La présente invention a trait à une nouvelle composition thérapeutique comprenant un dérivé de galvinoxyl seul ou éventuellement associé à la propolis, à un procédé de préparation de ladite composition, et à l'utilisation de cette composition en tant que moyen antiviral, d'une manière générale vis-à-vis des virus à enveloppe lipoprotéique (en abrégé : LEV), et en particulier vis-à-vis des virus de l'herpès et de leurs analogues qui font partie de l'ensemble des LEV.

La propolis est une substance gommeuse que l'on récupère dans les ruches. Plus précisément, il s'agit d'une substance que les abeilles recueillent sur certaines plantes, notamment les écailles de bourgeon de peupliers et d'aunes, rassemblent et utilisent pour colmater les fissures des ruches, fixer les rayons et vernisser les parois. Dans le domaine de l'apiculture, la propolis est connue comme étant le moyen antibiotique ou désinfectant de la ruche empêchant la prolifération des bactéries et des moisissures.

La propolis brute renferme généralement des résines et substances balsamiques (approximativement 55-50 %25 en poids), de la cire d'abeille (approximativement 30-35% en poids), des huiles éthérées (approximativement 10 % en poids) et des pollens (approximativement 5 % en poids), voir notamment EP-A-0 061 508 (page 2, lignes 1-28), EP- A-0 109 993 (page 1, lignes 24-26) et E.M.SCHNEIDEWIND et 0 al, Die Pharmazie 34, 103, (1979). On connaît, notamment de EP-A-0 061 508 (page 3, lignes 6-7) et de EP-A-0 109 993

(page 2, lignes 3-8; page 10, lignes 7-11; et page 11, lignes 1-4) précités, d'une part, et de EP- A-0 310 757 (page 3, lignes 31-32), d'autre part, les propriétés antivirales de la propolis extraite des ruches et purifiée vis-à-vis des virus de l'herpès (notamment HSVi et HSV ₂ ) et des virus de la grippe (notamment IV _A ).

Par commodité, les abréviations suivantes sont utilisées dans la présente description.

EBV = virus de Epstein Barr

HSVi = virus herpès simplex de type 1

HSV ₂ = virus herpès simplex de type 2 HSViR = virus herpès simplex de type 1 résistant à l'acyclovir [substance antivirale de référence répondant à la formule développée de 2-amino-l,9-dihydro-9-[(2- hydroxyéthoxy)méthyl] -6H purine-6-one]

IV _A = virus de la grippe de type A

LEV = virus à enveloppe lipoprotéique

Dérivé de galvinoxyl (DéG)

Prp = propolis

Rp = rapport pondéral

RT = température ambiante (15-20°C)

TV = titre infectieux de l'échantillon de

ZV = virus de Zoster

Selon l'invention, il a été découvert de manière surprenante qu'un dérivé de galvinoxyl pouvait être utilisé comme moyen antiviral vis-à-vis des virus à enveloppe lipoprotéique (LEV), et en particulier vis-à-vis des virus de l'herpès.

Ainsi la présente invention a plus particulièrement pour objet un dérivé de galvinoxyl chimiquement dénommé « 2,6-di-t-Butyl-(3,5-di-t-butyl-4-oxo-2,5-cyclohexadièn-l-yl idène)- p-tolylhydroxy » et représenté par la formule suivante :

pour son utilisation dans le traitement des maladies provoquées par les virus à enveloppe lipoprotéique (LEV).

Pour plus de commodité, le composé 2,6-di-t-Butyl-(3,5-di-t-butyl-4-oxo-2,5- cyclohexadièn-l-ylidène)-p-tolylhydroxy tel que défini ci-dessus sera simplement dénommé « dérivé de galvinoxyl » dans la présente demande. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, le dérivé de galvinoxyl tel que défini ci-dessus est plus particulièrement utilisé dans le traitement des maladies provoquées par les souches de l'herpès HSVi, HSV ₂ et/ou HSViR. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, le dérivé de galvinoxyl tel que défini ci-dessus est associé à de la propolis.

La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend un dérivé de galvinoxyl tel que défini ci-dessus.

Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, la composition telle que définie ci-dessus comprend en outre de la propolis.

Si tel est le cas, ladite composition comprend de 100 à 650 parties en poids du dérivé de galvinoxyl pour une partie en poids de propolis.

La composition de l'invention telle que définie ci-dessus est utilisée dans le traitement des maladies provoquées par les virus à enveloppe lipoprotéique (LEV), et plus particulièrement dans le traitement des maladies provoquées par les souches de l'herpès HSVi, HSV ₂ et/ou HSViR.

La composition telle que définie ci-dessus comprend le dérivé de galvinoxyl en association avec un ou plusieurs excipients appropriés pour une administration par la voie orale, injectable ou locale.

