DOMAINE TECHNIQUE

La présente invention concerne le domaine des agents antibactériens.

Plus précisément, de nouveaux dérivés de la 6-amino-6-désoxyglucosamine ont été synthétisés et apparaissent comme très actifs.

ETAT ANTERIEUR DE LA TECHNIQUE

Les aminoglycosides sont des pseudo-polysaccharides polyaminés naturels synthétisés par les bactéries Gram positif pour lutter contre d'autres bactéries. Les premiers composés de cette famille ont été découverts dans les années 40 et identifiés comme de puissants agents antibiotiques très vite utilisés à l'hôpital. La streptomycine, la néomycine, la kanamycine et la gentamicine furent les premières molécules de la famille des aminoglycosides à être isolées.

La majorité des aminoglycosides ont pour élément de structure commun le cycle streptamine ou 2-désoxystreptamine lié, par liaison glycosidique, à une ou deux unités mono ou disaccharidiques.

Parmi eux sont illustrés ci-dessous la paromamine (1) et la néamine (2), constituées du cycle I (2-désoxystreptamine) lié sur la position 4 au cycle II (glucosamine si R=OH ou 6-amino-6-désoxy glucosamine si R=NH ₂ ) par liaison glycosidique. Ces deux composés constituent les motifs de base de deux grandes familles d' aminoglycosides :

la famille des dérivés substitués en position 5, à laquelle appartiennent la paromomycine (3) et la néomycine (4) ;

la famille des dérivés (5) substitués en position 6, à laquelle appartiennent les kanamycines et la tobramycine.

1 : R = OH, Paromamine

2 : R = NH ₂ , Néamine

Parmi les agents antibiotiques actuels, les aminoglycosides représentent une classe très importante de molécules essentiellement utilisées en milieu hospitalier. L'utilisation restreinte dans ce milieu minimise le risque que des bactéries résistantes se développent, ce qui permet d'avoir accès à des molécules actives en cas d'urgence.

La plupart des aminoglycosides ont un effet antibiotique à la fois contre les bactéries Gram positif et Gram négatif. Ils sont souvent administrés en combinaison avec des β-lactames ou des fluoroquinolones pour élargir leurs spectres. En revanche, tous les aminoglycosides sont inactifs sur les bactéries anaérobies et les mycoplasmes.

Les aminoglycosides ont plusieurs modes d'action dont le principal réside dans la perturbation de la synthèse protéique en raison d'une interaction forte avec le site A de l'AR ribosomal bactérien 16S. En 1987, Mozaed et Noller ont montré que certains aminoglycosides interagissent spécifiquement avec l'ARN ribosomal. Depuis cette découverte, d'autres ARNs pour lesquels les aminoglycosides sont de bons ligands ont été identifiés. Ils sont, par exemple, capables de se fixer aux ARN TAR, RRE et DIS du VIH-1.

Leurs effets antibiotiques sont également dus aux modifications des propriétés de la membrane bactérienne qu'ils provoquent. Malheureusement, les aminoglycosides présentent certains inconvénients lors de leur utilisation comme médicaments. En effet, leur toxicité en limite l'utilisation thérapeutique, et comme pour de nombreux autres agents, des phénomènes de résistance apparaissent. Ainsi, les souches bactériennes résistantes sont responsables des maladies nosocomiales qui constituent un problème de santé majeur.

Ces résistances impliquent des modifications enzymatiques de la structure des aminoglycosides les rendant incapables de se lier à TARN ribosomal bactérien, la réduction de leur concentration intracellulaire par efflux, l'altération de la structure de la sous-unité 30S de l'AR cible et la méthylation du site de fixation des aminoglycosides dans l'ARN.

En ce qui concerne les résistances causées par les enzymes de modification synthétisées par certaines bactéries, on rencontre trois classes d'enzymes de résistance :

les aminosides O-phosphotransférases (APH) et les aminosides nucléotidyltransférases (ANT) qui phosphorylent les aminoglycosides sur les fonctions hydroxyles à l'aide de l'ATP ;

les aminosides N-acétyltransférases (AAC) qui catalysent l'acylation des fonctions aminés de l'aminoglycoside à l'aide du coenzyme A.

Les enzymes de modification sont spécifiques des différentes positions de l'aminoglycoside. Une enzyme qui phosphoryle la fonction hydroxyle en position 3 ' sur le cycle II va porter le nom APH3 ' . La kanamycine B est par exemple modifiée par les enzymes suivantes :

A noter qu'une enzyme bifonctionnelle AAC(6')-APH(2") a été découverte en 1997.

En ce qui concerne les mécanismes qui contribuent à la diminution de la concentration cellulaire en molécules actives, les pompes d'efflux présentes dans la membrane cellulaire des cellules procaryotes constituent un système de rejet des agents xénobiotiques qui risquent d'intoxiquer la cellule. Ces pompes d'efflux peuvent être suractivées à cause d'une mutation. Certaines cellules présentent des mutations dans les gènes de régulation de ces pompes de sorte qu'elles vont être surexprimées et que le rejet des xénobiotiques sera moins sélectif permettant l'efflux des aminoglycosides (systèmes « Multi-Drug Résistant » ou MDR). Les effets antibiotiques majeurs des aminoglycosides et les problèmes de résistance ont donc conduit à un regain d'intérêt pour la chimie de ces molécules dans le but de trouver de nouveaux agents antibiotiques et/ou antiviraux. Il s'agit en particulier d'identifier de nouveaux agents actifs sur les bactéries résistantes aux aminoglycosides actuellement disponibles et donc aux traitements actuels.

Ainsi, le document WO2009/095588 rapporte des activités antimicrobiennes intéressantes pour des molécules dérivés de la néamine, plus précisément des dérivés de la néamine ou de la paromamine disubstitués (3 '+6 ou 3'+4' ou 4'+6), ou trisubstitués (3'+4'+6) aux positions 3', 4' et/ou 6 ou impliquant la position 5 (3'+6+5 ou 3'+4'+5 ou 4'+6+5). Toutefois, ces molécules, présentant au moins deux cycles dont l'un est un sucre, sont obtenues à partir de substances de départ coûteuses (paromomycine et néomycine).

Il existe donc un besoin réel de développer de nouvelles molécules présentant les activités antibactériennes recherchées. C'est dans cette démarche que s'inscrit la présente invention. En effet, le Demandeur a mis en évidence que des molécules dérivées de la 6- amino-6-désoxyglucosamine présentaient de telles propriétés.

Pour rappel, la 6-amino-6-désoxyglucosamine présente la formule suivante :

6-amino-6-désoxyglucosamine

Cette numérotation des atomes va être adoptée dans le reste de la description.

EXPOSE DE L'INVENTION

Ainsi et selon un premier aspect, l'invention concerne des composés présentant la formule suivante :

dans laquelle :

Ri≠ 2-désoxystreptamine et ses dérivés substitués aux positions 5 et/ou 6 ;

R ₂ et R _Ô , identiques ou différents, représentent une fonction aminé primaire, secondaire ou tertiaire : NH ₂ , NHR, NRR' avec R et R' = alkyl, aryl, cyclique ou non, substitué ou non ;

OR ₃ et OR ₄ forment des fonctions alcool, éther, ester, carbonate, carbamate, sulfonate ou sulfamate ; et

. si R ₃ = R ₄ , alors R ₃ et R ₄ ≠ H ;

. si R ₃ = H, alors R4≠ H et Ri≠ OH ; et

. si R ₄ = H, alors R ₃ ≠H et Ri≠OH ;

. si Ri= OH, alors R ₃ et R4≠ H .

Par ailleurs et de manière privilégiée, si Ri = OR ₅ , alors R ₃ et/ou R4 et/ou R ₅ n'est pas un sucre (ou ose ou monosacharide) ou un polysaccharide (ou polyose ou oligosaccharide). Dans le cadre de l'invention, on entend par « sucre » un cycle formé de 5 ou 6 atomes dont un atome d'oxygène intracyclique lié à un atome de carbone également intracyclique, lui-même lié à un deuxième atome d'oxygène exocyclique (sucre sous forme hémiacétalique ou acétalique). Dans le cas d'un polysaccharide, un tel cycle est lié, via un atome d'oxygène, à un ou plusieurs autres cycles de type « sucre » tel que défini ci-dessus.

