EXTRAIT DE GRAINES DE PASSIFLORE ET COMPOSITIONS COSMETIQUES, PHARMACEUTIQUES, DERMATOLOGIQUES OU

NUTRACEUTIQUES LE COMPRENANT L'invention se rapporte à une composition comprenant un extrait de graines de

Passiflore, Passiflora incarnata ou edulis et préférentiellement edulis. La composition est avantageusement cosmétique, pharmaceutique, dermatologique, nutraceutique. L'invention a également pour objet un procédé d'extraction d'un extrait de graines de Passiflore, ainsi que l'extrait susceptible d'être obtenu par ledit procédé. L'invention concerne également une telle composition ou un tel extrait pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des troubles ou pathologies de la peau, des muqueuses ou des phanères, pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des troubles vasculaires, pour son utilisation pour lutter contre le stress oxydant, ou encore pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des altérations du tissu adipeux. L'invention concerne enfin un procédé de soin cosmétique de la peau, des phanères ou des muqueuses, en vue d'améliorer leur état ou leur aspect, consistant à administrer une telle composition ou un tel extrait.

LES PASSIFLORES

La famille des passiflores (Passiflora) est constituée d'environ 500 espèces. Les espèces sont souvent distribuées dans les régions chaudes tempérées et tropicales et notamment sur le continent américain, mais sont plutôt rares en Asie, Australie et Afrique tropicale.

Botanique

Les plants se présentent sous forme d'arbrisseaux ou herbes grimpantes. Les feuilles sont alternes, parfois simples, lobées ou palmées. Les fleurs peuvent attendre 9 cm de diamètre sont bisexuelles ou unisexuelles et régulières. Elles sont blanches et violettes et présentent des appendices pétaloïdes fins, garnis d'appendices filiformes symbolisant la couronne d'épines du Christ. Le fruit de 4 à 5 cm de longueur est ovalaire et souvent de couleur jaune à orangé. Les espèces les plus répandues sont notamment P. incarnata et P. edulis.

Eléments de Phytochimie

Les plus étudiées sont P. incarnata et P. edulis. P. incarnata : les constituants majeurs sont représentés par la famille des flavonoïdes qui sont présentes en grande quantité dans les feuilles. Elle contient une forte teneur en isovitexine. Elle contient également en faible quantité des alcaloïdes indoliques simples (harmane, harmine...), des sucres comme le raffmose, le saccharose, fructose, glucose, et des huiles essentielles et du maltol décrit comme la molécule qui serait à l'origine des effets sédatifs et anti-convulsifîants attribués à cette plante.

P. edulis : à partir d'un extrait méthanolique de feuilles séchées a été identifié un composé spécifique, la passiflorine - cyclopropane triterpène glycoside (E. Bombardelli et al, 1975).

Elle contient de l'isoorientine, flavonoïde qui n'est pas retrouvée dans P. incarnata ainsi que des traces d'huile essentielle et d'alcaloïdes identiques à P. incarnata.

La pulpe du fruit contient des flavonoïdes, schaftoside, isoschaftoside, isoorientine, orientine, isovitexine, dérivés de lutéoline (MX. Zeraik, J.H. Yariwake - 2010), de l'acide ascorbique (environ 60 mg/100 g).

La pulpe contient également des dérivés cyanogéniques glycosylés : la prunasine, la sambunigrine et l'amygdaline, ainsi que récemment identifiés, deux mandelonitrile β- rutinosides (D. Chassagne and J. Crouzet, 1998 ; D.S. Seigler, 2002).

Toxicologie

Des constituants cyanogéniques sont présents essentiellement dans les parties aériennes de différentes variétés de passiflore.

Caractéristiques de la graine

Les graines constituent 6 à 12% du fruit de P. Edulis et elles contiennent :

- des polyphénols dont le Piceatannol (structure proche du resveratrol) et son dimère la scirpusine B (S. Sano ; K. Sugiyama ; T. Ito, 2011), substances à effets vasorelaxant et anti-oxydant.

- de l'huile, 18% par solvant contenant des phytostérols (0.2%> dont campestérol, stigmastérol, sitostérol, avenasterol) ; 60 à 73% d'acide linoléique (oméga 6), 14%) à 20%) d'acide oléique et 465 ppm de tocophérols (G. Piobom, N. Barou et al, 2006 ; R. de V.V. Lopes et al).

- Des sucres et des protéines ART ANTERIEUR

Usage Alimentaire

Le fruit semble être consommé depuis la préhistoire. Au XVIème siècle au Pérou, les magnifiques fleurs de passiflores étaient déjà considérées comme un remède et de nombreuses espèces de passiflores sont toujours utilisées dans de nombreux pays dans les pratiques thérapeutiques courantes.

Usage Médical

Les passiflores (souvent les parties aériennes et parfois les fruits) sont souvent utilisées partout dans le monde comme anxiolytique, sédatif, diurétique et analgésique (toutes les descriptions dans « Passif ora : review update. K. Dhawan, S. Dhawan, A. Sharma,

2004 »). Le maltol et certains de ses dérivés seraient à l'origine de cet effet sédatif.

Cette activité serait plus constante et plus significative pour P. incarnata.

Des extraits de P. incarnata seraient capables de réverser la dépendance à la morphine.

Des effets anti-inflammatoires ont également été mis en évidence pour des extraits de feuilles de P. edulis.

Les différentes familles de polyphénols contribuent vraisemblablement de manière très importante à l'effet anti-oxydant et anti-glycation des protéines (M. Rudnicki et al,

2007) des parties aériennes de P. edulis.

Un effet anti-hypotenseur d'un extrait méthanolique d'écorces de fruits de P. edulis ainsi qu'un effet hypocholestémiant d'un extrait de graines délipidées riches en fibres ont également été mis en évidence.

Effet anti-tumoral de décoction de fruit via l'inhibition de métalloprotéinases matricielles (MMP2 et MMP9) impliquées dans l'invasion tumorale, les métastases et l'angiogénèse (S.S. Patel, 2009).

Usage Dermo-cosmétiques

Usage cutané des feuilles de P. foetida au Brésil pour traiter les maladies cutanées d'origine inflammatoire. A Maurice et Rodrigues les décoctions de feuilles de P. suberosa sont utilisées en bain pour traiter les maladies de peau.

DESCRIPTION DE L'INVENTION

La Demanderesse a découvert que les extraits de graines de passiflore, en particulier Passiflora incarnata ou Passiflora edulis, et encore plus avantageusement Passiflora edulis, présentent des propriétés cosmétiques et dermatologiques jamais décrites jusqu'à présent. En particulier, c'est la première fois que de tels extraits de graines de passiflore sont utilisés en tant que tels, pour leurs propriétés spécifiques.

L'invention a pour objet une composition comprenant un extrait peptidique et osidique de graines de passiflore, en particulier de graines de Passiflora incarnata ou de Passiflora edulis, avantageusement de Passiflora edulis, en tant que principe actif, et le cas échéant un excipient approprié. La composition est avantageusement cosmétique, pharmaceutique, dermatologique. La composition peut aussi être nutraceutique. Ladite composition est de préférence formulée pour être administrée par voie topique externe ou orale.

Par « extrait peptidique et osidique », on entend un extrait comprenant majoritairement ou essentiellement des peptides et des oses (sucres). Les protéines naturellement présentes dans les graines ont été hydrolysées en peptides, avantageusement l'hydrolyse est une hydrolyse enzymatique.

Dans le cadre de la présente invention, l'extrait peptidique et osidique est avantageusement obtenu par hydrolyse enzymatique, plus avantageusement en présence d'au moins une protéase et au moins une carbohydrase. Il est plus avantageusement susceptible d'être obtenu par le procédé décrit plus loin dans la description.

Dans l'extrait peptidique et osidique, les peptides ont avantageusement une masse moléculaire inférieure à 3500 Da. Ces peptides recouvrent tous les composés à base d'aminoacides présents dans l'extrait.

Selon une variante avantageuse de l'invention, dans l'extrait peptidique et osidique, au moins 90% des peptides ont une masse moléculaire inférieure à 1200 Da.

Dans l'extrait peptidique et osidique, avantageusement au moins 30%> des peptides, plus avantageusement au moins 40%> des peptides, ont une masse moléculaire inférieure à 300 Da. Selon une variante avantageuse de l'invention, entre 30% et 50% des peptides ont une masse moléculaire inférieure à 300 Da.

