 Hz, NH) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 23.4 (CH ₂ ), 23.7 (CH ₃ ), 24.9 (CH ₂ ), 25.2 (CH ₂ ), 25.4 (CH ₂ ), 26.7 (CH ₃ ), 28.8 (CH ₂ ), 28.9 (CH ₂ ), 36.0 (CH ₂ ), 39.6 (CH ₂ ), 47.1 (CH ₂ ), 48.3 (CH ₂ ), 53.6 (CH), 54.4 (CH), 57.9 (CH), 59.0 (C), 126.9 (CH), 128.8 (2*CH), 129.2 (2*CH), 137.2 (C), 172.0 (C), 173.0 (C), 175.0 (C), 175.8 (C), 202.7 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 555 (100) [M+Na] ⁺ , 533 (10) ; SMHR (ESI+) : m/z calculée pour C ₂₇ H ₃₇ N ₄ O ₅ CINaS ₂ 555.2350, trouvée 555.2343.

P ré p a ra t i o n d u B e n zy l 6-((3S,9S,14af?)-9-benzyl-6,6-diméthyl-1 ,4,7,10- tétraoxotétradécahvdropyrrolo[1,2-a1[1,4,7,101tétraazacv clododécin-3-yl)hexanoate (IVc)

A partir de (IVc), le produit (IVc) est obtenu après purification par flash chromatographie (1% MeOH/CH ₂ CI ₂ ), Rdt% = 69% ; R _f = 0.17 (40% EtOAc/cyclohexane) ; [α] ^D = -75 (c = 1.4, CHCI ₃ ) ; IR v _max (film) 3309, 2934, 1735, 1678, 1663, 1629, 1525, 1424, 1257, 1 173 cm ^"1 ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1.25-1.40 (m, 7H), 1.65 (m, 2H), 1.72 (m, 1 H), 1.77-187 (m, 6H), 2.17 (m, 1 H), 2.29 (m, 1 H), 2.35 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.95 (dd, J = 13.5, 5.7 Hz, 1 H), 3.19-3.29 (m, 2H), 3.86 (ddd, J = 10.3, 8.6, 4.6 Hz, 1 H), 4.18 (ddd, J = 10.2, 7.6, 7.6 Hz, 1 H), 4.65 (m, 1 H), 5.11 (s, 2H), 5.16 (ddd, J = 10.2, 10.1 , 5.7, 1 H), 5.90 (s, NH), 7.09 (bd, J = 10.2 Hz, NH), 7.17-7.40 (m, 10H), 7.51 (bd, J = 10.3 Hz, NH) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 23.7 (CH ₃ ), 24.86 (CH ₂ ), 24.93 (CH ₂ ), 25.2 (CH ₂ ), 25.4 (CH ₂ ), 26.7 (CH ₃ ), 28.9 (2xCH ₂ ), 34.3 (CH ₂ ), 36.0 (CH ₂ ), 47.2 (CH ₂ ), 53.6 (CH), 54.5 (CH), 58.0 (CH), 59.0 (C), 66.3 (CH ₂ ), 126.9 (CH), 128.4 (2xCH), 128.7 (2*CH ), 128.8 (2xCH), 129.2 (2xCH), 136.2 (C), 137.2 (C), 172.0 (C), 173.0 (C), 173.6 (C), 174.5 (C), 175.8 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 613 (100) [M+Na] ⁺ , 591 (18) ; SMHR (ESI+) : m/z calculée pour C ₃₃ H ₄₂ N ₄ O ₆ Na 613.3002, trouvée 613.2991.

