Domaine de l'invention

La présente invention se situe dans le domaine des principes actifs cosmétiques et dermato-pharmaceutiques ainsi qu'aux compositions en comportant.

La présente invention a pour objet de fournir de nouvelles molécules utiles pour prévenir ou lutter contre les signes cutanés du vieillissement, et en particulier les rides, le relâchement, la perte de volume et d'élasticité de la peau.

Plus particulièrement, l'invention se rapporte à des peptides activateurs de l'expression de la dermatopontine, à des compositions cosmétiques où pharmaceutiques comprenant de tels peptides, à l'utilisation de telles compositions pour augmenter l'expression des protéines de la matrice extracellulaire, prévenir la dégradation des fibres de collagène et des fibres élastiques par les UV et enfin, à des méthodes de soin cosmétiques destinées à prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et du photovieillissement.

Arrière-plan de l'invention

La peau est un organe de recouvrement composé de plusieurs couches (derme, jonction dermo-épidermique, épiderme) ; Le derme est le tissu de soutien de la peau et se compose d'eau, de fibres d'élastine et de fibres de collagène (70 % des fibres dermiques), enveloppées dans une matrice interstitielle de protéoglycannes. Les fibroblastes sont la principale composante cellulaire du derme et sont à l'origine de la synthèse des fibres de collagène et des fibres d'élastine.

La partie la plus externe est l'épidémie, un épithélium pluristratifïé constitué essentiellement de kératinocytes étroitement liés entre eux. L'assisse basale de l'épiderme est composée par une couche de cellules prolifératives, principalement des kératinocytes et des mélanocytes, qui s'ancrent sur la jonction dermo-épidermique (JDE). La JDE est une structure extracellulaire en treillage qui constitue l'interface entre le derme et l'épiderme.

La peau, comme tous les autres organes, est soumise au processus physiologique complexe du vieillissement. On distingue le vieillissement intrinsèque ou chronologique, qui est la conséquence d'une sénescence génétiquement programmée et d'altérations biochimiques dues à des facteurs endogènes. Au niveau de la peau, il se caractérise par un ralentissement de la régénération cellulaire et des matrices extracellulaires, aboutissant à une atrophie dermique et épidermique, une sécheresse, une réduction de l'élasticité, et l'apparition de ridules et de fines rides.

Le vieillissement extrinsèque, quant à lui, est dû à des agressions environnementales que subit l'organisme tout au long de la vie, tels que la pollution, le soleil, les maladies, les habitudes de vie, etc. Il se superpose au vieillissement intrinsèque au niveau des zones chroniquement exposées au soleil ; on parle alors de photovieillissement. Les principales altérations liées au photovieillissement siègent au niveau du derme et comprennent : l'apparition de tâches pigmentaires, une diminution et une fragmentation des fibres de collagène provoquant des rides et l'accumulation de fibres élastiques dystrophiques constituant l'élastose solaire.

De nombreuses voies de recherche ont été explorées pour identifier des agents actifs capables de lutter contre le vieillissement cutané, parmi lesquelles la protection contre les stress environnementaux (soleil, pollutions...), l'activation de la régénération cellulaire, le renforcement de la matrice extracellulaire de collagène et d'élastine. Ces recherches ont abouti à la mise sur le marché de nombreux agents actifs plus ou moins efficaces. De ce fait, il reste toujours d'actualité d'identifier de nouveaux composés capables de prévenir ou de lutter contre le vieillissement cutané. Le problème plus particulièrement ciblé par l'invention est de lutter contre la désorganisation des structures fibrillaires de la matrice extracellulaire cutanée apparaissant lors du vieillissement ou du photovieillissement.

Les inventeurs ont récemment identifié une cible moléculaire intéressante pour remplir cette fonction. Il s'agit de la dermatopontine, une petite protéine acide, riche en tyrosine, présente en abondance dans le derme et plus précisément, autour des fibres de collagène. Elle joue un rôle clé dans la structuration des fibrilles de collagène (Jonathan et al., J. Biol. Chem., 1993, vol. 268, pp. 19826-19832), participe au processus d'adhésion des fibroblastes (Lewandowska et al., J. cell Sci., 1991 , vol.99, pp. 657-668), des kératinocytes via l'intégrine α ₃ βι et un récepteur de type protéoglycanne. Ces propriétés font de la dermatopontine un acteur important de la cicatrisation (Akamoto et al., Biochem, 2010, vol. 49, pp. 147-155).

Confirmant ces résultats, l'absence de dermatopontine chez des souris génétiquement modifiées abouti à une diminution de l'épaisseur du derme et de sa teneur en collagène, ainsi qu'à une moindre élasticité de la peau (Takeda et al. J. Invest. Dermatol. 2002, vol. 1 19, pp. 678-683). Indépendamment de son rôle structural, la dermatopontine peut se lier en un complexe trimérique avec la décorine et le TGF bêta et potentialiser ainsi l'action du TGF bêta 1 (Okamoto et al., Biochem J. 1999 Feb 1 ;337 (3):537-41).

Le document JP2008201777 divulgue l'utilisation de peptides dérivés de la dermatopontine, en tant qu'agents favorisant l'adhésion cellulaire et la cicatrisation.

Le document US20050065089 divulgue que la dermatopontine native peut être utilisée pour potentialiser l'activation du TGF beta dans le cadre d'un traitement biologique des hernies discales.

Toutefois, à ce jour, aucun peptide conforme à l'invention n'a été décrit pour activer la dermatopontine dans les cellules de la peau et prévenir ou réparer les signes cutanés du vieillissement et du photovieillissement.

