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Title:
GELDANAMYCIN DERIVATIVES, PREPARATION METHODS AND USES THEREOF
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2011/082519
Kind Code:
A1
Abstract:
Geldanamycin derivatives, preparation methods and uses thereof in the manufacture of medicaments of cell killing agents, cell proliferation inhibitors and antitumor agents are disclosed.

Inventors:
LIN GUOQIANG (CN)
FENG CHENGUO (CN)
Application Number:
PCT/CN2010/002196
Publication Date:
July 14, 2011
Filing Date:
December 29, 2010
Export Citation:
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Assignee:
HANGZHOU HUADONG MEDICINE GROUP BIOTECHNOLOGY INST CO LTD (CN)
SHANGHAI RENZHOU BIOCHEMICAL TECHNOLOGY CO LTD (CN)
LIN GUOQIANG (CN)
FENG CHENGUO (CN)
International Classes:
C07D225/06; A61K31/341; A61K31/395; A61K31/4192; A61K31/435; A61K31/495; A61P35/00; C07D401/12; C07D403/12; C07D405/12
Domestic Patent References:
WO2007059116A22007-05-24
Foreign References:
CN101220068A2008-07-16
Attorney, Agent or Firm:
CCPIT PATENT AND TRADEMARK LAW OFFICE (CN)
中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 (CN)
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Claims:
权 利 要 求

1. 格尔德霉素衍生物,其选自下述式(1) - (14)所示化合 物或者其盐中的至少一种:

式(2)

-28-

式(8) /o//〇 96lisosl>d sssonoiΜ

οε --

O

U

O NH2

式(14)

2. 药物组合物, 其中至少含有化学式(1) - (I4)所示的化合 物或者其盐中的一种作为有效成分。

3. 权利要求 2 的药物组合物, 其中还含有药学上允许的赋 形剂。

4. 权利要求 2 的药物组合物, 其中还含有其它肿瘤治疗药 物。

5. 细胞生长抑制剂, 其中至少含有化学式 (1) - (14) 所 示的化合物或者其盐中的一种作为有效成分。

6. 细胞增殖抑制剂, 其中至少含有化学式 (1) - (14) 所 示的化合物或者其盐中的一种作为有效成分。

7. 化学式 (1) - (14) 所示的任一种格尔德霉素衍生物或 者其盐在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。

8. 化学式 (1) - (14) 所示的任一种格尔德霉素衍生物或 者其盐在制备用于细胞杀伤的杀伤剂中的用途。

9. 化学式 (1) - (14) 所示的任一种格尔德霉素衍生物或 者其盐在制备用于细胞增殖抑制剂中的用途。

10. 一种抑制细胞生长、抑制细胞增殖或治疗肿瘤的方法, 其 包括给予受试者治疗有效量的化学式(1) - (14)所示的任一种 格尔德霉素衍生物或者其盐的步骤。

Description:
格尔德霉素衍生物及其制备方法和用途 技术领域

本发明涉及一类新的格尔德霉素类衍生物、 制备该类化合物 的方法, 以及该类化合物用于制备细胞杀伤活性的细胞 杀伤剂、 细胞增殖抑制剂及抗肿瘤药物的用途。 背景技术

格尔德霉素最早于 1970年从链霉菌产物中发现 [C. DeBoer, et al.; Geldanamycin, a new antibiotic: J. Antibiot" 1970, 23(9), 442-447] ,其后,从微生物产物中或通过人工合成陆续 现了许多同 类化合物并发现该类化合物具有多种生物活性 。 如文献 [M. Muroi, et α/·; The structures of macbecin I and II: Tetrahedron, 1981, 37, pp. 1123-1131】、 文献 [R. C. Schnur, et al.; Inhibition of the oncogene product ^lS5 erbB " 2 in vitro and in vivo by geldanamycin and dihydrogeldanamycin derivatives: J. Med. Che , 1995, 38, 3806-3812】、 文献 [Μ· Bendin, et al. Geldanamycin, an inhibitor of the chaperone activity of HS90, induces MAPK-independent cell cycle arrest: Int. J. Cancer, 2004, 109, 643-652]、 文献 [Z.-Q. Tian et air, Synthesis and biological activities of novel 17-aminogeldanamycin derivatives: Bioorg. Med. Chem" 2004, 12, 5317-5329]以及文献 [J.-Y. L. Brazidec, et aL; Synthesis and biological evaluation of a new class of geldanamycin derivatives as potent inhibitors of Hsp90: J. Med. Chenu, 2004, 47, 3865-3873】等都 曾记载了天然或人工合成的格尔德霉素类化合 物及其生物活性。 该 类化合物的生物活性多与热休克蛋白 90有关。 热休克蛋白 90是细 胞内最活跃的一种分子伴侣, 许多信号传导途径均依赖于热休克蛋 白 90, 并且, 它在肿瘤细胞中的表达比正常细胞高出 2 ~ 10倍, 在 肿瘤细胞生长和存活中可能起重要的调节作用 。 格尔德霉素类化合 物能与热休克蛋白 90特异性结合并抑制其功能,导致多种癌基因 物和细胞周期调控蛋白的降解, 从而显示抗癌等多种生物活性, 因 此, 该类化合物受到了癌症研究者的极大关注和深 入研究。 其中, 17-烯丙胺 -17-脱甲氧格尔德霉素( 17-AAG )在美国正在进行治疗肿 瘤的 ΙΠ期临床试验。

