本发明属于医药领域， 具体涉及一种含有氨基酸的化合物、 其衍生物及 制备方法。 背景技术

HCV ( hepatitis C vims )属于黄病毒科肝病毒属， 包括 I 、 II、 III等 6种 基因型 (gene type: gt)和 12种基因亚型， 其中 gtla和 gt2b亚型研究较多。 世界范 围内约 1.7亿人口感染 HCV,其中近 60%-80%将发展为慢性肝炎， 部分进一步 发展为肝硬化和肝癌。 HCV尚缺乏有效的疫苗预防， 近 20年来的治疗方法主 要是 IFN-a (或 PEG修饰的长效 IFN )和广谱抗病毒药物利巴韦林的联合使用， 其针对 II型和 III型患者疗效显著， 但仅对 40%左右的 I型患者有效， 而且皮 疹等严重的副作用也影响了它们的使用。 随着以 HCV NS3/4A为靶标的抑制 剂特拉匹韦与 IFN-a和利巴韦林在临床上的联合应用， HCV NS3/4A抑制剂已 经成为研究热点。 目前， 已经有很多针对 HCV NS3/4A的抑制剂被研发出来。

HCV含 (+)-RNA单链， 后者的 5' 非编码区包括 4个茎环序列 （ stem loop, SL ) ， 其中 SL2-4构成内部核糖体进入位点 (internal ribosom entrysite, IRES), 与 40S核糖体亚单位结合后启动 HCV多聚蛋白的翻译。 多聚蛋白包括结构蛋 白和非结构蛋白 (NS)两个部分， 如附图 1所示， 前者位于多聚蛋白氨基端 1/3, 包括核心蛋白 (core)和 2个包膜糖蛋白 (E1,EZ)， 后者位于多聚蛋白羧基端 2/3， 包括 NS2、 NS3、 NS4A、 NS4B、 NS5A和 NS5B。 NS的加工由 HCV自身编码 的 NS3/4A丝氨酸蛋白酶介导， Ser-139残基亲核进攻 NS3-NS4A、 NS4A-NS4B、 NS4B-NS5A和 NS5A-NS5B连接区的 Cys-Ser酰胺键， 形成的四面体中间体被 存在于氧阴离子穴（ oxy-anion hole ) 中的 His-57固定， 如附图 2所示。 成熟后 的 NS于内质网装配， 形成复制复合体后以病毒基因为模板转录为 (-) -RNA中 间体,再以之为新的模板逆转录形成 (+)-RNA。 （+)-RNA翻译产生多聚蛋白， 进入侵染周期， 包膜后产生病毒子代。

NS3/4A是含锌离子的金属蛋白酶， 由 NS3非共价结合 NS4A构成。 NS3 氨基端 1/3为丝氨酸蛋白酶， 羧基端 2/3为解旋酶和核苷三磷酸酶 (NTPase)。 NS4A作为辅助因子 (cofator)调节 NS3的活性， NS3在未与 NS4A结合时呈非活 性的解折叠状态,当 NS4A 21-34位氨基酸与 NS3 N端约 28-30个有序化的氨基 酸残基借助氢键作用形成反平行疏水核心结构 时， NS3/4A丝氨酸蛋白酶复合 物形成。 NS3/4A C端是 Zn ²⁺ 结合区， 单晶 X射线衍射表明由 3个 Cys和 His咪唑 环与 Zn ²⁺ 作用形成， Zn ²⁺ 起到稳定 NS3/4A空间结构和指导 NS3/4A结构域正确 折叠的作用。 N端与 C端两个结构域上的催化残基 His-57、 Asp-81 , Ser-139构 成了 NS3/4A复合物的活性中心。 NS3/4A具有丝氨酸蛋白水解酶、 解旋酶和 磷酸核苷酶活性,在多聚蛋白的加工成熟和 RNA复制中起作用，亦可阻断 IRF-3 源性的细胞内源性抗病毒反应,对 HCV 完成生命周期起到很重要的作用。