Avantageusement selon l'invention, entre 30%> et 70%>, plus avantageusement entre 40%> et 60%>, des peptides de l'extrait ont une masse moléculaire comprise entre 300 et 1200 Daltons.

La répartition des masses molaires des peptides est exprimée en pourcentage par rapport à la concentration totale de peptides. Typiquement, l'extrait peptidique et osidique selon l'invention ne contient substantiellement pas de protéines résiduelles qui sont potentiellement allergisantes.

L'extrait selon la présente invention comprend avantageusement 10 à 90 % en poids de peptides et 10 à 90 % en poids de sucres totaux, les pourcentages étant exprimés par rapport au poids total dudit extrait (avant ajout éventuel d'un support de séchage).

Dans l'extrait peptidique et osidique, le ratio massique peptides/sucres est avantageusement supérieur à 0,75 et de préférence compris entre 1 et 2

L'extrait peptidique et osidique comprend avantageusement 20 à 70 %, avantageusement 30 à 65 %, typiquement 55%, en poids de peptides, les pourcentages étant exprimés par rapport au poids total dudit extrait.

L'extrait peptidique et osidique comprend avantageusement 20 à 60 %, avantageusement 30 à 55 %, typiquement 40%, en poids de sucres, les pourcentages étant exprimés par rapport au poids total dudit extrait.

En particulier, l'extrait peptidique et osidique comprend avantageusement 20 à

70 %>, avantageusement 30 à 65 %>, en poids de peptides et 20 à 60 %>, avantageusement 30 à 55 %>, en poids de sucres, les pourcentages étant exprimés par rapport au poids total dudit extrait.

Selon un aspect préféré de l'invention, l'extrait peptidique et osidique comprend 55 %> en poids de peptides et 40 %> en poids de sucres, les pourcentages étant exprimés par rapport au poids total de matière active dudit extrait avant ajout par exemple d'un éventuel support de séchage. Les 5%> restant sont des minéraux (cendres) et autres molécules diverses.

Selon une variante avantageuse de l'invention, la composition contient 0,001 à 10 %>, typiquement 0,01 à 5 %>, en poids d'extrait, exprimé en pourcentage d'extrait sec.

L'invention a également pour objet un procédé de préparation d'un extrait peptidique et osidique de graines de passiflore en particulier de graines de Passiflora incarnata ou de Passiflora edulis, avantageusement de Passiflora edulis, comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique dans les conditions optimales de pH et de température, connues de l'homme de l'art. Le traitement enzymatique de la dispersion peut être suivi si besoin d'un traitement thermique afin de dénaturer les enzymes. Avantageusement selon l'invention, le procédé de préparation d'un extrait peptidique et osidique de graines de passiflore comprend les étapes successives suivantes :

a) dispersion en phase aqueuse des graines broyées ; puis

b) traitement enzymatique de la dispersion aqueuse obtenue à l'étape a), puis c) le cas échéant, traitement thermique pour dénaturer les enzymes, et

d) récupération de l'extrait peptidique et osidique à la fin de l'étape b) ou c).

A l'étape a), la phase aqueuse est avantageusement de l'eau.

Le traitement enzymatique (étape b) est avantageusement réalisé par ajout d'au moins une protéase et d'au moins une carbohydrase, dans les conditions optimales de pH et de température, connues de l'homme de l'art. Le pH est par exemple compris entre 3,0 et 9,0. La température est typiquement comprise entre 20 et 90°C. En particulier, le traitement enzymatique comprend successivement une étape bl) d'ajout d'une carbohydrase, avantageusement choisie parmi les pectinases, cellulases, arabanases, hémicellulases, xylanases et β-glucanases, puis une étape b2) d'ajout d'une protéase de type alcaline ou acide.

L'étape d'hydrolyse du procédé selon l'invention est très importante, puisqu'elle permet de transformer ou de « découper » les protéines natives présentes dans les graines de passiflore en peptides. Cette étape permet également avantageusement de transformer ou de « découper » les polysaccharides présents dans les graines de passiflore en oligosaccharides ou monosaccharides.

Dans une variante avantageuse du procédé, préalablement à l'étape a) les graines de passiflore sont délipidées. Avant d'être dispersées (étape a)), les graines broyées peuvent être délipidées, notamment dans de l'éthanol. L'élimination des lipides permet une meilleure efficacité des étapes ultérieures de fîltration, ultrafîltration ou nanofîltration. Il est également et préférentiellement possible d'utiliser à titre de graines broyées des tourteaux de ces graines, c'est-à-dire le résidu issu de l'extraction préalable de l'huile. Cette extraction de l'huile peut être réalisée par solvant, par technique de C0 ₂ supercritique ou, préférentiellement, par pressage mécanique.

Lors de l'étape d), l'extrait peptidique et osidique est avantageusement récupéré par extraction de la dispersion obtenue à la fin de l'étape b, sous agitation, avantageusement à un H compris entre 3,0 et 9,0 avantageusement à une température comprise entre 20 et 90°C.

Dans une variante avantageuse, le procédé comprend une étape supplémentaire, entre les étapes b), ou le cas échéant c), et d) de fîltration ou centrifugation, éventuellement suivie d'une ultrafîltration, diafîltration, ou nanofiltration.

Les étapes de fîltration ou de centrifugation, suivies notamment d'une ultrafîltration ou diafîltration sur membranes permettent d'éliminer les protéines résiduelles. Les étapes de nanofiltration permettent d'éliminer des sels minéraux ou des acides aminés libres par exemple.

Le procédé selon l'invention comprend avantageusement une étape d' ultrafîltration à 15 kDa, avantageusement entre 10 et 15 kDa, ce qui permet d'éliminer toute protéine résiduelle potentiellement allergisante.

Dans un mode de réalisation particulier selon l'invention, le procédé comprend également une étape de nanofiltration avec par exemple un seuil de coupure compris entre 100 Daltons et 300 Daltons, avantageusement entre 130 et 300 Daltons, typiquement entre 200 Daltons et 300 Daltons, pour éliminer une partie des acides aminés ou monosaccharides libres ou les sels minéraux, suite à l'étape d'ultrafîltration

Avantageusement, l'extrait peptidique et osidique peut être stabilisé par séchage, par des procédés connus de l'homme de l'art, en présence ou non d'un support de type, par exemple, maltodextrines ou fibres d'acacia (Fibregum® société CNI). La teneur en support varie typiquement selon un ratio allant de 0% à 80% en poids de support par rapport au pourcentage massique de matière sèche obtenu dans la forme liquide de l'extrait. L'extrait est préférentiellement séché par lyophilisation afin d'obtenir une poudre finale. La poudre finale comprend avantageusement 30 à 70%> en poids de matière sèche de l'extrait, le complément à 100% étant le support de lyophilisation. Plus avantageusement la poudre finale comprend en poids 50%> de matière sèche issue de l'extrait et 50%> de support de lyophilisation.

Préférentiellement, à titre d'exemple, l'extrait peptidique et osidique peut être obtenu selon le procédé suivant :

a) mise en solution de tourteau de graines de passiflore délipidées par pressage, à

10%) de matière sèche dans l'eau ; b) hydrolyse enzymatique des carbohydrates par action d'une cellulase (Cellulyve de la société Lyven par exemple)

c) suivi d'une hydrolyse par une protéase acide (par exemple la Prolyve PAC de la société Lyven) ;

d) traitement thermique afin de dénaturer les enzymes ;

e) centrifugation, ultrafîltration et diafïltration sur membranes 15 kDa. Cette étape permet notamment d'éliminer les protéines résiduelles potentiellement allergisantes

f) nanofîltration sur membrane 200 Da. Cette étape permet notamment d'éliminer des sels minéraux ou des acides aminés libres par exemple.

La présente invention a également pour objet un extrait de graines de passiflore en particulier de graines de Passiflora incarnata ou de Passiflora edulis, avantageusement de Passiflora edulis, susceptible d'être obtenu par le procédé mentionné ci-dessus. Un tel extrait répond aux spécifications définies précédemment. En particulier, un tel extrait contient avantageusement 10 à 90 % en poids de peptides et 10 à 90 % en poids de sucres. Plus particulièrement, l'extrait comprend 20 à 70 %, avantageusement 30 à 65 %, en poids de peptides et 20 à 60 %, avantageusement 30 à 55 %, en poids de sucres.