Exposé de l'invention

Les inventeurs ont mis en évidence que des peptides de formule générale (I) suivante : R ₁ -(AA) _n -X ₁ -Arg-X ₂ -Trp-X ₃ -X ₄ -X ₅ -X ₆ (R ₃ )-(AA) _p -R ₂

étaient de bons agents activateurs de la dermatopontine. En conséquence, ces peptides sont adaptés pour lutter contre le vieillissement et le photovieillissement de la peau.

Les peptides selon l'invention se caractérisent par le fait qu'ils :

- activent l'expression de la dermatopontine,

- augmentent l'expression du collagène de type I, III et de la fibronectine, - préviennent la dégradation des structures fibrillaires de collagène et des fibres élastiques dans une peau soumise à des rayonnements UV.

On entend par « peptide ou agent actif activateur de la dermatopontine ou capable d'activer la dermatopontine», tout peptide de formule générale (I) capable d'augmenter la quantité de dermatopontine présente dans la cellule, soit en augmentant la synthèse protéique par modulation directe ou indirecte de l'expression génique, soit par d'autres processus biologiques tels que la stabilisation de la protéine ou encore la stabilisation des transcrits d' ARN messager.

On entend par peau, l'ensemble des tissus de recouvrement constituant la peau, les muqueuses et les phanères, y compris les cheveux, les cils et les sourcils.

Ainsi, l'invention a pour objet premier un peptide de formule générale (I)

R ₁ -(AA) _n -X ₁ -Arg-X ₂ -Trp-X ₃ -X ₄ -X ₅ -X ₆ (R ₃ )-(AA) _p - R ₂

Dans laquelle

Xi représente l'acide aspartique ou aucun acide aminé, X ₂ représente la glutamine ou l'acide glutamique,

X ₃ représente l'asparagine ou la lysine ou la glutamine ou aucun acide aminé,

X ₄ représente la phénylalanine ou la tyrosine ou aucun acide aminé,

X ₅ représente la tyrosine ou l'alanine ou aucun acide aminé,

X ₆ représente la cystéine ou aucun acide aminé,

AA représente un acide aminé quelconque et n et p sont des nombres entiers compris entre 0 et 2 ;

Ri représente la fonction aminé primaire de l'acide aminé N-terminal, libre ou substituée par un groupement de type acyle (R-CO-) où le radical R est soit une chaîne alkyle de Ci à C ₃₀ saturée ou insaturée de type acétyle, soit un groupement aromatique de type benzoyle, tosyle, ou benzyloxycarbonyle ;

R ₂ représente la fonction carboxyle de l'acide aminé C-terminal possédant soit un groupement hydroxyle libre ou substitué par un groupement choisi parmi une chaîne alkyle de Ci à C ₃₀ , soit un groupement -NH ₂ , -NHY ou -NYY' avec Y et Y' représentant une chaîne alkyle de C] à C ₄ ;

R ₃ représente la fonction thiol de la cystéine en position X ₆ , soit libre, soit substituée par un groupement méthyle ou acétyle, soit liée de manière covalente par un pont disulfure à une autre cystéine ;

Ladite séquence de formule générale (I) étant constituée de 3 à 12 résidus d'acides aminés et pouvant être sous forme de sels.

Selon une méthode de réalisation avantageuse de l'invention, le peptide correspond préférentiellement à la formule générale (I)

Ri-(AA) _n -Xi -Arg-X ₂ -Trp-X ₃ -X ₄ -X ₅ -X ₆ (R ₃ )-(AA) _P - R ₂

Dans laquelle

Xi représente l'acide aspartique ou aucun acide aminé,

X ₂ représente la glutamine ou l'acide glutamique,

X ₃ représente l'asparagine ou la lysine ou la glutamine ou aucun acide aminé,

X ₄ représente la phénylalanine ou la tyrosine ou aucun acide aminé,

X ₅ représente la tyrosine ou l'alanine ou aucun acide aminé,

X ₆ représente la cystéine ou aucun acide aminé,

AA représente un acide aminé quelconque à l'exception de l'arginine, la cystéine, la leucine, la glycine et l'acide glutamique ; et n et p = 0 ou 1 avec n différent de p ;

Ri représente la fonction aminé primaire de l'acide aminé N-terminal, libre ou substituée par un groupement de type acyle (R-CO-) où le radical R est soit une chaîne alkyle de Ci à C ₃₀ saturée ou insaturée de type acétyle, soit un groupement aromatique de type benzoyle, tosyle, ou benzyloxycarbonyle ;

R ₂ représente la fonction carboxyle de l'acide aminé C-terminal possédant soit un groupement hydroxyle libre ou substitué par un groupement choisi parmi une chaîne alkyle de Ci à C ₃₀ , soit un groupement -NH ₂ , -NHY ou -NYY' avec Y et Y' représentant une chaîne alkyle de Ci à C ₄ ;

R-3 représente la fonction thiol de la cystéine en position X ₆ , soit libre, soit substituée par un groupement méthyle ou acétyle, soit liée de manière covalente par un pont disulfure à une autre cystéine ;

Ladite séquence de formule générale (I) étant constituée de 3 à 7 résidus d'acides aminés et pouvant être sous forme de sels.