本发明的格尔德霉素衍生物属于安莎霉素类抗 生素, 从结构上 看, 在迄今已有记载的所有格尔德霉素类化合物中 , 尚未看到具有 与本发明化合物相同的结构的同类化合物。 发明内容

本发明旨在提供一种具有细胞杀伤活性、细胞 增殖抑制活性及 抗肿瘤活性的格尔德霉素衍生物。

本发明人通过刻苦的努力,发现了选自下述式 (1 ) - ( 14 )所 示的一类具有细胞杀伤活性、 细胞增殖抑制活性及抗肿瘤活性的 格尔德霉素衍生物:

式(1 )

-3-

式 (7)

薩 US OAV

式(13)

在本发明中, 为了描述简便, 将下述结构式 (15) 所述结构 定义为 GA, 即

' X 0

式 (15)

在本发明中所述的修饰都是在式 (15) 中的 17位进行的。 本发明还提供了合成式(1) - (14)所示格尔德霉素衍生物 的方法。

所述分离纯化包括利用本领域技术人员熟知的 天然产物分离 纯化的常规方法, 如液液萃取、 柱层析、 薄层层析及重结晶等。

本发明还提供了一种抑制细胞生长、 抑制细胞增殖或治疗肿 瘤的方法, 其包括给予受试者治疗有效量的化学式 (1) - (14) 所示的任一种格尔德霉素衍生物或者其盐的步 骤。 本发明中的术语"药学上可接受的盐,,可以 药用无机或有机 盐。 本发明式 I中具有碱性基团的化合物可以与无机酸形成 用 盐, 例如硫酸盐、 盐酸盐、 氢溴酸盐、 磷酸盐; 也可与有机酸形 成药用盐, 例如乙酸盐、 草酸盐、 柠檬酸盐、 葡萄糖酸盐、 琥珀 酸盐、 酒石酸盐、 对曱苯磺酸盐、 甲磺酸盐、 苯甲酸盐、 乳酸盐、 马来酸盐等。 本发明式 I中具有酸性基团的化合物可以与碱金属 或碱土金属形成药用盐, 优选但不限于钠盐、 钾盐、镁盐或钙盐。

本发明的式 I化合物可与各种药物上可接受的载体、 赋形剂 或辅料配伍制成抗肿瘤药物, 用于肿瘤的治疗。

本发明化合物可单独或以药物组合物的形式给 药。 给药途径 可以是口服、 非肠道或局部给药。 药物组合物可根据给药途径配 成各种适宜的剂型。

本发明化合物的药物组合物可以以下面的任意 方式施用: 口 服, 喷雾吸入, 直肠用药, 鼻腔用药, 颊部用药, 局部用药, 非 肠道用药, 如皮下, 静脉, 肌内, 腹膜内, 鞘内, 心室内, 胸骨 内和颅内注射或输入,或借助一种外植储器用 药。其中优选口服、 腹膜内或静脉内给药方式。

当口服用药时, 本发明化合物可制成任意口服可接受的制剂 形式, 包括但不限于片剂、 胶嚢、 水溶液或水悬浮液。 其中, 片 剂使用的载体一般包括乳糖和玉米淀粉, 另外也可加入润滑剂如 硬脂酸镁。胶嚢制剂使用的稀释剂一般包括乳 糖和干燥玉米淀粉。 水悬浮液制剂则通常是将活性成分与适宜的乳 化剂和悬浮剂混合 使用。 任选地, 以上口服制剂形式中还可加入一些甜味剂、 芳香 剂或着色剂。

当皮肤局部施用时, 本发明化合物可制成适当的软膏、 洗剂 或霜剂制剂形式, 其中将活性成分悬浮或溶解于一种或多种载体 中。 软膏制剂可使用的载体包括但不限于: 矿物油、 液体凡士林、 白凡士林、 丙二醇、 聚氧化乙烯、 聚氧化丙烯、 乳化蜡和水; 洗 剂或霜剂可使用的载体包括但不限于: 矿物油、 脱水山梨糖醇单 硬脂酸酯、 吐温 60、 十六烷酯蜡、 十六碳烯芳醇、 2-辛基十二烷 醇、 苄醇和水。

本发明化合物还可以无菌注射制剂形式用药, 包括无菌注射 水或油悬浮液或无菌注射溶液。 其中, 可使用的载体和溶剂包括 水、 林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。 另外, 灭菌的非挥发油也可 用作溶剂或悬浮介质, 如单甘油酯或二甘油酯。

另外需要指出, 本发明化合物使用剂量和使用方法取决于诸 多因素, 包括患者的年龄、 体重、 性别、 自然健康状况、 营养状 况、 化合物的活性强度、 服用时间、 代谢速率、 病症的严重程度 以及诊治医师的主观判断。优选的使用剂量介 于 0.01 ~ 100 mg/kg 体重 /天。

本发明的式(1 ) - ( 14 )所示的化合物还可作为抑制细胞周 期的低分子生物探针用于生命科学研究中。 当把式 (1 ) - ( 14 ) 所示的化合物用于生命科学研究中时,可溶于 甲醇或含水曱醇中, 也可溶于二甲基亚砜的含水溶液中加以应用。 具体实施方式

下列实施例将进一步说明本发明,但并不对本 发明构成限制。 试验材料: 核磁共振由 Varian EM-360A, EM-390或 Bruker AMX-300型仪器测定。质谱由 Finnigan 4021, HP5989A, Finnigan FTMS-2000 型仪器测定。 快速柱层析在硅胶 (300-400 目)上进行。

TLC用 HSGF254高效板,用 UV灯 254和 365 nm波长或 5 %磷钼 酸乙醇溶液检测。反应的完成终点由 TLC检测确定。 实验使用的试 剂都是商品化试剂, 未经过纯化直接使用。 实验使用的胺类片段部 分通过商品化购买得到, 不能购买得到的通过以下两种合成路线合 成得到 ,

比较例 1

为了与进入临床研究的 17位修饰的格尔德霉素衍生物进行 平行比较,申请人合成了表 1所示的两个用做比较对象的比较例化 合物 1和 2: RZC01和 RZC02。合成方法参考文献( Shen, Y., Xie, Q., Norberg, Μ·, et al. Bioorg. Med. Chem. 2005, 13, 4960.) 。

表 1

比较例化合物 命名 结构式 分子量

1

RZC02 、N A 617

z NH-GA

2

RZC03 ¾¾¾/ ^ H-GA 568

实施例 1 向格尔德霉素 (2 g ) 中加入多巴胺盐酸盐 (1.35 g ) , 然后 加入二氯曱烷(100 mL ) , 三乙胺(1.5 mL ) , 甲醇 (33 mL), 于室温下搅拌反应。 反应式如下: 反应体系初呈桔红色, 颜色逐渐加深至黑色。 反应 2.5天, 反应完成。 减压蒸除溶剂, 硅胶柱层析提纯(洗脱剂: 二氯甲烷 / 曱醇 = 20: 1 ), 得到紫色固体, 命名为 RZ801 (732 mg, 30% )。 将该产物进行分析测试, 得到如下的波谱数据:

! H NMR ( CDC1 3 , 300 MHz )δ 0.94 (d, J = 5.7 Hz, 3H); 1.00 (d, J = 6.6 Hz, 3H); 1.62-1.84 (obscure, m, 8H); 2.02 (s, 3H); 2.32-2.48 (m, IH); 2.58-2.90 (m, 4H); 3.28 (s, 3H); 3.37 (s, 3H); 3.35-3.47 (m 2H), 3.48-3.82 (m, 3H); 4.33 (d, br, IH); 4.54 (s, br, IH); 4.90 (s, br, 2H); 5.19 (s, IH); 5.82-5.98 (m, 2H); 6.16 (br, s, IH); 6.38-6.47 (m, IH); 6.52-6.64 (m, 2H); 6.68 -6.75 (m, 2H); 6.83 (br, d, J = 8.1 Hz, IH); 6.95 (br, d, J = 11.7 Hz, IH); 7.22 (s, IH); 9.17 (s, 1H)。

13 C NMR ( acetone- , 75 MHz ) δ 12.46, 12.90, 13.14, 23.22, 29.07, 33.13, 34.70, 35.95, 47.77, 56.68, 56.74, 73.20, 81.59, 82.20, 82.27, 108.46, 109.26, 116.26, 116.60, 120.97, 126.91, 128.80, 130.64, 133.44, 134.27, 134.87, 137.71, 138.69, 144.70, 145.96, 146.11, 157.12, 169.39, 180.79, 184.82。

ESI (m/z): 704.2 (M + Na + ).

证明得到了结构式如式 (1 ) 所示的产物: -z\ -

°9L'£Sl '8SO8I '€Κ89Τ -9V9SI 'SSl 'ZL't l -LVi -ZL'Sil -Setil -S9'££l -ZL'Z£l '6L'6l\ 'W^Zl 88·9ΖΪ '099^1 i£8SIl ^69*801 ^S*80l -6£'IS 'tl'lS '99'ZL -OI LS -69'9S -60'LP -ΖΟ'ξϊ -6£'t£ -SZ'Z£ -OS'SZ -LV Z i98 Z -SL'Zl -1911 -L£'Zl 9 (ZHPM SL '£1303 ) W L 3 EI 8 (HI 's) LV6 'ZH L'S = f 'Ρ) SZ'L KHZ '^Η Γ8 = f 'P) LO'L HT 'ZH p u = r 'jq 4 p) HZ 'ZH = r 'P)T8*9 KHI 'ZH i n = r 8S*9 Km 6£ 9-τε·9 KHI 'S) ei*9 KHZ; ^6 s-i8 s HI 'S) 6i s KHZ; '« 'jq) β ρ -(HI 'S 'jq) KHI 'ZH 66 = r 'p) i£ t '∞) es'e-^s'e KHI '« os*e-ore HC 'S) 9ε·ε

's) Are HZ '« ε6 -ζ8*ζ -(HZ IS -Z9 '« 8^ -9ε

KH£ 'S) ZO'Z H9 'ajnosqo) £8 I"T9 T H£ 'ZH 6*9 = f 'Ρ) 001 - ( H£ 'ZH 99 = f ' ) S609 ( z腦 00€ ' C 13QD ) 謂 H t

' ^ 。 (%8l 'Sui £ ) Z08ZH ¾ '^g

( Ί"ΐ S*0 ) ^ ' (Ί«ΙΖΪ) ¾ ' (im OS) f-Tfl l ί ^

96TZ00/0T0ZN3/X3d 6TSZ80/H0Z: OAV ESI (m/z): 688.3 (M + Na十)。

证明得到了结构式如式 (2 ) 所示的产物: 式 (2 )

实施例 3

取格尔德霉素 (1 g),加入 [(2-氨基) -乙硫基卜甲基呋喃( 0.5 mL ), 加入二氯甲烷(100 mL ), 室温搅拌反应, 体系呈橙红色悬浊液,反 应式如下:

反应 8天, 停止反应。 减压蒸除溶剂, 柱层析提纯(洗脱剂: 二氯甲烷 /曱醇 = 40: 1 ), 再经过制备 TLC分离得到紫色固体, 命 名为 RZ803(150 mg, 12% ) 。 将该产物进行分析测试, 得到如下 的波谱数据:

! H NMR ( CDC1 3 , 300 MHz ) δ 0.90-1.10 (m, 6H); 1.62-1.90 (obscure, m, 3H); 1.80 (s, 3H); 2.03 (s, 3H); 2.26-2.37 (m, 1H); 2.62-2.87 (m, 4H); 3.72 (d, J = 2.1 Hz, 3H); 3.37 (d, J = 0.9 Hz, 3H); 3.42-3.70 (m, 4H); 3.74 (s, 3H); 4.26-4.40 (m, 1H); 4.94 (br, s, 2H); 5.19 (br, s, 1H); 5.81-5.96 (m, 2H); 6.22 (br, s, 1H); 6.50-6.65 (m, 2H); 6.94 (br, d, J = 11.4 Hz,lH); 7.29 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 7.38 (s, 1H); 9.14 (s, 1H)。

13 C NMR ( CDCI3, 75 MHz ) δ 12.34; 12.60; 12.78; 22.95; 27.86; 28.55; 31.10; 32.26; 34.41; 35.00; 43.92; 56.71; 57.10; 72.55; 81.14; 81.37; 81.61; 107.94; 108.90; 109.09; 110.61; 126.55; 126.90; 132.76; 133.69; 134.94; 135.79; 141.03; 142.45; 144.68; 150.86; 156.03; 168.38; 180.78; 183.80。

ESI (m/z): 708.1 (M + Na+)。 证明得到了结构式如式 (3 ) 所示的产物: 式 ( 3 )

实施例 4

格尔德霉素 (567 mg ), 加 2, 2-二苯基 -1-丙胺(496 mg ), 加 二氯曱烷(50 mL ), 加甲醇(12 mL ), 加三乙胺( 0.45 mL ), 室温 搅

反应 6天, 停止反应。 减压蒸除溶剂, 硅胶柱层析提纯(洗脱 剂: 二氯甲烷 /甲醇 = 20: 1 ), 再经过制备 TLC分离得到紫色固体, 命名为 RZ805 (136 mg, 18% ) 。 将该产物进行分析测试, 得到如 下的波谱数据:

lB匪 R ( CDC1 3 , 300 MHz ) δ 0.96 (d, J = 6.3 Hz, 3H); 1.01 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.62-1.95(m, 9H); 2.02 (s, 3H); 2.32-2.48 (m, IH) 2.63-2.80 (m, 2H); 3.26 (s, 3H); 3.37 (s, 3H); 3.42-3.64 (m, 2H) 3.96-4.05 (m, IH); 4.21-4.46 (m, 3H); 4.90 (s, br, 2H); 5.19 (s, IH) 5.81-5.94 (m, 2H); 6.19 (s, br, IH); 6.58 (t, J = 11.4 Hz, IH); 6.94 (d, br, J = 11.7 Hz, IH); 7.15-7.41 (m, 11H); 9.14 (s, 1H)。

1 C NMR ( CDC1 3 , 75 MHz ) δ 12.41; 12.59; 12.79; 23.07; 27.03 28.47; 32.27; 34.67; 35.07; 47.55; 55.37; 56.69; 57.11; 72.54; 81.12 81.41; 81.60; 108.78; 126.55; 126.87; 126.99; 127.01; 127.23; 127.24 128.75; 132.71; 133.67; 134.93; 135.76; 141.10; 145.18; 145.34 145.35; 156.01; 168.38; 180.54; 183.65。

ESI (m/z): 726.3 (M + Na+)。

证明得到了结构式如式 (4 ) 所示的产物: NH-GA

P 式 ( 4 )

实施例 5

格尔德霉素 (561 mg ), 加 3- (二乙氧基甲基硅烷基) -1-丙胺 ( 840 mg ), 加二氯甲烷(50 mL ), 室温搅拌反应,反应式如下:

GA +

反应 3天, 停止反应。 减压蒸除溶剂, 硅胶柱层析提纯(洗脱 剂:二氯甲烷 /甲醇 = 1: 1 ),得到紫色固体,命名为 RZ811 (590 mg, 80% )。 将该产物进行分析测试, 得到如下的波谱数据:

! H NMR ( CDC1 3 , 300 MHz ) δ 0.15 (s, 3H); 0.63-0.74 (m, 2H); 0.97 (d, J = 4.8 Hz, 3H); 1.00 (d, J = 5.1 Hz,3H); 1.23 (t, J = 5.3 Hz, 6H);1.67-1.84 (m, 8H); 2.03 (s, 3H), 2.37-2.48 (m, IH); 2.62-2.80 (m, 2H); 3.27 (s, 3H); 3.37 (s, 3H); 3.42-3.62 (m, 4H); 3,78 (q, J = 5.4 Hz, 4H); 4.28-4.34 (br, d, J = 4.3 Hz, IH); 4.39 (br, s, IH); 4.89 (s, br, IH); 5.19 (s, IH); 5.82-5.95(m, 2H); 6.34-6.42 (m, IH); 6.59 (t, J = 8.7 Hz, IH); 6.96 (d, br, J = 8.7 Hz, IH); 7.28 (s, IH); 9.20 (s, 1H)。

13 C NMR ( CDCI3, 75 MHz ) δ -4.99; 11.19; 12.30; 12.60; 12.74; 18.39; 22.85; 23.52; 28.44; 32.25; 34.38; 35.01; 48.30; 56.69; 57.07; 58.25; 72.56; 81.19; 81.45; 81.63; 108.24; 108.62; 126.56; 126.85; 132.68; 133.79; 134.96; 135.73; 141.43; 144.84; 156.06; 168.39; 180.49; 183.88.

