GLYCOCONJUGUES ET LEUR UTILISATION COMME VACCIN CONTRE SHIGELLA FLEXNERI DE SEROTYPE 3a ET X

La présente invention se rapporte à des composés dérivés de sucres reproduisant les épitopes des sérotypes 3a et X de Shigella flexneri et à leur utilisation pour la préparation de compositions vaccinales.

Plus spécifiquement, l'objet de la présente invention se rapporte à de nouveaux composés glycoconjugués comprenant des oligo- ou polysaccharides décrits ci- après, au procédé de synthèse de ces oligo- ou polysaccharides et glycoconjugués, à des dérivés de ces oligo- ou polysaccharides, à des compositions les contenant, ainsi qu'à l'utilisation des glycoconjugués à des fins de vaccination.

La présente invention se rapporte enfin à des méthodes de diagnostic d'une infection de Shigella flexneri utilisant un ou plusieurs oligo- ou polysaccharides ou leur conjugués.

Les vaccins conjugués polysaccharide-protéine représentent un progrès majeur dans le développement de vaccins antibactériens compatibles avec une utilisation chez les jeunes enfants. Il s'avère donc utile de mettre au point un vaccin de type glycoconjugué chimiquement défini contre les infections associées aux sérotypes prévalents de Shigella flexneri, une bactérie à Gram négatif responsable de la forme endémique de la dysenterie bacillaire. De manière à éviter certaines limitations liées à l'utilisation de polysaccharides extraits de cultures bactériennes, l'emploi d'antigènes saccharidiques synthétiques mimant la partie polysaccharidique (PS) du lipopolysaccharide (LPS) de S. flexneri, cible majeure de la réponse protectrice humorale de l'hôte à l'infection, a été privilégié.

La shigellose ou dysenterie bacillaire est responsable d'environ 1 million de décès par an, correspondant à 165 millions de cas, survenant principalement dans les pays en voie de développement (seulement 1,5 million de cas dans les pays développés). Les enfants de moins de 5 ans sont les plus touchés.

Cette maladie diarrhéique, transmise par voie féco-orale, est causée par une entérobactérie à Gram négatif appelée Shigella. Parmi les différents types de Shigella connus, Shigella dysenteria type 1 est à l'origine d'épidémies dévastatrices alors que Shigella flexneri et Shigella sonnei sont responsables de la forme endémique de la maladie. Dans le cas de Shigella flexneri, plusieurs sérotypes sont prévalents, en particulier les sérotypes 2a, Ib ₅ 3 a et 6. Améliorer les conditions d'hygiène dans les zones touchées permettrait de réduire le nombre de -cas de shigellose, mais cela reste difficile. Ainsi la seule approche réaliste en terme

de prévention reste le développement d'un vaccin à large couverture sérotypique. A ce jour, il n'existe aucun vaccin contre la shigellose.

La réponse immunitaire à l'infection est essentiellement humorale. La réponse immunitaire protectrice contre la ré-infection est dirigée contre l'antigène majeur de surface, le lipopolysaccharide ou LPS. Celui-ci est composé de trois entités : une partie lipidique, le lipide A ancré dans la membrane ; un polysaccharide de bas poids moléculaire, appelé antigène O, exposé au milieu extérieur et dont l'unité répétitive caractérise le sérotype de la bactérie ; et un oligosaccharide court appelé le core qui réalise la jonction entre les deux (cf. Figure 1).

Les données disponibles sur le terrain montrent que la réponse immunitaire protectrice est spécifique du sérotype infectieux, ce qui indique l'antigène O comme cible privilégiée. Par analogie avec les vaccins à base de polysaccharides capsulaires déjà commercialisés, on peut donc espérer le développement de vaccins dérivés du LPS.

Or du fait de la présence du lipide A, îe LPS est toxique, et ne peut être utilisé tel quel dans les préparations vaccinales de type glycoconjugués. Une étape de détoxification préliminaire est indispensable. Le LPS détoxifié est un polymère de bas poids moléculaire qui doit être conjugué à une molécule porteuse pour être utilisé dans une préparation vaccinale.

Cette approche présente certaines limitations :

- les rendements faibles

- le coût élevé

- le maintien de l'intégrité de l'antigène O et donc des épitopes impliqués dans la protection, pendant les différentes étapes de purification et les différentes étapes de détoxification et activation chimiques.

Aucun vaccin glycoconjugué à base de LPS n'est encore commercialisé.

L'alternative développée consiste à concevoir des vaccins glycoconjugués chimiquement définis reposant sur l'utilisation d'oligosaccharides synthétiques représentatifs des épitopes osidiques impliqués dans la protection.

La stratégie des constructions vaccinales ciblées est de coupler, par liaison covalente et via un point d'ancrage unique, un haptène spécifique du sérotype infectieux sur une molécule porteuse lui conférant l'immunogénicité requise (cf. Figure 2). Outre la nature de l'haptène et celle de la molécule porteuse, divers paramètres doivent être pris en considération tels que la densité d'exposition de l'haptène sur la molécule porteuse ou la chimie de couplage.

C'est cette approche que les inventeurs ont développée pour les sérotypes prévalents 3 a et X ; ainsi, en premier lieu, ils ont été identifiés le(s) épitope(s) saccharidique(s) « protecteurs » contre l'infection par S. flexneri 3a. Pour ce faire, divers oligosaccharides représentatifs de l'antigène polymérique naturel dont l'unité répétitive biologique est le pentasaccharide ramifié (illustré à la Figure 21) ont été synthétisés, notamment en série de tri-, tétra- et pentasaccharides.

L'antigène O de la bactérie S. flexneri sérotype 3a a pour unité répétitive un pentasaccharide ramifié (E)AB _AC CD. La partie linéaire est un tétrasaccharide composé de trois résidus L-rhamnose A, B et C et d'un résidu iV-acétyl-D-glucosamine D. La spécificité sérotypique est associée à la présence d'un résidu α-D-glucose E en position 3 du rhamnose A ainsi qu'à la présence d'une fonction acétyle en position 2 du rhamnose C (Figure 21).

L'antigène O de la bactérie S. flexneri sérotype X, est le pentasaccharide ramifié (E)ABCD.

Une fois les épitopes protecteurs identifiés, les inventeurs ont ensuite synthétisé des glycoconjugués, protéiques ou peptidiques, induisant des titres élevés en anticorps anti-PS chez la souris. Ces glycoconjugués incorporent des haptènes saccharidiques mimant de façon optimale le PS naturel. Les haptènes sont sélectionnés sur la base des données d'antigénicité des oligosaccharides synthétisés (évaluées par ELISA).

Légende des figures :

Figure 1 : Composition du LPS

Figure 2 : Constructions vaccinales

Figure 3 : Donneurs 1, 2 et 3

Figure 4 : Structure du produit secondaire 11

Figure 5 : Structure du produit secondaire 13

Figure 6 : RMN du proton du céto-aldéhyde 16

Figure 7 : RMN du carbone du céto-aldéhyde 16

Figure 8 : Structure du diol 26

Figure 9: Structure du donneur thiophényle 34

Figure 10: Structure de 33' issu du réarrangement de Chapman de 33

Figure 11 : Structure de l'oxazoline 2'

Figure 12 : Structure du donneur 39

Figure 13 : Comparaison des spectres du proton de 40 et 41

Figure 14 : HMBC du produit de couplage 41

Figure 15 : Supeiposition des spectres C ¹³ GD de 40, 41 et 42 Figure 16 : Structure du produit silylé observé lors du couplage entre 38 et 47

Figure 17 : HSQC du mélange 77 et 78

Figure 18 : HMBC du mélange 77 et 78

Figure 19 : Structure du donneur 80

Figure 20 : Structure de Foxazoline l'

Figure 21 - Antigène O de la bactérie S. flexneri 3a

Figure 22 : étude de la réduction de la fonction trichloroacétamide

Exposé détaillé de l'invention

Ainsi, la présente invention a pour objet des conjugués spécifiques de Shigella flexneri de sérotype 3 a et/ou X, comprenant un saccharide (oligosaccharide ou polysaccharide) sélectionné dans le groupe constitué par la liste Ll :

(X) _x -(D(E)A) _n -(Y) _y

(X) _x -KE)AB) _n -(Y) _y

PC) _x -(CD(E)A) _n -(Y) _y

(X) _x -(D(E)AB) _n -(Y) _y

(X) _x -((E)ABC) _n -(Y) _y

(X) _x -(BCD(E)A) _n -(Y),

(X) _x -(CD(E)AB) _n -(Y) _y

(X) _x -(D(E)ABC) _n -<Y) _y

(X) _x -((E)ABCD} _n -(Y) _y , et dans lesquels :

A représente un résidu α-L-Rhap-(l,2), B représente un résidu α-L-Rhap-(l,3),

C représente un résidu α-L-Rhap-(l,3) ou un résidu [2-O-acétyle] α-L-Rhaj!?-(l,3), D représente un résidu β-D-GlcNAcp-(l,2) et E représente un résidu α-D-Glcp-(l,3), x et y représentent indépendamment 0 ou 1 ,

X et Y représentent un mono-, di- ou oligosaccharide et sont indépendamment sélectionnés dans le groupe constitué par A, B, C, D, E, AB, BC, CD, DA, (E)A, ABC, BCD, CDA, DAB,

O

(E)AB, D(E)A ₅ ABCD, BCDA, CDAB, DABC, (E)ABC, D(E)AB, CD(E)A, (E)ABCD,

D(E)ABC, CD(E)AB etBCD(E)A,

X et Y sont tels que la séquence de l'enchaînement -ABCD- est toujours conservée, et n est un nombre entier compris entre 1 et 10, de préférence entre 2 et 6 lesquels saccharides (oligosaccharides et polysaccharides) étant liés à une molécule M de support de préférence.

X et Y sont tels que le saccharide selon l'invention présente toujours une séquence ou un enchainement de séquence partiel ou complet du saccharide naturel -ABCD-, voir à titre d'exemple, les composés I à XXVIII.

Les abbréviations utilisées sont : Rhap : rhamnopyranosyl ; Glcp : glucopyranosyl ;

GIcN A.cp : 2-acétamido 2-désoxy-glucopyranosyl.

Définitions

Au sens de l'invention, un oligosaccharide est un carbohydrate contenant de 2 à 20 unités monosaccharidiques liées ensemble ; dans la présente invention le terme oligosaccharidique est utilisé de manière large et inclus tous les saccharides définis dans la présente invention ; cet usage diffère de la définition standard des oligosaccharides qui en général ne contiennent pas plus de 10 unités monosaccharidiques (Joint Commission on Biological Nomenclature, Eur. J.Biochem., 1982, 126, 433-437).

Par polysaccharide, on entend dans la présente invention un carbohydrate contenant plus de 20 unités monosaccharidiques liées entre elles.

Par la suite, on utilisera le terme saccharide pour désigner indifféremment les oligosaccharides et les polysaccharides.

Le terme « groupe fonctionnel » se réfère à des groupes d'atomes caractérisés par leurs compositions élémentaires ; de tels groupes fonctionnels confèrent une réactivité à la molécule qui les contient. Des groupes fonctionnels usuels incluent : des aminés primaires (R-NH ₂ ) ; des imines primaires (-C(=NH)-R') ; azo : [azo, -N=N-R'] ; nitrile : - C=N ; acide carboxylique ; carboxyle : -C(=O)OH ; acide carboxylique et ses dérivés tels que des esters : [-C(=O)O-R'] ou des esters activés ; carbonyle : [aldéhyde : -C{=O)H ; cétone, - C(=O)-R'], ou des dérivés de ces carbonyles tels que des carbonyles masqués (acétal ou thioacétal ; alkènes : [-CH=CH-R'] ; alkynes : [-C≡C-R'] ; isocyanates : [-N=C=O] ; isothiocyanate : [-N=C-S] ; thioacyle : [-SCO-R'], [thiol - SH, dithiol : -S-S-R'] ; azide -N ₃ : hydrazide : -CONHNH ₂ , hydrazine, maléimide, O-alkyle hydroxylamine, halogène. Les groupes fonctionnels selon l'invention comprennent aussi les donneurs thioglycosides et les donneurs de type phosphates ou encore le trichloroacétimidate ou le trifluoroacétimidate.

D

Les « oligo- ou polysaccharides structurellement proches » au sens de la présente invention correspondent à un oligo- ou un polysaccharide modifié à partir de la liste Ll, caractérisé par sa capacité à mimer immunologiquement le déterminant antigénique de PO-SP de S. flexneri, en particulier S. flexneri type 3a ou X. De tels oligo- ou polysaccharides modifiés peuvent être obtenus par modification de structure qui rendent les polysaccharides modifiés antigéniquement similaires au déterminant antigénique de l'O-SP de S. flexneri 3a ou X. De tels oligo- ou polysaccharides modifiés peuvent être obtenus par exemple à l'aide d'un espaceur spécifique qui permet de mettre ces oligosaccharides dans la même conformation que l'O-SP natif.

Le terme « immunoréactif » signifie une liaison spécifique entre une molécule contenant un déterminant antigénique et une molécule contenant un anticorps.

Un anticorps correspond aux immunoglobulines ou à leurs fragments comprenant un site de reconnaissance et un site de liaison à l'antigène. Des anticorps sont soit des immunoglobulines entières soit des fragments actifs tels que les fragments ab, ab\ (ab') ₂ et scv, ainsi que les anticorps chimériques.

L'expression « immunologiquement similaire » se réfère à la capacité de l'oligo- ou du polysaccharide selon l'invention d'immuno-réagir ou de se lier à un anticorps tel que défini dans la présente invention qui reconnaît et se lie à un déterminant antigénique natif de l'O-SP de S. flexneri de type 3a ou X.

Le terme « molécule M de support » se réfère à n'importe quelle molécule qui peut être liée de manière covalente à un oligo ou à un polysaccharide de l'invention, pour j former les glycoconjugués de l'invention. Il inclut différentes molécules de support (carriers) pour leur utilisation comme vaccin ou pour préparer des réactifs de diagnostic.

Le terme « immunocarrier » se réfère à une molécule immunogénique ou à un fragment de celle-ci qui est reconnue par les cellules T et est capables d'induire une réponse immune.

Par « autres molécules M pour la préparation de réactif de diagnostic », on entend, au sens de la présente invention, des agents habituellement utilisés pour immobiliser les molécules sur un support solide ou pour marquer les molécules.

Un marqueur se réfère à n'importe quelle substance qui peut produire un signal qui peut être détecté par n'importe quel moyen.

Le terme glycoconjugué se réfère à un oligo- ou un polysaccharide de la liste Ll lié de manière covalente à une molécule M de support (carrier).

Par « prévention et traitement », on entend, au sens de la présente invention, la prévention de l'infection ou de la réinfection, la réduction ou l'élimination des symptômes et la réduction ou la complète élimination du pathogène. Le traitement peut être effectué de manière prophylactique ou thérapeutique.

Les oligo- et polysaccharides de l'invention sont dits conjugués ou glycoconjugués lorsqu'ils sont liés de manière covalente à une molécule M de support.

Dans le cadre des procédés décrits ci-après, par clivage, on entend indifféremment une réaction de déprotection par désacétalation ou hydrolyse acide.

Dans le cadre de la présente invention et sans autre précision, C représente un résidu α-L-Rha/?-(l,3) acétylé ou non.

Selon un mode de réalisation avantageux desdits conjugués, ils sont associés à une molécule M sélectionnée dans le groupe constitué par des peptides et des protéines comprenant au moins un épitope T ou un dérivé de celui-ci.

Selon un autre mode de réalisation desdits conjugués, la molécule M de support est sélectionnée dans le groupe constitué par la protéine IpaD, le peptide PADRE, la toxine tétanique, la protéine KLH ou la protéine CRMi _97.

L 'oligo- ou le polysaccharide est de préférence conjugué à une molécule M, par l'intermédiaire d'une molécule de liaison ou d'un agent de réticulation, qui est de préférence une molécule linéaire ayant un poids moléculaire > 500 daltons, laquelle molécule n'est ni pyrogénique ni toxique dans la forme finale du produit.

Pour la conjugaison par l'intermédiaire d'une molécule de liaison, soit l 'oligo- ou le polysaccharide, soit la molécule M, soit les deux sont tout d'abord liés de manière covalente à ladite molécule de liaison.

Ladite molécule de liaison est avantageusement une molécule homobifonctionnelle ou hétérobifonctionnelle (Bioconjugatte techniques, G.T. Hermanson, Ed., Académie Press San Diego, 1995), e.g., dihydrazide adipique, éthylènediamine, cystamine, N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio) propionate (SPDP), N-succinimidyl-[N-(2- iodoacétyl)]-β-alanyl propionate-propionate (SIAP), succinimidyl-4-(N-maléimido-méthyl) cyclohexane-1 carboxylate (SMCC), acide 3,3'-dithiodipropionique. Parmi les molécules de liaison hétérobifonctionnelles, on peut citer les acides omega-hydroxy alcanoïques.

Les méthodes pour lier des oligo et/ou des polysaccharides à des protéines non toxiques sont bien connues dans l'art. Par exemple dans les Brevet US 5,204,098 et US 5,738,855, il est précisé qu'un saccharide contenant au moins un groupe carboxylique à l'aide d'une condensation carbodiimide peut être thiolaté avec de la cystamine ou aminaté

avec un dihydrazide adipique, des diaminoesters ou de l'éthylènediamine. Les groupes qui peuvent être introduits par cette méthode ou par d'autres méthodes connues dans l'art incluent les groupes suivants : thiols, hydrazides, aminés et acides carboxyliques. Aussi bien les intermédiaires thiolatés que les intermédiaires aminatés sont stables, peuvent être lyophilisés et stockés au froid. L'intermédiaire thiolaté peut être réduit et lié de manière covalente à une molécule M de support polymérique contenant un groupe disulfîde tel qu'un groupe 2- pyridyldithio. L'intermédiaire aminaté peut être lié de manière covalente à une molécule M de support polymérique contenant un groupe carboxylique par une réaction de condensation carbodiimide.

Les saccharides peuvent être liés de manière covalente à la molécule M de support avec ou sans molécule de liaison ou espaceur. Une molécule M de support peut être une molécule naturelle, modifiée, synthétique, semi- synthétique ou recombinante et contient un ou plusieurs groupes fonctionnels, par exemple des groupes amino primaires ou secondaires, des groupes azido ou des groupes carboxyle. La molécule M de support peut être soluble dans l'eau ou non. Les molécules M de support immunogènes sont choisies pour accroître Pirnmunogénicité du saccharide et/ou pour induire la production d'anticorps contre ladite molécule M de support qui sont intéressants d'un point de vue médical.

Les molécules M de support immunogènes incluent des protéines, des peptides, des polysaccharides, des acides polylactiques, des acides polyglycoliques, des agrégats lipidiques et des particules virales inactivées.

Lesdits conjugués peuvent avantageusement être dérivatisés avec des groupes fonctionnels, de manière à les rendre capables de se lier à des ligands chimiques tels que la biotine ou des supports physiques tels que des plaques, billes ou particules (particules de métal, telles que particules d'or ou autres).

Lesdits conjugués peuvent réagir avec la molécule M via le résidu saccharidique soit directement, soit par l'intermédiaire d'un espaceur, qui peut être monovalent ou polyvalent (i.e. comprenant plusieurs copies dudit résidu saccharidique).

Selon un autre mode de réalisation avantageux dudit conjugué, le rapport saccharide :molécule M est compris entre 1:1 et 200:1, de préférence entre 30:1 et 10:1.

La présente invention se rapporte également à des conjugués, caractérisé en ce que le saccharide est sélectionné dans le groupe constitué par les tétrasaccharides, les pentasaccharides et les multimères de ces derniers respectant la séquence de l'enchaînement des saccharides naturels des séroptypes 3 a et X, à savoir -ABCD-.

Selon un autre mode de réalisation, ledit saccharide est sélectionné dans le groupe constitué par :

[CD(E)A] ₃ [D(E)AB], [(E)ABC], [BCD(E)A] ₃ [CD(E)AB] ₃ [D(E)ABC] ₃ [(E)ABCD], [BCD(E)A] _n, [CD(E)AB] _n, [D(E)ABC] _n, [(E)ABCD] _n , [BCD(E)AB] ₃ [D(E)ABCD] ₃ [D(E)ABCD(E)A], [BCD(E)ABCD] ₃ [BCD(E)ABCD(E)A] ₃ [D(E)ABCD(E)ABC] ₃ avec n étant compris entre 2 et 5.

La présente invention comprend également les dérivés saccharidiques sélectionnés dans le groupe constitué par :

(D(E)A) _n -WQ

((E)AB) _n - WQ

(CD(E)A) _n - WQ

(D(E)AB) _n - WQ

((E)ABC) _n - WQ

(BCD(E)A) _n - WQ

(CD(E)AB) _n - WQ

(D(E)ABC) _n - WQ

((E)ABCD) _n - WQ dans lequel A ₃ B ₃ C D ₃ E et n ont la même définition qu'à la revendication I ₃ W est un atome d'oxygène ou de soufre et Q représente l'un des groupes suivants : alkyle, alkényle, acyle, ou un groupe donneur comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, éventuellement fonctionnalisé.

La présente invention inclut également les saccharides de la liste Ll comprenant un espaceur du type O-R-Z et de préférence du type 0-R-NH ₂ (Z=NH ₂ ), dans lesquels R représente un groupe alkyle comprenant de 1 à 12 atomes de carbone et de préférence de 1 à 6 atomes de carbone et Z est un groupe fonctionnel. On obtient ainsi à partir de la liste Ll ₃ les saccharides dérivatisés suivants :

(D(E)A) ₀₁ -O-R-Z

((E)AB} _m - O-R-Z

(CD(E)A) _n ,- O-R-Z

(D(E)AB) _1n - O-R-Z

((E)ABC) _1n - O-R-Z

(BCD(E)A) _n - O-R-Z

(CD(E)AB) _n - O-R-Z

(D(E)ABC) _n - O-R-Z

((E)ABCD) _n - O-R-Z

Le groupe fonctionnel peut être masqué, par exemple, un S-acétyle ou un pont disulfure pour générer -SH qui n'est pas isolé mais qui est l'espèce active. A partir de Pallyle, le passage en aldéhyde est aussi envisageable.

La présente invention est également relative à une composition imrnunogène comprenant un conjugué tel que défini ci-dessus dans un excipient pharmaceutiquement acceptable, c'est-à-dire acceptable d'un point de vue physiologique.

Le conjugué comprend notamment des pentasaccharides tels que ceux compris dans la liste Ll ainsi que les multimère de ces pentasaccharides.

Ladite composition immunogène comprend avantageusement en outre un immunogène capable de protéger contre un autre agent pathogène, tel que S. flexneri de sérotype Ib, 2a et 6 ou d'autres espèces de Shigella, telles que S. dysenteriae et S. sonnei ou d'autres pathogènes responsables de diarrhées chez l'homme. Vaccins

Les compositions immunogènes selon l'invention utilisées comme vaccins incluent un ou plusieurs véhicules pharmaceutiques tel que l'eau, le sérum physiologique, le glycérol et l'éthanol. De surcroît, des substances auxiliaires tels que des agents de mouillage ou des agents émulsifïants, des substances tampons et d'autres peuvent être également utilisées comme excipients.

Les compositions immunogènes qui induisent des anticorps protecteurs contre une infection à 5. flexneri, en particulier S. flexneri de sérotype 3 a ou X sont administrées à un sujet, de préférence à un humain en quantité suffisante pour prévenir ou atténuer la sévérité ou la durée de l'infection par S. flexneri, en particulier S. flexneri de sérotype 3a ou X.

Chaque dose vaccinale comprend une quantité effective de conjugué selon l'invention. Une -tellcquantité varie selon le sujet à traiter, l'âge et les conditions générales du sujet à traiter, la capacité de la réponse immunitaire du sujet à traiter, le degré de protection désiré, la sévérité de la condition à traiter, le conjugué sélectionné et son mode d'administration, parmi d'autres facteurs. Une quantité efficace appropriée peut être déterminée aisément par l'homme du métier.

Plus particulièrement, le conjugué selon l'invention peut être administré en quantité thérapeutiquement efficace comprise entre 1 et 1000 μg de saccharide, de préférence entre 1 et 50 μg.

Une quantité optimale pour un vaccin particulier peut être mise au point par des études standard impliquant la mesure du titre en anticorps anti-LPS 3a ou X chez les sujets.

Suite à une première vaccination, les sujets peuvent recevoir une ou deux injections de rappel à environ 4 semaines d'intervalle.

La composition immunogène selon l'invention peut être administrée avec ou sans adjuvant. Les adjuvants peuvent être ajoutés directement à la composition vaccinale ou bien être administrés de manière séparée soit simultanément soit après l'administration du vaccin. De tels adjuvants inclus mais ne sont pas limités aux sels d'aluminium {hydroxyde d'aluminium) mais incluent également les émulsions huile dans eau avec ou sans agents de stimulation spécifique tels que : muramyl peptides, saponine, cytokines, mutants détoxifiés de toxines bactériennes tels que la toxine cholérique, la toxine de Pertussis ou la toxine d'E. CoIi sensible à la chaleur.

La composition immuogène selon l'invention peut être administrée avec d'autres immunogènes ou agents immuno régulateurs, par exemple des immunoglobulines, des cytokines, des lymphokines et des chemokines.

L'invention a encore pour objet un procédé de préparation d'un conjugué selon la liste Ll, caractérisé en ce qu'il comprend la réaction covalente d'une molécule saccharide-ORZ, telle que définie ci-dessus avec une molécule M de support convenable.

Selon un mode de mise en œuvre avantageux dudit procédé, la réaction covalente comprend une activation préalable de la molécule M.

Selon un autre mode de mise en œuvre avantageux dudit procédé, il comprend les étapes suivantes : a) la conjugaison d'un saccharide-ORZ, tel que défini ci-dessus avec un espaceur pour obtenir une molécule dérivatisée contenant ledit espaceur, et b) la réaction de la molécule dérivatisée et comprenant l'espaceur avec la molécule M.

En variante, ledit procédé comprend les étapes suivantes : a) la conjugaison d'une molécule M convenable à un espaceur pour obtenir une molécule M de support dérivatisée comprenant l'espaceur, b) la réaction de ladite molécule M de support dérivatisée avec un saccharide-ORZ, tel que défini ci-dessus.

Selon un mode de mise en œuvre avantageux, l'espaceur est une petite molécule ayant un poids moléculaire inférieur à 500 daltons, soit homo-bifonctionnelle, soit hétéro-bifonctionnelle.

La présente invention a également pour objet un anticorps monoclonal IgG immunoréactif avec un le LPS de S. flexneri de sérotype 3 a ou un anticorps monoclonal IgG immunoréactif avec un le LPS de S. flexneri de sérotype X.

La présente invention a également pour objet un polynucléotide codant pour la chaîne légère et/ou la chaîne lourde d'un anticorps tel que défini ci-dessus ou un fragment de celui-ci.

La présente invention a égélement pour objet un vecteur d'expression comprenant le polynucléotide tel que défini ci-dessus.

La présente invention a également pour objet une cellule hôte modifiée par un polynucléotide ou un vecteur tels que définis ci-dessus.

La présente invention a en outre pour objet un animal transgénique non humain ou une plante transgénique, caractérisés en ce que tout ou une partie des cellules sont modifiées par un polynucléotide ou un vecteur tels que définis ci-dessus. Protection passive

L'invention est également relative à une composition pharmaceutique comprenant un anticorps tel que défini ci-dessus ou un fragment fonctionnel de celui-ci et un véhicule ou excipient pharmaceutiquement acceptable.

Les anticorps selon la présente invention qui ont un effet protecteur contre une infection à £ flexneri, en particulier S. flexneri type 3a ou X sont administrés chez un sujet, de préférence un homme, en quantité suffisante pour prévenir ou atténuer la sévérité ou la durée de l'infection par S. flexneri, en particulier S. flexneri type 3a ou X.

L'administration de l'anticorps peut être soit prophylactique (avant toute exposition à S. flexneri) ou thérapeutique (avant l'infection ou tout au début de l'infection).

Les doses d'anticorps varient en fonction de différents facteurs tels que l'âge du sujet et son poids. En général, les doses en anticorps sont comprises entre 1 mg/kg et lOmg/kg.

De préférence, l'anticorps est un anticorps de classe IgG.

La voie d'administration de l'anticorps peut être soit orale soit systémique, par exemple sous cutanée, intra musculaire ou intra veineuse. Diagnostic

Les anticorps et les saccharides selon la présente invention sont utilisés in vitro comme réactifs de diagnostic spécifique de S. flexneri type 3 a ou X dans des immunoessais standards.

Les anticorps selon la présente invention sont utilisés pour tester la présence de S. flexneri type 3a ou X dans des échantillons biologiques pour établir le diagnostic de Shigellose chez un individu présentant des symptômes diarrhéique.

Alternativement, les saccharides selon la présente invention peuvent être utilisés pour tester la présence d'anticorps anti S. flexneri type 3a ou X. Ces saccharides peuvent être utilisés pour des études épidémiologiques, par exemple pour déterminer la distribution géographique ou l'évolution des infections à S. flexneri type 3a ou X dans le monde ainsi que pour évaluer la réponse en anticorps induite par un immunogène.

Les anticorps et les saccharides selon la présente invention peuvent avantageusement être marqués et/ou immobilisés sur un support solide selon des protocoles standards connus de l'homme du métier. De tels marqueurs incluent mais ne sont pas limités à des enzymes (phosphatase alkaline, peroxydase), molécules luminescentes ou molécules fluorescentes. Par exemple, les saccharides selon l'invention conjugués à la biotine peuvent être immobilisés sur un support solide pour détecter la présence d'anticorps anti S. flexneri type 3a ou X dans des échantillons biologiques.

De tels immunoessais incluent mais ne sont pas limités à des essais d'agglutination, des radioimmunoessais, des ELISA, des essais de fluorescence, des westerns blots etc...

Ainsi, l'invention a encore pour objet un kit de diagnostic d'une infection à Shigella flexneri de sérotype 3a ou X, caractérisé en ce qu'il comprend au moins un conjugué ou un saccharide tels que définis ci-dessus.

L'invention a également pour objet un intermédiaire pour la préparation d'un oligo- ou polysaccharide de la liste Ll, caractérisé en ce qu'il est sélectionné dans la liste L2 suivante :

- Trichloracétimidate de 3-O-acétyl-2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-2- trichloroacétamido-α/β-D-glucopyranose 2,

- Trichloracétimidate de 2-désoxy-4,6-O-isopropylidène-3-O-lévulinoyl-2- trichloroacétamido-α-D-glucopyranose 3,

- Allyl 2-désoxy-4,6-O-isopropylidène-2-trichloroacétamido-β-D- glucopyranoside 20,

- AUyI (3,4,6-tri-O-acétyl-2-désoxy-2-trichloroacétamido-β-D- glucopyranosyl)-(l-→2)-[2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-gluco pyranosyl-(l—»3)]-4-O-benzyl-α- L-rhamnopyranoside 22,

- AUyI (3 -0-acétyl-2-désoxy-4,6-0-isoρropylidène-2-trichloroacét amido-β- D-glucopyranosyl)-(l→-2)-[2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glu copyranosyl-(l-→3)]-4-O-benzyl- α-L-rhamnopyranoside 23,

- Trichloracétimidate de 2,3,4,6-tétra-Obenzyl-α/β-D-glucopyranose 33,

- AUyI (2,3 ,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-( 1 →3)-2-0-acétyl-4- O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 35,

- Allyl (2-désoxy-2-trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-( 1 — >2)- [2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l-→3)]-4-(9- benzyl-α-L-rhaninopyranoside 37,

- Allyl (2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-2-trichloroacétamido-β-D- glucopyranosyl)-(l→-2)-[2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-gluco pyranosyl-(l-→3)]-4-0-benzyl-α- L-rhamnopyranoside 38,

- Allyl (2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l—> 3)-(2- désoxy-4,6-O-isopropylidène-2-trichloroacétamido-β-D-glu copyranosyl)-(l— »2)-[2,3,4,6- tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l— »3)]-4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 40,

- Allyl (2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-( 2- désoxy-2-trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l-→2)- [2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D- glucopyranosyl-(l→-3)]-4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 41,

- Allyl (3,4-di-(9-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(1^3)-(2-désoxy-2- trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l—>2)-[2,3,4, 6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl- (l-→3)]-4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 69,

- Tricholroacétimidate de (2,3,4-tri-0-acétyl-α-L~rhamnopyranosyl)-(l→3)- 2-O-acétyl-4-O-benzyl-α/β-L-rhamnopyranose 46,

- Trichloroacétimidate de (3,4-di-O-benzyl-2-O-lévulinoyl-α-L- rhamnopyranosyl)-(l— >3)-2-O-acétyl-4-O-benzyl-α/β-L-rhamnopyranose 47,

- Allyl (2,3,4-tri-ο-acétyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-(2-O-ac� �tyl-4-ο- benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→3)-(2-désoxy-4,6-O-isopr opylidène-2-trichloroacétainido- β-D-glucopyranosyl)-(l→2)-[2,3,4,6-tétra-ο-benzyl-α-D- glucopyranosyl-(l→3)]-4-O- benzyl-α-L-rhamnopyranoside 52,

- Allyl α-L-rhamnopyranosyl-(l— >3)-(2-O-acétyl-4-O-benzyl-α-L- rhamnopyranosyl)-(l-→3)-(2-désoxy-4,6-ο-isopropylidène- 2-trichloroacétamido-β-D-

^

glucopyranosyl)-(l→2)-[2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glu copyranosyl-(l→3)]-4-(9-benzyl-α- L-rhamnopyranoside 54,

- Allyl α-L-rhamnopyranosyl-(l→-3)-(4-(9-benzyl-α-L-rhamnopyrano syl)- (l-→3)-(2-désoxy-4,6-O-isopropylidène-2-trichloroacétam ido-β-D-glucopyranosyl)-(l→-2)- [2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l→3)]-4-(9-b enzyl-α-L-rhamnopyranoside 55,

- Allyl α-L-rhamnopyranosyl-(l→3)-(2-O-acétyl-4-O-benzyl-α-L- rhamnopyranosyl)-(l-→3)-(2-désoxy-2-trichloroacétamido-� �-D-glucopyranosyl)-(l-→2)- [2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l-→-3)]-4-O- benzyl-α-L-rhamnopyranoside 56,

- Allyl α-L-rhamnopyranosyl-(1^3)-(4-ο-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl )- (l-→3)-(2-désoxy-2-trichloroacétamido-β-D-glucopyranosy l)-(l-→2)-{2,3,4,6-tétra-0-benzyl- α-D-glucopyranosyl-(l →3)]-4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 57,

Allyl (3,4-di-O-benzyl-2-ο-lévulinoyJ-α-L-rhamnopyranosyl)-(l� �-3)-(2-O- acétyl-4- ο-benzyl-α-rhamnopyranoside 61 ,

- Allyl (3,4-di-0-benzyl-2-0-lévulinoyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-� �3)-(2- O-acétyl-4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→3)-(2-déso xy-4,6-O-isopropylidène-2- trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l→2)-[2,3,4,6-t� �tra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl- (1 -→-3)]-4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 64,

- Allyl (3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l →3)-(2-ο-acétyl-4-O- benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→-3)-(2-désoxy-4,6-O-isopr opylidène-2-trichloroacétamido- β-D-glucopyranosyl)-( 1 —>2)-[2,3 ,4,6-tétra-οbenzyl-α-D-glucopyranosyl-( 1 -→3)] -4-O- benzyl-α-L-rhamnopyranoside 66,

- Allyl (3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l— >3)-(2-O-acétyl-4-O- benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(1^3)-(2-désoxy-2-trichloroac� �tamido-β-D-glucopyranosyl)- (l→2)-[2,3,4,6-tétra-ο-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l→3 )]-4-ο-benzyl-α-L- rhamnopyranoside 67,

- Allyl (3 ,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-( 1 →3)-2-O-acétyl-4-O- benzyl-α-L-rhamnopyranόside 79,

- Trichloracétimidate de (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)- (1 →3)-4-O-benzyl-2-0-lévulinoyl-α/β-L-rhamnopyranose 80,

- Trichloracétimidate de (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)- ( 1 -→3)-2-O-benzoyl-4-O-benzyl-α/β-L-rhamnopyranose 80 ' ,

- Allyl (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-(4-O-b enzyl-α- L-rharrmopyranosyl)-(l-→2)-(3,4-di-ο-benzyl-α-L-rhamnopy ranosyl)-(l— >3)-2-ο-acétyl-4-O- benzyl-α-L-rhamnopyranoside 85,

- Trichloroacétimidate (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l-→3)- (4-O-benzyl-2-O-lévulinoyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→2)-( 3,4-di-O-benzyl-α-L- rhamnopyranosyl)-(l→3)-2-0-acétyl-4-O-benzyl-α/β -L-rhamnopyranose 86,

- Allyl (2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l— >3)-(4-<9-benzyl-2- O-lévulinoyl-α-L-rhamnopyranosyl)-( 1 -→2)-(3 ,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-( 1 -→3 )- 2-O-acétyl-4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 87,

- AUyI (2,3 ,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l →3)-(4-<9-benzyl-α- L-rhamnopyranosyl)-(l-→2)-(3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyra nosyl)-(l→-3)-4-O-benzyl-α- L-rhamnopyranoside 89,

- Allyl (3,4,6-tri-O-acétyl-2-désoxy-2-trichloroacétamido-β-D- glucopyranosyl)-(l→-2)-[2,3,4,6-tétra-(9-benzyl-α-D-gluc opyranosyl-(1^3)]-(4-C>-benzyl-α- L-rhamnopyranosyl)-(l→-2)-(3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyra nosyl)-(l—>3)-2-O-acétyl-4-O- benzyl-α-L-rhamnopyranoside 90,

- Allyl (2-désoxy-2-tricliloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l — ^-2)- [2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l-→3)]-(4-O- benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)- ( 1 — >2)-(3 ,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-( 1 -→3)-2-ο-acétyl-4-ο-benzyl-α-L- rhamnopyranoside 91,

- Allyl (2-désoxy-2-trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l—& gt;2)- [2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l— >3)]-(4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)- (1— >2)-(3,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→3)-4-0-b enzyl-α-L- rhamnopyranoside 92,

- Allyl (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-(4-O-b enzyl-2- O-lévulinoyl-α-L-rhairmopyranosyl)-(1^2)-(3,4-di-O-benzyl- α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→3)- (2-O-acétyl-4-(9-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→3)-2-ac étamido-2-désoxy-4,6-0- isopropylidène-β-D-glucopyranoside 93,

- Allyl (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-(4-ο- benzyl-α- L-rhamnopyranosyl)-(l→2)-(3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyran osyl)-(l-→3)-(2-O-acétyl-4- (9-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→3)-2-acétamido-2-dés oxy-4,6-ο-isopropylidène-β-D- glucopyranoside 94,

- Allyl (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l →3)-(4-O-benzyl-α- L-rhamnopyranosyl)-(l-→2)-(3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyra nosyl)-(l— >3)-(2-O-acétyl-4- O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→'3)-2-acétamido-2-déso xy-β-D-glucopyranoside 95,

- Allyl (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-(4-O-b enzyl-α- L-rhamnopyranosyl)-(l→2)-(3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyran osyl)-(l→3)-(4-O-benzyl-α-

L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-2-acétamido-2-désoxy-4,6-O-i sopropylidène-β-D- glucopyranoside 96,

- Allyl (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l-→3)-(4-O- benzyl-α- L-rhamnopyranosyl)-(1^2)-(3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranos yl)-(l-→-3)-(4-O-benzyl-α- L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-2-acétamido-2-désoxy-β-D-gluco pyranoside 97,

- Allyl (2 ₅ 3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-(4-O-benz yl-2- O-lévulinoyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→2)-3,4-di-O-benzyl -α-L-rhamnopyranoside 107,

- Allyl (2,3,4,6-tétra-<9-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-(2 -ο-benzoyl- 4-ο-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→-2)-3,4-di-O-benzyl-� �-L-rhamnopyranoside 107',

- AUyI (2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l →3)-(4-ο-benzyl-α- L-rhamnopyranosyl)-(l -→2)-3,4-di-ο-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 108,

- Allyl (2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-2-trichloroacétamido-β-D- glucopyranosyl)-( 1 -→2)- [2,3 ,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl-( 1 →3)] -(4-ο-benzyl-α- L-rhamnopyranosyl)-(l→-2)-3,4-di-ο-benzyl-α-L-rhamnopyra noside 110,

- Allyl (3 -O-acétyl-2-désoxy-4,6-ο-isopropylidène-2-trichloroacét amido-β- D-glucopyranosyl)-(l-^2)-[2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-gluco pyranosyl-(l→-3)]-(4-ο-benzyl- α-L-rhamnopyranosyl)-( 1 — »2)-3 ,4-di-ο-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 115,

- Allyl (2-désoxy-2,3,4-tri-0-acétyl-2-trichloroacétamido-β-D- glucopyranosyl)-(l-→2)-[2,3,4,6-tétra-ο-benzyl-α-D-gluc opyranosyl-(l→-3)]-(4-ο-benzyl-α- L-rhamnopyranosyl)-(l — >2)-3,4-di-ο-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 115',

- Allyl (2-désoxy-2-trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l→2 )- [2,3 ,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl-( 1 -→3)] -(4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)- { 1 — >2)-3 ,4-di-ο-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 115"

- Allyl (2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-2-acétamido-β-D-glucopyra nosyl)- (l→2)-[2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l→3) ]-(4-O-benzyl-α-L- rhamnopyranosyl)-( 1 →2)-3 ,4-di-ο-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 116,

- Allyl 2-O-acetyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside-(l-→3)-(2 - désoxy-4,6-O-isopropylidène-2-acétamido-β-D-glucopyranos yl)-(l→-2)-[2,3,4,6-tétra-O- benzyl-α-D-glucopyranosyl-( 1 →3)]-(4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-( 1 -→2)-3 ,4-di-ο- benzyl-α-L-rhamnopyranoside 116',

- Allyl 2-O-acetyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside-(l-→3)-(2 - désoxy-2-acétamido-β-D-glucopyranosyl)-( 1 — >2)- [2,3 ,4,6-tétra-O-benzyl-α-D- glucopyranosyl-(l-→3)]-(4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-( l— >2)-3,4-di-O-benzyl-α-L- rhamnopyranoside 116",

- Allyl (3 ,4-di-O-benzyl-2-0-léwlinoyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l -→3)-2-O- acétyl-4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l—>3)-(2-dés oxy-4,6-O-isopropylidène-2- trichloroacétamido-β-D-glucopy ₁ -anosyl)-(l—>2)-[2 ₅ 3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl- (l→'3)]-(4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→^2)-3,4-di- O-benzyl-α-L- rhamnopyranoside 122,

- Allyl (3,4-di-O-benzyl-2-O-lévulinoyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→ 3)-2-O- acétyl-4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l—>3)-(2-dés oxy-2-trichloroacétamido-β-D- glucopyranosyl)-(1^2)-[2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyr anosyl-(l→-3)]-(4-0-benzyl-α- L-rhamnopyranosyl)-( 1 -→2)-3 ,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 123 ,

- Allyl (3 ,4-di-O-benzyl-2-α-L-rhamnopyranosyl)-(l →3)-2-O-acétyl-4-O- benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→3)-{2-désoxy-2-trichloro acétamido-β-D-glucopyranosyl)- (l→2)-{2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l→3) ]-(4-O-benzyl-α-L- rhamnopyranosyl)-( 1 -→2)-3 ,4-di-<9-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 124,

- Allyl (3,4-di-O-benzyl-2-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→-3)-4-O-benzyl -α-L- rhaninopyranosyl)-(l-→3)-(2-désoxy-2-trichloroacétamido- β-D-glucopyranosyl)-(l-→2)- [2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l→-3)]-(4-(9 -benzyl-α-L-r3iamnopyranosyl)- (1— >2)-3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 125,

- Allyl (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l →3)-(4-O-benzyl-2- O-lévulinoyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l — »2)-(3 ,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-( 1 →3 )- (2-O-acétyl-4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→3)-(2-d� �soxy-4,6-O-isopropylidène-2- trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l— >2)-[2,3,4 ₅ 6-tétra-ο-benzyl-α-D-glucopyranosyl- ( 1 →3)] -4-ο-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 126,

- Allyl (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-{l-^3)-(4-O-be nzyl-α- L-rhamnopyranosyl)-(l-→2)-(3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyra nosyl)-(l-→3)-(2-O-acétyl-4- 0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→'3)-(2-désoxy-4,6-0-iso propylidène-2- trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l—>2)-[2,3,4, 6-tétra-ο-benzyl-α-D-glucopyranosyl- (l→3)]-4-ο-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 127,

Allyl (2-désoxy-4,6-ο-isopropylidène-3-O-lévulinoyl-2- trichloroacétamido-β-D-glucopyranose)-(l-→-2)-[2,3,4,6-t étra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl- (l-→3)]-(4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→2)-(3,4-di -ο-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)- (l→3)-(2-ο-acétyl-4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→ 3)-(2-désoxy-4,6-O- isopropylidène-2-trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-( l— »2)-[2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α- D-glucopyranosyl-(l →-3)]-4-ο-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 128.

L'invention se rapporte encore à un intermédiaire pour la préparation d'un saccharide tel que défini dans la liste Ll ₅ caractérisé en ce qu'il est sélectionné dans la liste L3 suivante :

- [CD(E)A] (III et IV),

- [D(E)AB] (VIII) ₃ - [(E)ABC] (XI et XII),

- [BCD(E)A] (V et VI), - [CD(E)AB] (IX et X),

- [D(E)ABC] (XIII et XIV),

- [(E)ABCD] (XV et XVI),

- [BCD(E)AB] (XVII et XVIII),

- [D(E)ABCD] (XXIII et XXIV),

- [D(E)ABCD(E)A] (XIX et XX),

- [BCD(E)ABCD] (XXV et XXVI),

- [BCD(E)ABCD(E)A] (XXI et XXII),

- [D(E)ABCD(E)ABC] (XXVII et XXVIII)

Description détaillée du mode de préparation des saccharides selon T invention

Tableau 1 : Oligosaccharides représentatifs des fragments de l 'antigène O

Toutes les synthèses reposent sur l'utilisation de ces synthons clés réprésentés dans le schéma 1.

Donneur D 2 R = Ac Accepteur D 19 R = Ac 3 R = Lev D 20 R = CI ₃ Ac

21 (E)A Donneur 80

C Accepteur 31

B Donneur 49

Schéma 1 : Synthons clés retenus

Ainsi les synthons accepteurs peuvent être allongés à leur extrémité non réductrice par incorporation itérative des monosaccharides ou disaccharides donneurs requis fonctionnalisés de façon appropriée. En outre, les glycosides d'allyle peuvent être allongés à leur extrémité réductrice après déallylation sélective et activation, permettant leur couplage sur les monosaccharides ou disaccharides accepteurs requis fonctionnalisés de façon appropriée.

Dans les procédés de synthèse qui suivent, les abbréviations utilisées sont :

TA :température ambiante

CCM : Chromatographie sur couche mince

Ac: Acétyle

Cl]Ac : Trichloroacétyle

TCA : trichloroacétimidate

Bn: Benzyle

Bz : Benzoyle

Lev : Levulinoyle

Et: Ethyle

Me: Méthyle

Pr: Propyle iPr : isopropyle

DCM : Dichlorométhane

DCE : 1,2-dichloroéthane

Chex : Cyclohexane

Et ₂ O : Ether diéthylique iPr ₂ O : Ether diisopropylique

EP : Ether de pétrole

Toi: Toluène

THF : Tétrahydrofurane

DMF : N,N-diméthylformamide

APTS : Acide para-toluènesulfonique

TfOH : Acide trifluorométhanesulfonique

TMSOTf : trifluorométhanesulfonate de triméthylsilyle

CSA : acide camphor sulfonique

HCI : acide chlorhydrique

DCC : Dicyclohexylcarbodiimide

DCU : dicyclohexylurée

DMAP : N-diméthylaminopyridine

Rf : Rapport frontal

DBU: 1 ,8-diazo-bicyclo(5.4.0)undec-7-ene

GIc : Glucose

Rha : Rhamnose

Litt. Littérature éq. : équivalent aq. : aqueux quant. : Quantitatif

MS : Spectroscopie de Masse

HRMS : Spectroscopie de Masse Haute Résolution

ESI : Ionisation par Electrospray

HPLC : Chromatographie Liquide Haute Résolution

RMN: Résonance Magnétique Nucléaire

COSY: Corrélation Spectroscopy

DEPT : Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer

HSQC : Heteronuclear Single Quantum Corrélation

HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Corrélation

TOCSY : TOtal Corrélation Spectroscopy

ROESY : ROtative frame Overhauser Enhancement Spectroscopy

NOESY : Nuclear Overhauser Enhancement SpectroscopY

DOWEX (H+) : DOWEX SOWX8-200

Solution HCI à 10 %

NaHC03 : Hydrogènocarbonate de sodium

K2C03 : Carbonate de Potassium

Na2S04 : Sulfate de sodium

CS2C03 : Carbonate de césium

NaHS03 : Hydrogénosulfite de sodium

HCIlM ou SM

Solution de NaCI sat

Solution d'acide acétique 80% (pour dissach E(A»

Solution aqueuse de TFA SO %

Les schémas auxquels les procédés font références sont indiqués à titre d'illustration d'un mode de réalisation particulier sans aucunement limiter les conditions de mise en œuvre de ces procédés à ces conditions particulières. Partie I - Etape préalable de synthèse des synthons clés Donneurs de Glucosamine :

L'antigène O de S. flexneri 3a comporte une structure de type 3)-β-D-pGlcNHAc-(l. Comme indiqué dans la partie rétrosynthèse les précurseurs donneurs retenus dérivent de la 4,6-0-isopropylidène-2-trichloroacétamido-D-glucosamine. Cette partie présente la synthèse des nouveaux donneurs 2 et 3. Une voie d'accès alternative à celle publiée pour l'analogue l, ¹ très utilisé au laboratoire, est également proposée. 1. Monosaccharide D donneur 1 et 2

L'objectif a été d'obtenir ces trois donneurs en grande quantité avec de bons rendements et en limitant le nombre d'étapes de purification. Il est a noté que différents accepteurs et quelques donneurs glucosaminyl comportant une fonction 4,6-0- isopropylidène ont déjà été utilisés dans la synthèse d'analogues de lipide A ou de peptidoglycane ⁴ mais plus rarement dans la synthèse d'oligosaccharides complexes. A notre connaissance, deux donneurs « trichloroacétimidate » dérivés de la glucosamine en série azido ² ' ⁵ et un analogue en série 2-trichloréthoxycarbonyl ⁶ ont déjà été décrits. En série trichloroacétamide, seul un donneur thiophényle a déjà été décrit. ⁷

a. Protection de la fonction aminé Conditions pour introduire la fonction trichloroacétamide sélectionnée comme groupe participant.

Il était connu d'utiliser la méthode de Bergmann et Zervas passant par une imine. 8 ^ô - ^" 1 ⁱ 0 ^υ Le chlorhydrate de D-glucosamine 4 est mis en réaction avec de la soude et du para- anisaldéhyde pour former l'imine 5 (Schéma 2). Après acétylation de toutes les fonctions hydroxyles et clivage de l'imine en condition acide, la fonction aminé générée peut être protégée par une fonction trichloroacétyle à l'aide du chlorure de trichloroacétyle ce qui conduit à Panomère β pur 8 avec un rendement global de 45%. Cette méthode est efficace car chaque intermédiaire est cristallisable. Cependant, elle implique 4 étapes, et l'accès au donneur 2 est rendu impossible puisque la dégradation du milieu réactionnel a été observée lorsque des différentes tentatives de désacétylation du per-acétyle 8.

Schéma 2 : Méthode I d'accès au per-acétyle 8

Une alternative est la méthode décrite par Jacquinet et al. ^ι (Méthode II, Schéma 3). Le chlorhydrate de D-glucosamine 4 mis en réaction avec une base faible, l'hydrogénocarbonate de sodium, puis du chlorure de trichloroacétyle, est converti régiosélectivement en hémiacétal 9 protégé sur la fonction aminé par une fonction trichloroacétyle. Cette méthode est efficace sur de grandes quantités si on enchaîne avec l' acétylation directe et la cristallisation du dérivé per-acétylé 8 comme décrit par les auteurs. En revanche, la cristallisation du trichloroacétamide 9 est difficile du fait de la grande solubilité de ce composé dans le milieu de cristallisation (eau froide). Ces deux étapes ont permis d'isoler le mélange d'anomères α et β 8 dans un rapport 90/10 avec un rendement de 45% inférieur à celui décrit (63%). ^!

Méthode II :

45% 88%

Schéma 3 : Méthodes d'accès II et III au dérivé per-acétylé 8

II a par ailleurs été montré qu'il était possible de convertir une fonction aminé en amide avec de bons résultats par introduction de groupements tels que Pacétyle, le palmitoyle ou le butyroyle ¹¹ ' ⁿ mais aussi plus récemment l'introduction de butanoyle ou d'un 3,4,5,6- tétra-chlorophtaloyle ¹⁰ ' ¹³ sur la position 2D- L'introduction de ces groupes acyles repose sur l'utilisation d'une base forte, le methylate de sodium (NaOMe) pour déprotonner la fonction aminé du chlorhydrate de glucosamine commerciale. L'aminé libre libérée réagit sur l'anhydride correspondant au groupement désiré. Ces conditions ont été testées pour « trichloroacétyler » la fonction aminé de la glucosamine commerciale. Après optimisation des conditions, le chlorhydrate de D-glucosamine mis en réaction à 0°C .(cette réaction est très sensible) avec du NaOMe et de l'anhydride trichloroacétique, est converti en trichloroacétamide 9 (Méthode III, Schéma 3). La recristallisation à cette étape étant difficile dû fait de la présence de sels, Pacétylation de toutes les fonctions hydroxyles est ensuite réalisée sans purification préalable de 9. Le mélange d'anomères α et β (65/35) 8 est isolé avec un rendement de 88% après chromatographie. Cette méthode est donc très intéressante par rapport aux méthodes précédentes, les rendements obtenus étant en effet nettement supérieurs à ceux décrits antérieurement pour la préparation de 8. De plus, cette première étape est aisément reproductible à l'échelle de la dizaine de grammes.

b. Synthèse du trichloroacétimidate de 3,4-,6-tri-O-acétyl-2-désoxy-2- trichloroacétamido-α-D-glucopyranose 1

Le dérivé per-acétylé 8, obtenu sous forme d'un anomère β pur (méthode I) ou d'un mélange d'anomères α/β (méthode II ou méthode III), doit être désacétylé en position anomérique. Parmi toutes les méthodes citées dans la littérature, deux méthodes très utilisées ont été testées :

- l'acétate d'hydrazinium ;'' ^{14j 15}

- Péthylènediamine en milieu acide. ¹⁶ ' ¹⁷

Lorsque la réaction est réalisée en présence d'éthylènediamine et d'acide acétique, elle est plus lente qu'en présence d'acétate d'hydrazinium, mais l'hémiacétal voulu 10 est obtenu avec une meilleure régiosélectivité et donc un rendement de 89% supérieur au 68% obtenu avec la première méthode. Ce meilleur rendement peut s'expliquer par l'absence de la formation du produit secondaire 11, issu de la désacétylation en position 3, observée lorsque l'acétate d'hydrazinium est utilisé. La structure du composé 11 est confirmée par l'analyse

RMN. Un shift du déplacement chimique vers les champs forts du proton 3 de 11 (δ = 4,00 ppm) par rapport à l'hémiacétal 10 (δ = 5,43 ppm) est observé (Figure 4).

L'hémiacétal est ensuite activé en donneur 1. Ce dernier étant instable dans les conditions de purification sur silice, une base organique facilement éliminable a été sélectionnée sur la base des données de la littérature. ^18"20 Le carbonate de césium est apparu comme un choix intéressant car n'impliquant qu'une simple filtration pour éliminer les sels formés. L'alcool 10 est donc mis en réaction dans le dichlorométhane en présence de carbonate de césium et de trichloroacétonitrile pour donner le trichloroacétimidate 1 avec un rendement brut de 95% (Schéma 4). Mais, lors des différents essais de couplage réalisés en utilisant ce donneur, la quantité d'acide (TMSOTf) à additionner a été augmentée, par rapport à des conditions classiques, pour avoir un pH de milieu réactionnel suffisamment acide. Il est vraisemblable que des traces de carbonate de césium subsiste. Pour cette raison, l'emploi d'une base forte, également très utilisée dans la littérature, la DBU ²¹ a aussi été testé. L'alcool 10 est mis en réaction dans le 1 ,2-dichloroéthane en présence de DBU et de trichloroacétonitrile pour donner, après purification rapide sur gel de silice, le trichloroacétimidate 1 avec un rendement de 87%. ²² ' ²³ Une autre optimisation a été apportée. Si les étapes de désacétylation anomérique et d'activation sont enchaînées sans purification intermédiaire, le donneur 1 est obtenu à partir du précurseur 8 avec un rendement de 84% sur 2 étapes, amélioré par rapport aux données publiées ¹ (77%).

89%

Schéma 4 : Synthèse du donneur 1

c. Synthèse du trichloroacétimidate de 3-O-acétyl-2-désoxy-4,6-O- isopropylidène-2-trichloroacétamido-α/β-D-glucopyranose 2

Le trichloroacétamide 9 est préparé selon la méthode III décrite ci-dessus et utilisée telle quelle. Il est protégé régiosélectivement en position 4 et 6 par un groupement isopropylidène par action du 2-méthoxypropène et de CSA pour conduire à l'hémiacétal 12. ^{24~ 29} L'utilisation du 2-méthoxypropène ³⁰ ' ³¹ a été préférée à l'utilisation plus classique du 1,2- diméthoxypropane ³² car celui-ci permet de limiter à 10% la formation du furanose 13 (confirmé par la présence du pic du proton anomérique à 6,26 ppm avec une constante de

couplage de 4,9 Hz en RMN ¹ H caractéristique d'un furanose α acétylé en position anomérique ³³ ), contre 30% si la réaction implique le 1 ,2-diméthoxypropane (Figure 5).

Ensuite, les positions hydroxyles 1 et 3 libres du trichloroacétamide 12 sont acétylées pour obtenir le diacétate 14 avec un rendement de 70% sur les 3 étapes (Schéma 5).

9, α/β : 55/45 12 14, α/β : 55/45, 3 étapes, 70%

Schéma 5 : Synthèse du monosaccharide 14

L'avant dernière étape est similaire à celle de la synthèse de l'hémiacétal 10. Il s'agit d'une désacétylation anomérique. Une fois encore, les meilleurs résultats sont obtenus avec Péthylènediamine ¹⁷ en présence d'acide acétique. L'hémiacétal 15 est isolé avec un rendement de 87%, supérieur au 78% obtenus si l'acétate d'hydrazinium ¹⁵ est employé (Schéma 6).

Comme pour le donneur 1, des bases organiques faibles -comme le carbonate de césium ²⁰ ou le carbonate de potassium ^34"36 ont été testées pour préparer le donneur 2. La réaction d'activation n'a jamais été totale, ce qui est probablement dû au fait de l'instabilité du trichloroacétimidate 2 formé. La base a donc été remplacée par une base plus forte, la DBU ²¹ , ce qui a permis d'isoler le donneur 2, avec un rendement de 87%. ²² ' ²³

Schéma 6 : Synthèse du donneur 2

En revanche, lorsque la réaction de désacétylation anomérique a été réalisée à plus grande échelle, la dégradation de l'hémiacétal 15 sur la silice est observée avec la présence, en CCM, d'un composé plus polaire 16, difficilement isolable en chromatographie. Après avoir forcé la formation de ce composé secondaire 16 en laissant le composé plus longtemps sur la silice, l'analyse par RMN montre la disparition de Pacétyle, de la fonction trichloroacétamide et l'apparition d'un aldéhyde, avec un déplacement chimique

caractéristique à 9,43 ppm en proton et 187,0 ppm en carbone. Alors que la perte de Pisopropylidène pouvait être envisagée dû fait de l'acidité de la silice, l'analyse par RMN confirme bien sa présence avec des signaux caractéristiques à 1 ,54 ppm et 1 ,43 ppm en proton ainsi que le signal caractéristique du carbone portant les deux méthyles à 99,8 ppm. Le reste de la structure est confirmée par comparaison avec la littérature. ³⁷

L'apparition de ce céto-aldéhyde 16 peut s'expliquer par une élimination de l'acétyle, due à l'acidité de la silice, suivie de l'hydrolyse de l'imine formée. Pour empêcher la foπnation de ce produit secondaire, l'hémiacétal 15 est engagé directement dans la réaction d'activation sans aucune purification à ce stade. Le donneur 2 est ainsi obtenu avec un rendement de 80% sur les deux étapes, désacétylation anomérique et activation (Schéma 6). 2. Couplage du donneur fonctionnalisé 2 avec différents accepteurs Un alcool modèle : l'alcool allylique

Après avoir obtenu ce premier donneur 2, l'objectif a été de comparer ses propriétés en tant que donneur avec le précurseur 1. L'alcool allylique a été sélectionné comme accepteur, conduisant à un produit de glycosylation potentiellement utile dans la synthèse des oligosaccharides de S. flexneri 3a.

L'alcool allylique a donc été couplé, dans des conditions classiques tel que le TMSOTf (0,2 éq.) dans le dichlorométhane en présence de tamis moléculaire. Avec le donneur 2, la formation du glycoside d'allyle β 17, isolé avec un rendement de 82% est observée (Schéma 7). En comparaison, le couplage avec le triacétate donneur 1, permet aussi d'obtenir l'analogue 18 avec un rendement tout à fait comparable de 83%. Ce résultat suggère que l'isopropylidène du donneur 2 est stable dans les conditions de couplage ^t que la stéréosélectivité observée est tout aussi bonne pour le donneur 2 que pour le donneur 1.

Pour confirmer que le donneur 2 est utilisable pour une élongation future en position 3D après couplage, le glycoside d'allyle 17 a été transformé en accepteur. Deux voies ont été envisagées, la première est une saponification simultanée de la fonction acétyle en position 3 et de la fonction trichloroacétyle en position 2, suivi d'une acétylation sélective in situ de la fonction aminé générée pour donner l'accepteur iV-acétylé 19 avec un rendement de 71%. ⁴ L'autre stratégie est la désacétylation sélective de l'acétyle en position 3. Dans ce cas, la fonction trichloroacétamide qui masque la fonction acétamide est conservée. En effet, il a souvent été montré qu'une fonction acétamide de glucosamine pouvait influencer les rendements de couplage. ³⁸ Après optimisation des conditions de désacétylation, le carbonate de potassium, qui peut être éliminé par simple filtration est retenu dans la mesure où il conduit au meilleur rendement en accepteur 20 (94%). L'accepteur 20 peut également être

obtenu via le donneur 1. Il est intéressant de constater que les rendements sont comparables pour les deux voies, voir légèrement meilleurs si 1 est impliqué. En résumé, l'accepteur 20 est obtenu avec un rendement de 49% en 7 étapes via 1 alors qu'avec le donneur 2 et le même nombre d'étape, il est obtenu avec un rendement de 43% (Schéma 7).

20, 7 étapes via 2, 43%

18 7 étapes via 1, 49%

Schéma 7 : Synthèse de deux nouveaux accepteurs 19 et 20 3. Prise en compte de la présence potentielle d'un acétyle : Synthèse du donneur

3

Cependant, la présence d'une fonction acétyle isolée peut s'avér-er limitante dans le cas d'un allongement ultérieur de séquences comprenant le résidu C. Prenant en compte cette limitation, il s'agit de concevoir un donneur équivalent à 2 mais doté d'un groupement orthogonal à l' acétyle en position 3. Comme vu dans la partie rétrosynthèse, notre choix s'est porté sur le groupement lévulinoyle. La synthèse de l'analogue 3-(9-lévulinoyle de 2 a donc été envisagée.

H ₂ Q 3, 2 étapes, 84%

Schéma 8 : Synthèse du donneur 3

L'intermédiaire clé est le glycoside d'allyle 24, aisément obtenu à partir de l'accepteur 20 par action d'acide lévulinique activé par la DCC en présence de DMAP (98%). La conversion de ce dernier en donneur .3 implique l'hémiacétal 25 issu d'une étape de

déallylation anomérique dans des conditions classiques ³⁹ ' ⁴⁰ (Schéma 8). Mais, en absence de base, la perte de Pisopropylidène a été observée dû à la formation in situ de l'acide iodhydrique HI. ³⁹ La perte de ce groupement peut-être évitée si une base faible, par exemple l'hydrogénocarbonate de sodium, ⁴¹ est ajoutée. De plus, l'hémiacétal 25 s'est avéré instable car, lors de la purification par chromatographie sur gel de silice, le céto-aldéhyde 16 a de nouveau été isolé. Dans ces conditions, l'hémiacétal n'a pas pu être isolé sans 10% de contamination. En revanche, si les deux étapes, déallylation et activation, sont enchaînées sans purification intermédiaire, alors le donneur 3 est isolé avec un rendement de 84% sur deux étapes.

4. Conclusion

A ce stade, trois donneurs, précurseurs du résidu D, sont disponibles. Une synthèse efficace a été mise au point pour chacun d'entre eux, incluant une amélioration de 25% de la synthèse de 1 par rapport aux données de la littérature. ¹ Effectivement, le donneur fonctionnalisé 2, est obtenu avec un rendement de 56% en 5 étapes et le donneur 3 avec un rendement de l'ordre de 40% en 10 étapes (Schéma 9).

De plus, la synthèse des donneurs 1 et 2 n'implique que deux étapes de purification sur gel de silice. Ces précurseurs peuvent ainsi être préparés à grande échelle (de l'ordre de la dizaine de grammes).

3

40% via 1 36% via 2

Schéma 9 : Bilan de la synthèse des donneurs 1, 2 et S

Conditions expérimentales de synthèse des donneurs 1, 2 et 3 :

> 2-Désoxy-2-[p-méthoxybenzylidène(amino)]-β-D-glucopyrano se 5 :

> l,3,4,6-Tétra-O-acétyl-2-désoxy-2-|p-méthoxybenzylidène (amino)]-β-D- glucopyranose ¹⁰ 6 :

> Hydrochlorure de l,3 ₅ 4,6-tétra-0-acétyl-2-amino-2-désoxy-β-D-glucopyranose ¹⁰ 7

Chemical Formula C14H19NO5 Chemical Formula C22H27NO10 Chemical Formula C14H22CINO9

Exact Mass- 297, 1212 Exact Mass 465,1635 Exact Mass 383,0983

MoIecular Weighf 297,3038 Molecular Weight.465,4505 Molecular Weight 383,7788

A une solution de chlorhydrate de D-glucosamine 4 (25,0 g, 116 mmol) dans de la soude IM (120 mL) fraîchement préparée sous agitation vive, est additionné duj^αra-anisaldéhyde (17,0 mL, 140 mmol). Après quelques instants, la cristallisation débute. Le milieu réactionnel est placé à 4°C et après 2 h, le précipité est filtré et lavé avec de l'eau froide puis avec un mélange EtOH/H ₂ O (1/1) pour conduire à l'imine 5 sous forme d'un solide blanc (24,9 g,

%).

RMN ¹ H (DMSO-dό), £8.11 (s, IH, CH), 7.68 (d, 2H, CH _Ph ), 6.97 (d, 2H, CH _Ph ), 4.69 (d,

IH, J _1>2 = 7.8 Hz, H-I), 3.78 (s, 3H, OMe), 3.71 (m, IH, H-6a), 3.50 (pt, IH, H-3), 3.43 (dd,

IH, J ₅ , _6a = 9.0 Hz, H6b), 3.25 (m, IH, H-5), 3.15 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.5 Hz, H-4), 2.81 (dd, IH, J _2;3

= 9.1 Hz, H-2).

RMN ¹³ C (DMSO-d6), £ 162.7 (CH), 161.9 (C _Ph ), 130.4 (2C, CH _Ph ), 129.7 (C _Ph ), 114.8 (2C,

CH _Ph ), 96.2 (C-1, ¹ Jc _H = 153.9 Hz), 78.7 (C-2), 77.5 (C-5), 75.2 <C-3), 71.0 (C-4), 61.9 (C-6),

56.5 (OMe).

Dans un mélange pyridine/anhydride acétique (1/1, 200 mL), placé sous agitation dans un bain de glace, est ajouté par fractions l'imine 5 (24,9 g, 84 mmol). Le milieu réactionnel est agité durant 1 h puis à TA toute une nuit. La solution jaune obtenue est transférée dans 500 mL d'eau glacée. Le précipité blanc résultant est filtré, lavé avec de l'eau froide puis séché.

Le solide blanc obtenu est identifié comme étant le tétra-0-acétyle 6 (34,3 g, 88%).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £8.17 (s, IH, CH), 7.68 (d, 2H, CH _Ph ), 6.93 (d, 2H, CH _Ph ), 5.96 (d, IH,

J _1;2 ≈ 7.8 Hz, H-I), 5.44 (pt, IH, J _2;3 = 9.6 Hz, H-3), 5.15 (pt, IH, J _3,4 = 9.8 Hz ₅ H-4), 4.38

(dd, IH, J5, _6a = 4.6 Hz, J _6a)6b = 12.4 Hz, H-6a), 4.13 (dd, IH, J _5>6b = 2.1 Hz, H6b), 4.00 (m,

IH, H-5), 3.85 (s, 3H, OMe), 3.46 (dd, IH, H-2), 2.13, 2.06, 2.05, 1.89 (4s, 12H, H _Ac ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £171.0, 170.2, 169.8, 169.1 (4C, C _Ac ), 164.6 (CH), 162.7 (C _Ph ), 130.6

(2C, CH _Ph ), 128.7 (Cp _h ), 114.7 (2C, CH _Ph ), 93.5 (C-I, ¹ J _0H = 167.0 Hz), 73.3 (C-3), 73.1 (C-

2), 73.0 (C-5), 68.4 (C-4), 62.2 (C-6), 55.9 (OMe), 21.2, 21.1, 21.0, 20.9 (4C, C _Ac ).

Le tétra-O-acétyle 6 (34,3 g, 74,0 mmol) est dissous dans 300 mL d'acétone chaud puis de l'HCl (5M, 15,0 mL) est ajouté goutte à goutte au milieu réactionnel. Immédiatement, un

précipité se forme et le ballon est plongé dans un bain glacé. Après addition de 300 mL d'éther diéthylique et 2 h d'agitation, le ballon est placé en chambre froide toute une nuit. Le précipité obtenu est filtré, lavé avec de l'éther diéthylique et séché à la pompe à palette pour donner le chlorhydrate de glucosamine 7 sous forme d'un solide blanc (19,0 g, 43%). RMN ¹ H (D ₂ O), J5.90 (d, IH, Ji _,2 = 8.8 Hz, H-I), 5.43 (pt, IH, J _2,3 = 9.1 Hz, H-3), 5.06 (pt, IH, J _3;4 = 9.6 Hz, H-4), 4.27 (dd, IH, J _5,6a = 3.8 Hz, J _6a,6b = 12.6 Hz, H-6a), 4.16-4.11 (m, 2H, H-5, H-6b), 3.70 (dd, IH ₃ H-2), 2.13, 2.06, 1.99 (3s, 12H, H _Ac ).

RMN ¹³ C (D ₂ O), «5173.9, 173.4, 173.0, 171.5 (4C, C _Ac ), 90.7 (C-1, ¹ JcH= 161.0 Hz), 72.5 (C- 5), 71.2 (C-3), 68.4 (C-4), 61.8 (C-6), 52.7 (C-2), 20.6, 20.5, 20.4, 20.3 (4C, C _Ac ).

> 2-Désoxy-2-trichloroacétamido-α/β-D-glucopyranose ¹ 9 :

> l,3,4,6-Tétra-O-acétyl-2-désoxy-2-trichloroacétamido-α/ β-D-glucopyranose ¹ 8 :

Chemical Formula Chemical Formula C-Jg^oCl ₃ NO-Io

Exact Mass 322,9730 Exact Mass 491,0153

MolecularWeight 324,5430 Molecular Weight 492,6897

Du chlorhydrate de D-glucosamine 4 commercial (5,0 g, 23,2 mmol) est dissous dans du

MeOH (100 mL) et la solution est agitée pendant 2 h à TA. Ensuite, le ballon est placé à 0 ⁰ C et agité pendant 10 min puis du NaOMe 25% (16,1 mL, 58,1 mmol, 2,5 éq.) est additionné lentement au milieu réactionnel. Après 15 min d'agitation, un précipité est observé puis de l'anhydride trichloroacétique (6,4 mL, 34,9 mmol, 1,5 éq.) est ajouté goutte à goutte au milieu réactionnel maintenu dans un bain de glace. Après 1 h 30 sous agitation, le suivi par CCM

(iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5) montre la disparition de 4 (Rf = 0,1) et l'apparition d'un produit moins polaire (Rf= 0,6). Le milieu réactionnel est alors neutralisé par de la résine échangeuse d'ion DOWEX (H ⁺ ), puis filtré sur fritte et concentré à l'évaporateur rotatif. Le résidu est dissous dans un minimum d'H ₂ O puis lyophilisé. La mousse jaune obtenue, qui est un mélange d'anomère 9 _α/ p (6/4), est engagée dans l'étape suivante après contrôle RMN pour vérifier l'absence de 4.

Rf= 0,6 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5).

RMN ¹ H (DMSO-d6), δ: α : 8.13 (bs, IH, NH), 5.06 (d, IH, J _1;2 = 3.5 Hz, H-I), 4.99 (bs, IH,

OH-4), 4.90 (bs, IH, OH-2), 4.82 (bs, IH, OH-3), 4.43 (bs, IH, OH-6), 3.73 (m, IH, H-3),

3.64 (m, IH, H-6a), 3.61 (m, IH, H-5), 3.56 (m, IH, H-2), 3.53 (m, IH, H-6b), 3.18 (pt, IH,

J _3;4 = 8.6 Hz, H-4).

RMN ¹³ C (DMSO-d6), δ: a : 162.3 (CN _TCA ), 93.5 (CCl ₃ ), 90.5 (C-I, ¹ J _0H = 167.4 Hz), 73.1

(C-5), 71.6 (C-4), 70.7 (C-3), 61.8 (C-6), 57.8 (C-2).

•OC-

RMN ¹ H (DMSO-d6) ₅ δ: β : 8.59 (d, IH, J _NH,2 = 8.5 Hz, NH), 4.95 (bs, IH, OH-4), 4.65 (d,

IH, Ji _,2 = 7.6 Hz, H-I), 4.50 (bs, IH, OH-6), 3.68 (m, IH, H-6a), 3.50 (m, IH, H-5), 3.46 (m,

IH, H-6b), 3.41 (m, IH, H-2), 3.18 (m, 2H, H-3, H-4).

RMN ¹³ C (DMSO-d6), δ: β : 162.1 (C _NTC A), 95.4 (C-I, ¹ JcH = 157.0 Hz), 94.3 (CCl ₃ ), 77.7

(C-4), 74.2 (C-5), 72.0 (C-3), 62.0 (C-6), 59.9 (C-2).

Voie 1 : Le brut réactionnel 9 obtenu est dissous dans un mélange pyridine/anhydride acétique (1/1, 50 mL) à 0°C et le milieu réactionnel est laissé sous agitation pendant une nuit à TA. Après avoir vérifié par un suivi CCM (DCM/EtOAc, 9/1) l'apparition de deux nouveaux composés (Rf= 0,45 et 0,2), le milieu ractionnel est concentré à l'évaporateur rotatif puis coévaporé au Toi (3 x 100 mL) et au DCM (3 x 100 mL). Le résidu est séché à la pompe à palettes pour conduire au dérivé attendu sous forme d'un solide correspondant à un mélange d'anomères α/β. Le solide obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice

(DCM/EtOAc, 97/3→9/l) pour conduire, par ordre d'élution, au monosaccharide 8 _α désiré

(6,6 g, 57%) puis au stéréoisomère 8 _β (3,5 g, 31%). Les deux anomères 8 _α et 8 _β (65/35) sont isolés sous forme de solide blanc (10,1 g, 88%).

Voie 2 : A une solution de DCM (40 mL) et de pyridine (5,2 mL, 65,3 mmol, 5 éq.) est ajouté le chlorhydrate de glucosamine 7 par fractions (5 g, 13,1 mmol). Le milieu réactionnel est placé dans un bain glacé puis le chlorure de trichoroacétyle (4,1 mL, 36,0 mmol, 2,8 éq.) est ajouté au goutte à goutte. Après 15 min d'agitation à O ⁰ C, le milieu réactionnel est agité pendant 30 min à TA. La réaction est suivie par CCM (DCM/EtOAc, 9/1), l'apparition d'un produit moins polaire (Rf= 0,2) est alors observé. Le milieu réactionnel est repris à l'H ₂ O (20 mL) et la phase aqueuse est extraite au DCM (3 x 30 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaHCO ₃ 5% (3 x 50 mL), avec de l'H ₂ O (3 x 50 mL) puis séchées sur Na ₂ SO ₄ et concentrées à l'évaporateur rotatif pour donner un solide blanc (6,3 g, 98%) correspondant à l'anomère 8 _β .

8 _α : Rf = 0,45 (DCM/EtOAc, 9/1).

RMN ¹ R (CDCl ₃ ), £6.83 (d, IH, J _NH;2 = 8.3 Hz, NH _α ), 6.29 (d, IH, J _1;2 ≈ 3.7 Hz, H-I), 5.34

<pt, IH, J _2>3 = 9.6 Hz, H-3), 5.23 (pt, IH, J _3;4 = 9.8 Hz, H-4), 4.35-4.25 (m, 2H, H-2, H-6a),

4.07-4.01 (m, 2H, H-5, H-6b), 2.18, 2.08, 2.05 (3s, 12H, H _Ac ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ 172.0, 171.0, 169.4, 168.7 (4C, C _Ac ), 162.3 (C _NTC A), 92.1 (CCl ₃ ), ^" 89.9

(C-1, ¹ Jc _H = 179.2 Hz), 70.4 (C-5), 70.2 (C-3), 67.4 (C-4), 61.7 (C-6), 53.7 (C-2), 21.1, 21.0,

20.9, 20.8 (4C, C _Ac ).

8 _β : Rf= 0,2 (DCM/EtOAc, 9/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), 57.19 (d, IH ₅ J _NH , ₂ = 9.4 Hz, NH), 5.83 (d, IH, J _1;2 = 8.7 Hz, H-I), 5.37 (pt, IH, J _2,3 = 9.4 Hz, H-3), 5.18 (pt, IH, J _3>4 = 9.8 Hz, H-4), 4.32 (m, 2H, H-2, H-6a), 4.18 <m, IH, J ₅ , _6b = 2.3 Hz, J _6a , _6b = 12.4 Hz, H-6b), 3.89 (ddd, IH, J _4;5 = 10.0 Hz, J _5j6a = 4.7 Hz, H- 5), 2.13, 2.06 (2s, 12H ₃ H _Ac ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), 5171.6, 171.0, 169.7, 169.6, (4C, C _Ac ), 162.7 (C _NTC A), 92.5 (CCl ₃ ), 92.4 (C-I, ¹ Jc _H = 159.6 Hz), 73.5 (C-5), 72.2 (C-3), 68.1 (C-4), 62.0 (C-6), 55.0 (C-2), 21.1, 21.0,

> S^jδ-Tri-O-acétyl^-désoxy^-trichloroacétamido-α/β-D-gl ucopyranose ¹ 10 :

> 4,6-Tri-0-acétyl-2-désoxy-2-trichloroacétamido-α/β-D-gl ucopyranose 11 :

Chemical Formula: C-^H^gCIsNOg -Chemical Formula: C^H-ieC^NOs

Exact Mass: 449,0047 Exact Mass: 406,9941

MolecularWeight: 450,6530 MolecularWeight: 408,6163

A une solution d'éthylènediamine (1,8 mL, 25 mmol, 1,2 éq.) dans du THF (390 mL) est additionné lentement de l'acide acétique (1,7 mL, 29,1 mmol, 1,4 éq.). Il en résulte immédiatement la formation d'un précipité. Ensuite le tétra-O-acétyle 8 (10,2 g, 20,8 mmol) est additionné au milieu réactionnel qui est agité à TA et la réaction est suivie par CCM (DCM/MeOH, 95/5 et Chex/EtOAc, 1/1). Après 24 h, la transformation de 8 (Rf= 0,7 et 0,3, respectivement) en un composé plus polaire est totale (Rf= 0,4 et 0,3, respectivement). Le milieu réactionnel est repris à l'eau froide (100 mL) et à l'acétate d'éthyle (100 mL) et la phase aqueuse est extraite à l'acétate d'éthyle (3 x 100 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaHCO ₃ 5% (3 x 50 mL), avec une solution de NaCl _s at (3 x 50 mL), avec de l'H ₂ O (3 x 50 mL) puis séchées sur Na ₂ SO ₄ et concentrées à l'évaporateur rotatif. Le solide blanc obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 8/2→l/l) pour conduire par ordre d'élution à Phémiacétal 10 sous forme d'un solide blanc (8,3 g, 89%) puis au diiol non voulu 11 {420 mg, 5%). 10 : Rf= 0,3 (Chex/EtOAc, 1/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), 57.03 (d, IH, J _NH,2 = 8.9 Hz, NH), 5.43 (pt, IH, J ₂₎₃ = 9.6 Hz, H-3), 5.43 (pt, IH, J _1>2 = 3.6 Hz, H-I), 5.19 (pt, IH, J _3;4 = 9.6 Hz, H-4), 4.33-4.24 (m, 3H, H-2, H-5, H- 6a), 4.19 (m, IH, H-6b), 3.47 (d, IH, J _0H ,i = 2.6 Hz, OH), 2.13, 2.09, 2.05 (3s, 9H, H _Ac ). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), 5170.3, 169.4, 168.5 (3C, C _Ac ), 161.1 (C _NTCA ), 91.0 (CCl ₃ ), 89.9 (C-I, ¹ Jc _H = 172.6 Hz), 69.5 (C-3), 67.2 (C-4), 67.0 (C-5), 61.0 (C-6), 53.2 (C-2), 19.7, 19.6, 19.5 (3C, C _Ac ).

11 : Rf= 0,2 (Chex/EtOAc, 1/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), 57.19 (d, IH, J _NHjH - ₂ ⁼ 8.6 Hz, NH), 5.34 (pt, IH, Ji _>2 ≈ 3.3 Hz, H-I) ₃ 5.19 (pt, IH, J _3;4 = 9.5 Hz, H-4), 4.25-4.03 (m, 4H, H-6a, H-5, H-2, H-6b), 3.97 (pt, IH, J _2j3 = 9.5 Hz, H-3), 2.10, 2.08 (2s, 6H, H _Ac ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 171.7, 171.4 (2C, C _Ac ), 1-63.3 (CNT _C A), 92.6 (CCl ₃ ), 91.3 (C-I, ¹ JcH = 171.9 Hz), 71.5 (C-4), 70.9 (C-3), 68.4 (C-5), 62.7 (C-6), 56.4 (C-2), 21.3, 21.2 (2C ₅ C _Ac ) HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₁₂ H ₁₆ NO ₈ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 429.9839 m/z mesurée : 429.9864

> Trichloracétimidate de 3,4,6-tri-0-acétyI-2-désoxy-2-trichloroacétamido-α/β-D- glucopyranose ¹ 1 :

> 2-Trichlorométhyl-(3,4,6-tri-0-acétyl-l,2-didésoxy-α-D-g lucopyrano)-[2,l-rf]-2- oxazoline ¹ l' :

Chemi Formula: C-^HIgCl ₃ NOe 430,9941

Molecular Weight: 595,0401 Molecular Weight: 432,6377

Voie 1 : L'hémiacétal 10 (4,0 g, 8,9 mmol) est solubilisé dans du DCE (30 mL) et agité sous argon à -5°C puis de la DBU (372 μL, 2,5 mmol, 0,28 éq.) et du trichloroacétonitrile (4,4 mL, 44,4 mmol, 5 éq.) sont ajoutés. Le milieu réactionnel est agité à cette température pendant 15 min puis il est déposé, sans aucun traitement, sur une colonne de gel de silice (flash chromatographie, Chex/EtOAc+5% NEt ₃ , 7/3→l/l) pour obtenir le trichloroacétimidate 1 sous forme d'un solide blanc (4,6 g, 87%).

Voie 2 : L'hémiacétal 10 (1,5 g, 3,3 mmol) est solubilisé dans du DCM (15 mL). Du trichloroacétonitrile (1,7 mL, 16,7 mmol, 5 éq.) est additionné au milieu réactionnel puis du Cs ₂ CO ₃ (217 mg, 670 μmol, 0,2 éq.) est ajouté par petites fractions. Le milieu réactionnel est agité à TA et la réaction est suivie par CCM (Chex/EtOAc, 1/1). Après lh30 d'agitation, la transformation de 10 en un produit moins polaire (Rf= 0,8) est totale. Le résidu obtenu est Filtré et lavé avec du DCM. Le filtrat est alors co-évaporé au Toi à l'évaporateur rotatif. Le trichloroacétimidate 1 sous forme d'un solide jaune obtenu (1,9 g, 98%) -est engagé directement dans l'étape suivante après contrôle par RMN ¹ H. 1 : Rf = 0,8 (Chex/EtOAc, 1/1)

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ: α : 8.85 (s, IH, NH), 7.00 (d, IH, J _NH;2 = 8.5 Hz, NH), 6.5 (d, IH, J _1;2 = 3.6 Hz, H-I), 5.44 (pt, IH, J _2,3 = 9.7 Hz, H-3), 5.3 (pt, IH, J _3,4 = 10.0 Hz, H-4), 4.45 (ddd,

IH, H-2), 4.28 (dd, IH, J _5,6a = 4.2 Hz, J _6a>6b = 12.7 Hz, H-6a), 4.18-4.12 (m, 2H, H-5, H-6b),

2.11, 2.08, 2.06 (3s, 9H ₅ H _Ac ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ: α : 171.8, 170.9, 169.5 (3C, C _Ac ), 162.4 (C=NH), 160.3 (CNTCA), 94.0

(C-I, ¹ Jc _H = 181.4Hz), 92.1 (CCl ₃ ), 90.8 (CCl ₃ ), 70.8 (C-5), 70.5 (C-3), 68.2 (C-4), 61.6 (C-

6), 54.2 (C-2), 21.1, 21.0, 20.9 (3C, C _Ac )

L'oxazoline 1% résultant de la dégradation de 1 durant la purification, est isolé comme le second produit à éluer lors de chromatographie sur gel de silice. l' : Rf= 0,65 (Chex/EtOAc, 1/1)

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ : oxazoline : 6.35 (d, IH, J ₁₎₂ = 7.4 Hz, H-I), 5.41 (pt, IH, J ₂ , ₃ = 2.3 Hz,

H-3), 4.96 (m, IH, J _4>5 = 8.2 Hz, J ₂₎₄ = 1.6 Hz, H-4), 4.49 (m, IH, H-2), 4.29 (dd, IH, J ₅ , _6a =

3.0 Hz, J _6a,6b = 12.1 Hz, H-6a), 4.20 (dd, IH, J ₅ , _6b = 6.0 Hz, H-6b), 3.80 (m, IH, H-5), 2.15,

2.13, 2.11 (3s, 9H ₅ H _Ac ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ: oxazoline : 170.8, 169.8, 169.3 (3C, C _Ac ), 163.4 (N=C), 103.5 (C-I ₅

¹ J _CH = 183.6 Hz) ₅ 86.5 (CCl ₃ ), 69.4 (C-5), 69.1 (C-3), 68.0 (C-4), 65.1 (C-2), 63.8 (C-6), 21.2,

21.1, 21.0 <3C, C _Ac ).

> 2-Désoxy-4,6-0-isopropylidène-2-trichloroacétamido-α/β- D-glucopyranose 12 :

> l,3-Di-0-acétyl-2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-2-trichloro acétamido-α/p-D- glucopyranose 14 :

Chemical Formula: C ^ 1 H16CI3NO6

Exact Mass: 363,0043 Exact Mass: 447,0254

Molecular Weight: 364,6068 Moleciilar Weight: 448,6802

Du chlorhydrate de D-glucosamine commercial 4 (11,6 g, 54,0 mmol) est protégé en position 2 _D par un groupement trichloroacétamide comme décrit précédemment. Le brut obtenu 9 (54,0 mmol) est dissous dans du DMF (185 mL) contenant du 2- méthoxypropène (10,3 mL, 108,0 mmol, 2 éq.). Du CSA (24,0 g, 108,0 mmol, 2 éq.) est ajouté par fractions au milieu réactionnel jusqu'à obtenir un pH de 2. Le milieu réactionnel est agité à TA et la réaction est suivie par CCM (DCM/MeOH, 8/2 et Chex/EtOAc, 1/1). Après 2h30 d'agitation, le MeOH formé est évaporé à Pévaporateur rotatif -et du 2-méthoxypropène (2 mL, 21,6 mmol, 0,4 éq.) est de nouveau ajouté. Après 1 h d'agitation, la transformation de 9 en un produit moins polaire (Rf= 0,3 dans Chex/EtOAc, 1/1) est quasi-totale. Le milieu réactionnel est neutralisé avec de la triéthylamine (0,2 mL) puis concentré à l'évaporateur rotatif pour conduire à un solide jaune, correspondant à un mélange d'anomères 12 _α/β (9/1).

^

Rf= 0,3 (Chex/EtOAc, 1/1).

RMN ¹ H (DMSO-d6), £ : a : 8.37 (d, IH, J _NH,2 = 7.8 Hz, NH), 6.88 (d, IH, J _];2 = 3.9 Hz, H- 1), 5.0 (m, 2H, OH), 3.77 (m, IH, H-3), 3.71-3.65 (m, 4H, H-2, H-5, H-6a, H-6b), 3.50 (m, IH, H-4), 1.44 (s, 3H, H _iPr ), 1,25 (s, 3H, H _iPr ).

RMN ¹³ C (DMSO-d6), δ : α : 162.4 (C _NTCA ), 99.9 (C _iPr ), 93.3 (CCl ₃ ), 91.2 (C-I, ¹ JcH = 168.2 Hz), 75.0 (C-4), 67.5 (C-3), 63.9 (C-5), 62.3 (C-6), 58.0 (C-2), 29.8 (C _iPr ), 21.6 (C _iPr ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Naf C _{1 !} H ₁₆ NO ₆ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 385.9941 m/z mesurée : 385.9962

Le brut réactionnel 12 obtenu est dissous dans un mélange pyridine/anhydride acétique (1/1, 100 mL) à 0 ⁰ C et le milieu réactionnel est laissé sous agitation pendant une nuit à TA. Après avoir vérifié par un suivi par CCM (Chex/EtOAc, 1/1) l'apparition de deux nouveaux composés (Rf= 0,7 et 0,75), le milieu réactionnel est concentré à l'évaporateur rotatif puis coévaporé au Toi (3 x 200 mL) et au DCM (3 x 200 mL). Le résidu est séché à la pompe à palettes pour conduire au dérivé attendu sous forme d'un solide. Le solide obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 8/2→75/25) pour conduire au mélange d'anomères 14 _< χ _/β dans les proportions 55/45 sous forme d'un solide blanc (17,0 g, 70%) 14 _α : Rf= 0,7 (Chex/EtOAc, 1/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.01 (d, IH, J _NH,2 = 8.4 Hz, NH), 6.23 (d, IH ₅ J _1>2 = 3.9 Hz, H-I), 5.30 (pt, IH, J _2;3 ≈ 9.5 Hz, H-3), 4.28 (ddd, IH, H-2), 3.93-3.83 (m, 2H, H-4, H-6a), 3.79-3.74 (m, 2H, H-5, H-6b), 2.16, 2.09 (2s, 6H, H _Ac ), 1-51 (s, 3H, H _iPr ), 1.39 (s, 3H, H _iPr ). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £172.2, 169.4 (2C, C _Ac ),162.4 (C _NTCA ), 100.4 (C _iPr ), 92.2 (CCl ₃ ), 90.5 (C- 1, ¹ Jc _H ≈ 178.6 Hz), 71.8 (C-4), 70.0 (C-3), 66.4 (C-5), 62.2 (C-6), 53.8 (C-2), 29.2 (C _iPr ), 21.2, 21.1 (2C, C _AC ), 19.4 (ça*). 14 _β Rf= 0,75 (Chex/EtOAc, 1/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.03 (d, IH, J _NH , ₂ = 9.7 Hz, NH), 5.78 (d, IH, J _li2 = 8.7 Hz, H-I), 5.24 (pt, IH, J _2,3 = 9.6 Hz, H-3), 4.25 (m, IH, H-2), 4.01 (m, IH, H-6a), 3.88-3.83 (m, 2H, H-4, H- 6b), 3.55 (m, IH, H-5), 2.11 (s, 3H, H _Ao ), 2.09 (s, 3H, H _Ac ), 1.52 (s, 3H, H _iPr ), 1.45 (s, 3H,

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 171.8, 169.5 (2C, C _Ac ), 162.8 (C _NTCA ), 100.5 (C _iPr ), 93.2 (C-I), 92.2 (CCl ₃ ), 71.6 (C-4), 71.3 C-3), 69.1 (C-5), 62.1 (C-6), 55.9 (C-2), 30.1 (C _iPr ), 21.2, 21.1 (2C,

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₁₅ H ₂₀ NO ₈ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 470.0152 m/z mesurée : 470.0123

O /

> S-O-Acétyl^-désoxy^jό-O-isopropylidène-l-trichloroacéta mido-α/β-D- glucopyranose 15 :

> 2,5-Hydroxy-4,6-O-isopropylidène-hex-2-enal 16 :

Chemical Formula: C13H18CI3NO7 Chemical Formula:

Exact Mass: 405,0149 Exact Mass: 202,0841

Molecular Weight: 406,6435 Molecular Weight: 202,2045

A une solution d'éthylènediamine (177 μL, 2,4 mmol, 1,2 éq.) dans du THF (40 mL) est additionné lentement de l'acide acétique (162 μL, 2,8 mmol, 1,4 éq.). Il en résulte immédiatement la formation d'un précipité. Ensuite le di-O-acétyle 14 (900 mg, 2,0 mmol) est additionné au milieu réactionnel qui est agité à TA et la réaction est suivie par CCM (DCM/MeOH, 95/5 et Chex/EtOAc, 1/1). Après 20 h, la transformation de 14 (Rf= 0,7 et 0,75 dans Chex/EtOAc, 1/1) en un composé plus polaire est totale (Rf= 0,6 dans DCM/MeOH, 95/5 et 0,5 dans Chex/EtOAc, 1/1). Le milieu réactionnel est repris à l'eau froide (25 mL) et à l'acétate d'éthyle (25 mL) et la phase aqueuse est extraite à l'acétate d'éthyle (3 x 20 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaHCO ₃ 5% (3 x 15 mL), avec une solution de NaCl _sat (3 x 15 mL), avec de l'H ₂ O (3 x 15 mL) puis séchées sur Na ₂ SO ₄ et concentrées à l'évaporateur rotatif. Le solide obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 8/2→l/l) pour conduire au mélange d'anomères 15 _α/β dans les proportions 95/5 sous forme d'un solide blanc (710 mg, 87%) suivi du céto-aldéhyde 16 (20 mg, 5%). 15 _α : Rf= 0,5 (Chex/EtOAc, 1/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), J7.l l (d, IH, J _NH , ₂ = 8.9 Hz, NH), 5.37-5.34 (m, 2H, H-I, H-3), 4.20 (ddd, IH, J ₁₎₂ = 3.7 Hz, J ₂ , ₃ = 9.5 Hz, J _2,0H = 1.8 Hz, H-2), 4.02 (ddd, IH, H-5), 3.91 (dd, IH, J ₅ , _6a = 5.2 Hz, J _6a;6b = 10.6 Hz, H-6a), 3.86-3.77 (m, 2H, J _3,4 = 10.6 Hz, H-4, H-6b), 2.09 (s, 3H, HAC), 1-53 (s, 3H, HiPr), 1.45 (s, 3H, H _iPr ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), J 171.8 <C _Ac ), 162.5 (CNTC _A ), 100.4 (C _iPr ), 92.4 (CCl ₃ ), 92.1 (C-I, ¹ JcH = 173.5 Hz), 72.0 (C-4), 70.2 (C-3), 64.3 (C-5), 62.6 (C-6), 55.3 (C-2), 29.3 (C _iPr ), 21.3 (C _Ac ), 19.4 (C _iPr ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Naf C ₁₃ H ₁₈ NO ₇ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 428.0047 m/z mesurée : 428.0048 16 : Rf= 0,25 (Chex/EtOAc, 6/4).

^

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £9.43 (s, IH, H-I), 6.45 (d, IH, J _3,4 ≈ 5.7 Hz, H-3), 4.74 (m, IH, H-4), 3.93 (m, IH, H-6a), 3.77-3.69 (m, 2H, H-5, H-6b), 1.54 (s, 3H ₅ H _iPr ), 1.43 (s, 3H, H _iPr ); RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 187.0 (CHO), 137.3 (C-3), 135.8 (C-2), 99.8 (C _iPr ), 72.0 (C-4), <57.2 (C- 5), 65.1 (C-6), 29.0 (C _iPr ), 19.5 (C _iPr );

> Trichloracétimidate de 3-0-acétyI-2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-2- trichloroacétamido-α/β-D-glucopyranose 2 :

> 2-Trichlorométhyl-(3-0-acétyl-l,2-didésoxy-4,6-0-isopropy lidène-α-D- glucopyrano)-[2,l-fif]-2-oxazoline 2':

Chemical Formula: C15H1QCI6N2O7 Chemical Formula: C-isH-iβClaNOe

Exact Mass: 547,9245 Exact Mass: 387,0043

Molecular Weight: 551 ,0306 Molecular Weight: 388,6282

Voie 1 : L'hémiacétal 15 (3,0 g, 7,4 mmol) est dissous dans du DCE (12 mL) et agité sous argon à -5°C, puis de la DBU (310 μL, 2,1 mmol, 0,28 éq.) et du trichloroacétonitrile (3,7 mL, 36,9 mmol, 5 éq.) sont ajoutés. Le milieu réactionnel est agité à cette température pendant 15 min puis il est déposé, sans aucun traitement, sur une colonne de gel de silice (flash chromatographie, Chex/EtOAc+5% NEt ₃ , 7/3) pour obtenir le trichloroacétimidate 2 sous forme d'un solide blanc (3,5 g, 87%).

Voie 2 : A une solution d'éthylènediamine (1,0 mL, 14,5 mmol, 1,4 éq.) dans du THF (180 mL) est additionné lentement de l'acide acétique (1,0 mL, 17,6 mmol, 1,7 éq.). Il en résulte immédiatement la formation d'un précipité. Ensuite le di-O-acétyle 14 (4,6 g, 10,4 mmol) est additionné au milieu réactionnel qui est agité à TA et la réaction -est suivie par CCM (DCM/MeOH, 95/5 et Chex/EtOAc, 1/1). Après 20 h, la transformation de 14 (Rf= 0,7 et 0,75 dans Chex/EtOAc, 1/1) en un composé plus polaire est totale (Rf= 0,6 dans DCM/MeOH, 95/5 et 0,5 dans Chex/EtOAc, 1/1). Le milieu réactionnel est repris à l'acétate d'éthyle (150 mL) et est lavé à l'eau froide (2 x 25 mL) et la phase aqueuse est extraite à l'acétate d'éthyle (2 x 50 mL). Les phases organiques sont regroupées puis séchées sur Na ₂ SO ₄ et concentrées à l'évaporateur rotatif pour conduire au composé désiré sous forme d'un solide blanc (4,2 g).

Le brut précédent (4,2 g, 10,4 mmol) est solubilisé dans du DCE (15 mL) et agité sous argon à -5°C puis de la DBU (434 μL, 2,9 mmol, 0,28 éq.) et du trichloroacétonitrile (4,5 mL, 44,6 mmol, 4,3 éq.) sont ajoutés. Le milieu réactionnel est agité à cette température pendant 15

min puis il est déposé, sans aucun traitement, sur une colonne de gel de silice (flash chromatographie, Chex/EtOAc+5% NEt ₃ , 7/3) pour obtenir le trichloroacétimidate 2 sous forme d'un solide blanc (4,6 g, 80%).

2 : Rf = 0,5 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ: a : 8.78 (s, IH, NH), 7.10 (d, IH, J _NH,2 = 8.5 Hz, NH), 6.45 (d, IH, J _li2

≈ 3.7 Hz, H-I) ₃ 5.40 (pt, IH, J _2,3 ≈ 9.2 Hz, H-3), 4.39 (m, IH, H-2), 3.98-3.91 (m, 3H, H-4,

H-5, H-6a), 3.81 (m, IH, H-6b), 2.11 (s, 3H, H _Ac ), 1.54 (s, 3H, H _iPr ), 1.43 (s, 3H, H _iPr ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ: a : 171.9 (C _Ac ), 162.5 (C _NTCA ), 160.7 (C=NH), 100.5 (C _iPr ), 94.7 (C-

1, ¹ JcH = 180.1 Hz), 92.2 (CCl ₃ ), 91.0 (CCl ₃ ), 71.4 (C-4), 69.9 (C-3), 67.0 (C-5), 62.3 (C-6),

55.0 (C-2), 29.3 (C _iPr ), 21.2 (C _Ac ), 19.4 (C _iPr ).

L'oxazoline 2', résultant de la dégradation de 2 durant la purification, est isolé comme le second produit à éluer lors de chromatographie sur gel de silice.

2' : Rf= 0,4 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ: oxazoline : 7.18 (d, IH, J _NH,2 = 8.5 Hz, NH), 6.28 (d, IH, Ji, ₂ ≈ 7.53Hz,

H-I), 5.05 (m, IH, H-3), 4.34 (m, IH, H-2), 4.05 (m, IH, H-6a), 3.88 (m, IH, H-4), 3.76 (m,

IH, H-6b), 3.59 (m, IH, H-5), 2.11 (s, 3H, H _Ac ), 1.52 (s, 3H, H _iPr ), 1.43 (s, 3H, H _iPr ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), S: oxazoline : 170.0 (C _Ac ), 163.1 (N-C), 105.9 (C-I), 100.5 (C _iPr ), 92.2

(CCl ₃ ), 74.2 (C-3), 70.8 (C-4), 68.5 (C-2), 65.2 (C-5), 62.1 (C-6), 29.0 (C _iPr ), 21.4 (C _Ac ), 19.3

(C _iPr ).

> AUyI 3-0-acétyl-2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-2-trichloroacét amido-β-D- glucopyranoside 17 :

Chemical Formula: C-)gH22Cl3N07

Exact Mass: 445,0462 Molecular Weight: 446,7074

Du TMSOTf (360,0 μL, 2,0 mmol, 0,2 éq.) est additionné à une solution d'alcool allylique (1,4 mL, 20,1 mmol, 2 éq.) et de donneur 2 (5,5 g, 10,1 mmol, 1 éq.) dans du DCM (700 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (3,9 g), agitée sous argon à -78°C. Après 30 min sous agitation le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2) indique la disparition du donneur (Rf = 0,65) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,45). La réaction est stoppée par l'addition de triéthylamine (0,5 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice

(Tol/EtOAc, 9/l→75/25) pour obtenir le glycoside d'allyle 17 sous frome d'un solide blanc (3,7 g, 82%).

Rf= 0,45 (Tol/EtOAc, 1/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), 57.65 (d, IH, J _NHj2 = 9.6 Hz ₃ NH), 5.81 (m, IH, CH=), 5.38 (pt, IH, J ₂ , ₃ = 9.3 Hz, H-3), 5.25 (m, IH, J _tra n _s ⁼ 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.15 (m, IH, J ₀ I _s = 9.2 Hz ₅ =CH ₂ ), 4.62 (d, IH, Ji, ₂ = 8.3 Hz, H-I), 4.29 (m, IH, H _A n), 4.18 (m, IH, H-2), 4.10 (m, IH, H _A n), 3.99 (dd, IH, J _5>6a = 5.5 Hz, J _6a;6b = 10.8 Hz, H-6a), 4.17 (m, IH, H-6b), 3.81 (pt, IH, J _3>4 = 9.5 Hz, H- 4), 3.75 (ddd, IH, J ₄₎₅ = 9.9 Hz, H-5), 2.08 (s, 3H, H _Ac ), 1.51 (s, 3H, H _iPr ), 1.38 (s, 3H, H _iPr ). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), 5172.0 (C _A c), 162.7 (C _N T _CA ), 133.7 (CH=), 118.0 (=CH ₂ ), 100.9 (C-I, ¹ J _C H = 158.1 Hz), 100.1 (C _iPr ), 93.1 (CCl ₃ ), 72.5 (C-3), 72.1 (C-4), 70.6 (C _A n), 67.4 (C-5), 62.2 (C-6), 56.1 (C-2), 29.1 (C _iPr ), 21.1 (C _Ac ), 19.3 (C _iPr ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Naf C ₁₆ H ₂₂ NO ₇ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 468.0359 m/z mesurée : 468.0359 > AUyI 3,4,6-tri-0-acétyl-2-désoxy-2-trichIoroacétamido-β-D-glu copyranoside 18 :

Chemical

Exact Mass: 489,0360 Molecular Weight: 490,7169

Du TMSOTf (830,0 μL, 4,6 mmol, 0,2 éq.) est additionné à une solution d'alcool allylique (3,1 mL, 46,0 mmol, 2 éq.) et de donneur 1 (13,7 g, 23,0 mmol, 1 éq.) dans du DCM (160 mL), en présence de tamis moléculaire 4 à (8,9 g), agitée sous argon à -78 ⁰ C. Après 30 min sous agitation le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2) indique la disparition du donneur (Rf= 0,5) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,35). La réaction est stoppée par l'addition de triéthy lamine (1 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 9/l→75/25) pour obtenir le glycoside d'allyle 18 sous forme d'un solide blanc (9,4 g, 83%).

Rf= 0,35 (Tol/EtOAc, 1/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), 56.98 (d, IH, J _NH,2 = 8.9 Hz, NH), 5.84 (m, IH, CH=), 5.39 (pt, IH, J _2j3 = 9.3 Hz ₅ H-3), 5.28 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.19 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.12 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.6 Hz, H-4), 4.74 (d, IH, J _li2 = 8.3 Hz, H-I), 4.36 (m, IH, H _A11 ), 4.29 (dd, IH, J _5,6a = 5.0 Hz, J _6a,6b = 12.3 Hz, H-6a), 4.17 (dd _? 2H, J _5,6b = 2.4 Hz, H-6b), 4.10 (m, IH, H _A11 ), 4.03 (m, IH, H-2), 3.75 (ddd, IH, J _4,5 = 9.9 Hz, H-5), 2.10, 2.04, 2.03 (3s, 9H, H _Ac ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 171.3, 171.1, 169.7 (3C, C _A c), 162.4 (CNTCA), 133.6 (CH=), 118.4 C=CH ₂ ), 99.7 (C-1, ¹ Jc _H = 155.5 Hz), 92.7 (CCl ₃ ), 72.4 (C-5), 72.0 (C-3), 70.6 (C _A n), 69.0 (C- 4), 62.5 (C-6), 56.3 (C-2), 21.1, 21.0, 20.9 (3C, C _Ac ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C _n H ₂₃ NO ₉ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 512.0258 m/z mesurée : 512.0258 > AIIyI 2-acétamido-2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-β-D-glucopyran oside ⁴ 19 :

Chemical Formula : C ₁₄ H ₂₃ NO ₆

Exact Mass: 301,1525

Molecular Weighf 301,3355

Après addition de NaOH 1 M (6,7 mL, 6,7 mmol, 3 éq.) au glycoside d'allyle 17 (1,0 g, 2,2 mmol) en solution dans du MeOH (40 mL), le milieu réactionnel est agité pendant une nuit et son évolution est suivie par CCM (DCM/MeOH, 9/1). Après avoir observé la disparition de

17 (Rf= 0,95) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,5), de l'anhydride acétique

(630 μL, 6,7 mmol, 3 éq.) est ajouté au milieu réactionnel. Après 3 h d'agitation, Le solide jaune obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (DCM/MeOH, 98/2— »9/1) pour obtenir l'alcool 19 sous forme d'un solide blanc (476 mg, 71%).

Rf= 0,5 (DCM/MeOH, 9/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £5.90 (m, IH, CH=), 5.74 (d, IH, J _NH , ₂ = 4.6 Hz, NH) ₅ 5.32 (m, IH, J _trans =

17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.26 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 4.68 (d, IH, J,, ₂ = 8.3 Hz, H-I), 4.37 (m,

IH, H _AII ), 4.10 (m, IH, H _A n), 4.00-3.93 (m, 2H, H-3, H-6a), 3.82 (m, IH, H-6b), 3.61 (pt, IH,

J _3>4 = 9.4 Hz, H-4), 3.49 (m, IH, H-2), 3.31 (ddd, IH, J _5)6b = 5.4 Hz, J ₄ , ₅ = 10.0 Hz, H-5), 2.07

(s, 3H, H _NAc ), 1.55 (s, 3H, H _iPr ), 1.47 (s, 3H, H _iPr ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 162.7 (C _NAc ), 134.2 (CH=), 117.8 C=CH ₂ ), 100.9 (C-1, ¹ JcH = 162.1 Hz),

100.1 CC ₁ - _Pr ), 74.6 (C-4), 71.8 (C-3), 70.5 (C _A11 ), 67.5 (C-5), 62.4 (C-6), 57.9 (C-2), 29.4 (C _iPr ),

23.7 (C _NAc ), 19.5 (Ci _Pr ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₁₄ H ₂₃ NO ₆ Na m/z théorique : 324.123 m/z mesurée : 321.1412 [M+H] ⁺ C ₁₄ H ₂₃ NO ₆ m/z théorique : 302.1604 m/z mesurée : 302.1599

> AHyI 2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-2-trichloroacétamido-β-D-g Iucopyranoside 20 :

Chemical Formula C14H20CI3NO5

Exact Mass 403,0356 MolecularWeight 404,6707

Voie l : Après addition de NaOMe 0,5 M (42,0 mL, 20,9 mmol, 1,1 éq.) au glycoside d'allyle 18 (9,3 g, 19,0 mmol) en solution dans du MeOH (40 mL), le milieu réactionnel est agité pendant une nuit et son évolution est suivie par CCM (Tol/EtOAc, 8/2, DCM/MeOH, 9/1). Après avoir observé la disparition de 18 (Rf= 0,35 et 0,85, respectivement) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0 et 0,3, respectivement), le milieu réactionnel est neutralisé par addition de résine échangeuse d'ion DOWEX (H ⁺ ), puis filtré sur fritte. La résine est lavée avec un mélange DCM/MeOH et les solvants sont évaporés. Le solide jaune obtenu est engagé directement dans l'étape suivante (6,8 g).

Dans du DMF (30 mL) est dissous le brut précédent (6,8 g, 19,0 mmol) et le 2- méthoxypropène (3,4 mL, 38,0 mmol, 2 éq.). Du CSA (1,2 g, 5,2 mmol, 0,15 éq.) est ajouté par fractions au milieu réactionnel. Sous agitation à TA, la réaction est suivie par CCM (Tol/EtOAc, 6/4 et DCM/MeOH, 95/5). Après 2h30 d'agitation, le MeOH formé est évaporé à l'évaporateur rotatif et du 2-méthoxypropène (1,7 mL, 19,0 mmol, 1 éq.) est de nouveau ajouté. Après 1 h d'agitation, la transformation du produit de départ en un produit moins polaire (Rf= 0,3 dans Tol/EtOAc, 6/4) est quasi-totale. Le milieu réactionnel est neutralisé avec de la triéthylamine (1 mL) puis concentré à l'évaporateur rotatif. Le solide obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 8/2-→7/3) pour conduire à l'alcool 20 sous forme d'un solide blanc (6,2 g, 81%).

Voie 2 : Le glycoside d'allyle 17 (395 mg, 880 μmol) est dissous dans du MeOH (5 mL) puis du K ₂ CO ₃ (37 mg, 260 μmol, 0,3 éq.) est ajouté au milieu réactionnel. Après 25 min sous agitation, le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 6/4) indique la disparition de 17 (Rf= 0,45) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,25). Le milieu réactionnel est évaporé sous pression réduite. Le solide obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 8/2→l/l) pour conduire à l'alcool 20 sous forme d'un solide blanc (335 mg,

10/

Rf= 0,3 (Tol/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.26 (d, IH, J _NH,2 = 7.4 Hz, NH), 5.84 (m, IH, CH=), 5.27 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.19 (m, IH, J ₀₁₅ = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 4.89 (d, IH, J _lj2 = 8.3 Hz, H-I), 4.33 (m, IH, H _A U), 4.20 (pt, IH, J _2;3 = 9.2 Hz, H-3), 4.08 (m, IH, H _A π), 3.93 <dd, IH, J ₅ , _6a = 5.4 Hz,

J _6a , _6b = 10.8 Hz, H-6a), 3.79 (m, IH, H-6b), 3.56 (pt, IH, J _3,4 = 9.3 Hz, H-4), 3.50 (m, IH, H- 2), 3.32 (ddd, IH, J _4;5 = 10.0 Hz, H-5), 1.52 (s, 3H, H _iPr ), 1.42 (s, 3H, H _iPr ). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), (5162.3 (C _NTCA ), 133.3 (CH=), 118.4 (=CH ₂ ), 99.9 (C _iPr ), 98.9 (C-1, ¹ JcH = 165.0 Hz), 92.5 (CCl ₃ ), 74.4 (C-4), 70.6 (C _A n), 69.8 (C-3), 67.0 (C-5), 61.9 (C-6), 59.3 (C-2),

29.0 (CiPr), 19.1 (CiPr).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₁₄ H ₂₀ NO ₆ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 42-6.0254 m/z mesurée : 426.0252

> AIIyI 2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-3-0-lévulinoyl-2-trichloroa cétamido-β-D- glucopyranoside 24 :

Chemical Formula: C-igHgβClaNOs

Exact Mass: 501,0724 Molecular Weight: 502,7706

L'alcool 20 (5,9 g, 14,6 mmol) est dissous dans du DCM (100 mL) puis la DMAP (3,6 g, 29,3 mmol, 2 éq.) est ajouté au milieu réactionnel. Dans un autre ballon, la DCC (4,5 g, 22,0 mmol, 1,5 éq.), et l'acide lévulinique (2,7 mL, 26,4 mmol, 1,8 éq.) sont agités dans du DCM (100 mL) puis ajoutés au milieu réactionnel. Le milieu réactionnel est alors agité durant 30 min, temps au bout duquel le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 7/3) montre la formation d'un composé moins polaire majoritaire (Rf= 0,35) et la disparition de 20 (Rf= 0,25). La DCU est filtrée sur célite et le filtrat est repris à l'H ₂ O (50 mL). La phase aqueuse est extraite au DCM (3 x 200 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaHCθ _3Sat (3 x 100 mL), une solution de NaCl _sat (3 x 100 mL), filtrées sur filtre séparateur de phases et concentrées à l'évaporateur rotatif. L'huile obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 85/15→75/25) pour conduire à l'ester de lévulinoyle 24 (7,3 g,

Rf= 0,35 (Tol/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), ^7.50 (d, IH, J _NH,2 = 9.4 Hz, NH), 5.82 (m, IH, CH=), 5.34 (pt, IH, J _2>3 = 9.6 Hz, H-3), 5.24 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.13 (m, IH, J _cis = 10.5 Hz, =CH ₂ ), 4.66 (d, IH, J _1;2 = 8.3 Hz ₅ H-I), 4.29 (m, IH, H _A π), 4.11 (m, IH, H-2), 4.06 (m, IH, H _A n), 3.96 (dd, IH, J _5;6a = 5.4 Hz, J _6a;6b = 10.7 Hz, H-6a), 3.81 (m, IH, H-6b), 3.78 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.6 Hz, H- 4), 3.60 (ddd, IH, J _4>5 = 9.9 Hz, H-5), 2.72 (m, 2H, CH _2Lev ), 2.58 (m, 2H, CH _2Le v), 2.14 <s, 3H, CH _3Lev ), 1.50 (s, 3H, H _iPr ), 1.36 (s, 3H, H _iPr ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £205.5 (C _Lev ), 173.1 (C _Lev ), 162.3 (C _NT CA), 133.3 (CH=), 117.5 (=CH ₂ ), 100.4 (C-1, ¹ Jc _H = 162.5 Hz) ₅ 99.8 (C _lPr ), 92.7 (CCl ₃ ), 72.1 (C-3), 71.7 (C-4), 70.4 (C _A n), 66.9 (C-5), 61.9 (C-6), 56.0 (C-2), 37.9 (CH _2Lev ), 29.6 (CH _3Lev ) ₃ 28.7 (C _lPr ), 28.1 (CH _2Lev ), 18.9

(C ₁ Pr).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₁₉ H ₂₆ NO ₈ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 524.0622 m/z mesurée : 524.0657

[M+NH ₄ ] ⁺ Ci ₉ H ₂₆ NO ₈ ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 519.1068 m/z mesurée : 519.1097

> -Désoxy-4,6-0-isopropylidène-3-0-lévulinoyl-2-trichloroac étamido-β-D- glucopyranose 25 :

> Trichloracétimidate de 2-désoxy-4,6-CMsopropylidène-3-0-lévulinoyl-2- trichloroacétamido-α-D-glucopyranose 3 :

> 2-Trichlorométhyl-(l,2-didésoxy-4,6-0-isopropylidène-3-0- lévulinoyl-α-D- glucopyrano)-[2,l-^]-2-oxazolme 3':

Chemical Formula C16H22CI3NO8 Chemical Formula C13H22CI6N2O8 Chemical Formula C16H20CI3NO7

Exact Mass 461,0411 Exact Mass 603,9507 Exact Mass 443,0305

MolecularWeight 462,7068 Molecular Weight 607,0939 MolecularWeight 444,6915

Le (l,5-cyclooctadiènebis(méthyldiphénylphosphine)iridium(I) hexafluorophosphate) (360 mg) est dissous dans du THF (100 mL) sous agitation. Le milieu subit 5 cycles dégazage vide/argon, 5 cycles dégazage vide/hyrdogène puis est mis sous hydrogène pendant 15 min. Le milieu subit alors une seconde fois 5 cycles dégazage vide/argon. La solution de l'ester lévulinoyle 24 (6,0 g, 11,9 mmol) dans du THF (15 mL) est transféré sur la solution de catalyseur activé. Le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 6/4) montre la disparition de 24 (Rf= 0,4) et l'apparition d'un produit un peu moins polaire (Rf= 0,45).

Du diiode (6,0 g, 23,8 mmol, 2 éq.) et du NaHCO ₃ (3,0 g, 35,7 mmol, 3 éq.) en solution dans un mélange THF/H ₂ O (8/2, 70 mL) est ajouté au milieu réactionnel. Le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 6/4) indique la disparition de l'intermédiaire (Rf= 0,45) et l'apparition d'un nouveau composé beaucoup plus polaire (Rf= 0.3). Pour stopper la réaction, une solution aqueuse de NaHSO ₃ 10% (60 mL) est ajoutée par fractions au milieu jusqu'à disparition de la coloration noire. Le milieu réactionnel est repris avec du DCM et la phase aqueuse est extraite au DCM (3 x 200 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de

NaCl _sat <3 x 100 mL), avec de I ³ H ₂ O (3 x 100 mL) puis séchées sur filtre séparateur de phases et concentrée à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue (5,5 g), correspondant à l'hémiacétal 25, est engagée directement sans aucune purification dans l'étape suivante.

25 : Rf = 0,3 (Tol/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.16 (m, IH, NH), 5.33-5.28 (m, 2H, H-3, H-I) ₅ 4.44 (bs, IH, OH), 4.16

(dd, IH, J _lj2 = 3.6 Hz, J _2;3 = 10.0 Hz, H-2), 3.99 (ddd, IH, J _4,5 = 10.1 Hz, H-5), 3.88 (dd, IH,

J5, _6a = 5.2 Hz, J _6a , _6b = 10.7 Hz, H-6a), 3.82-3.76 (m, 2H, H-4, H-6b), 2.71 (m, 2H, CH _2L ev),

2.61 (m, 2H, CH _2Le v), 2.17 (s, 3H, CH _3L ev), 1.51 (s, 3H, H _iPr ), 1.39 (s, 3H, H _iPr ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.4 (C _Lev ), 173.0 (C _Lev ), 162.2 (C _NTCA ), 100.0 (C _iPr ), 92.1 (CCl ₃ ), 91.6

(C-I, ¹ Jc _H = 158.9 Hz), 71.8 (C-4), 70.3 (C-3), 63.7 (C-5), 62.2 (C-6), 54.8 (C-2), 37.9

(CH _2Lev ), 29.8 (CH _3Lev ), 28.9 (C _iPr ), 28.0 (CH _2Lev ), 19.1 <C _iPr ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₁₆ H ₂₂ NO ₈ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 484.0309 m/z mesurée : 484.0332 [M+NH ₄ ] ⁺ C ₁₉ H ₂₆ NO ₈ ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 479.0755 m/z mesurée : 479.0780

Le brut 25 (5,5 g, 11,9 mmol) est solubilisé dans du DCE (50 mL) et agité sous argon à -5°C puis de la DBU (500 μL, 3,3 mmol, 0,28 éq.) et du trichloroacétonitrile (5,9 mL, 59,5 mmol, 5 éq.) sont ajoutés. Le milieu réactionnel est agité à cette température pendant 15 min puis il est déposé, sans aucun traitement, sur une colonne de gel de silice (flash chromatographie, Tol/EtOAc+5% NEt ₃ , 9/1— >7/3) pour obtenir le trichloroacétimidate 3 sous forme d'un solide blanc (6,1 g, 84%). Rf= 0,55 (Tol/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £8.76 (s, IH ₅ NH), 7.09 (d, IH, J _NH,2 = 8.3 Hz, NH), 6.42 (d, IH, J _1;2 = 3.7 Hz, H-I), 5.33 (pt, IH ₅ J _2>3 = 10.4 Hz, J _3,4 = 9.2 Hz, H-3), 4.36 (m, IH, H-2), 3.92 (dd, IH, J _5j6a = 4.7 Hz, J _6a , _6b = 9.2 Hz, H-6a), 3.90-3.84 (m, 2H, H-4, H-5), 3.81 (m, IH, H-6b), 2.72 (m, 2H ₅ CH ₂ U _v ) ₅ 2.61 (m, 2H, CH _2Lev ), 2.15 (s, 3H, CH _3Lev ) ₅ 1.51 (s, 3H ₅ H _iPr ), 1.39 (s, 3H ₅ H _iPr ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £205.8 (C _Lev ), 173.6 (C _Lev ), 162.1 (C _NTCA ) ₅ 160.2 (C=NH) ₅ 100.2 (C _iPr ), 94.2 (C-1, ¹ Jc _H = 180.9 Hz), 91.7 (CCl ₃ ), 90.5 (CCl ₃ ), 71.0 (C-4), 69.7 (C-3), 66.5 (C-5), 61.8 (C-6), 54.6 (C-2), 37.8 (CH _2Lev ), 29.7 (CH _3Lev ) ₅ 28.8 (C _iPr ), 27.9 (CH _2Lev ) ₅ 19.0 (Ca*). L'oxazoline 3', résultant de la dégradation de 3 durant la purification, est isolé comme le second produit à éluer lors de chromatographie sur gel de silice. Rf= 0,45 (Tol/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), ô6.26 (à, IH, J _li2 = 7.5 Hz, H-I), 5.01 (dd IH, J ₂₎₃ = 3.4 Hz, J _3;4 = 7.8 Hz, H-3), 4.37 (dd, IH, H-2), 4.00 (m, IH, J _5,6a = 5.6 Hz, J _6a>6b = 11.0 Hz, H-6a), 3.90 (pt, IH, J _4;5 = 10.2 Hz, H-4), 3.76 (pt, IH, H-6b), 3.49 (m, IH, H-5), 2.81 (m, 2H, CH _2Le v), 2.64 (m, 2H, CH _2Lev ), 2.19 (s, 3H, CH _3Lev ), 1.50 (s, 3H, H _iPr ), 1.39 (s, 3H ₅ H _iPr ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ 206.6 (C _Lev ), 171.9 (C _Lev ), 162.7 (N=C), 105.2 (C-I), 100.1 (C _iPr ), 86.2 (CCl ₃ ), 74.0 (C-3), 70.5 (C-4), 68.0 (C-2), 64.4 (C-5), 61.7 (C-6), 38.0 (CH _2Le v), 29.8

(CH ₃ Lev), 28.7 (CiPr), 28.0 (CH _2Lev ), 18.8 (CiPr).

Partie II - Synthèse des cibles J, IL IIL IV, V et VI

Dans cette seconde partie sont décrits les procédés conduisant aux saccharides I, II, III, IV, V VI.

Cette partie présente la synthèse des fragments di-, tri-, tétra- et pentasaccharides cibles en série A réducteur avec ou non la présence de Pacétyle en position 2<>

Rétrosynthèse des oïigosaccharides en série A réducteur

Procédé 1 :

Selon un autre des ses objets, la présente invention se rapporte à un procédé de préparation du disaccharide (E)A (I), produit intermédiaire dans la synthèse d'un saccharide (oligo- ou polysaccharide) tel que défini dans la liste Ll, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : condensation du monosaccharide accepteur 31 avec le monosaccharide donneur 33 conduisant au disaccharide 35, de préférence la réaction de condensation est réalisée dans dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, l'acétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, de préférence, l'éther et à une température inférieure ou égale à -20°C (schémas 14 et 15) ; désacétylation du disaccharide 35 pour conduire au disaccharide 21, de préférence, en présence de NaOMe à reflux du méthanol (schémas 14 et 15) ; déprotection du disaccharide 21 par hydrogénolyse des groupes benzyles pour conduire au disaccharide (E)A, de préférence, sous pression d'hydrogène dans un alcool tel que Péthanol en présence de dérivé de palladium, par exemple le palladium sur charbon (schéma 16).

1. Synthèse de l' accepteur 31

Dans un premier temps, une synthèse rapide et efficace de quantités importantes du diol 26 a été mise au point en s'appuyant sur les nombreuses données disponibles dans la littérature et les travaux antérieurs du laboratoire ^42"45 (Figure 8).

La synthèse est réalisée en 4 étapes. ⁴² Pour la première étape de glycosylation, de nombreux acides ont été utilisés, dans la littérature, pour catalyser -cette réaction tels que l'acide trifluoromethanesulfonique ⁴³ (TMSOTf) ou l'acide chlorhydrique. ⁴² D'autres réactifs permettant de générer in situ de l'acide chlorhydrique ont aussi été employés comme par exemple le chlorure d'acétyle. ⁴⁶ Dans notre cas, la glycosylation du L-rhamnose monohydraté 27, en présence d'un excès d'alcool allylique, a été testée en présence de deux promoteurs différents : le TMSOTf et l'acide chlorhydrique issu de l'action de l'alcool allylique sur le chlorure d'acétyle.

L'emploi du TMSOTf a permis d'isoler le triol 28 avec un rendement de 64%. Le chlorure d'acétyle s'est montré plus efficace. En effet, dans ce cas, l'anomère α est obtenu avec un rendement de 89% dans un rapport α/β de 90/10 soit un rendement global de 98%. Le glycoside d'allyle 28 obtenu est ensuite protégé régiosélectivement en position 2 et 3 par une fonction isopropylidène en présence de 2,2-diméthoxypropane et d'un catalyseur acide

(APTS) dans l'acétone. L'acétal est introduit au niveau des positions 2 et 3 car il s'agit de diols cώ-vicinaux et ces derniers forment des cycles à 5 plus stables que les diols trans- vicinaux. L'acétal 29, obtenu avec un rendement de 84%, est ensuite benzylé sur la fonction hydroxyle en position 4 par action de l'alcoolate, issu de la déprotonation de l'alcool 29 par l'hydrare de sodium, sur le bromure de benzyle. L'intermédiaire complètement protégé 30 est isolé avec un rendement de 82%. Enfin, la fonction isopropylidène de l'intermédiaire 30 est clivée par hydrolyse acide pour régénérer les fonctions hydroxyles libres en position 2 et 3 et conduire au diol 26 souhaité avec un rendement de 72% (Schéma 10).

Schéma 10 : Synthèse du monosaccharide 26 Après avoir réalisé la synthèse du diol 26 en purifiant et caractérisant chacun des intermédiaires 28, 29 et 30, la synthèse a été reproduite sans chromatographie intermédiaire. Le diol attendu 26 est simplement isolé par recristallisation avec un rendement global de 78% nettement supérieur à celui obtenu précédemment (44% sur les 4 étapes) et celui de la littérature, qui enchainait aussi les quatre étapes ⁴³ (46%) (Schéma 11). De façon intéressante, le caractère cristallin du diol 26 permet d'enchaîner la séquence des 4 étapes de protection/déprotection sur des quantités importantes (20 g, par exemple).

5 g de L-rhamnose, 4 étapes avec chromatographie systématique Recristallisation : 3,5 g, 44%

20 g de L-rhamnose, 4 étapes sans chromatographie Recristallisation : 25,8 g, 78%

Schéma 11 : Bilan de la synthèse du monosaccharide 26 et accès à l'accepteur 31 La dernière étape avant le couplage glycosidique avec un donneur glucose consiste en une protection régiosélective de la position 2. ⁴⁷ ' ⁴⁸ Du fait du caractère cz ^' 5-vicinal des

hydroxyles 2 et 3 et de leur différence de basicité, la position 2 peut aisément être protégée sélectivement par ouverture régiosélective d'un orthoester cyclique intermédiaire. Ainsi, le diol 26 réagit avec l'orthoacétate de triméthyle en présence d'APTS, pour être converti en accepteur 31 via une étape d'hydrolyse acide. L'accepteur 31 est obtenu sous forme d'un mélange de régioisomères 2-OAc/3-OAc dans un rapport 97/3 (rapport déterminé par RMN ¹ H en se basant sur le signal du H-6 du rhamnose). Cet accepteur n'étant pas très stable sur silice, il est utilisé tel quel dans l'étape de couplage (une migration de la fonction acétyle du OH-2 vers le OH-3 en milieu acide a été observée précédemment au laboratoire ⁴⁵ ' ⁴⁹ ). Un spectre RMN ¹ H effectuée avant le couplage permet de vérifier que l'acétyle n'a pas migré (Schéma 11).

2. Donneurs de glucose 33 et 34

Le 2,3,4,6-tétra-O-benzyl-β-D-glucopyranose commercial 32 réagit à température ambiante avec du trichloroacétonitrile en présence de K ₂ CO ₃ dans du dichlorométhane pour engendrer le donneur 33, activé en position anomérique. La réaction est réalisée sous contrôle cinétique, ³⁰ ' ³⁴ à TA et en présence d'une base faible afin de favoriser la formation de l'anomère β ³⁵ qui cristallise, légèrement contaminé par l'anomère α (α/β : 7/93 rapport déterminé par RMN ¹ H en se basant sur le signal du proton anomérique). Le donneur 33 est obtenu avec un rendement de 76% (Schéma 12). Le trichloroacétimidate est instable sur silice, ce qui rend le suivi de la réaction difficile, mais, une fois cristallisé, il peut être conservé au congélateur pendant de longues périodes.

DCM 32 33

Schéma 12 : Synthèse du donneur 33 Pour connaître l'influence du donneur utilisé lors des réactions de glycosylation, le donneur thiophényle 34 (Figure 9), disponible au laboratoire, a aussi été utilisé.

3. Disaccharide (E)A accepteur 21

Le disaccharide 35 ⁴⁵ ' ⁴⁹ ' ⁵¹ est obtenu par condensation de l'accepteur 31 et du donneur 33. Il a été montré, dans la littérature qu'une liaison de type 1,2-cis est obtenu avec une meilleure stéréosélectivité en utilisant la procédure inverse de Schmidt ²³ ' ⁵² i .e. le donneur est ajouté goutte à goutte au milieu réactionnel comprenant accepteur et activateur. Ainsi, le réarrangement du donneur 33 en 33' ⁵³ selon le réarrangement dit « de Chapman » ^54"56 est limité (Figure 10).

Le mécanisme simplifié de la réaction implique une compétition entre une réaction de type SN et une réaction de type SN comme le montre le Schéma 13.

Attaque par la face inférieure

Attaque par la face supérieure ou inférieure

I I

Schéma 13 : Mécanisme simplifié déformation du disaccharide 35 Pour obtenir majoritairement une liaison 1,2-cis, le mécanisme de type S _N ² doit être favorisé. Ainsi, les influences du solvant (Ether ou Toluène), du catalyseur (TMSOTf ou BF ₃ OEt ₂ ), de la température d'addition du donneur et de la stéréochimie du donneur ont été étudiées (Tableau 2).

Au vu du Tableau 2, les conclusions suivantes peuvent être tirées :

- En comparant les entrées 1 à 5 et 6 à 10, les meilleures stéréosélectivités sont observées en utilisant du TMSOTf comme -catalyseur et le toluène comme solvant de glycosylation ;

Les entrées 4 et 9 montrent qu'augmenter la quantité de catalyseur ou ajouter du tamis moléculaire n'augmente ni la stéréosélectivité ni le rendement ; La comparaison entre les entrées 2 et 7 avec, respectivement, les entrées 1 et 6 montre que plus la température d'addition du donneur est basse, plus la stéréosélectivité est bonne ce qui prouve qu'un mécanisme de type SN est favorisé à basse température ;

- Comme attendu, si le mécanisme de type S _N ² est favorisé, alors utiliser un donneur sous forme d'un mélange α/β n'améliore pas la stéréosélectivité (entrée 3) ;

- Le donneur thiophényle ne permet pas d'obtenir une meilleure stéréosélectivité que le donneur trichloroacétimidate (entrée 5).

„ , Température d' ai out Rendement et

Entrée Solvant Catalyseur Donneur** , _ , , „ ,„ . du donneur*** Rapport α/β*

* n. d. : non déterminé.

** Le donneur est solubilisé dans un minimum de DCM puis dissout dans le solvant de couplage (2/1).

*** Toutes les réactions ont été arrêtées après retour à TA.

Tableau 2 : Optimisation de la glycosylation du disaccharide 35

Au vu de ces résultats, les conditions optimums retenues sont donc : toluène comme solvant, donneur sous sa forme anomère β, TMSOTf (0,02 éq.) comme catalyseur, utilisation de la procédure inverse de Schmidt.

Après avoir isolé grossièrement un mélange d'anomères α/β (35), difficilement séparables, ce mélange est désacétylé en présence de NaOMe à reflux du méthanol car la fonction acétyle à cliver est isolée et encombrée. Les diastéréoisomères sont isolés par chromatographie sur gel de silice à cette étape (Schéma 14). Le disaccharide 21 de configuration α ( ¹ Jc _H ⁼ 166,3 Hz) est obtenu avec un rendement de 58% et le disaccharide 36 de configuration β (Ji ,2= 7,5 Hz, ¹ JcH= 159,5 Hz) avec un rendement de 12%.

33, 1 ,2 éq.

35, α/β : 85/15, 2 étapes, 82% ³⁶ ' ^12% 21, 58%

Schéma 14 : Synthèse du disaccharide 21

Dans un deuxième temps, ce couplage a été réalisé sur 8 g (27 mmol) d'accepteur 1 au lieu de 500 mg. Le rendement en disaccharide 21 est légèrement augmenté {61%) sur les 3 étapes soit 48% de rendement en anomère α à partir du L-rhamnose commercial. De plus, lors de la- purification grossière à l'étape de désacétylation, 10% de diol 26, issu de la transestérification de 31 qui n'a pas réagit lors de l'étape de couplage sont isolés, ce qui conduit à un rendement corrigé en disaccharide 21 de 69% sur les 3 étapes (Schéma 15).

32, 20 g 33, 24,1 g 35, 21 g, α/β : 85/15, 2 étapes, 90%

76% sur 3 étapes

61% en α sur 3 étapes

48% en α à partir du L-Rhamnose

36, 15% 21, 13,6 g, 61%

Schéma 15 : Synthèse du disaccharide 21 à grande échelle

Une autre possibilité d'accès au disaccharide 21 est inspirée des travaux de Nifant'ev et aV ^η Ce dernier a montré que des couplages en position 3 du rhamnose pouvaient être réalisés sur le diol cis sans protection préalable de la fonction hydroxyle axiale. L'avantage de cette stratégie est de réduire le nombre d'étapes de protection/déprotection même si la formation de régioisomères, couplés en position 2 ou 3, et du trisaccharide est observée. Les premiers essais de couplage réalisés au laboratoire entre le donneur 6 et le diol accepteur 1 ont montré la présence d'un mélange complexe de produits. Il est évident qu'en l'absence de

groupement participant, la formation des deux régioisomères α, couplés en position 2 ou 3, ainsi que celle des deux stéréoisomères β correspondants, pouvaient être attendues. Cette stratégie a donc été rapidement abandonnée.

4. Déprotection finale du disaccharide (E)A 21

L'hydrogénolyse ⁵⁸ ' ⁵⁹ des groupes benzyles du disaccharide 21 est effectuée sous pression d'hydrogène dans Féthanol en présence de palladium sur charbon en milieu légèrement acide pour conduire au glycoside de propyle / avec un rendement de 83%.

Schéma 16 : Hydrogénolyse du disaccharide 21

Procédé 2 :

L'invention se rapporte également au procédé de préparation du trisaccharide D(E)A (II), oligosaccharide produit intermédiaire dans la synthèse d'un oligo- ou polysaccharide tel que défini dans la liste Ll, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : condensation du monosacccharide donneur 1 avec le disaccharide accepteur 21 conduisant au trisaccharide 22, de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1 ,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, Pacétonitrile ou tout autre solvant équivalent, de préférence, dans le dichlorométhane en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique (schéma 17) ; désacétylation du trisaccharide 22 conduisant au trisaccharide 37, de préférence, en présence de NaOMe (schéma 19) ; déprotection du trisaccharide 37 par hydrogénolyse acide suivie d'une hydrodéchloration pour conduire au trisaccharide D(E)A, de préférence, sous pression d'hydrogène en présence de palladium sur charbon en milieu basique (schéma 20).

La présente invention se rapporte encore au procédé de préparation du trisaccharide D(E)A (II), oligosaccharide produit intermédiaire dans la synthèse d'un oligo- ou polysaccahride tel que défini dans la liste Ll comprenant les étapes suivantes : condensation du monosacccharide donneur 2 avec le disaccharide accepteur 21 conduisant au trisaccharide 23, de préférence la réaction de condensation est

réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1 ,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, l'acétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, de préférence, dans le dichlorométhane, en présence de TMSOTf à 0,3 eq (schéma 18) ; désacétylation du trisaccharide 23 conduisant au trisaccharide accepteur 38, de préférence, en présence de NaOMe (schéma 19) ; clivage du groupement isopropylène du trisaccharide 38 par hydrolyse acide conduisant au trisaccharide 37 ; déprotection du trisaccharide 37 pour conduire au trisaccharide D(E)A, de préférence par hydrogénolyse acide suivie d'une hydrodéchloration sous pression d'hydrogène en présence, d'un dérivé de palladium tel que le palladium sur charbon en milieu basique.

5. Trisaccharide D(E)A accepteur 38 a. Accès au trisaccharide accepteur 38 via le glycoside d'allyle 22 Outre la synthèse d'un trisaccharide accepteur pouvant être allongé en position 3 _D OU I _A , notre objectif a été de déterminer si l'introduction d'une fonction isopropylidène sur les positions 4 _D et 6 _D est plus efficace au stade du monosaccharide ou au stade du trisaccharide.

Dans un premier temps, la condensation entre le donneur 1 et l'accepteur 21 est réalisée dans le dichlorométhane en présence de TMSOTf (0,2 éq.) et de tamis moléculaire. Le trisaccharide 22 est obtenu avec la configuration β attendue ( ¹ JcH ⁼ 161,0 Hz) et un rendement de 95%, confirmant le rôle de groupe participant du trichloroacétamide {Schéma 17) ainsi que l'efficacité, comme déjà observé dans les séries précédentes, de 1 en tant que donneur.

Schéma 17 ; Couplage entre le donneur 1 et l 'accepteur 21

Le glycoside d'allyle 22 est désacétylé en présence de NaOMe dans les conditions de Zemplen ⁶⁰ pour obtenir le triol 37 avec un rendement de 94%. Ce dernier est ensuite protégé

régiosélectivement en position 4 _D et 6D par un groupement isopropylidène en présence de 2- méthoxypropène ³⁰ ' ³¹ et de CSA pour conduire à l'accepteur 38 avec un rendement de 76% (Schéma 19). Il est à noter, que l' isopropylidène de l'accepteur 38 s'est révélé instable en milieu légèrement acide (par exemple, le CDCI ₃ utilisé pour l'analyse RMN). Un équilibre entre 38 et le triol 37 (Rapport 65/35 : 38/37) formé de façon plus ou moins rapide en fonction de la température de l'échantillon mais aussi de sa concentration est observé. b. Accès au trisaccharide accepteur 38 via le glycoside d'allyle 23

Lorsque les conditions de couplage utilisées précédemment (dichlorométhane, 0,2 éq. de TMSOTf, tamis moléculaire) ont été appliquées au donneur 2, la formation de l'oxazoline 2' issue du donneur 2 a été observée comme confirmée par la présence du signal du proton anomérique à 7,18 ppm en RMN ¹ H caractéristique d'une oxazoline ³³ (Figure 11).

Pour compenser cette différence de réactivité, les couplages suivants ont donc été réalisés avec 0,3 éq. de TMSOTf pour permettre l'ouverture de l'oxazoline formée. Dans ce cas, la condensation entre le donneur 11 et l'accepteur 9 permet d'obtenir le trisaccharide 23 avec la configuration β attendue ( ¹ Jc _H = 164,4 Hz) et un rendement de 92% (Schéma 18).

23

Schéma 18 : Couplage entre le donneur 2 et l'accepteur 21

Augmenter les quantités de TMSOTf et de donneur 2 est donc nécessaire pour introduire un résidu glucosamine pré-équipé à des positions stériquement encombrées comme ici, la position 2 _A - Si on prend en compte les conditions de glycosylation, la combinaison des deux exemples présentés permet de valider le potentiel donneur du composé 2 déjà fonctionnalisé permettant l'allongement, après couplage et simple déprotection sélective, en position 3 _D sans autres étapes supplémentaires de protection à un stade avancé de la synthèse. L'avantage de cette deuxième stratégie est que l' isopropylidène a déjà été introduit au niveau de la synthèse du donneur 2. Ainsi, le glycoside d'allyle 23 est désacétylé dans les conditions de Zemplen ⁶⁰ pour obtenir, en une étape, l'accepteur 38 avec un rendement de 84% (Schéma 19).

c. Conclusion sur la synthèse du trisaccharide D(E)A

N'impliquant cette fois que deux étapes de purification par chromatographie, les deux voies de synthèse de l'accepteur trisaccharide 38 ont été reproduites à l'échelle de 5 g et comparées (Schéma 19). Au vu de ces résultats, il se révèle donc plus avantageux d'introduire la fonction isopropylidène au stade du trisaccharide plutôt qu'au stade du monosaccharide. En effet, les rendements des étapes de couplage et de protection/déprotection ne changent pas mais la préparation du donneur 2 (56% en 5 étapes) porteur d'une fonction isopropylidène est moins performante que celle du triacétate 1 (72% en 4 étapes) (Partie 1).

Voie 1 : A partir de 9, 3 étapes, 86 % Voie 2 : A partir de 9, 2 étapes, 87 %

Schéma 19 : Bilan de la préparation de l'accepteur 38 6. Déprotection finale du trisaccharide D(E)A 37

Pour le trisaccharide 37, deux réactions sont nécessaires : une hydrogénolyse acide suivi d'une hydrodéchloration. ⁶² ' ' Ainsi, 37 est d'abord traité dans des conditions identiques à 21, puis la réduction de la fonction trichloroacétamide en acétamide est effectuée sous pression d'hydrogène en présence de palladium sur charbon en milieu basique (NEt ₃ ). Le glycoside de propyle attendu // est obtenu avec un rendement de 69% (Schéma 20).

Schéma 20 : Hydrogênolyse du trisaccharide 37

II est à noté qu'une synthèse de l'analogue de // en série glycoside de méthyle a déjà été publiée dans les années 80 par Kochetkov et al ^63'65 Outre le choix de réaliser la synthèse de // en série glycoside de propyle, possédant l'avantage d'avoir des intermédiaires de synthèse à la fois potentiellement donneur et accepteur, la différence entre les deux stratégies réside dans le choix des groupements protecteurs. Effectivement, Kochetkov et al. ont travaillé en utilisant la chimie des bromure de glycosyle développée par Koenigs-Knorr ⁶⁶ , et le phtalimide comme groupe protecteur de la fonction aminé. En 8 étapes, le trisaccharide est obtenu avec un rendement de 11% , à partir du méthyl 4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside (Schéma 21), alors que la synthèse proposée ci-dessus permet d'obtenir le trisaccharide D(E)A avec un rendement de 29% en 6 étapes à partir de l'allyl 4-<9-benzyl-α-L- rhamnopyranoside. On remarquera toutefois que la différence de rendement majeure réside dans l'étape d'acétylation régiosélective de l'accepteur A.

Schéma 21 : Synthèse de la cible D(E)A décrite par Kochetkov ,'63

^

Procédé 3 :

Un autre des objets de l'invention se rapporte au procédé de préparation du tétrasaccharide _Ac CD(E)A (III), tel que défini dans la liste Ll, comprenant les étapes suivantes : condensation du monosaccharide donneur 39 avec le trisaccharide accepteur 38 conduisant aux tétrasaccharides 40 et 41, de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, l'acétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, de préférence, dans le toluène, en présence de TMSOTf et à -78 ⁰ C (schéma 22) ; clivage du groupement isopropylidène du tétrasaccharide 40 par hydrolyse acide conduisant au tétrasaccharide 41 ; déprotection des groupement benzyle et réduction concimitante du trichloroacétamide du tétrasaccharide 41 pour conduire au tétrasaccharide _A cCD(E)A, de préférence sous pression d'hydrogène dans un alcool, par exemple, l'éthanol en présence de dérivé de palladium tel que le palladium sur charbon. 7. Tétrasaccharide CD(E)A

Les cibles tétrasaccharides III et IV sont issus de la condensation du donneur 39 (Figure 12), disponible au laboratoire, et du trisaccharide accepteur 38.

Lors du premier essai de glycosylation, dans les conditions utilisées pour le couplage du donneur 2 avec l'accepteur 21 (dichlorométhane, TMSOTf 0,3 éq., tamis moléculaire), trois produits ont pu être isolés (entrée 1 du Tableau 3 et Schéma 22), dont le produit de couplage 40 souhaité avec la configuration α ( ¹ Jc _H " 169,1 Hz).

Schéma 22 : Couplage entre l 'accepteur 35 et le donneur 39

Le glycoside d'allyle 41 possède aussi la configuration α ( ¹ Jc _H ~ 169,8 Hz) mais a perdu, dans les conditions acides de couplage, la fonction isopropylidène comme l'indique l'absence des pics caractéristiques de l' isopropylidène sur les spectres du proton et du carbone (41, Figure 13). Un spectre RMN HMBC a aussi permis de montrer que le couplage avait bien eu lieu en position 3D (Figure 14) préalablement à la désacétalation. Pour confirmer cette réaction secondaire et donc la perte de l' isopropylidène du tétrasaccharide 41 dans les conditions acides de couplage, le produit de couplage 40 est traité par une solution aqueuse de TFA 50% dans le dichlorométhane à 0°C. Après 4h, Le produit isolé est équivalent d'après les analyses en CCM et en RMN au glycoside d'allyle 41. Ce résultat montre que la glycosylation entre 38 et 39 est antérieure à la perte de l' isopropylidène.

En revanche, l'hypothèse faite sur le produit 42 isolé est la formation d'un tétrasaccharide dont l'unité C est liée en position 3 _D par une liaison β. Pour valider cette hypothèse, et notamment la présence d'un acétyle en position 2c, le produit 42 est désacétylé en présence de NaOMe pour donner, après purification, l'alcool 43 attendu confirmé par une

analyse complète RMN (absence d'acétyle et présence d'isopropylidène avec un pic caractéristique à 99,8 ppmen carbone). La superposition des trois spectres C ¹³ GD de 40, 41 et 42 permet de visualiser les liaisons α de 40 et 41 et la liaison β de 42 (Figure 15).

La présence de 42 et donc la formation de cette liaison β ( ¹ Jc _H ⁼ 156,6 Hz) prouve que l'acétyle en position 2c n'a pas joué entièrement son rôle de groupe participant comme l'ont déjà montré des exemples de la littérature. ^68"75 Des conditions de couplage ont été recherchées afin d'augmenter la stéréosélectivité mais aussi de limiter la dégradation du produit de couplage 40 voulu. Dans certains travaux de la littérature, l'utilisation du toluène permet d'obtenir de meilleurs résultats de couplage que l'utilisation du dichlorométhane. ⁶⁹ ' ^76"79 Ainsi, le toluène mais aussi l'éther diéthylique ont été testés (Tableau 3).

Entrée Solvants Température 40 41 42

1 DCM 40% 22% 20%

2 Et ₂ O -78°C→TA 58% 21% n. o.

3 Toluène n. o. n. o. n. o.

4 Toluène -78 ⁰ C 72% 5% n. o.

* n. o. : non observé. Tableau 3 : Influence du solvant sur le couplage entre l 'accepteur 38 et le donneur 39

La formation du tétrasaccharide attendu n'a pas été observée dans l'éther diéthylique (entrée 2 du Tableau 3). En revanche, réaliser le couplage dans le toluène permet d'isoler les composés 40 et 41 dans un rapport 75/25 avec un rendement global de 79% (entrée 3). La réaction de couplage est cette fois stéréosélective, aucune trace d'anomère βC n'étant observée (Schéma 23). Pour limiter la dégradation de la fonction isopropylidène, la réaction est poursuivie à -78°C pendant 15 minutes et le milieu réactionnel est neutralisé par ajout de triéthylamine à cette température. Dans ce cas, un mélange de produits 40 et 41 est alors obtenu dans un rapport 95/5 avec un rendement de 77% (entrée 4).

L' isopropylidène porté par 40 est clivé par hydrolyse acide ' ^ι pour conduire au diol 41 (88%), soit un rendement de 66% sur les 2 étapes (Schéma 23).

Schéma 23 : Optimisation du couplage entre l 'accepteur 38 et le donneur 39 8. Déprotection finale des tétrasaccharides en série A réducteur

Dans le cas de Foligosaccharide 41, la possibilité de clivage de la fonction acétyle dans des conditions acides ou basiques, exclue l'hydrogénolyse acide et l'hydrodéchloration basique. De plus, comme la cible /// possède une fonction hydroxyle libre en position vicinale de la position 2c, le risque de migration existe. La mise au point des conditions adéquates d'hydrogénation a donc été effectuée sur le pentasaccharide 56 avant d'hydrogéner le tétrasaccharide 41.

Les différents essais réalisés, dans ces conditions mises au point sur le pentasaccharide 56, n'ont pas permis d'isoler la cible /// sous une seule forme mais, -comme on pouvait s'y attendre, sous forme d'un mélange de deux régioisomères, acétylés en position 2c ou 3c avec un rendement de 76% (Schéma 24).

41 / mg)

NaOMe, MeOH, oco/ Reflux ' ^{Bî> /o}

69 /V, CD(E)A (26 étapes >100 mg)

Schéma 24: Hydrogénolyse des tétrasaccharides 41 et 69

Procédé 4 :

L'invention se rapporte également au procédé de préparation du composé tétrasaccharide CD(E)A (IV), tel que défini dans la liste Ll, comprenant les étapes suivantes : condensation du monosaccharide donneur 39 avec le trisaccharide accepteur 38 conduisant aux tétrasaccharides 40 et 41, de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1 ,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, l'acétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, de préférence dans le dichlorométhane, en présence de TMSOTf à 0,2 éq. comme catalyseur et à -78 ⁰ C (schéma 22) ; clivage du groupement isopropylidène du tétrasaccharide 40 par hydrolyse acide conduisant au tétrasaccharide 41 ; désacétylation du tétrasaccharide 41 conduisant au tétrasaccharide 69, de préférence en présence de NaOMe à reflux du méthanol (85%) (schéma 24) ;

déprotection par hydrogénolyse du tétrasaccharide 69, de préférence sous pression d'hydrogène dans l'alcool, par exemple Péthanol, en présence d'un dérivé de palladium tel que le palladium sur charbon pour conduire au tétrasaccharide CD(E)A. L'analogue non-acétylé est obtenu après désacétylation du diol 41 en présence de NaOMe à reflux du méthanol (85%). Pour finir, l'hydrogénation de 69 est effectuée sous 50 bars d'hydrogène. Le glycoside de propyle IV est isolé avec un rendement de 71% (Schéma 24). Procédé 5 :

L'invention se rapporte au procédé de préparation du pentasaccharide B _Ac CD(E) A (V) tel que défini dans la liste Ll comprenant les étapes suivantes : condensation du disaccharide donneur 46 avec le trisaccharide accepteur 38 conduisant au pentasaccharide 52, de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, l'acétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, encore préférentielement, dans le toluène, en présence de TMSOTf à 0,3 éq. et à -78 °C (schéma 27); désacétylation du pentasaccharide 52 conduisant au pentasaccharide 54, de préférence en conditions basiques avec du K ₂ CO ₃ (schéma 28) ; clivage du groupement isopropylidène du pentasaccharide 54 conduisant au pentasaccharide 56, de préférence en solution aqueuse de TFA 50% dans le dichlorométhane à 0 ⁰ C (schéma 29) ; déprotection du pentasaccharide 56 pour conduire au pentasaccharide BA _C CD(E)A de préférence sous pression d'hydrogène dans l'alcool, par exemple Péthanol, en présence de dérivé de palladium tel que le pallaidum sur charbon (schéma 35).

La présente invention se rapporte également au procédé de préparation du pentasaccharide B _AC CD(E)A (V) tel que défini dans la liste Ll comprenant les étapes suivantes : condensation du disaccharide donneur 47 avec le trisaccharide accepteur 38 conduisant au pentasaccharide 64, de préférence, la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, l'acétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, plus préferentiellement, dans le toluène, en présence de TMSOTf à 0,3 éq. et à -40 °C (schéma 33) ;

déprotection du groupement lévulinoyle du pentasaccharide 64 conduisant au pentasaccharide 66 de préférence en milieu tamponné (pyridine/ AcOH) en présence d'hydrazine monohydraté (schéma 33) ; clivage du groupement isopropylidène du pentasaccharide 66 conduisant au pentasaccharide 67 de préférence en solution aqueuse de TFA 50% dans le dichlorométhane à 0°C (schéma 34) ; déprotection du pentasaccharide 67 pour conduire au pentasaccharide B _AC CD(E)A de préférence sous pression d'hydrogène dans l'éthanol en présence de palladium sur charbon (schéma 36).

9. Pentasaccharide BAγCD(E)A V

Notre analyse rétrosynthétique ayant pris en compte l'accès à des oligosaccharides d'ordre supérieur, la synthèse proposée pour la cible V implique le synthon donneur 47. En l'absence d'élongation en position 2 _B , le donneur 46, plus facile d'accès que 47, peut également être employé avec succès (Schéma 25). Les deux voies ont été étudiées.

44 R ₁ = Ac R ₂ = Ac 46 47

45 R ₁ = Bn R ₂ = Lev

48, 3 étapes via L-rhamnose 27 31 49, 8 étapes via L-rhamnose 27

Schéma 25 : Stratégie de synthèse d'accès à la cible V a. Voie B tritri-O-acétyl

Par analogie avec la synthèse du disaccharide 35, l'accepteur 31 est condensé sur le donneur 48, disponible au laboratoire (3 étapes, 76% ⁸² ' ⁴⁹ ). La réaction de glycosylation est réalisée dans le dichlorométhane en présence de TMSOTf (0,3 éq.) et de tamis moléculaire. Le glycoside d'allyle 50 est obtenu avec la configuration α attendue {J _1;2 = 1,5 Hz, ¹ JcH = 173,0 Hz) et un rendement de 95% (Schéma 26). Le disaccharide 50 est déallylé ³⁹ ' ⁴⁰ en hémiacétal 51 (91%) et ensuite converti par action de trichloroacétonitrile et DBU, ^" ' ^" en donneur 46 avec un rendement de 89%.

Schéma 26 : Synthèse du donneur 46

Le choix stratégique initial impose que la désacétylation sélective vis-à-vis d'un acétyle isolé soit réalisable. Le disaccharide 50, synthon clé de la préparation du donneur 46, a servi de modèle pour confirmer que tous les acétyles du rhamnose B peuvent être clivés sélectivement en présence de celui en position 2c- Le clivage sélectif a donc été testé dans différentes conditions basiques ou acides (Tableau 4). Le meilleur résultat a été observé dans des conditions basiques avec l'utilisation du K ₂ CO ₃ . Le triol 50' et le tétraol 50" sont obtenus dans un rapport 70/30

Conditions Température Temps de Réaction Rapport 50750"

NaOMe/MeOH 0,2 éq. ⁶⁰ TA 2h30 60/40

NaOMe/MeOH 0,2 éq. ^6υ O ⁰ C >2 jours n. d.

NEts/MeOH/HjO*"- ⁸⁴ O ⁰ C 2 jours 55/45

K ₂ CO ₃ MeOH 1 éq. ⁸ⁱ TA 15 min 70/30

K ₂ CO ₃ MeOH 1 éq. ^S3 O ⁰ C lh30 65/35

HBF ₄ dans Et ₂ OMeOH ⁸⁶ ' ^8/ TA >7 jours n. d.

* n. d. : non déterminé.

Tableau 4 : étude de la désacétylation sélective du disaccharide 50 Le donneur 46 étant maintenant disponible et la désacétylation sélective du disaccharide 50 en acétate 50' étant réalisable, le couplage pour accéder à la cible pentasaccharide a été envisagé avec l'accepteur 38.

Les conditions mises au point, lors de la synthèse du tétrasaccharide 40 (toluène, TMSOTf 0,3 éq., tamis moléculaire) ont été appliquées à cette réaction de condensation (Schéma 27). Deux composés ont pu être isolés après chromatographie, dans un rapport 78/22 avec un rendement de 90%, le produit de couplage 52, possédant bien la configuration α souhaité ( ¹ Jc _H ⁼ 170,5 Hz), et le diol 53. Comme dans le cas de 41, ce dernier, dont la structure a pu être confirmée par une analyse complète en RMN, résulte de la perte de l'isopropylidène « post-condensation » dans les conditions acides de couplage. De la même façon que pour le tétrasaccharide 40, pour limiter la perte de l'isopropylidène, la température est maintenue à -78 ⁰ C pendant 15 minutes puis la réaction est stoppée par ajout de triéthylamine. Un mélange de pentasaccharides 52 et 53 est obtenu, cette fois, dans un rapport 92/8 avec un rendement de 87%.

Schéma 27 : Couplage entre l'accepteur 38 et le donneur 46

Le pentasaccharide 52 est ensuite désacétylé, dans les conditions mises au point sur le disaccharide 50 (K ₂ CO ₃ , MeOH) pour obtenir le triol 54 et le tétraol 55 dans un rapport 92/8 avec un rendement de 92% (Schéma 28). Cette désacétylation sélective est plus efficace sur le pentasaccharide 52 que sur le disaccharide 50, sûrement, comme cela pouvait être anticipé, du fait de l'encombrement stérique plus important au niveau de la fonction acétyle en position 2c.

52 54, 85% 55, 7%

Schéma 28 : Désacétylation sélective du pentasaccharide 52

Traités par une solution aqueuse de TFA 50% dans le dichlorométhane à 0°C, ' les composés 54 et 55 conduisent respectivement aux pentasaccharides 56 et 57 avec un rendement identique de 95% (Schéma 29).

54 R = Ac 56 R = Ac 55 R = H 57 R = H

Schéma 29 : Désacétalation des composés 54 et 55

b. Série B 2-O-lévulinoyl

Pour réaliser la synthèse du building block 47, la synthèse du précurseur 49 (Schéma 25) a été envisagée. En effet, comme nous l'avons vu dans la partie rétrosynthèse, le choix d'un groupe protecteur temporaire et participant, en position 2 _B , s'est porté sur le groupe lévulinoyle. ⁸⁸ ' ⁸⁹

^

Plusieurs stratégies sont envisageables mais pour valoriser la synthèse à grande échelle du diol 26, une protection régiosélective de la position 3 de ce diol par un groupement benzyle semble être la meilleure stratégie. Le diol 26 est ainsi chauffé à reflux du toluène au soxhlet en présence d'oxyde de dibutylétain utilisé en quantité stœchiométrique dans le toluène pour former l'intermédiaire dibutylstannylène. ⁹⁰ Après formation de cet intermédiaire, l'attaque régiosélective de l'hydroxyle 3, sur le bromure de benzyle, a été testée en présence d'iodure de terrfo-butyl ammonium, ⁹¹ ou de fluorure de césium. ^92"94 Ce dernier permet d'obtenir l'accepteur 58 ⁹⁵ avec un rendement de 88% supérieur au 70% obtenu avec l'iodure de tertio-butyl ammonium.

, _R 58, TBAI : 70%

^Zb CsF : 88%

Schéma 30 : Synthèse de l 'accepteur 58

L'accepteur 58 est, converti en ester de lévulinoyle 59 avec un rendement de 89% par action d'acide lévulinique en présence de DCC et de DMAP dans le dichlorométhane ⁸⁹ (Schéma 31) puis déallylé ⁹⁶ ' ^{39> 40} en deux étapes (Partie Rétrosythèse) permettant d'isoler l'hémiacétal 60 avec un rendement de 94%. Ce dernier est mis en réaction dans le 1,2- dichloroéthane en présence de DBU et de trichloroacétonitrile ²² ' ²³ pour conduire au trichloroacétimidate 49 avec un rendement de 92%.

59

Schéma 31 : Synthèse du donneur 49

Le couplage entre le donneur 49 et l'accepteur 31 a été étudié en utilisant différentes conditions de solvant. ⁶⁹ ' ^76~79 Si la condensation est réalisée dans le dichlorométhane en présence de TMSOTf (0,3 éq.) et de tamis moléculaire, le disaccharide 61 est obtenu avec la configuration α attendue (J _1]2 = 1,5 Hz, ¹ JcH = 169,5 Hz) et un rendement de 66% confirmant le rôle de groupe participant du lévulinoyle (Schéma 32). Dans le toluène en présence de TMSOTf (0,3 éq.) et de tamis moléculaire, le rendement en disaccharide 61 est accru (77%) et atteint 90% quand le couplage est réalisé à grande échelle (7 g d'accepteur 5). Puis, comme pour le disaccharide 50, le disaccharide 61 est converti en donneur 47 en deux étapes (Schéma 32), une étape de déallylation ³⁹ ' ⁴⁰ (93%) suivie d'une étape d'activation ²² ' ²³ (84%).

49, 1 ,5 éq. 61 62 47

Schéma 32 : Synthèse du donneur 47

Différentes conditions de solvant ⁶⁹ ' ^76"79 (dichlorométane, toluène) ont été testées lors du couplage entre le donneur disaccharide 47 et l'accepteur trisaccharide 38 (Schéma 33). Les deux premières entrées du Tableau 5 montrent, encore une fois, l'efficacité du toluène par rapport au dichlorométhane mais aussi la stabilité de la fonction isopropylidène à -78°C. En revanche lorsque le couplage a été réalisé à plus grande échelle (de l'ordre de 2 g d'accepteur 38), l'accepteur silylé 63 et la dégradation du donneur 47, probablement liées à la faible réactivité du donneur et/ou de l'accepteur, sont observées (Figure 16).

Deux hypothèses ont été émises :

1. Le milieu réactionnel n'est pas assez acide pour permettre l'attaque l'accepteur silylé 63 sur le donneur ;

2. Il n'y a pas assez de donneur dans le milieu réactionnel,

Aucune amélioration n'est observée lorsque le couplage est réalisé en conditions plus acides (0,4 éq de TMSOTf) et, par ailleurs, l'addition de donneur supplémentaire conduit à sa dégradation immédiate. Ces deux hypothèses ne permettant pas d'éluder le problème de réactivité du donneur 47, un autre facteur, l'influence de la température a donc été étudié. Effectivement, les entrées 3 et 4 du Tableau 5 indiquent qu'à -40 ⁰ C ou à -20 ⁰ C, ni accepteur de départ 38 ni accepteur silylé 63 ne sont observés mais, à nouveau, comme pour les couplages précédents, la perte d' isopropylidène est bien réelle. En revanche, si la température est trop augmentée, le rendement chute. L'analyse par RMN, HMBC notamment, a permis de confirmer la structure du pentasaccharide 64 et du pentasaccharide 65, ayant perdu l' isopropylidène. De nouveau, la glycosylation précède la perte de cette fonction.

Entrée Solvants Température Temps de réaction Accepteur 38 restant 64 65

1 DCM -78°C Ih. 30% 42% n.o.

2 Toluène -78°C Ih. 16% 63% n.o.

3 Toluène -40 ⁰ C 30 min. n.o. 66% 22%

4 Toluène -20 ⁰ C 30 min. n.o. 66% 13%

* n. o. : non observé.

Tableau 5 : étude du couplage entre le donneur 47 et l 'accepteur 38 En conclusion, si la température est trop faible, le donneur s'hydrolyse plus vite qu'il ne réagit avec l'accepteur 38 ou l'accepteur silylé 63 et, à l'inverse, si la température est trop élevée, le couplage a bien lieu mais avec un rendement qui décroit avec l'augmentation de la température. Le contrôle de la température est donc déterminant comme illustré dans le Schéma 33. De plus, pour limiter la dégradation de l'isopropylidène lors du couplage, un autre facteur a été étudié : le temps de réaction avant neutralisation du milieu réactionnel. Le entrées 3 et 5 du Tableau 5 permettent de confirmer que ce facteur influence la perte de l'isopropylidène. La condensation entre le donneur 47 et l'accepteur 38 est donc réalisée dans le toluène en présence de TMSOTf (0,3 éq.) et de tamis moléculaire à -40°C. Après 10 min (entrée 5 du Tableau 5), la réaction est stoppée et le pentasaccharide 64, doté de la configuration α attendue ( ¹ Jc _H = 167.6 Hz), est isolé avec un rendement de 75%.

Schéma 33 : Mécanisme du couplage entre le donneur 47 et l'accepteur 38 La déprotection du groupement lévulinoyle du pentasaccharide 64 est réalisée en milieu tamponné (pyridine/ AcOH) en présence d'hydrazine monohydraté. ⁸⁹ ' ^97"101 L'alcool 66 est obtenu avec un rendement de 94%. Traité par une solution aqueuse de TFA 50% dans le dichlorométhane à O ⁰ C, ⁸⁰ ' ⁸¹ ce dernier conduit au pentasaccharide 67 avec un rendement de 84% (Schéma 34).

64 66 67

Schéma 34 : Délévulinoylation de l 'ester de lévulinoyle 64 suivi de sa désacétalation

10. Déprotection finale des pentasaccharides en série A réducteur La possibilité de clivage de la fonction acétyle de 56 dans des conditions acides ou basiques, excluant l'hydrogénolyse acide et Phydrodéchloration basique, une mise au point des conditions adéquates d'hydrogénation a été effectuée. L'utilisation de la haute pression (50 bars) a été préférée à une étude sur le choix du catalyseur (Schéma 35).

Schéma 35 : Hydrogénolyse du pentasaccharide 56

Après deux jours, l'intermédiaire chloroacétamide 68 a été observé lors du suivi par spectrométrie de masse (M = 940.3429, trouvé m/z = 940.3425) et par RMN (singulet à 4,1 ppm en proton et un signal à 42,5 ppm en carbone) (Schéma 35). Après huit jours supplémentaires, la conversion en acétamide est totale. Le glycoside de propyle V est isolé avec un rendement de 70%. L'autre possibilité est d'utiliser le pentasaccharide 67 issu du

couplage avec le synthon disaccharide 47. Le glycoside de propyle attendu V est obtenu, dans les mêmes conditions, avec un rendement de 75% (Schéma 36).

Schéma 36 : Hydrogénolyse du pentasaccharide 67 Procédé 6 :

L'invention se rapporte encore au procédé de préparation du composé VI pentasaccharide BCD(E)A (VI) tel que défini dans la liste Ll comprenant les étapes suivantes : condensation du disaccharide donneur 46 avec le trisaccharide accepteur 38 conduisant au pentasaccharide 52 de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1 ,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, Pacétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, préférentiellement dans le toluène, en présence de TMSOTf à 0,3 éq. et à -78 °C (schéma 27) ; désacétylation du pentasaccharide 52 conduisant au pentasaccharide 55 de préférence en conditions basiques, notamment avec du K ₂ CO ₃ (schéma 28) ; désacétylation du pentasaccharide 55 conduisant au pentasaccharide 57 de préférence en solution aqueuse de TFA 50% dans le dichlorométhane à 0°C (schéma 29) ; déprotection du pentasaccharide 57 pour conduire au pentasaccharide BCD(E)A de préférence sous pression d'hydrogène dans l'alcool, par exemple Féthanol, en présence de dérivé de palladium, tel que le palladium sur charbon (schéma 37). En effet, par analogie au procédé précédent, l'hydrogénation sous 50 bars de pression, de l'alcool 57 conduit au glycoside de propyle VI, isolé avec un rendement de 71% (Schéma 37).

Schéma 37 : Hydrogénolyse du pentasaccharide 57 11. Conclusion

Dans cette partie, la synthèse de six oligosaccharides en série A réductrice, mono- acétylé ou non correspondant aux sérotypes 3 a ou X de S. flexneri, incluant un di-, un tri-, deux tétra-, et deux pentasaccharides ainsi qu'une étude comparative d'accès à la cible pentasaccharide V ont été réalisées. D'après le Schéma 38, l'accès à cette cible, issu du couplage entre le trisaccharide accepteur 38 et le disaccharide donneur 46, est un peu plus efficace que celle utilisant le donneur 47. Mais l'avantage de la seconde voie de synthèse est l'allongement possible du synthon disaccharide 61 ainsi que du pentasaccharide 64, en position réductrice ou non-réductrice, pour accéder à des cibles oligosaccharidiques de plus grande taille.

Schéma 38 : Bilan pour l'accès à la cible B AcCD(E)A V Mise en oeuyre expérimentales des procédés 1 à 6 Procédé 1 :

> AHyI α-L-rhamnopyranoside ⁴² 28 :

Chemical Formula: CgH-jgOs

Exact Mass: 204,0998 Molecular Weight: 204,2203

Du chlorure d'acétyle (19,6 mL, 270,0 mmol, 2,5 éq.) est ajouté par portions à de l'alcool allylique (250 mL) à 0°C durant 15 min, puis le L(+)-rhamnose monohydrate commercial 27 (20,0 g, 110,0 mmol) est ajouté au milieu réactionnel. Le milieu réactionnel est ensuite chauffé à 70°C pendant 2,5 h puis à 4O ⁰ C durant une nuit. Le suivi de la réaction par CCM (DCM/MeOH, 9/1) montre la disparition de 27 (Rf= 0,1) et la présence d'un produit majoritaire moins polaire (Rf= 0,45). Le milieu réactionnel est refroidi à 0 ⁰ C ₅ neutralisé par addition de NaHCθ ₃ puis filtré sur célite et enfin concentré à Févaporateur rotatif. Les volatiles sont coévaporés avec du Toi (2 x 100 mL) pour conduire à une huile jaune. L'huile jaune est purifiée par chromatographie sur gel de silice (DCM/MeOH, 98/2→8/2) pour

_γj 8 000687

obtenir un mélange du glycoside d'allyle 28 _α (19,8 g, 88%) et son anomère 28 _β (2,4 g, 11%) sous forme d'une huile jaune.

28 _α : Rf= 0.45 (DCM/MeOH, 9/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £5.92 (m, IH ₅ CH=), 5.30 (m, IH, J _trans = 15.7 Hz, =CH ₂ ), 5.20 (m, IH,

J _C i _S = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 4.81 (bs, IH, H-I), 4.5 (bs, IH, OH), 4.19-4.10 (m, 2H, H _A n, OH), 3.98

(m, IH, HAU), 3.96 (bs, IH, H-2), 3.79 (m, IH, H-3), 3.68 (dq, IH, J _4;5 = 9.4 Hz, H-5), 3.50

(m, 2H, H-4, OH), 1.32 (d, 3H, J _5;6 = 6.2 Hz, H-6).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ 134.0 (CH=), 118.0 (=CH ₂ ), 99.3 (C-I, ¹ Jc _H = 164.2 Hz), 73.1 (C-4),

72.4 (C-3), 71.5 (C-2), 68.5 (C-5), 68.4 (C _A n), 17.9 (C-6).

> AUyI 2,3-^-isopropylidène-α-L-rhamnopyranoside ⁴² 29 :

Chemical Formula ^* C12H20O5

Exact Mass 244,1311 MolecularWeight 244,2842

Le glycoside d'allyle 28 (3,5 g, 17,1 mmol) est dissous dans un mélange d'acétone (16 mL) et de 2,2-diméthoxypropane (6,9 mL, 51 ,3 mmol, 3 éq.) agité sous atmosphère inerte à TA. De l'APTS (162 mg, 0,84 mmol, 0,05 éq.) est additionné et l'agitation est poursuivie pendant 2 h Le suivi par CCM (DCM/MeOH, 9/1) montre la disparition de 28 (Rf= 0,45) et la formation d'un composé moins polaire majoritaire (Rf= 0,85). Le milieu réactionnel est neutralisé par addition de triéthylamine (1 mL) puis concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune est reprise dans du DCM (100 mL) et lavée avec de l'H ₂ O (3 x 50 mL). Les phases organiques sont regroupées, séchées sur filtre séparateur de phases et concentrées à l'évaporateur rotatif pour conduire à une huile jaune. L'huile jaune est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 9/l→6/4) pour obtenir l'alcool 29 sous forme d'une huile jaune (3,5 g,

Rf= 0.85 (DCM/MeOH, 9/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £5.89 (m, IH, CH=), 5.32 (m, IH, J _trans = 15.6 Hz, =CH ₂ ), 5.22 (m, IH, J _cis = 10.6 Hz, =CH ₂ ), 5.01 (bs, IH, H-I), 4.19 (m, IH, HAU), 4.16 (d, IH, J ₁₎₂ = 0.6 Hz, J _2>3 = 5.8 Hz ₅ H-2), 4.09 (pt, IH, J _3,4 = 5.8 Hz, H-3), 4.01 (m, IH, H _AU ), 3.68 (dq, IH, J ₄ , ₅ = 9.3 Hz, H-5), 3.39 (m, IH, H-4), 2.9 (s, IH, OH), 1.53 (s, 3H, H _iPr ), 1.35 (s, 3H, H _iPr ), 1.32 (d, 3H, J _5j6 ≈ 6.3 Hz, H-6).

^

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ 134.0 (CH=), 118.2 (=CH ₂ ), 110.0 (C _iPr ) ₅ 96.6 (C-I), 78.5 (C-3), 76.2 (C-2), 74.7 (C-4), 68.3 (C _A1 i), 66.2 (C-5), 28.3 (C _iPr ), 26.5 (C _iPr ), 17.8 (C-6). > AUyI 4-O-benzyl-2,3-^-isopropyIidène-α-L-rhamnopyranoside ² 30 :

Chemical Formula: C^g^gOs

Exact Mass: 334,1780 Molecular Weight: 334,4067

Dans un ballon tricol, l'alcool 29 (3,5 g, 14,4 mmol) est dissous dans du DMF (80 mL) sous argon et refroidi à -5°C puis du NaH 60% dans l'huile (1,7 g, 41,8 mmol, 2,9 éq.) est additionné par petites fractions. L'agitation est poursuivie à TA pendant 1 h Après retour à - 5°C, le bromure de benzyle (1,9 mL, 15,8 mmol, 1,1 éq.) est additionné goutte à goutte. Après 4 heures d'agitation à TA, le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 8/2) montre la formation d'un composé moins polaire majoritaire (Rf= 0,7). Après avoir placé le ballon dans un bain de glace, du MeOH (1,2 mL) est additionné lentement et l'agitation est maintenue pendant 2 h à TA. De l'H ₂ O est ajoutée (20 mL) puis le milieu réactionnel est transféré dans une ampoule à décanter et la phase aqueuse est extraite à l 'acétate d'éthyle (3 x 100 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées successivement à l'H ₂ O (2 x 20 mL), à HCl 5% (2 x 20 mL), à NaCl _sat (2 x 20 mL), puis séchées sur filtre séparateur de phases et enfin concentrées à Févaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 99/l→8/2) pour obtenir le composé 30 sous forme d'une huile jaune (3,9 g, 82%).

Rf= 0,7 (Chex/EtOAc, 8/2).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), (57.41-7.31 (m, 5H, CH _Ph ), 5.92 (m, IH, CH=), 5.33 (m, IH, J _tran s = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.23 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.05 (bs, IH, H-I), 4.94 (d, IH, J = 11.6 Hz, H _Bn ), 4.67 (d, IH, H _Bn ), 4.32 (pt, IH, J _3;4 = 6.8 Hz, H-3), 4.20 (m, 2H, H-2, H _A n), 4.01 (m, IH, HAπ), 3.76 (dq, J _4j5 = 9.8 Hz, IH, H-5), 3.25 (pt, IH, H-4), 1.54 (s, 3H, H _iPr ), 1.41 (s, 3H, Hi _P r), 1.32 (d, 3H ₅ J _5,6 = 6.3 Hz, H-6).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), (5138.8 (C _Ph ), 134.1 (CH=), 128.8-128.0 (CH _Ph ), 118.1 (=CH ₂ ), 109.5 (Ci _Pr ), 96.5 (C-1, ¹ Jc _H = 167.8 Hz), 81.5 (C-4), 79.1 (C-3), 76.5 (C-2), 73.3 (C _Bn ), 68.2 (C _A ,,), 64.8 (C-5), 28.4 (C _iPr ), 26.7 (C _iPr ), 18.2 (C-6).

> AHyI 4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranoside ⁴² 26 :

Chemical Formula: C15H22O5

Exact Mass: 294,1467 Molecular Weight: 294,3429

Voie 1 : Le composé 30 (3,9 g, 11,8 mmol) est dissous dans une solution d'acide acétique à 80% aq. (60 mL) et porté à 60°C. Après 3 h de réaction, le suivi par CCM (DCM/EtOAc, 1/1) montre la formation d'un composé plus polaire majoritaire (Rf= 0,6). La réaction est refroidie à TA puis concentrée et coévaporée avec un mélange Tol/Chex (1/1, 3 x 100 mL). Une recristallisation est réalisée dans un mélange iPr ₂ O/EP (8/2, 10 mL). Après une nuit en chambre froide, les cristaux blancs sont filtrés et lavés par un mélange 1Pr ₂ CVEP (1/1, 10 mL) pour obtenir le diol 26 sous forme de cristaux blancs (2,5 g, 72% soit 44% sur 4 étapes). Voie 2 : Du chlorure d'acétyle (19,6 mL, 270,0 mmol, 2,5 éq.) est ajouté par portions à de l'alcool allylique (250 mL) à 0°C durant 15 min, puis le L(+)-rhamnose monohydrate commercial 27 (20,0 g, 110,0 mmol) est ajouté au milieu réactionnel. Le milieu réactionnel est ensuite chauffé à 70°C pendant 2,5 h puis à 40°C durant une nuit. Le suivi de la réaction par CCM (DCM/MeOH, 9/1) montre la disparition de 27 (Rf= 0,1) et la présence d'un produit majoritaire moins polaire (Rf= 0,45). Le milieu réactionnel est refroidi à 0 ⁰ C, neutralisé par addition de NaHCO ₃ puis filtré sur célite et enfin concentré à l'évaporateur rotatif. Les volatiles sont coévaporés avec du Toi (2 x 100 mL) pour conduire à une huile jaune (27,6 g).

Le brut réactionnel obtenu (27,6 g, 110,0 mmol) est dissous dans un mélange d'acétone (121 mL) et de 2,2-diméthoxypropane (40,5 mL, 330,0 mmol, 3 éq.) agité sous atmosphère inerte à TA. De l'APTS (208 mg, 1,1 mmol, 0,01 éq.) est additionné et l'agitation est poursuivie pendant 2 h Le suivi par CCM (DCM/MeOH, 9/1) montre la disparition de 28 (Rf= 0,45) et la formation d'un composé moins polaire majoritaire (Rf = 0,85). Le milieu réactionnel est neutralisé par addition de triéthylamine (2 mL) puis concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune est reprise dans du DCM (200 mL) et lavée avec de l'H ₂ O (3 x 100 mL). Les phases organiques sont regroupées, séchées sur filtre séparateur de phases et concentrées à l'évaporateur rotatif pour conduire à une huile jaune (25,1 g).

Dans un ballon tricol, le brut réactionnel obtenu (25,1 g, 110,0 mmol) est dissous dans du DMF (320 mL) sous argon et refroidi à -5°C puis du NaH 60% dans l'huile (13,2 g, 330,0 mmol, 3 éq.) est additionné par petites fractions. L'agitation est poursuivie à TA pendant 1 h Après retour à -5°C, le bromure de benzyle (25,5 mL, 210,0 mmol, 2 éq.) est additionné goutte à goutte. Après 4 heures d'agitation à TA, le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 8/2) montre

_gQ

la formation d'un composé moins polaire majoritaire (Rf= 0,7). Après avoir placé le ballon dans un bain de glace, du MeOH (9 mL) est additionné lentement et l'agitation est maintenue pendant 2 h à TA. De l'H ₂ O est ajoutée (50 mL) puis le milieu réactionnel est transféré dans une ampoule à décanter et la phase aqueuse est extraite à l'acétate d'éthyle (3 x 250 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées successivement à l'H ₂ O (2 x 50 mL), à HCl 5% (2 x 50 mL), à NaCl _sat (2 x 50 mL), puis séchées sur filtre séparateur de phases et enfin concentrées à Pévaporateur rotatif pour conduire à une huile jaune (35,0 g). Le brut réactionnel obtenu (35,0 g, 110,0 mmol) est dissous dans une solution d'acide acétique à 80% aq. (280 mL) et porté à 6O ⁰ C. Après 3 h de réaction, le suivi par CCM (DCM/EtOAc, 1/1) montre la formation d'un composé plus polaire majoritaire (Rf= 0,6). La réaction est refroidie à TA puis concentrée et coévaporée avec un mélange Tol/Chex (1/1, 3 x 250 mL). Une recristallisation est réalisée dans un mélange iPr ₂ O/EP (8/2, 100 mL). Après une nuit en chambre froide, les cristaux blancs sont filtrés et lavés par un mélange iPr ₂ O/EP (1/1). Les eaux mères sont concentrées et purifiées par chromatographie sur gel de silice (DCM/EtOAc, 9/1 — >7/3). L'huile jaune obtenue est recristallisée dans un mélange iPr ₂ O/EP pour obtenir le diol 26 sous forme de cristaux blancs (25,8 g, 78%). Rf= 0,6 (DCM/EtOAc, 8/2).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.40-7.33 (m, 5H, CH _Ph ), 5.88 (m, IH, CH=), 5.31 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.20 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 4.83 (s, IH, H-I), 4.81 (d, IH, J= 11.3 Hz, H _B n), 4.72 (d, IH, H _Bn ), 4.19 (m, IH, H _A n), 4.00-3.96 (m, 2H ₅ H-3, H _A n), 3.95 (bs, IH, H-2), 3.78 (dq, J _4,5 = 9.4 Hz, IH, H-5), 3.37 (pt, IH, J _3,4 = 9.0 Hz, H-4), 3.05 (bs, 2H, OH), 1.31 (d, 3H, J _5,6 = 6.3 Hz, H-6).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £138.6 (C _Ph ), 134.1 (CH=), 129.0-128.4 (CH _Ph ), 117.7 (=CH ₂ ), 98.8 (C-I, ¹ J _CH = 168.2 Hz), 82.1 (C-4), 75.5 (C _Bn ), 71.8, 71.6 (C-2 ^* , C-3 ^* ), 68.3 (C _A π), 67.6 (C-5), 18.4 (C-6).

> Trichloracétimidate de 2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α/β-D-glucopyranose ³⁵ 33 :

Chemical Formula: C ₃₆ H ₃₆ Cl ₃ NO ₆

Exact Mass: 683,16 MolecularWeight: 685,03

Le 2,3,4,6-tétra-O-benzyl-β-D-glucopyranose commercial 32 (25,0 g , 46,3 mmol) sont dissous dans du DCM (250 mL). Sont alors ajoutés du K ₂ CO ₃ (25,0 g, 180,0 mmol, 3,9 éq.) préalablement séché une nuit à 300 ⁰ C ₅ puis du trichloroacétonitrile (25,0 mL, 250,0 mmol, 5,4 éq.). Le milieu réactionnel est laissé sous forte agitation pendant 3 h à TA. La réaction est

suivie par CCM (Chex/EtOAc + 5% NEt ₃ , 8/2). Bien qu'elle ne soit pas terminée, la réaction est stoppée afin d'éviter l'isomérisation du trichloroacétimidate β (Rf= 0,6) en α (Rf= 0,7).

Le milieu réactionnel est filtré, concentré sous vide. Le trichloroacétimidate est obtenu par recristallisation dans un mélange iP^O/EP (6/4, 100 mL). La première filtration, après 1 h dans un bain de glace, permet de récupérer le produit de départ sous forme de flocons (1,1 g,

2 mmol), et la seconde, après une semaine en chambre froide, le produit d'arrivée sous forme de billes. Il s'agit majoritairement de l'anomère 33 _β (22,4 g, 71%) et minoritairement de

Panomère 33 _α (1,7 g, 5%).

33p : Rf = 0,6 (Chex/EtOAc, 8/2).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ : β : 8.72 (s, IH, NH), 7.36-7.29 (m, 2OH, CH _Ph ), 5.83 (d, IH, J _1-2 = 7.3

Hz, H-I), 4.98-4.55 (m, 8H, H _Bn ), 3.80-3.74 (m, 5H, H-2, H-3, H-4, H-6a, H-6b), 3.67 (m,

IH, H-5).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ : β : 161.6 (C=NH), 138.8-138.3 (C _Ph ), 128.7-127.9 (CH _Ph ), 98.7 (C-I,

¹ J _CH = 167.2 Hz), 84.9 (C-4), 81.3 (C-3), 77.7 (C-2), 76.3 (C-5), 76.0, 75.4, 75.3, 73.8 (4C,

C _Bn ), 68.6 (C-6).

> Allyl 2-0-acétyl-4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranoside ⁴ 31 :

> Allyl (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-2-O-ac étyl-4-O-benzyl- α-L-rhamnopyranoside' ¹ 35 :

> Allyl (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-4-O-be nzyl-α-L- rhamnopyranoside 21 :

> Allyl (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-β-D-glucopyranosyl)-(l→3)-4-O-be nzyl-α-L- rhamnopyranoside ⁴⁵ 36 :

Chemical Formula Cigh^O _β Chemical Formula Cs2H5gθ-| -] Chemical Formula CsoHsgO-io Chemical Formula C50H56O10

Exact Mass 336,1573 Exact Mass 858,3979 Exact Mass 816,3873 Exact Mass 816,3873

MolecuIarWeight 336,3796 Molecular Weight 859,0103 Molecular Weight 816,9736 MolecularWeight 816,9736

L'orthoacétate de triméthyle (6,6 mL, 51,7 mmol, 1,9 éq.) et l'APTS (72 mg, 400 μmol, 0,014 éq.) sont ajoutés au diol 26 (8,0 g, 27,2 mmol) en solution dans Facétonitrile (15 mL). Le milieu réactionnel est agité à TA et la réaction est suivie par CCM (Tol/EtOAc, 9/1, DCM/EtOAc, 1/1). Après 1 h, la transformation du diol 26 (Rf= 0,5 dans DCM/EtOAc, 1/1) en orthoester moins polaire (Rf= 0,6 dans Tol/EtOAc, 9/1) est totale et le ballon est plongé

^

dans un bain de glace. L'agitation est maintenue pendant 10 min, puis de l'acide acétique 80% aqueux (15 mL) sont ajoutés. Après 1 h sous forte agitation à TA, le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2) indique la transformation complète de l' orthoester en un composé plus polaire (Rf= 0,25). Le milieu réactionnel est repris à l'eau froide (50 mL) et la phase aqueuse est extraite rapidement au DCM (3 x 100 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaCl _sat (3 x 20 mL), filtrées sur filtre séparateur de phases et concentrées à l'évaporateur rotatif. L'huile incolore (9,1 g, 98%) est engagée directement dans l'étape suivante après contrôle par RMN ¹ H. Ce dernier indique la présence de l'accepteur 31 voulu et du régioisomère acétylé en position 3 dans un rapport 97/3. Rf= 0,25 (Tol/EtOAc, 8/2).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), J7.38-7.32 (m, 5H, CH _Ph ), 5.88 (m, IH ₅ CH=), 5.31 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.21 (m, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.14 (dd, IH, Ji _,2 = 1.7 Hz, J ₂₃ = 3,6 Hz, H-2), 4.86 (d, IH, J= 11.1 Hz, H _Bn ), 4.80 (d,- lH, H-I), 4.73 (d, IH, H _Bn ), 4.17 (m, 2H, H-3, H _A n), 3.98 (m, IH, H _A n), 3.78 (dq, IH, J _4>5 = 9,4 Hz ₅ H-5), 3.37 (pt, IH, J ₃₎₄ = 9.5 Hz, H-4), 2.19 (s, 3H, H _Ac ), 1-37 (d, 3H, J _5fi ^≈ 6.3 Hz, H-6).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £168.9 (C _Ac ), 136.3 (C _Ph ), 131.6 (CH=), 126.6-126.0 (CH _Ph ), 115.6 C=CH ₂ ), 94.6 (C-I), 79.9 (C-4), 73.4 (C _Bn ), 70.9 (C-2), 68.3 (C-3), 66.2 (C _A H), 65.6 (C-5), 19.2 (C _Ac ), 16.1 (C-6).

Du TMSOTf (98,0 μL, 550 μmol, 0,02 éq.) est additionné à une solution de l'huile brute obtenue (9,1 g, 27,2 mmol) dans du Toi (112 mL), agitée sous argon à -78°C. Après 30 min sous agitation à cette température, une solution du donneur 33 (22,4 g, 32,6 mmol, 1,2 éq.) dans un mélange Tol/DCM (2/1, 24 mL) est ajoutée goutte à goutte. Le bain éthanol- carboglace est retiré et l'agitation est poursuivie pendant 1 h, temps au bout duquel le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 9/1, Chex/EtOAc, 73/27 et Tol/EtOAc, 8/2) indique la disparition de l'accepteur 31 (Rf = 0,15 et 0,2,- respectivement) et l'apparition d'un composé moins polaire (Rf= 0,4 et 0,55, respectivement). La réaction est stoppée par l'addition de triéthylamine (0,2 mL) puis le milieu réactionnel est concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée grossièrement par flash-chromatographie (Tol/EtOAc, 97/3→94/6). Le mélange d'anomères 35 _α et 35 _β sous forme d'une huile jaune (21,0 g, 85/15, αE/βE, 90%) est engagée dans l'étape suivante sans autre purification. Rf= 0,55 (Chex/EtOAc, 73/27).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ: α : 7.46-7.15 (m, 25H, CH _Ph ), 5.88 (m, IH, CH=), 5.43 (dd, IH, H-2 _A ), 5.31 (m, IH, Jtran _s = 17.3 Hz, =CH ₂ ) ₅ 5.24-5.21 (m, 2H ₅ H-1 _E , =CH ₂ ), 5.06 (d, IH ₅ J = 11.0

_g

Hz, H _Bn ), 4.99 (d ₅ IH, J= 10.2 Hz, H _Bn ), 4.92 (d, IH, H _Bn ), 4.89 (d, IH, H _Bn ), 4.82 (d, IH, J ₁₂ = 1.6 Hz ₃ H-IA), 4.77 (d, IH, J= 11.9 Hz, H _8n ), 4.72 (d, IH, H _Bn ), 4.65 (d, IH, H _Bn ), 4.63 (d, IH, H _B ,0, 4.52 (d, IH, J= 11.0 Hz ₅ H _8n ), 4.40 (d, IH, J = 12.1 Hz, H _Bn ), 4.37 (dd, IH, J ₂ , ₃ =

3.3 HZ, J ₃ , ₄ = 9.6 HZ, H-3 _A ), 4.19 (m _O ver.aped, IH, H _A11 ), 4.14 (pt _0V erlaped, IH, J _3;4 = 9.5 HZ, H-3 _E ),

4.10 (nioveriaped, IH, H-5 _E ), 4.00 (m, IH, H _A I _I ), 3.84 (dq, IH, J ₄ , ₅ = 9.4 Hz, H-5 _A ), 3.85 (pt, IH, J _4>5 = 9.4 Hz, H-4 _E ), 3.68-3.61 (m, 3H, H-2 _E , H-6a _E , H-4 _A ), 3.57 (dd, IH, J ₅ , _6b = 1.8 Hz, J _6a , ₆ b = 10.9 Hz, H-6b _E ), 1.99 (s, 3H, H _Ac ), 1.43 (d, 3H, J _5,6 = 6.3 Hz, H-6 _A ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ : β : 170.5 (C _Ac ), 138.9-137.7 (C _Ph ), 133.6 (CH=), 128.6-127.4 (CHPh), 117.5 (=CH ₂ ), 96.7 (C-IA, V _CH = 170.4 Hz), 92.7 (C-1 _E , ¹ J _C H = 167.0 Hz), 82.2 (C-3 _E ), 79.9 (C-4 _A ), 79.4 (C-2 _E ), 77.9 (C-4 _E ), 76.2, 75.5, 75.0, 73.3, 73.0 (5C, C _Bn ), 72.2 (C-3 _A ), 70.2 (C- 5 _E ), 68.3 (C-6 _E ), 68.1 (C _A11 ), 68.0 (C-5 _A ), 67.9 (C-2 _A ), 20.9 (C _Ac ), 18.0 (C-6 _A ). Après addition de NaOMe 0,5 M (53,8 mL, 26,9 mmol, 1,1 éq.) à l'huile obtenue (21,0 g, 24,5 mmol) en solution dans un mélange DCM/MeOH (11/8, 250 mL), le milieu réactionnel est porté à reflux. Après 2 h, la réaction n'évoluant plus (Tol/EtOAc, 9/1, Chex/EtOAc, 73/27), elle est arrêtée Après retour à TA, il est neutralisé par addition de résine échangeuse d'ion DOWEX (H ⁺ ), puis filtré sur fritte. La résine est lavée avec un mélange DCM/MeOH et les solvants sont évaporés. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc 92/8→9/l) pour conduire par ordre d'élution au disaccharide 21 désiré (Rf= 0,3 et 0,45, 13,6 g, 61% sur trois étapes) puis au stéréoisomère β 36 (Rf= 0,15 et 0,35,

3.4 g, 15% sur trois étapes). Les deux disaccharides 21 et 36 sont isolés sous forme d'huiles incolores. Les produits de condensation sont obtenus avec un rendement global de 76% sur trois étapes, dans un rapport α/β de 8/2.

21 : Rf = 0,45 (Chex/EtOAc, 73/27)

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.25-7.02 (m, 25H, CH _Ph ), 5.78 (m, IH, CH=), 5.18 (m, IH, J _tran s = 17.3

Hz, =CH ₂ ), 5.10 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 4.85 (d, IH, J = 11.0 Hz, H _Bn ), 4.81 (m, 3H,

H-1 _E , H-1 _A , H _Bn ), 4.73 (d, 2H, J= 11.5 Hz, He _n ), 4.60 (m, 3H, H _Bn ), 4.39 (d, 2H, J= 12.0 Hz,

H _Bn ), 4.30 (d, IH, H _Bn ), 4.07 (m, IH, H _A π), 3.99 (pt, IH, H-3 _E ), 3.95-3.92 (m, 2H, H-3 _A , HAII),

3.90-3.83 (m, 2H, J _4>5 = 9.1 Hz, H-2 _A , H-5 _E ), 3.68 (dq, IH, J _4>5 = 9.3 Hz, H-5 _A ), 3.63 (pt, IH,

J _3;4 = 9.7 Hz, H-4 _E ), 3.51 (dd, IH, J _1;2 = 3.6 Hz, J _2;3 = 9.6 Hz, H-2 _E ), 3.41 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.4

Hz, H-4 _A ), 3.37 (dd, IH, J _5j6b = 2.7 Hz, J _6a,6b = 10.9 Hz, H-6b _E ), 3.30 (bs, IH, OH), 3.24 (dd,

IH, J ₅ , _6a = 1.8 Hz, H-6a _E ), 1.27 (d, 3H, J _5>6 = 6.2 Hz, H-6 _A ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), S : 139.0-137.9 (C _Ph ), 134.2 (CH=), 129.4-127.9 (CH _Ph ), 117.7 (=CH ₂ ),

98.6 (C-1 _E , ¹ JcH= 166.3 Hz), 94.4 (C-I _A , ¹ J ₀ H = 166.9 Hz), 82.8 (C-3 _E ), 79.7 (C-4 _A ), 79.3 (C-

2 _E ), 78.1 (C-4 _E ), 77.7 (C-3 _A ), 77.0, 76.0, 75.3, 74.7, 73.8 (5C, C _0n ), 71.1 (C-5 _E ), 68.3 (C-6 _E ), 68.2 (C _AH ), 67.8 (C-2 _A ), 67.6 (C-5 _A ), 18.3 (C-6 _A ). 36 : Rf = 0,35 (Chex/EtOAc, 73/27)

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), J7.43-7.28 (m, 25H, CH _Ph ), 5.95 (m, IH, CH=), 5.36 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.26 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.04 (d, IH, J= 11.1 Hz, H _Bn ), 4.98 (m, 2H, H _Bn ), 4.93 (bs, IH, H-I _A ), 4.90 (m, 2H, H _Bn ), 4.81 (d, IH, J _1;2 = 7.5 Hz, H-1 _E ), 4.81 (m, IH, J = 11.2 Hz, H _Bn ), 4.65 (m, 4H, H _Bn ), 4.26 (m, IH, H _Aπ ), 4.25-4.21 (m, 2H, H-3 _A , H-2 _A ), 4.05 (m, IH, H _A ,0, 3.89 (m, IH, H-5 _A ), 3.80-3.63 (m, 6H, H-6a _E , H-3 _E , H-4 _E , H-6b _E , H-4 _A , H-2 _E ), 3.60 (m, IH, H-5 _E ), 3.33 (bs, IH, OH), 1.40 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.3 Hz, H-6 _A ). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ : 138.9-138.3 (C _Ph ), 134.4 (CH=), 129.5-127.9 (CH _Ph ), 117.8 (=CH ₂ ), 103.0 (C-1 _E , ¹ Jc _H = 159.5 Hz) ₃ 99.1 (C-1 _A , ¹ Jc _H = 167.6 Hz), 85.3 (C-3 _E ), 82.6 (C-2 _E ), 81.4 (C-3 _A ), 80.5 (C-4 _A ), 78.2 (C-4 _E ), 76.0, 75.5, 75.4, 75.1 (4C, C _Bn ), 75.0 (C-5 _E ), 74.0 (C _Bn ), 70.5 (C-2 _A ), 69.3 (C-6 _E ), 68.3 (C _A11 ), 68.0 (C-5 _A ), 18.4 (C-6 _A ).

> Propyl α-D-glucopyranosyl-(l— >3)-α-L-rhamnopyranoside / :

Chemical Formula: C15H28O10

Exact Mass: 368,1682 Molecular Weight: 368,3768

Du Pd-C 10% (420 mg) est ajouté à une solution dégazée de disaccharide 21 (500 mg, 610 μmol) dans un mélange éthanol (24 mL) et acide acétique (70,0 μL, 1,2 mmol, 2 éq.). La suspension est saturée avec de l'hydrogène à pression atmosphérique et agitée à TA pendant 1 nuit. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 7/1/2 et Chex/EtOAc, 73/27) montre la disparition de 21 (Rf = 1 et 0,45, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf = 0,6 et 0, respectivement). Ensuite le milieu réactionnel est filtré sur célite puis concentré à Pévaporateur rotatif. Le résidu obtenu est purifié sur colonne C-18 (H ₂ OZCH ₃ CN, 100/0→9/l) pour conduire à la cible / sous forme d'un solide blanc (187 mg, 83%). Rf= 0,6 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 7/1/2).

RMN ¹ H (D ₂ O), £5.03 (d, IH, J _lj2 = 3.8 Hz, H-1 _E ), 4.81 (d, IH, J _1;2 = 1.6 Hz, H-1 _A ), 4.10 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 2.2 Hz, H-2 _A ), 3.92 (m, IH, H-5 _E ), 3.80-3.70 (m, 5H, H-3 _A , H-3 _E , H-6a _E , H- 6b _E , H-5 _A ), 3.62 (m, IH, H _Pr ), 3.56-3.45 (m, 3H, H-2 _E , H-4 _A , H _Pr ), 3.42 (pt, IH, J _3>4 = 9.3 Hz, H-4 _E ), 1.63 (sex, 2H, CH ₂ ), 1.27 (d, 3H, J _5,6 = 6.2 Hz, H-6 _A ), 0.88 (t, 3H, J= 7.4 Hz, CH ₃ ).

RMN ¹³ C (D ₂ O), £99.6 (C- 1 _A , ¹ Jc _H = 170.2 Hz), 95.9 (C-1 _E , ¹ JcH = 172.7 Hz), 76.1 (C-3 _A ),

73.3 (C-3E), 72.1 (C-5 _E ), 71.8 (C-2 _E ), 70.7 (C-4 _A ), 70.0 (C _Pr ), 69.8 (C-4 _E ), 69.0 (C-5 _A ), 67.3

(C-2 _A ), 60.7 (C-6 _E ), 22.4 (CH ₂ ), 17.1 (C-6 _A ), 10.3 (CH ₃ ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Naf C ₁₅ H ₂₈ Oi ₀ Na m/z théorique :

391.1580 m/z mesurée : 391.1556 Procédé 2 :

> AlIyI (3,4,6-tri-0-acétyl-2-désoxy-2-trichloroacétamido-β-D-gl ucopyranosyI)-

(l-→2)-[2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l� ��3)]-4-O-benzyl-α-L- rhamnopyranoside 22 :

Chemical Formula: C ₆₄ I^ ₂ CIsNO ₁₈

Exact Mass: 1247,3815 MolecularWeight: 1249,6114

Du TMSOTf (40,0 μL, 230 μmol, 0,2 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 21 ⁴⁵ (920 mg, 1,13 mmol) et de donneur 1 (800 mg, 1,3 mmol, 1,2 éq.) dans du DCM (24 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (1,0 g), agitée sous argon à -78°C. Après 3 h sous agitation, le bain éthanol-carboglace est retiré et l'agitation est poursuivie pendant 30 min, temps au bout duquel le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3) indique la disparition de l'accepteur (Rf ≈ 0,5) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,2). La réaction est stoppée par l'addition de triéthylamine (0,2 mL) puis le milieu réactionnel est filtré puis concentré à Pévaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc^ 8/2→7/3) pour obtenir le glycoside d'allyle 22 sous forme d'un solide blanc (1,3 g, 92%). Rf= 0,2 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.40-7.03 (m, 26H, NH, CH _Ph ), 5.88 (m, IH, CH=), 5.29 (m, IH, Jt _ran s = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.20 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.22-5.16 (m, 3H ₅ H-1 _E , 2H _Bn ), 5.06 (s, 2H, H _Bn ), 5.01 (pt, IH, J _3,4 = 9.7 Hz, H-4 _D ), 4.85 (d, IH, J _1;2 = 1.5 Hz, H-IA), 4.86-4.75 (m, 3H, H-I ₀ , H-3 _D , H _Bn ), 4.72 (d, IH, J= 10.1 Hz, H _Bn ), 4.55 (m, 2H, H _Bn ), 4.45 (d, IH, J= 10.9 Hz, H _Bn ), 4.30 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _Bn ), 4.25-4.12 (m, 4H, H-2 _D , H-3 _A , H-3 _E , H _Aπ ), 4.07-3.99

_g

(m, 3H ₅ H-6a _D , H-6b _Ds H-5 _E ), 3.98-3.90 (m, 2H ₅ H-2 _A , H _A n), 3.91 (dd, IH, J _!;2 = 3.6 Hz, H- 2E), 3.80 (pt, IH ₅ J3, ₄ = 9.2 Hz, H-4 _E ), 3.71 (m, IH ₅ H-5 _A ), 3.45 (pt, IH ₅ J ₃ , ₄ = 9.8 Hz, H-4 _A ) ₅ 3.37 (m, 2H, H-6a _E , H-6b _E ) ₅ 2.94 (m, IH, H-5 _D ), 2.12, 2.02 (2s, 9H ₅ H _Ac ), 1.40 (d, 3H ₅ J ₅ , ₆ ≈ 6.2 Hz, H-6 _A ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 170.6, 170.5, 169.1 (3C, C _Ac ), 161.9 (C _NTCA ), 138.5-137.6 (C _Ph ), 133.7 (CH=), 128.9-127.2 (CH _Ph ), 117.2 (=CH ₂ ), 100.8 (C-I ₀ , ¹ Jc _H = 161.0 Hz), 98.1 (C-1 _A , ¹ J ₀ H = 172.2 Hz) ₅ 94.5 (C-1 _E , ¹ J ₀ H = 165.5 Hz), 92.7 (CCl ₃ ), 83.4 (C-3 _E ), 79.6 (C-4 _A ), 78.9 (C-2 _E ), 78.5 (C-4 _E ), 76.O ₅ 75.1, 74.8 (3C, C _Bn ), 74.6 (C-3 _A ), 74.4 C-2 _A ), 73.9, 73.3 (2C, C _Bn ), 73.1 (C- 3 _D ), 71.6 (C-5 _D ) ₅ 69.8 (C-5 _E ), 68.1 (C-5 _A ), 67.9 (C _A1I ), 67.8 (C-4 _D ), 67.7 (C-6 _E ), 61.6 (C-6 _D ), 55.5 (C-2 _D ), 20.7, 20.6, 20.5 (3C ₅ C _Ac ) ₅ 17.8 (C-6 _A ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Naf C ₆₄ H ₇₂ NO ₁₈ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 1270.3713 m/z mesurée : 1270.3662

[M+NHUf C ₆₄ H ₇₂ NO ₁₈ ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 1265.4159 m/z mesurée : 1265.4180

> Allyl (3-0-acétyl-2-désoxy-4,6-CMsopropyIidène-2-trichIoroacét amido-β-D- glucopyranosyl)-(l— >2)-[2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l-→3) ]-4-0- benzyl-α-L-rhamnopyranoside 23 :

Chemical Formula: C63H72C!3NOie

Exact Mass: 1203,3917 Molecular Weight: 1205,6019

Du TMSOTf (59,0 μL, 330 μmol, 0,3 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 21 ⁴⁵ (900 mg, 1,1 mmol) et de donneur 2 (850 mg, 1,5 mmol, 1,4 éq.) dans du DCM (30 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (0,9 g) ₅ agitée sous argon à -78°C. Après 6 h sous agitation, le bain éthanol-carboglace est retiré et l'agitation est poursuivie pendant 30 min, temps au bout duquel le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3) indique la disparition presque totale de l'accepteur (Rf= 0,5) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,35). La réaction est stoppée par l'addition de triéthylamine (0,1 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par

chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 8/2— >7/3) pour obtenir le glycoside d'allyle 23 sous forme d'un solide blanc (1,2 g, 90%). Rf= 0,35 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), J7.42-7.04 (m, 26H, NH, CH _Ph ), 5.89 (m, IH, CH=), 5.28 (m, IH, J _tra ns ⁼ 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.19 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.13-5.1 (m, 3H, J _1;2 = 3.3 Hz, 2H _Bn , H- IE) ₅ 5.04 (d, 2H, H _13n ), 4.79-4.74 (m, 3H, H-3 _D , H-I _A , H _Bn ), 4.71 (m, 2H, H-I ₀ , H _Bn ), 4.58- 4.51 (m, 2H, H _Bn ), 4.45 (d, IH, J= 10.9 Hz, H _Bn ), 4.29 (d, IH, J=12.0 Hz, H _Bn ), 4.18-4.10 (m, 4H, H-3 _A , H-3 _E , H _AI I, H-2 _D ), 4.07 (m, IH, H-5 _E ), 3.97 (bs, IH, H-2 _A ), 3.94 (m, IH, H _A n), 3.91-3.83 (m, 2H, H-2 _E , H-6a _D ), 3.78 (pt, IH, J _3,4 = 9.4 Hz, H-4 _E ), 3.75-3.64 (m, 3H, H-6b _D , H-5 _A , H-4 _D ), 3,43 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.6 Hz, H-4 _A ), 3.41 (m, IH, H-6a _E , H-6b _E ), 2.71 (m, IH ₅ H- 5 _D ), 2.07 (s, 3H, H _Ac ), 1-45 (s, 3H, H _iPr ), 1.40 (s, 3H, H _iPr ), 1.39 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), S 171.2 (C _Ac ), 162.5 (C _NTCA ), 138.8-137.8 (C _Ph ), 134.1 (CH=), 129.5- 127.7 (CHp ₁₁ ), 117.6 (=CH ₂ ), 101.8 (C-I ₀ , ¹ JcH = 164.4 Hz), 100.1 (C _iPr ), 98.7 (C-1 _A , ¹ JcH = 173.7 Hz), 94.9 (C-1 _E , ¹ J _0H = 168.6 Hz), 93.1 (CCl ₃ ), 83.8 (C-3 _E ), 80.1 (C-4 _A ) 78.9 (2C, C-2 _E , C-4 _E ), 76.5, 75.5, 75.3 (3C, Q _3n ), 74.7 (C-3 _A ), 74.6 (C-2 _A ), 74.4, 73.8 (2C, C _Bn ), 72.8 (C-3 _D ), 71.5 (C-4 _D ), 70.1 (C-5 _E ), 68.6 (C-5 _A ), 68.2 (2C, C _Aπ , C-6 _E ), 67.6 (C-5 _D ), 62.4 (C-6 _D ), 56.8 (C- 2 _D ), 29.4 (C _5P r), 21.3 (C _Ac ), 19.3 (C _jPr ), 18.3 (C-6 _A ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₆₃ H ₇₂ NO ₁₆ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 1226.3814 m/z mesurée : 1226.3860 [M+NH ₄ ] ⁺ C ₆₃ H ₇₂ NO ₁₆ ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 1221.4260 m/z mesurée : 1221.4227 [M+K] ⁺ C ₆₃ H ₇₂ NO ₁₆ ³⁵ Cl ₃ K m/z théorique : 1242.3553 m/z mesurée : 1242.3586

> AIIyI (2-désoxy-2-trichloroacétamido-β-D-gIucopyranosyI)-(l— >2)-[2,3,4,6-tétra- 0-benzyI-α-D-glucopyranosyl-(l-→3)]-4-0-benzyl-α-L-rhamn opyranoside 37 :

Chemical Foπnula: Cs _β Hg _β CIsNO-is

Exact Mass: 1121,3498 Molecular Weight: 1123,5013

Après addition de NaOMe 0,5 M (160 μL, 8,0 μmol, 0,2 éq.) au tri-O-acétyle 22 (500 mg, 40 μmol) en solution dans du MeOH (3 mL), le milieu réactionnel est agité pendant 15 min et son évolution est suivie par CCM (Chex/EtOAc, 1/1, DCM/MeOH, 95/5). Après avoir observé la disparition de 22 (Rf= 0,7 et 0,95, respectivement) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,05 et 0,3, respectivement), le milieu réactionnel est neutralisé par addition de résine échangeuse d'ion DOWEX (H ⁺ ), puis filtré sur fritte. La résine est lavée avec un mélange DCM/MeOH et les solvants sont évaporés. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (DCM/MeOH, 99/l→96/4) pour conduire au triol 37 sous forme d'un solide blanc (420 mg, 94%). Rf= 0,3 (DCM/MeOH, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.38-7.06 (m, 26H, NH, CH _Ph ), 5.88 (m, IH, CH=), 5.29 (m, IH, J _tran s = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.20 (m, IH, J _C i _S = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.10 (d, IH, J _1;2 = 3.7 Hz, H-1 _E ), 5.07 (m, 3H ₅ J= 10.0 Hz, H _Bn ), 4.90-4.87 (m, 2H, H-1 _A , H _Bn ), 4.79-4.70 (m, 2H, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.62 (d, IH, J _1;2 = 8.3 Hz, H-1 _D ), 4.61-4.46 (m, 3H, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.30 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _Bn ), 4.17-4.09 (m, 4H, H-3 _A , H-5 _E , H _A ,i, H-3 _E ,), 4.01 (m, 2H, H-2 _A , H _A)1 ), 3.84-3.78 (m, 5H, H-2 _E , H-4 _E , H-2 _D , H-6a _D , H-6b _D ), 3.63 (m, IH, H-5 _A ), 3.51 (pt, H, J _3,4 = 9.2 Hz, H-4 _D ), 3.44 (m, 3H, H-4 _A , H-6a _E , H-6b _E ), 3.01 (m, 2H, H-5 _D , OH), 2.57 (pt, IH, J _2>3 = 9.6 Hz, H-3 _D ), 2.56 (bs, IH, OH), 1.40 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £164.4 (C _NTCA ), 138.9-137.8 (C _Ph ), 129.5 (CH=), 129.1-127.7 (CH _Ph ), 117.7 (=CH ₂ ), 101.3 (C-I ₀ , ¹ Jc _H = 160.3 Hz), 98.6 (C-1 _A , ¹ JcH= 171.6 Hz), 94.8 (C-1 _E , ¹ J ₀ H = 166.4 Hz), 92.9 (CCl ₃ ), 83.6 (C-3 _E ), 80.2 (C-4 _A ), 79.5, 79.0 (2C, C-2 _E , C-4 _E ), 76.6 (C _Bn ), 76.0 (C-3 _D ), 75.6 (CB ₁₁ ), 75.5 (C-5 _D ), 75.4, 75.3 (2C, C _Bn ), 74.8 (C-3 _A ), 74.6 (C-2 _A ), 73.8 (C _Bn ), 71.6 (C-4 _D ), 70.3 (C-5 _E ), 68.7 (C-5 _A ), 68.3 (C _A11 ), 66.2 (C-6 _E ), 62.4 (C-6 _D ), 58.6 (C-2 _D ), 18.3

(C-6A).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₅₈ H ₆₆ NOi ₅ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 1144.3396 m/z mesurée : 1144.3389

[M+NH ₄ ] ⁺ C ₅₈ H ₆₆ NO ₁₅ ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 1139.3842 m/z mesurée : 1139.3890

> Propyl (2-acétamido-2-désoxy-β-D-glucopyranosyl)-(l→2)-[α-D-g lucopyranosyl- (l→3)]-4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranoside II :

Chemical Formula- C23H41NO15

Exact Mass: 571,2476 Molecular Weight. 571 ,5693

Du Pd-C 10% (280 mg) est ajouté à une solution dégazée de trisaccharide 37 (412 mg, 360 μmol) dans un mélange éthanol (30 mL) et HCl IM (280 μL). La suspension est saturée avec de l'hydrogène à pression atmosphérique et agitée à TA pendant 1 nuit. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 7/1/2 et DCM/MeOH, 92/8) montre la disparition de 37 (Rf = 1 et 0,35, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf = 0,45 et 0, respectivement). Ensuite le milieu réactionnel est filtré sur célite puis concentré à l'évaporateur rotatif. Le résidu obtenu est alors dissous dans un mélange éthanol (30 mL) et triéthylamine (153 μL, 1,1 mmol, 3 éq.). Du Pd-C 10% (280 mg) est ajouté au milieu réactionnel. La suspension est alors saturée avec de l'hydrogène à pression atmosphérique et agitée à TA pendant 1 nuit. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 7/1/2) montre la disparition de l'intermédiaire (Rf = 0,45) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf ≈ 0,4). Ensuite le milieu réactionnel est filtré sur célite puis concentré à l'évaporateur rotatif. Le résidu obtenu est purifié sur colonne C- 18 (H ₂ CVCH ₃ CN, 100/0→9/l) pour conduire à la cible // sous forme d'un solide blanc (144 mg, 69%). Rf= 0,45 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 7/1/2).

RMN ¹ H (D ₂ O), £5.10 (d, IH, J ₁₌₂ = 3.7 Hz, H-1 _E ), 4.89 (d, IH, J _1;2 = 1.8 Hz, H-IA), 4.79 (d, IH, Ji, ₂ = 8.5 Hz, H-1 _D ), 4.23 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 2.3 Hz, H-2 _A ), 4.01 (m, IH, H-5 _E ), 3.89-3.86 (m, 3H, H-3 _A , H-6a _D , H-6b _D ), 3.80 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.7 Hz, H-3 _E ), 3.78-3.64 (m, 6H, H-6b _D , H-6a _E , H-6b _E , H-2 _D , H-2 _E , H-5 _A ), 3.60 (m, IH, H _Pr ), 3.50-3.44 (m, 2H, H-4 _E , Hp ₁ ), 3.42-3.38 (m, 3H, H-5 _D , H-3 _D , H-4 _D ), 3.32-3.34 (pt, IH ₅ J ₃ , ₄ - 9.7 Hz, H-4 _A ), 2.10 (s, 3H, H _Ac ) ₅ 1-57 (sex, 2H, CH ₂ ), 1.24 (d, 3H, J _5,6 = 6.2 Hz, H-6 _A ), 0.87 (t, 3H, J= IA Hz, CH ₃ ).

RMN ¹³ C (D ₂ O), £ 174.8 (C _NAc ), 102.3 (C-I ₀ , ¹ J ₀ H= 163.4 Hz) ₅ 99.6 (C-IA, ¹ ^CH = 171.3 Hz), 95.1 (C-I _E , ¹ Jc _H = 169.5 Hz), 76.3 (C-4 _D ), 74.6 (2C, C-2 _A , C-3 _D ), 74.5 (C-3 _A ) ₅ 73.5 (C-3 _E ) ₅ 71.8 (C-5 _E ), 71.7 (C-2 _E ), 71.3 (C-4 _A ) ₅ 70.2 (C5- _D ), 70.0 (C _Pr ) ₅ 69.8 (C-4 _E ), 69.3 (C-5 _A ), 61.0 (C-6 _Ό ), 60.7 (C-6 _E ), 56.0 (C-2 _D ), 23.0 (C _NAc ), 22.4 (CH ₂ ), 17.1 (C-6 _A ) ₅ 10.3 (CH ₃ ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₂₃ H ₄₁ NO ₁₅ Na m/z théorique : 594.2374

m/z mesurée : 594.2379

> AUyI (2-désoxy-4,6-O-isopropylidène-2-trichIoroacétamido-β-D- glucopyranosyI)- (l→2)-[2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l→3) ]-4-(?-benzyl-α-L- rhamnopyranoside 38 :

Chemical Formula

Exact Mass 1161,3811 Molecular Weight 1163,5652

Voie 1 : Dans du DMF (3 mL) est dissous le triol 37 (500 mg, 450 μmol) et le 2- méthoxypropène (85 μL, 890 μmol, 2 éq.). Du CSA (10 mg, 23 μmol, 0,1 éq.) est ajouté par fractions au milieu réactionnel. Sous agitation à TA, la réaction est suivie par CCM (Chex/EtOAc, 1/1 et DCM/MeOH, 96/4). Après 6 h d'agitation, la transformation de 37 (Rf= 0,05 et 0,1, respectivement) en un produit moins polaire (Rf= 0,75 et 0,85, respectivement) est presque totale. Le milieu réactionnel est neutralisé avec de la triéthylamine (0,2 mL) puis concentré à l'évaporateur rotatif. Le solide obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 9/l→l/l) pour conduire à l'alcool 38 sous forme d'un solide blanc (390 mg, 76%).

Voie 2 : Du TMSOTf (65,7 μL, 366 μmol, 0,2 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 21 (1,5 g, 1,8 mmol) et de donneur 1 (1,3 g, 2,2 mmol, 1,2 éq.) dans du DCM (37 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (1,45 g), agitée sous argon à -78°C. Après 3 h sous agitation, le bain éthanol-carboglace est retiré et l'agitation est poursuivie pendant 30 min, temps au bout duquel le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3) indique la disparition de 21 (Rf = 0,5) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,2). La réaction est stoppée par l'addition de triéthylamine (0,2 mL) puis le milieu réactionnel est filtré puis concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 8/2-→7/3) pour obtenir un solide blanc (2,5 g).

Après addition de NaOMe 0,5 M (800 μL, 400 μmol, 0,2 éq.) au brut précédent (2,5 g, 2,0 mmol) en solution dans du MeOH (5 mL), le milieu réactionnel est agité pendant 15 min et son évolution est suivie par CCM (Chex/EtOAc, 1/1, DCM/MeOH, 95/5). Après avoir

_gi

observé la disparition du produit de départ (Rf= 0,7 et 0,95, respectivement) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,05 et 0,3, respectivement), le milieu réactionnel est neutralisé par addition de résine échangeuse d'ion DOWEX (H ⁺ ), puis filtré sur fritte. La résine est lavée avec un mélange DCM/MeOH et les solvants sont évaporés. L'huile jaune obtenue est engagée directement dans l'étape suivante (2,2 g).

Le brut précédent (2,2 g, 2,0 mmol) est dissous dans du DMF (15 mL) et le 2- méthoxypropène (385 μL, 4,0 mmol, 2 éq.). Du CSA (93 mg, 400 μmol, 0,2 éq.) est ajouté par fractions au milieu réactionnel. Sous agitation à TA, la réaction est suivie par CCM (Chex/EtOAc, 1/1 et DCM/MeOH, 96/4). Après 6 h d'agitation, la transformation du produit de départ (Rf= 0,05 et 0,12, respectivement) en un produit moins polaire (Rf= 0,75 et 0,85, respectivement) est presque totale. Le milieu réactionnel est neutralisé avec de la triéthylamine (0,2 mL) puis concentré à l'évaporateur rotatif. Le solide obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 9/1— »1/1) pour conduire à l'alcool 38 sous forme d'un solide blanc (1,8 g, 86%).

Voie 3 : Après addition de NaOMe 0,5 M (108 μL, 54 μmol, 0,2 éq.) au glycoside d'allyle 23 (328 mg, 270 μmol) en solution dans du MeOH (5 mL), le milieu réactionnel est agité à TA et la réaction est suivie par CCM (Chex/EtOAc, 1/1, Chex/EtOAc, 7/3). Après une nuit, la transformation de 23 (Rf= 0,75 et 0,5, respectivement) en un produit moins polaire (Rf= 0,6 et 0,2, respectivement) est totale. Le milieu réactionnel est donc neutralisé par addition de résine échangeuse d'ion DOWEX (H ⁺ ), puis filtré sur fritte. La résine est lavée avec un mélange DCM/MeOH et les solvants sont évaporés. Le produit obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc+NEt ₃ , 7/3— >6/4) pour conduire à l'alcool 38 sous forme d'un solide blanc (241 mg, 76%).

Voie 4 : Du TMSOTf (245,0 μL, 1,4 mmol, 0,3 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 21 (3,6 g, 4,5 mmol) et du donneur 2 (3,5 g, 6,3 mmol, 1,4 éq.) dans du DCM (8 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (3,7 g), agitée sous argon à -78°C. Après 6 h sous agitation, le bain éthanol-carboglace est retiré et l'agitation est poursuivie pendant 30 min, temps au bout duquel le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3) indique la disparition de 21 (Rf = 0,5) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,35). La réaction est stoppée par l'addition de triéthylamine (0,1 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 8/2→7/3) pour obtenir un solide blanc (5,3 g).

Après addition de NaOMe 0,5 M (4,5 mL, 2,2 mmol, 0,5 éq.) au brut précédent (5,3 g, 4,5 mmol) en solution dans du MeOH (60 mL), le milieu réactionnel est agité à TA et la réaction est suivie par CCM (Chex/EtOAc, 6/4). Après 4 h, la transformation du produit de départ (Rf= 0,7) en un produit moins polaire (Rf= 0,5) est totale. Le milieu réactionnel est donc neutralisé par addition de résine échangeuse d'ion DOWEX (H ⁺ ), puis filtré sur fritte. La résine est lavée avec un mélange DCM/MeOH et les solvants sont évaporés. Le produit obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc+NEt ₃ , 7/3—>6/4) pour conduire à l'alcool 38 sous forme d'un solide blanc (4,5 g, 87%). Rf= 0,45 (Chex/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), 57.42-7.08 (m, 26H, NH, CH _Ph ), 5.89 (m, IH, CH=), 5.29 (m, IH, J _tran s = 15.6 Hz, =CH ₂ ), 5.21 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, OH ₂ ), 5.10 (d, IH, λ, ₂ = 3.6 Hz, H-IE), 5.15- 4.91 (m, 3H, H _Bn ), 4.90 (d, IH, J= 12.1 Hz, H _Bn ), 4.82-4.79 (m, 2H, H-I _A , H _8n ), 4.74 (d, IH, J = 10.0 Hz, H _Bn ), 4.62-4.49 (m, 4H, H _Bn , H-I ₀ , 2H _Bn ), 4.34 (d, IH, J=10.9 Hz, H _Bn ), 4.18- 4.11 (m, 4H, H-3 _A , H-5 _E , H _A n, H-3 _E ), 4.02 (bs, IH, H-2 _A ), 4.01 (m, IH, H _A11 ), 3.91-3.82 (m, 4H, H-2 _E , H-4 _E , H-2 _D , H-6a _D ), 3.76-3.71 (m, 2H, H-6a _D , H-5 _A ), 3.51-3.42 (m, 4H, H-4 _A , H- 6a _E , H-6b _E , H-4 _D ), 2.84 (m, 2H, H-5 _D , OH), 2.48 (pt, IH, J ₂ , ₃ = 9.4 Hz, H-3 _D ), 1.51 (s, 3H, H _iPr ), 1.50 (s, 3H, H _ffr ), 1.40 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £164.1 (C _NTCA ), 138.8-137.8 (C _Ph ), 134.2 (CH=), 129.3-127.7 (CH _Ph ), 117.6 C=CH ₂ ), 101.5 (C-1 _D , ¹ Jc _H = 163.6 Hz), 100.1 (C _iPr ), 98.7 (C-1 _A , ¹ J ₀ H = 174.0 Hz), 94.5 (C-I _E , ¹ J _CH = 167.5 Hz), 92.9 (CCl ₃ ), 83.6 (C-3 _E ), 80.2 (C-4 _A ), 80.1 C-2 _E ), 79.1 (C-4 _E ), 76.6, 75.8, 75.7, 75.3 (4C, C _Bn ), 74.7 (C-3 _A ), 74.4 (C-4 _D ), 74.0 (C-2 _A ), 73.8 (C _Bn ), 73.4 (C-3 _D ), 70.2 (C-5 _E ), 68.7 (C-5 _A ), 68.2 (2C, C _A11 , C-6 _E ), 67.4 (C-5 _D ), 62.3 <C-6 _D ), 59.1 (C-2 _D ), 27.3 (C _iPr ), 19.3 (C _iPr ), 18.3 (C-6 _A ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₆₁ H ₇₀ NO ₁₅ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 1184.3709 m/z mesurée : 1184.3669

[M+NH ₄ ] ⁺ C ₆₁ H ₇₀ NO ₁₅ ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 1179.4155 m/z mesurée : 1179.4165 Procédé 3 :

> AUyI (2-6>-acétyl-3,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→ 3)-C2-désoxy-4,6-0- isopropyIidène-2-trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-C l-→2)-[2,3 _» 4,6-tétra- O-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l-→3)]-4-6>-benzyl-α-L-r hamnopyranoside 40 :

Chemical Formula: Cβ3Hg4Cl3Nθ20

Exact Mass: 1529,5435 Molecular Weight. 1531,9882

Du TMSOTf (24,0 μL, 131 μmol, 0,3 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 38 (510 mg, 440 μmol) et du donneur 39 ⁶⁷ (350 mg, 660 μmol, 1,5 éq.) dans du Toi (11 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (350 mg), agitée sous argon à -78°C. Après 30 min sous agitation à -78°C, le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 75/25 et Chex/EtOAc, 6/4) indique la disparition de 38 (Rf = 0,1 et 0,45, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,3 et 0,7, respectivement). La réaction est stoppée par l'addition de triéthylamine (0,1 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 6,5/3,5→l/l) pour conduire par ordre d'élution au glycoside d'allyle 40 sous forme d'un solide blanc (480 mg, 72%) puis au diol 41 sous forme d'un solide blanc (33 mg, 5%). Rf= 0,7 (Chex/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), 57.45-7.10 (m, 35H, CH _Ph ), 6.98 (d, IH, J _NH , ₂ = 8.6 Hz, NH), 5.92 (m, IH, CH=), 5.37 (m, IH, H-2 _C ), 5.29 (m, IH, J _trans = 16.9 Hz, =CH ₂ ), 5.21 (m, IH, J _cis = 10.6 Hz, =CH ₂ ), 5.17 (d, IH, J _lj2 = 3.6 Hz, H-1 _E ), 5.05-4.90 (m, 3H, H _Bn ), 4.83-4.69 (m, 6H, H-l _c , 2H _Bn , H-U, 2H _Bn ), 4.64-4.50 (m, 7H, 3H _Bn , H-1 _D , 3H _Bn ), 4.34 (d, IH, J = 12.0 Hz, H _Bn ), 4.17-4.14 (m, 3H, H-3 _E , H _A n, H-3 _A ), 4.12-4.03 (m, 3H, H-5 _E , H-5 _C , H-2 _D ), 4.00 (bs, IH, H- 2 _A ), 3.99-3.89 (m, 2H, H _A n, H-3 _C ), 3.90-3.86 (m, 2H, H-2 _E , H-6a _D ), 3.84 (pt, IH, J _3;4 ^≈ 9.8 Hz ₅ H-4 _E ) 3.74-3.69 (m, 2H, H-6b _D , H-5 _A ), 3.50 (pt, IH, J _3,4 = 9.4 Hz, H-4 _D ), 3.49-3.41 (m, 3H, H-4 _A , H-6a _E , H-6b _E ), 3.40 (pt, IH, J _3;4 = 9.5 Hz, H-4 _C ), 2.84-2.76 (m, 2H, H-5 _D , H-3 _D ), 2.16 (s, 3H, H _Ac ), 1.51 (s, 3H, H _iPr ), 1.50 (s, 3H, H _iPr ), 1.41 (d, 3H, J _5;6 = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.41 (d, 3H, J _5j6 = 6.2 Hz, H-6c).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), 5170.1 (C _Ac ), 162.2 (C _NTCA ), 139.0-137.8 (C _Ph ), 134.3 (CH=), 129.8- 127.7 (CHn ₁ ), 117.5 C=CH ₂ ), 101.7 (C-1 _D , ¹ J ₀ H = 161.0 Hz), 99.9 (C _iPr ), 98.9 (C-l _c , ¹ JcH = 169.1 Hz), 98.8 (C-1 _A , ¹ Jc _H = 171.2 Hz), 94.6 (C-1 _E , ¹ J _0n = 167.6 Hz), 93.5 (CCl ₃ ), 83.5 (C-

3 _E ), 80.6 (C-2 _E ), 80.2 (C-4 _C ), 80.1 (C-4 _A ), 79.1 (C-4 _E ), 79.0 (C-3 _D ), 78.5 (C-3 _C ), 76.5, 75.7, 75.6, 75.3, 75.2 (5C ₅ C _Bn ), 74.8 (C-3 _A ), 74.1 (C-2 _A ), 73.8 (C _Bn ), 73.0 (C-4 _D ), 72.2 (C _Bn ), 70.3 (C-5 _E ), 69.7 (C-2 _C ), 68.7 (C-5 _A ), 68.3 (C-6 _E ), 68.3 (C-5 _C ), 68.2 (C _AI1 ), 67.4 (C-5 _D ), 62.5 (C- 6 _D ), 57.8 (C-2 _D ), 29.5 (C _iPr ), 21.5 (C _Ac ), 19.3 (C _iPr ), 18.4, 18.3 (C-6 _A , C-6 _C ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₈₃ H ₉₄ NO ₂₀ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 1552.5332 m/z mesurée : 1552.5293

[M+NH ₄ ] ⁺ C ₈₃ H ₉₄ NO ₂₀ ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 1547.5779 m/z mesurée : 1547.5818

[MR-K] ⁺ C ₈₃ H ₉₄ NO ₂₀ ³⁵ Cl ₃ K m/z théorique : 1568.5072 m/z mesurée : 1568.5120

> AHyI (2-(?-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→3) -(2-désoxy-2- trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l→2)-[23 ₅ 4,6-tétra-0-ben:^l-α-D- glucopyranosyl-(l→3)]-4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 41 :

Chemical Formula: C80H90CI3NO20

Exact Mass: 1489,5122 Molecular Weight: 1491,9243

Une solution aqueuse de TFA 50% (1,6 mL) est additionnée lentement à une solution de glycoside d'allyle 40 (79 mg, 52,0 μmol) dans du DCM (4 mL) à 0°C. Le milieu réactionnel est agité pendant 4 h à cette température, temps au bout duquel le suivi par CCM

(Chex/EtOAc, 6/4) indique la disparition totale de 40 (Rf= 0,65) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,3). Le milieu réactionnel est concentré par coévaporation avec du Toi (3 x 10 mL). L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice

(Chex/EtOAc, 7/3-→-6/4) pour obtenir un solide blanc correspondant au diol 41 attendu (68 mg, 88%).

Rf= 0,3 (Chex/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), J7.40-7.07 (m, 35H, CH _Ph ), 6.99 (d, IH, J _NH>2 = 8.3 Hz, NH), 5.91 (m,

IH, CH=), 5.31 (m, IH, H-2 _C ), 5.29 (m, IH, J, _ran s ⁼ 16.9 Hz, =CH ₂ ), 5.25-5.23 (m, 2H ₅ =CH ₂ ,

H-1 _E ), 5.12 (m, 2H ₅ H _Bn ), 5.08 (d, IH, J= 12.6 Hz, H _Bn ), 4.99-4.91 (m, 2H, H _Bn ), 4.85 (d, IH, J _lj2 = 1.5 Hz, H-U) ₅ 4.82 (d, IH, J= 11.1 Hz, H _3n ), 4.73 (d, IH, J = 10.1 Hz, H _Bn ), 4.67 (d, IH, J= 11.4 Hz, H _Bn ), 4.62-4.51 (m, 6H, 2H _Bn , H-I ₀ , 3H _Bn ) 4.49 (d, IH ₅ J _lj2 = 1.8 Hz, H-I _c ), 4.35 (d, IH, J= 11.9 Hz, H _Bn ), 4.22-4.13 (m, 5H, OH-4 _D , H-3 _A , H-3 _E , H _A n, H-5 _E ), 4.04-4.01 (m, 3H, H _A II, H-2 _A , H-3 _C ), 3.98 (m, IH, H-2 _D ), 3.96 (m, IH, H-5 _C ) 3.87-3.82 (m, 3H, H-6a _D , H-2 _E , H-4 _E ), 3.80-3.70 (m, 2H, H-6b _D , H-5 _A ), 3.52-3.49 (m, 3H, H-4 _A , H-6a _E , H-6b _E ), 3.46 (pt, IH, J _3,4 = 9.4 Hz, H-4 _C ), 3.39 (pt, IH, J _3;4 = 9.4 Hz, H-4 _D ), 3.09 (m, IH, H-5 _D ), 2.09 (m, 4H, H _AC , H-3 _D ), 1.41 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.34 (d, 3H, J _5>6 = 6.2 Hz, H-6 _C ). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £170.5 (C _Ac ), 162.3 (C _NTCA ), 138.8 -137.8 (C _Ph ), 134.3 (CH=), 129.7- 127.8 (CHph), 117.8 (=CH ₂ ), 101.4 (C-1 _D , ¹ J ₀ H = 158.6 Hz), 99.5 (C-l _c , ¹ JCH = 169.8 Hz), 98.6 (C-1 _A , ¹ Jc _H = 174.0 Hz), 94.3 (C-1 _E , ¹ Jc _H = 169.3 Hz), 93.7 (CCl ₃ ), 87.3 (C-3 _D ), 83.4 (C- 3 _E ), 81.0 (C-2 _E ), 80.2 (C-4 _A ), 79.6 (C-4 _C ), 79.2 (C-4 _E ), 77.5 (C-3 _C ), 76.6, 75.7, 75.6, 75.5, 75.3 (5C ₅ C _Bn ), 75.2 (C-5 _D ), 74.6 (C-3 _A ) 74.3 (C-2 _A ) ₅ 73.8, 72.2 (2C, C _Bn ), 71.2 (C-4 _D ), 70.3 (C-5 _E ), 69.8 (C-5 _C ), 69.4 (C-2 _C ) ₅ 68.8 (C-5 _A ), 68.3 (C-6 _E ), 68.1 (C _Aπ ), 63.3 (C-6 _D ), 55.6 (C- 2 _D ), 21.4 (C _AC ), 18.4 (C-6 _A ), 18.2 (C-6 _C ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₈₀ H ₉₀ NO ₂₀ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 1512.5019 m/z mesurée : 1512.4950

[M+NH ₄ f C _8O H ₉₀ NO ₂₀ ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 1507.5465 m/z mesurée : 1507.5507

[M+K] ⁺ C ₈₀ H ₉₀ NO _2O ³⁵ Cl ₃ K . m/z théorique : 1528.4758 m/z mesurée : 1528.4808

> AHyI (3,4-di-(?-benzyl-β-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-(2-désoxy-4 ,6-0- isopropylidène-2-trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-( l— >2)-[2,3,4,6-tétra- 0-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l-→3)]-4-0-benzyl-α-L-rhamn opyranoside 43 :

Chemical Formula: CsiHg2Cl3N0ig

Exact Mass: 1487,5329 Molecular Wright: 1489,9515

Du TMSOTf (25,0 μL, 140 μmol, 0,5 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 38 (300 mg, 260 μmol) et du donneur 39 ⁶⁷ (190 mg, 360 μmol, 1,4 éq.) dans du DCM (5 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (350 mg), agitée sous argon à -78°C. Après 30 min sous agitation, le bain éthanol-carboglace est retiré et l'agitation est poursuivie pendant 30 min, temps au bout duquel le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 75/25 et Chex/EtOAc, 6/4) indique la disparition de 38 (Rf = 0,1 et 0,45, respectivement). La réaction est stoppée par l'addition de triéthylamine (0,1 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 6,5/3,5→l/l) pour conduire par ordre d'élution au glycoside d'allyle 40 sous forme d'un solide blanc (170 mg, 40%), au composé 42 (80 mg, 20%), légèrement contaminé, puis au diol 41 sous forme d'un solide blanc (85 mg, 22%). Après addition de NaOMe 0,5 M (800 μL, 400 μmol) à 42 (25 mg) en solution dans du MeOH (1 mL), le milieu réactionnel est agité à TA et son évolution est suivie par CCM (Chex/EtOAc, 6/4). Après 4 h, la disparition de 42 (Rf= 0,65) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,5) sont observées. Le milieu réactionnel est neutralisé par addition de résine échangeuse d'ion DOWEX (H ⁺ ), puis le milieu réactionnel est filtré sur fritte. La résine est lavée avec un mélange DCM/MeOH et les solvants sont évaporés. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 8/2→6/4) pour conduire à l'alcool 43 sous forme d'un solide blanc (8 mg).

Rf= 0,5 (Chex/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.55 (d, IH, J _NH ,2 = 8.3 Hz, NH), 7.40-7.03 (m, 35H, CH _Ph ), 5.88 (m, IH, CH=), 5.26 (m, IH, J _tra n _s = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.18 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.10-5.05 (m, 3H, H _5n , H-1 _E , H _Bn ), 5.00-4.92 (m, 3H, H _Bn ), 4.86 (d, IH, J= 12.1 Hz, H _5n ), 4.76 (m, IH,

J _1>2 = 1.5 Hz ₅ H-U), 4.75-4.69 (m, 4H, H _Bn , H-1 _D> 3H _Bn ), 4.66-4.50 (m, 4H, 3H _Bn , H-l _c ), 4.45 (d, IH, J= 10.9 Hz, H _Bn ), 4.30 (d, IH, J= 11.9 Hz, H _8n ), 4.17-4.02 (m, 6H, H-3 _E , H-3 _A , H _A n, H-5 _E , H-2 _C , H-2 _D ), 3.99 (m, IH, H-2 _A ), 3.91 (m, IH, H _A π), 3.85-3.68 (m, 5H, H-6a _D , H-2 _E , H- 4 _E , H-6b _D , H-5 _A ), 3.62 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.4 Hz, H-4 _D ), 3.52-3.39 (m, 6H, H-4 _C , H-3 _D , H-4 _A , H- 3 _C , H-6a _E , H-6b _E ) ₅ 3.24 (m, IH, H-5 _C ), 2.72 (m, IH, H-5 _D ), 1.45 (s, 6H, H _iPr ), 1.40 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.3 Hz, H-6 _A ), 1.18 (d, 3H, J _5;6 = 6.3 Hz, H-6 _C ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), 5163.2 (CNTC _A ), 138.8-137.8 (C _Ph ), 134.2 (CH=), 129.5-127.6 (CH _Ph ), 117.6 (=CH ₂ ), 101.8 (C-I ₀ , ¹ Jc _H = 160.3 Hz), 99.8 (Q _Pr ), 99.1 (C-I ₀ , ¹ JCH = 156.6 Hz), 98.7 (C-I _A , ¹ J _CH = 172.7 Hz), 95.0 (C-1 _E , ¹ Jc _H = 166.1 Hz), 93.4 (CCl ₃ ), 83.8 (C-3 _E ), 81.7 (C-3 _C ), 80.1 (C-4 _A ) 79.7 (C-4 _C ), 79.1 (C-4 _E ), 78.5 (C-2 _E ), 77.1 (C-3 _D ), 76.5, 75.8, 75.5, 75.1 (4C, C _Bn ), 75.1 (C-3 _A ), 74.6 (C-4 _D ), 74.4 (C-2 _A ), 74.3, 73.8 (2C, C _Bn ), 71.7 (C-5 _C ), 71.1 (C _Bn ), 70.7 (C-5 _E ), 68.7 (C-5 _A ), 68.2 (C-2 _C ), 68.2, 68.1 (C-6 _E , C _M ), 67.1 (C-5 _D ), 62.4 (C-6 _D ), 56.6 (C- 2 _D ), 29.4 (CiPr), 19.5 (C _iPr ), 18.5 (C-6 _C ), 18.2 (C-6 _A ).

> Propyl (2/3-0-acétyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-(2-acétamido-2 -désoxy-β-D- glucopyranosyl)-(l ^→ 2)-[α-D-glucopyranosyl-(l— »3)]-α-L-rhamnopyranoside /17 :

Chemical Formula C31H53NO20

Exact Mass 759,3161 Molecular Weight 759,7472

Du Pd-C 10% (300 mg) est ajouté à une solution de tétrasaccharide 41 (340 mg, 320 μmol) dans de Péthanol (30 mL). La suspension est saturée avec de l'hydrogène à 50 bars et agitée à TA pendant 1O j. Le suivi par CCM (1PrOHZH ₂ OzKH ₃ , 4/1/0,5 et Chex/EtOAc, 6/4) montre la disparition de 41 (Rf = 1 et 0,2, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf = 0, 5 et 0, respectivement). Le milieu réactionnel est filtré sur un filtre Acrodisc LC 25 mm, et le filtrat est concentré à l'évaporateur rotatif. Le résidu obtenu est purifié sur colonne C- 18 (H ₂ O/CH ₃ CN, 100/0→7/3) pour conduire à la cible /// sous forme d'un mélange de deux régioisomères 2c- et 3c-O-acétyle et d'un solide blanc (132 mg, 76%). Rf= 0,5 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5).

RMN ¹ R (D ₂ O) ₃ £ (partial) 5.05 (m, IH ₅ H-1 _E ), 4.83-4.72 (m, 4H ₅ H-1 _A , H-l _c , H-1 _D , H-2 _C ), 4.17 (m, IH ₅ H-2 _A ), 3.93 (m, IH, H-5 _E ), 3.82-3.3.79 (m, 2H ₅ H-3 _A , H-5 _C ), 3.73-3.52 (m, 10H ₅ H-2 _Ds H-6a _D , H-3 _E5 H-6a _E , H-6b _E , H-6b _D , H-3 _C , H-5 _A , H-2 _E , H _Pr ), 3.42-3.32 (m, 6H ₅ H-4 _E , H _Pr5 H-5 _D , H-4 _C , H-4 _D , H-3 _D ), 3.21 (pt ₅ IH ₅ J _3>4 = 9.7 Hz ₅ H-4 _A ), 2.07-2.2.01 (m ₅ 6H ₅ H _Ac , H _NAc ), 1.48 (sex, 2H, CH ₂ ), 1.17-1.11 (d ₅ 6H, H-6 _A , H-6 _C ), 0.80 (t, 3H, J= 7.4 Hz ₅ CH ₃ ). RMN ¹³ C (D ₂ O) ₅ £ (partial) 174.9, 174.5, 174.I ₅ 173.6 (C _N Ac C _AC ), 101.8 (C-1 _D ), 101.5, 101.2 (C-Ic), 99.O ₅ 98.8 (C-I _A ), 94.8, 94.7 (C-l _E ), 82.6, 81.7 (C-3 _D ), 76.4 (C-4 _D ), 74.7 (C-2 _A ), 74.3- 73.9 (C-3 _A , C-2 _C , C-3 _C ), 73.5, 73.3 (C-3 _E ) ₅ 72.4 (C-4 _C ), 71.7, 71.6 (C-5 _E , C-2 _E ), 71.0 (C-4 _A ), 70.0 (C _Pr ), 69.6-68.5 (C-4 _E , C-5 _A , C-5 _C , C-5 _D ), 60.9 (C-6 _D ), 60.6 (C-6 _E ), 55.8 (C-2 _D ), 23.1, 22.8 (C _NAc ), 22.3 (CH ₂ ), 20.8, 20.6 (C _Ac ) ₅ 17.1-16.6 (C-6 _A , C-6 _C ), 10.2 (CH ₃ ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₃₁ H ₅₃ NO ₂₀ Na m/z théorique : 782.3058 m/z mesurée : 782.3066 Procédé 4 :

> AHyI (3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-(2-désoxy-2- trichloroacétamido-β-D-gIucopyranosyI)-(1^2)-[2,3 _? 4,6-tétra-0-benzyI-α-D- glucopyranosyl-(l→3)]-4-0-benzyl-α-L-rhamnopyraiioside 69 :

Chemical Formula C78H88CI3NO19

Exact Mass 1447,5016 MolecuIar Weight 1449,8876

Après addition de NaOMe 0,5 M (102 μL, 51 μmol, I ₅ I éq.) au diol 41 (69 mg, 46 μmol) en solution dans du MeOH (3 mL), le milieu réactionnel est porté à reflux. Après 2 h, le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 6/4) indique la disparition du produit de départ (Rf = 0,3) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,2). Après retour à TA, il est neutralisé par addition de résine échangeuse d'ion DOWEX (H ⁺ ), puis filtré sur fritte. La résine est lavée avec un mélange DCM/MeOH et les solvants sont évaporés. Le solide obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 6/4—» 1/1) pour conduire à un solide blanc correspondant au triol 69 (57 mg, 85%).

Rf= 0,2 (Chex/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.41-7.07 (m, 35H, CH _Ph ), 6.93 (d, IH ₅ J _NH ,2 = 7.7 Hz, NH), 5.89 (m, IH, CH=), 5.29 (m, IH, J _trans - 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.23 (m, IH, J _ci s ⁼ 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.21 (d, IH, Ji, ₂ = 3.7 Hz, H-1 _E ), 5.13-4.88 (m, 5H, H _Bn ), 4.84 (d, IH, Ju = 1.7 Hz, H-U) ₅ 4.79 (d, IH, J = 11.0 Hz, H _Bn ), 4.73-4.67 (m, 3H, H _Bn ), 4.62 (m, IH, H _Bn ), 4.58 (d, IH, J _lj2 = 8.5 Hz, H-I _D ), 4.58 (m, IH, H _Bn ), 4.55 (m, IH, H-l _c ), 4.51 (d, 2H, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.34 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _Bn ), 4.19-4.11 (m, 4H, H-3 _A , H _A n, H-3 _E , H-5 _E ), 4.03-4.00 (m, 3H, H-2 _A , H-2 _C , HAπ), 3.96 (m, IH, H-2 _D ), 3.93-3.87 (m, 3H, H-5 _C , H-3 _C , H-6a _D ), 3.85 (m, IH, H-2 _E ), 3.83 (m, IH, H-4 _E ), 3.77 (m, IH, H-6b _D ), 3.73 (m, IH, H-5 _A ), 3.50-3.44 (m, 4H, H-4 _C , H-6a _E , H- 6b _E , H-4 _A ), 3.38 (pt, IH, J _3,4 - 8.9 Hz, H-4 _D ), 3.08 (m, IH, H-5 _D ), 2.30 (m, IH, J _3;4 = 8.8 Hz, H-3 _D ), 1.40 (d, 3H, J _5;6 = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.32 (d, 3H, J _5j6 = 6.2 Hz, H-6 _C ). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 162.0 (C _NTCA ), 138.7-138.2 (C _Ph ), 134.3 (CH=), 129.7-127.6 (CH _Ph ), 117.8 (-CH ₂ ), 101.4 (C-1 _D , ¹ JcH= 161.7 Hz), 101.0 (C-l _c , ¹ Jc _H = 168.3 Hz), 98.6 (C-1 _A , ¹ JcH = 168.3 Hz), 94.3 (C-I _E , ¹ Jc _H = 17.6 Hz) ₅ 93.7 (CCl ₃ ), 87.1 (C-3 _D ), 83.5 (C-3 _E ), 80.8 (C-2 _E ),

80.2 (C-4 _A ), 79.5 (C-4 _C ), 79.4 (C-3 _C ), 79.3 (C-4 _E ), 76.6, 75.7, 75.6, 75.5, 75.3 (5C, C _Bn ),

75.3 (C-5 _D ), 74.5 .(2C, C-2 _A , C-3 _A ), 73.8 ₅ 72.2 (2C, C _Bn ) ₅ 71.1 (C-4 _D ), 70.3 (C-5 _E ), 69.5 (C- 5c), 68.9 (C-2c), 68.8 (C-5 _A ), 68.4 (C-6 _E ), 68.1 (C _A11 ) ₅ 63.3 (C-6 _D ), 55.9 (C-2 _D ), 21.4 (C _Ac ), 18.3, 18.2 (C-6 _A ^* , C-6 _C ^* ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₇₈ H ₈₈ NO ₁₉ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 1470.4913 m/z mesurée : 1470.5050

[M+NH ₄ ] ⁺ C ₇₈ H ₈₈ NO ₁₉ ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 1465.5360 m/z mesurée : 1465.5448

[M+K] ⁺ C ₇₈ H ₈₈ NO ₁₉ ³⁵ Cl ₃ K m/z théorique : 1486.4653 m/z mesurée : 1486.4777

> Propyl α-L-rhamnopyranosyl-(l— »3)-(2-acétamido-2-désoxy-β-D- glucopy ranosy I)-(I →2)- [α-D-glucopy ranosyl-(l →3)] -α-L-rhamnopyranoside IV :

Chemical Formula CggHs-jNO-ig

Exact Mass 717,3055 MolecularWeight 717,7105

Du Pd-C 10% (300 mg) est ajouté à une solution dégazée de tétrasaccharide 68 (320 mg, 220 μmol) dans de l'éthanol (30 mL). La suspension est saturée avec de l'hydrogène à 50 bars et agitée à TA pendant 2 j. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5 et Chex/EtOAc, 6/4) montre la disparition de 68 (Rf = 1 et 0,2, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf = 0,65 et 0, respectivement). Le milieu réactionnel est Filtré sur un filtre Acrodisc LC 25 mm, et le filtrat est concentré à Pévaporateur rotatif. Le résidu obtenu est purifié sur colonne C- 18 (H ₂ O/CH ₃ CN, 100/0→7/3) pour conduire à la cible IV sous forme d'un solide blanc (119 mg, 71%). Rf= 0,65 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5).

RMN ¹ H (D ₂ O), £5.06 (d, IH, J _lj2 = 3.7 Hz, H-1 _E ), 4.83 (d, IH, J _lj2 = 1.6 Hz, H-IA), 4.76 (d, IH, J _1;2 = 1.3 Hz, H-Ic), 4.73 (d, IH, Ji _,2 = 8.6 Hz, H-I ₀ ), 4.18 (m, IH, H-2 _A ), 3.95 (m, IH, H-5 _E ), 3.88 (m, IH, H-5 _C ), 3.83-3.79 (m, 2H, H-3 _A , H-Oa _n ), 3.74 (m, IH, H-2 _D ), 3.72 (m, IH, H-3 _E ), 3.70-3.67 (m, 3H ₅ H-2 _C , H-6a _E , H-6b _E ), 3.65-3.59 (m, 4H ₅ H-6b _D , H-3 _C , H-5 _A , H-2 _E ), 3.52 (m, IH, H _Pr ), 3.42-3.28 (m, 6H, H-4 _E , H _Pr , H-4 _D , H-5 _D , H-3 _D , H-4 _C ), 3.23 (pt, IH ₅ J ₃ , ₄ = 9.7 Hz ₅ H-4 _A ), 2.01 (s, 3H ₅ H _NAc ), 1-49 (sex, 2H ₅ CH ₂ ), 1.16 (d, 3H ₅ J _5>6 = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.12 (d, 3H ₅ J _5,6 = 6.3 Hz, H-6 _C ), 0.80 (t, 3H ₅ J= 7.4 Hz ₅ CH ₃ ).

RMN ¹³ C (D ₂ O) ₅ £ 174.5 (C _NAc ), 101.8 (C-I ₀ , ¹ Jc _H = 160.3 Hz) ₅ 101.6 (C-Ic ₅ ¹ JCH = 170.5 Hz), 99.0 (C-IA, ¹ Jc _H = 172.7 Hz), 94.8 (C-1 _E , ¹ J _0H = 169.8 Hz) ₅ 81.7 (C-3 _D ), 76.4 (C-4 _D ), 74.7 (C-2 _A ), 74.1 (C-3 _A ), 73.5 (C-3 _E ), 72.2 (C-4 _C ) ₅ 71.7 (C-5 _E ), 71.6 (C-2 _E ), 71.2 (C-2 _C ), 71.0 (C-4A), 70.5 (C-3 _C ), 70.0 (C _Pr ), 69.6 (C-5 _D ), 69.3 (C-5 _C ), 69.1 (C-5 _A ), 68.6 (C-4 _E ), 60.9 (C- 6 _D ), 60.6 (C-6 _E ), 55.9 (C-2 _D ), 22.8 (C _NAc ), 22.3 (CH ₂ ), 17.O ₅ 16.7 (C-6 _As C-6 _c ) ₅ 10.2 (CH ₃ ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₂₉ H ₅₁ NO ₁₉ Na m/z théorique : 740.2953 m/z mesurée : 740.2941

Procédé 5 :

> Allyl (2,3,4-tri-O-acétyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-2-O-acét yl-4-(?-benzyl-α- L-rhamnopyranoside 50 :

Chemical Formula:

Exact Mass: 608,2469 Molecular Weight: 608,6308

Du TMSOTf (124,0 μL, 690 μmol, 0,3 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 31 (780 mg, 2,3 mmol) et de donneur 48 ⁸² ' ⁴⁹ (1,5 g, 3,5 mmol, 1,5 éq.) dans du DCM (60 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (2,0 g), agitée sous argon à -78°C. Après 6 h, à cette température, le bain éthanol-carboglace est retiré et l'agitation est poursuivie pendant 30 min, temps au bout duquel le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2) indique la disparition de 31 (Rf = 0,3) et l'apparition d'un nouveau composé moins polaire (Rf= 0,35). La réaction est stoppée par addition de triéthylamine (0,1 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 9/l→8/2) pour obtenir le glycoside d'allyle 50 sous forme d'un solide blanc (1,3 g, 95%).

Rf= 0,35 (Tol/EtOAc, 8/2).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), 57.34-7.02 (m, 5H, CH _Ph ), 5.87 (m, IH, CH=), 5.33 (m, IH, H-2 _B ), 5.28 (m, IH, =CH ₂ ), 5.25 (m, IH, H-3 _B ), 5.20 (m, IH, =CH ₂ ), 5.18 (m, IH, H-2 _C ) ₅ 5.07 (pt, IH, J _3;4 = 9.9 Hz, H-4 _B ), 5.04 (d, IH, J _lj2 = 1.5 Hz, H-1 _B ), 4.82 (d, IH, J= 10.8 Hz, H _Bn ), 4.75 (d, IH, Ji, ₂ = 1.6 Hz, H-Ic), 4.67 (d, IH, J= 10.9 Hz, H _Bn ), 4.17-4.12 (m, 2H, H-3 _C , H _A π), 4.00- 3.91 (m, 2H, H _A] ,, H-5 _B ), 3.77 (m, IH, H-5 _C ), 3.51 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.5 Hz ₅ H-4 _C ), 2.21, 2.08, 2.07, 1.99 (4s, 12H, H _Ac ), 1.34 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _C ), 1.21 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.3 Hz, H-6 _B ). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £170.9, 170.4, 170.3, 170.2 (4C, C _Ac ), 138.3 (C _Ph ), 133.8 (CH=), 129.4- 128.1 (CHp _h ), 117.9 (=CH ₂ ), 99.8 (C-1 _B , ¹ JcH = 173.0 Hz), 96.8 (C-l _c , ¹ J _CH = 170.0 Hz), 81.1 (C-4 _C ), 77.2 (C-3 _C ), 75.6 (C _Bn ), 72.5 (C-2 _C ), 71.1 (C-4 _B ), 70.2 (C-2 _B ), 69.5 (C-3 _B ), 68.5 (C _A11 ), 68.3 (C-5 _C ), 67.6 (C-5 _B ), 21.4, 21.2, 21.1, 21.0 (4C, C _Ac ), 18.3 (C-6 _C ), 17.7 (C-6 _B ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Naf C ₃₀ H ₄₀ O ₁₃ Na m/z théorique : 631.2367 m/z mesurée : 631.2368 [M+K] ⁺ C ₃₀ H ₄₀ O ₁₃ K m/z théorique : 647.2106 m/z mesurée : 647.2124

> (2,3 ₅ 4-Tri-0-acétyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→3)-2-0-acétyl-4 -0-benzyl-α-L- rhamnopyranose 51 :

Chemical Formula ^* C27H36O13

Exact Mass: 568,2156 Molecular Weight: 568,5669

Le (l,5-cyclooctadiènebis(méthyldiphénylphosphine)iridium(I) hexafluorophosphate) (170 mg) est dissous dans du THF (16 mL) sous agitation. Le milieu subit 5 cycles dégazage vide/argon, 5 cycles dégazage vide/hyrdogène puis est mis sous hydrogène pendant 15 min. Le milieu subit alors une seconde fois 5 cycles dégazage vide/argon. La solution de glycoside d'allyle 50 (1,3 g, 2,2 mmol) dans du THF (8 mL) est transférée sur la solution de catalyseur activé. Le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2) montre la disparition de 50 (Rf= 0,35) et l'apparition d'un produit proche moins polaire (Rf= 0,4).

Du diiode (1,1 g, 4,4 mmol) en solution dans un mélange THF/H ₂ O (8/2, 15 mL) est ajouté au milieu réactionnel. Le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2 et DCM/MeOH, 95/5) indique la disparition de l'intermédiaire (Rf= 0,35 et 0,95, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé beaucoup plus polaire (Rf= 0 et 0,55, respectivement). Pour stopper la réaction, une solution aqueuse de NaHSO ₃ 10% (10 mL) est ajoutée par fractions au milieu jusqu'à disparition de la coloration noire. Le milieu réactionnel est repris avec du DCM (30 mL) et la phase aqueuse est extraite au DCM (3 x 20 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaCl _sat (3 x 15 mL), avec de TH ₂ O (3 x 15 mL) puis séchées sur filtre séparateur de phases et concentrées à Févaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (DCM/MeOH, 99/1 →9/l) pour obtenir l'hémiacétal 51 sous forme d'une huile jaune (1,1 g, 91%). Rf= 0,55 (DCM/MeOH, 95/5).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ : a : 133-126 (m, 5H, CH _Ph ), 5.34 (m, IH, H-2 _B ), 5.25 (m, IH, H-3 _B ), 5.18 (m, IH, H-2 _C ), 5.10 (s, IH, H-l _c ), 5.05 (pi, IH, J ₃ , ₄ = 9.9 Hz, H-4 _B ), 5.04 (d, IH, J _1>2 = 1.7 Hz, H-I _B ), 4.80 (d, IH, J= 10.9 Hz, H _Bn ), 4.65 (d, IH, J= 10.9 Hz, H _Bn ), 4.19 (m, IH ₅ H- 3 _C ), 4.01-3.91 (m, 2H, H-5 _C , H-5 _B ), 3.58 (s, IH, OH), 3.49 (pt, IH, J ₃ , ₄ ≈ 9.5 Hz, H-4 _C ), 2.21, 2.08, 2.07, 1.99 (4s, 12H, H _Ac ), 1.31 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _C ), 1.19 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.3 Hz, H- 6B).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ: a : 171.7, 171.0, 170.6, 170.3 (4C, C _Ac ), 138.3-137.9 (C _Ph ), 128.8- 128.1 (CHp _h ), 99.7 (C-1 _B , ¹ J _CH = 172.7 Hz), 92.3 (C-l _c , ¹ J _CH = 170.5 Hz), 81.1 (C-4 _C ), 76.6 (C-3 _C ), 75.9 (C _Bn ), 72.9 (C-2 _C ), 71.1 (C-4 _B ), 70.2 (C-2 _B ), 69.5 (C-3 _B ), 68.2 (C-5 _C ) ₅ 67.6 (C- 5 _B ), 21.4, 21.2, 21.1, 21.0 (4C, C _Ac ), 18.3 (C-6 _C ), 17.6 (C-6 _B ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Naf C ₂₇ H ₃₆ Oi ₃ Na m/z théorique : 591.2054 m/z mesurée : 591.2037

[M+K] ⁺ C ₂₇ H ₃₆ Oi ₃ K m/z théorique : 607.1793 m/z mesurée : 607.1838

> Tricholroacétimidate de (2,3,4-tri-0-acétyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-2-0- acétyI-4-O-benzyl-α/β-L-rhamnopyranose 46 :

Chemical Formula: C2gH3gCl3NO-i3

Exact Mass: 711,1252 MolecularWeight: 712,9540

L'hémiacétal 51 (1,0 g, 1,7 mmol) est solubilisé dans du DCE (7 mL) et agité sous argon à - 5°C puis de la DBU (72 μL, 476 μmol, 0,28 éq.) et du trichloroacétonitrile (2,2 mL, 21,5 mmol, 12 éq.) sont ajoutés. Le milieu réactionnel est agité à cette température pendant 15 min puis il est déposé, sans aucun traitement, sur une colonne de gel de silice (flash chromatographie, Chex/EtOAc+5% NEt ₃ , 7/3) pour obtenir le trichloroacétimidate 46 sous forme d'une huile jaune (1,1 g, 89%). Rf= 0,5 (Chex/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ : a : 8.70 (s, IH, NH), 7.33-7.27 (m, 5H, CH _Ph ), 6.18 (d, IH, J _lj2 = 1.7 Hz, H-Ic), 5.35 (m, 2H, H-2 _B , H-2 _C ), 5.22 (m, IH, H-3 _B ), 5.08 (s, IH, Ji, ₂ = 1.5 Hz, H-1 _B ), 5.07 (pt, IH, J _3,4 = 9.9 Hz, H-4 _B ), 4.80 (d, IH, J= 10.8 Hz, H _Bn ), 4.68 (d, IH, J = 10.8 Hz, H _Bn ), 4.23 (m, IH, H-3 _C ), 4.00-3.92 (m, 2H, H-5 _C , H-5 _B ), 3.62 (pt, IH, J _3;4 = 9.6 Hz, H-4 _C ), 2.26, 2.08, 2.07, 1.99 (4s, 12H, H _Ac ), 1.37 (d, 3H, J _5,6 = 6.3 Hz, H-6 _C ), 1.19 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.3 Hz, H-6 _B ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ : a : 170.6, 170.5, 170.4, 170.2 (4C, C _Ac ), 164.0 (C=NH), 137.8 (C _Ph ), 128.8-128.3 (CH _Ph ), 99.6 (C-1 _B , ¹ J _0H = 173.4 Hz), 95.1 (C-l _c , ¹ Jc _H = 178.6 Hz), 91.2 (CCl ₃ ), 80.5 (C-4 _C ), 76.2 (C _Bn ), 75.6 (C-3 _C ), 71.3 (C-5 _C ), 70.9 (C-4 _B ), 70.7 (C-2 _C ), 70.0 (C-2 _B ), 69.4 (C-3 _B ), 67.8 (C-5 _B ), 21.3, 21.2, 21.1, 21.0 (4C, C _Ac ), 18.3 (C-6 _C ), 17.7 (C-6 _B ).

> Allyl (2,3,4-tri-O-acétyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-(2-O-acé tyl-4-C?-benzyl-α- L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-(2-désoxy-4,6-0-isopropylidène- 2- trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l→2)-[2,3,4,6-t� �tra-0-benzyl-α-D- glucopyranosyI-(l-→3)]-4-6>-benzyl-α-L-rhamnopyranosid e 52 :

Chemical Formula CggH-|04Cl3Nθ27

Exact Mass 171 1,5861 Molecular Weight 1714,1169

Du TMSOTf (50,0 μL, 280 μmol, 0,3 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 38 (1,1 g, 935 μmol) et de donneur 46 (935 mg, 1,3 mmol, 1,4 éq.) dans du Toi (5,6 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (765 mg), agitée sous argon à -78°C. Après 15 min sous agitation, le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 7/3) indique la disparition de 38 (Rf = 0,35) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,55). La réaction est stoppée par l'addition de triéthylamine (0,1 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 9/l→4/6) pour obtenir par ordre d'élution un solide blanc correspondant au glycoside d'allyle 52 (1,3 g, 80%) puis au diol 53 à savoir l' allyl (2,3,4-tri-O-acétyl-α-L-rhamnopyranosyl)- (l-→3)-(2-O-acétyl-4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→ -3)-(2-désoxy-2- trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l→2)-[2,3,4,6-t� �tra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl- (l→3)]-4-ο-benzyl-α-L-rhamnopyranoside (Rf = 0,25, 108 mg, 7%) contaminé par le donneur hydrolyse. Rf= 0,55 (Tol/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.48-7.12 (m, 35H, CH _Ph ), 6.95 (d, IH, J _NH , ₂ = 8.8 Hz, NH), 5.92 (m, IH, CH=), 5.38 (m, IH, H-2 _B ), 5.29 (m, IH, J _trans = 16.9 Hz, OH ₂ ), 5.28 (m, IH, H-3 _B ), 5.22 (d, IH, Ji ₁₂ = 4.1 Hz, H-1 _E ), 5.21 (m, IH, J _cis = 10.6 Hz, =CH ₂ ), 5.17 (m, IH, H-2 _C ), 5.15 (m, 4H, H-1 _B , H-4 _B , 2H _Bn ), 5.05 (d, IH, J = 12.2 Hz, H _Bn ), 4.95 (d, IH, J= 12.2 Hz, H _Bn ), 4.86-

4.82 (m, 3H, H-1 _A , 2H _Bn ), 4.76-4.70 (m, 3H, H _Bn , H-l _c , H _Bn ), 4.62-4.53 (m, 4H, 2H _Bn , H-I ₀ , H _Bn ), 4.36 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _5n ), 4.22-4.14 (m, 6H, H-3 _E , H _Aπ , H-3 _C , H-3 _A , H-5 _B , H-5 _E ), 4.09-4.04 (m, 3H, H-2 _D , H-5 _C , H-2 _A ) ₅ 3.99 (m, IH, H _AU ), 3.93-3.88 (m, 2H, H-2 _E , H-6a _D ), 3.85 (pt, IH, J _3;4 = 9.6 Hz ₅ H-4 _E ), 3.77-3.72 (m, 2H, H-5 _A , H-6b _D ), 3.57 (pt, IH ₃ J _3;4 = 9.2 Hz, H-4 _D ), 3.52-3.45 (m, 4H, H-4 _C , H-4 _A , H-6a _E , H-6b _E ) ