本明細書において「細胞膨張化致死毒」� ��は、cytolethal distending toxin (CDTまたはCLDT)と 呼ばれる、蛋白性のA-B型ホロトキシンのグル ープに属する毒素因子を指す。このものは、 ほかに細胞膨化致死毒(素)、細胞膨潤化致死� ��(素)などと称されることもある。細胞膨張� �致死毒は、A,B,Cの3ユニットからなるサブユ� �ット構造を有し、Bサブユニットが毒素活性� ��心ユニットであり、AおよびBサブユニット� �細胞接着に関わっていると考えられている� �細胞に作用すると細胞が大きく膨らむ等の� �形が生じ、最終的に細胞死を引き起こす。� �素原性大腸菌が産生する易熱性エンテロト� �シン(LT)などを実験的に細胞に作用させた場� ��にも細胞が大きく膨らむ等の変形が見られ� ��が、毒素を取り除いた場合、細胞は回復し� ��致死することはない。しかしながら、CDTを� ��去しても細胞は回復せず、死に至る。

 本明細書において用いられる「ポリヌク� ��オチド」とは、複数の塩基または塩基対か� ��なるリボヌクレオチドもしくはデオキシヌ� ��レオチドの重合体を意味する。ポリヌクレ� ��チドは、RNA、一本鎖型および二本鎖型のDNA� ��含む。ポリヌクレオチドは、天然に存在す� ��状態から修飾されていないもの、および修� ��されているものの双方を含む意である。修� ��された塩基としては、例えば、トリチル化� ��れた塩基およびイノシンのような特殊な塩� ��がある。

 本明細書において用いられる「ポリペプ� ��ド」は、複数のアミノ酸からなる重合体を� ��味する。従って、オリゴペプチドおよびタ� ��パク質もまた、ポリペプチドの概念に含ま� ��る。ポリペプチドは、天然に存在する状態� ��ら修飾されていないもの、および修飾され� ��いるものの双方を含む意である。修飾とし� ��は、アセチル化、アシル化、ADP-リボシル化 、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分 の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチ ド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体 の共有結合、ホスファチジルイノシトールの 共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合の 形成、脱メチル化、共有架橋の形成、シスチ ンの形成、ピログルタメートの形成、ホルミ ル化、γ-カルボキシル化、グリコシル化、GPI アンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、 メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク 質分解処理、リン酸化、プレニル化、ラセミ 化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化の ようなタンパク質へのアミノ酸の転移RNA媒介 付加、ユビキチン化などが含まれる。

 本明細書において用いられる「変異」と� ��、アミノ酸配列におけるアミノ酸の変化ま� ��は塩基配列における塩基の変化(すなわち単 一または複数のアミノ酸またはヌクレオチド 置換、欠失、付加または挿入)を指す。従っ� �、本明細書において用いられる「変異体」� �、一つ以上のアミノ酸が変化しているアミ� �酸配列または一つ以上の塩基が変化してい� �塩基配列を指す。この変異体の塩基配列の� �化は、基準ポリヌクレオチドによってコー� �されるポリペプチドのアミノ酸配列を変更� �ても、しなくてもよい。変異体はアレリッ� �変異体のように天然に存在するものでも、� �然に存在することが知られていない変異体� �あってもよい。変異体は、置換されたアミ� �酸が類似の構造的または化学的特性を有す� �保存的変化を有しうる。まれに、変異体は� �非保存的置換を有しうる。生物学的または� �疫学的活性を阻害することなく、いずれの� �およびどれほど多くのアミノ酸残基を置換� �挿入、または欠失するかを決定する手引き� �、当技術分野において周知のコンピュータ� �プログラム、例えばDNAスター・ソフトウェ� �を用いて発見することができる。

 「欠失」はその中で1つ以上のアミノ酸ま たはヌクレオチド残基がそれぞれ、天然に存 在する細胞膨張化致死毒ポリペプチドのアミ ノ酸配列またはヌクレオチド配列と比較して 存在しない、アミノ酸またはヌクレオチド配 列のいずれかの変化である。

 「挿入」または「付加」は、天然に存在� ��る細胞膨張化致死毒ポリペプチドのアミノ� ��配列またはヌクレオチド配列と比較して、� ��れぞれアミノ酸またはヌクレオチド残基1つ 以上が付加されたアミノ酸またはヌクレオチ ド配列の変化である。

 「置換」とは、天然に存在する細胞膨張� ��致死毒ポリペプチドのアミノ酸配列または� ��クレオチド配列と比較して、アミノ酸また� ��ヌクレオチド1つ以上がそれぞれ異なるアミ ノ酸またはヌクレオチドに入れ替えられたア ミノ酸またはヌクレオチド配列の変化である 。

 本明細書において用いられる「ハイブリ� ��イズ」とは、核酸鎖が塩基対形成を通じて� ��補鎖と結合するプロセスを意味する。

 本明細書において「検出」とは、定性お� ��び定量の両方の意味を含む。また、「定量� ��には半定量も含まれる。

<被検試料中のカンピロバクター属細菌の� �在の検出>
 本発明は、被検試料中のカンピロバクター� ��細菌の存在の検出方法を提供する。被検試� ��中のカンピロバクター属細菌の存在の検出� ��、カンピロバクター感染症の診断、カンピ� ��バクター属細菌に汚染された食品の迅速診� ��、食品加工工程のバリデーション、食中毒� ��生時における起因菌の同定など種々の目的� ��おいて有用である。

 本発明の検出方法の第一の態様は、被験� ��料中のカンピロバクター属細菌を検出する� ��法であって、カンピロバクター属細菌のcdtB ゲノムDNAまたはmRNAに特異的に結合しうる2つ� ��ポリヌクレオチドからなる「(a)配列番号:1� �よび2記載の配列からなるプライマー対によ� ��て増幅されるカンピロバクター属細菌のcdtB ゲノムDNAの領域、または増幅される前記ゲノ ムDNAの領域に相当するmRNAの領域を増幅しう� �プライマー対」および「(b)配列番号:3および 4記載の配列からなるプライマー対によって� �幅されるカンピロバクター属細菌のcdtBゲノ� ��DNAの領域、または増幅される前記ゲノムDNA� ��領域に相当するmRNAの領域を増幅しうるプラ イマー対」のうちいずれか1以上のプライマ� �対を用いて被験試料に対し核酸増幅反応を� �う工程を含む方法である。

 上記方法は、C.ジェジュニおよびC.フィー タスについて、それぞれのcdtBゲノムDNAまた� �mRNAに特異的な領域を増幅することにより、� ��菌を検出する方法である。上記方法におい� ��使用するプライマーとしては、C.ジェジュ� �については、第一に「配列番号:1および2記� �の配列からなるプライマー対(実施例プライ� ��ー:Cj-CdtBU5およびCj-CdtBR6)」を挙げることが� �きるが、上記配列そのものに限られず、C.ジ ェジュニのcdtBゲノムDNAまたはmRNAに特異的に� ��合しうる2つのポリヌクレオチドからなるプ ライマー対であって、C.ジェジュニのcdtBゲノ ムDNAを鋳型として「配列番号:1および2記載の 配列からなるプライマー対」によって増幅さ れる領域または相当するmRNA領域を増幅可能� �プライマー対であれば、他の配列であって� �使用することができる。本明細書において� �特異的に結合」とは、「結合」から、偶発� �な結合(非特異的な結合)を排除する意図であ る。「配列番号:1および2記載の配列からなる プライマー対」が結合するC.ジェジュニ 81-17 6株のcdtBゲノムDNA(配列番号:31)の位置を図5に� ��す。また配列番号:1および2記載の配列から� ��るプライマー対によって、C.ジェジュニ ATC C33560株(DDBJ Accession No.:AB274783)またはC.ジェジ ュニ ATCC43432株(DDBJ Accession No.:AB274784)のゲノ ムDNAを増幅すると、714bpの増幅産物が得られ� ��。

 また、C.フィータスについては、第一に� �配列番号:3および4記載の配列からなるプラ� �マー対(実施例プライマー:Cf-CdtBU6およびCf-Cdt BR3)」を挙げることができるが、上記配列そ� �ものに限られず、C.フィータスのcdtBゲノムDN Aを鋳型として「配列番号:3および4記載の配� �からなるプライマー対」によって増幅され� �領域または相当するmRNA領域を増幅可能なプ� ��イマー対であれば、他の配列であっても使� ��することができる。「配列番号:3および4記� ��の配列からなるプライマー対」が結合するC .フィータス Co1-187株のcdtBゲノムDNA(配列番号 :32)の位置を図6に示す。また配列番号:3およ� �4記載の配列からなるプライマー対によって� ��C.フィータス ATCC27374株(DDBJ Accession No.:AB274 802)、ATCC19438株(DDBJ Accession No.:AB274803)のゲノ� ��DNAを増幅すると、553bpの増幅産物が得られ� �。

 本発明の方法は、「(a)配列番号:1および2� ��載の配列からなるプライマー対によって増� ��されるカンピロバクター属細菌のcdtBゲノム DNAの領域、または増幅される前記ゲノムDNAの 領域に相当するmRNAの領域を増幅しうるプラ� �マー対」と「(b)配列番号:3および4記載の配� �からなるプライマー対によって増幅される� �ンピロバクター属細菌のcdtBゲノムDNAの領域� ��または増幅される前記ゲノムDNAの領域に相� ��するmRNAの領域を増幅しうるプライマー対」 とを別々に用いてもよいが、単一の核酸増幅 反応において両方のプライマー対を同時に使 用することもできる。実施例のように、複数 のPCRプライマーを単一の反応系で使用するPCR は、マルチプレックスPCR法と呼ばれ、PCR産物 を電気泳動し、バンドのサイズを見ることで 複数の菌種を同時に鑑別することができる。 本発明は、このマルチプレックスPCR法を代表 とする、複数の核酸領域の増幅に好適に用い られるプライマーおよびその組み合わせを用 いた核酸増幅法によるカンピロバクター属細 菌の検出方法を提供する。本発明における核 酸増幅の方法は、目的とする増幅物が得られ る限り種類は問わない。PCR法は、本発明にお いて好ましい核酸増幅法の具体例である。本 発明の方法は、リアルタイムPCR法などによっ て、定量法として実施してもよい。

 本発明の方法は、上記「(a)配列番号:1お� �び2記載の配列からなるプライマー対によっ� ��増幅されるカンピロバクター属細菌のcdtBゲ ノムDNAの領域、または増幅される前記ゲノム DNAの領域に相当するmRNAの領域を増幅しうる� �ライマー対」および/または「(b)配列番号:3� �よび4記載の配列からなるプライマー対によ� ��て増幅されるカンピロバクター属細菌のcdtB ゲノムDNAの領域、または増幅される前記ゲノ ムDNAの領域に相当するmRNAの領域を増幅しう� �プライマー対」とともにC.コリのcdtBゲノムDN Aに特異的な領域を増幅するプライマー:「(c)� ��列番号:5および6記載の配列からなるプライ� ��ー対によって増幅されるカンピロバクター� ��細菌のcdtBゲノムDNAの領域、または増幅され る前記ゲノムDNAの領域に相当するmRNAの領域� �増幅しうるプライマー対」を単一の核酸増� �反応系において使用することができる。す� �わち本発明は、被験試料中のC.ジェジュニ、 C.フィータス、およびC.コリの3種カンピロバ� ��ター属細菌を同時に検出可能な方法を提供� ��る。本発明者等は、上記3種のプライマーを 同時に用いて核酸増幅反応を行い、C.ジェジ� ��ニ、C.フィータス、およびC.コリの3種カン� �ロバクター属細菌を一度に検出可能である� �とを確認した。実施例に示すように、本発� �の方法は、目的とするカンピロバクター属� �菌を確実に検出する一方、他の種のカンピ� �バクター属細菌を誤検出することなく、極� �て特異性が高い方法である。「配列番号:5お よび6記載の配列からなるプライマー対(実施� ��プライマー:Cc-CdtBU5およびCc-CdtBR5)」が結合� �るC.コリ Co1-243株のcdtBゲノムDNA(配列番号:33) の位置を図7に示す。

 本発明の方法は、上述した、C.ジェジュ� �、C.フィータス、C.コリに対する特異的プラ� ��マーを用いて核酸増幅反応を行う工程の後� ��、「カンピロバクター属細菌のcdtBゲノムDNA またはmRNAの増幅断片の有無または該増幅断� �の分子量から、カンピロバクター属細菌の� �在を判定する工程」または「カンピロバク� �ー属細菌のcdtBゲノムDNAまたはmRNAの増幅断片 量を定量する工程」を含む。

 また本発明の方法は、C.ジェジュニ、C.フ ィータス、C.コリに対する特異的プライマー� ��用いて核酸増幅反応を行う工程の前または� ��に、「カンピロバクター属細菌のcdtA~Cのい� ��れかのゲノムDNAまたはmRNAに共通に結合しう る2つのポリヌクレオチドからなる共通プラ� �マー対を用いて核酸増幅反応を行う工程」� �行うことができる。上記「カンピロバクタ� �属細菌のcdtA~CのいずれかのゲノムDNAまたはmR NAに共通に結合しうる2つのポリヌクレオチド からなる共通プライマー対」とは、C.ジェジ� ��ニ、C.フィータス、およびC.コリの全ての細 菌について、cdtA、cdtB、およびcdtCのいずれか のcdtをコードするゲノムDNAを増幅しうるプラ イマー対、またはC.ジェジュニ、C.フィータ� �、およびC.コリの全ての細菌について、cdtA� �cdtB、およびcdtCのいずれかのcdtをコードする mRNAを増幅しうるプライマー対を意味する。� �のようなプライマーの具体例としては、本� �実施例で使用した配列番号:7および8に記載� �配列からなるプライマー対(実施例cdtB共通プ ライマー:C-CdtBcom1および(C-CdtBcom2)を挙げるこ� ��ができる。上記プライマー対のほか、配列� ��号:9(WO2005/054472 配列番号:7)および10(WO2005/054 472 配列番号:8)に記載の配列からなるプライ� ��ー対(cdtB共通プライマー対)、配列番号:11(WO2 005/054472 配列番号:47)、12(WO2005/054472 配列番� �:48)、配列番号:13(WO2005/054472 配列番号:49)、� �よび14(WO2005/054472 配列番号:50)に記載の4配列 から2つの配列を組み合わせてなるプライマ� �対(cdtB共通プライマー対)、配列番号:15(WO2005/ 054472 配列番号:64)および16(WO2005/054472 配列番 号:65)に記載の配列からなるプライマー対(cdtA 共通プライマー対)、配列番号:17(WO2005/054472 � ��列番号:66)および18(WO2005/054472 配列番号:67)� �記載の配列からなるプライマー対(cdtC共通プ ライマー対)、も好適に使用できる共通プラ� �マー対である。上記共通プライマー対がC.ジ ェジュニ、C.フィータス、およびC.コリの全� �の細菌について、cdtA、cdtB、およびcdtCのい� �れかのcdtをコードするゲノムDNAを増幅しう� �ことについては、WO2005/054472において詳細に� ��明されている。上記「カンピロバクター属� ��菌のcdtA-CゲノムDNAまたはmRNAに共通に結合し うる2つのポリヌクレオチドからなる共通プ� �イマー対」を用いた核酸増幅反応を、C.ジェ ジュニ、C.フィータス、C.コリに対する特異� �プライマーを用いた核酸増幅反応と組み合� �せて行うことにより、カンピロバクター属� �菌検出における感度向上が期待できる。上� �したとおり、上記プライマー対は少なくと� �C.コリ、C.ジェジュニ、およびC.フィータス3� ��種の細胞膨張化致死毒をコードするゲノムD NAまたはmRNAを共通して増幅する共通プライマ ー対である。上記共通プライマー対は、上記 3菌種のみならず、その他のカンピロバクタ� �属細菌の細胞膨張化致死毒をコードするゲ� �ムDNAまたはmRNAを増幅すると期待できる。ま� ��同様に、該プライマー対と同一のゲノムDNA� ��域または相当するmRNA領域を増幅しうるプラ イマー対についても、上記3菌種を共通して� �ゲノム領域または相当するmRNA領域を増幅す� ��ことができ、その他のカンピロバクター属� ��菌の該ゲノム領域または相当するmRNA領域を 増幅することができると考えられる。

 本発明の方法の第二の態様は、被験試料� ��のカンピロバクター属細菌を検出する方法� ��あって、カンピロバクター属細菌のcdtAゲノ ムDNAまたはmRNAに特異的に結合しうる2つのポ� ��ヌクレオチドからなるプライマー対「(a)配� ��番号:19および20記載の配列からなるプライ� �ー対によって増幅されるカンピロバクター� �細菌のcdtAゲノムDNAの領域、または増幅され� ��前記ゲノムDNAの領域に相当するmRNAの領域を 増幅しうるプライマー対」を用いて被験試料 に対し核酸増幅反応を行う工程を含む方法、 である。上記方法は、C.コリのcdtAゲノムDNAま たはmRNAに特異的に結合するプライマー対に� �ってcdtAゲノムDNAまたはmRNAの一部を増幅し、 増幅断片の有無または増幅断片の分子量から 、C.コリの検出を可能とする。上記プライマ� ��の具体例は、「配列番号:19および20に記載� �配列からなるプライマー対(実施例プライマ� ��:Cc-CdtAU1およびCc-CdtAR1)」である。上記第二� �態様の方法は、上記プライマー対(a)に加え� �カンピロバクター属細菌のcdtAゲノムDNAまた� ��mRNAに特異的に結合しうる2つのポリヌクレ� �チドからなるプライマー対「(b)配列番号:21� �よび22記載の配列からなるプライマー対(実� �例プライマー:Cj-CdtAU2およびCj-CdtAR2)によって 増幅されるカンピロバクター属細菌のcdtAゲ� �ムDNAの領域、または増幅される前記ゲノムDN Aの領域に相当するmRNAの領域を増幅しうるプ� ��イマー対」、および/または「(c)配列番号:23 および24記載の配列からなるプライマー対(実 施例プライマー: Cf-CdtAU1およびCf-CdtAR1)によ� �て増幅されるカンピロバクター属細菌のcdtA� ��ノムDNAの領域、または増幅される前記ゲノ� ��DNAの領域に相当するmRNAの領域を増幅しうる プライマー対」を同時に使用することにより 、C.コリと同時に、C.ジェジュニおよびC.フィ ータスのいずれかまたは両方をも検出するこ とが可能である。

 本発明の方法は、上述した、C.ジェジュ� �、C.フィータス、C.コリに対する特異的プラ� ��マーを用いて核酸増幅反応を行う工程の後� ��、「カンピロバクター属細菌のcdtAゲノムDNA またはmRNAの増幅断片の有無または該増幅断� �の分子量から、カンピロバクター属細菌の� �在を判定する工程」または「カンピロバク� �ー属細菌のcdtAゲノムDNAまたはmRNAの増幅断片 量を定量する工程」を含む。本発明における 増幅断片は、DNAでもRNAでもよい。

 本発明の方法の第三の態様は、被験試料� ��のカンピロバクター属細菌を検出する方法� ��あって、カンピロバクター属細菌のcdtCゲノ ムDNAまたはmRNAに特異的に結合しうる2つのポ� ��ヌクレオチドからなるプライマー対「(a)配� ��番号:25および26記載の配列からなるプライ� �ー対(実施例プライマー:Cc-CdtCU1およびCc-CdtCR1 )によって増幅されるカンピロバクター属細� �のcdtCゲノムDNAの領域、または増幅される前� ��ゲノムDNAの領域に相当するmRNAの領域を増幅 しうるプライマー対」を用いて被験試料に対 し核酸増幅反応を行う工程を含む方法、であ る。上記方法は、C.コリのcdtCゲノムDNAまたは mRNAに特異的に結合するプライマー対によっ� �cdtCゲノムDNAまたはmRNAの一部を増幅し、増幅 断片の有無または増幅断片の分子量から、C.� ��リの検出を可能とする。上記第三の態様の� ��法は、上記プライマー対(a)に加え、カンピ� ��バクター属細菌のcdtAゲノムDNAまたはmRNAに� �異的に結合しうる2つのポリヌクレオチドか� ��なるプライマー対「(b)配列番号:27および28� �載の配列からなるプライマー対(実施例プラ� ��マー:Cj-CdtCU1およびCj-CdtCR2)によって増幅さ� �るカンピロバクター属細菌のcdtCゲノムDNAの� ��域、または増幅される前記ゲノムDNAの領域� ��相当するmRNAの領域を増幅しうるプライマー 対」、および/または「(c)配列番号:29および30 記載の配列からなるプライマー対(実施例プ� �イマー:Cf-CdtCU2およびCf-CdtCR1)によって増幅さ れるカンピロバクター属細菌のcdtCゲノムDNA� �領域、または増幅される前記ゲノムDNAの領� �に相当するmRNAの領域を増幅しうるプライマ� ��対」を同時に使用することにより、C.コリ� �同時に、C.ジェジュニおよびC.フィータスの� ��ずれかまたは両方をも検出することが可能� ��ある。

 本発明の方法は、上述した、C.ジェジュ� �、C.フィータス、C.コリに対する特異的プラ� ��マーを用いて核酸増幅反応を行う工程の後� ��、「カンピロバクター属細菌のcdtCゲノムDNA またはmRNAの増幅断片の有無または該増幅断� �の分子量から、カンピロバクター属細菌の� �在を判定する工程」または「カンピロバク� �ー属細菌のcdtCゲノムDNAまたはmRNAの増幅断片 量を定量する工程」を含む。

 本発明の方法により、ヒトまたは動物の� ��種生体試料(例えば、糞便、直腸等のスワブ 検体)、食品中のC.コリ、C.ジェジュニ、およ� ��C.フィータスの存在について、簡便かつ迅� �に、菌種毎に知ることができる。本発明の� �法を実施する際は、カンピロバクター属細� �の存在が疑われる生体試料や食品等から当� �者に周知のポリヌクレオチド調製方法(ボイ� ��法等)によってポリヌクレオチドを調製し、 得られたポリヌクレオチドを本発明の被験試 料とすることができる。

<キット>
 本発明は、上記本発明の検出方法に用いる� ��めのキットを提供する。これらキットは、� ��発明のプライマー対の他、使用説明書を含� ��ものである。さらなる他の要素、例えば、� ��光プローブ、インターカレーター、ポリヌ� ��レオチド調製用の試薬、陽性または陰性プ� ��イマー対などを含んでいてもよい。

 本発明のキットの第一の態様は、「(a)配� ��番号:1および2記載の配列からなるプライマ� ��対によって増幅されるカンピロバクター属� ��菌のcdtBゲノムDNAの領域、または増幅される 前記ゲノムDNAの領域に相当するmRNAの領域を� �幅しうるプライマー対」、および「(b)配列� �号:3および4記載の配列からなるプライマー� �によって増幅されるカンピロバクター属細� �のcdtBゲノムDNAの領域、または増幅される前� ��ゲノムDNAの領域に相当するmRNAの領域を増幅 しうるプライマー対」のうち、少なくとも1� �プライマー対を含むキットである。上記プ� �イマー対(a)はC.ジェジュニについて、上記プ ライマー対は(b)C.フィータスについて、それ� ��れのcdtBゲノムDNAまたはmRNAに特異的な領域(� ��徴的に存在する領域)を増幅する。

 上記プライマーとしては、C.ジェジュニ� �ついては、第一に「配列番号:1および2記載� �配列からなるプライマー対(実施例プライマ� ��:Cj-CdtBU5およびCj-CdtBR6)」を挙げることがで� �るが、上記配列そのものに限られず、C.ジェ ジュニのcdtBゲノムDNAまたはmRNAを鋳型として� ��配列番号:1および2記載の配列からなるプラ� ��マー対」によって増幅される領域または相� ��するmRNA領域を増幅可能なプライマー対であ れば、他の配列のポリヌクレオチドであって も使用することができる。

 同様に、C.フィータスについては、第一� �「配列番号:3および4記載の配列からなるプ� �イマー対(実施例プライマー:Cf-CdtBU6およびCf- CdtBR3)」を挙げることができるが、上記配列� �のものに限られず、C.フィータスのcdtBゲノ� �DNAまたはmRNAを鋳型として「配列番号:3およ� �4記載の配列からなるプライマー対」によっ� ��増幅される領域または相当するmRNA領域を増 幅可能なプライマー対であれば、他の配列の ポリヌクレオチドであっても使用することが できる。

 このような本発明のプライマー対を構成� ��る「他の配列のポリヌクレオチド」は、C.� �ェジュニまたはC.フィータスのcdtBゲノムDNA� �たはmRNAに相補的な、少なくとも15塩基また� �20塩基以上の鎖長を有するポリヌクレオチド 、例えば、15~100塩基、20~100塩基、15~35塩基長� ��20~35塩基長のポリヌクレオチドである。こ� �で「相補鎖」とは、A:T(ただしRNAの場合は U) 、G:Cの塩基対からなる2本鎖核酸の一方の鎖� �対する他方の鎖を指す。また、「相補的」� �は、少なくとも15個の連続したヌクレオチド 領域で完全に相補配列である場合に限られず 、少なくとも70%、好ましくは少なくとも80%、 より好ましくは90%、さらに好ましくは95%以上 の塩基配列上の相同性を有すればよい。相同 性を決定するためのアルゴリズムは本明細書 に記載したものの他、当業者が相同性を決定 するために通常使用するアルゴリズムを使用 することができる。上記「本発明のプライマ ー対を構成する他のポリヌクレオチド」は、 ハイブリダイゼーション条件下、好ましくは ストリンジェントな条件下で、cdtBゲノムDNA� �ハイブリダイズし、他のポリペプチドをコ� �ドするDNAとはハイブリダイズしない。また� �発明のプライマー対は、通常のハイブリダ� �ゼーション条件下、好ましくはストリンジ� �ントな条件下で、各種カンピロバクター属� �菌のcdtBゲノムDNAに共通する領域にはハイブ� ��ダイズしない。上記「本発明のプライマー� ��を構成する他の配列のポリヌクレオチド」� ��、例えば、配列番号:1、2、配列番号:3およ� �4のいずれかの記載の塩基配列に1または複数 の塩基(例えば1~10個または1~5個、好ましくは1 ~4個、より好ましくは1~3個、最も好ましくは1 または2個の塩基)が付加、欠失、置換および/ または挿入した塩基配列からなる、少なくと も15塩基または20塩基以上の鎖長を有するポ� �ヌクレオチドである。

 上記「本発明のプライマー対を構成する� ��の配列のポリヌクレオチド」は、当業者で� ��れば、上記配列番号に記載のポリヌクレオ� ��ド配列、および/または公知cdtBゲノムDNA配� �にもとづき、適宜設計し、合成により調製� �ることができる。また、上記のように調製� �たポリヌクレオチドが、変異前のプライマ� �対と同一のゲノムDNA領域を増幅しうるかは� �該調製した変異プライマーを用いて核酸増� �反応を行い、その増幅産物を分析すること� �より、簡便に評価することができる。

 本発明のキットは、C.ジェジュニcdtBゲノ� ��DNAまたはmRNAに特異的な領域を増幅する上記 プライマー対(a)、およびC.フィータスcdtBゲノ ムDNAまたはmRNAに特異的な領域を増幅する上� �プライマー対に加え、C.コリcdtBゲノムDNAま� �はmRNAに特異的な領域を増幅するプライマー� ��を含むことができる。このように、C.ジェ� �ュニ、C.フィータス、C.コリの3種それぞれに ついて特異的なプライマー対をすべて含む本 発明のキットは、マルチプレックスPCR法等に より、上記カンピロバクター属細菌の混合感 染を一度に検出することができる。上記C.コ� ��cdtBゲノムDNAに特異的な領域を増幅するプラ イマー対としては、「配列番号:5および6記載 の配列からなるプライマー対(実施例プライ� �ー:Cc-CdtBU5およびCc-CdtBR5)」、および該「配列 番号:5および6記載の配列からなるプライマー 対」によって増幅されるカンピロバクター属 細菌のcdtBゲノムDNAの領域、または増幅され� �前記ゲノムDNAの領域に相当するmRNAの領域を� ��幅しうるその他のプライマー対を挙げるこ� ��ができる。