L'extrait est avantageusement utilisé en tant qu'agent actif dans une composition telle qu'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique, qui peut comprendre un ou plusieurs excipients appropriés. La composition peut en outre comprendre au moins un autre composé actif en plus de l'hydrolysat de passiflore. Cet autre composé peut être choisi parmi tous les composés et leurs équivalents fonctionnels, énoncés ci-dessous :

Cet autre composé peut être en particulier choisi parmi des actifs classiquement utilisés en dermatologie ou cosmétique tels que les émollients, les actifs hydratants, les activateurs de la synthèse de kératine, les kératorégulateurs, les kératolytiques, les agents restructurant de la barrière cutanée (activateurs de la synthèse des lipides cutanés), des agonistes PPARs (ou Peroxysome Proliferator Activated Receptor), les agonistes RXR ou LXR, les agents sébo-régulateurs, les agents anti-irritants, les agents apaisants, les agents anti-inflammatoires, les agents anti-oxydants et les agents anti- âge, les agents dépigmentants ou hypo dépigmentants, les agents pigmentants, les agents lipolytiques ou inhibiteurs de la lipogénèse ou encore les agents anti-cellulite ou amincissants, les filtres et écrans solaires minéraux ou organiques, les composés antifongiques, les conservateurs, les agents anti-bactériens, les pré et probiotiques, les antibiotiques, les immuno -modulateurs.

Plus particulièrement, les agents cicatrisants et/ou restructurants de la barrière cutanée pouvant être utilisés en association sont avantageusement le panthénol (vitamine B5), l'arabinogalactane, l'oxyde de zinc, les céramides, le cholestérol, le squalane et les phospho lipides.

Les agents sébo -régulateurs pouvant être utilisés en association sont avantageusement choisis dans le groupe constitué par les inhibiteurs de 5-alpha- réductase. Le zinc (et les dérivés de zinc tels que ses sels gluconate, salicylate et acide pyroglutamique) et la spironolactone, présentent aussi une activité sébo-suppresseur. D'autres séborégulateurs d'origine lipidique agissant sur la qualité du sébum, comme l'acide linoléique présentent également un intérêt.

L'agent anti-inflammatoire et/ou anti-irritant et/ou apaisant peut être 1 ' arabinogalactane .

Les actifs protecteurs solaires pouvant être utilisés en association sont avantageusement des filtres et écrans solaires UVB et/ou UVA, tels les écrans ou filtres minéraux et/ou organiques connus de l'Homme du métier qui adaptera leur choix et leurs concentrations en fonction du degré de protection recherché.

Les conservateurs pouvant être utilisés en association sont par exemple ceux généralement utilisés en cosmétique, les molécules à activité anti-bactérienne (pseudo- conservateurs) tels que les dérivés capryliques comme par exemple le capryloyl glycine et le glycéryl caprylate ; l'hexanediol, le sodium levulinate, et les dérivés de zinc et de cuivre (gluconate et PC A).

Cet autre composé peut être en particulier choisi parmi les extraits végétaux, en particulier :

- les huiles végétales telles que l'huile de soja et/ou l'huile de colza, l'huile d'avocat (WO2004/012496, WO2004/012752, WO2004/016106, WO2007/057439), l'huile de lupin et avantageusement l'huile de lupin blanc doux (W098/47479), ou un mélange de ces huiles ;

l'oléodistillat ou les concentrats d'huile végétale ou animale, notamment de tournesol, plus avantageusement des concentrats de tournesol linoléiques, tels que l'huile de tournesol concentrée en insaponifîables (Soline ^® - WO2001/21 150), commercialisée par les Laboratoires Expanscience, les huiles concentrées en insaponifîables du type huile d'avocat, de colza, de maïs utiles notamment pour leur activité hydratante et/ou émolliente, cicatrisante et/ou restructurante de la barrière cutanée, anti-inflammatoire et/ou anti-irritante et/ou apaisante ;

Les insaponifîables de végétaux ou d'huile végétale, avantageusement des furanes d'avocat (Avocadofurane ^® ), pouvant être obtenus par le procédé décrit dans la demande internationale WO 01/21605 , les insaponifîables d'Avocat et/ou de Soja, plus particulièrement un mélange d'insaponifîables d'Avocat furaniques et d'insaponifîables de soja, avantageusement dans un rapport respectif d'environ 1/3 - 2/3 (tel que Piasclédine®), les insaponifîables de soja (tels qu'obtenus selon le procédé décrit dans le demande internationale WO 01/51596), les insaponifîables stéroliques (typiquement des insaponifîables dont la teneur en stérols, en méthylstérols et en alcool triterpéniques est comprise entre 20 et 95% en poids, de préférence 45-65% en poids, par rapport au poids total de l'insaponifiable), les phytostérols, les esters de stérols et les dérivés vitaminiques, utiles notamment pour leur activité cicatrisante et/ou restructurante de la barrière cutanée, anti-âge, anti-inflammatoire ;

Les peptides ou complexes d'acides aminés végétaux, en particulier les d'avocat (tel que ceux décrits dans la demande internationale WO2005/105123), les peptides de lupin (tel que ceux décrits dans la demande internationale WO2005/102259), les peptides de quinoa (tel que ceux décrits dans la demande internationale WO2008/080974), les peptides de maca (tel que ceux décrits dans la demande internationale WO2004/112742), les peptides de soja fermenté ou non, les peptides de riz (tel que ceux décrits dans la demande internationale WO2008/009709), utiles notamment pour leur activité hydratante et/ou émolliente (avocat), kératorégulatrice (lupin, quinoa), cicatrisante et/ou restructurante de la barrière (maca, quinoa, soja), antiinflammatoire et/ou anti-irritante et/ou apaisante (lupin, quinoa), antioxydante (avocat), anti-âge (lupin, maca), pigmentante (riz), les peptides de schizandra (tel que ceux décrits dans la demande de brevet FR 0955344), l'extrait de graines d'Acacia macrostachya (tels que celui décrit dans la demande de brevet FR 0958525), l'extrait de graines de Vigna unguiculata (tels que celui décrit dans la demande de brevet FR 0958529) ;

- Les sucres végétaux, en particulier les sucres d'avocat (tels que ceux décrits dans la demande WO2005/115421), utiles notamment pour leur propriété kératorégulatrice, cicatrisante et/ou restructurante de la barrière cutanée, antiinflammatoire et/ou irritante et/ou apaisante ;

- Le butyle avocadate (5 alpha Avocuta®), inhibiteur de la 5-alpha réductase (WO 01/52837 et WO 02/06205) et typiquement, régulateur de la sécrétion séborrhée se trouvant augmentée dans l'acné et les pellicules ;

- Les extraits riches en polyphénols, et plus particulièrement les extraits de fruits d'avocat (tels que ceux décrits dans la demande FR 1 061 055), les extraits de feuilles de maca (tels que ceux décrits dans la demande FR 1 061 047), et les extraits de parties aériennes de Gynandropsis gynandra (tels que ceux décrits dans la demande FR 1 061 051),

- Le lupéol (FR 2 8 22 821, FR 2 857 596) utile notamment pour favoriser la cicatrisation ;

- Un beurre de Cupuaçu, particulièrement apprécié pour ses propriétés hydratantes. Cet autre composé peut être en particulier choisi parmi les oxazolines, en particulier celles choisies dans le groupe constitué par la 2-undécyl-4-hydroxyméthyl-4- méthyl-l,3-oxazoline, la 2-undécyl-4,4-diméthyl-l,3-oxazoline, la (E)-4,4-diméthyl-2- heptadéc-8-ényl- 1 ,3-oxazoline, la 4-hydroxyméthyl-4-méthyl-2-heptadécyl- 1,3- oxazoline, la (E)-4-hydroxyméthyl-4-méthyl-2-heptadéc-8-ényl-l,3-oxazo line, la 2- undécyl-4-éthyl-4-hydroxyméthyl-l,3-oxazoline (de préférence la 2-undécyl-4,4- diméthyl-l,3-oxazoline, appelée OX-100 ou Cyclocéramide ^® ; WO2004050052, WO2004050079, et WO2004112741). Elles sont particulièrement utiles pour leur activité anti-inflammatoire et/ou anti-irritante et/ou apaisante, antioxydante, dépigmentant, immunomodulatrice.

Toutes ces associations comprennent au moins un autre composé actif, en plus de l'extrait de graines de Passiflore, et peuvent comprendre deux, trois, quatre ou plus de composés actifs tels que décrits précédemment.