En pratique, les composés exclus sont les dérivés disubstitués ou trisubstitués dans lesquels : R ₃ 0U R4 ou R ₅ est un sucre ou un polysaccharide ; R ₃ et R ₄ , R ₃ et R ₅ ou R ₄ et R ₅ sont des sucres ou des polysaccharides; ou R ₃ et R ₄ et R ₅ sont des sucres ou des polysaccharides.

A noter que Ri peut aussi bien se trouver en configuration alpha que béta (anomère alpha ou anomère béta).

Par ailleurs, les différents diastéréoisomères de ces composés sont également visés dans le cadre de la présente demande.

En outre, les composés selon l'invention peuvent se présenter sous forme de sels, résultant de la réaction des fonctions aminés avec un acide, par exemple sous forme de chlorhydrates ou fluoroacétates. Cette nouvelle classe d'agents antibiotiques présente des avantages certains et inattendus :

- Alors que tous les aminoglycosides naturels d'intérêt présentent au moins deux unités monosaccharidiques (cycles), il a été mis en évidence dans le cadre de la présente invention que seul le cycle II, de type glucosamine, était essentiel à l'activité recherchée ;

La substance de départ permettant d'obtenir les dérivés actifs est peu coûteuse, notamment la N-acétylglucosamine qui est le constituant majeur du polysaccharide formant la carapace des crustacés comme le crabe, à savoir le chitosane.

En d'autres termes, la présente invention concerne notamment les dérivés di- (3+1 ou 4+1 ou 3+4) et trisubstitués (3+4+1) des substances connues suivantes :

6-amino-6-désoxyglucosamine ;

6-amino-6-désoxyglucosamine

- les dérivés isomères des précédents dérivés de la 6-amino-6-désoxyglucosamine, tels que ceux de la 6-amino-6-désoxymannosamine ou de la 6-amino-6- désoxygalactosamine, préparés à partir de la mannosamine et de la galactosamine plus chères, respectivement :

mannosamine 6-amino-6-désoxymannosamine galactosamine 6-amino-6-désoxygalactosamine

Comme déjà dit, dans ces molécules, les fonctions aminés primaires en position 2 et 6 peuvent être remplacées par des fonctions aminés secondaires ou tertiaires incluses dans un cycle ou non, par substitution par des groupements alkyles ou aryles d'un ou de plusieurs atomes d'hydrogène de la fonction aminé primaire.

La présente invention repose sur la mise en évidence par le Demandeur que l'activité antibactérienne des composés dérivés de la néamine ou de la paromamine, disubstitués sur le cycle II (6-amino-6-désoxy glucosamine), notamment aux positions dites 3' et 4' de la néamine ou de la paromamine, conservaient une activité même en l'absence du cycle I, à savoir la 2-désoxystreptamine. Il est donc possible d'introduire tout autre substituant en position 1 de ce cycle, incarnée dans le cadre de la présente invention par le résidu Ri .

Pour rappel, les différentes molécules citées ont la formule suivante :

e

Afin de se différencier de l'art antérieur, le résidu Ri est avantageusement différent de la 2-désoxystreptamine et de ses dérivés substitués aux positions 4 et/ou 5 et/ou 6, comme décrit dans le document WO2009/095588.

En d'autres termes, Ri ne présente pas la formule suivante :

avec R' ₅ , R' ₆ définis comme R ₃ et R ₄ dans le cadre de la présente demande.

Dans le cadre de l'invention, le résidu Ri peut être de toute nature, en particulier il peut représenter une chaîne carbonée substituée ou non, pouvant contenir des hétéroatomes et pouvant être cyclique ou non.

Par exemple, le résidu Ri correspond à CR ₅ , OR ₅ ou SR ₅ , R ₅ étant défini comme R ₃ et R ₄ ci-dessus. Selon ce mode de réalisation, la présente invention vise des composés de formule :

Toutefois, de manière privilégiée, la présente invention vise des composés de formule :

dans laquelle :

R ₂ et R _Ô , identiques ou différents, représentent une fonction aminé primaire, secondaire ou tertiaire : NH ₂ , NHR, NRR' avec R et R' = alkyl, aryl, cyclique ou non, substitué ou non ;

OR ₃ , OR ₄ et OR ₅ forment des fonctions alcool, éther, ester, carbonate, carbamate, sulfonate ou sulfamate ; et

. si R3 = R4 = R5, alors R3, R4 et R ₅ ≠ H ;

. si R ₃ = H, alors R ₄ et R ₅ ≠ H ;

. si R ₄ = H, alors R ₃ et R ₅ ≠ H;

. si R ₅ = H, alors R ₃ et R ₄ ≠ H.

Par ailleurs et comme déjà dit, si alors R ₃ et/ou R ₄ et/ou R ₅ n'est pas un sucre ou un polysaccharide.

Selon un mode de réalisation particulier, les dérivés visés sont substitués à la fois aux positions 1, 3 et 4, c'est à dire que R ₃ ≠ H, R ₄ ≠ H et R ₅ ≠ H. Toutefois, les dérivés disubstitués peuvent s'avérer privilégiés en raison d'une toxicité potentielle moindre.

De manière avantageuse, les résidus R ₃ et R ₄ (et éventuellement R ₅ ) sont identiques.

Ainsi, selon l'invention, une, voire les deux, des fonctions alcool en position 3 et 4 présentes dans les molécules connues sont remplacées par des fonctions éther, ester, carbonate, carbamate, sulfonate ou sulfamate.

Dans la fonction alcool, l'oxygène présente une liaison simple avec un atome d'hydrogène (OH).

Dans la fonction éther, l'oxygène présente une liaison simple avec un atome de carbone, lui-même engagé dans un groupement de type alkyle (OCRR'R") ou de type aryle (OAr).

Dans la fonction ester, l'oxygène présente une liaison simple avec un atome de carbone, lui-même engagé dans une double liaison avec un autre atome d'oxygène (OCOR). Dans la fonction carbonate, l'oxygène présente une liaison simple avec un atome de carbone, lui-même engagé dans une double liaison avec un second atome d'oxygène et dans une autre liaison simple avec un troisième atome d'oxygène (OC(O)OR).

Dans la fonction carbamate, l'oxygène présente une liaison simple avec un atome de carbone, lui-même engagé dans une double liaison avec un autre atome d'oxygène et dans une liaison simple avec un atome d'azote (OC(O)NHR ou OC(O)NRR').

Dans la fonction sulfonate, l'oxygène présente une liaison simple avec un atome de soufre, lui-même engagé dans deux doubles liaisons, chacune formée avec un atome d'oxygène, et dans une liaison simple avec un atome de carbone (OS0 ₂ R).

Dans la fonction sulfamate, l'oxygène présente une liaison simple avec un atome de soufre, lui-même engagé dans deux doubles liaisons, chacune formée avec un atome d'oxygène, et dans une liaison simple avec un atome d'azote (OS0 ₂ NHR ou OSO ₂ NRR').

La nature de ces fonctions découle notamment du procédé mis en œuvre pour la synthèse de ces dérivés.

Il apparaît clairement que dans les composés visés par la présente invention, les fonctions OR ₃ et OR ₄ peuvent indépendamment être choisies dans le groupe constitué des fonctions alcool, éther, ester, carbonate, carbamate, sulfonate ou sulfamate. Toutes les combinaisons sont donc envisagées.

Sans vouloir être lié à une quelconque théorie, la modification et/ou l'encombrement de ces positions stratégiques par des substituants pourrait prévenir leur dégradation par les enzymes bactériennes de résistance impliquées dans les modifications de la structure des aminoglycosides. Ceci pourrait expliquer l'activité antibactérienne remarquable observée pour ces composés.

Selon un mode de réalisation privilégiée de l'invention, les résidus R3, R4 et éventuellement R ₅ , identiques ou différents, représentent :

♦ H avec au moins deux d'entre eux différent de H;

♦ un groupe alkyle, haloalkyle ou hétéroalkyle contenant entre 1 et 30 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ;

♦ un ou plusieurs groupes alcènyle ou alcynyle contenant entre 2 et 30 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ; ♦ un ou plusieurs groupes cycloalkyle, cycloalcènyle ou cycloalcynyle, substitués ou non, contenant entre 3 et 30 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée;

♦ un ou plusieurs groupes aryle ou hétéroaryle contenant entre 3 et 10 atomes de carbone par cycle ;

♦ un groupe alkaryle ou aralkyle contenant entre 1 et 30 atomes de carbone, les termes aryle et alkyle ayant les définitions ci-dessus ;

♦ un ou plusieurs groupes alkoxy, thioalkyle, sulfonylalkyle, aminoalkyle contenant entre 1 et 30 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ;

♦ un ou plusieurs groupes alkoxyalkyle, alkylthioalkyle, alkylsulfonylalkyle, alkylaminoalkyle, alkylcétoalkyle, alkylester d'alkyle ou d'aryle contenant entre 1 et 30 atomes de carbone en chaîne linéaire ou ramifiée ;

♦ un ou plusieurs groupes hétérocyclique contenant entre 5 et 10 atomes de carbone par cycle ;

♦ un groupe alkylcarbonyle ou arylcarbonyle (-C(O)R), R étant défini comme R ₃ , R4 et

R ₅ ;

♦ un groupe alkyloxycarbonyle ou aryloxycarbonyle (-C(O)OR), R étant défini comme R ₃ , R4 et R5 ;

♦ un groupe alkylcarbamoyle ou arylcarbamoyle (-C(O)NHR ou (-C(O)NRR'), R et R' identiques ou différents étant définis comme R ₃ , R4 et R ₅ ;

♦ un groupe sulfonyle (-S0 ₂ R), R étant défini comme R ₃ , R4 et R ₅ ;

♦ un groupe aminosulfonyle (-SO ₂ NHR ou -SO ₂ NHRR'), R et R' identiques ou différents étant définis comme R ₃ , R4 et R5 ;

lesdits groupes étant tous éventuellement substitués par un ou plusieurs groupes nitro, cyano, hydroxy, carboxy, carbonyle ou amino, par un ou plusieurs halogènes ou par une ou plusieurs fonctions nitrile, cyanhydrine, aldéhyde.

Par "aminé", on entend un groupement comportant un atome d'azote. Il peut s'agir d'une aminé primaire NH ₂ , d'amines secondaires NH ou d'amines tertiaires NR'R". R et R", identiques ou différents, sont définis comme R ₃ , R4 et R ₅ .

Selon l'invention, le terme "alkyle" désigne un radical hydrocarboné linéaire ou ramifié de 1 à 30 atomes de carbone, tel que, à titre indicatif, méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, tert-butyle, isobutyle, pentyle, hexyle, heptyle, octyle, nonyle, décyle, undécyle, dodécyle, tridécyle, tétradécyle, pentadécyle, hexadécyle, heptadécyle, octadécyle, nonadécyle ou icosyle. Le groupe alkyle ci-dessus défini peut comporter un ou plusieurs atomes d'halogène (fluor, chlore, brome ou iode). Dans ce cas, on parle de groupe "haloalkyle". Le groupe alkyle peut en outre comprendre des hétéroatomes choisis parmi P, O, N, S et Se. Dans ce cas, on parle de groupe "hétéroalkyle". Par "alcényle", on entend une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée de 2 à 30 atomes de carbone comprenant une ou plusieurs doubles liaisons. Des exemples de groupes alcényle sont les groupes alcényle portant une seule double liaison tels que -CH-CH=CH- CH ₂ , H ₂ C=CH- (vinyle) ou H ₂ C=CH-CH ₂ - (allyle).

Par "alcynyle", on entend une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée de 2 à 30 atomes de carbone comprenant une ou plusieurs triples liaisons. Des exemples de groupes alcynyle sont les groupes alcynyle portant une seule triple liaison tel que -CH ₂ -C≡ CH.

Le terme "cycloalkyle" désigne des groupements hydrocarbonés saturés qui peuvent être mono- ou polycycliques et comprennent de 3 à 10 atomes de carbone. Il s'agit, par exemple, de groupements cycloalkyle monocycliques tels que cyclopropyle, cyclobutyle, cyclopentyle, cyclohexyle, cycloheptyle, cyclooctyle, cyclononyle, cyclodécyle, cycloundécyle et cyclododécyle.

Par "cycloalcényle", on entend selon l'invention un groupe dérivé d'un groupe cycloalkyle tel que défini ci-dessus, présentant une ou plusieurs doubles liaisons, par exemple deux doubles liaisons. Il s'agit par exemple du groupement cyclohexène (une double liaison) ou cyclopenta-l,3-diène (deux doubles liaisons).

Par "cycloalcynyle", on entend selon l'invention un groupe dérivé d'un groupe cycloalkyle tel que défini ci-dessus, présentant une ou plusieurs triples liaisons, par exemple une triple liaison.

Le terme "aryle" représente un groupement hydrocarboné monocyclique ou polycyclique aromatique comprenant 3 à 10 atomes de carbone par cycle, tel que phényle ou naphtyle.

Le terme "hétéroaryle" désigne un groupe aromatique monocyclique ou polycyclique comprenant entre 3 et 10 atomes de carbone par cycle et comprenant 1, 2 ou 3 hétéroatomes endocycliques par cycle choisis parmi P, O, N, S et Se. Des exemples en sont les groupes furyle, thiényle, pyrrolyle, oxazolyle, isoxazolyle, thiazolyle, isothiazolyle, imidazolyle, pyrazolyle, oxadiazolyle, triazolyle, thiadiazolyle, pyridyle, pyridazinyle, pyrazinyle et triazinyle.

Par "alkaryle", on entend un groupe alkyle, substitué par un groupe aryle, ces deux groupes étant définis ci-dessus.

Par "aralkyle", on entend un groupe aryle, substitué par un groupe alkyle, ces deux groupes étant définis ci-dessus. Par "alkoxy", on entend un groupe O-alkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone, notamment méthoxy, éthoxy, propoxy et butoxy. Par "alkoxyalkyle", on entend un groupe alkyle-O-alkyle ayant de 1 à 30 atomes de carbone. Les groupes "thioalkyle" ou "alkylthioalkyle", "sulfonylalkyle" ou "alkylsulfonylalkyle" et "aminoalkyle" ou "alkylaminoalkyle" comportent en outre respectivement un ou plusieurs atomes de soufre, un ou plusieurs groupes sulfonyl et une ou plusieurs fonctions aminé.

Le terme "groupe hétérocyclique" désigne des cycles carbonés saturés ou insaturés, monocycliques ou polycycliques, présentant 1, 2 ou 3 hétéroatomes endocycliques choisis parmi P, O, N, S et Se. Ce sont généralement des dérivés des groupes hétéroaryles décrits ci-dessus. Des exemples d'hétérocycles insaturés sont dihydrofuryle, dihydrothiényle, dihydropyrrolyle, pyrrolinyle, oxazolinyle, thiazolinyle, imidazolinyle, pyrazolinyle, isoxazolinyle, isothiazolinyle, oxadiazolinyle, pyranyle et les dérivés mono- insaturés de la pipéridine, du dioxane, de la pipérazine, du trithiane, de la morpholine du dithiane, de la thiomorpholine, ainsi que tétrahydropyridazinyle, tétrahydropyrimidinyle, et tétrahydrotriazinyle.

Selon un mode de réalisation privilégié, R ₃ et/ou R4, (et éventuellement R ₅ ) sont choisis dans le groupe suivant : alkyl, avantageusement nonyle (C ₉ H ₁₉ ) ou hexyle, naphtyl-1 alkyle, avantageusement naphtyl-1 -méthylène, naphtyl-1 -propyle ou naphtyl-1 -butyle, naphtyl-2 alkyle, avantageusement naphtyl-2-méthylène, naphtyl-2-propyle ou naphtyl-2- butyle.

Comme déjà dit, Ri (OR5) ne correspond pas à la 2-désoxystreptamine et à ses dérivés substitués aux positions 5 et/ou 6 et fixés par la position 4.

Selon un mode de réalisation privilégié, R ₅ est avantageusement choisi dans le groupe suivant : méthyle (CH ₃ ), allyle ou CH ₂ -CHOH-CH ₂ OH, CH ₂ -CHOH-CH ₂ R (R= OH, NH ₂ , NH-(CH ₂ ) ₂ -OH, NH-(CH ₂ ) _n -NH ₂ ) ou CH ₂ -CHOH-CHOH-CH ₂ -NH ₂ . Plus généralement, il s'agit donc d'un groupement alkyle substitué ou non par au moins une fonction hydroxyle et/ou aminé.

Dans le cas particulier où le résidu R ₅ est un groupement allyle, différentes modifications subséquentes sont possibles, telles qu'illustrées ci-après : Oxydation de la double liaison du groupement allyle

Couplage par réaction de métathèse :

De manière générale, R, R' et R' ' sont définis comme une chaîne carbonée substituée ou non, pouvant contenir des hétéroatomes, cyclique ou non.

L'ensemble de ces réactions est bien connu et peut aisément être mis en œuvre par l'homme du métier.

Ainsi, des composés privilégiés selon l'invention sont les suivants : onyl

En particulier, des composés selon l'invention sont par exemple les composés suivants :

De manière remarquable, il a été montré dans le cadre de la présente invention, que ces composés pouvaient avoir un intérêt dans le cadre d'une application thérapeutique. C'est pourquoi et selon un autre aspect, la présente invention vise l'utilisation d'un composé tel que décrit ci-dessus comme médicament et une composition pharmaceutique le comprenant.

Dans une telle composition, le composé selon l'invention se présente avantageusement sous forme de sel pharmaceutiquement acceptable, notamment chlorhydrate ou méthylsulfonate.

Bien sûr, une telle composition peut également contenir tout excipient ou véhicule pharmaceutiquement inerte, et éventuellement un ou plusieurs autres principes actifs. Dans le cadre des cocktails d'antibiotiques, un principe actif privilégié est un antibiotique d'une autre classe, préférentiellement un β-lactame ou une fluoroquinolone.

Comme déjà dit, les composés selon l'invention servent avantageusement à la préparation de médicaments destinés à la prophylaxie ou au traitement des infections microbiennes, avantageusement bactériennes. Ces infections bactériennes peuvent être dues aussi bien à des bactéries Gram positif, telles que Staphylococcus aureus, que des bactéries Gram négatif, telles qu'Escherichia coli. De manière remarquable, les composés selon l'invention peuvent être actifs aussi bien vis-à-vis de souches sensibles, que vis à vis de souches considérées comme résistantes notamment aux aminoglycosides classiques tels que la néamine ou la néomycine. EXEMPLES DE REALISATION

L'invention et les avantages qui en découlent ressortiront mieux des exemples de réalisation suivants. Ceux-ci ne sont cependant en aucun cas limitatifs.

La présente invention va être illustrée plus avant à l'aide des composés 10, 17a, 17b, 31, 32, et 33 suivants :

A partir d'un intermédiaire dans la synthèse du composé 10, un composé de référence 12 a été synthétisé pour mettre en évidence l'importance des substituants R3 et R4 dans les propriétés antimicrobiennes observées :

PARTIE EXPERIMENTALE

/ - Synthèse des composés :

La partie expérimentale ci-après décrit les protocoles de synthèse suivis pour l'obtention de deux dérivés de la glucosamine, ainsi que les caractérisations des nouveaux produits. Le schéma de synthèse est détaillé ci-dessous :

12 : R = H

"Réactifs et conditions : (a) alcool allylique, CH ₃ COCl, reflux, 20 h, quantitatif ; (b) TsCl, pyridine, température ambiante (t. a.), 13 h, 63% ; (c) NaN ₃ , DMF, 80°C, 3 h, 91%; (d) 2NMBr, NaH, DMF, t. a., 48 h, 28% ; (e) KOH, EtOH, reflux ou Ba(OH) ₂ , H ₂ 0, reflux, 8 h, 78% ; (f) TrCl, DMF, Et ₃ N, t. a., 8 h, 82% ; (g) 2NMBr, NaH, DMF, t. a., 10 h, 79% ; (h) Ph ₃ P, THF/H ₂ 0 (19/1), 80°C, 6 h ; (i) TFA/anisole (1/1), 0°C, 3 h ; 0 ^' ) Résine Dowex (Cl ^" ), 62% pour 10, 76% pour 12 (3 étapes).

Les dérivés 2, 3, 4, et 7, sont déjà décrits dans la littérature :

Wong, C.-H; Hendrix, M.; Manning, D.D.; Rosenbohm, C; Greenberg, W.A. A library approach to the discovery of small molécules that recognize RNA: use of 1,3-hydroxyamine motif as core. J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 8319-8327;

Wu, B.; Yang, j.; Robinson, D.; Hofstadler, S.; Griffey, R.; Swayze, E.E.; He, Y. Synthesis of linked carbohydrates and évaluation of their binding for 16S RNA by mass spectrometry. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003, 13, 3915-3918. l-Allyl-6-azido-2,6-didésoxy-2-tritylamino-a-D-glucopyranos ide 8: A une solution du dérivé 7 (0,30 g, 1,23 mmol) dans le DMF (8 mL) et la triéthylamine (0,5 mL) est ajouté une solution de TrCl (1,03 g, 3,68 mmol, 3 équiv) dans le DMF (3 mL) et la triéthylamine (0,5 mL), puis le mélange est agité à température ambiante pendant 8 h sous atmosphère d'argon. Une solution saturée de NH ₄ C1 est ajoutée, puis le mélange est extrait avec de l'acétate d'éthyle (3 x 10 mL). Les phases organiques réunies sont séchées sur MgS0 ₄ , filtrées puis concentrées. Le résidu obtenu est purifié par colonne de chromatographie sur gel de silice (éluant : acétate d'éthyle/cyclohexane 1/3, contenant 0,1% de triéthylamine) pour donner le composé 8 (0,49 g, 82%) sous la forme d'un solide blanc.

Fusion : 128-130°C.

RMN 1H (400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 7,54-7,56 (m, 5H, arom.), 7,23-7,32 (m, 10H, arom.), 5,81 (m, 1H, allyl CH), 5,21 (dd, 1H, J = 4,0, 16,0 Hz, allyl CH ₂ ), 5,13 (dd, 1H, J = 4,0, 12,0 Hz, allyl CH ₂ ), 3,75-3,80 (m, 2H, H-3, OCH ₂ ), 3,60 (m, 1H, H-5), 3,43-3,48 (m, 2H, H-4, H-6), 3,27-3,38 (m, 2H, H-6', OCH ₂ ), 3,07 (d, 1H, J = 4,0 Hz, H-l), 2,96 (dd, 1H, J = 4,0, 12,0 Hz, H-2).

RMN ¹³ C (100 MHz, CDC1 ₃ ) δ 146,7, 134,0 (allyl CH), 129,0, 128,2, 126,9, 117,1 (allyl CH ₂ ), 97,5 (C-l), 73,9 (C-3), 71 ,6 (C-4), 70,4 (C-5, CPh ₃ ), 68,7 (OCH ₂ ), 57,6 (C-2), 51,7 (C-6).

HRMS (ESL ) m/z : [M+K] ⁺ calculée 525,1941, trouvée 525,1931, [M+Na] ⁺ calculée 509,2165, trouvée 509,2164. l-Allyl-6-azido-2,6-didésoxy-3,4-di-0-[(2-naphtyl)méthyl]- 2-tritylamino-a-D- glucopyranoside 9:

A une solution du dérivé 8 (1,22 g, 2,51 mmol) dans le DMF (10 mL) sont ajoutés NaH (0,4 g, 10,04 mmol, 4 équiv) puis le 2-bromométhylnaphthalène (2,22 g, 10,04 mmol, 4 équiv). Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 10 h sous atmosphère d'argon. Une solution saturée de NH ₄ C1 est ajoutée puis le mélange est extrait avec de l'acétate d'éthyle (3 x 30 mL). Les phases organiques réunies sont séchées sur MgS0 ₄ , filtrées puis concentrées. Le résidu obtenu est purifié par colonne de chromatographie sur gel de silice (éluant : acétate d'éthyle/cyclohexane 1/45, contenant 0,1% de triéthylamine) pour donner le composé 9 (1 ,52 g, 79%) sous la forme d'un solide blanc.

Fusion : 118-120°C.

RMN 1H (400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 7,17-8,01 (m, 29H, arom.), 5,80 (m, 1H, CH allyl), 5,70 (m, 1H, CH ₂ naphtyl), 5,18-5,23 (m, 2H, CH ₂ allyl, CH ₂ naphtyl), 5,11-5,14 (m, 2H, CH ₂ allyl, CH ₂ naphtyl), 4,76 (m, 1H, CH ₂ naphtyl), 3,94 (t, 1H, J = 8,0 Hz, H-3), 3,65-3,72 (m, 2H, H-5, OCH ₂ allyl), 3,50 (dd, 1H, J = 8,0, 12,0 Hz, H-4), 3,42 (m, 1H, H-6), 3,14- 3,32 (m, 3H, H-2, H-6, OCH ₂ allyl), 2,71 (d, 1H, J= 4,0 Hz, H-l).