Cette composition peut en outre comporter de la propolis.

Ainsi que mentionné précédemment, une telle composition sera particulièrement avantageuse vis-à-vis de l'herpès et des maladies analogues à l'herpès. On a en effet trouvé qu'une telle composition était particulièrement efficace dans le traitement de l'herpès simplex de type 1 et de type 2, notamment les maladies provoquées par les souches HSVi et HSViR, qui sont transmissibles par contact entre muqueuses, d'une part, et les maladies provoquées par les souches HSV ₂ , qui sont sexuellement transmissibles et comprennent notamment les végétations vénériennes, d'autre part. Selon l'invention, on préconise une nouvelle utilisation thérapeutique suivant laquelle on utilise le dérivé de galvinoxyl seul ou éventuellement associé à de la propolis pour l'obtention d'un médicament antiviral destiné à une utilisation en thérapeutique humaine ou vétérinaire vis-à-vis des maladies provoquées par les virus à enveloppe lipoprotéique, notamment les maladies provoquées par les souches (i) HSVi, HSV ₂ et HSViR et (ii) IVA, EBV et ZV.

La composition antivirale selon l'invention peut être préparée selon une méthode connue en soi.

Le procédé pour la préparation de la composition est caractérisé en ce qu'il consiste à mélanger le dérivé de galvinoxyl seul ou avec de la propolis dans un milieu physiologique aqueux ou huileux approprié, à une température comprise entre 15°C et 75°C.

Lorsque le dérivé de galvinoxyl est associé avec de la propolis, le rapport pondéral entre le dérivé de galvinoxyl et la propolis va de 100/1 à 650/1.

D'autres avantages et caractéristiques de l'invention seront mieux compris à la lecture qui va suivre d'essais comparatifs et d'exemples de préparation. Bien entendu, l'ensemble de ces éléments n'est nullement limitatif mais est donné à titre d'illustration.

EXEMPLE 1 - Essais comparatifs -

On fait appel à un milieu de culture contenant DéG aux concentrations de 50 ou 25 mg/ml et à des solutions de Prp à des concentrations décroissantes de 0,363 mg/ml, 0,272 mg/ml, 180 mg/ml, 136 mg/ml et 0,090 mg/ml. Des volumes égaux dudit milieu de culture et desdites solutions sont incubés en présence de HSViR pendant 1 heure à 37°C sous agitation. Après centrifugation, les titres infectieux sont déterminés de la manière habituelle selon la méthode dite des dilutions limites et comparés à des échantillons témoins de virus HSViR, des échantillons témoins de propolis et des échantillons témoins de HG1 incubés dans les mêmes conditions (il n'a pas été nécessaire de préparer d'échantillons témoins d'excipient dès lors que des essais précédents ont démontré l'absence d'effet de l'excipient sur les virus, notamment HSViR). Pour mesurer précisément l'interaction de DéG et de Prp, on a utilisé la méthode décrite par R.F.SCHINAZI et al, Antimicrob. Agents Chemother. , 22 (No 3), pages 499-507 (1982) et reprise par J.C. POTTAGE, ibidem 30, (No 2), pages 215-219, (1986), en tenant compte des définitions suivantes :

Y _a = titre infectieux en présence de Prp/titre TV,

Y _b = titre infectieux en présence de DéG/titre TV,

Y _ab = titre infectieux en présence de Prp + DéG /titre TV,

Y _c = Y _a X Y _b .

Si :

1) Yab < Y _c , l'interaction est une synergie,

2) Y _ab > Y _c niais < au composé le plus actif seul, l'interaction est dans ce cas une réaction subadditive,

3) Y _ab > au composé le moins actif seul, l'interaction est un antagonisme, et

4) Y _ab > au composé le plus actif mais < au composé le moins actif, l'interaction est alors dénommée interférence.

Pour simplifier les calculs, les titres infectieux trouvés lors des essais des associations DéG/Prp et des essais témoins ont été exprimés par leur logarithme décimal. Les résultats obtenus ont été consignés dans le tableau I ci-après.

Les résultats du tableau I montrent que :

- aux plus fortes concentrations utilisées (Prp 0,363 mg/ml et DéG 50 mg/ml), il n'est pas possible d'observer une interaction dès lors que à cette dose la propolis seule est virucide,

- à la concentration en Prp de 0,272 mg/ml, on observe uniquement un effet d'interférence avec DéG,

- en revanche, pour les faibles concentrations en Prp (0,090 à 0,180 mg/ml), il y a une synergie avec DéG intervenant à la concentration de 25 ou 50 mg/ml.

Dans le cas d'espèce, il y a synergie quand le rapport Rp = DéG/Prp est compris entre 135/1 et TABLEAU I : Etude de l'association Prp/DéG sur le titre infectieux de HSViR

TV Titre Titre Essais Ya Yb Yab Yc Interaction

Prp DéG Prp

+ DéG

4,5 3,5 (a) 2 (f) 0,5 0,77 0,44 0,11 0,33 synergie

4,5 4,5 (a) 3 (g) 2,5 1 0,66 0,55 0,66 synergie

5,0 4,0 (a) 2 (g) 0 0,8 0,4 0 0,32 synergie

4,5 2,5 (b) 2 (f) 0 0,55 0,44 0 0,24 synergie

4,0 1,0 (c) i (f) 0 0,25 0,25 0 0,06 synergie

4,5 1,5 (c) 2 (f) 0 0,33 0,44 0 0,14 synergie

4,5 3,5 (c) 3 (g) 2 0,77 0,66 0,44 0,50 synergie

5,0 3,0 (c) 2 (g) 1 0,6 0,4 0,2 0,24 synergie

4,0 0 (d) 2 (f) 0,5 0 0,5 0,12 0 interférence

5,0 1,0 (d) 2 (g) 1,0 0,2 0,4 0,25 0,08 interférence

4,0 0 (e) 2 (f) 0 0 0,5 0 0 (h)

Notes

(a) Ppr à la concentration de 0,090mg/ml

(b) Prp à la concentration de 0,136 mg/ml

(c) Prp à la concentration de 0,180 mg/ml

(d) Prp à la concentration de 0,272 mg/ml

(e) Prp à la concentration de 0,363 mg/ml

(f) DéG à la concentration de 50 mg/ml

(g) DéG à la concentration de 25 mg/ml

(h) dose trop élevée en Prp

EXEMPLE 2 - Formulation -

On porte à 70-75°C un mélange de 59 g de vaseline blanche, de 2,99 g de sesquioléate de sorbitan et de 3 g de monooléate de glycérol. On cesse de chauffer quand le mélange est devenu homogène et ajoute ensuite sous agitation 5 g de DéG, 30 g d'eau à une température inférieure ou égale à 65 °C et poursuit l'agitation jusqu'à refroidissement à RT. On homogénéise et obtient une pommade constituée par une émulsion eau-dans-huile, utilisable comme collyre.

EXEMPLE 3 - Formulation -

On mélange à 70-75°C 56,98 g de vaseline blanche avec 3,5 g de sesquioléate de sorbitan, 3,5 g de monooléate de glycérol. Quand le mélange est devenu homogène, on cesse le chauffage et ajoute 7 g de DéG. On mélange à nouveau et ajoute sous agitation un mélange constitué de 0,02 g de propolis et de 30 g d'eau à une température inférieure à 70°C environ. On poursuit l'agitation jusqu'à refroidissement à RT, puis on homogénéise et obtient une pommade constituée par une émulsion eau-dans-huile, utilisable comme collyre. EXEMPLE 4 - Formulation -

On mélange 4,66 g de stéarate de polyéthylèneglycol 1500 avec 13 g de monostéarate de glycérol, 3 g de monooléate de glycérol, 10,5 g d'oléate de décyle, 5,5 g de triglycéride caprique/caprylique et 5 g d'isostéarate de glycérol. On chauffe progressivement jusqu'à 70- 75°C et on cesse le chauffage dès que le mélange est devenu homogène. On ajoute alors 8 g de DéG et agite lentement. On verse alors dans le mélange résultant 3 g de propylèneglycol, 0,3 g de citral et 47 g d'eau. On agite le mélange résultant tout en le laissant se refroidir jusqu'à RT. Après passage dans un dispositif d'homogénéisation, on obtient une émulsion eau- dans-huile ayant la consistance d'une crème. EXEMPLE 5 - Obtention de la propolis purifiée -

La propolis utilisée dans les exemples 1 et 3 ci- dessus est une propolis purifiée obtenue par extraction avec EtOH à 80 % [i.e. mélange EtOH/H ₂ 0 dans un rapport pondéral d'environ (8/2)], comme indiqué ci-après. La Prp brute est déposée par les abeilles sur des grilles plastiques perforées montées sur des cadres disposés dans les ruches. Ces grilles contenant la Prp brute sont prélevées des ruches et amenées à -30°C dans un congélateur de façon à rendre la Prp brute cassante, que l'on broie ensuite au mortier. Le matériau broyé est extrait avec EtOH à 80 %, à raison de 1 partie en poids de Prp brute pour 10 parties en volume de EtOH à 80 %, pendant 24 h, sous agitation, à RT. Le résidu insoluble est écarté par fîltration. Le filtrat que l'on recueille est évaporé sous pression réduite et donne un extrait sec de couleur brun-clair. Rendement : 65 % en poids, par rapport à la Prp brute de départ.