Selon une méthode de réalisation de l'invention tout particulièrement préférée, le peptide est de séquence :

(SEQ ID n°l) : Asp-Arg-Gln-Trp-NH ₂

(SEQ ID n°2) : Asp-Arg-Glu-Trp-NH ₂

(SEQ ID n°3) : Asp-Arg-Gln-Trp-Asn-Tyr-NH ₂

(SEQ ID n°4) : Arg-Glu-Trp-Gln-Phe-Tyr-Cys-NH ₂

(SEQ ID n°5) : Arg-Glu-Trp-Gln-Phe-Tyr-Cys(Cys)-(NH ₂ )

(SEQ ID n°6) : Asp-Arg-Glu-Trp-Gln-Phe-NH ₂

(SEQ ID n°7) : Asp-Arg-Gln-Trp-Asn-Tyr-Ala-Cys-NH ₂

(SEQ ID n°8) : Asp-Arg-Gln-Trp-Asn-Tyr-Ala-Cys(Cys)-(NH ₂ )

(SEQ ID n°9) : Asp-Arg-Glu-Trp-Gln-Phe-Tyr-Cys-NH ₂

(SEQ ID n°10) : Asp-Arg-Glu-Trp-Gln-Phe-Tyr-Cys(Cys)-(NH ₂ )

(SEQ ID n°l 1) : Asp-Arg-Gln-Trp-Lys-Phe-NH ₂

(SEQ ID n° 12) : Arg-Glu-Trp-Gln-Phe-Tyr-NH ₂

(SEQ ID n°13) : Arg-Glu-Trp-Gln-Phe-Tyr.

Selon un mode de réalisation particulièrement intéressant, le peptide correspond à la séquence SEQ ID n°5.

Selon un autre mode de réalisation particulièrement intéressant, le peptide correspond à la séquence SEQ ID n°9 ou à la SEQ ID n° 10.

Selon un autre mode de réalisation encore plus particulièrement intéressant, le peptide correspond à la séquence SEQ ID n°12 ou à la SEQ ID n°13. Les acides aminés, constituant le peptide selon l'invention et désignés sous les termes AA, peuvent être sous configuration isomérique L- et D-. De manière préférentielle, les acides aminés sont sous forme L.

Le terme « peptide » désigne un enchaînement de deux ou plusieurs acides aminés liés entre eux par des liaisons peptidiques.

Par « peptide », il faut également entendre le peptide naturel ou synthétique de l'invention tel que décrit ci-dessus, ou au moins l'un de ses fragments, qu'il soit obtenu par protéolyse ou de manière synthétique, ou encore tout peptide naturel ou synthétique dont la séquence est totalement ou partiellement constituée par la séquence du peptide précédemment décrit.

De façon à améliorer la résistance à la dégradation, il peut être nécessaire d'utiliser une forme protégée du peptide selon l'invention. De préférence, on utilise pour protéger la fonction aminé primaire de l'acide aminé N-terminal, une substitution par un groupement Ri de type acyle (R-CO-) dans lequel le radical R est soit une chaîne alkyle de Ci à C ₃₀ saturée ou insaturée de type acétyle, soit un groupement aromatique de type benzoyle, tosyle, ou benzyloxycarbonyle, encore plus préférentiellement un groupement acétyle. De préférence, on utilise, pour protéger la fonction carboxyle de l'acide aminé C-terminal, une substitution par un groupement R ₂ de type chaîne alkyle de Ci à C ₃₀ , ou un groupement NH2, NHY ou NYY avec Y représentant une chaîne alkyle de Ci à C ₄ , encore plus préférentiellement un groupement NH2.

Le peptide selon l'invention peut être protégé au niveau de l'extrémité N-terminale, C- terminale ou au niveau des deux extrémités.

De façon à inhiber la dimérisation des peptides selon l'invention, la fonction thiol de la cystéine C-terminale peut être substituée par un groupement méthyle, acétyle ou encore une autre cystéine. Dans ce dernier cas, la substitution aboutit à la formation d'un pont disulfure entre les deux résidus cystéines.

Ainsi, l'invention concerne une composition telle que définie précédemment, caractérisée par le fait que le peptide selon l'invention et avantageusement de séquence SEQ ID n°l à SEQ ID n°13 est sous forme protégée ou non, préférentiellement sous forme protégée au niveau de l'extrémité C-terminale.

Le peptide de formule générale (I) selon l'invention peut être obtenu soit par synthèse chimique classique (en phase solide ou en phase homogène liquide), soit par synthèse enzymatique (Kullman et al. J. Biol. Chem., 1980, vol. 225, p. 8234) à partir d'acides aminés constitutifs. Le peptide selon l'invention peut être d'origine naturelle ou synthétique. Préférentiellement selon l'invention, le peptide est d'origine synthétique, obtenu par synthèse chimique.

Selon l'invention, l'agent actif peut être un peptide unique ou un mélange de peptides. Le peptide selon l'invention est avantageusement solubilisé dans un ou plusieurs solvants physiologiquement adaptés, tels que l'eau, le glycérol, l'éthanol, le propanediol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques ou tout mélange de ces solvants.

On entend par «physiologiquement adapté» que le solvant choisi est approprié pour entrer en contact avec la peau sans provoquer de réactions de toxicité ou d'intolérance.

Le peptide dilué est ensuite stérilisé par filtration stérile.

Après cette étape de dilution, le peptide peut être encapsulé ou inclus dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique tels que les liposomes ou toute autre microcapsule utilisée dans le domaine de la cosmétique ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisé dans, ou fixé sur, tout vecteur physiologiquement adapté.

Selon un second objet de l'invention, le peptide de formule générale (I) peut être utilisé en tant que médicament.

De manière particulièrement avantageuse, le peptide de formule générale (I) peut être utilisé en tant qu'agent cicatrisant.

L'invention a encore pour objet une composition pharmaceutique cicatrisante comprenant, dans un milieu physiologiquement adapté, le peptide selon l'invention.

