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Patent Searching and Data


Title:
FOLIAMANGIFEROSIDES, PREPARATION METHOD AND USE THEREOF
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2011/044751
Kind Code:
A1
Abstract:
Foliamangiferosides having the general formula (I) are disclosed, wherein R is H or -OCH3. The preparation method of the compounds, pharmaceutical compositions comprising the compounds as the active ingredients, the use of the compounds and the pharmaceutical compositions for inhibiting the activity of α-glucosidase are also disclosed. The foliamangiferosides can be used in preparing drugs for treating diabetes.

Inventors:
WANG, Tao (#88 Yuquan Road, Nankai District, Tianjin 3, 300193, CN)
王涛 (中国天津市南开区玉泉路88号, Tianjin 3, 300193, CN)
ZHANG, Yi (#88 Yuquan Road, Nankai District, Tianjin 3, 300193, CN)
张祎 (中国天津市南开区玉泉路88号, Tianjin 3, 300193, CN)
LIU, Erwei (#88 Yuquan Road, Nankai District, Tianjin 3, 300193, CN)
刘二伟 (中国天津市南开区玉泉路88号, Tianjin 3, 300193, CN)
Application Number:
CN2010/001544
Publication Date:
April 21, 2011
Filing Date:
September 30, 2010
Export Citation:
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Assignee:
TIANJIN UNIVERSITY OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE (#88 Yuquan Road, Nankai District, Tianjin 3, 300193, CN)
天津中医药大学 (中国天津市南开区玉泉路88号, Tianjin 3, 300193, CN)
WANG, Tao (#88 Yuquan Road, Nankai District, Tianjin 3, 300193, CN)
王涛 (中国天津市南开区玉泉路88号, Tianjin 3, 300193, CN)
ZHANG, Yi (#88 Yuquan Road, Nankai District, Tianjin 3, 300193, CN)
张祎 (中国天津市南开区玉泉路88号, Tianjin 3, 300193, CN)
LIU, Erwei (#88 Yuquan Road, Nankai District, Tianjin 3, 300193, CN)
International Classes:
C07H15/203; A61K31/7034; A61K36/22; A61P3/10; C07H1/08; A61K127/00
Foreign References:
CN1733785A
CN1488355A
CN100998601A
CN101284001A
CN101693730A
Attorney, Agent or Firm:
CCPIT PATENT AND TRADEMARK LAW OFFICE (8th Floor, Vantone New World Plaza2 Fuchengmenwai Street, Beijing 7, 100037, CN)
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Claims:

1、 通式 (I)所示的芒果叶苷:

(I)

或其异构体、 溶剂合物、 前药, 其中,

R为 -H或 -OCH3

2、 根据权利要求 1的芒果叶苷, 其选自:

或其异构体、 溶剂合物、 前药。

3、 制备权利要求 1-2任一项所述芒果叶苷的方法, 其包括以下 步骤:

(1)将芒果叶用 50%-95%的乙醇或曱醇水溶液提取;

(2)提取液回收醇后, 用与水不互溶的有机溶剂萃取, 丟弃有 机溶剂层以除去杂质;

(3)萃取后的水溶液上大孔吸附树脂富集,用 50%-95%乙醇洗 脱;

(4)将步骤 (3)所得洗脱物用正相和反相硅胶层析, 得芒果叶苷 化合物。

4、 芒果叶的提取物, 其中包含权利要求 1-2任一项所述芒果叶 苷。

5、 根据权利要求 4的提取物, 其中包含的芒果叶苷的量占该提 取物总量大于 l%(w/w)。

6、 根据权利要求 4或 5的提取物, 其中包含芒果叶苷 A和芒果 叶苷 B, 并且其中芒果叶苷 A和芒果叶苷 B的重量比为 (50~500): 1。

7、 根据权利要求 4-6任一项的提取物, 其是由包括下述步骤的 方法制备得到:

(1)将芒果叶用水或一定浓度的乙醇溶液提取;

(2)提取液回收乙醇后转到水相;

(3)水溶液上大孔吸附树脂, 弃去流出液, 用 50%-95%乙醇 脱;

(4)醇洗脱液回收溶剂并蒸干, 即得。

8、 制备权利要求 4-6任一项所述提取物的方法, 其包括以下步

(1)芒果叶用水或一定浓度的乙醇溶液提取;

(2)提取液回收乙醇后转到水相;

(3)水溶液上大孔吸附树脂, 弃去流出液, 用 50%-95%乙醇洗 脱;

(4)醇洗脱液回收溶剂并蒸干, 即得。 9、一种药物组合物,其包含治疗和 /或预防有效量的权利要求 1-2 任一项所述芒果叶苷或者权利要求 4-7任一项所述提取物,以及任选 的药学可接受的赋形剂。

10、权利要求 1-2任一项所述芒果叶苷或者权利要求 4-7任一项 所述提取物在制备用于抑制 α-葡萄糖苷酶活性的药物中的用途。

11、 权利要求 1-2任一项所述芒果叶苷或者权利要求 4-7任一项 所述提取物在制备作为 α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的用途。

12、 权利要求 1-2任一项所述芒果叶苷或者权利要求 4-7任一项 所述提取物在制备用于预防和 /或治疗糖尿病的药物中的用途。

13、 抑制 α-葡萄糖苷酶活性的方法, 其包括给有需要的受试者 施用有效量的权利要求 1-2任一项所述芒果叶苷或者权利要求 4-7任 一项所述提取物。

14、 预防和 /或治疗糖尿病的方法, 其包括给有需要的受试者施 用有效量的权利要求 1-2任一项所述芒果叶苷或者权利要求 4-7任一 项所述提取物。

Description:
芒果叶苷及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及从芒果叶中分离提取的化合物及其 制备方法与应用, 尤其是芒果叶苷及其制备方法与应用。 背景技术