Préparation du (3S,9S,14af?)-9-benzyl-3-((S)-7-(tert-butyldiméthylsilyloxy )-6-oxooctyl)- 6,6-diméthyldécahvdropyrrolo[1 ,2-a1[1 ,4,7,101tétraazacyclododécine-1 ,4,7,10-tétraone (IVc

A parti r de (IVg), le prod u it (IVg) est obtenu après purification par flash chromatographie (0.8% MeOH/CH ₂ CI ₂ ), Rdt% = 59%; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 0.07 (s, 6H), 0.91 (s, 9H), 1.25-1.34 (m, 9H), 1.55 (m, 2H), 1.63 (m, 2H), 1.76 (m, 1 H), 1.77 (s, 3H), 2.17 (m, 1 H), 2.32 (m, 1 H), 2.47-2.64 (m, 2H), 2.95 (dd, J = 13.5, 5.7 Hz, 1 H), 3.21 (m, 1 H), 3.26 (dd, J = 13.5, 10.1 Hz, 1 H), 3.86 (m, 1 H), 4.13 (q, J = 6.8 Hz, 1 H), 4.20 (ddd, J = 10.1 , 7.6, 7.6 Hz, 1 H), 4.67 (bd, J = 7.6 Hz, H1 ), 5.17 (m, 1 H), 6.1 1 (bs, NH), 7.15 (d, J = 10.1 Hz, NH), 7.18-7.29 (m, 5H), 7.57 (bd, J = 10.1 Hz, NH); RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm -4.9 (CH ₃ ), -4.5 (CH ₃ ), 21 .0 (CH ₃ ), 22.9 (CH ₂ ), 23.1 (CH ₂ ), 23.8 (CH ₃ ), 24.9 (CH ₂ ), 25.2 (CH ₂ ), 25.9 (3*CH ₃ ), 26.6 (CH ₃ ), 29.8 (CH ₂ ), 29.9 (CH ₂ ), 36.0 (CH ₂ ), 36.9 (CH ₂ ), 47.1 (CH ₂ ), 53.6 (CH), 54.6 (CH), 58.0 (CH), 58.9 (C), 75.1 (CH), 126.9 (CH), 128.8 (2xCH), 129.2 (2xCH), 137.2 (C), 172.0 (C), 173.0 (C), 174.5 (C), 175.8 (C), 214.3 (C); Masse (ESI+) m/z (%) 665 (100) [M+Na] ⁺ , 643 (30).

Préparation du (3S,9S,14af?)-9-benzyl-3-((f?)-7-(tert-butyldiméthylsilylox y)-6-oxooctyl)-

6,6-diméthyldécahvdropyrrolo[1 ,2-a1[1 ,4,7,101tétraazacyclododécine-1 ,4,7,10-tétraone

(IVf)

A pa rti r de (IVf), le prod u it (IVf) est obtenu après pu rification par flash chromatographie (0.8% MeOH/CH ₂ CI ₂ ), Rdt% = 60% ; [α] ^D = -47 (c = 2.3, CHCI ₃ ) ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 0.07 (s, 6H), 0.91 (s, 9H), 1.26-1.34 (m, 7H), 1.34 (s, 3H), 1.55-1.73 (m, 4H), 1.75 (m, 1 H), 1.77 (s, 3H), 2.17 (m, 1 H), 2.32 (m, 1 H), 2.47- 2.64 (m, 2H), 2.95 (dd, J = 13.5, 5.7 Hz, 1 H), 3.21 (m, 1 H), 3.26 (dd, J = 13.5, 10.1 Hz, 1 H), 3.86 (m, 1 H), 4.13 (q, J = 6.8 Hz, 1 H), 4.19 (ddd, J = 10.1 , 7.6, 7.6 Hz, 1 H), 4.66 (bd, J = 7.8 Hz, 1 H), 5.16 (m, 1 H), 6.03 (s, NH), 7.12 (d, J = 10.1 Hz, NH), 7.18-7.29 (m, 5H), 7.55 (bd, J = 10.1 Hz, NH) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm -4.8 (CH ₃ ), -4.5 (CH ₃ ), 21 .1 (CH ₃ ), 22.9 (CH ₂ ), 23.2 (CH ₂ ), 23.8 (CH ₃ ), 25.0 (CH ₂ ), 25.2 (CH ₂ ), 26.0 (3xCH ₃ ), 26.7 (CH ₂ ), 29.8 (CH ₂ ), 29.9 (CH ₂ ), 36.0 (CH ₂ ), 36.9 (CH ₂ ), 47.2 (CH ₂ ), 53.7 (CH), 54.6 (CH), 58.0 (CH), 59.0 (C), 75.1 (CH), 126.9 (CH), 128.8 (2xCH), 129.3 (2 ^χ CH), 137.3 (C), 172.0 (C), 173.0 (C), 174.6 (C), 175.9 (C), 214.4 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 665 (17) [M+Na] ⁺ , 551 (100) ; SMHR (ESI+) : m/z calculée pour C ₃₄ H ₅₄ N ₄ O ₆ NaS, 665.3710, trouvée 665.3717.

