Compuestos de Ia vitamina D deuterados

Sector de Ia técnica

La invención se dirige a compuestos de fórmula I caracterizados por ser derivados deuterados de las vitaminas D ₂ y D ₃ , a procedimientos para Ia obtención de dichos compuestos y a intermedios útiles en su síntesis. Estos compuestos de fórmula I son útiles como patrones internos en métodos de cuantificación de vitamina D, de sus metabolitos y/o análogos por espectrometría de masas. Estado de Ia técnica Las etapas de Ia activación metabólica y las funciones de Ia vitamina D han sido descubiertas gracias al empleo de metabolitos y análogos de Ia vitamina D que incorporaban trazadores radiactivos.

Los metabolitos y análogos deuterados de Ia vitamina D (véase H. F. DeLuca y col., patente US 4,297,289; E. G. Baggiolini y col., patente US 4,898,855 y E. G. Baggiolini y col., patente US 5,247,123) son útiles como sustancias de referencia isotópicamente sustituidas de diferentes vitaminas D y metabolitos para su empleo en métodos de cuantificación de Ia vitamina D (de sus metabolitos y/o análogos) en plasma sanguíneo y tejidos por espectrometría de masas directa o mediante técnicas acopladas en serie (tándem) con cromatografía de gases o de líquidos. En Ia patente US 4,297,289 se preparan vitaminas con mareaje isotópico (deuterio, tritio) en una única posición, C6.

En las patentes US 4,898,855 y US 5,247,123 se preparan compuestos hexa y octadeuterados de un único metabolito de Ia vitamina D ₃ , Ia 1α,25-dihidroxivitamina D ₃ . Por otra parte, en Ia patente WO 9851678 de S. G. Reddy se reivindican 3-epivitaminas D ₃ deuteradas, aunque no concreta su preparación, y Ia metodología descrita podría ser seguida con dificultad por un experto en Ia materia.

La presente invención se dirige a compuestos con grados de deuteración elevados en los metabolitos y análogos de las vitaminas D ₃ y D ₂ , compuestos que presentan Ia cadena lateral propia de Ia vitamina, sin hidroxilo en C25, compuestos con mayor complejidad que los conocidos y compuestos con configuración epimérica en C3. Se proporciona una metodología con mayor versatilidad sintética dirigida a un amplio grupo de compuestos.

Descripción de Ia Invención

En un aspecto, Ia presente invención se dirige a compuestos de fórmula I

en donde A es un enlace sencillo, doble o triple,

M es un grupo trideuterometilo,

N es un hidrógeno, trideuterometilo, metilo, hidroxilo ó -OR, en donde R se selecciona entre los grupos metoximetilo, metoxietilo, trimetilsililetoximetilo, trimetilsililo, trietilsililo, í-butildimetilsililo, tri-/sopropilsililo, í-butildifenilsililo, dimetilfenilsililo, dimetilbencilsililo, benzoato, p-nitrobenzoato, pivalato o acetato,

R ¹ , R ² , R ³ y R ⁴ se seleccionan independientemente entre hidrógeno, hidroxilo ó -OR, en donde R se selecciona entre los grupos metoximetilo, metoxietilo, trimetilsililetoximetilo, trimetilsililo, trietilsililo, í-butildimetilsililo, tri-/sopropilsililo, t- butildifenilsililo, dimetilfenilsililo, dimetilbencilsililo, benzoato, p-nitrobenzoato, pivalato o acetato, con Ia condición de que cuando N es hidrógeno o metilo, entonces R ² es necesariamente hidroxilo.

Los compuestos de fórmula I son compuestos deuterados derivados de las vitaminas D ₂ y D ₃ , útiles como patrones internos en métodos de cuantificación de vitamina D, de sus metabolitos y/o análogos por espectrometría de masas.

En un aspecto particular, Ia invención se dirige a los siguientes compuestos de fórmula I: 26,26,26,27,27,27,28,28,28-nonadeuterovitamina D ₂ (1a), 26,26,26, 27,27,27,28,28,28-nonadeutero-25-hidroxivitamina D ₂ (1 b), 26,26,26, 27,27,27, 28,28,28-nonadeutero-1 α-hidroxivitamina D ₂ (1 c), 26,26,26, 27,27,27, 28,28,28-nonadeutero-1 α,25-dihidroxivitamina D ₂ (1d),

26,26,26, 27,27,27-hexadeutero-3-epi-1 α-hidroxivitamina D ₃ (1e), 26,26,26, 27,27,27-hexadeutero-3-epi-1 α,25-dihidroxivitamina D ₃ (1 f ), 26,26,26, 27,27,27-hexadeutero-3-epi-1 α-hidroxivitamina D ₂ (1g), 26,26,26, 27,27,27, 28,28,28-nonadeutero-3-epi-1 α-hidroxivitamina D ₂ (1 h),

26,26,26, 27,27,27-hexadeutero-3-epi-1 α,25-dihidroxivitamina D ₂ (1 i),

26,26,26, 27,27,27, 28,28,28-nonadeutero-3-epi-1 α,25-dihidroxivitamina D ₂ (1 j), 26,26,26, 27,27,27-hexadeutero-24fí,25-dihidroxivitamina D ₃ ( ^" I k), 26,26,26, 27,27,27-hexadeutero-1 α,24fí,25-trihidroxivitamina D ₃ (11). En otro aspecto, Ia invención se dirige a un procedimiento para Ia preparación de los compuestos de fórmula I, en donde A es un enlace sencillo, doble o triple, M es un grupo trideuterometilo,