Selon un aspect particulier de l'invention, ledit peptide peut être utilisé pour traiter les symptômes dermatologiques liés à l'âge ou au photovieillissement prématuré, et notamment le retard de cicatrisation, la laxité et l'atrophie dermique, l'élastose solaire et la diminution de la cohésion dermo-épidermique.

Avantageusement, selon cette forme de l'invention, les compositions pharmaceutiques seront appropriées à une application topique ou pourront se présenter sous une forme liquide appropriée pour l'injection sous ou dans la peau, en particulier appropriée aux multi-injections superficielles locales de type mésothérapie.

L'invention a pour troisième objet une composition cosmétique comprenant, dans un milieu physiologiquement adapté, un peptide de formule générale (I), en tant qu'agent actif activateur de la dermatopontine. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'agent actif selon l'invention est présent dans les compositions de l'invention à une concentration comprise entre 10 ^"9 M

* 8 et 10 M environ, et préférentiellement à une concentration comprise entre 10 ^" M et 10 ^{^5} M, et encore plus préférentiellement entre 5.10 ^"5 M et 5.10 ^"6 M par rapport au poids total de la composition finale.

Cette fourchette de concentrations représente la quantité nécessaire d'agent actif pour obtenir l'effet moléculaire recherché, à savoir, activer l'expression de la dermatopontine, du collagène de type I, III et de la fibronectine.

De manière préférée, la composition selon l'invention se présente sous une forme adaptée à l'application par voie topique comprenant un milieu physiologiquement adapté pour la peau. Par « physiologiquement adapté », on entend des milieux qui conviennent à une utilisation en contact avec la peau ou les phanères humains, sans risque de toxicité, d'incompatibilité, d'instabilité, de réponse allergique et autres effets secondaires.

On entend par « application topique », le fait d'appliquer ou d'étaler l'agent actif selon l'invention, ou une composition le contenant, à la surface de la peau.

Ces compositions pourront notamment se présenter sous forme d'une solution aqueuse, hydro-alcoolique ou huileuse ; d'une émulsion huile-dans-eau, eau-dans-huile ou émulsions multiples ; de gel aqueux ou anhydre ; de colloïde. Ces compositions peuvent aussi se présenter sous forme de crèmes, de suspensions, ou encore de poudres, adaptées à une application sur la peau, les muqueuses, les lèvres et/ou les phanères. Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'une crème, d'une pâte ou d'une mousse. Elles peuvent aussi se présenter sous forme solide, comme un stick, ou être appliquées sur la peau sous forme d'aérosol. Elles peuvent être utilisées comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage de la peau.

L'ensemble de ces compositions comprennent, en outre, tout additif communément utilisé dans le domaine d'application envisagé ainsi que les adjuvants nécessaires à leur formulation, tels que des co-solvants (éthanol, glycérol, alcool benzylique, humectant...), des épaississants, des diluants, des émulsionnants, des anti-oxydants, des colorants, des filtres solaires, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d'odeur, des huiles essentielles, des oligo-éléments, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, des filtres chimiques ou minéraux, des agents hydratants ou des eaux thermales etc. On peut, par exemple, citer des polymères hydrosolubles de type polymère naturel, tels que les polysaccharides, ou polypeptides, des dérivés cellulosiques de type méthylcellulose ou hydroxypropylcellulose, ou encore des polymères synthétiques, polaxamères, carbomères, siloxanes, PVA ou PVP, et notamment les polymères vendus par la société ISP.

Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l'invention. Ces adjuvants peuvent, par exemple, être présents à des concentrations allant de 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Lorsque la composition de l'invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter de 5 à 80 % en poids et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et co-émulsionnants utilisés dans la composition seront choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés en une proportion allant de 0,3 à 30 % en poids, par rapport au poids total de la composition.

Il est bien entendu que l'agent actif selon l'invention peut être utilisé seul ou bien en association avec d'autres agents actifs.

Avantageusement, les compositions utilisables selon l'invention contiennent, en outre, au moins un autre agent actif destiné à renforcer l'action de l'agent actif selon l'invention, dans le domaine de la prévention et de l'amélioration des signes cutanés du vieillissement, ou encore un autre agent actif permettant d'élargir la gamme de propriétés de la composition considérée.

On peut citer, de manière non limitative, les classes d'ingrédients suivantes : les agents régénérants, anti-âges, antirides, apaisants, anti-radicalaires, anti-glycation, hydratants, antibactériens, antifongiques, kératolytiques, myorelaxants, desquamants, raffermissants, les agents stimulant la synthèse de macromolécules dermiques ou le métabolisme énergétique, les agents modulant la différenciation, la pigmentation ou la dépigmentation cutanée, les agents stimulant la pousse des ongles ou des cheveux, les agents stimulant la microcirculation, les écrans ou filtres solaires ou encore les agents inhibiteurs des métallo- protéinases.

Dans un mode plus particulier de réalisation, la composition selon l'invention comprendra, outre le peptide selon l'invention,

- au moins un composé activateur du cytochrome c et/ou,

- au moins un composé hydratant, tel qu'un composé activateur des aquaporines et/ou,

- au moins un composé activateur des sirtuines et/ou,

- au moins un composé qui augmente l'adhésion cellulaire et/ou, - au moins un composé qui augmente la production de protéines matricielles telles que le collagène, fibronectine, laminine, glycosaminoglycanes et/ou,

- au moins un composé modulateur de l'activité du protéasome et/ou,

- au moins un composé modulateur du rythme circadien et/ou,

- au moins un composé modulateur des protéines HSP et/ou,

- au moins un composé qui augmente l'énergie cellulaire et/ou,

- au moins un composé modulant la pigmentation de la peau et/ou,

- au moins un composé activateur du coenzyme Q10 et/ou,

- au moins un composé améliorant la fonction barrière, tel qu'un composé activateur de la transglutaminase ou de la HMG-CoA réductase et/ou,

- au moins un composé protecteur de la mitochondrie.

Lesdits composés ci-dessus peuvent être d'origine naturelle, comme des hydrolysats peptidiques de plantes, ou encore d'origine synthétique, comme des peptides.

Indépendamment de leurs fonctions, les autres agents actifs associés à l'agent actif selon l'invention dans la composition pourront avoir des structures chimiques très diverses. On peut citer de manière non limitative, les peptides, la vitamine C et ses dérivés, les vitamines du groupe B, la DHEA (dihydroépiandrostérone), les phytostérols, l'acide salicylique et ses dérivés, les rétinoïdes, les flavonoïdes, les aminés de sucres, les azoles, les sels métalliques, les extraits peptidiques d'origine végétale ou encore les polymères.

L'invention a pour quatrième objet l'utilisation d'une composition cosmétique, comprenant le peptide de formule générale (I) en tant qu'agent actif, pour renforcer la structure de la jonction dermo-épidermique, stimuler l'expression des composants de la jonction dermo-épidermique, augmenter la densification de la zone supportant la jonction dermo-épidermique, ou encore améliorer l'ancrage des kératinocytes basaux et/ des mélanocytes sur la jonction dermo-épidermique.

L'invention a pour cinquième objet l'utilisation d'une composition cosmétique, comprenant le peptide de formule générale (I) en tant qu'agent actif, pour augmenter l'expression des protéines de la matrice extracellulaire par les fibroblastes de la peau.

Selon un aspect avantageux de l'invention, l'agent actif permet d'augmenter la densité et l'élasticité du derme, et donc la fermeté de la peau, de prévenir ou de lutter contre le relâchement des traits du visage, la perte de volume, l'amincissement de la peau, l'atonie, les ridules, les rides profondes et l'atrophie dermique. L'invention a pour sixième objet l'utilisation d'une composition cosmétique, comprenant le peptide de formule générale (I) en tant qu'agent actif, pour prévenir la dégradation des fibres de collagène et des fibres élastiques dans la peau soumise aux agressions extérieures.

On entend par l'expression « agressions extérieures », les agressions que peut produire l'environnement. A titre d'exemple, on peut citer des agressions telles que la pollution, les rayonnements UV, ou encore les produits à caractère irritant. Par pollution, on entend aussi bien la pollution « extérieure » due par exemple aux particules de diesel, à l'ozone ou aux métaux lourds, que la pollution « intérieure » qui peut être due notamment aux émissions de solvants de peintures, de colles, ou de papier-peints (tels que toluène, styrène, xylène ou benzaldéhyde), ou bien encore la fumée de cigarette.

Il a été mis en évidence que l'agent actif permet de limiter la dégradation et la désorganisation des fibres élastiques et de stimuler la réorganisation des fibres de collagène, consécutives aux rayonnements UV, et plus particulièrement aux rayonnements UVA.

La désorganisation des fibres élastiques désigne l'ensemble des modifications consécutives à des expositions solaires répétées, ainsi que l'accumulation de fibres élastiques dystrophiques typiques de l'élastose solaire. Ces altérations, difficilement réversibles et partiellement responsables de la ptôse ou relâchement cutané lié à l'âge, sont principalement dues aux rayonnements UVA qui pénètrent profondément dans le derme.

Un mode de réalisation particulier de l'invention a pour objet l'utilisation d'une composition cosmétique comprenant le peptide selon l'invention, pour prévenir ou lutter contre les signes inesthétiques liés à l'élastose solaire et/ou à la désorganisation des fibres élastiques causées par les expositions aux rayonnements UV, et plus particulièrement aux rayonnements UVA.

L'invention a pour septième objet l'utilisation d'une composition cosmétique, comprenant le peptide de formule générale (I) en tant qu'agent actif pour augmenter la régénération de l'épidémie et du derme.

On entend par l'expression « régénération de l'épiderme et du derme » que, selon cet aspect avantageux de l'invention, le peptide de l'invention provoque une prolifération et une migration plus importante des kératinocytes et des fibroblastes, ce qui favorise un renouvellement accéléré de l'épiderme et plus généralement une meilleure régénération de la peau. L 'invention a pour huitième objet une méthode de soin cosmétique destiné à prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement et du photovieillissement, caractérisé en ce que l'on applique topiquement sur la peau à traiter une composition selon l'invention.

Par manifestations cutanées du vieillissement, on entend toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau et des phanères dues au vieillissement comme, par exemple, l'amincissement de la peau, le relâchement, la perte d'élasticité et l'atonie, les rides profondes et les ridules, la perte de fermeté et de tonicité, et l'atrophie dermique ou toute autre dégradation interne de la peau consécutive à une exposition aux rayonnements UV.

En particulier, l'invention se rapporte à un procédé de traitement cosmétique destiné à protéger la peau contre les agressions dues aux rayonnements UV.

Dans un mode de réalisation particulier, la composition est appliquée avant une exposition au soleil, en tant que soin avant-soleil afin de prévenir la désorganisation des fibres élastiques.

Dans un second mode de réalisation de l'invention, la composition est appliquée après une exposition au soleil, en tant que soin après-soleil afin de réparer les dommages subis par les fibres de collagène et les fibres élastiques.

D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif.