芒果叶 (Mango Leaf)为漆树科植物芒果 Mangifera indica L.的 叶。 中医认为芒果甘酸、 平、 无毒。 入肝、 脾经。 能益胃生津、止渴、 止呕、 利尿, 适用于口渴咽干、 胃气虛弱、 眩牽呕逆。 《食性本草》 记载芒果"主妇人经脉不通"; 《本草纲目拾遗》指出芒果"凡渡海者, 食之不呕浪"; "能益胃气, 故能止呕晕"。 芒果叶的应用始见于 《岭 南采药录》。 《陆川本草》、 《南宁市药物志》(1959年, 第一辑)和《全 国中草药汇编》对芒果叶也有相应记载, 但均附录于芒果项下。 而单 独将芒果叶作为中药记载则始于 1977年的《中药大辞典》。据《广西 中药材标准》记载: 性味酸、 甘、 凉, 平, 具有行气疏滞, 祛痧积的 功能, 用于热滞腹痛, 气胀, 小儿疳积, 消渴等证。 在我国, 芒果分 布于台湾、 广东、 广西、 海南、福建、 云南、 以及四川等省及自治区, 药材资源非常丰富。

芒果叶的化学成分包括: 抗坏血酸、 鞣质、 芒果苷、 及鞣花酸、 儿茶酚、 莽草酸、 奎尼酸、 山奈醇、 侧柏烯等多种成分。 以往的药理 学研究表明, 芒果叶提取物具有平喘止咳袪痰作用。 1973 年广西中 医学院将芒果叶开发成为芒果止咳片; 1998 年被列为国家中药保护 品种; 同年又被列为国家基本药物。 芒果叶中的代表成分芒果苷 (mangiferin)具有抗脂质过氧化、 免疫、 抗炎、 镇痛、 保肝利胆、 抗 病毒、 抗肿瘤、 中枢神经系统兴奋等作用。

α-葡萄糖苷酶 (α-glucosidase)存在于人体小肠刷状缘上, 参与人 体糖的代谢, 对维持人体正常生理功能起着重要作用。 α-葡萄糖苷酶 通过水解 α-1,4糖苷键从淀粉和多糖的非还原端切下葡 糖, 人体对 淀粉、糊精、蔗糖等碳水化合物的利用吸收依 赖于小肠刷状缘上该酶 的活性, α-葡萄糖苷酶抑制剂是临床上治疗糖尿病的一 种药物, 目前 主要来源于微生物代谢产物, 如阿卡波糖 (acarbose, 商品名: 拜糖 平)、 伏格列波糖 (voglibose, 商品名: 倍欣)、 米格列醇 (miglitol)等, 临床证明阿卡波糖、 伏格列波糖等治疗 II型糖尿病有明显的降低餐 后高血糖效果, 是较好的治疗糖尿病药物, 可见 α-葡萄糖苷酶抑制 剂能够有效可逆性竟争抑制小肠壁刷状缘上 α-葡萄糖苷酶的活性, 从而明显延緩和阻碍碳水化合物的降解和在消 化道的吸收速度,延迟 来自双糖、低聚糖及多糖的葡萄糖吸收,有效 推迟并减轻糖尿病人餐 后血糖升高的时间及进程, 有助于控制 II型糖尿病的血糖上升。

然而, 本领域仍然需要有新的用于治疗糖尿病例如 II型糖尿病 的方法。 而从天然产物中寻找安全性高的 α-葡萄糖苷酶抑制剂来降 低血糖是现阶段一个新的研究方向。 发明内容

在一个实施方案中,本发明所要解决的技术问 题在于提供从芒果 叶中提取分离的新化合物芒果叶苷。在另一个 实施方案中,本发明所 要解决的另一技术问题在于提供上述芒果叶苷 的制备方法。在再另一 个实施方案中,本发明所要解决的另一技术问 题在于提供上述芒果叶 苷的应用。本发明人发现从芒果叶中分离获得 一类新颖的化合物即芒 果叶苷类化合物, 它们具有有益的生物学活性例如可用于预防和 /或 治疗糖尿病例如 II型糖尿病。 本发明基于上述发现而得以完成。

明概述:

本发明第一方面提供具有下述结构通式 (I)所示的芒果叶苷:

(I)

或其异构体、 溶剂合物、 前药, 其中,

R为 -H或 -OCH 3

本发明第二方面提供了制备本发明第一方面所 述芒果叶苷的方 法, 其包括以下步骤:

(1)将芒果叶用 50%-95%的乙醇或甲醇水溶液提取;

(2)提取液回收醇后, 用与水不互溶的有机溶剂萃取, 丢弃有机 溶剂层以除去杂质;

(3)萃取后的水溶液上大孔吸附树脂富集, 用 50%-95%乙醇洗 脱;

(4)将步骤 (3)所得洗脱物用正相和反相硅胶层析, 得芒果叶苷化 合物。

本发明第三方面提供了一种芒果叶的提取物, 其中包含本发明第 一方面所述的芒果叶苷。

本发明第四方面提供了制备本发明第三方面所 述提取的方法,其 包括以下步骤:

(1)芒果叶用水或一定浓度的乙醇溶液提取;

(2)提取液回收乙醇后转到水相;

(3)水溶液上大孔吸附树脂,弃去流出液,用 50%-95%乙醇洗脱;

(4)醇洗脱液回收溶剂并蒸干即得。

本发明第五方面提供了一种药物组合物, 其包含治疗和 /或预防 有效量的本发明第一方面所述芒果叶苷或者本 发明第三方面所述提 取物, 以及任选的药学可接受的赋形剂。

本发明第六方面提供了本发明第一方面所述芒 果叶苷或者本发 明第三方面所述提取物在制备用于抑制 α-葡萄糖苷酶活性或者作为 α-葡萄糖苷酶抑制剂或者预防和 /或治疗糖尿病的药物中的用途。

本发明第七方面提供了抑制 α-葡萄糖苷酶活性或者预防和 /或治 疗糖尿病的方法,其包括给有需要的受试者施 用有效量的本发明第一 方面所述芒果叶苷或者本发明第三方面所述提 取物。

本发明第八方面提供了用于抑制 α-葡萄糖苷酶活性或者作为 α- 葡萄糖苷酶抑制剂或者预防和 /或治疗糖尿病的本发明第一方面所述 芒果叶苷或者本发明第三方面所述提取物。

本发明第九方面提供了用于抑制 α-葡萄糖苷酶活性或者用作 α- 葡萄糖苷酶抑制剂或者用于预防和 /或治疗糖尿病的药物组合物, 其 中包含有效量的本发明第一方面所述芒果叶苷 或者本发明第三方面 所述提取物。

明详述:

的植物化学成分的分离,得到化合物

因此, 本发明第一方面提供具有下述结构通式 (I)所示的芒果叶 苷:

或其异构体、 溶剂合物、 前药, 其中,

R为 -H或 -OCH 3

才艮据本发明第一方面的芒果叶苷, 其中 R为 -H。 即此时 R为 -H, 为芒果叶苷 A, 其结构式为:

在本发明第一方面的一个实施方案中, 所述芒果苷叶 A的物理化 学性质为: 淡黄色粉末, [αρ25 =+21.6° (浓度: 2.91, 曱醇)。 高分辨 电喷雾质谱数据: 理论值 C 2 oH 21 0 1() (M-H) 421.1140; 实测值 421.1149。红外光讲 (溴化钾, cm-1): 3281 , 2924, 2855, 1653, 1622, 1558, 1459, 1085, 1017。 氢谱 (400兆赫, 重二曱基亚砜): 3.21 (2H, 多重峰,重叠, 1"-H 和 5"-H), 3.22 (1H, 多重峰, 3"-H), 3.49 (1H, 多重峰, 重叠, 2"-H), [3.49 (1H, 多重峰, 重叠), 3.59 (1H, 宽二 重峰, J = 11 Hz), 6"-H2] , 3.69 (3H, 单峰, 4-OCH3), 4.62 (1H, 二重峰, J = 9.6 Hz, 1,,-H), 6.06 (1H, 单峰, 5-H), 6.79 (2H, 二重 峰, J = 8.4 Hz, 3',5'-H), 7.59 (2H, 二重峰, J= 8.4 Hz, 2',6'-H)。 碳谱 (100兆赫,重二甲基亚砜)109.0 (C-1), 155.7 (C-2), 104.6 (C-3), 159.5 (C-4), 91.4 (C-5), 156.4 (C-6), 130.2 (C-1'), 131.7 (C-2'), 114.9 (C-3'), 161.9 (C-4'), 114.9 (C-5'), 131.7 (C-6'), 74.7 (C-1"), 71.9 (C-2"), 78.2 (C-3"), 69.5 (C-4"), 81.1 (C-5"), 60.3 (C-6"), 193.8 (C=0), 55.6 (OCH3-3').

根据本发明第一方面的芒果叶苷, 其中 R为 -OCH 3 。 即此时 R 为 -OCH 3 , 为芒果叶苷 B, 其结构式为:

在本发明第一方面的一个实施方案中, 所述芒果苷叶 B 的物理 化学性质为: 淡黄色粉末, [aID25 =+2.5° (浓度: 0.67,曱醇)。 高分辨 电喷雾质谱数据: 理论值 C 21 H 23 0„ (M-HH51.1246 ; 实测值 451.1246。 红外光谱 (溴化钾, cm-1): 3281 , 2922, 2852, 1650, 1626, 1560, 1464, 1081。 氢语 (400兆赫, 重二曱基亚砜): 3.21 (3H, 多 重峰, 重叠, 3", 4" 以及 5"-H), [3.53 (1H, m, 重叠),3.60 (1H, 宽 二重峰, ca. J = 11 Hz), 6"-H2], 3.55 (1H, m, 重叠, 2,,-H), 3.70 (3H, s, 4-OCH3), 3.79 (3H, s, 3'-OCH3), 4.63 (1H, 二重峰, J = 9.6 Hz, 1"-H), 6.79 (1H, 二重峰, J = 8.0 Hz, 5'-H), 7.16 (1H, 宽 二重峰, ca. J = 8 Hz, 6'-H), 7.35 (1H, 宽 s, 2'-H). 13C-NMR (100 兆赫, 重二曱亚砜) 108.9 (C-1), 155.6 (C-2), 104.4 (C-3), 159.3 (C-4), 91.3 (C-5), 156.4 (C-6), 130.2 (C-1'), 111.5 (C-2'), 147.3 (C-3'), 151.6 (C-4'), 114.6 (C-5,), 124.9 (C-6'), 74.6 (C-1"), 71.8 (C-2"), 78.0 (C-3"), 69.3 (C-4"), 80.9 (C-5"), 60.2 (C-6"), 193.6 (C=0). 55.5 (OCH3-3', OCH3-4)。

本发明第二方面提供了制备本发明第一方面所 述芒果叶苷的方 法, 其包括以下步骤:

(1)将芒果叶用 50%-95%的乙醇或甲醇水溶液提取;