N es un hidrógeno, trideuterometilo, metilo, hidroxilo ó -OR, en donde R se selecciona entre los grupos metoximetilo, metoxietilo, trimetilsililetoximetilo, trimetilsililo, trietilsililo, í-butildimetilsililo, tri-/sopropilsililo, í-butildifenilsililo, dimetilfenilsililo, dimetilbencilsililo, benzoato, p-nitrobenzoato, pivalato o acetato, R ¹ , R ² , R ³ y R ⁴ se seleccionan independientemente entre hidrógeno, hidroxilo ó -OR, en donde R se selecciona entre los grupos metoximetilo, metoxietilo, trimetilsililetoximetilo, trimetilsililo, trietilsililo, í-butildimetilsililo, tri-/sopropilsililo, t- butildifenilsililo, dimetilfenilsililo, dimetilbencilsililo, benzoato, p-nitrobenzoato, pivalato o acetato, que comprende una reacción de Wittig-Horner entre los compuestos Il y III en presencia de una base

en donde

A es un enlace sencillo, doble o triple,

M es un grupo trideuterometilo,

N es un hidrógeno, trideuterometilo, metilo, hidroxilo ó -OR, en donde R se selecciona entre los grupos metoximetilo, metoxietilo, trimetilsililetoximetilo, trimetilsililo, trietilsililo, í-butildimetilsililo, tri-/sopropilsililo, í-butildifenilsililo, dimetilfenilsililo, dimetilbencilsililo, benzoato, p-nitrobenzoato, pivalato o acetato,

R ¹ , R ² , R ³ y R ⁴ se seleccionan independientemente entre hidrógeno, hidroxilo ó -OR, en donde R se selecciona entre los grupos metoximetilo, metoxietilo, trimetilsililetoximetilo, trimetilsililo, trietilsililo, í-butildimetilsililo, tri-/sopropilsililo, t- butildifenilsililo, dimetilfenilsililo, dimetilbencilsililo, benzoato, p-nitrobenzoato, pivalato o acetato.

En otro aspecto, Ia invención se dirige a un procedimiento alternativo para Ia preparación de los compuestos de fórmula I que comprende un acoplamiento de los compuestos IV y V en presencia de un catalizador,

N

en donde

A es un enlace sencillo, doble o triple, M es un grupo trideuterometilo,

N es un hidrógeno, trideuterometilo, metilo, hidroxilo ó -OR, en donde R se selecciona entre los grupos metoximetilo, metoxietilo, trimetilsililetoximetilo, trimetilsililo, trietilsililo, í-butildimetilsililo, tri-/sopropilsililo, í-butildifenilsililo, dimetilfenilsililo, dimetilbencilsililo, benzoato, p-nitrobenzoato, pivalato, o acetato, R ³ se selecciona entre hidrógeno, hidroxilo ó -OR, en donde R se selecciona entre los grupos metoximetilo, metoxietilo, trimetilsililetoximetilo, trimetilsililo, trietilsililo, í-butildimetilsililo, tri-/so-propilsililo, í-butildifenilsililo, dimetilfenilsililo, dimetilbencilsililo, benzoato, p-nitrobenzoato, pivalato, o acetato,

X es bicloruro de indio (-InCI ₂ ), bromuro de cinc (-ZnBr) o dialcoxiboro [-B(OR) ₂ ], y σ es un SíR3, SiR ₂ R', siendo R y R' radicales alquilo o arilo, o un grupo metoximetilo. En un aspecto particular, el catalizador es seleccionado preferentemente entre tetra-kis- trifenilfosfina paladio(O), dicloruro de paladio(ll) bis-trifenilfosfina, dicloruro de paladio(ll) bis-(difenilfosfin)ferroceno, acetato de paladio(ll), dicloruro de paladio(ll)bis-acetonitrilo, tris(dibenzilidenacetona)dipaladio(0), acetilacetonato de niquel(N), o bis(1 ,5- diciclooctadienil) niquel(O).

Otro aspecto de Ia invención es el compuesto intermedio de fórmula III, útil en Ia preparación de los compuestos de fórmula I

en donde

A es un enlace sencillo, doble o triple,

M es un grupo trideuterometilo,

N es un hidrógeno, trideuterometilo, metilo, hidroxilo ó -OR, en donde R se selecciona entre los grupos metoximetilo, metoxietilo, trimetilsililetoximetilo, trimetilsililo, trietilsililo, í-butildimetilsililo, tri-/sopropilsililo, í-butildifenilsililo, dimetilfenilsililo, dimetilbencilsililo, benzoato, p-nitrobenzoato, pivalato o acetato, R ³ se selecciona independientemente entre hidrógeno, hidroxilo ó -OR, en donde R se selecciona entre los grupos metoximetilo, metoxietilo, trimetilsililetoximetilo, trimetilsililo, trietilsililo, í-butildimetilsililo, tri-/so-propilsililo, í-butildifenilsililo, dimetilfenilsililo, dimetilbencilsililo, benzoato, p-nitrobenzoato, pivalato o acetato, exceptuando el compuesto siguiente:

donde σ es un SiR ₃ , SiR ₂ R', siendo R y R' radicales alquilo o arilo, o un grupo metoximetilo.

Otro aspecto de Ia invención es el compuesto intermedio de fórmula IV, útil en Ia preparación de los compuestos de fórmula I

N

en donde

A es un enlace sencillo, doble o triple, M es un grupo trideuterometilo, N es un hidrógeno, trideuterometilo, metilo, hidroxilo ó -OR, en donde R se selecciona entre los grupos metoximetilo, metoxietilo, trimetilsililetoximetilo, trimetilsililo, trietilsililo, í-butildimetilsililo, tri-/sopropilsililo, í-butildifenilsililo, dimetilfenilsililo, dimetilbencilsililo, benzoato, p-nitrobenzoato, pivalato o acetato, R ³ se selecciona independientemente entre hidrógeno, hidroxilo ó -OR, en donde R se selecciona entre los grupos metoximetilo, metoxietilo, trimetilsililetoximetilo, trimetilsililo, trietilsililo, í-butildimetilsililo, tri-/so-propilsililo, í-butildifenilsililo, dimetilfenilsililo, dimetilbencilsililo, benzoato, p-nitrobenzoato, pivalato o acetato, X es bicloruro de indio (-InCI ₂ ), bromuro de cinc (-ZnBr) o dialcoxiboro [-B(OR) ₂ ]. Otro aspecto de Ia invención son los compuestos de fórmula Vl, VII, VIII, IX, X y Xl, intermedios útiles en Ia preparación de los compuestos de fórmula I

compuestos de fórmula Vl

en donde

A es un enlace sencillo, doble o triple, M es un grupo trideuterometilo,

N es un hidrógeno, trideuterometilo, metilo, hidroxilo ó -OR, en donde R se selecciona entre los grupos metoximetilo, metoxietilo, trimetilsililetoximetilo, trimetilsililo, trietilsililo, í-butildimetilsililo, tri-/sopropilsililo, í-butildifenilsililo, dimetilfenilsililo, dimetilbencilsililo, benzoato, p-nitrobenzoato, pivalato o acetato, R ¹ es un grupo hidroxilo, trialquilsililoxi o benzoato,