ESI (m/z): 742.3 (M + Na+)。

证明得到了结构式如式 (5 ) 所示的产物:

OEt

^Si^ NH'GA 式 ( $ ) 实施例 6

格尔德霉素(561 mg ),加 2- (二烯丙基氨基)乙胺 (200 mg ), 加

反应 2天, 停止反应。 减压蒸除溶剂, 硅胶柱层析提纯(洗脱 剂: 丙酮 /石油醚 =1: 3 ), 得到紫色固体, 命名为 RZ813 (566 mg, 95% )。 将该产物进行分析测试, 得到如下的波谱数据:

! H NMR ( CDC1 3 , 300 MHz ) δ 0.93-1.05 (m, 6H); 1.66-1.92 (obscure, m, 6H); 2.03 (s, 3H); 2.35-2.47 (m, IH); 2.62-2.82 (m, 4H); 3.15 (d, J = 6.6 Hz, 4H); 3.27 (s, 3H); 3.37 (s, 3H); 3.40-3.45 (m, 2H); 3.46-3.68 (m, 2H); 4.32 (d, J = 9.9 Hz, IH); 4.53 (br, s, IH); 4.98 (s, br, 2H); 5.15-5.21 (m, 4H); 5.24 (s, IH); 5.78-5.96 (m, 4H); 6.59 (t, J = 11.3 Hz, IH); 6.96 (d, J = 11.1 Ηζ,ΙΗ); 7.16 (s, br, IH); 7.27 (s, br, IH); 9.21 (s, 1H)。

13 C NMR ( CDCI3, 75 MHz ) δ 12.57; 12.62, 12.71, 22.95, 28.39, 32.28, 34.44, 35.12, 42.66, 50.75, 56.53, 56.70, 57.08, 72.54, 81.24, 81.52, 81.70, 108.40, 108.83, 118.22, 126.60, 126.81, 132.67, 133.88, 134.91, 135.03, 135.65, 141.27, 145.37, 156.03, 168.40, 180.13, 184.03。

ESI (m/z): 668.9 (M + H+)。

证明得到了结构式如 (6 ) 所示的产物: 式 (6 ) 实施例 7

格尔德霉素 (561 mg ), 加 2-氨基茚满 (340 mg ), 加二氯甲烷 ( 5 加甲醇(12 mL ), 加三乙胺(0.5 mL ),反应式如下:

室温搅拌反应 5.5天, 停止反应。 减压蒸除溶剂, 硅胶柱层析 提纯(洗脱剂: 二氯甲烷 /甲醇 = 40: 1 )得到较纯产物。 再经过乙 酸乙酯溶解,石油醚滴加重结晶得到纯紫色固 体,命名为 RZ816(180 mg, 27% ) 0 将该产物进行分析测试, 得到如下的波谱数据:

! H NMR ( GDC1 3 , 300 MHz ) δ 0.92-1.06 (m, 6H); 1.57-1.67 (m, 3H); 1.74-1.86 (obsure, m, 4H); 2.03 (s, 3H); 2.33-2.46 (m, IH); 2.68-2.82 (m, 2H); 2.86-3.04 (m, 2H); 3.20-3.30 (m, 4H); 3.38 (s, 3H); 3.42-3.54 (m, 2H); 3.55-3.64 (m, IH); 4.26-4.38 (m, 2H); 4.85 (br, s, 2H); 5.20 (s, IH); 5.81-5.97 (m, 2H); 6.47-6.64 (m, 2H); 6.69 (d, J = 11.7 Hz,lH); 7.18-7.32 (m, 5H); 9.17 (s, 1H)。

13 C NMR ( CDCI3, 75 MHz ) δ 12.30; 12.57; 12.74; 22.86; 28.72; 32.24; 34.52; 34.93; 40.82; 41.32; 54.95; 56.67; 57.03; 72.56; 81.15; 81.36; 81.54; 108.61; 108,81; 124.77; 124.95; 126.50; 126.88; 127.15; 127.23; 132.77; 133.67; 134.90; 135.78; 139.56; 139.66; 141.18; 144.17; 156.15; 168.32; 180.66; 183.69。

ESI (m/z): 684.4 (M + Na+)。

证明得到了结构 (7 ) 所示的产物: 实施例 8

格尔德霉素 (561 mg ) , 加 2- ( 2-萘氧基) 乙胺 ( 700 m ) , 加二氯曱烷(50mL ) , 室温搅拌反应, 反应式如下: 反应 4天, 停止反应。 减压蒸除溶剂, 硅胶柱层析提纯(洗脱 剂:二氯曱烷 /甲醇 =20: 1 ),得到紫色固体,命名为 RZ818 (380 mg, 53% )。 将该产物进行分析测试, 得到如下的波谱数据:

1 H NMR ( CDC1 3 , 300 MHz ) δ 0.94-1.08 (m, 6H); 1.66-1.88 (obscure, m, 6H); 2.03 (s, 3H); 2.35-2.52 (m, IH); 2.68-2.82 (m, 2H); 3.27 (s, 3H); 3.37 (s, 3H); 3.42-3.50 (m, IH); 3.54-3.64 (m, IH); 3.90-4.14 (m, 2H); 4.21-4.38 (m, 4H); 4.91 (s, br, 2H); 5.20 (s, IH); 5.81-5.95 (m, 2H); 6.59 (t, J = 11.6 Hz, IH); 6.62-6.71 (m, IH); 6.95 (d, J = 11.1 Ηζ,ΙΗ); 7.14-7.22 (m, 2H); 7.29 (s, IH); 7.32-7.42 (m, IH); 7.41-7.50 (m, IH); 7.70-7.82 (m, 3H); 9.13 (s, 1H)。

13 C NMR ( CDCI3, 75 MHz ) δ 12.35; 12.57; 12.76; 22.98; 28.56; 32.25; 34.36; 35.01; 45.01; 56.69; 57.05; 65.84; 72.53; 81.13; 81.56; 106.97; 108.91; 109.22; 118.53; 124.05; 126.51; 126.56; 126.74; 126.88; 127.66; 129.26; 129.71; 132.79; 133.63; 134.25; 134.91; 135.77; 140.92; 144.94; 155.90; 156.12; 168.32; 180.76; 183.83。

ESI (m/z): 738.4 (M + Na + )。

证明得到了结构式如 (8 ) 所示的产物:

实施例 9

格尔德霉素( 561 mg ), 加 2- ( 2, 4-二氯苯氧基 )乙胺 (900 mg), 加二氯曱烷(50 mL ), 室温搅拌反应。 反应式如下:

体系颜色呈红色。 反应 7天, 停止反应。 减压蒸除溶剂, 硅胶 柱层析提纯(洗脱剂: 二氯甲烷 /甲醇 =30: 1 ), 得到紫色固体, 命 名为 RZ819 (300 mg,41。/。)。 将该产物进行分析测试, 得到如下的 波谱数据:

! H NMR ( CDC1 3 , 300 MHz ) δ 0.94-1.06 (m, 6H); 1.66-1.86 (obscure, m, 6H); 2.30-2.44 (m, IH); 2.68-2.82 (m, 2H); 3.28 (s, 3H); 3.37 (s, 3H); 3.40-3.50 (m, IH); 3.52-3.64 (m,lH); 3.92-4.10 (m, 2H);

4.16- 4.26 (m, 3H); 4.32 (d, J = 9.6 Hz, IH); 4.86 (s, br, 2H); 5.20 (s, br, IH); 5.81-5.94 (m, 2H); 6.53-6.64 (m, 2H); 6.85-7.00 (m,2H);

7.17- 7.42 (m, 3H); 9.13 (s, 1H)。

13 C NMR ( CDCI3, 75 MHz ) δ 12.36; 12.56; 12.77; 22.96; 28.63; 32.26; 34.33; 35.00; 44.73; 56.69; 57.07; 67.89; 72.54; 81.11; 81.32; 81.56; 109.03; 109.68; 115.13; 124.49; 126.51; 126.92; 127.16; 127.70; 130.26; 132.82; 133.58; 134.92; 135.81; 140.77; 145.02; 152.40; 156,10; 168.33; 180.85; 183.87。

ESI (m/z): 756.4 (M + Na+)。

证明得到了结 (9 ) 所示的产物:

实施例 10

格尔德霉素( 0.56 g ).加 2-{[ 4 -(1, 2 ,3-三峻)丁基]苯氧基 }乙胺 (0. 42 g), 加二氯曱烷(50 mL ), 室温搅拌反应。 反应式如下:

停止反应。 减压蒸除溶剂, 硅胶柱层析提纯(洗脱 剂: 乙酸乙酯 /石油醚 =1: 1→二氯甲烷 /甲醇 =30: 1 ), 得到紫色固 体, 命名为 RZ820(350 mg,44% )。 将该产物进行分析测试, 得到 如下的波谱数据:

! H NMR ( CDC13, 300 MHz )δ 1.01 (d, J = 6.6 Hz, 6H); 1.55-1.68 (m, 2H); 1.70-1.84 (m, obscure, 4H); 1.86-2.00 (m, 4H); 2.03 (s, 3H); 2.34-2.47 (m, IH); 2.60 (t, J =7.4 Hz, 2H); 2.66-2.80 (m, 2H); 3.27 (s, 3H); 3.37 (s, 3H); 3.42-3.50 (m, IH); 3.54-3.64 (m, IH); 3.80-4.05 (m, 2H); 4.10-4.21 (m, 2H); 4.25-4.35 (m, 2H); 4.40 (t, J = 7.1 Hz, 2H); 4.97 (s, br, 2H); 5.19 (s, IH); 5.81-5.94 (m, 2H); 6.53-6.66 (m, 2H); 6.84 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 6.96 (d, J = 8.7 Hz, IH); 7.08 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.27-7.32 (m, IH); 7.52 (s, IH); 7.70 (s, IH); 9.16 (s, 1H)。

13 C NMR ( CDC13, 75 MHz ) δ 12.39, 12.52, 12.74, 22.95, 28.24, 28.64, 29.65, 32.33, 34.19, 34.34, 35.10, 45.07, 49.94, 56.69, 57.07, 66.09, 72.63, 81.16, 81.43, 81.59, 108.91, 109.31, 114.75, 123.09, 126.46, 126.98, 129.42, 132.83, 113.62, 133.75, 134.65, 134.93, 135.86, 141.01, 145.09, 156.07, 156.38, 168.33, 180.84, 183,85.