(2)提取液回收醇后, 用与水不互溶的有机溶剂萃取, 丢弃有机 溶剂层以除去杂质;

(3)萃取后的水溶液上大孔吸附树脂富集, 用 50%-95%乙醇洗 脱;

(4)将步骤 (3)所得洗脱物用正相和反相硅胶层析, 得芒果叶苷化 合物。

在本发明第二方面所述方法的一个实施方案中 ,其中所述的与水 不互溶的有机溶剂选自乙酸乙酯。

在本发明第二方面所述方法的一个实施方案中 ,其中可以不包括 步骤 (2)。 即使步骤 (1)所得提取物经浓缩后用水溶解, 直接加载到步 骤 (3)的大孔树脂中进行吸附, 虽然这样可能会使产率降低, 但仍可 以实现本发明目的。

本发明第三方面提供了一种芒果叶的提取物, 其中包含本发明第 一方面所述的芒果叶苷。

根据本发明第三方面的提取物,其中包含的芒 果叶苷的量占该提 取物总量大于 l%(w/w)、 大于 2%(w/w)、 大于 3%(w/w)、 大于 4%(w/w)、 或大于 5%(w/w)。 应理解为, 如果该提取物中包含一种以 上的本发明第一方面所述芒果叶苷, 则上述 "芒果叶苷的量"是指各 种芒果叶苷的量的总和。

根据本发明第三方面的提取物, 其中包含芒果叶苷 A, 并且芒果 叶苷 A 的量占该提取物总量大于 l%(w/w)、 大于 2%(w/w)、 大于 3%(w/w), 或大于 4%(w/w)。

根据本发明第三方面的提取物, 其中包含芒果叶苷 B, 并且芒果 叶苷 B的量占该提取物总量大于 0.005%(w/w)、 大于 0.01%(w/w)、 或大于 0.015%(w/w)。 根据本发明第三方面的提取物, 其中包含芒果叶苷 A和芒果叶 苷 B, 并且其中芒果叶苷 A和芒果叶苷 B的重量比为 (50~500): 1, 或者为(100~400): 1, 或者为(150 350): 1, 或者为(200 300): 1。

根据本发明第三方面的提取物,其可用包括下 述步骤的方法制备 得到:

(1)将芒果叶用水或一定浓度的乙醇溶液提取;

(2)提取液回收乙醇后转到水相;

(3)水溶液上大孔吸附树脂,弃去流出液,用 50%-95%乙醇洗脱;

( 4 )醇洗脱液回收溶剂并蒸干, 即得。

根据本发明第三方面的提取物,其可用包括下 述步骤的方法制备 得到:

(1)将芒果叶用 50%-95%的乙醇或曱醇水溶液提取;

(2)提取液回收醇后, 用与水不互溶的有机溶剂萃取, 丟弃有机 溶剂层以除去杂质;

(3)萃取后的水溶液上大孔吸附树脂富集, 用 50%-95%乙醇洗 脱, 得提取物; 和任选地

(4)进一步将步骤 (3)所得提取物用正相硅胶层析, 得提取物。 在一个实施方案中, 上述步骤 (2)中的与水不互溶的有机溶剂选 自乙酸乙酯。 在一个实施方案中, 上述步骤 (3)中在进行乙醇洗脱之 前, 还包括先用低浓度乙醇 (例如 10-25%的乙醇)预先洗脱的步骤。

本发明第四方面提供了制备本发明第三方面所 述提取物的方法, 其包括以下步骤:

(1)芒果叶用水或一定浓度的乙醇溶液提取;

(2)提取液回收乙醇后转到水相;

(3)水溶液上大孔吸附树脂,弃去流出液,用 50%-95%乙醇洗脱;

( 4 )醇洗脱液回收溶剂并蒸干, 即得。

本发明第四方面还提供了制备本发明第三方面 所述提取的方法, 其包括以下步骤:

(1)将芒果叶用 50%-95%的乙醇或曱醇水溶液提取;

(2)提取液回收醇后, 用与水不互溶的有机溶剂萃取, 丢弃有机 溶剂层以除去杂质;

(3)萃取后的水溶液上大孔吸附树脂富集, 用 50%-95%乙醇洗 脱, 得提取物; 和任选地

(4)进一步将步骤 (3)所得提取物用正相硅胶层析, 得提取物。 根据本发明第四方面的方法, 其中所述步骤 (3)中在进行乙醇洗 脱之前, 还包括先用低浓度乙醇 (例如 10-25%的乙醇)预先洗脱的步 根据本发明第四方面的方法, 其包括以下步骤:

(1)芒果叶用水或一定浓度的乙醇溶液提取;

(2)提取液回收乙醇后转到水相;

(3)水溶液上大孔吸附树脂, 弃去流出液, 先用 10-25%的低浓度 乙醇预洗脱, 弃去, 然后用 50%-95%乙醇洗脱;

(4)醇洗脱液回收溶剂并蒸干, 即得。

本发明第五方面提供了一种药物组合物, 其包含治疗和 /或预防 有效量的本发明第一方面所述芒果叶苷或者本 发明第三方面所述提 取物, 以及任选的药学可接受的赋形剂。

本发明第六方面提供了本发明第一方面所述芒 果叶苷或者本发 明第三方面所述提取物在制备用于抑制 α-葡萄糖苷酶活性的药物中 的用途。

本发明第六方面还提供了本发明第一方面所述 芒果叶苷或者本 发明第三方面所述提取物在制备作为 α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中 的用途。

本发明第六方面还提供了本发明第一方面所述 芒果叶苷或者本 发明第三方面所述提取物在制备用于预防和 /或治疗糖尿病的药物中 的用途。 在一个实施方案中, 所述糖尿病是 II型糖尿病。

本发明第七方面提供了抑制 α-葡萄糖苷酶活性的方法, 其包括 给有需要的受试者施用有效量的本发明第一方 面所述芒果叶苷或者 本发明第三方面所述提取物。

本发明第七方面还提供了预防和 /或治疗糖尿病的方法, 其包括 给有需要的受试者施用有效量的本发明第一方 面所述芒果叶苷或者 本发明第三方面所述提取物。 在一个实施方案中, 所述糖尿病是 II 型糖尿病。

本发明第八方面提供了用于抑制 α-葡萄糖苷酶活性的本发明第 一方面所述芒果叶苷或者本发明第三方面所述 提取物。

本发明第八方面还提供了作为 α-葡萄糖苷酶抑制剂的本发明第 一方面所述芒果叶苷或者本发明第三方面所述 提取物。

本发明第八方面还提供了预防和 /或治疗糖尿病的本发明第一方 面所述芒果叶苷或者本发明第三方面所述提取 物。 在一个实施方案 中, 所述糖尿病是 II型糖尿病。

本发明第九方面提供了用于抑制 <χ-葡萄糖苷酶活性的药物组合 物,其中包含有效量的本发明第一方面所述芒 果叶苷或者本发明第三 方面所述提取物。

本发明第九方面还提供了用作 a-葡萄糖苷酶抑制剂的药物组合 物,其中包含有效量的本发明第一方面所述芒 果叶苷或者本发明第三 方面所述提取物。

本发明第九方面还提供了用于预防和 /或治疗糖尿病的药物组合 物,其中包含有效量的本发明第一方面所述芒 果叶苷或者本发明第三 方面所述提取物。 在一个实施方案中, 所述糖尿病是 II型糖尿病。

本发明任一方面或该任一方面的任一子方面所 具有的特征同样 适用于其它任一方面或该其它任一方面的任一 子方面,或者本发明任 一方面的任一子方面所具有的特征同样适用于 该方面的其它任一子 方面, 只要它们不会相互矛盾, 当然在相互之间适用时, 必要的话可 对相应特征作适当修饰。

下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描 述。

本发明所引述的所有文献, 它们的全部内容通过引用并入本文, 并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一 致时,以本发明的表述 为准。此外,本发明使用的各种术语和短语具 有本领域技术人员公知 的一般含义, 即便如此,本发明仍然希望在此对这些术语和 短语作更 详尽的说明和解释,提及的术语和短语如有与 公知含义不一致的, 以 本发明所表述的含义为准。 本文中使用的术语"约",其通常是指本领域允 的误差范围,例 如 ±10%, 例如 ±5% , 例如 ±2%。

如本文所述的,术语 "有效量"是指可在受试者中实现治疗、预防、 减轻和 /或緩解本发明所述疾病或病症的剂量。

如本文所述的, 术语"药物组合物", 其可以与 "组合物" 互换使 用, 并且可以指可用于在受试者中实现治疗、 预防、 减轻和 /或緩解 本发明所述疾病、 病症、 症状的物质。

如本文所述的, 术语"受试者", 有时亦可称为 "患者", 可以指接 受本发明芒果叶苷或本发明提取物以治疗、 预防、 减轻和 /或緩解本 发明所述疾病、 病症、 症状的动物, 特别是哺乳动物, 例如人、 狗、 猴、 牛、 马等。

如本文所述的,术语 "疾病或症状 "是指所述受试者的一种身体状 态, 该身体状态与本发明所述疾病或症状有关。

如本文所述的, "%", 如未特别指明, 对于总物料是固体时一般 是指重量 /重量的百分比, 对于总物料是液体时一般是指重量 /体积的 百分比。 当然, 对于总物料是液体并且溶质是液体时, 表征该液态溶 质的百分比一般是指体积 /体积的百分比。对于描述乙醇时使用的%, 例如 95%乙醇, 其具有本领域公知的含义, 例如可参见 2005年版《中 华人民共和国药典二部》凡例中的定义。

如本文所述的, 术语"提取物,,, 如未另外指明, 是指芒果叶经提 取获得的 "提取物"。

如本文所述的, 术语" (w/w)", 如未另外指明, 是指重量 /重量的 比率。 类似地, (w/v)是指重量 /体积的比率。

如本文所述的, 术语"芒果叶", 如未另外指明, 是指芒果叶的干 燥品

本发明药物组合物中使用的"药学可接受的赋 剂,,可以是药物 制剂领域中任何常规的赋形剂。 特定赋形剂的选择将取决于用于治疗 特定患者的给药方式或疾病类型和状态。 用于特定给药模式的合适药 物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员 的知识范围内。 例如, 可以作为药学可接受的赋形剂包括药学领域常 规的稀释剂、载体、填 充剂、 粘合剂、 湿润剂、 崩解剂、 吸收促进剂、 表面活性剂、 吸附载 体和润滑剂等。 必要时, 还可以在药物组合物中加入香味剂、 防腐剂 和甜味剂等。

本发明的药物组合物可以制成片剂、 粉剂、 颗粒剂、 胶嚢、 口服 液、 膏剂、 霜剂、 注射乳剂 (注射用无菌粉针)等多种形式。 上述各种 剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制 备。