La composition selon l'invention peut être formulée sous la forme de différentes préparations adaptées à une administration topique, à une administration orale, rectale, vaginale, nasale, auriculaire ou bronchique, ainsi qu'à une administration parentérale.

Selon une première variante, les différentes préparations sont adaptées à l'administration topique et incluent notamment les crèmes, les émulsions, les laits, les pommades, les lotions, les huiles, les solutions aqueuses ou hydro-alcooliques ou glycoliques, les poudres, les patchs, les sprays, les shampooings, les vernis ou tout autre produit pour application externe.

La composition comprenant un extrait de graines de passiflores ayant les spécifications indiquées est particulièrement destinée à une utilisation cosmétique, pharmaceutique, dermatologique, nutraceutique.

Dans le cadre d'une utilisation cosmétique, pharmaceutique, ou dermatologique, la composition sera avantageusement formulée sous la forme d'une préparation adaptée à une administration topique. La composition comprenant un extrait peptidique et osidique est particulièrement destinée à une utilisation cosmétique, pharmaceutique, ou dermatologique.

Dans le cadre d'une utilisation alimentaire, à visée nutritive ou cosmétique (« cosmet-food »), la composition sera avantageusement formulée sous la forme d'une préparation adaptée à une administration orale.

L'invention a également pour objet l'utilisation d'un extrait peptidique et osidique de graines de passiflores, ayant les spécifications décrites précédemment, pour la fabrication d'une composition cosmétique, pharmaceutique, dermatologique, d'une composition nutraceutique, ou d'un aliment fonctionnel. Un aliment fonctionnel est un aliment conventionnel, ou qui en a l'apparence, qui fait partie de l'alimentation normale, et qui a pour caractéristique de procurer des effets physiologiques bénéfiques dépassant ses fonctions nutritionnelles habituelles ou de réduire le risque de maladies chroniques.

L'invention a ainsi pour objet un aliment fonctionnel comprenant l'extrait selon l'invention.

L'invention a aussi pour objet un extrait selon l'invention ou une composition selon l'invention pour son utilisation pour prévenir et/ou traiter :

- des troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères

- des troubles vasculaires

- des altérations du tissu adipeux,

- le stress oxydant.

En particulier, la composition ou l'extrait selon l'invention est destiné à la prévention et/ou au traitement des réactions ou pathologies allergiques, inflammatoires, irritatives ou des troubles de la barrière ou de l'homéostasie de la peau, des phanères (cheveux et ongles) et/ou des muqueuses (gencives, parodontes, muqueuses génitales) immature(s), normale(s) ou mature(s)/âgée(s).

Avantageusement, la composition ou l'extrait selon l'invention peut être utilisé(e) pour la prévention et/ou le traitement des réactions, troubles ou pathologies : de la peau, telles que l'acné, la rosacée ou érythrocouperose, le psoriasis, les troubles vasculaires, la dermite du siège, la dermatite atopique, l'eczéma, la dermatite de contact, la dermatite irritative, la dermatite allergique, la dermite séborrhéique (croûte de lait), le psoriasis, la peau sensible, la peau réactive, la peau sèche (xérose), la peau déshydratée, la peau avec rougeur, Pérythème cutané, la peau âgée ou photoâgée, la peau photosensibilisée, la peau pigmentée (mélasma, pigmentation postinflammatoire...), la peau dépigmentée (vitiligo), la peau avec cellulite, la peau relâchée, la peau avec vergetures, les dartres, les gerçures, les piqûres, les crevasses en particulier des seins, les coups de soleil, les inflammations dus aux rayons de toutes sortes, les irritations par agents chimiques, physiques (par exemple contrainte de tension pour les femmes enceintes), bactériologiques, fongiques ou viraux, parasitaires (poux, gale, teigne, acariens, dermatophytes), radiologiques ou par déficit de l'immunité innée (peptides antimicrobiens) ou acquise (cellulaire, humorales, cytokines), et/ou

des muqueuses telles que les gencives et parodontes pouvant présenter des gingivites (gencives sensibles des nouveaux nés, problèmes d'hygiène, dus au tabagisme ou autres), des parodontopathies, ou des muqueuses génitales pouvant présenter des irritations des sphères génitales maies ou femelles externes ou internes et/ou

des phanères tels que les ongles (ongles cassants, fragiles ...) et des cheveux (alopécie, pellicules, hirsutisme, dermites séborrhéiques, folliculites) immatures, normaux ou matures, présentant en particulier des troubles du cuir chevelu tels que les alopécies (ou pelade) androgénétiques, aiguës, localisées, cicatricielles, congénitales, occipitales du nourrisson, aerata, dues à la chimiothérapie/radiothérapie ou encore l'effluvium télogène, l'effluvium anagène, la dystrophie pilaire, la trichotillomanie, la teigne ou les pellicules grasses ou sèches.

L'invention concerne également un procédé de soin cosmétique de la peau et/ou des phanères et/ou des muqueuses, en vue d'améliorer leur état et/ou leur aspect, consistant à administrer une composition ou un extrait selon la présente invention.

En particulier, le procédé de soin cosmétique permet d'affermir la peau et de diminuer l'effet « peau d'orange » avantageusement par voie topique sur la peau et/ou phanères et/ou muqueuses.

L'invention concerne un procédé de soin cosmétique de la peau, en vue d'en prévenir le vieillissement, consistant à appliquer sur la peau une composition ou un extrait selon la présente invention.

La composition ou l'extrait selon la présente invention peut également être avantageusement utilisée dans la prévention et/ou le traitement des troubles vasculaires, en particulier les rougeurs et les couperoses.

La composition ou l'extrait selon la présente invention peut également être avantageusement utilisée dans la prévention et/ou le traitement des altérations du tissu adipeux. Les altérations des tissus adipeux sont en particulier la cellulite ou l'effet « peau d'orange ». La composition selon l'invention permet d'affermir la peau.

Les modes d'administration, les posologies et les formes galéniques optimales des composés et compositions selon l'invention peuvent être déterminés selon les critères généralement pris en compte dans l'établissement d'un traitement pharmaceutique, en particulier dermatologique, cosmétique ou vétérinaire adapté à un patient ou à un animal, comme par exemple l'âge ou le poids corporel du patient ou de l'animal, la gravité de son état général, la tolérance au traitement, les effets secondaires constatés, le type de peau. En fonction du type d'administration souhaitée, la composition et/ou les composés actifs selon l'invention peuvent en outre comprendre au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable, notamment dermato logiquement acceptable, ou un excipient cosmétiquement acceptable. Selon la première variante, on utilise un excipient adapté pour une administration par voie topique externe. La composition selon la présente invention peut en outre comprendre au moins un adjuvant pharmaceutique ou cosmétique connu de l'homme du métier, choisi parmi les épaississants, les conservateurs, les parfums, les colorants, des filtres chimiques ou minéraux, les agents hydratants, les eaux thermales, etc. Les exemples qui suivent permettent d'illustrer l'invention.

Exemple 1 : extrait selon l'invention

Un extrait peptidique et osidique est obtenu selon le procédé suivant :

a) mise en solution de tourteau de graines de Passiflore edulis délipidées par pressage, à 10% de matière sèche dans l'eau ;

b) hydrolyse enzymatique des carbohydrates par action d'une cellulase (Cellulyve de la société Lyven)

c) suivi d'une hydrolyse par une protéase acide (Prolyve PAC de la société Lyven) ; d) traitement thermique afin de dénaturer les enzymes ;

e) centrifugation, ultrafîltration et diafïltration sur membranes 15 kDa afin d'éliminer les protéines résiduelles potentiellement allergisantes

f) nanofïltration sur membrane 200 Da afin d'éliminer des sels minéraux ou des acides aminés ou monosaccharides libres

g) récupération de l'extrait peptidique et osidique.

