La présente invention concerne essentiellement une com¬ position à base de phases lamellaires lipidiques hydratées ou de liposomes contenant de la pregnenolone ou un ester de pregnenolone.

L'invention trouve notamment application dans Le domaine cosmétique oupharmaceutique, notamment dermatologique,pour la réalisation de compositions à activité régénératrice ou revitalisante.

Les stéroîdes ont déjà été utilisés pour la prépara¬ tion de compositions pharmaceutiques ou cosmétiques destinées au traitement de la peau. Les brevets US 2791 534 et GB 768 129, par exemple, révèlent l'utilisation des stéroîdes comme agents à activité antiride.

L'effet des hormones sur la peau a été plus particuliè¬ rement étudié et, dans l'article publié dans J. Soc. Cosmetic Chemists, volume 18, pages 549 à 562 (19 août 1967), on indique que la testos- térone produit un effet de rajeunissement sur la peau, et que la progestérone et la pregnenolone, intermédiaires dans la biosynthèse de la testostérone, produisent un effet semblable, mais à un degré bien moindre, et particulièrement faible dans le cas de la pregneno¬ lone.

C'est pourquoi la pregnenolone, libre ou sous forme d'ester, a souvent été utilisée, pour le traitement de la peau, en combinaison avec d'autres agents actifs.

Ainsi, le brevet US 4474763 décrit une composition antiride contenant de la pregnenolone et de l'élastine, qui est une protéine de la peau connue pour son activité antiride. De même, le brevet US 3 326 901 révèle une composition à action anti-irritante et antidéshydratante contenant de la pregne¬ nolone et de l'allantoïne.

L'effet antidéshydratant sur la peau de la pregneno¬ lone a été également mentionné plus récemment dans La demande de brevet français n° 2 405 069. Dans cette demande, il est proposé une composition pharmaceutique hormonale contenant un oestrogène hydro-

soLuble (oestrone), un oestrogène liposoluble (oestradiol), un androgène (la testostérone) et, éventuellement, de la pregnenolone pour donner un effet antidéshydratant à la composition. Selon l'auteur de cette demande de brevet, seules Les hormones sexuelles, hormones mâles et hormones femelles, sont capables de prévenir les phénomènes de détérioration de La peau dus à L'action conjointe de L'âge et des agressions climatiques et, par contre, il est indiqué que la pregne¬ nolone ne joue aucun rôle dans Les processus de restauration cutanée. L'analyse de L'art antérieur montre donc que l'uti- lisation de La pregnenolone ou d'un ester de pregnenolone seul, dans le traitement de la peau, a toujours été Limitée en raison de La très faible activité de cette substance.

Par ailleurs, on connaît déjà L'emploi de phases lamel¬ laires Lipidiques hydratées ou de liposomes dans des compositions pharmaceutiques ou des compositions cosmétiques, dans lesquelles on incorpore divers principes actifs (FR-A-2 521 565).

Il a maintenant été découvert, de manière tout à fait surprenante et inattendue, que la pregnenolone ou ses esters avaient, sur La peau et les phanères, une activitér^énérΞrics et revitalisante exacerbée, Lorsque cette substance était au moins en partie incorporée dans une phase Lamellaire Lipidique hydratée ou dansdes Liposomes. On a en particulier constaté une amélioration tout à fait remarquable de L'activité de La pregnenolone sur la synthèse des protéines.

On peut ainsi en déduire en quelque sorte un effet de potentialisation de L'activité de La pregnenolone ou des esters de la pregnenolone dans des phases lamellaires lipidiques hydratées ou dans des Liposomes.

Ainsi, La présente invention a pour effet de résoudre Le nouveau problème technique consistant en La fourniture d'une nou- velle formulation de La pregnenolone ou d'un ester de pregnenolone, permettant de potentialiser Leur efficacité pour permettre Leur uti¬ lisation dans des compositions cosmétiques ou pharmaceutiques, notam¬ ment dermatologiques, à activité régénératrice ou revitalisante.

Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention fournit une composition à base de phases lamellaires lipidiques

hydratées ou de Liposomes, caractérisée en ce que lesdites phases Lamellaires lipidiques hydratées ou lesdits Liposomes contiennent au moins en partie de La pregnenolone ou un ester de pregnenolone, de préférence L'acétate, Le sulfate ou Le palmitate de pregnenolone. Selon un autre mode de réalisation avantageux de

L'invention, La composition précitée est caractérisée en ce que Les phases Lamellaires Lipidiques hydratées précitées ou les liposcmes con¬ tiennent en outre au moins en partie un stérol, de préférence le^-sitostérol.

Plus particulièrement, Le stérol est incorporé dans La phase Lipidique des phases Lamellaires lipidiques hydratées ou des liposomes à une concentration en poids comprise entre environ 1 % et 20 %, et de préférence égale à 10 % environ.

SeLon une variante de réalisation de cette composition, celle-ci est caractérisée en ce que la pregnenolone ou l'ester de pregnenolone, seul ou en mélange avec le stérol, est introduit dans la phase Lipidique des phases Lamellaires Lipidiques hydratées ou des Liposomes.

Plus particulièrement, la concentration en pregnenolone ou en ester de pregnenolone est comprise entre environ 0,05 '/. et 20 %, de préférence entre environ 1 % et 15 / '., et de préférence encore entre environ 1 % et 5 X en poids de Ladite phase Lipidique, de sorte que La somme des concentrations dans cette phase en pregnenolone ou en ester de pregnenolone d'une part et en stérol, s'il y est présent, d'autre part ne dépasse pas environ 25 7. et de préférence environ 20 / '..

SeLon une autre variante de réalisation de cette compo¬ sition, celle-ci est caractérisée en ce que L'ester de pregnenolone est introduit dans La phase aqueuse des phases Lamellaires lipidiques hydratées ou des Liposomes. Dans ce cas, bien entendu, La solubilité dans L'eau dudit ester devra être telle que L'on puisse obtenir au moins La concentration souhaitée dans Lesdites phases Lamellaires ou lesdits Liposomes.

Plus particulièrement, la concentration de L'ester de prégnénoLone est comprise entre environ 0,001 % et 5 %, et de préfé- rence entre environ 0,01 % et 2 % en poids de Ladite phase aqueuse.

L'incorporation de La prégnénoLone ou de ses esters, et éventuelLement du stérol, dans Les phases Lamellaires Lipidiques

hydratées ou dans Les Liposomes selon l'invention, peut être effectuée selon des procédés connus. Ceux-ci sont choisis plus particulièrement en fonction du caractère plus ou moins lipophile ou hydrophiLe du composé à incorporer. SeLon un mode préféré de réalisation de La composition à base de phases Lamellaires lipidiques hydratées ou liposomes selon L'invention, on choisit une technique de préparation décrite dans Le document FR-A-2521 565, éventuellement en combinaison avec une technique décrite dans Le document FR-A-2 534587. Selon un deuxième aspect, La présente invention con¬ cerne aussi une composition cosmétique ou pharmaceutique, notamment dermatologique, à activité régénératrice ou revitalisante, caracté¬ risée en ce qu'elle comprend une composition à base de phases lamel- Laires lipidiques hydratées ou de liposomes, telle que précédemment définie.

De préférence, la proportion en poids de La prégné¬ noLone ou de l'ester de prégnénoLone est comprise entre environ 0,0005 % et 5 % , de préférence entre environ 0,002 '/. et 1 , et encore de préférence entre environ 0,01 et 0,5 % en poids, reLative- ment au poids total de La composition.

D'autres buts, caractéristiques et avantages de L'invention apparaîtront plus clairement à La Lumière de La descrip¬ tion explicative qui va suivre, faite en référence à plusieurs exemples illustratifs qui ne sauraient en aucune façon Limiter La portée de l'invention. Dans ces exemples, les pourcentages sont donnés en poids, sauf indication contraire.

EXEMPLE 1

A - Préparation d'une composition sous forme de poudre Lipidique contenant de l'acétate de préαnénolone. On dissout dans 100 ml de dichlorométhane 10Û mg d'acétate de pregnenolone, 1 g de β-sitostéroL auxquels on ajoute 8,9 g de Lécithine de soja, éventuellement en présence d'un anti¬ oxydant lipophile, par exemple 0,2 g d'α-tocophénoL.

On atomise La solution obtenue à 65°C, comme décrit dans le document FR-A-2 521 565. On obtient ainsi une poudre Lipidique

composée de petites particules sensiblement sphériques de 1 à 40 nm de diamètre environ.

B - Préparation d'une composition sous forme de suspension de liposomes avantageusement homogénéisée. On disperse 5 g de La poudre obtenue à L'étape A dans une quantité d'eau telle que l'on aboutisse à un volume final de 250 ml. Cette opération est conduite à température ordinaire sous agitation magnétique pendant 1 h.

On obtient ainsi, après homogénéisation soit au moyen d'ultrasons, soit au moyen d'un homogénéiseur sous pression, par exemple selon le procédé décrit dans le document FR-A-2 534 487, une suspension de liposomes.

Si, par exemple, on réalise une homogéné sation par traitement aux ultrasons pendant 15 min, on obtient des liposomes ayant une dimension comprise entre 135 et 186 nm.

On obtient donc,après cette étape B, 250 ml de suspen¬ sion de liposomes homogénéisés, dont La teneur en phase lipidique est de 2 %.

EXEMPLES 2 à 7 Compositions sous forme de suspensions de liposomes contenant de l'acétate de prégnénoLone.