本发明中所述 α-葡萄糖苷酶 (α-glucosidase)存在于人体小肠刷状 缘上, 参与人体糖的代谢, 对维持人体正常生理功能起着重要作用。 α-葡萄糖苷酶通过水解 α-1,4糖苷键从淀粉和多糖的非还原端切下葡 萄糖, 人体对淀粉、糊精、蔗糖等碳水化合物的利用 吸收依赖于小肠 刷状缘上该酶的活性, α-葡萄糖苷酶抑制剂是临床上治疗糖尿病的一 种药物, 治疗 II型糖尿病有明显的降低餐后高血糖效果, 是较好的 治疗糖尿病药物; α-葡萄糖苷酶抑制剂可逆性竟争抑制小肠壁刷 状缘 上 α-葡萄糖苷酶的活性, 从而明显延緩和阻碍碳水化合物的降解和 在消化道的吸收速度, 延迟来自双糖、 低聚糖及多糖的葡萄糖吸收, 有效推迟并减轻糖尿病人餐后血糖升高的时间 及进程, 有助于控制 II型糖尿病的血糖上升。

α-糖苷酶抑制剂主要适用于以餐后血糖升高为 主的 Π型糖尿病 患者, 尤其是肥胖者及老年人, 对于空腹、 餐后血糖均升高的患者, 可与其他口服降糖药或胰岛素合用;并且能降 低糖耐量低减患者向糖 尿病转化的风险,故可用于对糖耐量低减患者 的干预治疗; II型糖尿 病患者服用磺脲类或双胍类降糖药效果不佳, 尤其是餐后血糖控制不 理想,可以加用 α-糖苷酶抑制剂; 用于单纯饮食治疗血糖得不到满意 控制的糖尿病患者,特别是肥胖者更为适宜; 对于 I型糖尿病患者, α- 糖苷酶抑制剂可作为胰岛素的辅助治疗药物。

α-糖苷酶抑制剂几乎不被肠道吸收入血,对肝 、肾功能影响甚微, 几乎没有全身副作用,对碳水化合物的消化和 吸收只是延緩而不是完 全阻断,最终对碳水化合物的吸收总量不会减 少, 因此不会导致热量 丟失; 不抑制蛋白质和脂肪的吸收,故通常不会引起 营养物质的吸收 障碍。 本发明通过对从芒果叶中分离得到的化合物芒 果叶苷,尤其是芒 果叶苷 A和芒果叶苷 B均为首次发现的新化合物, 体外 α-糖苷酶抑 制活性研究表明其具有很强的抑制 α-葡萄糖苷酶活性的作用, 含有 该化合物的芒果叶提取物也显现出强的抑制 α-葡萄糖苷酶活性的作 用,从而有望用于制备治疗糖尿病的药物,进 而达到对于糖尿病的治 疗目的。

本发明通过从芒果叶中分离提取, 发现了新的化合物芒果叶苷, 该化合物为首次发现, 并且 α-葡萄糖苷酶活性抑制实验表明: 所述 芒果叶苷具有很强的抑制 α-葡萄糖苷酶活性的作用, 含有该化合物 的芒果叶提取物也显现出强的抑制 α-葡萄糖苷酶活性的作用, 从而 有望用于制备治疗糖尿病的药物, 进而达到对于糖尿病的治疗目的。 具体实施方式

为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的 技术方案,下面结 合具体实施方式对本发明所述技术方案作进一 步的详细说明。在下面 的实施例中, 如未另外指明, 所述芒果叶是指批号为 090722的芒果 叶干燥品, 其购自河北安国祁新中药颗粒有限公司。

实施例 1: 活性成分单体芒果叶苷 Α的制备

步骤 1: 芒果叶 (批次 90722, 干燥品 5kg)用 9倍量的乙醇回流提 取 2次,每次 3小时,合并滤液, 回收溶剂后真空干燥箱 (50 e C)干燥, 得提取物 1.163kg (浸膏)。

步骤 2:取上述提取物 600g,加 5L蒸馏水溶解,用乙酸乙酯 (5L) 萃取三次, 分别得到乙酸乙酯层和水层; 水层部分含大量沉淀, 取水 层混悬液体积的 4/5, 减压浓缩至 2L, 离心, 过滤, 上清液经过大孔 吸附树脂处理 (H 2 0→95%EtOH), 得到 95%乙醇洗脱物 84g。

步驟 3: 取上述 95%乙醇洗脱物 72g, 进行硅胶柱层析【氯仿一 甲醇 (10:1→5:1)→氯仿一甲醇一水 (7:3:1→6:4:1, 下层)→曱醇】, 得 到 9个组分 (即, 流分), 其中组分 6为 9.0g;

步骤 4:取步驟 3所得组分 6中的 7.0g 进行反相 ODS柱层析【曱 醇一水 (10%→20%→30%→40%→50%→100%)】,得到 7个组分 (分 别以组分 6-1、 组分 6-2、 组分 6-3、 组分 6-4、 组分 6-5、 组分 6-6、 和组分 6-7表示), 其中组分 6-2、 6-3以及 6-4分别为 4.9g、 0.2g以 及 0.6g;

步骤 5: 步骤 4所得组分 6-2经制备型高效液相进行制备【色谱 条件:泵: k-501 ;检测器: Waters 2487;温度:室温;色语柱 Cosmosil packed column 5C18-MS-II (Size 20 I.D.x250mm); 流动相: MeOH:H2O(20:80)+l%HAc; 流速: 9.0ml/min】, 得到一单体化合 物 (4.2克), 经鉴定为新化合物芒果叶苷 A。