ESI (m/z):789.6 (M + H+); 811.5 (M + Na+)。

证明得 产物:

实施例 11

格尔德霉素( 1 g ),加 1-叔丁氧叛基 -3- ( 2-氨基甲基)哌啶( 0.57 g ), 加二氯 :

体系颜色呈橙红色。 反应 1.5天, 体系颜色呈深褐色。 补加 1-叔 丁氧羰基 -3- ( 2-氨基甲基)哌啶(0.20 g )加热回流, 反应 5天, 停 止反应。 减压蒸除溶剂, 硅胶柱层析提纯(洗脱剂: 乙酸乙酯 /石油 醚 =1: 1 ), 得到紫色固体,命名为 RZ821 (997 mg, 73% )。 产物为两 差向异构体的混合物, 比例为 1.5:1 ( HPLC鉴定)。 将该产物进行 分析测试, 得到如下的波谱数据:

X H NMR ( CDC13, 300 MHz ) δ 0.92-1.05 (m, 6H); 1.20-1.60 (m, obscure, 13H); 1.62-2.10 (m, obscure, 10H); 2.30-2.46 (m, IH); 2.62-2.80 (m, 2H); 2.81-2.95 (m, IH); 3.00-3.14 (m, IH); 3.27 (s, 3H); 3.37 (s, 3H); 3.40-3.52 (m, 2H); 3.54-3.63 (m, IH); 4.31 (d, J = 9.6 Hz, 2H); 5.05 (s, br, 2H); 5.18 (s, IH); 5.81-5.94 (m, 2H); 6.38 (s, br, IH); 6.59 (t, J = 11.4 Hz, IH); 6.96 (d, J = 11.7 Hz, IH); 7.29 (s, IH); 9.17 (s,lH)。

ESI (m/z): 765.7(M +Na+)。

证明得到了结构 (11 ) 所示的产物:

实施例 12

格尔德霉素(1 8 ),加1-(2-曱氧基)-4- ( 2-氨基乙基)派嗪 ( 628 mg ), 加二 室温搅拌反 。 反应式如下:

反应 3天, 停止反应。 减压蒸除溶剂, 硅胶柱层析提纯(洗脱 剂: 乙酸乙酯 /石油醚 =1: 1 ),得到紫色固体,命名为 RZ822 ( 1.73g, 86% )。 将该产物进行分析测试, 得到如下的波傳数据:

! H NMR ( CDC1 3 , 300 MHz ) δ ) 0.95-1.05 (m,6H); 1.68-1.86 (m, 6H); 2.03 (s, 3H); 2.37-2.50 (m, IH); 2.65-2.82 (m, 8H); 3.13 (br, s, 4H); 3.27 (s, 3H); 3.37 (s, 3H); 3.42-3.65 (m, 3H); 3.68-3.82 (m, IH); 3.87 (s, 3H); 4.32 (d, J = 10.2 Hz, IH); 4.50 (s, br, IH); 4.87 (s, br, 2H); 5.19 (s, IH); 5.81-5.96 (m, 2H); 6.59 (t, J = 11.3 Hz, IH); 6.85-7.06 (m, 5H); 7.19 (s, br, IH); 7.27 (s, IH); 9.21 (s, 1H)。

13 C NMR ( CDC1 3 , 75 MHz ) δ 12.27; 12.57; 12.72; 23.07; 28.41 32.25; 34.41; 35.08; 41.75; 50.58; 52.66; 55.30; 55.81; 56.68; 57.04 72.50; 81.19; 81.44; 81.62; 108.67; 108.84; 111.09; 118.29; 120.97 123.04; 126.56; 126.81; 132.68; 133.78; 134.97; 135.65; 141.02 141.15; 145.44; 152.16; 156.09; 168.38; 180.11; 184.10。

ESI (m/z): 764.6 (M + H+); 786.6 (M + Na+)。

证明得到了 示的产物: 式 (12 )

实施例 13

格尔德霉素 ( 1 g ), 加 2- [二 (2-曱氧基)氨基】乙胺 ( 472 mg ), 加 二氯甲烷(lOOmL ), 室温搅拌反应。 反应式如下:

反应 5天, 停止反应。 减压蒸除溶剂, 柱层析提纯(洗脱剂: 丙酮 /石油醚 =1: 2.5 ),得到紫色固体,命名为 RZ823( 931 mg, 79% )。 将该产物进行分析测试, 得到如下的波谱数据:

lH NMR ( CDCI3, 300 MHz ) δ 0.92-1.04 (m, 6H); 1.62-1.84 (m, 6H); 2.03 (s, 3H); 2.36-2.50 (m, IH); 2.62-2.82 (m, 6H); 2.85-2.94 (m, 2H); 3.27 (s, 3H); 3.34 (s, 6H); 3.37 (s, 3H); 3.40-3.53 (m, 6H); 3.54-3.73 (m, 2H); 4.32 (d, J = 10.2 Ηζ,ΙΗ); 4.58 (s, br, IH); 4.83 (s br, 2H); 5.19 (s, IH); 5.80-5.98 (m, 2H); 6.59 (t, J = 11.3 Hz, IH) 6.96 (d, J = 11.4 Hz,lH); 7.20 (s, br, IH); 7.25 (s, IH); 9.22 (s, 1H)。