On prépare plusieurs compositions sous forme de suspensions de liposomes selon Le procédé décrit à l'exemple 1, en faisant varier La proportion des constituants de La phase lipidique. Le tableau I ci-après indique la composition des différentes suspensions obtenues.

EXEMPLES 8 à 10

Compositions sous forme de suspensions de Liposomes contenant de la prégnénoLone.

On prépare, selon le procédé de L'exemple 1, diffé- rentes compositions liposomales en substituant la prégnénoLone à L'acé¬ tate de prégnénoLone et en faisant varier la proportion des consti¬ tuants de la phase lipidique. La composition des différentes suspen¬ sions de liposomes figure au tableau I.

TABLEAU I

Ov

EXEMPLE 11

Etude de L'influence du stérol sur la stabilité des Liposomes conte¬ nant de la prégnénoLone ou un ester de prégnénoLone.

On cherche à déterminer L'influence du β-sitostérol sur la stabilité des liposomes selon L'invention.

Pour cela, on prépare une suspension témoin selon le procédé de l'exemple 1, dont la phase Lipidique a comme composition 90 % de Lecithine de soja et 10 % de β-sitostéroL.

L'évaluation de la stabilité des liposomes est effectuée par La détermination de leur taille au moyen d'un appareil approprié, tel qu'un NANOSIZER^. Les mesures sont effectuées au temps zéro (à L'achèvement de la préparation), à température ambiante, puis à 8 j et à 15 j aux températures de 4°C, ambiante, et 40°C. Le tableau II mentionne, pour chaque mesure, la polydispersité qui quantifie l'épar- pillement des tailles des liposomes et la taille moyenne. Plus la valeur de ces grandeurs est faible et régulière dans le temps, géné¬ ralement meilleure est la qualité de la suspension de Liposomes, dont la stabilité en est un critère.

La stabilité des liposomes peut donc être évaluée par une mesure de leur taille, car on sait que lorsqu'ils sont instables les liposomes ont tendance à fusionner entre eux, leur dimension augmente et, à partir d'une certaine taille, ils sédimentent.

Le tableau II montre clairement que L'incorporation de L'acétate de prégnénoLone est favorisée par La présence de β-sitostérol. Lorsque la teneur en β-sitostérol dans La poudre est nulle ⁽ ex. n° 7), on observe une sédimentation au bout de 8 j à 40°C, de plus, les valeurs de La polydispersité et de la taille, sont grandes.

Dans les autres cas, La taille des liposomes reste sensiblement constante et à une valeur acceptable. En outre, le tableau II montre que l'incorporation de β-sitostérol à un taux supérieur à environ 15 % en poids ⁽ ex. n° 6), dans La poudre Lipidique, provoque des phénomènes de sédimentation et nuit à la stabilité des liposomes contenant l'acétate de prégnénoLone. On voit clairement l'avantage de La présence de β-sitostérol, dont la concentration est de préférence 10 % en poids de la phase lipidique (ex. n° 4).

TABLEAU II

00

t = temps en jours T.A. = température ambiante (environ 20°C ⁾

EXEMPLE 12

Evaluation du pouvoir multiplicateur des compositions selon l'inven¬ tion sur des fibroblastes humains en culture.

La méthode d'évaluation du pouvoir multiplicateur de substances sur des ceLIules en culture est dérivée de la méthode de Madame ADOLPHE et al., J. Cosmetic Sci. (1983), 6_, 55.

Des fibroblastes humains sont cultivés en boîte de Pétri (35 mm) dans du MEM (milieu minimum de Eagle) contenant 5 / '. de sérum de veau. Après 24 h (37°C, 5 '/. CO^ , on remplace le milieu par un mélange constitué de MEM et de La substance à tester, à diffé¬ rentes concentrations. Ce mélange contient une concentration de 2,5 % en sérum de veau. Un témoin à 2,5 V. de sérum de veau, sans substance additionnelle, est réalisé en parallèle. Les cellules sont ensuite incubées à 37°C en atmosphère humide chargée de 5 % de Z0- pendant 7 j. Trois essais sont effectués pour chaque culture.

Le dénombrement des cellules est réalisé au moyen d'un appareillage approprié, après lavage au tampon phosphate et décolle- ment des cellules à la trypsine.

Le pouvoir multiplicateur des substances est exprimé par La formule suivante :

N.P. - N 2,5

A.P. = ., -, _t - x 100

N 2,5

- dans laquelle A.P. représente le pouvoir multiplicateur des cellules, N.P. Le nombre des cellules cultivées en présence de La substance à tester et N 2,5 le nombre de cellules cultivées dans le témoin, c'est-à-dire en présence de 2,5 '/. de sérum de veau.

Les résultats obtenus pour différentes concentrations en acétate de prégnénoLone, en abrégé PREAC, sont représentés à La figure 1 sous forme d'un histogramme.