芒果苷叶 A的物理化学性质:淡黄色粉末, [α 25 +21.6。(浓度: 2.91, 甲醇)。 高分辨电喷雾质谱数据: 理论值 C 20 H 21 O 1() (M-H) 421.1140; 实测值 421.1149。红外光谱(溴化钾, cm-1): 3281 , 2924, 2855, 1653, 1622, 1558, 1459, 1085, 1017。 氢讲 (400兆赫, 重 二曱基亚砜 ): 3.21 (2H, 多重峰, 重叠, 1"-H 和 5"-H), 3.22 (1H, 多重峰, 3 -H), 3.49 (1H, 多重峰, 重叠, 2"-H), [3.49 (1H, 多重 峰, 重叠), 3.59 (1H, 宽二重峰, J = 11 Hz), 6"-H2] , 3.69 (3H, 单 峰, 4-OCH3), 4.62 (1H, 二重峰, J = 9.6 Hz, 1"-H), 6.06 (1H, 单 峰, 5-H), 6.79 (2H, 二重峰, J = 8.4 Hz, 3',5'-H), 7.59 (2H, 二重 峰, J = 8.4 Hz,2,,6'-H)。碳谱 (100兆赫,重二甲基亚砜) 109.0 (C-l), 155.7 (C-2), 104.6 (C-3), 159.5 (C-4), 91.4 (C-5), 156.4 (C-6), 130.2 (C-l'), 131.7 (C-2'), 114.9 (C-3»), 161.9 (C-4'), 114.9 (C-5'), 131.7 (C-6'), 74.7 (C-l"), 71.9 (C-2"), 78.2 (C-3"), 69.5 (C-4"), 81.1 (C-5"), 60.3 (C-6"), 193.8 (C=0), 55.6 (OCH3-3')。

根据芒果叶苷 A的理化性质判断其结构如下所示:

该化合物未见文献报道, 为首次分离得到。 实施例 2: 活性成分单体芒果叶苷 B的制备 实施例 1步驟 4所得组分 6-4, 经制备型高效液相进行制备【色 谱条件: 泵: k-501 ; 检测器: Waters 2487; 温度: 室温; 色谱柱 Cosmosil packed column 5C18-MS-II (Size 20 I.D.x250mm);流动 目: MeOH:H2O(30:70)+l%HAc 以及 MeOH:H2O(20:80); 流速: 9.0ml/min】得到了一单体化合物 (0.06克),根据其理化性质以及核磁 共振数据推知该化合物为一新化合物, 命名为芒果叶苷8。

芒果苷叶 B的物理化学性质: 淡黄色粉末, [a】D25 =+2.5。 (浓度: 0.67,甲醇)。 高分辨电喷雾质谱数据: 理论值 C 21 H 23 0„ (M-H) 451.1246; 实测值 451.1246。红外光傳 (溴化钾, cm-1): 3281 , 2922, 2852, 1650, 1626, 1560, 1464, 1081。 氢谱 (400兆赫, 重二甲基 亚砜): 3.21 (3H, 多重峰,重叠, 3", 4" 以及 5"-H), [3.53 (IH, m, 重 叠), 3.60 (1H, 宽二重峰, ca. J = 11 Hz), 6 -H2], 3.55 (1H, m, 重叠, 2"-H), 3.70 (3H, s, 4-OCH3), 3.79 (3H, s, 3»-OCH3), 4.63 (1H, 二重峰 J = 9.6 Hz, 1"-H), 6.79 (1H, 二重峰, J = 8.0 Hz, 5'-H), 7.16 (1H, 宽 二重峰, ca. J = 8 Hz, 6,-H), 7.35 (1H, 宽 s, 2'-H). 13C-NMR (100 兆赫, 重二曱亚砜) 108.9 (C-1), 155.6 (C-2), 104.4 (C-3), 159.3 (C-4), 91.3 (C-5), 156.4 (C-6), 130.2 (C-1'), 111.5 (C-2'), 147.3 (C-3'), 151.6 (C-4'), 114.6 (C-5'), 124.9 (C-6'), 74.6 (C-l"), 71.8 (C-2"), 78.0 (C-3"), 69.3 (C-4"), 80.9 (C-5"), 60.2 (C-6"), 193.6 (C=0). 55.5 (OCH3-3', OCH3-4)

根据芒果叶苷 B的物理化学性质判断其结构如下所示:

芒果叶苷 B化合物未见文献报道, 为首次分离得到 实施例 3: 本发明所述化合物降血糖作用实验研究

α-葡萄糖苷酶抑制活性研究方法 ^体重约 200g的 Wistar雄 性大鼠, 断头处死后摘除空肠, 刮下刷子缘绒毛膜, 混合于 0.1M马 来酸緩沖液 (pH6.0)中,混合液作为 α-葡萄糖苷酶粗酶使用;在 74mM 蔗糖基质溶液 lOOuL中加入溶解于 2.5%DMSO样品溶液 50uL, 加 入大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶溶液 50uL, 37度反应 30 分钟后, 加入 800uL水,放入沸水浴中加热 2分钟灭活, 用葡萄糖试剂盒测定葡萄 糖生成量。

样品组溶液配制:

将 0.1M马来酸水溶液与 0.1M马来酸钠混合, 调至 pH6.0, 为 0.1M马来酸緩沖液; 样品溶解于 DMSO溶液中, 用 0.1M马来酸緩 冲液稀释 10倍, 作为样品溶液使用。

其中, 样品组为: 按照以上实验方法添加样品实检组 (样品为芒 果叶苷 A (实施例 1所得)、 芒果叶苷 B (实施例 1所得)); 对照组为: 按照以上实验方法添加 2.5%DMSO实验组; 空白组为: 与样品组使 用试剂种类与用量相同,加入大鼠小肠 α-葡萄糖苷酶溶液 50uL后马 上加入 800uL水, 放入沸水浴中加热 2分钟灭活。 此外, 用芒果叶 乙醇提取物 (实施例 1步骤 1所得产品)进行类似试验。