NS3/4A复合物缺少长的表面卷曲， 其二级结合点通常是平的,造成靶标 宽而浅,活性位点处于溶剂暴露下,与抑制剂的� ��合能来源于弱的亲脂和静电 作用。

S1口袋以疏水性氨基酸残基 Val-132、 Leu- 135 , Phe-154为侧链。 第一代 抑制剂诱导产生的突变残基为 Asp-168、 Arg-155 , Ala- 156, 如附图 3所示。

HCV NS3/4 A抑制剂分为共价丝氨酸的底物类似物和内切� �产物类似物 两类。

Cys-Ser酰胺键,亲电部分与有催化作用的丝氨� ��残基形成共价键，模拟水解反 应形成的过渡态类似物， 亲电基团包括醛、 硼酸、 内酰胺、 α -酮酰胺和 α - 酮酸。 以亲电基团为基础的第一代抑制剂， 对丝氨酸蛋白酶家族的选择性较 差,代表化合物为已上巿的特拉匹韦和波西普� �。

特拉匹韦、 波西普韦等 -羰基 HCV NS3/4A抑制剂在人体生理条件下也 易发生 P1手性中心差向异构化的问题， 由有效的 S构型转变为基本无效的 R构 型。

针对该问题， 美国专利 US20070225297采用了将羰基的 α -氢进行氘代， 研究表明氘代后的化合物发生差向异构化的速 率大大降低， 可在一定程度上 保持有效的 S型， 例如特拉匹韦的氘代化合物（简称： D-特拉匹韦）如附图 4。 然而， 虽然氘代后的化合物发生差向异构化的速率降 低， 但是仍然继续 发生差向异构化， 特别是， 将常规适应症的治疗药物进行氘代并且长期应 用 的安全性问题并未得到广泛而深入地验证， 因而有必要通过继续研究进一步 解决上述问题。 发明内容

针对本领域的不足之处， 本发明的目的是提出一种氟代的 α酮酰胺化合 本发明的另一目的是提出所述氟代的 α酮酰 制备方法, 本发明的第三个目的是提出含有氟代的

本发明的第四个目的是提出该氟代的

实现本发明上述目的的技术方案为：

本发明涉及式（1 )所述的氟代的 α酮酰 ， 或其盐或其立体异构 一种氟代的 α酮酰胺， 其具有如下的结构: ( 1 )

R4为 C _W2 烷基、 （^_ ₁₂ 烷氧基、 芳基氧基、 杂芳基氧基、 环烷基、 芳香 基、 杂芳基、 氢化或部分氢化的杂芳基中的一种， 所述 C _W2 烷基、 d_ ₁₂ 烷氧 杂芳基中的 H可以被卤素、 d_ ₁₂ 烷基、 （^_ ₁₂ 烷氧基、 羧基、 氨基、 酰胺基、 硝基中的一种或多种取代；

或者与 R5—起形成环状结构， 该环状结构中的 H可以被卤素、 d_ ₁₂ 烷基、 (^_ ₁₂ 烷氧基、 羧基、 氨基、 酰胺基、 硝基中的一种或多种取代；

R5为氢原子、 d_ ₁₂ 烷基、（^_ ₁₂ 烷氧基、 芳基氧基、 杂芳基氧基、环烷基、 芳香基、杂芳基、氢化或部分氢化的杂芳基中 的一种，其中所述的 d_ ₁₂ 烷基、 分氢化的杂芳基中的 H可以被卤素、 d_ ₁₂ 烷基、 （^_ ₁₂ 烷氧基、 羧基、 氨基、 酰胺基、 硝基中的一种或多种取代；

或者与 R4—起形成环状结构，该环状结构中的 H可以被卤素、 d_ ₁₂ 烷基、 (^_ ₁₂ 烷氧基、 羧基、 氨基、 酰胺基、 硝基中的一种或多种取代；

！^为^^烷基、 环烷基或者 d_ ₁₂ 烷基氨基， 所述的 d_ ₁₂ 烷基、 环烷基任 选被芳酰胺基、 杂芳酰胺基取代；

及其盐。

优选地， 所述 R4为 d_ ₆ 烷基、 d_ ₆ 烷氧基、 氢化或部分氢化的杂芳基中的 一种， 所述 (^_ ₆ 烷基、 d_ ₆ 烷氧基、 氢化或部分氢化的杂芳基中的 H可以被卤 素取代， 或者 R4与 R5—起形成环状结构， 该环状结构中的 H可以被卤素、 d_ ₆ 烷基、 （^_ ₆ 烷氧基中的一种或多种取代；

R5为氢原子、 d_ ₆ 烷基、 d_ ₆ 烷氧基、 芳基氧基、 杂芳基氧基、 氢化或部 分氢化的杂芳基中的一种， 其中的 d_ ₆ 烷基、 d_ ₆ 烷氧基、 芳基氧基、 杂芳基 氧基、 氢化或部分氢化的杂芳基中的 H可以被卤素、 烷基或者芳基取代， 或 者与 R5—起形成环状结构；

R6为 d_ ₆ 烷基、 环烷基或者 d_ ₆ 烷基氨基， 所述的 d_ ₆ 烷基、 环烷基任选 被芳酰胺基、 杂芳酰胺基取代。

更优选地， 所述 R4为丙基、 异丙基、

种 ， 或者 R4与 R5—起形成五元环结构、 或被卤素、 烷基、 烷氧基、 羧基、 氨 基、 酰胺基、 硝基中的一种或多种取代的三元环结构；

R5为氢原子， 或者 R5与 R4—起形成五元环结构、 或被卤素、 烷基、 烷氧 基、 羧基、 氨基、 酰胺基、 硝基中的一种或多种取代的环丙烷；

R6为为 d_ ₆ 烷基、环烷基或者 C1-6烷基氨基， 所述的 C1-6烷基、环烷基任 选被芳酰胺基、 杂芳酰胺基取代。

优选地， 所述 R6为

以上结构式中曲线形状的键表示与其他基团键 合的位置。 进一步地， 所述氟代的 α酮酰胺为以下化合物中的一种:

与式 (3)的胺反应，

O

Η。ΝΚ N R3

R2 O ( 3 ) 得到目标化合物。

其中， 所述的羧酸化合物的活化， 是将羧酸与氯化亚砜或草酰氯反应生 成酰氯； 或者将羧酸通过 EDC反应活化； 或者将羧酸与醇或酚形成活泼酯； 所述的有机溶剂为乙腈、 丙酮、 四氢呋喃、 二氯甲垸、 三氯甲烷、 四氯 化碳、 甲酰胺、 Ν,Ν-二甲基甲酰胺、 二甲基亚砜、 乙酸乙酯、 乙酸甲酯中的 一种或多种。

所述的式 （3 ) 化合物可采用本领域公知的方法制得。

优选地， 采用以下反应路线 Α:

本发明提出式 （3 ) 化合物可由以下两种方法之一制得:

方法一、 式 （4 ) (4) 1 )在酸性条件下， 发生消除脱水反应生成相应的

2) 通过选择性的环氧化处理；

3)在 Olah试剂存在下反应；

4)经过二氧化锰、 氯铬酸吡啶嗡盐 (PCC试剂）、 过 次氯酸钠中 的一种或多种氧化后得到目标产物；

方法二、 式 （4) 的化合物经过：

1 )在酸性条件下， 发生消除脱水反应生成相应的

2) 通过非选择性的环氧化处理；

3)在 Olah试剂存在下反应；

4)经过二氧化锰、 氯铬酸吡啶嗡盐 (PCC试剂）、 过 或者次氯酸钠 中的一种或多种氧化后， 进一步的拆分， 获得目标产物,

方法二的反应路线为：

， 其中 Rl、 R2和 R3如前面所定义。

式 （2) 的化合物已经商业化。

具体地， 式（3)的化合物可以通过将式（4) .性条件下（优 选硫酸、 磷酸、 多聚磷酸、 盐酸、 氢溴酸、 甲磺酸、 苯磺酸、 对甲苯磺酸、 三氟甲磺酸或三氟乙酸）发生消除脱水反应生 成相应的式（5)