R ² es hidrógeno, un grupo hidroxilo, trialquilsililoxi; o R ¹ y R ² conjuntamente son halometileno,

R ³ se selecciona entre hidrógeno, hidroxilo ó -OR, en donde R se selecciona entre los grupos metoximetilo, metoxietilo, trimetilsililetoximetilo, trimetilsililo, trietilsililo, í-butildimetilsililo, tri-/so-propilsililo, í-butildifenilsililo, dimetilfenilsililo, dimetilbencilsililo, benzoato, p-nitrobenzoato, pivalato, o acetato, exceptuando el compuesto siguiente:

donde σ es un SiR ₃ , SiR ₂ R', siendo R y R' radicales alquilo o arilo, o un grupo metoximetilo. compuestos de fórmula VII

en donde

A es un enlace sencillo o doble, M es un grupo trideuterometilo,

R ¹ es un grupo hidroxilo, trialquilsililoxi o benzoato,

R ² es hidrógeno, o R ¹ y R ² conjuntamente pueden ser un grupo carbonilo o halometileno. Los compuestos de fórmula VIII

en donde

A es un enlace sencillo, doble o triple, M es un grupo trideuterometilo, Y es un grupo hidroxilo, carbamato o dietilfosfato, R ¹ es un grupo hidroxilo, trialquilsililoxi o benzoato,

R ² es hidrógeno, o R ¹ y R ² conjuntamente pueden ser un grupo carbonilo o halometileno. Los compuestos de fórmula IX, X, y Xl

en donde

Z es un oxígeno o un grupo dibromometileno, X es un hidrógeno, un grupo hidroxilo o un grupo trialquilsililoxi, σ es un SiR ₃ , SiR ₂ R', siendo R y R' radicales alquilo o arilo, o un grupo metoximetilo. Descripción detallada de Ia Invención Los compuestos de fórmula I son preparados mediante una síntesis convergente a través de cualquiera de los dos procedimientos que se muestran en el esquema 1.

Esquema 1

Los compuestos de fórmula I son preparados mediante Ia reacción de los compuestos de fórmula Il con una base y posterior reacción con los compuestos de fórmula III, en donde De un modo particular, este acoplamiento se puede llevar a cabo por reacción del anión del compuesto de fórmula II, que se prepara por reacción del compuesto de formula Il con n-butil litio a -78 ⁰ C en tetrahidrofurano anhidro, con compuestos de formula III. Si fuese necesario, es posible llevar a cabo Ia desprotección de los grupos protectores. Esta desprotección se realiza preferentemente con fluoruro de tetra-n-butilamonio en tetrahidrofurano a temperatura ambiente y con resina acida de intercambio iónico AG W50 X4 en metanol desoxigenado.

Alternativamente los compuestos de fórmula I son preparados mediante el acoplamiento entre un compuesto de fórmula IV y un compuesto de fórmula V, en presencia de un catalizador, en donde En un modo preferente de Ia realización, los compuestos de fórmula IV se preparan por reacción del compuesto de formula Vl, en donde R ¹ y R ² son conjuntamente halometileno, con í-butil litio a -78 ⁰ C en tetrahidrofurano anhidro seguido del tratamiento con un reactivo seleccionado entre tricloruro de indio, dibromuro de cinc, isopropoxicatecolborano o 2-isopropoxi-4,4,5,5-tetrametil-1 ,3,2-dioxaborolano. El acoplamiento se lleva a cabo en presencia de un catalizador seleccionado preferentemente entre tetra-/(/s-trifenilfosfina paladio(O), dicloruro de paladio(ll) bis- trifenilfosfina, dicloruro de paladio(ll) bis-(difenilfosfin)ferroceno, acetato de paladio(ll), dicloruro de paladio(ll) bis-acetonitrilo, tris(dibenzilidenacetona)dipaladio(0), acetilacetonato de niquel(ll), o bis(1 ,5-diciclooctadienil) niquel(O), con un compuesto de formula V. Si es necesario se realiza Ia desprotección de los grupos protectores, de un modo particular con fluoruro de tetra-n-butilamonio en tetrahidrofurano a temperatura ambiente y con resina acida de intercambio iónico AG W50 X4 en metanol desoxigenado.

Modo de realización particular de Ia invención

Los ejemplos y comentarios siguientes se facilitan para permitir a los expertos en Ia especialidad una comprensión más clara y para poner en práctica Ia invención. No deben ser considerados como limitativos del ámbito de Ia invención, sino ilustrativos y representativos de los mismos. Los compuestos de fórmula III pueden ser preparados de un modo particular por una secuencia de reacciones a partir del compuesto de formula 2 ya conocido (Esquema 2).

El compuesto de fórmula 3 se obtiene por adición estereoselectiva del anión del

(1 ,1 ,1 ,2,2,2)-d ₆ 2-metil-3-butin-2-ol protegido.

El compuesto de fórmula 4 se prepara por hidrogenación parcial del triple enlace por tratamiento con hidrógeno y el catalizador de Lindlar en metanol anhidro.

El compuesto de fórmula 5 se obtiene por reacción con isocianato de fenilo en piridina anhidra.

Los compuestos de fórmula 6 se preparan por reacción de sustitución con cupratos de metilo de alto orden trideuterados o sin deuterar. Los compuestos de fórmula 7 se obtienen por reacción con hidruro de litio y aluminio en tetrahidrofurano anhidro.

Los compuestos de fórmula 8 se preparan por oxidación con dicromato de piridinio en diclorometano anhidro.

Los compuestos de fórmula 9 se preparan a través de Ia secuencia de desprotección, reacción con cloroglioxilato de metilo y desoxigenación por tratamiento con hidruro de trifenililestaño en tolueno.

Esquema 2

5, Y = OCarb

8a, R ³ = 0M0M, N = CH ₃ 7a, N = CH ₃ 6a, N = CH ₃ 8b, R ³ = OMOM, N = CD ₃ 7b, N = CD ₃ 6b, N = CD ₃ 9a, R ³ = H, N = CH ₃ 9b, R ³ = H, N = CD ₃

Alternativamente, como se muestra en el esquema 3, los compuestos de formula III correspondientes a las cetonas del biciclo CD cadena lateral deuteradas de vitamina D ₂ pueden ser preparados de modo particular por una secuencia de reacciones a partir del compuesto de formula 10 ya conocido. El compuesto de fórmula 11 se obtiene por adición estereoselectiva del anión del (1 ,1 ,1 ,2,2,2)-d ₆ (E)-2-metil-3-buten-2-ol protegido.

El compuesto de fórmula 12 se prepara por reacción con clorofosfato de dietilo en piridina anhidra.

Los compuestos de fórmula 13 se preparan por reacción de sustitución con cupratos de metilo de alto orden trideuterados o sin deuterar.

Los compuestos de fórmula 7 se obtienen por desprotección del grupo protector con fluoruro de tetra-n-butilamonio en tetrahidrofurano a temperatura ambiente.

Esquema 3

7b, N = CD ₃

Como se muestra en el esquema 4, los compuestos de fórmula III correspondientes a las cetonas deuteradas del biciclo CD cadena lateral hidroxilada en C-24 son preparados por una secuencia de reacciones a partir del compuesto de formula 11. El compuesto de fórmula 14 se obtiene por reacción con anhídrido acético en piridina anhidra.

El compuesto de fórmula 15 se obtiene por reacción con dicloruro de bis(acetonitrilo)paladio en tetrahidrofurano anhidro.

El compuesto de fórmula 16 se obtiene por hidrogenación con catalizador de dióxido de platino en metanol anhidro.

El compuesto de fórmula 17 se obtiene por desprotección del grupo protector con ácido fluorhídrico en tetrahidrofurano:acetonitrilo a temperatura ambiente.

El compuesto de fórmula 18 se obtiene por oxidación con dicromato de piridinio en diclorometano.

Como se muestra en el esquema 5, los compuestos de formula III correspondientes a las cetonas del biciclo CD cadena lateral hexadeuteradas de vitamina D ₃ son preparados por una secuencia de reacciones a partir del compuesto de formula 19, que ya es conocido. El compuesto de fórmula 20 se prepara por reacción del compuesto de formula 19 con í-butil litio a -78 ⁰ C en THF anhidro, adición de cianuro de cobre y reacción con el benzoato de (1 ,1 ,1 ,2,2,2)-d ₆ (Z)-2-[2-metil-3-buteno].

El compuesto de fórmula 21 se prepara por desprotección con fluoruro de tetra-n- butilamonio en tetrahidrofurano anhidro.

El compuesto de fórmula 22 se prepara por hidrogenación con paladio sobre carbón como catalizador en metanol.

El compuesto de fórmula 23 se prepara por oxidación con dicromato de piridinio en diclorometano. Esquema 5

Como se muestra en el esquema 6, los compuestos de formula V correspondientes a los anillos A de las 3-epivitaminas son preparados por una secuencia de reacciones a partir

del compuesto de formula 24, que ya es conocido. El compuesto de fórmula 25 se obtiene por reacción con ácido peryódico en dietiléter anhidro.

El compuesto de fórmula 26 se prepara por tratamiento con tetrabromuro de carbono en diclorometano.

El compuesto de fórmula 27 se prepara por tratamiento con di-/sopropilamiduro de litio en THF anhidro seguido de atrapado del enolato con N-(5-cloro-2-piridil)triflimida.

La conversión del compuesto 27 en el óxido de fosfina 28, requerido para el acoplamiento de Wittig-Horner, se realiza a través de procedimientos conocidos.

Esquema 6

24 25, Z = O 27 28 26, Z = CBr ₂ Como se muestra en el esquema 7, algunos de los compuestos de formula IV son preparados por una secuencia de reacciones a partir de los compuesto de formula 8a, 8b, 9a, 9b o 23, ya descritos. Los compuestos de fórmula 29, 30, 31 , 32, o 33 se obtienen por reacción con el anión del bromuro de bromometiltrifosfonio en tolueno anhidro. Esquema 7

N = CH ₃ N = CD ₃ CH ₃

Ejemplo 1

26,26,26, 27,27,27,28,28,28-Nonadeuterovitamina D ₂ (1a)

A una disolución de 0.21 mmoles del óxido de fosfina 34 en 5 mL de tetrahidrofurano anhidro enfriada a -78 ⁰ C se añaden 0.21 mmoles de n-butil litio 1 .5 M en hexano gota a

gota bajo atmósfera de argón. Después de agitar 30 minutos, se añade gota a gota, una disolución de 0.21 mmoles de Ia cetona 9b en 3 ml_ de tetrahidrofurano anhidro durante un periodo de 30 minutos. A continuación se agita Ia mezcla de reacción a -78 ⁰ C durante 2 horas. La reacción se detiene por adición de una disolución acuosa de cloruro sódico y Ia mezcla resultante se deja alcanzar temperatura ambiente. El aislamiento del compuesto del título puede hacerse por extracción con acetato de etilo y Ia purificación mediante cromatografía rápida en columna de gel de sílice.