Selon un autre mode de réalisation (schéma 4), l'alcène terminal du composé intermédiaire (Vl) est substitué différemment en effectuant un autre type de réaction radicalaire. Par exemple, la réaction avec l'acide thio-acétique (XVII) (par exemple R ^a = un groupe alkyle contenant entre 1 et 10 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée, notamment CH ₃ ) sur l'intermédiaire (Vl) en présence d'un initiateur de radical (AIBN) conduite la formation du thio-estertétrapeptide cyclique (XVIII) (91%).

Vl XVIII

Schéma 4

P ré p a ra t i o n d u S-4-((3S,9S,14a/?)-9-benzyl-6,6-diméthyl-1 ,4,7,10- tétraoxotétradécahvdropyrrolo[1,2-a1[1,4,7,101tétraazacv clododécin-3-yl)butyl éthanethioate (XVIIIa)

Le composé (Vl) (32 mg, 0.073 mmol) dans du THF anhydre (10 ml_) est ajouté de l'acide thioacetique (22 mg, 0.29 mmol). La solution est chauffée à reflux pendant 30 min sous argon. Une quantité catalytique d'AIBN est ajoutée et la réaction est agitée à reflux pendant 16 h. Après évaporation du solvant, le résidu est directement purifié par flash chromatographie (1% MeOHZCH ₂ Cb) pour donner le produit (XVIIIa) (34 mg, 91%). R _f = 0.12 (1% MeOH/CH ₂ CI ₂ ) ; IR v _max (film) 3307, 2934, 1684, 1630, 1528, 1428, 1274, 1187, 915 cm ^"1 ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1.34 (s, 3H), 1.39 (m, 2H), 1.53-1.71 (m, 4H), 1.72 (m, 5H), 2.11-2.22 (m, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.85 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 2.95 (dd, J= 13.4, 5.6 Hz, 1H), 3.23 (m, 1H), 3.26 (m, 1H), 3.86 (m, 1H), 4.21 (m, 1H), 4.68 (m, 1H), 5.17 (s, 1H), 6.02 (s, NH), 7.13 (d, J= 10.1 Hz, NH), 7.19-7.29 (m, 5H), 7.53 (d, J = 10.1 Hz, NH) ; RMN 1 '3Xc (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 23.7 (CH ₃ ), 24.8 (CH ₂ ), 24.9 (CH ₂ ), 25.1 (CH ₂ ), 26.6 (CH ₂ ), 28.6 (CH ₂ ), 28.9 (CH ₂ ), 29.33 (CH ₂ ), 30.8 (CH ₃ ), 35.9 (CH ₂ ), 47.1 (CH ₂ ), 53.6 (CH), 54.4 (CH), 57.9 (CH), 58.9 (C), 126.9 (CH), 128.8 (2xCH), 129.2 (2xCH), 137.2 (C), 172.0 (C), 173.0 (C), 174.4 (C), 175.8 (C), 196.0 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 539 (100) [M+Na] ⁺ , 517 (10) ; SMHR (ESI+) : m/z calculée pour C ₂₆ H ₃₆ N ₄ O ₅ NaS 539.2304, trouvée 539.2302.

Procédure générale pour obtenir (IV) à partir de (Vl) en « un pot », exemple de (IVf)

Le cyclotétrapeptide (Vl) (31 mg, 0.07 mmol) et le carbonyl xanthate (NIf) (45 mg, 0.14 mmol) dans du 1 ,2-dichloroéthane (0.2 ml_) sont chauffés à reflux pendant 30 min sous argon. 3 mg de dilauroyl peroxide (DLP) sont ajoutés tous les 2 h (5 à 7 fois en tout). Au bout de 18 h à reflux (réaction suivie par CCM), le solvant est évaporé et remplacé par de l'isopropanol (1 .5 mL). La solution est portée 30 min à reflux sous argon, puis du DLP (28 mg, 0.07 mmol) est ajouté. La solution est chauffée à reflux pendant 1 h, puis du DLP est à nouveau ajouté (14 mg, 0.035 mmol). Le mélange est chauffé encore 3 h. Après évaporation , le produit est directement purifié par chromatographie (gel de silice, 25% EtOAc/cyclohexane) pour donner le produit (IVf) (22 mg, 48%).