后通过选择性的环氧化 （例如史一安反应）或者非选择性的环

用过氧化氢或者过氧化脲）分别得到高 ee值（对映体过量） 的式 （6)， 或者 消旋的式（6' ), 然后在 Olah试剂（HF/pyridine)存在下， 分别得到高 ee值（对 映体过量） 的式 （7)， 或者消旋的式 （7' ), 两者经过氧化后 （二氧化锰、 氯 铬酸吡啶嗡盐 (PCC试剂)、 过氧化氢或者次氯酸钠）得到的产物， 前者直接为 目标产物， 后者需要进一步的拆分（例如， 使用光学的有机酸， 例如酒石酸、 扁桃酸、 樟脑磺酸）才能获得高光学纯度的目标产物。

其中， 式 （1 ) 化合物的合成可以通过： 将式 （ 2 ) 的羧酸化合物经过 活化 （与氯化亚砜或草酰氯反应生成酰氯； 或者与活泼的碳二亚胺， 例如二 环己基碳二亚胺， 即 DCC， 或 1-(3-二甲氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺盐酸盐， 即 EDC反应活化；或者与醇或酚形成活泼酯，例如 与对硝基苯酚或烯丙醇反应；)， 在合适的溶剂中 （例如乙腈、 丙酮、 四氢呋喃、 二氯甲烷、 三氯甲烷、 四氯 化碳、 甲酰胺、 Ν,Ν-二甲基甲酰胺、 二甲基亚砜、 乙酸乙酯、 乙酸甲酯或其 混合物） 与式 （3 ) 化合物在 -20 ~ 100°C下搅拌反应即得。

本发明还提供了式（ 1 )化合物或其盐或其立体异构体作为活性成分� �制 备预防和治疗丙型肝炎疾病药物中的应用。

所述式（1 )化合物的盐为可药用盐， 包括： 其中可应用的、 衍生自可药 用无机以及有机酸的酸性加成盐如氢氯酸盐、 氢溴酸盐、 硫酸盐、 磷酸盐、 马来酸盐、 富马酸盐、 酒石酸盐、 柠檬酸盐、 苯甲酸盐、 4 甲氧基苯甲酸盐、 2 或 4-羟基苯甲酸盐、 4-氯苯甲酸盐、 苯磺酸盐、 烟酸、 甲磺酸盐、 抗坏血酸 盐、 乙酸盐、 琥珀酸盐、 乳酸盐、 戊二酸盐、 葡糖酸盐、 羟基萘羧酸盐、 油 酸盐及氨基酸盐， 常用的氨基酸盐是指甘氨酸盐、 丙氨酸盐、 苯丙氨酸、 天 等； 以及从可药用无机以及有机碱制备的盐， 衍生自无机碱的盐包括铝、 铵、 钙、 铜、 铁、 亚铁、 锂、 镁、 锰、 亚锰、 钾、 钠、 锌以及铋盐， 特别优选的 为铵、 钙、 镁、 钾、 钠盐。 衍生自可药用有机碱的盐包括伯、 仲以及叔胺、 环状胺如精氨酸、 甜菜碱、 胆碱等的盐。

本发明提出的活性成分能以立体异构体的形式 存在， 应该理解为本发明 包括活性成分所有的几何异构体、 光学异构体及其混合物。 本发明提出的化 合物也可以含有一个或多个不对称碳原子， 并且因此可以显示出光学异构和 / 或非对映异构现象。 可以使用常规技术， 例如色谱或分步结晶等， 分离对映 异构体。 所需要的光学异构体也可以通过合适的光学活 性的起始原料， 在不 会造成外消旋或差向 (立体)异构化的条件下的反应（即 '手性池' 方法)， 通过 合适的起始原料与 '手性助剂' 的反应，通过衍生化 (即拆分，包括动态拆分)， 接着通过常规的方式例如色谱分离出对映衍生 物， 或通过在对本领域人员已 知的条件下与合适的手性试剂或手性催化剂反 应， 得到或者反应后分离出对 应异构体， 所有的立体异构体和其混合物都被包括在本发 明的范围内。