Exemple 1 : Mise en évidence de l'effet activateur des peptides SEQ ID n°5 et SEQ

ID n°9 sur l'expression de la dermatopontine

Le but de cette étude est de déterminer l'influence du peptide SEQ ID n°5 et du peptide SEQ ID n°9 sur l'expression de la dermatopontine dans les fibroblastes. Pour cela, des marquages spécifiques par immunofluorescence ont été réalisés sur des cultures de fibroblastes humains normaux et sur des peaux maintenues en culture ex vivo.

Protocole : Des fibroblastes humains normaux sont cultivés pendant 24 ou 48 heures et traités une fois par jour avec une solution à 10 ^"6 M de peptide SEQ ID n°5 ou de peptide SEQ ID n°9. Les cellules sont ensuite lavées, fixées au formaldéhyde à 3.7% pendant 10 minutes à température ambiante.

Les échantillons de peau humaine sont mis en culture à l'interface air/liquide. Une solution de peptide SEQ ID n°5 ou de peptide SEQ ID n°9 à 10 ^"6 M est appliquée topiquement, puis les échantillons sont incubés durant 24 heures ou 48 heures. Ces échantillons de peau sont ensuite fixés avec du formaldéhyde puis inclus dans la paraffine ou fixés avec de l'OCT, par congélation à -20° C. Des coupes de 3 à 4 μηι sont alors réalisées (6 μη pour les coupes à froid). L'immunomarquage des échantillons inclus en paraffine est effectué après démasquage des sites spécifiques. L'immunomarquage des échantillons inclus avec de l'OCT est effectué après une fixation à 37°C et de l'acétone froid.

Les cellules fixées ou les coupes sont incubées en présence d'un anticorps polyclonal de lapin spécifique de la dermatopontine (Proteintech group, Réf : 10537-1-AP), puis d'un anticorps secondaire, couplé à un marqueur fluorescent. Après montage dans un milieu ad hoc, les cellules sont alors examinées au microscope à Epi-fluorescence (Nikon Eclipse E600 microscope).

Résultats : Dans toutes les conditions testées, on observe une fluorescence plus intense dans les fibroblastes traités par le peptide SEQ ID n°5 ou le peptide SEQ ID n°9 à 10 ^"6 M que dans les conditions contrôle.

Les peaux humaines montrent une fluorescence plus intense au niveau du derme dans les échantillons traités par le peptide SEQ ID n°5 ou le peptide SEQ ID n°9.

Conclusions : Les peptides SEQ ID n°5 et SEQ ID n°9 stimulent très sensiblement l'expression de la dermatopontine par les fibroblastes du derme.

Exemple 2 : Etude de Pultrastructure des cellules cutanées traitées par le peptide SEQ ID n° 5

Le but de cette étude est d'observer les structures subcellulaires des kératinocytes et des fibroblastes traités par le peptide SEQ ID n°5 à 10 ^"6 M.

Protocole :

Des KHN ou des fibroblastes sont cultivés en boîte ou en système Transwell, ou des peaux cultivées ex vivo sont traités avec une solution à 10 ^"6 M de peptide SEQ ID n°5 pendant 48 heures (le milieu est changé tous les 24 heures). Les cellules ou les échantillons de peaux sont lavés au PBS, puis sont fixés par la fixation hypertonique de Karnosky (4% Paraformaldéhyde, 5% glutaraldéhyde dans un tampon 0,08M Phosphate), 1 heure à température ambiante, puis 24 heures à 4°C. Les cellules sont détachées du support par grattage, centrifugées 5 minutes à 1000 rpm à 4°C. Le surnageant est éliminé et un tampon de 0,1 M sodium cacodylate est déposé sur le culot. Les cellules sont mélangées à 2 % d'agar puis post-fïxées par le tétroxyde d'osmium pendant 1 heure. Les échantillons de peaux sont directement post-fixées par le tétroxyde d'osmium au minimum 1 heure. Les spécimens sont alors déshydratés par passages successifs dans une série d'alcool (de 50 à 100 %). Les cellules ou les échantillons de peaux sont ensuite enrobés dans une résine. La polymérisation s'effectue pendant environ 12 heures à 60°C. Des coupes semi-fines de 0,5 μηι sont réalisées à ultra-microtome. Les coupes sont déposées sur une lame collée à la chaleur puis colorée au bleu de toluidine. Les lames sont ensuite déshydratées de nouveau et montées dans un milieu adéquat. Après avoir choisi la zone d'étude optimale, le bloc est retaillé à la taille désirée et des coupes ultra-fines sont alors réalisées. Seules les coupes qui ont une couleur « gris-argent » et une taille adéquate sont montées sur la grille de microscopie électronique doublement marquée par de l'uranyl acétate et du citrate de plomb, et sont examinées au microscope à transmission à 60 ou 80 KV.

Résultats : L'étude ultrastructurale montre un enrichissement en organites, et particulièrement en mitochondries dans les kératinocytes traités par le peptide SEQ ID n°5. Dans les cultures en système Transwell®, les contacts intercellulaires entre les kératinocytes apparaissent plus cohésifs et les interdigitations plus marquées par rapport au contrôle non traité. De même, dans les cultures de peau ex vivo, des contacts cellulaires plus étroits entre les cellules de la couche basale sont observés.

Dans les fibroblastes en culture traités par le peptide SEQ ID n°5, on observe que les corps cavéolaires, le reticulum endoplasmique rugueux et l'appareil de Golgi, sont sensiblement plus développés que dans les cellules témoins. On observe également une sécrétion plus intense de composants de la matrice extracéllulaire que dans les cellules contrôle non traitées.