P r é p a r a t i o n d u ( 3S,9S,14af?)-9-benzyl-6,6-diméthyl-3-(7,7,7-trifluoro-6- oxoheptyl)décahvdropyrrolo[1 ,2-a1[1 ,4,7,101tétraazacvclododécine-1 ,4,7,10-tétraone

(IVb)

Le produit (IVb) est obtenu après purification par flash chromatographie (35% EtOAc/cyclohexane), Rdt% = 49% ; R _f = 0.08 (40% EtOAc/cyclohexane) ; [α] ^D = -71 (c = 0.44, CHCI ₃ ) ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1.25-1.36 (m, 7H), 1.56-1.72 (m, 4H), 1.77 (m, 1H), 1.77 (s, 3H), 2.18 (m, 1H), 2.33 (m, 1H), 2.71 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.95 (dd, J= 13.5, 5.7 Hz, 1H), 3.22 (m, 1H), 3.26 (dd, J= 13.5, 10.1 Hz, 1H), 3.87 (m, 1H), 4.19 (m, 1H), 4.66 (bd, J = 7.8 Hz, 1H), 5.17 (ddd, J = 10.1, 10.1, 5.7 Hz, 1H), 5.92 (s, NH), 7.12 (d, J = 10.2 Hz, NH), 7.19-7.31 (m, 5H), 7.49 (d, J = 10.2 Hz, NH) ; IR v _max (thin film, CH ₂ CI ₂ ) 3307, 2925, 1763, 1683, 1666, 1631, 1529, 1435, 1206, 1174 cm ^"1 ; Masse (ESI+) m/z (%) 575 (100) [M+Na] ⁺ , 437 (12) ; SMHR (ESI+) : m/z calculée pour C ₂₇ H ₃₅ N ₄ O ₅ F ₃ Na 575.2457, trouvée 575.2442.

P r é p a r a t i o n d u ( 3S,9S,14af?)-9-benzyl-6,6-dimethyl-3-(6- oxooctyl)decahvdropyrrolo[1 ,2-aïï1 ,4,7,101tetraazacvclododecine-1 ,4,7,10-tetraone (IVd)

Le produit (IVd) est obtenu après purification par flash chromatographie (30% EtOAc/cyclohexane), Rdt% = 50% ; R _f = 0.1 (40% EtOAc/cyclohexane) ; [α] ^D = -65 (c = 0.47, CHCI ₃ ) ; IR v _max (film) 2923, 1716, 1683, 1540, 1522, 1457, 1177 cm ^"1 ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1.05 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 1.25-1.34 (m, 4H), 1.34 (s, 3H), 1.51-1.70 (m, 4H), 1.77 (m, 1H), 1.77 (s, 3H), 2.18 (m, 1H), 2.32 (m, 1H), 2.39 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.41 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 2.95 (dd, J = 13.5, 5.7 Hz, 1H), 3.22 (m, 1H), 3.26 (dd, J = 13.5, 9.9 Hz, 1H), 3.86 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 4.66 (bd, J = 8.0 Hz, 1H), 5.16 (ddd, J = 10.1, 10.1, 5.8 Hz, 1H), 5.89 (s, NH), 7.08 (d, J = 10.2 Hz, NH), 7.18- 7.31 (m, 5H), 7.51 (d, J = 10.2 Hz, NH) ; RMN 1 '3Xc (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 8.1 (CH ₃ ), 23.8 (CH ₃ ), 25.0 (CH ₂ ), 25.2 (CH ₂ ), 25.6 (CH ₂ ), 26.7 (CH ₃ ), 29.0 (CH ₂ ), 29.9 (CH ₂ ), 36.0 (CH ₂ ), 36.1 (CH ₂ ), 42.4 (CH ₂ ), 47.2 (CH ₂ ), 53.6 (CH), 54.5 (CH), 58.0 (CH), 59.0 (C), 126.9 (CH), 128.8 (2xCH), 129.2 (2xCH), 137.2 (C), 172.0 (C), 173.0 (C), 174.6 (C), 175.9 (C), 211.8 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 535 (100) [M+Na] ⁺ , 437 (33).

P ré p a ra t i o n d e l ' ét h y l 8-((3S,9S,14af?)-9-benzyl-6,6-diméthyl-1.4.7.10- tétraoxotétradécahvdropyrrolo[1 ,2-a1[1 ,4,7,10]tétraazacvclododécin-3-yl)-3- oxooctanoate (IVe)

Le produit (IVe) est obtenu après purification par flash chromatographie (35% EtOAc/cyclohexane), Rdt% = 52% ; R _f = 0.05 (40% EtOAc/cyclohexane) ; [α] ^D = -71 (c = 0.68, CHCI ₃ ) ; IR v _max (film) 3305, 2928, 1741, 1714, 1681, 1666, 1629, 1529, 1434, 1315, 1232, 1178, 1030 cm ^"1 ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1.28 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.25-1.34 (m, 4H), 1.34 (s, 3H), 1.54-1.67 (m, 4H), 1.77 (m, 1H), 1.77 (s, 3H), 2.17 (m, 1H), 2.32 (m, 1H), 2.53 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.95 (dd, J = 13.5, 5.7 Hz, 1H), 3.23 (m, 1H), 3.26 (dd, J= 13.4, 10.0 Hz, 1H), 3.42 (s, 2H), 3.86 (m, 1H), 4.17 (m, 1H), 4.20 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.66 (bd, J = 7.8 Hz, 1H), 5.16 (ddd, J= 10.1, 10.1, 5.8 Hz, 1H), 5.92 (s, NH), 7.09 (d, J= 10.2 Hz, NH), 7.19-7.32 (m, 5H), 7.51 (d, J= 10.1 Hz, NH) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 14.3 (CH ₃ ), 23.3 (CH ₂ ), 23.8 (CH ₃ ), 25.0 (CH ₂ ), 25.2 (CH ₂ ), 25.5 (CH ₂ ), 26.7 (CH ₃ ), 28.8 (CH ₂ ), 28.9 (CH ₂ ), 36.0 (CH ₂ ), 43.0 (CH ₂ ), 47.2 (CH ₂ ), 49.5 (CH ₂ ), 53.6 (CH), 54.5 (CH), 58.0 (CH), 59.0 (C), 61.6 (CH ₂ ), 126.9 (CH), 128.8 (2xCH), 129.2 (2xCH), 137.2 (C), 167.4 (C), 172.0 (C), 173.0 (C), 174.5 (C), 175.8 (C), 202.9 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 593 (100) [M+Na] ⁺ , 521 (20) ; SMHR (ESI+) : m/z calculée pour C ₃₀ H ₄₂ N ₄ O ₇ Na 593.2951, trouvée 593.2942.

4. Procédé de préparation des peptides cycliques de formule (IVf) et (IVg)

TBDMSO HO

Schéma 5

Selon un mode de réalisation de l'invention, on fait réagir le composé intermédiaire de formule (VII) avec le carbonyle xanthate de formule (MIf) (voir schéma 2) et dans une seconde étape, on procède à la déprotection du composé obtenu. On obtient ainsi le composé (IVf). Selon un autre mode de réalisation de l'invention, on fait réagir le composé intermédiaire de formule (VII) avec le carbonyle xanthate de formule (MIg) (voir schéma 2) de manière à obtenir le composé (IVg). La déprotection des groupements silylés (TMDMS) est réalisée avec l'aide du fluorure de tétrabutyl ammonium (TBAF).

(3S,9S,14a/?)-9-benzyl-3-((/?)-7-hvdroxy-6-oxooctyl)-6,6- diméthyldécahvdropyrrolo[1 ,2-a1[1 ,4,7,101tétraazacvclododécine-1 ,4,7,10-tétraone (IVf)

R _f = 0.16 (2% MeOH/CH ₂ CI ₂ ) ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1.26-1.35 (m, 4H), 1.34 (s, 3H), 1.38 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.60-1.69 (m, 4H), 1.77 (m, 1 H), 1.77 (s, 3H), 2.18 (m, 1 H), 2.33 (m, 1 H), 2.40-2.57 (m, 2H), 2.95 (dd, J = 13.5, 5.7 Hz, 1 H), 3.21 (m, 1 H), 3.27 (dd, J = 13.5, 10.1 Hz, 1 H), 3.86 (m, 1 H), 4.19 (m, 1 H), 4.24 (q, J = 7.1 Hz, 1 H), 4.66 (bd, J = 7.7 Hz, 1 H), 5.17 (ddd, J = 10.1 , 10.1 , 5.8 Hz, 1 H), 6.00 (s, NH), 7.13 (d, J = 10.2 Hz, NH), 7.18-7.30 (m, 5H), 7.51 (d, J = 10.2 Hz, NH) ; RMN 'X (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 20.1 (CH ₃ ), 23.5 (CH ₂ ), 23.8 (CH ₃ ), 25.0 (CH ₂ ), 25.2 (CH ₂ ), 25.4 (CH ₂ ), 26.7 (CH ₃ ), 28.9 (CH ₂ ), 29.0 (CH ₂ ), 36.0 (CH ₂ ), 37.5 (CH ₂ ), 47.2 (CH ₂ ), 53.7 (CH), 54.5 (CH), 58.0 (CH), 59.0 (C), 72.8 (CH), 126.9 (CH), 128.8 (2xCH), 129.2 (2 ^χ CH), 137.2 (C), 172.1 (C), 173.0 (C), 174.5 (C), 175.8 (C), 212.6 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 551 (100) [M+Na] ⁺ , 529 (10) ; SMHR (ESI+) : m/z calculée pour C ₂₈ H ₄₀ N ₄ O ₆ Na 551.2846, trouvée 551.2847.

(3S,9S,14af?)-9-benzyl-3-((S)-7-hvdroxy-6-oxooctyl)-6,6- diméthyldécahvdropyrrolo[1 ,2-a1[1 ,4,7,101tétraazacyclododécine-1 ,4,7,10-tétraone (IVg)

R _f = 0.09 (60% EtOAc/cyclohexane) ; ¹ H NMR (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1.25-1.35 (m, 4H), 1.34 (s, 3H), 1.38 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.62-1.69 (m, 4H), 1.77 (m, 1 H), 1.77 (s, 3H), 2.17 (m, 1 H), 2.32 (m, 1 H), 2.38-2.58 (m, 2H), 2.95 (dd, J = 13.5, 5.7 Hz, 1 H), 3.22 (m, 1 H), 3.26 (dd, J = 13.5, 10.1 Hz, 1 H), 3.86 (m, 1 H), 4.19 (m, 1 H), 4.22 (q, J = 7.1 Hz, 1 H), 4.67 (bd, J = 7.7 Hz, 1 H), 5.16 (ddd, J = 10.1 , 10.1 , 5.8 Hz, 1 H), 6.12 (bs, NH), 7.17 (d, J = 10.2 Hz, NH), 7.20-7.30 (m, 5H), 7.54 (d, J = 10.2 Hz, NH) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 20.1 (CH ₃ ), 23.5 (CH ₂ ), 23.8 (CH ₃ ), 25.0 (CH ₂ ), 25.2 (CH ₂ ), 25.5 (CH ₂ ), 26.7 (CH ₃ ), 28.9 (CH ₂ ), 29.0 (CH ₂ ), 36.0 (CH ₂ ), 37.5 (CH ₂ ), 47.2 (CH ₂ ), 53.7 (CH), 54.5 (CH), 58.0 (CH), 59.0 (C), 72.8 (CH), 126.9 (CH), 128.8 (2xCH), 129.2 (2 ^χ CH), 137.2 (C), 172.1 (C), 173.0 (C), 174.5 (C), 175.8 (C), 212.6 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 551 (45) [M+Na] ⁺ , 242 (100) ; SMHR (ESI+) : m/z calculée pour C ₂₈ H ₄₀ N ₄ O ₆ Na 551.2846, trouvée 551.2847. 5. Autres peptides cycliques et procédé de préparation selon l'invention

Préparation des peptides cycliques (IV'i) et (IVk)

Schéma 6

L'acide (IVj) est obtenu par hydrogénation catalytique. L'acide hydroxamique (IVk) est obtenu à partir de (IVj).