本发明的化合物也可显示出互变异构现象， 所有的互变异构形式和其混 合物也被包括在本发明的范围内。

含有本发明所述氟代的 α酮酰胺或其盐或其异构体的组合物， 所述组合 物为药学可接受的剂型， 具体为乳剂、 溶液、 混悬剂、 气雾剂、 片剂、 胶囊、 糖浆、 散剂、 颗粒或栓剂。

含有本发明氟代的 α酮酰胺或其盐或其异构体的组合物， 可以用于制备 各种给药途径的制剂， 包括， 包括乳剂、 溶液、 混悬剂、 气雾剂以及干粉制 剂的形式进行局部给药， 或以片剂、 胶囊、 糖浆、 散剂或颗粒等口服制剂给 药， 或以溶液或混悬液的形式进行肠胃外给药， 或进行皮下给药； 或以栓剂 的形式经直肠给药， 或透皮给药。

本发明所述氟代的 α酮酰胺或其盐或其异构体作为活性成分在制� ��预防 和治疗丙型肝炎药物中的应用。

本发明的有益效果：

通过努力， 本申请的发明人已发现了一系列氟代的 α -羰基类 HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶抑制剂， 研究发现这些氟代的 α -羰基类 HCV NS3/4A 丝氨酸蛋白酶抑制剂的稳定性显著提高， 不但不发生差向异构化（消旋）， 而 且其抑制 HCB的活性得到了进一步的改善。 附图说明

附图 1 HCV 多聚蛋白结构图。

附图 2 切割机制的示意图。

附图 3 HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶结构图。

附图 4 氘代特拉匹韦的化学结构图。 具体实施方式

以下实施例用于说明本发明， 但不用来限制本发明的范围。

在本实施例中， 化学通式 （1) ~ (3)相应的具体的化合物为表 1:

表 1: 化合物结构

实施例中， R2和 R3如前面所定义。

式（4 )的化合物已经商业化， 或者可以依据 WO2007/022459所述的化合 物 24的多种合成方法制备。

式（3 )的化合物可以通过将式（4 )的化合物在酸性条件下（优选硫酸、 磷酸、 多聚磷酸、 盐酸、 氢溴酸、 甲磺酸、 苯磺酸、 对甲苯磺酸、 三氟甲磺 酸或三氟乙酸）发生消除脱水反应生成相应的 式（5 )的烯， 该烯然后通过选 择性的环氧化 （例如史一安反应）或者非选择性的环氧化 （例如使用过氧化 氢或者过氧化脲）分别得到高 ee值（对映体过量） 的式 （6 )， 或者消旋的式 ( 6' ) ， 然后在 Olah试剂 （HF/pyridine )存在下， 分别得到高 ee值（对映体 过量） 的式 （7 )， 或者消旋的式 （7' )， 两者经过氧化后 （二氧化锰、 氯铬酸 吡啶嗡盐 (PCC试剂）、 过氧化氢或者次氯酸钠）得到的产物， 前者直接为目标 产物， 后者需要进一步的拆分（例如， 使用光学的有机酸， 例如酒石酸、 扁 桃酸、 樟脑磺酸）才能获得高光学纯度的目标产物。

在本实施例中， 化学通式 （3 ) ~ ( 7 )相应的具体的化合物为表 2:

表 2: 化合物结构

下面的描述中， 如无特殊说明， 可以根据本领域技术人员已知的手段， 制备本发明的化合物。

用下面的非限制性实施例进一步说明部分本说 明化合物及其制备方法， 同时这些实施例所用的某些原料的制备过程以 后面的制备实施例说明。 实施例 1 氟代特拉匹韦的 R及 S-端基异构体制备