La eliminación del grupo protector de silicio puede efectuarse mediante el tratamiento de una disolución del compuesto del título sililado en 2 mL de metanol desoxigenado y anhidro, con 200 mg de resina DOWEX AG 50W-X4 bajo atmósfera de argón y agitando en Ia oscuridad a temperatura ambiente durante 24 horas. Esta mezcla de reacción se detiene mediante Ia adición de una disolución acuosa de cloruro sódico y el compuesto del título se aisla por extracción con acetato de etilo y se purifica por cromatografía rápida en columna de gel de sílice (92% de rendimiento). RMN ¹ H (250 MHz, CDCI ₃ , δ): 6.21 y 6.02 (sistema AB, 2H, J = 12.6 Hz, H-6 y H-7); 5.37 (2H, m, H-22 y H-23); 5.05 (1 H, s ancho, H-19E); 4.84 (2H, s ancho, H-19Z); 3.93 (1 H, m, H-3); 1.03 (3H, d, J = 7 Hz, CH ₃ -21 ); 0.54 (3H, s, CH ₃ -18). Ejemplo 2 26,26,26,27,27,27,28,28,28-Nonadeutero-25-hidroxivitamina D ₂ (1 b)

CD ₃

A un disolución de 0.55 mmoles del óxido de fosfina 34 en 10 mL de tetrahidrofurano anhidro enfriada a -78 ⁰ C se añaden 0.55 mmoles de n-butil litio 1.5 M en hexano gota a gota bajo atmósfera de argón. Después de agitar 30 minutos, se añade gota a gota, una disolución de 0.53 mmoles de Ia cetona 8b en 5 mL de tetrahidrofurano anhidro durante un periodo de 30 minutos. A continuación se agita Ia mezcla de reacción a -78 ⁰ C durante 2 horas. La reacción se detiene por adición de una disolución acuosa de cloruro sódico. La mezcla se deja alcanzar temperatura ambiente. El aislamiento del compuesto del título puede hacerse por extracción con acetato de etilo y Ia purificación mediante cromatografía rápida en columna de gel de sílice.

La eliminación de los grupos protectores puede efectuarse mediante tratamiento de una disolución del compuesto del título sililado en 3 ml_ de metanol desoxigenado y anhidro, con 250 mg de resina DOWEX AG 50W-X4 bajo atmósfera de argón y agitando en Ia oscuridad a temperatura ambiente durante 24 horas. Después de añadir una disolución acuosa de cloruro sódico, el compuesto del título se aisla por extracción con acetato de etilo y se purifica por cromatografía rápida en columna de gel de sílice (88% de rendimiento).

RMN ¹ H (250 MHz, CDCI ₃ , δ): 6.22 y 6.03 (sistema AB, 2H, J = 12.6 Hz, H-6 y H-7); 5.33 (2H, m, H-22 y H-23); 5.04 (1 H, s ancho, H-19E); 4.84 (2H, s ancho, H-19Z); 3.95 (1 H, m, H-3); 1.03 (3H, d, J = 7 Hz, CH ₃ -21 ); 0.54 (3H, s, CH ₃ -18).

Ejemplo 3

26,26,26, 27,27,27, 28,28,28-Nonadeutero-1 α-hidroxivitamina D ₂ (1 c)

A un disolución de 0.25 mmoles del óxido de fosfina 35 en 6 ml_ de tetrahidrofurano anhidro enfriada a -78 ⁰ C se añaden 0.25 mmoles de n-butil litio 1.5 M en hexano gota a gota bajo atmósfera de argón. Después de agitar 30 minutos, se añade gota a gota, una disolución de 0.23 mmoles de Ia cetona 9b en 5 ml_ de tetrahidrofurano anhidro durante un periodo de 30 minutos. A continuación se agita Ia mezcla de reacción a -78 ⁰ C durante 2 horas. La reacción se detiene por adición de una disolución acuosa de cloruro sódico. La mezcla se deja alcanzar temperatura ambiente. El aislamiento del compuesto del título puede hacerse por extracción con acetato de etilo y Ia purificación mediante cromatografía rápida en columna de gel de sílice. La eliminación de los grupos protectores puede efectuarse mediante tratamiento de una disolución del compuesto del título sililado en 3 mL de metanol desoxigenado y anhidro, con 200 mg de resina DOWEX AG 50W-X4 bajo atmósfera de argón y agitando en Ia oscuridad a temperatura ambiente durante 24 horas. Después de añadir una disolución acuosa de cloruro sódico, el compuesto del título se aisla por extracción con acetato de etilo y se purifica por cromatografía rápida en columna de gel de sílice (90% de rendimiento).

RMN ¹ H (250 MHz, CDCI ₃ , δ): 6.22 y 6.03 (sistema AB, 2H, J = 12.6 Hz, H-6 y H-7); 5.33

(2H, m, H-22 y H-23); 5.04 (1 H, s ancho, H-19E); 4.84 (2H, s ancho, H-19Z); 4.43 (1 H, m, H-1 ); 4.29 (1 H, m, H-3); 1.03 (3H, 6, J = I Hz, CH ₃ -21 ); 0.54 (3H, s, CH ₃ -18). Ejemplo 4

26,26,26,27,27,27,28,28,28-Nonadeutero-1 α,25-hidroxivitamina D ₂ (1 d)

A un disolución de 0.21 mmoles del óxido de fosfina 35 en 5 ml_ de tetrahidrofurano anhidro enfriada a -78 ⁰ C se añaden 0.21 mmoles de n-butil litio 1.5 M en hexano gota a gota bajo atmósfera de argón. Después de agitar 30 minutos, se añade gota a gota, una disolución de 0.21 mmoles de Ia cetona 8b en 3 ml_ de tetrahidrofurano anhidro durante un periodo de 30 minutos. A continuación se agita Ia mezcla de reacción a -78 ⁰ C durante 2 horas. La reacción se detiene por adición de una disolución acuosa de cloruro sódico y Ia mezcla obtenida se deja alcanzar temperatura ambiente. El aislamiento del compuesto del título puede hacerse por extracción con acetato de etilo y Ia purificación mediante cromatografía rápida en columna de gel de sílice.

La eliminación de los grupos protectores puede efectuarse mediante tratamiento de una disolución del compuesto del título sililado en 5 mL de metanol desoxigenado y anhidro, con 150 mg de resina DOWEX AG 50W-X4 bajo atmósfera de argón y agitando en Ia oscuridad a temperatura ambiente durante 24 horas. Después de añadir una disolución acuosa de cloruro sódico, el compuesto del título se aisla por extracción con acetato de etilo y se purifica por cromatografía rápida en columna de gel de sílice (85% de rendimiento).

RMN ¹ H (250 MHz, CDCI ₃ , δ): 6.38 y 6.01 (sistema AB, 2H, J = 11 Hz, H-6 y H-7); 5.35 (2H, m, H-22 y H-23); 5.31 (1 H, s ancho, H-19E); 5.00 (1 H, s ancho, H-19Z); 4.44 (1 H, m, H-1 ); 4.27 (1 H, m, H-3); 1.03 (3H, 6, J = I Hz, CH ₃ -21 ); 0.55 (3H, s, CH ₃ -18). Ejemplo 5 26,26,26, 27,27, 27-Hexadeutero-3-epi-1 α-hidroxivitamina D ₃ (1e)

Una disolución 0.27M de tricloruro de indio en THF se añade sobre una disolución de 0.43 mmoles del bromuro vinílico 33 en 5 ml_ de tetrah id rotura no anhidro con agitación y bajo argón a temperatura ambiente. La disolución resultante se enfría a -78 ⁰ C y se Ie añaden gota a gota 1.61 mmoles de í-butil litio 1.5 M en pentano. Después de agitar durante 1 h a -78 ⁰ C y a 0 ⁰ C durante otra hora, se añade una suspensión de 0.22 mmol del enoltriflato 27, 0.6 ml_ de trietilamina, 0.01 mmol de tetra-kis-(trifenilfosfina) paladio(O) en 5 ml_ de THF. Tras 3 horas de agitación, Ia reacción se detiene por adición de 3 ml_ de agua. El aislamiento del compuesto del título puede hacerse por extracción con hexano y Ia purificación mediante cromatografía rápida en columna de gel de sílice. La eliminación de los grupos protectores se efectúa por tratamiento de una disolución del compuesto del título sililado en 3 mL de acetonitrilo anhidro, 1 mL de diclorometano y 1 mL de trietilamina, con 0.2 mL de fluoruro de piridinio (70% HF/ 30% piridina) bajo argón y agitación en Ia oscuridad a temperatura ambiente durante 4 horas. Después de añadir una disolución acuosa de bicarbonato sódico, el compuesto del título se aisla por extracción con acetato de etilo y se purifica por cromatografía rápida en columna de gel de sílice (72% de rendimiento).

RMN ¹ H (250 MHz, CDCI ₃ , δ): 6.43 y 6.01 (sistema AB, 2H, J = 11 Hz, H-6 y H-7); 5.29 (1 H, s ancho, H-19E); 4.99 (1 H, s ancho, H-19Z); 4.31 (1 H, m, H-1 ); 4.05 (1 H, m, H-3); 0.93 (3H, d, J = 6 Hz, CH ₃ -21 ); 0.53 (3H, s, CH ₃ -18). Ejemplo 6 26,26,26, 27,27, 27-Hexadeutero-3-epi-1 α,25-dihidroxivitamina D ₃ (If)

Una disolución 0.46M de bromuro de cinc en THF se añade sobre una disolución de 0.21 mmoles del bromuro vinílico 36 en 2 mL de tetrahidrofurano anhidro con agitación y bajo

argón a temperatura ambiente. La disolución resultante se enfría a -78 ⁰ C y se Ie añaden gota a gota 0.79 mmoles de í-butil litio 1.5 M en pentano. Después de agitar durante 1 h a -78 ⁰ C y a 0 ⁰ C durante otra hora, se añade una suspensión de 0.1 1 mmol del enoltriflato 27, 0.3 ml_ de trietilamina, 0.005 mmol de tetra-kis-(trifenilfosfina) paladio (0) en 2 ml_ de THF. Tras 3 horas de agitación, Ia reacción se detiene por adición de 3 ml_ de agua. El aislamiento del compuesto del título puede hacerse por extracción con hexano y Ia purificación mediante cromatografía rápida en columna de gel de sílice. La eliminación de los grupos protectores se efectúa por tratamiento de una disolución del compuesto del título sililado en 1 mL de acetonitrilo anhidro, 0.5 mL de diclorometano y 0.5 mL de trietilamina, con 0.1 mL de fluoruro de piridinio (70% HF/ 30% piridina) bajo argón y agitación en Ia oscuridad a temperatura ambiente durante 4 horas. Después de añadir una disolución acuosa de bicarbonato sódico, el compuesto del título se aisla por extracción con acetato de etilo y se purifica por cromatografía rápida en columna de gel de sílice (75% de rendimiento). RMN ¹ H (250 MHz, CDCI ₃ , δ): 6.43 y 6.01 (sistema AB, 2H, J = 11 Hz, H-6 y H-7); 5.29 (1 H, s ancho, H-19E); 4.99 (1 H, s ancho, H-19Z); 4.31 (1 H, m, H-1 ); 4.05 (1 H, m, H-3); 0.93 (3H, d, J = 6 Hz, CH ₃ -21 ); 0.53 (3H, s, CH ₃ -18). Ejemplo 7 26,26,26, 27,27, 27-Hexadeutero-3-epi-1 α-hidroxivitamina D ₂ ( ^" Ig)

A una disolución de 1.85 mmoles del óxido de fosfina 28 en 30 mL de tetrahidrofurano anhidro enfriada a -78 ⁰ C se añaden 1.85 mmoles de n-butil litio 2.56 M en hexano gota a gota bajo atmósfera de argón. Después de agitar 30 minutos, se añade gota a gota, una disolución de 0.21 mmoles de Ia cetona 9a en 3 mL de tetrahidrofurano anhidro durante un periodo de 30 minutos. A continuación se agita Ia mezcla de reacción a -78 ⁰ C durante 4 horas. La reacción se detiene por adición de una disolución acuosa de cloruro sódico y Ia mezcla resultante se deja alcanzar temperatura ambiente. El aislamiento del compuesto del título puede hacerse por extracción con acetato de etilo y Ia purificación mediante cromatografía rápida en columna de gel de sílice.

La eliminación de los grupos protectores se efectúa por tratamiento de una disolución del compuesto del título sililado en 5 ml_ de acetonitrilo anhidro, 2.5 ml_ de diclorometano y

2.5 ml_ de trietilamina, con 0.5 ml_ de fluoruro de piridinio (70% HF/ 30% piridina) bajo argón y agitación en Ia oscuridad a temperatura ambiente durante 4 horas. Después de añadir una disolución acuosa de bicarbonato sódico, el compuesto del título se aisla por extracción con acetato de etilo y se purifica por cromatografía rápida en columna de gel de sílice (85% de rendimiento).