RMN ¹³ C (100 MHz, CDC1 ₃ ) δ 147,4, 136,6, 135,7, 134,2 (CH allyl), 133,6, 133,4, 133,1, 133,0, 129,2, 128,4, 128,3, 128,1, 127,9, 127,8, 126,7, 126,6, 126,3, 126,2, 126,1, 126,0, 125,9, 117,0 (CH ₂ allyl), 97,9 (C-l), 83,4 (C-3), 79,7 (C-4), 77,2 (CH ₂ naphtyl), 75,5 (CH ₂ naphtyl), 70,8 (CPh ₃ ), 70,0 (C-5), 68,8 (OCH ₂ allyl), 58,3 (C-2), 51,6 (C-6).

HRMS (ESI ⁺ ) m/z : [M+Na] ⁺ calculée 789,3417, trouvée 789,3434, [M-N2+Na] ⁺ calculée 761,3353, trouvée 761,3339. l-Allyl-2,6-diamino-2,6-didésoxy-3,4-di-0-[(2-naphtyl)méth yl]-a-D-glucopyranoside

10 :

A une solution du composé 9 (0,41 g, 0,53 mmol) dans un mélange THF/H ₂ 0 (19/1) est ajouté de la triphénylphosphine (0,21 g, 0,80 mmol, 1,5 équiv), puis le mélange est chauffé à 80°C pendant 8 h. Après concentration, le résidu est purifié par colonne de chromatographie sur gel de silice (éluant : acétate d'éthyle/cyclohexane 1/4, contenant 0,1%) de triéthylamine) pour donner le composé réduit en position 6.

Celui-ci est traité avec un mélange TFA/anisole (1/1) pendant 3 h à 0°C sous atmosphère d'argon, puis le mélange est co-évaporé 3 fois avec du toluène. Le résidu obtenu est lavé avec du diéthyléther sec (3 x 5 mL) pour donner un composé jaune. Celui-ci est purifié par chromatographie sur une colonne de résine échangeuse d'ions (Dowex Cl ^" ) dans le méthanol, pour donner le composé 10 (0,19 g, 62%> pour les 3 étapes) sous la forme d'un solide jaunâtre. Fusion : 183-185°C.

RMN 1H (400 MHz, CD ₃ OD, chorhydrate) δ 7,34-7,81 (m, 14H, arom.), 6,03 (m, 1H, CH allyl), 5,43 (m, 1H, CH ₂ allyl), 5,32 (m, 1H, CH ₂ allyl), 5,21 (d, 1H, J = 4,0 Hz, H-l), 5,07 (dd, 2H, CH ₂ naphtyl), 4,91 (dd, 2H, CH ₂ naphtyl), 4,37 (dd, 1H, J = 8,0, 12,0 Hz, OCH ₂ allyl), 4,20 (dd, 1H, J = 8,0, 12,0 Hz, OCH ₂ allyl), 4,06-4,15 (m, 2H, H-3, H-5), 3,70 (t, 1H, J = 8,0 Hz, H-4), 3,57 (dd, 1H, J = 4,0, 12,0 Hz, H-2), 3,35-3,40 (m, 1H, H-6), 3,08-3,11 (m, 1H, H-6).

RMN ¹³ C (100 MHz, D ₂ 0) δ 136,7, 136,3, 134,8, 134,7, 134,6 (CH allyl), 134,5, 129,4, 129,2, 129,1, 128,8, 127,7, 127,4, 127,3, 127,2, 126,8, 126,7, 119,5 (CH ₂ allyl), 96,4 (C-l), 81,5 (C-4), 79,5 (C-3), 76,5 (OCH ₂ naphtyl), 76,4 (OCH ₂ naphtyl), 70,8 (OCH ₂ allyl), 69,8 (C-5), 54,9 (C-2), 41,8 (C-6).

HRMS (ESI ⁺ ) m/z : [M+Na] ⁺ calculée 521,2416, trouvée 521,2404, [M+H] ⁺ calculée 499,2597, trouvée 499,2594.

Analyse élémentaire pour C ₃ iH ₃₆ N ₂ 0 ₄ +l,5 H ₂ 0 : calculée C 62,20, H 6,57, N 4,68 ; trouvée C 62,44, H 6,30, N 4,88. l-Allyl-6-amino-2,6-didésoxy-2-tritylamino-a-D-glucopyranos ide 11 :

A une solution du composé 8 (0,22 g, 0,45 mmol) dans un mélange THF/H ₂ 0 (19/1) est ajouté de la triphénylphosphine (0,15 g, 0,59 mmol, 1,3 équiv), puis le mélange est chauffé à 80°C pendant 6 h. Après concentration, le résidu est purifié par colonne de chromatographie sur gel de silice (éluant : méthanol/acétate d'éthyle 1/9 à 1/1, contenant 0,1% de triéthylamine) pour donner le composé 11 (0,19 g, 91%>) sous la forme d'un solide blanc.

Fusion : 139-14FC.

RMN 1H (400 MHz, CD ₃ OD) δ 7,66-7,69 (m, 5H, arom.), 7,15-7,27 (m, 10H, arom.), 5,85 (m, 1H, CH allyl), 5,25 (dd, 1H, J = 4,0, 16,0 Hz, CH ₂ allyl), 5,12 (m, 1H, CH ₂ allyl), 3,84 (dd, 1H, J= 4,0, 12,0 Hz, OCH ₂ ), 3,74 (t, 1H, J= 8,0, 12,0 Hz, H-3), 3,58 (m, 1H, H-5), 3,24 (m, 2H, H-6, OCH ₂ ), 3,15 (m, 1H, H-4), 2,90 (dd, 1H, J = 4,0, 12,0 Hz, H-6), 2,87 (d, 1H, J = 4,0 Hz, H-l), 2,75 (dd, 1H, J = 4,0, 12,0 Hz, H-2).

RMN ¹³ C (100 MHz, CD ₃ OD) δ 148,7, 135,5 (CH allyl), 130,3, 129,0, 127,6, 1 17,0 (CH ₂ allyl), 99,4 (C-l), 74,5 (C-3), 73,8 (C-4), 71 ,7 (CPh ₃ ), 69,8 (OCH ₂ ), 69,3 (C-5), 59,2 (C- 2), 42,4 (C-6).

HRMS (ESI ⁺ ) m/z: [M+Na] ⁺ calculée 483,2260, trouvée 483,2260, [M+H] ⁺ calculée 461 ,2440, trouvée 461 ,2442. l-Allyl-2,6-diamino-2,6-didésoxy-a-D-glucopyranoside 12

Une solution du composé 11 (0, 1 1 g, 0,24 mmol) dans un mélange TFA/anisole (1/1) est agitée pendant 6 h à 0°C sous atmosphère d'argon. Le mélange est co-évaporé 3 fois avec du toluène, puis le résidu est lavé avec du diéthyléther sec (3 x 5 mL). L'huile obtenue est purifiée par chromatographie sur une colonne de résine échangeuse d'ions (Dowex Cl ^" ) dans l'eau, pour donner le composé 12 (0,06 g, 84% pour les 2 étapes) sous la forme d'une huile jaune.

RMN 1H (400 MHz, D ₂ 0) δ 5,96 (m, 1H, CH allyl), 5,36 (dd, 1H, J = 4,0, 16,0 Hz, CH ₂ allyl), 5,28 (dd, 1H, J = 4,0, 12,0 Hz, CH ₂ allyl), 5,21 (d, 1H, J = 4,0 Hz, H-l), 4,26 (m, 1H, OCH ₂ ), 4,10 (m, 1H, OCH ₂ ), 3,85-3,93 (m, 2H, H-4, H-5), 3,36-3,46 (m, 3H, H-2, H- 3, H-6), 3, 16 (dd, 1H, J = 4,0, 12,0 Hz, H-6).