1.1 氟代特拉匹韦的 R-端基差向异构体制备

将 1.54g特拉匹韦的中间体羧酸、 0.4g的 N-羟基苯并三唑及 0.65g的 Ν,Ν-二 环己基碳二亚胺混合后加入 30ml DMF， 室温搅拌 20分钟后加入 0.6g氟代特拉 匹韦中间体胺， 继续室温搅拌反应 2小时后停止反应， 将反应体系过滤， 然后 向滤液中加入 400ml乙酸乙酯， 以饱和食盐水洗涤 3次后， 柱层析得 1.42g的白 色目标产物。

iH-NMR (400 MHz, CDC1 ₃ ): 9.20 (s, 1H), 8.91 (d， 1H), 8.77 (t， 1H)， 8.71 (d， 1H)， 8.51 (s， 1H)， 8.23 (t， 2H), 4.68 (dd， 1H)， 4.54(d， 1H)， 4.28(d, 1H), 3.55(d， 1H)， 3.30(d， 1H), 2.32-46(m, 2H), 1.95-2.17(m, 4H), 0.87 -1.81(m， 30H), 0.57-0.67(m， 4H)。

ESI-MS: m/z 698 (M+l), m/z 699 (M+2), m/z 700(M+3)。

1.2 氟代特拉匹韦的 S-端基差向异构体制备

R-端基异构体制备方法与 1.1所述的方法完全相同， 仅以 S-氟代特拉匹韦中间 体胺替代 R-氟代特拉匹韦中间体胺。

ESI-MS: m/z 698 (M+l), m/z 699 (M+2), m/z 700(M+3)。

R-端基异构体与 S-端基异构体的鉴别条件是使用 LC-MS， LC-MS 谱 定使用配备 BEH C18柱 （2.1 50mm, 1.7 μ m I.D., Waters)及 ESI-API 3000光 谱仪 （ABI-SCIEX, Toronto, Canada) 的 UPLC-SQD 系统 （Waters, USA) ， 结 果报告为阳离子模式。 BEH C18 柱的色谱分离条件为： 温度： 30°C ; 流速： 0.6 mL/min; 流动相： phase A (水）及 phase B (乙腈） 梯度洗脱： 0 2 min内将 phase B的浓度由 5%增加至 95%; 在 2 2.2 min,维持 95% B的浓度； 2.2-2.5 min, 将 phase B的浓度降至 5%. 液相中的流份直接导向 ESI电极， 获得最终的阳离 子模式。

R-端基异构体的保留时间为 1.533分钟， S-端基异构体 1.644分钟， 两者的 质谱完全一样。

将 1.80g化合物 A的中间体羧酸、 0.6g的 N-羟基苯并三唑及 1.05g的 Ν,Ν-二 环己基碳二亚胺混合后加入 50ml DMF， 室温搅拌 20分钟后加入 0.9g氟代特拉 匹韦中间体胺， 继续室温搅拌反应 2小时后停止反应， 将反应体系过滤， 然后 向滤液中加入 500ml乙酸乙酯， 以饱和食盐水洗涤 3次后， 柱层析得 1.86g的白 色目标产物。

^-NMR (400 MHz, CDC13): 1H-NMR (400 MHz, CDC1 ₃ ): 9.21 (s, 1H), 8.91 (d， 1H)， 8.75 (t， 1H)， 8.70 (d， 1H)， 8.53 (s, 1H)， 8.22 (t, 2H), 7.98 (d， 1H)， 7.86 (s， 1H)， 6.87 (d， 1H)， 4.65 (dd， 1H)， 4.53(d， 1H)， 4.42(d, 1H) ， 4.16(m， 1H)， 3.97(d， 1H)， 3.62(d, 1H)， 2.68(m, 1H)， 2.28-46(m, 3H)， 2.04(m, 4H), 0.87 -1.52(m, 22H), 0.57-0.67(m， 4H)。

ESI-MS: m/z785 (M+l), m/z 786 (M+2), m/z 787(M+3)。 实施例 3 氟代波西普韦的制备

将 1.10g波西普韦的中间体羧酸、 0.4g的 N-羟基苯并三唑及 0.65g的 Ν,Ν-二 环己基碳二亚胺混合后加入 30ml DMF, 室温搅拌 20分钟后加入 0.57g氟代波 西普韦中间体胺， 继续室温搅拌反应 2小时后停止反应， 将反应体系过滤， 然 后向滤液中加入 400ml乙酸乙酯， 以饱和食盐水洗涤 3次后， 柱层析得 0.84g的 白色目标产物。