L'extrait peptidique et osidique liquide ainsi obtenu présente les caractéristiques suivantes :

1 - Analyse physico-chimique (% / matière sèche totale)

Extrait sec (2h, 105°C, étuve ventilée)

pH

Azote α-aminé (OPA, équivalent leucine)

Peptides (Kjeldahl, N x 6.25)

Sucres solubles (HPLC) dont du glucose, fructose Cendres totales

2 - Profil des répartitions des masses molaires des peptides

Inférieur à 130 Da 26%

Entre 130 - 300 Da 17%

Entre 300 - 1200 Da 49%

Entre 1200 - 3500 Da 7%

Supérieur à 3500 Da <1%

Exemple 2 : Compositions pour application par voie topique

Plusieurs compositions pour application par voie topique sont présentées ci-dessous. L'extrait peptidique et osidique de graines de Passiflore, de l'exemple 1, peut être incorporé à divers produits cosmétiques, tels que des eaux nettoyantes, des émulsions huile dans eau, des émulsions eau dans huile, des huiles, des laits, des lotions, des shampooings, des produits moussants et sprays, dont les compositions sont présentées ci-dessous à titre d'exemples.

EAU NETTOYANTE HYDRATANTE

Matière première / Nom commercial ou Nom INCI %

EAU PURIFIÉE QSP 100 %

BIOSACCHARID GUM De 1 à 5 %

BUTYLENE GLYCOL De 1 à 5 %

ACIDE HYALURONIQUE De 0 à 5 %

EXTRAIT PEPTIDIQUE ET OSIDIQUE DE PASSIFLORE De 0,001 à 10 %

CONSERVATEURS De 0 à 1 %

ACIDE CITRIQUE MONOHYDRATE De 0 à 1 °/

TROMETHAMINE De 0 à 1 %

EAU NETTOYANTE PEAU SENSIBLE

EMULSION ANTI-AGE

ISONONYL ISONONANOATE De 1 à 5 °/

CIRE D'ABEILLE De 1 à 5 %

TARTRATE DE SODIUM De 1 à 5 %

CHLORURE DE SODIUM De 0 à 5 %

GLYCINE De 1 à 5 °/

CONSERVATEURS De 0 à 1 %

CHOLESTEROL De 0 à 1 %

PHYTOSPHINGOSINE De 0 à 1 %

ACIDE TARTRIQUE De 0 à 1 %

EAU PURIFIEE QSP 100 %

EMULSION RESTRUCTURANTE

Matière première / Nom commercial ou Nom INCI " ..

HYDROGENATED POLYDECENE De 5 à 20 %

LAURYLGLUCOSIDE-GLYSTEARATE De 1 à 5 %

DICAPRYLYL CARBONATE De 1 à 5 %

GLYCEROL De 5 à 20 ¹

CARBOPOL De 0 à 1 %

GOMME XANTHANE De 0 à 1 %

ACIDE ASIATIQUE De 0 à 1 %

VITAMINE B5 De O à 5 %

EXTRAIT PEPTIDIQUE ET OSIDIQUE DE PASSIFLORE De 0,01 à 10 %

LESSIVE SOUDE De 0 à 1 °/

CONSERVATEURS De 0 à 1 %

ACIDE CITRIQUE De 0 à 1 °/

EAU PURIFIÉE QSP 100 %

HUILE AMINCISSANTE

Matière première / Nom commercial ou Nom INCI %

SOLUBILISANT De 0 à 1 %

HUILE AMANDE DOUCE De 5 à 20 %

CAPRYLATE / CAPRATE DE COPRAH QSP 100 %

HUILE DE MACADAMIA RAFFINEE De 5 à 20 %

CAPRYLO CAPRATE DE GLYCEROL De 5 à 20 %

ALPHA BISABOLOL NAT De 0 à 1 %

ALPHA TOCOPHEROL De 0 à 1 %

EXTRAIT DE LIERRE De 0 à 5 °/

EXTRAIT PEPTIDIQUE ET OSIDIQUE DE PASSIFLORE De 0,01 à 10 %

CONSERVATEUR De 0 à 1 %

ESTER De 0 à 1 %

LAIT pour PEAU SECHE, ATOPIQUE

Matière première / Nom commercial ou Nom INCI " ..

HUILE AMANDE DOUCE De 1 à 5 %

HUILE MAIS

ACIDE STEARIQUE De 1 à 5 °/

ALCOOL CETYLIQUE Cl 6 Cl 8 De 0 à 1 %

ANTIMOUSSE 70414 De 0 à 1 °/ ALCOOL LAURIQUE 1 ÎOE De 1 à 5 °/

MONOLAURATE PEG 300 De 0 à 1 %

MONOLEATE DE GLYCEROL De 0 à 1 %

MONOSTEARATE DE GLYCEROL De 1 à 5 %

VITAMINE B 12 De 0 à 5°/

EXTRAIT PEPTIDIQUE ET OSIDIQUE DE PASSIFLORE De 0,1 à 10

CONSERVATEURS De 0 à 1 %

ACIDE CITRIQUE De 0 à 1 %

CITRATE TRISODIQUE De 0 à 1 %

EAU PURIFIEE QSP 100 %

PARFUM 1 te 0 à 1 %

HUILE ARACHIDE De 1 à 5 %

HUILE PALMISTE HYDROGENEE De 1 à 5 %

MOUSSANT

Matière première / Nom commercial ou Nom INCI %

EAU PURIFIÉE QSP 100 %

LAUROAMPHOACETATE De 5 à 20 %

COCOGLUCOSIDE De 5 à 20 %

TENSIOACTIF 1 De 5 à 20 %

TENSIOACTIF 2 De 5 à 20 %

DISTEARATE DE PEG 6000 De 1 à 5 %

CONSERVATEURS De 1 à 5 %

EXTRAIT PEPTIDIQUE ET OSIDIQUE DE PASSIFLORE De 0,001 à 10 %

EXTRAIT CAMOMILLE De 1 à 5 °/

ACIDE CITRIQUE MONOHYDRATE De 0 à 1 °/

SEQUESTRANT De 0 à 1 %

PARFUM De 0 à 1 %

LESSIVE SOUDE De 0 à 1 °/

SPRAY APAISANT

Matière première / Nom commercial ou Nom INCI %

EAU PURIFIÉE QSP 100 %

TRILAURETH-4 PHOSPHATE De 1 à 5 %

DICAPRYLYL CARBONATE De 1 à 5 °/

BUTYLENE GLYCOL De 1 à 5 %

ERYTHRITYL ESTER De 1 à 5 %

HUILE VASELINE FLUIDE De 1 à 5 °/

BEURRE DE KARITE De 0 à 1 %

HUILE VEGETALE De 0 à 1 %

CONSERVATEURS De 0 à 1 °/

LYCOPENE De 0 à 5 °/

EXTRAIT PEPTIDIQUE ET OSIDIQUE DE PASSIFLORE De 0,01 à 10 %

LESSIVE SOUDE De 0 à 1 %

PARFUM De 0 à 1 %

GOMME XANTHANE De 0 à 1 %

CARBOPOL De 0 à 1 °/ SEQUESTRANT De 0 à 1 °/

ACIDE CITRIQUE De 0 à 1 %

CREME LAVANTE PURIFIANTE

EMULSION ANTI-ROUGEURS

Matière première / Nom commercial ou Nom INCI %

PEG 40 STEARATE De 1 à 5 %

PEG 5 GLYCERYL STEAR 1 te 1 à 5

CERESINE WAX De 1 à 5 %

MONOSTEARATE DE GLYCEROL De 1 à 5 %

SOIN REPARATEUR

EMULSION DEPIGMENTANTE

STICK ROLL-ON ANTI-BACTERIEN

SOIN GOMMANT

Matière première / Nom commercial ou Nom INCI %

ARLATONE DUO De 5 à 20 %

AGENT GOMMANT De l à 10 ' SCLEROTIUM GUM De l à 10 '

CONSERVATEURS De 0 à 1 %

CAPRYLOYL GLYCINE De 0 à 1 %

SOUDE De 0 à 1 %

EXTRAIT PEPTIDIQUE ET OSIDIQUE DE PASSIFLORE De 0,01 à 10 %

SEQUESTRANT De 0 à 1 %

ACIDE CITRIQUE De 0 à 1 %

EAU PURIFIÉE QSP 100 %

PARFUM De 0 à 1 %

FLUIDE KERATINISANT

Matière première / Nom commercial ou Nom INCI %

CETYL ALCOHOL De 1 à 5 °/

SILICONE 345 De 1 à 5 %

ANTI-OXYDANT De 0 à 1 °/

EAU PURIFIEE QSP 100 %

CETRIMONIUM CHLORIDE De 0 à 5 %

QUINIE De 0 à 5 %

VITAMINE B5 1 >e 0 à 5 %

EXTRAIT PEPTIDIQUE ET OSIDIQUE DE PASSIFLORE De 0,01 à 10 %

HYDROLYZED WHEAT PROTEIN De 0 à 1 %

CONSERVATEUR De 0 à 2 %

PARFUM De 0 à 1 %

AJUSTEUR pH De 0 à 1 %

SHAMPOOING ANTIPELLICULAIRE

Matière première / Nom commercial ou Nom INCI " ..