Préparation du peptide cyclique (3S,9S,14a/?)-9-benzyl-3-(7-bromo-6-oxoheptyl)-6,6- diméthyldécahvdropyrrolo[1 ,2-a1[1 ,4J,101tétraazacvclododécine-1 ,4,7,10-tétraone

On ajoute du LiBr (23 mg, 0.27 mmol) au composé (IVa) (7.1 mg, 0.013 mmol) dissous dans l'acétone (1 mL) sous argon. La solution est agitée à l'abri de la lumière pendant 5 jours. L'acétone est évaporée et de l'EtOAc est ajouté. La phase organique est lavée avec d e l 'ea u , séchée s u r M gSO ₄ , pu is évaporée. Après flash chromatographie (gel de silice, 2% MeOH/CH ₂ CI ₂ ), le produit (IVh) (5.8 mg, 75%) est isolé sous forme de laque incolore.

R _f = 0.07 (40% EtOAc/cyclohexane) ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1.27-1.34 (m, 4H), 1.34 (s, 3H), 1.62 (m, 2H), 1.70-1.83 (m, 7H), 2.17 (m, 1 H), 2.32 (m, 1 H), 2.65 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.95 (dd, J = 13.5, 5.7 Hz, 1 H), 3.24 (m, 1 H), 3.26 (dd, J = 13.5, 10.0 Hz, 1 H), 3.86 (m, 1 H), 3.88 (s, 2H), 4.18 (ddd, J = 10.2, 7.6, 7.6 Hz, 1 H), 4.65 (bd, J = 7.8 Hz, 1 H), 5.16 (ddd, J = 10.1 , 10.0, 5.7 Hz, 1 H), 5.93 (s, NH), 7.1 1 (bd, J = 10.1 Hz, NH), 7.19-7.31 (m, 5H), 7.51 (bd, J = 10.1 Hz, NH) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 23.7 (CH ₃ , CH ₂ ), 25.0 (CH ₂ ), 25.2 (CH ₂ ), 25.5 (CH ₂ ), 26.7 (CH ₃ ), 28.8 (CH ₂ ), 28.9 (CH ₂ ), 34.5 (CH ₂ ), 36.0 (CH ₃ ), 39.8 (CH ₂ ), 47.2 (CH ₂ ), 53.6 (CH), 54.5 (CH), 58.0 (CH), 59.0 (C), 126.9 (CH), 128.8 (2xCH), 129.3 (2xCH), 137.2 (C), 172.1 (C), 173.0 (C), 174.5 (C),175.8 (C), 202.2 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 602 (30) [M+Na] ⁺ , 601 (100) [M+Na] ⁺ , 600 (30) [M+Na] ⁺ , 599 (100) [M+Na] ⁺ , 555 (30).

Préparation du peptide cyclique S-7-((3S,9S,14af?)-9-benzyl-6,6-diméthyl-1 ,4,7,10- tétraoxotétradécahvdropyrrolo[1 ,2-aïï1 ,4,7,101tétraazacvclododécin-3-yl)-2-oxoheptyl O-éthyl carbonodithioate (IVi)

L'éthyl xanthate de potassium (4.2 mg, 0.026 mmol) dans l'acétone (0.2 ml_) est injecté à une solution de composé (IVa) (7.9 mg, 0.0147 mmol) dans l'acétone (0.4 ml_) à 0 ⁰ C. La réaction est agitée à température ambiante pendant 5 h. Le solvant est évaporé et le résidu est directement purifié par flash chromatographie pour donner le composé (IVi) (5.5 mg, 60%).