RMN ¹³ C (100 MHz, D ₂ 0) δ 133,0 (CH allyl), 1 18,7 (CH ₂ allyl), 94,3 (C-l), 71 , 1 (C-3), 69,4 (C-4), 69,0 (OCH ₂ allyl), 68,0 (C-5), 53,6 (C-2), 40,2 (C-6).

HRMS (ESI ⁺ ) m/z : [M+H] ⁺ calculée pour C ₉ Hi ₈ N ₂ 0 ₄ 219,1345, trouvée 219, 1353.

Le composé de référence 12 dans les tests antimicrobiens a été synthétisé à partir de l'intermédiaire 7 dans la synthèse précédente : Synthèse des composés 17a et 17b

Réactifs et conditions : (a) a : C ₉ Hi ₉ Br, toluène, TBAF, NaOH _aq 50% ; b : NaH, DMF, 2NPBr, 50 °C, 20 h, quantitatif ; (b) (tBuOCO) ₂ 0, DMAP, THF, 45 °C, 6 h ; (c) (CH ₃ 0 ^~ , Na ⁺ )/CH ₃ OH, t. a., 6 h ; (d) PPh ₃ , THF/H ₂ 0, t. a., 4 h ; (f) TFA, DCM, t. a, 4 h.

Etape a : obtention des composés 13a et 13b

Composé 13a

Une solution du composé 4 (1,0 g) dans le toluène (20 mL) et une solution aqueuse de NaOH à 50% (10 mL) sont agitées à 45°C en présence de 1,65 g de TBAF (1,5 eq) et 14 mL de 1-bromononane (2 eq). Après 16 h, de l'acétate d'éthyle (20 mL) est ajouté à la solution refroidie. Après extraction, la phase organique est récupérée et la phase aqueuse est reprise avec de l'acétate d'éthyle (3 x 20 mL). Les phases organiques réunies sont séchées sur MgSC^, filtrées puis concentrées. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant : acétate d'éthyle/cyclohexane de 1/5 à 2/3) pour donner le composé 13a (1,08 g, 57 %) sous la forme d'un solide blanc.

Composé 13b

Une solution du composé 4 (1,0 g) dans le DMF (40 mL) est agitée à température ambiante en présence de NaH (0,42 g à 60 % dans l'huile) et de 2-(3- bromopropyl)naphtalène (1,73 g, 2 eq). Après 16 h, du toluène et du méthanol sont ajoutés et la solution est évaporée. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant acétate d'éthyle/cyclohexane de 1/5 à 2/3) pour donner le composé 13b (0,64 g, 28 %) sous forme d'un solide blanc.

Etape b, obtention des composés 14a et 14b

composé 14a composé 14b

Une solution du composé 13a (0,15 g) ou 13b (0.14 g), de DMAP (0,033 g) et de d'anhydride de t-butyloxycarbonyle (0,067 g) dans le THF anhydre (6 mL) est chauffée sous agitation pendant 2 h à 45 °C. Deux fractions de DMAP (0,033 g) et d'anhydride (0,067 g) sont successivement ajoutées à intervalle de 2 h. Après chauffage du mélange à 45 °C pendant 6 h au total, le mélange est ensuite dilué avec du dichlorométhane (20 mL) puis lavé plusieurs fois avec de l'eau jusqu'à neutralité de la phase aqueuse (4 x 30 mL). La phase organique est séchée sur MgS0 ₄ , filtrée puis concentrée. Les résidus obtenus sont purifiés par chromatographie sur gel de silice (éluant : acétate d'éthyle/cyclohexane de 1/19 à 1/9) pour donner sous forme de solides blancs les composés 14a (0,134 g, 77 %) et 14b (0,14 g, 86 %).

Etape

Les composés 14a (0,122 g) et 14b (0,138 g) sont respectivement dissous dans une solution de méthanolate de sodium (0,03 g) dans le méthanol anhydre (5 mL). Après agitation à température ambiante pendant 2 h, deux autres fractions de méthanolate (0,03 g) sont ajoutées à intervalle de 2 h. Après 6 h d'agitation au total, le mélange est concentré et dilué avec du dichlorométhane (20 mL). La solution est ensuite lavée plusieurs fois avec de l'eau (3 x 30 mL). La phase organique est séchée sur MgS0 ₄ , filtrée puis évaporée à sec pour donner les composés 15a (0,095 g) et 15b (0,125 g). Etape d, obtention des composés 16a et 16b

composé 16a composé 16b

Une solution du composé 16a (0,093 g) ou 16b (0,1 g) et de triphenylphosphine (3 eq par fonction azide à réduire) dans un mélange THF/eau (3: 1, 4 mL) est agitée pendant 4 h à température ambiante. La solution est ensuite évaporée à sec. Le résidu obtenu est ensuite chromatographié sur gel de silice (éluant : acétate d'éthyle/cyclohexane 1/9) pour obtenir le composé 16a (0,085 g, rendement pour les étapes c et d : 81 %) et le composé 16b (0,083 g, rendement pour les étapes c et d :83 %) sous forme de résidus jaunes.

Etape e, obtention des composés 17a et 17b

composé 17a composé 17b

Les composés 16a (0,074 g) et 16b (0,073 g) sont respectivement agités dans un mélange dichlorométhane/acide trifluoroacétique (TFA) (2/3, 5 mL) pendant 4 h à température ambiante. Les solutions sont ensuite évaporées à sec puis les résidus sont dissous dans l'eau (20 mL). La phase aqueuse est ensuite lavée avec de l'éther éthylique (3 x 20 ml). Les phases organiques sont réunies et extraites une fois avec de l'eau (20 mL). Les phases aqueuses sont réunies et évaporées à sec pour donner les composés 17a (0,09 g, 97 %) et

17b (0,085 g, 98 %) sous forme de gommes transparentes très hygroscopiques.

RMN 1H

2' 2'

composé 17a composé 17b 17a : δ ,04-5,94 (m, IH, H-2'), 6,04-5,94 (m, 1Η, H-2'.), 5,38 (dd, 1Η, J = 1 ,45 Hz, J ₂ = 17,3 Hz, H-3'), 5,27 (dd, 1Η, J = 1 ,0 Hz, J ₂ = 10,8 Hz, H-3'), 5,13 (d, 1Η, J= 3,3 Hz, H- 1), 5,56 (dd, IH, J = 5,6 Hz, J ₂ = 12,5 Hz, H-1 '), 4,09 (dd, 1Η, J = 6,5 Hz, J ₂ = 12,5 Hz, H-1 '), 3,89-3,76 (m, 3Η, H-1 " H-5), 3,72-3,65 (m, 2Η, H-1 " H-3), 3,59 (td, 1Η, J = 6,9 Hz, J ₂ = 8,8 Hz, H-1 "), 3,35-3,27 (m, 2Η, H-6 H-2), 3,22 (t, 1Η, J= 9,3, H-4), 3,11 (dd, 1Η, J = 9,6 Hz, J ₂ = 12, 9 Hz, H-6), 1,69-1,56 (m, 4Η, H-2"), 1,33-1,28 (m, 24 Η, H- 3"), 0,91-0,88 (m, 6H, H-4").

17b : δ 7,76-7,18 (m, 14Η, H-napht), 6,05-5,95 (m, 1Η, H-2'.), 5,39 (dd, 1Η, J = 1,5 Hz, J ₂ = 17,3 Hz, H-3'), 5,28 (dd, 1Η, J = 1,0 Hz, J ₂ = 10,8 Hz, H-3'), 5,13 (d, 1Η, J = 3,1 Hz, H-1), 4.31 (dd, 1Η, J = 5,5 Hz, J ₂ = 12,6 Hz, H-1 '), 4,10 (dd, 1Η, J = 6,3 Hz, J ₂ = 12,6 Hz, H-1 '), 3,88-3,78 (m, 2Η, H-1 " H-5), 3,72-3,65 (m, 3Η, H-1 " H-3), 3,54 (td, 1Η, Ji = 6,7 Hz, J ₂ = 9,0 Hz, H-1 "), 3,33-3,29 (m, 2Η, H-6 H-2), 3,23 (t, 1Η, J= 9,47, H-4), 3,09 (dd, 1Η, J = 9,5 Hz, J ₂ = 12,9 Hz, H-6), 2,71 (t, 2Η, J= 7,5 Hz, H-3"), 2,63 (t, 2Η, J= 7,6 Hz, H-3"), 2,00-1,93 (m, 2Η, H-2"), 1,81-1,73 (m, 2Η, H-2").