以下式计算抑制率(%):

抑制率(%)=( -8)/( -<:)*100

式中, A为对照组吸收度, B为样品组吸收度; C为空白组吸收 度。

单体化合物的结果见表 1, 提取物的试验结果见表 2。

由表 1的实验结果表明: 在 400uM浓度下, 芒果叶苷 A及芒果 叶苷 B抑制率分别为 58.2%和 45.6%, 表明能有效抑制小肠 α-葡萄 糖苷酶催化下蔗糖转化为葡萄糖。 由表 2的实验结果可见,本发明提 取物亦能有效抑制小肠 α-葡萄糖苷酶催化下蔗糖转化为葡萄糖。 表 1、 芒果叶苷 A及芒果叶苷 B对小肠 α-葡萄糖苷酶的抑制率

表 2、 芒果叶乙醇提取物对小肠 α-葡萄糖苷酶的抑制率

实施例 4: 芒果叶中芒果苷 A和芒果苷 B的含量测定

仪器设备及色谱方法:

高效液相色 i普仪: Waters 600系统

检测器: Waters 2487紫外检测器

色请柱: Cosmosil packed column 5C18-MS-II (5um, 4.6x250mm)

流动相: 曱醇一 1%醋酸水溶液 (3: 7)

检测波长: 254 nm

流速: 0.8 ml/min

对照品制备:取实施例 1中所得芒果叶苷 A质量 1.8mg, 实施例 2中芒果叶苷 B质量 2.3m g , 置 10ml容量瓶中, 甲醇溶解至刻度。

样品制备:取 090722批次芒果叶 500mg置 25ml具塞锥形瓶中, 加入 50ml甲醇后称重,超声 30min提取, 曱醇补足重量,得样品液。 样品液 14000转 /分钟高速离心后进 HPLC。

检测结果:

标准品液和样品液分别进样 10微升, 计算, 得芒果叶中芒果叶 苷 A和 B的含量分别为 0.20%(w/w)和 0.0013%(w/w)。 实施例 5: 含有芒果叶苷 A和芒果叶苷 B的芒果叶提取物的制 查

芒果叶 (5kg)用 9倍量的 80%乙醇回流提取 2次, 每次 3小时, 合并滤液, 回收溶剂后加水至 10000ml, 冷藏过夜; 取上清液上预处 理好的大孔吸附树脂处理, 流出液弃去, 先用 28 (8¥=柱体积)水沖 洗, 然后用 95%乙醇洗脱, 醇洗脱液回收乙醇至尽真空干燥得芒果 叶提取物(180克)。 批号: 090822。

参考实施例 4的方法, 测得本实施例所得提取物中, 芒果叶苷 A 和芒果叶苷 B的含量分别为 5.2%(w/w)和 0.022%(w/w),芒果叶苷 A 和芒果叶苷 B在提取物中的重量比为 236: 1。 实施例 6: 含有芒果叶苷 A和芒果叶苷 B的芒果叶提取物的制 芒果叶 (5kg)用 9倍量的 80%乙醇回流提取 2次, 每次 3小时, 合并滤液, 回收溶剂后加水至 10000ml, 冷藏过夜; 取上清液上预处 理好的大孔吸附树脂处理, 流出液弃去, 先用 28¥(8 =柱体积)水沖 洗, 再用 2BV20%乙醇预洗脱, 弃去; 然后用 80%乙醇洗脱, 醇洗 脱液回收乙醇至尽真空干燥得芒果叶提取物 (220克)。批号: 090902。

参考实施例 4的方法, 测得本实施例所得提取物中, 芒果叶苷 A 和芒果叶苷 B的含量分别为 4.7%(w/w)和 0.019%(w/w),芒果叶苷 A 和芒果叶苷 B在提取物中的重量比为 247: 1。 实施例 7: 芒果降糖口服液的制备

将芒果叶提取物 (来自实施例 6)2 g 加入 400毫升蒸馏水中溶解, 滤过, 加入适量单糖浆、 苯甲酸钠, 再加蒸馏水至 1000毫升, 冷藏, 滤过, 封装于 10亳升安瓿中, 100°C灭菌 30分钟, 即得。 实施例 8: 芒果降糖片的制备

取芒果叶提取物 (来自实施例 6)4g粉碎后, 加入淀粉 100g、乳糖 50g、 适量乙基纤维素、 交联聚维酮, 用 50 % - 95%的乙醇制颗粒, 干燥后, 整粒, 加入剩余量的交联聚维酮及硬酯酸镁, 压片, 即得。 实施例 9: 芒果降糖胶嚢的制备

将芒果叶提取物 (来自实施例 6)4 g 粉碎后, 加入适量硬酯酸镁, 灌胶嚢, 即得。 实施例 10: 芒果降糖片的制备

取芒果叶苷 A (来自实施例 6) 0.5g, 加入淀粉 100g、 乳糖 50g、 适量乙基纤维素、 交联聚维酮, 用 50 % - 95%的乙醇制颗粒, 干燥 后, 整粒, 加入剩余量的交联聚维酮及硬酯酸镁, 压片, 即得。 实施例 11: 芒果降糖胶嚢的制备

将芒果苷 B (来自实施例 6) 0.5g, 加入半乳糖 100g、 适量硬酯酸 镁, 装入 2号胶嚢, 即得。 上文参照具体实施方式对本发明芒果叶苷、提 取物及其制备方法 与应用进行的详细描述。应当理解,这些实施 例是说明性的而不是限 定性的。本领域技术人员可按照本发明权利要 求范围列举出许多实施 例。 因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改 ,应属本发明的保 护范围之内。