 本発明のキットの第二の態様は、本発明� ��プライマー対として、「(a):配列番号:19およ び20記載の配列からなるプライマー対(実施例 プライマー:Cc-CdtAU1およびCc-CdtAR1)によって増� ��されるカンピロバクター属細菌のcdtAゲノム DNAの領域、または増幅される前記ゲノムDNAの 領域に相当するmRNAの領域を増幅しうるプラ� �マー対」を含むキットである。上記プライ� �ー対(a)は、C.コリのcdtAに特異的に結合する� �上記第二の態様のキットは、上記プライマ� �対(a)に加え、プライマー対「(b)配列番号:21� �よび22記載の配列からなるプライマー対(実� �例プライマー:Cj-CdtAU2およびCj-CdtAR2)によって 増幅されるカンピロバクター属細菌のcdtAゲ� �ムDNAの領域、または増幅される前記ゲノムDN Aの領域に相当するmRNAの領域を増幅しうるプ� ��イマー対」、および/または「(c)配列番号:23 および24記載の配列からなるプライマー対(実 施例プライマー:Cf-CdtAU1およびCf-CdtAR1)によっ� ��増幅されるカンピロバクター属細菌のcdtAゲ ノムDNAの領域、または増幅される前記ゲノム DNAの領域に相当するmRNAの領域を増幅しうる� �ライマー対」を含むことができる。上記プ� �イマー対(a)に加え、プライマー対(b)および/� ��たは(c)を含むキットは、マルチプレックスP CR法等により、上記カンピロバクター属細菌� ��混合感染を一度に検出することができると� ��えられる。

 本発明のキットの第三の態様は、本発明� ��プライマー対として、「(a)配列番号:25)およ び26記載の配列からなるプライマー対(実施例 プライマー:Cc-CdtCU1およびCc-CdtCR1)によって増� ��されるカンピロバクター属細菌のcdtCゲノム DNAの領域、または増幅される前記ゲノムDNAの 領域に相当するmRNAの領域を増幅しうるプラ� �マー対」を含むキットである。上記プライ� �ー対(a)は、C.コリのcdtCに特異的に結合する� �上記第三の態様のキットは、上記プライマ� �対(a)に加え、プライマー対「(b)配列番号:27� �よび28記載の配列からなるプライマー対(実� �例プライマー:Cj-CdtCU1およびCj-CdtCR2)によって 増幅されるカンピロバクター属細菌のcdtCゲ� �ムDNAの領域、または増幅される前記ゲノムDN Aの領域に相当するmRNAの領域を増幅しうるプ� ��イマー対」、および/または「(c)配列番号:29 および30記載の配列からなるプライマー対(実 施例プライマー:Cf-CdtCU2およびCf-CdtCR1)によっ� ��増幅されるカンピロバクター属細菌のcdtCゲ ノムDNAの領域、または増幅される前記ゲノム DNAの領域に相当するmRNAの領域を増幅しうる� �ライマー対」を含むことができる。上記プ� �イマー対(a)に加え、プライマー対(b)および/� ��たは(c)を含むキットは、マルチプレックスP CR法等により、カンピロバクター属細菌の混� ��感染を一度に検出することができると考え� ��れる。

 さらに本発明のキットは、上述した共通� ��ライマー対のいずれか1つ以上を含むことが できる。

 本発明のキットを用いて行う核酸増幅反� ��の種類は、目的とする増幅産物が得られる� ��り、特に制限はない。例えば、PCR(ポリメラ ーゼ連鎖反応)法(RT-PCR法を含む)、ICAN法、LAMP� ��、SDA法、LCR法、NASBA法等、公知の核酸増幅� �応の中から選択することができる。好適な� �法としては、PCR法を示すことができる。

 本発明のキットは、上記プライマー対およ� ��使用説明書の他に、他の構成要素を含むこ� ��ができる。他の構成要素として、たとえば� ��陽性プライマー、陰性プライマー、ポリヌ� ��レオチド調製用試薬、蛍光標識プローブ等� ��含むことができるが、これらに限定されな� ��。陽性プライマーは、当業者であればカン� ��ロバクター属細菌の公知配列から適宜設計� ��て作ることができる。カンピロバクター属� ��菌の公知配列はデータベースから容易に入� ��でき、例えば、C.ジェジュニ ATCC 33560株の1 6SrRNA配列はアクセッション番号:M59298(配列番� ��:34)によって、C.コリ ATCC 33559株16SrRNA配列� �アクセッション番号:M59073(配列番号:35)によ� �て、C.フィータス ATCC 27374株16SrRNA配列はア� ��セッション番号:M65012(配列番号:36)によって� ��入手可能である。
 なお本明細書において引用された全ての先� ��技術文献は、参照として本明細書に組み入� ��られる。