EAU PURIFIÉE QSP 100 %

LAUROAMPHOACETATE De 5 à 20 %

COCOGLUCOSIDE De 5 à 20 %

DISTEARATE DE PEG 6000 De 1 à 5 %

CONSERVATEURS De 0 à 2 %

VITAMINE F De 0 à 5 °/

PIROCTONE OLAMINE De 0 à 2 %

EXTRAIT PEPTIDIQUE ET OSIDIQUE DE PASSIFLORE De 0,01 à 10 %

ZINC PYRITHIONE De 0 à 1 °/ AJUSTEUR pH De O à 1 %

SEQUESTRANT De 0 à 1 %

PARFUM De 0 à 1 %

FLUIDE DEMELANT

Matière première / Nom commercial ou Nom INCI %

CETEARYL ALCOHOL

De 1 à 5 % CETEARETH - 33

QUATERNIUM- 82 De 0 à 2 %

EAU PURIFIEE QSP 100 %

HYDROLYZED WHEAT PROTEIN De O à 5 %

CONSERVATEURS De 0 à 2 % AJUSTEUR H De 0 à 1 °/

PARFUM De 0 à 1 %

CYSTEINE De 0 à 5 %

EXTRAIT PEPTIDIQUE ET OSIDIQUE DE PASSIFLORE _{De 0} ^ _{0 1 à l 0} o _o ~

LOTION CAPILLAIRE FORTIFIANTE

Matière première / Nom commercial ou Nom INCI " ..

EAU PURIFIEE QSP 100 %

METHYL PROPANEDIOL De 5 à 20°

CONSERVATEUR 1 >e 0 à 2 %

AJUSTEUR pH De 0 à 1 %

PARFUM De 0 à 1 °/

BIOTINE 1 te 0 à 5 %

VITAMINE B9 De 0 à 5 %

EXTRAIT PEPTIDIQUE ET OSIDIQUE DE PASSIFLORE De 0,01 à 10 %

BETA-SITOSTEROL De 0 à 1 °/

ETHYLHEXYL COCOATE De O à 5%

PEG-40 CASTOR OIL De 0 à 5%

STICK PHOTOPROTECTEUR

Matière première / Nom commercial ou Nom INCI %

HUILE DE RICIN QSP 100%

ALCOOL OLEIQUE De 10 à 20%

HUILE PALMISTE De 10 à 20%

POLYGLYCERIN-3 -BEEWAX De 10 à 20%

CIRE DE CANDELILLA De 10 à 20%

HECTORITE De 10 à 20%

TITANIUM DIOXYDE De 0 à 5°/

EXTRAIT PEPTIDIQUE ET OSIDIQUE DE PASSIFLORE De 0,01 à 10 %

BEURRE DE KARITE De O à 5%

VITAMINE E De O à 1°/

CREME SOLAIRE SPF 50+

Matière première / Nom commercial ou Nom INCI %

EAU PURIFIÉE B4 QSP 100%

OXYDE DE TITANE De 10 à 20%

CYCLOPENTASILOXANE De 5 à 15°

OCTYL PALMITATE De 5 à 15%

C12-C15 ALKYL BENZOATE De 5 à 10%

DECYL PENTANOATE De 5 à 10°

OXYDE DE ZINC De 5 à 10%

GLYCEROL De 1 à 5%

PEG-45/DODECYL GLYCOL COPOLYMERE De 1 à 5°/

EXTRAIT PEPTIDIQUE ET OSIDIQUE DE PASSIFLORE De 0,01 à 10 %

CHLORURE DE SODIUM De 1 à 5°/

DEXTRIN PALMITATE De 1 à 2%

VITAMINE E De 0 à 2°/

CONSERVATEURS De 0 à 2%

VERNIS POUR ONGLES FRAGILES ET CASSANTS

Matière première / Nom commercial ou Nom INCI %

ACRYLATE COPOLYMER De 15 à 30 %

ETHANOL QSP 100%

ACETONE De 5 à 20 %

EXTRAIT PEPTIDIQUE ET OSIDIQUE DE PASSIFLORE De 0,01 à 5 %

Exemple 3 : Compositions pour administration par voie orale -

Les extraits de Passiflora edulis peuvent être avantageusement intégrés à des compositions orales, typiquement dans des compositions permettant l'administration de 50 mg à 200 mg d'extrait de Passiflora edulis par jour.

1/ Composition anti-vergetures sous forme de capsules molles

- EXTRAIT de Passiflora edulis 30 mg

- Huile d'Awara 60 mg

- Huile de colza riche en insaponifiable 300 mg - Vitamine du groupe B (Bl, B2, B3, B5, B6, B9, B12), QSP 100% des AJR

- Tocotriénols QSP 50 % AJR

- Vitamine E

- Cire d'abeille

- Lécithine de soja

- Gélatine alimentaire

- Glycérine QSP 1 capsule molle Cette composition est administrée de 4 à 6 capsules de 500 mg par jour.

2/ Comprimés anti-chute cheveux

- EXTRAIT de Passiflora edulis 25 mg

- Extraits de céréales (blé, sarrasin, millet, épeautre)

riche en acides aminés soufrés 200 mg

- Vitamine C QSP 50 % des AJR

- Glycosaminoglycanes issus de cartilages de poissons 200 mg

- Glucidex IT 19 (agent de compression) QSP 1 comprimé de 800 mg. Cette composition est administrée de 5 à 8 comprimés par jour.

3/ Exemples en stick poudre amincissant

- EXTRAIT de Passiflora edulis 100 mg

- Extrait de thé riche en polyphénols 100 mg

- Extrait de raisin riche en OPC 50 mg

- Bétaglucanes d'origine végétale 100 mg

- Gomme xanthane 1 mg

- Ascorbate de sodium 0,3 mg

- Maltodextrine QSP 5 g.

Cette composition est administrée 2 fois par jour.

- EXTRAIT de Passiflora edulis 100 mg

- Extrait de cente lia asiatica 100 mg

- Magnésium, sélénium, manganèse QSP 100 % des AJR. - Gomme xanthane 1 mg

- Ascorbate de sodium 0,3 mg

- Maltodextrine QSP 5 g.

Cette composition est administrée 2 fois par jour. 4/ Exemple en barre céréalière goût chocolat

- EXTRAIT de Passiflora edulis 200 mg - Lycopène 6 mg,

- Astaxanthine 4 mg

- Fucoxanthine 4 mg

- Lutéine sous forme micro-encapsulée 4 mg

- Tocotriénol micro-encapsulés QSP 100 % AJR en vitamine E.

- Chocolat noir, oligo fructose, sucre, sirop de fructose, cacao

maigre en poudre, céréales croustillantes, lait écrémé en poudre,

amandes, glycérol, sorbitol, huiles végétales, sirop de glucose,

arôme, lait condensé sucré, lécithine de soja, mono-et

diglycérides d'acides gras, sirop caramélisé, maltodextrine,

sel, sorbate de potassium, alpha tocophérol. QSP

une barre de 50 g.

Cette composition est administrée une fois par jour.

5/ Exemple en barre céréalière goût vanille

- EXTRAIT de Passiflora edulis 200 mg

- Extraits de céréales (blé, sarrasin, millet, épautre)

riche en acides aminés soufrés 200 mg

- Glycosaminoglycanes issus de cartilages de poissons 200 mg

- Extrait de thé vert riche en polyphénols 200 mg

- Oligo fructose, sucre, sirop de fructose, céréales

croustillantes, lait écrémé en poudre, amandes,

glycérol, sorbitol, huiles végétales, sirop de glucose,

arôme, lait condensé sucré, lécithine de soja,

mono-et diglycérides d'acides gras, sirop caramélisé,

maltodextrine, sel, sorbate de potassium, alpha tocophérol. QSP

une barre de 50 g.

Cette composition est administrée une fois par jour.

6/ Exemples en boisson lactée goût praliné

- EXTRAIT de Passiflora edulis 200 mg

- Extrait de thé vert riche en polyphénols 100 mg.