13 C NMR ( CDC1 3 , 75 MHz ) δ 12.25; 12.59; 12.72; 22.93; 28.37 32.26; 34.35; 35.08; 43.09; 53.27; 53.68; 56.69; 57.06; 58.86; 71.45 72.50; 81.24; 81.52; 81.68; 108.50; 108.83; 126.61; 126.76; 132.63 133.90; 135.02; 135.59; 141.21; 145.69; 156.08; 168.41; 179.83 184.11。

ESI (m/z): 705.4 (M + H+); 727.5 (M + Na+)。

证明得到了结构式如式 (13 ) 所示的产物:

OMe

N ,GA

MeO

Π 式 (13 )

实施例 14

格尔德霉素(l g ), 加 [1-曱基 -2- ( 3, 4-二甲氧基)苯基】氨基乙 胺( 638 mg ), 加二氯曱烷( 100 mL ), 室温搅拌反应。 反应式如下:

反应 2天, 停止反应。 减压蒸除溶剂, 硅胶柱层析提纯(洗脱 剂: 丙酮 /石油醚 =1: 1.5 ),得到紫色固体,命名为 RZ824 (1300 mg, 95%) 0 将该产物进行分析测试, 得到如下的波 i瞽数据:

J H NMR ( CDCI3, 300 MHz ) δ 0.96 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 1.00 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.72 (s, 3H); 1.75-1.88 (m, 4H); 2.03 (s, 3H); 2.33 (s, 3H); 2.35-2.44 (m, IH); 2.61-2.82 (m, 6H); 3.27 (s, 3H); 3.37 (s, 3H); 3.48-3.51 (m, 2H); 3.53-3.56 (m, 2H); 3.85 (s, 3H); 3.87 (s, 3H); 4.32 (d, J = 9.9 Hz, 1H); 4.50 (s, br, 1H); 4.87 (s, br, 2H); 5.19 (s, 1H); 5.80-5.88 (m, 2H); 6.59 (t, J = 11.3 Hz, 1H); 6.64-6.81 (m, 3H); 6.97 (d, J = 11.4 Hz, 1H); 7.08 (s, br, 1H); 7.27 (s, 1H); 9.20 (s, 1H)。

13 C NMR ( CDC1 3 , 75 MHz ) δ 12.27; 12.57; 12.72; 22,94; 28.38; 32.25; 33.53; 34.35; 35.05; 41.32; 42.55; 55.28; 55.79; 55.86; 56.66; 57.04; 59.32; 72.51; 81.20; 81.47; 81.62; 108.49; 108.80; 111.25; 111.88; 120.49; 126.56; 126.79; 132.51; 132.67; 133.80; 134.98; 135.64; 141.17; 145.35; 147.34; 148.81; 156.10; 168.39; 180.04; 183.96。

ESI (m/z): 767.5 (M + H + ); 789.5 (M + Na+)。

证明得到了结构式如式 (14 ) 所示的产物:

式 (14 )

实施例 15 格尔德衍生物的生物活性的检测

为了对前述实施例 1 - 14中合成的各衍生物进行生物活性验 证, 申请人采用 5种细胞林对各衍生物的 ΙΟμΜ 生长抑制率进行 了检测。 具体地, 采用细胞株: Α549 , MCF-7, AGS , HepG2 和 A2780

培养基: HG-DMEM+10%NBS培养基( MCF-7 HCT116和 HepG2 细胞株) ; RPMI 1640+10%FBS培养基(A2780, A549和 AGS 细胞株)

药物稀幹: 所有药物均溶解于 DMSO中, 配成 10mg/ml的贮存 溶液, 给药前用培养基稀释新鲜配制。

ΙΟμΜ 生长抑制率的检测方法

在平底 96孔板上培养细胞; 24h后加入终浓度为 ΙΟμΜ的复 合物; 72h后每孔加入 20μ1浓度为 5mg/ml的 MTT溶液(溶解 于 PBS中, 过滤除菌, 避光 4°C保存) ; 37°C孵育 4h; 用排枪将 MTT 从孑 L中吸出, 注意不要碰到细胞; 每孔加入 ΙΟΟμΙ 100%DMSO;室温震荡 15min; 570nm波长读数(酶标仪 Thermo Multiskan Spectrum ) 。

结果按照公式 (ODc-ODt)/ODc x 100%进行计算,其中 ODc为对 照组 OD 57 。值, ODt为给药组 OD 57 。值, 具体抑制结果如表 2所 示 0 表 2: 格尔德霉素衍生物对 5种不同的细胞系的生长抑制检测结果

表中 A549、 MCF-7、 AGS、 A2780和 HEPG-2分别代表肺腺 癌、 乳腺癌、 胃癌、 卵巢癌和肝癌细胞系, 纵向表示化学式(1 ) - ( 14 )所示的格尔德霉素衍生物。表中稍大的加黑 体为阳性结果。 上述结果表明本发明化合物具有很好的细胞杀 伤活性和细胞生 长抑制活性, 并且普遍具有很好的体外抗癌活性, 尤其是对于胃癌

(AGS), 卵巢癌(A2780 )和肝癌(HEPG-2 )。 与进入临床的药物分 子 RZC02与 RZC03相比, 化合物 RZ823与 RZ824体现出了更高 的抗癌活性, 且具有广谱抗癌活性的特点, 能同时抑制多种肿瘤细 胞。 尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描 述, 本领域技 术人员将会理解。 根据已经公开的所有教导, 可以对那些细节进 行各种修改和替换, 这些改变均在本发明的保护范围之内。 本发 明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物 给出。