RMN ¹ H (250 MHz, CDCI ₃ , δ): 6.22 y 6.05 (sistema AB, 2H, J = 1 1 Hz, H-6 y H-7); 5.43-

5.23 (2H, m, H-22 y H-23); 5.05 (1 H, s ancho, H-19E); 4.82 (2H, s ancho, H-19Z); 4.32 (1 H, m, H-1 ); 4.04 (1 H, m, H-3); 3.95 (1 H, m, H-3); 1.03 (3H, d, J = 7 Hz, CH ₃ -21 ); 0.54

(3H, s, CH ₃ -18).

Ejemplo 8

26,26,26, 27,27,27, 28,28,28-Nonadeutero-3-epi-1 α-hidroxivitamina D ₂ (1 h)

A una disolución de 0.074 mmoles del óxido de fosfina 28 en 2 ml_ de tetrahidrofurano anhidro enfriada a -78 ⁰ C se añaden 0.093mmoles de n-butil litio 1.5 M en hexano gota a gota bajo atmósfera de argón. Después de agitar 30 minutos, se añade gota a gota, una disolución de 0.074 mmoles de Ia cetona 9b en 1 ml_ de tetrahidrofurano anhidro durante un periodo de 30 minutos. A continuación se agita Ia mezcla de reacción a -78 ⁰ C durante 4 horas. La reacción se detiene por adición de una disolución acuosa de cloruro sódico y Ia mezcla resultante se deja alcanzar temperatura ambiente. El aislamiento del compuesto del título puede hacerse por extracción con acetato de etilo y Ia purificación mediante cromatografía rápida en columna de gel de sílice. La eliminación del grupo protector de silicio puede efectuarse mediante el tratamiento de una disolución del compuesto del título sililado en 2 mL de metanol desoxigenado y anhidro, con 200 mg de resina DOWEX AG 50W-X4 bajo atmósfera de argón y agitando en Ia oscuridad a temperatura ambiente durante 24 horas. Esta mezcla de reacción se detiene mediante Ia adición de una disolución acuosa de cloruro sódico y el compuesto del título se aisla por extracción con acetato de etilo y se purifica por cromatografía rápida en columna de gel de sílice (93% de rendimiento).

RMN ¹ H (250 MHz, CDCI ₃ , δ): 6.22 y 6.05 (sistema AB, 2H, J = 1 1 Hz, H-6 y H-7); 5.43-

5.23 (2H, m, H-22 y H-23); 5.05 (1 H, s ancho, H-19E); 4.82 (2H, s ancho, H-19Z); 4.31 (1 H, m, H-1 ); 4.05 (1 H, m, H-3); 3.93 (1 H, m, H-3); 0.57 (3H, s, CH ₃ -18). Ejemplo 9 26,26,26, 27,27, 27-Hexadeutero-3-epi-1 α,25-dihidroxivitamina D ₂ ( ^" I i)

A una disolución de 1.65 mmoles del óxido de fosfina 28 en 20 ml_ de tetrahidrofurano anhidro enfriada a -78 ⁰ C se añaden 1.73 mmoles de n-butil litio 2.5 M en hexano gota a gota bajo atmósfera de argón. Después de agitar 30 minutos, se añade gota a gota, una disolución de 0.21 mmoles de Ia cetona 8a en 8 ml_ de tetrahidrofurano anhidro durante un periodo de 30 minutos. A continuación se agita Ia mezcla de reacción a -78 ⁰ C durante 4 horas. La reacción se detiene por adición de una disolución acuosa de cloruro sódico y Ia mezcla resultante se deja alcanzar temperatura ambiente. El aislamiento del compuesto del título puede hacerse por extracción con acetato de etilo y Ia purificación mediante cromatografía rápida en columna de gel de sílice.

La eliminación del grupo protector de silicio puede efectuarse mediante el tratamiento de una disolución del compuesto del título sililado en 10 mL de metanol desoxigenado y anhidro, con 650 mg de resina DOWEX AG 50W-X4 bajo atmósfera de argón y agitando en Ia oscuridad a temperatura ambiente durante 24 horas. Esta mezcla de reacción se detiene mediante Ia adición de una disolución acuosa de cloruro sódico y el compuesto del título se aisla por extracción con acetato de etilo y se purifica por cromatografía rápida en columna de gel de sílice (70% de rendimiento).

RMN ¹ H (250 MHz, CDCI ₃ , δ): 6.22 y 6.05 (sistema AB, 2H, J = 1 1 Hz, H-6 y H-7); 5.43- 5.23 (2H, m, H-22 y H-23); 5.05 (1 H, s ancho, H-19E); 4.82 (2H, s ancho, H-19Z); 4.32 (1 H, m, H-1 ); 4.04 (1 H, m, H-3); 3.95 (1 H, m, H-3); 1.02 (3H, d, J = 7 Hz, CH ₃ -21 ); 0.54 (3H, s, CH ₃ -18). Ejemplo 10 26,26,26, 27,27,27, 28,28,28-Nonadeutero-3-epi-1 α,25-dihidroxivitamina D ₂ (1 j)

A una disolución de 0.558 mmoles del óxido de fosfina 28 en 9 ml_ de tetrahidrofurano anhidro enfriada a -78 ⁰ C se añaden 0.50 mmoles de n-butil litio 2.25 M en hexano gota a gota bajo atmósfera de argón. Después de agitar 30 minutos, se añade gota a gota, una disolución de 0.267 mmoles de Ia cetona 8b en 5 ml_ de tetrahidrofurano anhidro durante un periodo de 30 minutos. A continuación se agita Ia mezcla de reacción a -78 ⁰ C durante 4 horas. La reacción se detiene por adición de una disolución acuosa de cloruro sódico y Ia mezcla resultante se deja alcanzar temperatura ambiente. El aislamiento del compuesto del título puede hacerse por extracción con acetato de etilo y Ia purificación mediante cromatografía rápida en columna de gel de sílice.

La eliminación del grupo protector de silicio puede efectuarse mediante el tratamiento de una disolución del compuesto del título sililado en 10 mL de metanol desoxigenado y anhidro, con 650 mg de resina DOWEX AG 50W-X4 bajo atmósfera de argón y agitando en Ia oscuridad a temperatura ambiente durante 24 horas. Esta mezcla de reacción se detiene mediante Ia adición de una disolución acuosa de cloruro sódico y el compuesto del título se aisla por extracción con acetato de etilo y se purifica por cromatografía rápida en columna de gel de sílice (91% de rendimiento).

RMN ¹ H (250 MHz, CDCI ₃ , δ): 6.23 y 6.04 (sistema AB, 2H, J = 1 1 Hz, H-6 y H-7); 5.45- 5.25 (2H, m, H-22 y H-23); 5.05 (1 H, s ancho, H-19E); 4.82 (2H, s ancho, H-19Z); 4.32 (1 H, m, H-1 ); 4.04 (1 H, m, H-3); 3.95 (1 H, m, H-3); 1.03 (3H, d, J = 7 Hz, CH ₃ -21 ); 0.54 (3H, s, CH ₃ -18). Ejemplo 11 26,26,26, 27,27, 27-Hexadeutero-24fí,25-dihidroxivitamina D ₃ (1 k)

A un disolución de 0.90 mmoles del óxido de fosfina 34 en 20 ml_ de tetrah id rotura no anhidro enfriado a -78 ⁰ C se añaden 0.90 mmoles de n-butillitio 1.5 M en hexano gota a gota bajo atmósfera de argón. Después de agitar 30 minutos, se añade gota a gota, una disolución de 0.40 mmoles de Ia cetona 18 en 10 ml_ de tetrah i drofu rano anhidro durante un periodo de 30 minutos. A continuación se agita Ia mezcla de reacción a -78 ⁰ C durante 2 horas. La mezcla obtenida después de añadir una disolución acuosa de cloruro sódico. La mezcla se deja alcanzar temperatura ambiente. El aislamiento del compuesto del título puede hacerse por extracción con acetato de etilo y Ia purificación mediante cromatografía rápida en columna de gel de sílice. La eliminación de los grupos protectores puede efectuarse mediante tratamiento de una disolución del compuesto del título sililado en 20 mL de tetrahidrofurano anhidro, con 1.5 mmol de una disolución 1 M de fluoruro de tetrabutilamonio en tetrahidrofurano bajo atmósfera de argón y agitando en Ia oscuridad a temperatura ambiente durante 4 horas. La reacción se detiene mediante Ia adición de disolución acuosa de cloruro sódico y el soluto se aisla por extracción con acetato de etilo. A continuación se disuelve en 10 mL de tetrahidrofurano y se añade 1 mmol de una disolución acuosa 1 M de hidróxido de litio agitando bajo atmósfera de argón y en Ia oscuridad a temperatura ambiente. Al cabo de 6 horas se añade 1 mmol más de hidróxido de litio (1 M, ac.) y Ia operación se repite al cabo de otras 6 horas. Tras agitar durante 24 horas, Ia mezcla de reacción se detiene mediante Ia adición de una disolución acuosa de cloruro amónico y el compuesto del título se aisla por extracción con acetato de etilo y se purifica mediante cromatografía rápida en columna de gel de sílice.

RMN ¹ H (250 MHz, CDCI ₃ , δ): 6.21 y 6.02 (sistema AB, 2H, J = 11 Hz, H-6 y H-7); 5.03 (1 H, s ancho, H-19E); 4.81 (1 H, s ancho, H-19Z); 3.93 (1 H, m, H-3); 3.32 (1 H, m, H-24); 0.93 (3H, d, J = 6 Hz, CH ₃ -21 ); 0.54 (3H, s, CH ₃ -18). Ejemplo 12 26,26,26, 27,27, 27-Hexadeutero-1 α,24fí,25-trihidroxivitamina D ₃ (11)

A un disolución de 0.65 mmoles del óxido de fosfina 35 en 15 mL de tetrahidrofurano anhidro enfriado a -78 ⁰ C se añaden 0.65 mmoles de n-butillitio 1.5 M en hexano gota a

gota bajo atmósfera de argón. Después de agitar 30 minutos, se añade gota a gota, una disolución de 0.31 mmoles de Ia cetona 18 en 7 ml_ de tetrah id roturan o anhidro durante un periodo de 30 minutos. A continuación se agita Ia mezcla de reacción a -78 ⁰ C durante 2 horas. La reacción se detiene por adición de una disolución acuosa de cloruro sódico y se deja alcanzar temperatura ambiente. El aislamiento del compuesto del título puede hacerse por extracción con acetato de etilo y Ia purificación mediante cromatografía rápida en columna de gel de sílice.

La eliminación de los grupos protectores puede efectuarse mediante tratamiento de una disolución del compuesto del título sililado en 20 mL de tetrahidrofurano anhidro, con 1.5 mmol de una disolución 1 M de fluoruro de tetrabutilamonio en tetrahidrofurano bajo atmósfera de argón y agitando en Ia oscuridad a temperatura ambiente durante 4 horas. El compuesto obtenido después de añadir una disolución acuosa de cloruro sódico y extraer con acetato de etilo, se disuelve en 10 mL de tetrahidrofurano y se añade 1 mmol de una disolución acuosa 1 M de hidróxido de litio agitando bajo atmósfera de argón y en Ia oscuridad a temperatura ambiente. Al cabo de 6 horas se Ie añade 1 mmol de una disolución acuosa 1 M de hidróxido de litio y Ia operación se repite al cabo de otras 6 horas. Tras agitar durante 24 horas, se añade una disolución acuosa de cloruro amónico y el compuesto del título se aisla por extracción con acetato de etilo y se purifica mediante cromatografía rápida en columna de gel de sílice. RMN ¹ H (250 MHz, CDCI ₃ , δ): 6.37 y 6.05 (sistema AB, 2H, J = 12 Hz, H-6 y H-7); 5.33 (1 H, s ancho, H-19E); 5.00 (1 H, s ancho, H-19Z); 4.43 (1 H, m, H-1 ); 4.23 (1 H, m, H-3); 3.35 (1 H, m, H-24); 0.93 (3H, d, J = 6 Hz, CH ₃ -21 ); 0.54 (3H, s, CH ₃ -18).