1H-NMR (400 MHz, CDC13): 8.54 (t， 1H)， 8.39 (s, 1H)， 8.31 (s, 1H), 8.26 (t, 2H), 4.57 (d， 1H)， 4.36(d， 1H)， 3.55(d， 1H)， 3.30(d， 1H)， 1.80-2.07(m, 9H)， 0.81 -1.36(m， 26H)。

ESI-MS: m/z 538 (M+l), m/z 539 (M+2), m/z 540(M+3)。

实施例 4 化合物 B的制备

将 1.74g化合物 B的中间体羧酸、 0.42g的 N-羟基苯并三唑及 0.69g的 Ν,Ν- 二环己基碳二亚胺混合后加入 30ml DMF, 室温搅拌 20分钟后加入 0.91g氟代 波西普韦中间体胺， 继续室温搅拌反应 2小时后停止反应， 将反应体系过滤， 然后向滤液中加入 400ml乙酸乙酯， 以饱和食盐水洗涤 3次后， 柱层析得 1.05g 的白色目标产物。

^-NMR (400 MHz, CDC1 ₃ ): 7.40 (t, 1H)， 6.38 (s, 1H)， 4.51 (d， 1H)， 4.33(t， 1H), 3.73(s， 6H)， 3.69(d， 1H), 3.44(d， 1H), 2.95(d, 1H), 2.70(d, 1H), 2.04-2.44(m, 7H)， 0.81 -1.36(m， 23H) ， 0.57-0.67(m， 4H)。

ESI-MS: m/z747 (M+l), m/z747 (M+2), m/z 539 (M+3), m/z 740(M+4)。 制备实施例： 制备 (R)-3-氨基 -N-环丙基 -3-氟 -2-氧代戊酰胺（式 （3 )化合物）

1 ) ( Ε ) -1- (环丙: ) -1- -己 -2-烯 -3-氨基甲酸苄酯的制

将 16.0g的 1- (环丙基氨 ) -2-羟基 -1-氧代 -己基 -3-氨基甲酸苄酯置于 250ml甲苯中， 加入 0.5g对甲. ：磺酸， 将反应体系于 140°C回流 2小时后， 减压 蒸干得定量的目标化合物。

ESI-MS: m/z 301 (M-1),

) -2-丙基环氧乙烷 -2- 甲酸苄酯的

将 15.0g的 （E ) -1- (环丙基氨基羰基） -1-氧代-己 -2-烯 -3-氨基甲酸苄酯 置于 50ml冰乙酸的 150ml的二氯甲烷混合溶液中， 于室温下缓慢滴加入 10ml 过氧化氢（30% )水溶液， 滴毕继续在该条件下搅拌反应 3小时， 然后减压除 去二氯甲烷后， 向剩余溶液中加入 100ml饱和氯化钠水溶液， 继续搅拌得到无 色固体， 过滤， 低温真空干燥得 9.5g目标产物。

ESI-MS: m/z 317 (M-l) ₀ 3 ) 3-氨基 -N-环丙基 -3-氟 -2-羟基-己酰胺的制备

将 6.4g的 3- (环丙基氨基羰基） -2-丙基环氧乙烷 -2-基 -氨基甲酸苄酯置于 lg的 Olah试剂 （HF/pyridine ) 的 20ml乙腈中， 室温反应 1小时后， 停止反应后 减压除去乙腈， 向剩余溶液中加入 100ml饱和氯化钠水溶液， 继续搅拌得到粘 稠固体， 滤过干燥后， 溶解在 100ml甲醇中， 加入 0.5g的钯 /碳、 3g的甲酸铵回 流反应 3小时， 将反应的浓缩物以柱层析纯化得 1.8g目标产物。