- Vitamine du groupes B (Bl, B2, B3, B5, B6, B9, B12) QSP 100 % des AJR.

- Zn, Mg, Se QSP 100 % des AJR.

- Lait écrémé en poudre, arôme, fructose, blanc d'œuf,

noisettes, sucre, caramel, béta-carotène, gomme xanthane,

aspartame, acésulfame de potassium, lécithine de soja, maltodextrine QSP un sachet de 30 g-

Cette composition est administrée une fois par jour. Exemple 4 : Tests d'activités biologiques de l'extrait selon l'invention

L'extrait peptidique et osidique de passiflore de l'exemple 1 est nommé ci-après dans cet exemple hydrolysat de passiflore. A - Screening d'activités sur Kératinocvtes Humains Normaux (KHN)

Les activités biologiques de l'hydrolysat de Passiflore ont été évaluées par un test de modulation d'expression de gènes sur cultures de KHN : étude du profil d'expression sur puces Agilent Whole Génome Microarray comportant 43 376 séquences géniques.

a - Matériel et Méthodes

Les KHN ont été mis en culture durant 24 heures, puis traités par l'hydrolysat de Passiflore à 0.05% de matière sèche. Le traitement des kératinocytes a été effectué en décalé (72h, 24h, 6h) de manière à ce que chaque point d'analyse soit cultivé durant la même durée soient 72 + 24 heures.

L'expression des gènes sélectionnés a été évaluée par RT-PCR quantitative.

Les rapports des intensités (Ri) des échantillons traités versus le contrôle ont été calculés pour chaque gène et chaque condition de traitement.

b - Résultats

Les résultats considérés comme significatifs, sont ceux pour lesquels Ri est >2 pour chaque temps de cinétique mais aussi aux deux temps consécutifs soit 3-6h soit 6-24h. II a pu être mis en évidence :

Un effet anti-apoptotique, exprimé par l'inhibition par l'hydrolysat de Passiflore du facteur de transcription ATF3, lui-même facteur transcriptionnel de gènes pro- apoptotiques de la famille des GADD, d'autres gènes pro-apoptotiques inductibles par le stress comme DDIT4, FANCE, IRS2 et sa cible FOX03.

Un effet activateur de la prolifération cellulaire, via l'induction des gènes des cyclines CCNB1, CCND1 et la kinase cycline-dépendante CDK1. Cette observation est renforcée par l'induction de gènes impliqués dans divers mécanismes liés à l'activation cellulaire comme la réplication d'ADN (RFC4, TIPIN), la mitose (CDCA7, CDCA8), l'épissage (SF3A3, SRSF7), la transcription de l'AR (POP1) ou la traduction protéique (WDR3, NOP56, MRT04).

Un effet activateur de la biosynthèse des stérols, suggérant une activité protectrice de la couche cornée et donc de la barrière épidermique. Cela passe par l'activation des gènes : ACAT1, ACAT2, HMGCS1, HMGCR, MVD, FDPS, FDFT1, SQLE, LSS, MSM01/SC4MOL, DHCR, EBP, DHCR7, LIPA et SOAT1.

Un effet activateur des mécanismes anti-oxydants, qui passe par l'induction des métallothionéines MT1A , MT1B, MT1E, MT1F, MT1G, MT1H, MT1L, MT1M, MTIX, MT2A, la stimulation de gènes de plusieurs enzymes impliquées dans la biosynthèse du glutathion : GSTA4, GSTM3, MGST2, GPX1, GPX2, GPX8, GSS, PRDX1 ou encore de la superoxyde dismutase SOD1 et de la stimulation des gènes de plusieurs facteurs de transcription codés par MAFB, ATF3 et JUN, facteurs importants pour la réponse au stress oxydatif via leur fixation ausx motifs ARE (Antioxydant Response Elément) et HRE (Hypoxia Response Elément).

B - Screening d'activités sur Fibroblastes Humains Normaux (FHN)

Les activités biologiques de l'hydrolysat de Passiflore ont été évaluées par un test de modulation d'expression de gènes sur cultures de FFÎN. Ainsi l'expression de 46 gènes impliqués dans la biologie du derme, du remodelage des tissus conjonctifs et du vieillissement, et 46 gènes impliqués dans les fonctions clés de l'épiderme, telles que la fonction barrière en lien direct avec l'hydratation de l'épiderme, la réponse antioxydantes, ou encore la pigmentation par les mélanocytes, en présence de l'hydrolysat de passiflore dans le milieu de culture, a été étudiée par qRT-PCR.

a - Matériel et Méthodes

L'hydrolysat de passiflore a été dilué dans le milieu de culture. Les cultures de FFÎN sont traitées avec 0.01% et 0.05% d'hydrolysat de passiflore pendant 24h (et par TGF i molécule témoin). Au terme de l'application, les différences d'expression géniques ont été analysées par qRT-PCR. Les modifications d'expression de gènes, induites par l'hydrolysat de passiflore, sont exprimées sous forme de quantité relative (RQ) par rapport à la condition correspondant à une culture non traitée (si RQ>1 : stimulation de l'expression du gène et RQ<1 : inhibition de l'expression du gène). b - Résultats

Effet activateur des mécanismes anti-oxydants

L'hydrolysat de passiflore à 0.01% induit l'expression du gène MSRA (Mitochondrial peptide méthionine sulfoxide reductase A), enzyme mitochondriale connue pour son pouvoir anti-oxydant.

De même l'hydrolysat de passiflore à 0.05%> induit l'expression du gène NQOl (NAD(H)dehydrogenase quinone 1), enzyme anti-oxydante qui possède une activité identique à la superoxyde dismutase.

Par augmentation de la MSQRA et de NQOl ; l'hydrolysat de passiflore permettrait aux fïbroblastes de derme humain d'être plus résistant vis-à-vis des dommages oxydatifs responsables du vieillissement cellulaire et donc cutané.

Effet sur les composés de la Matrice Extra-Cellulaire

L'hydrolysat de passiflore à 0.01 et 0.05%> induit l'expression du gène SDCl codant pour le syndécan 1 qui est un protéoglycane transmembranaire et qui joue un rôle essentiel dans la cohésion des tissus.

Tableau 1 C - Screening d'activités sur Epidermes Reconstruits Mélanisés

Les activités biologiques de l'hydrolysat de Passiflore ont été évaluées par un test de modulation d'expression de gènes sur épidémies reconstruits mélanisés. Ainsi l'expression de 46 gènes impliqués dans la biologie du derme, du remodelage des tissus conjonctifs et du vieillissement, et 46 gènes impliqués dans les fonctions clés de l'épidémie, telles que la fonction barrière en lien direct avec l'hydratation de l'épidémie, la réponse anti-oxydantes, ou encore la pigmentation par les mélanocytes, en présence de l'hydrolysat de passiflore dans le milieu de culture, a été étudiée par qRT-PCR.

a - Matériel et Méthodes

L'hydrolysat de passiflore a été dilué dans le milieu de culture. Les épidermes sont traitées avec 0.01% et 0.05%> d'hydrolysat de passiflore pendant 24h (et par TGF i molécule témoin). Au terme de l'application, les différences d'expression géniques ont été analysées par qRT-PCR. Les modifications d'expression de gènes, induites par l'hydrolysat de passiflore, sont exprimées sous forme de quantité relative (RQ) par rapport à la condition correspondant à une culture non traitée (si RQ>1 : stimulation de l'expression du gène et RQ<1 : inhibition de l'expression du gène). b - Résultats

Effet sur les gènes impliqués dans la cohésion derme / épiderme

L'hydrolysat de Passiflore à 0.05%> induit l'expression de LAMC2, gène codant pour la laminine C2 ; l'hydrolysat de passiflore pourrait ainsi contribuer au renfort de la jonction dermo-épidermique et donc favoriser la fermeté de la peau.

Effet sur les gènes impliqués dans la fonction barrière de l'épiderme

L'hydrolysat de passiflore à 0.05%> induit l'expression du gène codant pour l'involucrine (IVL), protéine structurelle de l'enveloppe cornée, impliquée dans les étapes d'initiation et de maturation des cornéocytes et joue donc un rôle essentiel dans la fonction barrière de l'épiderme. Il stimule également l'expression du gène de la fïlaggrine (FLG), impliquée également dans l'hydratation et la fonction barrière.