Conclusions : Dans les kératinocytes en culture, le peptide SEQ ID n°5 à 10 ^"6 M provoque une stimulation globale de l'activité cellulaire avec, en particulier, une augmentation de la densité des mitochondries.

Dans les fibroblastes, le peptide SEQ ID n°5 induit une augmentation de la synthèse de composants de la matrice extracellulaire.

Dans les cultures de peau ex vivo, le peptide SEQ ID n°5 augmente les contacts intercellulaires des kératinocytes basaux. Exemple 3 : Mise en évidence de l'effet activateur du peptide SEO ID n°5 sur l'expression de fibronectine

Le but de cette étude est de déterminer l'influence du peptide SEQ ID n°5 sur l'expression de la fibronectine, une protéine de la matrice extracellulaire synthétisée par les fibroblastes. Pour cela, des marquages spécifiques par immunofluorescence ont été réalisés sur culture de fibroblastes et sur des cultures de peaux ex vivo.

Protocole : Des fibroblastes humains dermiques en culture sont traités une fois par jour avec une solution à 10 ^"6 M de peptide SEQ ID n°5 (le milieu contenant l'actif est changé toutes les 24 heures). Les cellules sont ensuite lavées, fixées au formaldéhyde à 3.7% pendant 10 minutes à température ambiante.

Les échantillons de peau humaine sont mis en culture à l'interface air/liquide. Une solution de peptide SEQ ID n°5 ou de peptide SEQ ID n°9 à 10 ^"6 M est appliquée topiquement, puis les échantillons sont incubés durant 24 heures ou 48 heures. Ces échantillons de peau sont ensuite fixés avec du formaldéhyde puis inclus dans la paraffine ou fixés avec de l'OCT par congélation à -20° C. Des coupes de 3 à 4 μιη sont alors réalisées (6 μπι pour les coupes à froid). L'immunomarquage des échantillons inclus en paraffine est effectué après démasquage des sites spécifiques. L'immunomarquage des échantillons inclus avec de l'OCT est effectué après une fixation à 37°C et de l'acétone froid.

Les cellules fixées ou les coupes sont incubées en présence d'un anticorps polyclonal de lapin spécifique de la fibronectine (Sigma, Réf : F-3648), puis d'un anticorps secondaire, couplé à un marqueur fluorescent. Les cellules sont alors examinées au microscope à Epi- fluorescence (Nikon Eclipse E600 microscope).

Résultats : On observe une fluorescence cytoplasmique plus intense dans les fibroblastes traités par le peptide SEQ ID n°5 à 10 ^"6 M que dans les cellules contrôle.

Dans la peau ex vivo la fluorescence se situe principalement dans la partie supérieure du derme papillaire, immédiatement sous la jonction dermo-épidermique.

Conclusions : Le peptide SEQ ID n°5 stimule très sensiblement l'expression de la fibronectine dans les fibroblastes.

Dans la peau humaine, le peptide SEQ ID n°5 stimule la densification de la zone supportant la jonction dermo-épidermique. Exemple 4 : Mise en évidence de l'effet activateur du peptide SEQ ID n°5 sur l'expression des molécules de la matrice extracellulaire dermique collagène I et collagène III

Le but de cette étude est de déterminer l'influence du peptide SEQ ID n°5 sur l'expression des molécules de la matrice extracellulaire dermique. Pour cela, l'expression des collagènes I et III dans des fïbroblastes humains provenant du derme a été étudiée.

Protocole : Des fïbroblastes humains normaux sont cultivés pendant 24 ou 48 heures et traités une fois par jour avec une solution à 10 ^"6 M de peptide SEQ ID n°5 ou de peptide SEQ ID n°9. Les cellules sont ensuite lavées, fixées au formaldéhyde à 3.7% pendant 10 minutes à température ambiante.

Les échantillons de peau humaine sont mis en culture à l'interface air/liquide. Une solution de peptide SEQ ID n°5 ou de peptide SEQ ID n°9 à 10 ^"6 M est appliquée topiquement, puis les échantillons sont incubés durant 24 heures ou 48 heures. Ces échantillons de peau sont ensuite fixés avec du formaldéhyde puis inclus dans la paraffine ou fixés avec de l'OCT par congélation à -20° C. Des coupes de 3 à 4 μη sont alors réalisées (6 μηι pour les coupes à froid). L'immunomarquage des échantillons inclus en paraffine est effectué après démasquage des sites spécifiques. L'immunomarquage des échantillons inclus avec de l'OCT est effectué après une fixation à 37°C et de l'acétone froid.

Les cellules fixées ou les coupes sont incubées en présence d'un anticorps polyclonal de lapin spécifique du Collagène I (Rockland, Réf : 600-401-103) ou d'un anticorps polyclonal de lapin spécifique du Collagène III (Rockland, Réf : 600-401-105), puis d'un anticorps secondaire couplé à un marqueur fluorescent. Après montage dans un milieu ad hoc, les cellules sont alors examinées au microscope à Epi-fluorescence (Nikon Eclipse E600 microscope).

Résultats : On observe une fluorescence plus intense dans les cultures et sur les coupes de peaux traitées par le peptide SEQ ID n ⁰ 5 à lO ^'6 M que dans les conditions contrôle.

Conclusions : Le peptide SEQ ID n°5 à 10 ^"6 M augmente l'expression du collagène I et du collagène III, deux protéines fibrillaires essentielles de la matrice extracellulaire dermique. Exemple 5 : Mise en évidence de l'effet protecteur du peptide SEQ ID n°5 sur fibres d'élastine soumises à irradiations par les UV

Le but de cette étude est de déterminer l'influence du peptide SEQ ID n°5 sur les fibres élastiques présentes dans le derme. Pour cela, une coloration spécifique des fibres élastiques a été réalisée sur des échantillons de peau cultivés ex vivo.