Réactifs et conditions : (a) mCPBA, DCM, t. a., 24 h ; (b) NaN ₃ , DMF, 60 °C, 24 h ou éthano lamine, 45 °C, 16 h ou 1,3-diaminopropane, 16 h, 45 °C; (c) (tBuOCO) ₂ 0, DMAP, THF, 45 °C, 16 h ; (d) (CH ₃ 0 ^~ , Na ⁺ )/CH ₃ OH, t. a., 8 h ; (e) PPh ₃ , THF/H ₂ 0, t. a., 6 h ; (f) TFA, DCM, t. a., 4 h.

Etape a, composé 18 A une solution du composé 13a (0,9 g) dans le dichlorométhane anhydre (25 mL) est ajouté 3 fois toutes les 8 h du mCPBA (0,38 g, 3 x 1,3 eq). Après agitation pendant 24 h à température ambiante, du dichlorométhane est ajouté (15 mL) et le mélange est lavé avec une solution aqueuse de NaOH à 5% (30 mL) puis avec de l'eau (2 x 30 mL). La phase organique est séchée sur MgSC^, filtrée puis évaporée à sec pour donner le mélange 18 de deux diastéréoisomères a et b (en proportion 2: 1) sous forme d'un solide opaque

(0,880 g).

RMN 1H (400 MHz, CDC1 ₃ ), 18a+b :

δ 5,70 (d, 0,66H, J= 9,6 Hz, NHaAc), 5,66 (d, 0,33H, J= 9,6 Hz, NHôAc), 4,80-4,78 (m, 1Η, H-l), 4,01 (dd, 0,33H, J _; = 2,5 Hz J ₂ = 1 1,4 Hz, H-l 'b), 3,84-3,69 (m, 3,7H, H-5 H- l 'a H-l "), 5,6 (dd, 0,66H, J _; = 6,0 Hz J ₂ = 11,9 Hz, H-l 'a), 3,56-3,46 (m, 3Η, H-6 H- 1 "), 3,44-3,23 (m, 3,33H, H-3 H-4 H-6 H-l 'b), 3,21-3,15 (m, 1Η, H-2'), 2,87-2,81 (m, 1Η, H-3'), 2,66 (dd, 0,66H, J _; = 2,7 Hz J ₂ = 4,9 Hz, H-3 'a), 2,60 (dd, 0,33H, J _; = 2,7 Hz J ₂ = 4,8 Hz, H-3'b), 2,02 (s, 3Η, CH ₃ ), 1,57-1 ,48 (m, 4Η, H-2"), 1,35-1,21 (m, 24Η, H- 3"), 0,90-0,86 (m, 6H, H-4").

Etape b

Composé 19

Une solution du composé 18 (0,1 g) de NaN ₃ (0,18 g, 15 eq) dans le DMF anhydre (10 mL) est agitée à 60 °C pendant 24 h. Après addition de dichlorométhane (20 mL), le mélange est lavé avec de l'eau (2 x 30 mL). La phase organique est séchée sur MgSC^, filtrée puis concentrée pour donner le composé 19 sous forme d'un résidu jaune (0,094 g).

Composé 20

Une solution du composé 18 (0,1 g) dans l'éthano lamine (20 mL) est agitée pendant 16 h à 45 °C. Après addition d'eau (20 mL), la solution est extraite 4 fois avec de l'acétate d'éthyle (4 x 20 mL). Les phases organiques sont réunies et lavées avec de l'eau (2 x 20 mL). Les phases aqueuses sont ensuite lavées avec de l'acétate d'éthyle (2 x 20 mL). Les phases organiques sont ensuite réunies et évaporées à sec pour donner le composé 20 sous forme d'un résidu jaune (0,1 1 g).

Composé 21

Une solution du composé 18 (0,1 g, 0,18 mmol) dans le 1,3-diaminopropane (10 mL) est agité pendant 16 h à 45 °C puis évaporée. Après addition d'acétate d'éthyle (20 mL), la solution est lavée avec de l'eau (3 x 20 mL). Les phases aqueuses sont réunies et lavées avec de l'acétate d'éthyle (2 x 20 mL). Les phases organiques sont ensuite réunies et évaporées à sec pour donner le composé 21 sous forme d'un résidu jaune (0,1 12 g).

Etape c, composés 22-24

composé 22 composé 23 composé 24

Une solution du composé 19 (0,094 g) ou 20 (0.11 g) ou 21 (0,1 1 g), de DMAP (0,030 g) et d'anhydride de t-butyloxycarbonyle (0,067 g) dans du THF anhydre (6 mL) est chauffée sous agitation pendant 2 h à 45 °C. Deux fractions de DMAP (0,033 g) et d'anhydride (0,067 g) sont successivement ajoutées à intervalle de 2 h. Après chauffage du mélange à 45 °C pendant 6 h au total, le mélange est ensuite dilué avec du dichlorométhane (20 mL) puis lavé plusieurs fois avec de l'eau jusqu'à neutralité de la phase aqueuse (4 x 30 mL). La phase organique est séchée sur MgS0 ₄ , filtrée puis concentrée. Les résidus obtenus sont purifiés par chromatographie sur gel de silice (éluant : acétate d'éthyle/cyclohexane de 1/19 à 1/9) pour donner les composés 22, 23 et 24 sous forme de résidus jaunes (respectivement, 0,078 g, 0,030 g, 0,060 g, rendement pour les étapes a, b et c : 60, 23 et 39 %). Etape d, composés 25-27

composé 25 composé 26 composé 27

Les composés 22 (0,078 g), 23 (0,030 g) et 24 (0,060 g) sont respectivement dissous dans une solution de méthanolate de sodium (0,03 g) dans du méthanol anhydre (5 mL). Après agitation à température ambiante pendant 2 h, deux autres fractions de méthanolate (0,03 g) sont ajoutées à intervalle de 2 h. Après 6 h d'agitation au total, le mélange est concentré et dilué avec du dichlorométhane (20 mL). La solution est ensuite lavée plusieurs fois avec de l'eau (3 x 30 mL). La phase organique est séchée sur MgSC^, filtrée puis évaporée à sec pour donner les composés 25 (0,059 g), 26 (0,021 g) et 27 (0,34 g).

composé 28 composé 29 composé 30

Une solution du composé 25 (0,059 g), 26 (0,021 g) ou 27 (0,034 g) et de triphenylphosphine (3 eq par fonction azide à réduire) dans un mélange THF/eau (3: 1, 4 mL) est agitée pendant 4 h à température ambiante. La solution est ensuite évaporée à sec. Le résidu obtenu est chromatographié sur gel de silice (éluant : acétate d'éthyle/cyclohexane 1/9) pour obtenir les composés 28, 29 et 30 sous forme de résidus jaunes (respectivement, 0,055 g, 0,017 g, 0,032 g, rendement pour les étapes d et e : 79, 62 et 58 %).

Etape f, obtention des composés 31-33

composé 31 composé 32 composé 33 Les composés 28 (0,055 g), 29 (0,017 g) et 30 (0,032 g) sont respectivement agités dans un mélange dichlorométhane/acide trifluoroacétique (TFA) (2/3, 5 mL) pendant 4 h à température ambiante. Les solutions sont ensuite évaporées à sec puis les résidus sont dissous dans l'eau (20 mL). La phase aqueuse est ensuite lavée avec de l'éther éthylique (3 x 20 ml). Les phases organiques sont réunies et extraites une fois avec de l'eau (20 mL). Les phases aqueuses sont réunies et évaporées à sec pour donner en mélange R/S les composés 31 (0,073 g, 92 %), 32 (0,020 g, 96 %) et 33 (0,039 g, 99 %) sous forme de gommes très hygroscopiques.

composé 31 composé 32 composé 33

31 : δ 5,13 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 3,95-3,53 (m, 9H, H-3 H-5 H-l ' H- H-l "), 3,35-3,29 (m, 2Η, H-2 H-6), 3,25-3,18 (m, 2Η, H-4 H-3'), 3,11 (dd, 1Η, J = 9,5 Hz J ₂ = 13,0 Hz, H-6), 3,01 (dd, lH, Ji = 10,0 Hz J ₂ = 11 ,8 Hz, H-3'), 1,70-1,56 (m, 4Η, H-2"), 1,33-1,28 (m, 24Η, H-3"), 0,92-0,88 (m, 24Η, H-4").