La figure 1 révèle que l'acétate de prégnénoLone, libre ou incorporé en liposαmss ne présente aucun effet significatif sur L'augmentation du nombre des fibroblastes humains en culture.

EXEMPLE 13

Evaluation de l'activité stimulante sur La synthèse des protéines.

L'évaluation de l'activité sur Le taux de protéine est réalisée suivant une méthode qui découle de la méthode décrite par JOHNSON et J.A. LOTT (1978), Clin. Chem. J24.

A la fin de la culture réalisée précédemment à l'exemple 12, les boîtes sont lavées deux fois au tampon phosphate puis traitées avec 1 ml de soude (0,5 N) .

Après agitation, 30 μl de surnageant cellulaire sont ajoutés à 2 ml d'une solution de bleu de Coomassie.

La concentration en protéines est obtenue après lecture au protî-analyser (Marius Instruments) qui évalue automatique¬ ment Le rapport des densités optiques.

D0590 nm D0465 nm

L'activité en "taux de protéine" pour chaque substance, à chaque concentration est exprimée par La formule :

^T S ^{" T} 2,5 T. . = x 100 ^T 2,5

- dans laquelle T.P. représente L'activité en taux de protéine ; T_ représente Le taux de protéine obtenu sur des cultures en présence du produit à tester et J- _c représente le taux de protéine obtenu sur des cultures en présence du témoin, c'est-à-dire en présence de 2,5 % de sérum de veau.

On a représenté à la figure 2 l'histogramme des résul¬ tats de l'activité sur le taux de protéine à différentes concentra¬ tions en acétate de pregnenolone.

La figure 2 met très nettement en évidence L'action stimulante de L'acétate de prégnénoLone incorporé en liposomes sur la synthèse des protéines, alors que ce même produit, à L'état Libre, ne montre pratiquement aucune action.

En conclusion, les tests effectués sur Les cultures de fibroblastes humains montrent L'intérêt des compositions selon

l'invention pour l'entretien, ou la restauration, des processus biolo¬ giques normaux de la peau et des phanères, par le biais de L'action stimulante sur La synthèse des protéines tissulaires.

En effet, on sait d'une part que, lorsque les cellules se divisent, cette synthèse est ralentie. L'absence d'action parti¬ culière des compositions selon L'invention sur la division des cellules ne constitue donc pas un handicap. D'autre part, l'on connaît l'importance que présente l'existence des protéines tissulaires en quantité et en qualité, pour le bon état physiologique de la peau. L'action stimulante des compositions selon l'invention sur la synthèse de telles protéines constitue donc un très grand intérêt, notamment en cosmétique et en dermatologie.

EXEMPLE 14

Composition gélifiée à base de liposomes lecithine de soja 0,89 g β-sitostérol 0,10 g acétate de prégnénoLone 0,01 g excipient gélifié qsp 100 g On prépare tout d'abord une poudre lipidique selon l'exemple 1-A. Cette poudre est ensuite dispersée à la concentration de 4 % selon l'exemple 1-B dans de l'eau, éventuellement stabilisée au moyen d'un conservateur, cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable à La concentration habituelle.

On gélifie alors la suspension obtenue en la mélangeant,

(8) à raison d'une partie pour 3 parties, avec un gel aqueux de Carbopol 940, préparé séparément de façon classique à La concentration de 5 %.

La composition gélifiée obtenue peut être utilisée soit pour être incorporée dans des formulations cosmétiques ou phar¬ maceutiques, soit telle quelle, éventuellement additionnée de parfums, pour le soin de la peau du corps ou du visage, avantageuse¬ ment en applications quotidiennes.

EXEMPLE 15

Composition cosmétique sous forme de crème

Lecithine de soja 4 g β-sitostérol 0,5 g acétate de prégnénoLone 0,5 g excipient pour émulsion huile dans eau qsp 100 g

On prépare séparément une suspension de liposomes seLon l'exemple 2 d'une part, et une émulsion huile dans eau d'autre part. Ces deux préparations sont ensuite mélangées à raison de 1 volume de suspension lîposomale pour 3 volumes d'émulsion. La crème obtenue est appliquée de préférence le soir sur le visage.

EXEMPLE 16

Composition dermatologique cicatrisante lecithine de soja 8 g β-sitostérol 1 g acétate de prégnénoLone 1 g excipients gélifiés qsp 100 g

Cette composition est obtenue à partir de la poudre préparée selon l'exemple 4 et dispersée à la concentration de 20 % au moyen d'un homogénéiseur sous pression. La dispersion obtenue R est ensuite mélangée avec 1 volume équivalent d'un gel de CarbopoL

940 à 5 '/..

Cette composition présente d'excellentes propriétés cicatrisantes. Elle est indiquée, en particulier, pour prévenir et traiter les vergetures en applications biquotidiennes.