Protocole : Des échantillons de peau humaine sont mis en culture à l'interface air/liquide. Une solution à 10 ^"6 M de peptide SEQ ID n°5 est appliquée topiquement, puis les échantillons sont incubés durant 48 heures avant d'être irradiés par des UVA à 5 J/cm ² . Des contrôles non traités et irradiés sont réalisés en parallèle.

Ces échantillons de peau sont ensuite fixés avec du formaldéhyde puis inclus dans la paraffine. Des coupes de 4 μηι sont alors réalisées. Ces coupes de peau sont successivement déparaffinées puis réhydratées dans différents bains de xylène et d'alcool. Les fibres d'élastine sont colorées en utilisant un kit de coloration Elastika van Gieson (VWR, Réf : 1.15974). Les coupes de peau colorées sont déshydratées puis montées dans le milieu de montage Eukitt et observées au microscope.

Résultats : Les observations au microscope montrent une moindre dégradation des fibres élastiques, ainsi qu'une meilleure préservation de l'organisation des fibres élastiques dans les échantillons irradiés et traités par le peptide SEQ ID n°5 à 10 ^"6 M que dans les conditions contrôle. Conclusion : Le peptide SEQ ID n°5 à 10 ^"6 M préservent les fibres élastiques des altérations provoquées par les rayonnements UV.

Exemple 6 : Mise en évidence de l'effet régénérant du peptide SEQ ID n°5

Le but de cette étude est de déterminer l'effet régénérant du peptide SEQ ID n°5 sur les fibroblastes dermiques et les kératinocytes humains normaux (KHN). Pour ce faire, le modèle de cicatrisation in vitro Ibidi (Integrated Bio Diagnostics, Munich, Germany) a été utilisé.

Protocole : Ce test consiste à maintenir une zone dépourvue de cellule au milieu d'un tapis cellulaire et à évaluer le temps nécessaire aux cellules disposées de part et d'autre de la « cicatrice » pour migrer ou proliférer et combler la brèche. Les inserts de culture en silicone autocollants sont placés au fond d'un puits d'une plaque de culture. Ces inserts ont la particularité d'être composés de deux chambres distinctes séparées par une membrane imperméable de 500 μ m d'épaisseur. Chacune des deux chambres est ensemencée avec des cellules d'un même type cellulaire et cultivées jusqu'à confluence, L'insert est alors retiré avec une pince stérile créant ainsi une zone acellulaire de 400 μηι de large entre les deux tapis cellulaires. Les cellules sont ensuite traitées avec une solution à 10 ^"6 M ou à 3.10 ^"6 M de peptide SEQ ID n°5 ajouté au milieu de culture, avec renouvellement du peptide toutes les 24 heures. Des observations en microscopie à contraste de phase (Olympus CK40 microscope X5 connecté à un appareil photo Olympus E-510) ont été réalisées à différents temps (0, 6, 24, 30 et 48 heures) jusqu'à ce que le processus de prolifération et de migration aboutisse au comblement de la brèche.

Résultats : Les observations microscopiques montrent un comblement total de la brèche après 30 heures par les kératinocytes humains traités par le peptide SEQ ID n°5 à 10 ^"6 M. Dans le même temps, dans les conditions contrôle, la brèche cellulaire n'est pas encore comblée.

Le comblement total de la brèche apparaît après 48 heures pour les fibroblastes humains traités par le peptide SEQ ID n°5 à 10 ^"6 M. Dans le même temps, dans les conditions contrôle, la brèche cellulaire n'est pas encore comblée.

L'effet du peptide est dose-dépendant, puisque le comblement de la brèche est plus rapide lorsque les cellules sont traitées par le SEQ ID n°5 à 3.10 ^"6 M.

Conclusions : Les fibroblastes et les kératinocytes humains normaux (KHN) ont réinvesti plus rapidement la brèche lorsqu'ils étaient cultivés en présence de peptide SEQ ID n°5, en comparaison des conditions contrôle.

Le peptide SEQ ID n°5 stimule la prolifération et la migration des fibroblastes et des KHN, favorisant ainsi la régénération de la peau.

Exemple 7 : Préparation de compositions

1 - Crème protection solaire:

45°C en augmentant l'agitation. La phase D est ensuite additionnée lorsque la température se situe en dessous de 40°C. Le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25°C sous vive agitation.

2-Crème remodelante visage :

Noms Noms lNCI % commerciaux massique

IMHII

Montanov 68 Cetearyl Alcohol (and) Cetearyl Glucoside 6,00

Squalane Squalane 3,00

Cetiol SB 45 Butyrospermum Parkii ( Shea Butter) 2,00

Préparer et fondre la phase A à 65-70°C. Chauffer la phase C à 65-70°C. La phase B est ajoutée à la phase A juste avant d'émulsionner A dans B. A environ 45°C, le carbomer est neutralisé par addition de la phase D. La phase E est ensuite additionnée sous légère agitation et le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25°C. La phase F est alors additionnée si souhaité.

Préparer la phase A et chauffer à 75 °C sous agitation. Préparer la phase B en dispersant le carbopol, puis la gomme xanthane sous agitation. Laisser reposer. Chauffer à 75°C. ^<

A température, émulsionner A dans B sous agitation rotor-stator. Neutraliser avec la phase C sous agitation rapide. Après refroidissement à 40°C, additionner la phase D, puis la phase E. Le refroidissement est poursuivi sous agitation légère et la phase F rajoutée.