32 : δ 5,13 (d, 1H, J= 3,3 Hz, H-l), 3,96-3,52 (m, 1 1Η, H-3 H-5 H-l ' H-2' H-l "), 3,36- 3,03 (m, 8Η, H-2 H-4 H-6 H-3' H-4'), 1,70-1,56 (m, 4Η, H-2"), 1,33-1,28 (m, 24Η, H- 3"), 0,92-0,88 (m, 6H, H-4").

33 : δ 5,13 (d, 1Η, J = 3,4 Hz, H-l), 3,95-3,50 (m, 9Η, H-3 H-5 H-l ' H-2' H-l "), 3,36- 3,29 (m, 2Η, H-2 H-6), 3,27-2,95 (m, 8Η, H-4 H-6 H-3' H-4' H-6'), 3,13 (q, 2Η, J= 7,1 Hz, H-5'), 1,70-1,56 (m, 4Η, H-2"), 1,33-1,28 (m, 24Η, H-3"), 0,92-0,88 (m, 6Η, H- 4").

77 - Activité antibactérienne 1/ Molécules testées:

Les molécules sont mises en solution dans l'eau ou le DMSO à une concentration de 5 ou 10 mg/ml, puis les solutions sont diluées si nécessaire. Pour chacune d'elle un volume de 200 μΐ est disposé en plaque de 96 puits. 2/ Souches testées:

Les souches suivantes servent au test de l'activité antimicrobienne :

- Staphylococcus aureus ATCC25923 = gram (+), souche clinique sensible ;

- Staphylococcus aureus 1199B (Pump NorA) = gram (+), souche clinique mutante surexprimant une pompe d'efflux NorA de la famille MFS, résistante aux fluoroquinolones, dont la ciprofloxacine ;

- Staphylococcus aureus RN4220/pUL5054 (Pump MsrA) = gram (+), souche surexprimant le transporteur ABC MrsA, contenant le plasmide multicopies pUL5054 porteur du gène msr(A) : EryR.

- Staphylococcus aureus APH2"-AAC6' = gram (+), souche résistante, capable de modification enzymatique des aminosides en position 2" et 6': résistance enzymatique par action de l'aminoglycoside-6'-N-acétyltransférase/2"-O- phosphoryltransférase surexprimée ;

- Staphylococcus aureus APH3' = gram (+), capable de modification enzymatique des aminosides : résistance enzymatique par action de raminoglycoside-3'-0- phosphoryltransférase surexprimée ;

- Staphylococcus aureus ANT4' = gram +, souche résistante, capable de modification enzymatique des aminosides : résistance enzymatique par action de raminoglycoside-4'-0-phosphoryltransférase surexprimée ;

S. aureus ATCC33592 HA-MRSA : gram (+) résistant à la méthicilline ;

S. aureus VRSA-VRS-2 : gram (+) résistant à la vancomycine

- A. Iwoffi ATCC 17925 : = gram (-), souche sensible ;

- E. coli 25922 : = gram (-), souche sensible ;

E. coli 25922 AAC6'-IB : = gram (-), souche capable de modification enzymatique des aminosides : résistance enzymatique par action de l'aminoglycoside-6'-O-acétyltransférase surexprimée ;

- E. coli arm : = gram (-), souche clinique capable de résistance enzymatique aux aminoglycosides par action de l'enzyme méthyltransférase sur son propre ARN ribosomal ;

Pseudomonas. aeruginosa ATCC 27853, Psa.F03 = Gram (-)

Pseudomonas aeruginosa PsaF03 AAC6'-IIA et Pseudomonas aeruginosa PA22 surexpMexXY = gram (-) surexprimant respectivement une enzyme de résistance aux aminoglycosides et des pompes d'efflux. 3/ Tests microbiologiques:

A- Validation des souches

Avant d'être utilisée, chaque souche est testée individuellement quant à son profil de résistance antibiotique. Cela signifie que pour chaque souche, la CMI (concentration minimale inhibitrice) d'un ou plusieurs antibiotiques de référence est testée, afin de s'assurer de la stabilité phénotypique de la bactérie.

B- Détermination de la CMI

Dans le cas des souches de S. aureus, la solution de la molécule sélectionnée est diluée d'un facteur de 2 en 2 dans des plaques de 96 puits de manière à couvrir une large gamme de concentration. A chacun de ces puits est ajouté un volume d'inoculum constitué de la préculture de la souche bactérienne diluée au l/100 ^eme . Chaque puits est doublé. Là encore, des témoins de non contamination, de croissance, et de résistance/sensibilité à un antibiotique de référence sont intégrés à l'expérience. La plaque est mise à incuber à 37°C, et la cinétique de prolifération bactérienne est suivie sur 24 heures, avec des mesures de DO620nm à 0, 1, 4, 7, et 24 heures. A partir de ces valeurs, la concentration mimimale inhibitrice (CMI) est déterminée : la CMI est la concentration la plus faible trouvée capable d'inhiber la prolifération bactérienne après 24 heures d'incubation. N'ayant pas d'idée a priori de cette valeur, il est possible que celle-ci ne se trouve pas dans la gamme de dilution choisie. Il est alors nécessaire de réitérer l'opération en ajustant cette gamme.

Dans le cas des souches de A. Iwoffi et de E. coli, la CMI a été déterminée par des microdilutions géométriques en accord avec les recommandations des normes CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute. Methods for dilution antimicrobial susceptibility test for bacteria that grow aerobically . Approved standards M7-A7 and 17 ^th informational supplément M100-S17; CLSI: Wayne, PA, 2007, vol 27, n°l .).

RESULTATS

Les effets antibiotiques ont donc été mesurés en termes de concentrations minimales inhibitrices de la croissance bactérienne (CMI) sur différentes bactéries Gram positif S. aureus, résistantes ou non.

Les résultats de CMI, exprimées en microgrammes/mL, sont présentés dans les tableaux I à IV ci-dessous pour les composés 10, 17a, 17b, 31, 32 et 33 représentatifs de l'invention et le composé de référence 12 choisi dans le tableau suivant et sont à comparer avec celles de la néomycine B et de la néamine.

Molécule testée Enzyme

ATCC Pump Pump Enzyme Enzyme

APH2 ' '

25923 NorA MsrA APH3 ' AN 4 '

-AAC6'

Néomycine B 2 1 2 1 >128 32

Néamine 32 32 16 16 >128 >128

Composé selon g 4 4 g 4 4

l ' invention 10

Composé de

>128 >128 >128 >128 >128 >128 référence 12

Tableau I : Concentrations minimales inhibitrices (CMI) en microgrammes/mL contre différentes souches de Staphylococcus aureus sauvage ou surexprimant des pompes d'efflux ou des enzymes de résistances aux aminoglycosides

Tableau II : Concentrations minimales inhibitrices (CMI) en microgrammes/mL contre différentes souches de Staphylococcus aureus sauvage ou résistant à la méthicilline ou la vancomycine (nd : non déterminée) Molécule testée A. Iwoffi E. coli E . coli E . coli ATCC 17925 25922 AAC6' -IB arm

Néomycine B 2 4 1

Composé selon

64 16 64 l'invention 10

Composé de >12i

>12i >12E >12i référence 12

Tableau III : Concentrations minimales inhibitrices (CMI) en microgrammes/mL différentes souches de bactéries Gram (-)

Tableau IV: Concentrations minimales inhibitrices (CMI) en microgrammes/mL différentes souches de bactéries Gram (-)

Les composés selon l'invention, en particulier les composés 10 et 33 s'avèrent être de bons agents antibactériens contre des bactéries Gram (+) voire Gram (-). Ces résultats montrent en outre l'importance de la présence des substituants portés en positions 3 et 4 pour obtenir une activité antimicrobienne. REFERENCES

Moazed, D.; NoUer, H. F. Interaction of antibiotics with functional sites in 16S ribosomal R A. Nature 1987, 327, 389-394.

Baussanne, I.; Bussière, A. ; Halder, S.; Ganem-Elbaz, C; Ouberai, M.; Riou, M. ; Paris, J.-M.; Ennifar, E. ; Mingeot-Leclercq, M. -P. ; Décout, J.-L. Synthesis and antimicrobial évaluation of amphiphilic neamine derivatives. J. Med. Chem. 2010, 59, 119-127.