R _f = 0.07 (40% EtOAc/cyclohexane) ; RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 1.28-1.34 (m, 4H), 1 .34 (s, 3H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1 .59-1.68 (m, 4H), 1.77 (m, 1 H), 1 .77 (s, 3H), 2.17 (m, 1 H), 2.32 (m, 1 H), 2.59 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.95 (dd, J = 13.5, 5.7 Hz, 1 H), 3.23 (m, 1 H), 3.26 (dd, J = 13.5, 9.9 Hz, 1 H), 3.86 (m, 1 H), 4.17 (m, 1 H), 4.65 (bd, J = 7.1 Hz, 2H), 6.67 (m, 1 H), 5.16 (ddd, J = 10.1 , 10.1 , 5.8 Hz, 1 H), 5.88 (s, NH), 7.09 (d, J = 10.2 Hz, NH), 7.18-7.29 (m, 5H), 7.50 (d, J = 10.2 Hz, NH) ; RMN ¹³ C (100 MHz, CDCI ₃ ) δ ppm 23.6 (CH ₂ ), 23.8 (CH ₃ ), 25.0 (CH ₂ ), 25.3 (CH ₂ ), 25.5 (CH ₂ ), 26.7 (CH ₃ ), 28.9 (CH ₂ ), 29.0 (CH ₂ ), 36.0 (CH ₂ ), 41 .9 (CH ₂ ), 45.7 (CH ₂ ), 47.2 (CH ₂ ), 53.7 (CH), 54.5 (CH), 58.0 (CH), 59.0 (C), 71 .1 (CH ₂ ), 126.9 (CH), 128.8 (2xCH), 129.2 (2*CH), 137.2 (C), 172.0 (C), 173.0 (C), 174.5 (C), 175.8 (C), 203.4 (C), 213.1 (C) ; Masse (ESI+) m/z (%) 641 (100) [M+Na] ⁺ , 553 (85) ; SMHR (ESI+) : m/z calculée pour C ₃₀ H ₄₂ N ₄ O ₆ NaS ₂ 641.2443, trouvée 641.2438.

6. Tests biologiques sur cellules

Les peptides cycliques synthétisés ont fait l'objet de tests in vitro sur fibroblastes humains infectés par Toxoplasma gondii (Toxo), sur fibroblastes humains (HFF) non infectés et sur cellules cancéreuses HeLa (cancer cervical) et MCF-7 (cancer du sein).

Leurs efficacités respectives ont été testées à 90 nM comme test préliminaire.

Les résultats sont représentés à la figure 1.

Correspondance des molécules : API=Apicidine , 37O=(IVf), 338= (Vl), 343= (IVc),

345= (IVc), 347= (IVj), 348= (IVk), 350= (IVa), 351 = (IVa), 355= (IVg), 356= (IVg),

357= (IVg), 368= (IVf), 369= (IVf), 397= (XVIIIa), 417= (IVd), 418= (IVb), 421 = (IVe).

Ayant montré des résultats préliminaires intéressants, l'efficacité du peptide cyclique (IV _f ) sur des fibroblastes humains infectés par Toxoplasma gondii a ensuite été comparée à celle d'autres molécules connus (apicidine et pyriméthamine notamment).

Comme représenté à la figure 2, le composé (IVf) a montré une très bonne efficacité, de l'ordre du nanomolaire. Il a une activité proche de celle de l'apicidine et surtout une efficacité bien supérieure par rapport à la pyriméthamine qui est le composé utilisé actuellement dans le traitement de la toxoplasmose. Le tableau ci-dessous donne les valeurs numériques obtenues.

7. Tests biologiques sur cerveaux de souris

Le peptide cyclique (IVf) a ensuite été testé sur des kystes (forme bradyzoïtes) de cerveaux de souris ex vivo à 200 nM (figure 3). Les kystes après traitement pendant 7 jours avec le peptide cyclique (IVf) sont réinoculés de façon intra-péritoniale aux souris. Les souris ayant subi l'injection de kystes traités uniquement avec le tampon phosphate salin (PBS) ou le DMSO développent des kystes, alors que celles ayant subi une injection de kystes traités avec le peptide cyclique (IVf) ne présentent aucun kyste.