Effet sur d'autres gènes

L'hydrolysat de passiflore diminue l'expression de MC1R, impliqué dans le processus de mélanogénèse, de PTGS2, impliqué dans la réponse inflammatoire et BIRC5, facteur anti-apoptotique marqueur des cellules souches. Hydrolysat de Hydrolysat de passiflore passiflore 0.01% 0.05%

Essais Nom des gènes RQ p-value RQ p-value

LACMC2 - Laminin subunit gamma-2 2.7769 0.026 Hs01043711_ml

IVL - Hs00846307_sl Involucrin 1.4151 0.0048

MC1R - Hs00267167_sl Melanocyte-stimuling 0.7131 0.0194 hormone receptor

PTGS2 - Prostaglandin G/H synthase 2 0.5185 0.0438 Hs01573476_gl

BIRC5 Baculoviral IAP repeat- 0.5122 0.0007

Hs00977611_gl containing protein 5 (survivin)

NTRK2 - BDNF/NT-3 growth factors 0.1707 0.0359 Hs01093103_ml receptor

FLG - Hs00863478_gl Filaggrin 0.7257 0.01555

Tableau 2

D. Effet sur la lipolyse du tissu adipeux humain

Le tissu adipeux blanc humain exerce une fonction métabolique fondamentale en fournissant aux autres tissus de l'organisme des molécules énergétiques sous forme d'acides gras libérés par le processus de lipolyse adipocytaire. L'adipocyte mobilise ses réserves énergétiques par hydrolyse des triglycérides stockés en acides gras et glycérol. Les acides gras ainsi libérés dans le sang sont utilisables par les autres tissus à des fins énergétiques.

L'effet de l'hydrolysat de passiflore sur la lipolyse adipocytaire a été évalué par le dosage du glycérol libéré lors de l'hydrolyse des triglycérides stockés dans les adipocytes matures humains cultivés en 3 dimensions.

a) Matériel et méthodes

Des adipocytes matures, isolés à partir de biopsies de tissu adipeux sous-cutané de quatre donneurs femmes normopondérées ou en surpoids, ont été incubés en présence de l'hydrolysat de passiflore pendant 4 heures à 37°C. Le glycérol libéré a été dosé par une méthode colorimétrique, les valeurs obtenues ont été normalisées à la quantité d'ADN. Les résultats ont été comparés statistiquement au moyen d'une analyse de variance à un facteur suivie d'un test de Dunnett.

b) Résultats

Les résultats sont reportés dans le tableau suivant :

Tableau 3

L'hydrolysat de passiflore à 0,005% a signifîcativement stimulé la libération de glycérol montrant un effet activateur de la lipolyse adipocytaire.

E. Activité anti-tyrosinase

La tyrosinase est une enzyme clé dans la synthèse de mélanine. Des inhibiteurs spécifiques de cette enzyme peuvent conduire à une inhibition de la synthèse de mélanine et ainsi induire des effets dépigmentants.

L'effet de l'hydrolysat de passiflore a été évalué sur l'activité de la tyrosinase extraite de mélanocytes humains (test acellulaire).

a) Matériel et méthodes

L'hydrolysat de passiflore et la référence de l'essai (acide kojique) ont été mis en présence de l'extrait enzymatique (tyrosinase) et incubés pendant 10 minutes sur glace. A la fin de l'incubation, le substrat L-DOPA à 2 mM a été ajouté et les échantillons ont été incubés 1 heure à 37°C. L'activité enzymatique a été évaluée par colorimétrie (lecture de la densité optique à 540 nm). Les résultats ont été exprimés en pourcentage d'activité tyrosinase et comparés statistiquement à l'aide d'un test t de Student.

b) Résultats

Les résultats sont reportés dans le tableau suivant : Activité tyrosinase (%

P CI50

Témoin)

Contrôle 100 - -

Acide kojique 0,0625 mM 95 Ns

Acide kojique 0,125 mM 93 Ns

Acide kojique 0,25 mM 88 p<0, 05 0,76 mM

Acide kojique 0,5 mM 66 p<0, 001

Acide kojique 1 mM 36 p<0, 001

Hydrolysat de passiflore 0,005% 101 Ns

Hydrolysat de passiflore 0,01% 97 Ns

Hydrolysat de passiflore 0,05% 83 p<0, 05

0,16%

Hydrolysat de passiflore 0,1 % 70 p<0, 01

Hydrolysat de passiflore 0,5% 0 p<0, 001

Hydrolysat de passiflore 1% -3 p<0, 001

Tableau 4

L'hydrolysat de passiflore a inhibé de façon nette et concentration-dépendante l'activité enzymatique de la tyrosinase (CI50 de 0,16%).

F. Protection contre le stress oxydant

Le stress oxydant, qu'il soit induit de façon endogène ou exogène (tabagisme, pollution atmosphérique, rayonnements UV) est responsable de nombreux désordres cutanés. En effet, via la production de radicaux libres, le stress oxydant peut altérer les différents constituants des cellules de la peau : protéines, lipides, ADN des noyaux et des mitochondries. Un effet anti-oxydant de l'hydrolysat de passiflore a été confirmé en évaluant, d'une part, sa capacité à moduler la production de radicaux libres et d'autre part, son effet protecteur contre la peroxydation des lipides dans des cellules soumises à un stress oxydant.

1. Effet sur la production d'espèces réactives de l'oxygène dans des kératinocytes

L'action anti-oxydante de l'hydrolysat de passiflore vis-à-vis d'un stress oxydatif généré par de l'eau oxygénée (H ₂ 0 ₂ ) dans des kératinocytes a été évaluée par mesure de la quantité d'espèces réactives de l'oxygène produites. Ce test est basé sur l'utilisation d'une sonde (DCFH-DA) qui est dégradée et fluoresce au contact des ROS (Reactive Oxygen Species ou Espèces Réactives de l'Oxygène). La fluorescence émise sera donc proportionnelle à la quantité de ROS produits par la cellule en réponse au stress oxydatif.

a) Matériel et méthodes

Des kératinocytes humains normaux ont été pré-incubés pendant 24 heures en présence d'hydrolysat de passiflore, ou des molécules de référence : Quercétine à ΙΟμΜ ou Vitamine C à 500μΜ. Les cellules ont ensuite été incubées pendant 1 heure en présence de la sonde DCFH-DA puis traitées par ΓΗ ₂ Ο ₂ à ΙΟΟμΜ pendant 20 minutes, toujours en présence de l'hydrolysat de passiflore ou des molécules de référence. Le dosage des ROS a été réalisé par mesure de la fluorescence émise. Les résultats ont été normalisés par le nombre de cellules vivantes déterminé par un test d'incorporation du rouge neutre réalisé en parallèle. La quantité de ROS émis est donc exprimée en densité de fluorescence (DFU) / densité optique issue du test au rouge neutre (DO ₅₄₀ ). Les résultats ont été analysés statistiquement par une analyse de variance à un facteur suivie d'un test de Tukey.

b) Résultats

Les résultats sont reportés dans le tableau suivant :

Tableau 5 L'hydrolysat de passiflore a fortement et de façon hautement significative inhibé la production de ROS induits par le stress H ₂ 0 ₂ . 2. Effet protecteur vis-à-vis de la peroxydation lipidique

L'effet protecteur de l'hydrolysat de passiflore vis-à-vis de la peroxydation lipidique a été évalué dans des cellules Jurkat irradiées aux UV.

a) Matériel et méthodes

Les cellules Jurkat ont été incubées pendant 45 minutes en présence ou non de l'hydrolysat de passiflore ou de la référence (BHT à 50μΜ) et en présence de la sonde fluorescente spécifique pour la mesure des peroxydes lipidiques (Ci l -fluor). Cette sonde fluorescente est un analogue de lipide qui s'intègre aux membranes et dont l'intensité de fluorescence diminue lorsqu'elle est peroxydée. Les cellules ont ensuite été irradiées par les UV (UVB 240mJ/cm ² + UVA 3,5J/cm ² ) en présence de l'hydrolysat de passiflore ou de la référence. A la fin de l'irradiation, les cellules ont été incubées pendant 30 minutes à 37°C avant d'être analysée par cytométrie en flux. Les résultats obtenus en intensité de fluorescence ont été exprimés en % du témoin irradié.

b) Résultats

Les résultats sont reportés dans le tableau suivant :

Tableau 6

L'hydrolysat de passiflore à 0,05% a protégé les cellules de la peroxydation lipidique induite par l'irradiation UV (24% de protection).