ESI-MS: m/z 205 (M+l) ₀

4 ) 目标化合物的制备

将 lg的 3-氨基 -N-环丙基 -3-氟 -2-羟基 -己酰胺至于 30ml二氯甲烷中， 搅拌 下加入 1.6g 的 PCC (三氧化铬的吡啶盐酸盐）， 室温反应 3小时后， 停止反应 后以 10ml X 3的饱和氯化钠水溶液洗涤后， 向其中加入 S-扁桃酸 0.75g的 5ml二 氯甲烷溶液，搅拌 0.5小时后蒸干后以 15ml 95%的乙醇重结晶， 得 0.36g目标产 实施例 5 分子稳定性测定

参考 US20070225297及 J. Med. Chem. 2009, 52, 7993 - 8001所述的方法， 分别采用两种条件：

条件一、 样品直接以乙腈溶解， 制备得 lOuM浓度的待测试溶液， 室温静 置 40小时后测试； 条件二、 样品以乙腈处理后加入等量的 pH 9的硼酸盐缓冲 液， 最终制备得 lOuM浓度的待测试溶液， 室温静置 2-3天后测试。

检测结果： 以特拉匹韦及其两种衍生物产生相应的端基差 向异构体的含 量表示， 结果见表 3。 特拉匹韦及其两种衍生物的稳定性比较

表明特拉匹韦经氟代后能够显著改善分子的溶 液稳定性。

实施例 6 化合物的细胞毒性 （CC50 )及活性 （IC50 ) 测定

参考 US20070225297及 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 14 (2004) 5007 _ 5011所述的方法， 采用测定 HC V复制子的 CC50及 IC50法完成下述测 定。 结果见表 4。

将具有自主复制的 Conl细胞株亚基因组 HCV复制子的 Huh-7细胞维持在 Dulbecco改良培养基（ DMEM )、 10%热灭活胎牛血清（ FBS )、 2mM L-谷氨 酰胺、多种非必需氨基酸（JRH 生物科学公司）及0.251!^/1111 0418 ( 11^^^611 公司） 中。 亚基因组 HCV复制子也编码新霉素磷酸转移酶， 使在 G418存在下 含 HC V复制子的 Huh-7细胞的选择性生长优于 HC V复制子阴性的 Huh-7细胞。 使用 4参数曲线拟合（SoftMax Pro )在 HCV Conl亚基因组复制子细胞 （ 19 ) 中测定复制子细胞中 HCV RNA含量降低 50% ( IC50 ) 或细胞活力降低 50%

( CC50 ) 的化合物浓度。 在 37 °C下， 将复制子细胞培育于经 2%FBS及 0.5% DMSO (无 G418)的 DMEM溶液稀释的测试化合物中。 使用 RNeasy-96试剂盒

( QIAGEN, Valencia, CA )萃取总细胞 RNA， 且在定量、 即时多重逆转录 PCR (QRT-PCR或 Taqman)分析法中测定 HCV RNA的拷贝数。在相同实验设定下使 用四氮唑盐的细胞活力分析方法测定化合物在 HCV复制子细胞中的细胞毒 性。

表 4各化合物的 I C50及 CC50值

氟代波西普韦 >100 0.19 结果表明四种氟代化合物的 IC50均优于其未氟代化合物的 IC50， 同时各 全性均合格， CC50>100。

以上的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式 进行描述， 并非对本发明 的范围进行限定， 在不脱离本发明设计精神的前提下， 本领域普通工程技术 人员对本发明的技术方案作出的各种变型和改 进， 均应落入本发明的权利要 求书确定的保护范围内。 工业实用性

本发明公开了一种氟代的 α酮酰胺化合物， 及其盐和立体异构体， 提出 含有该化合物的组合物、 该化合物作为化学成分在制备预防和治疗丙型 肝炎 药物中的应用。 本发明提出的化合物， 稳定性显著提高， 安全性均合格。 研 究发现本发明提出的氟代的 α -羰基类 HCV NS3/4A 丝氨酸蛋白酶抑制剂的 不但不发生差向异构化 （消旋）， 而且其抑制 HCB的活性得到了进一步的改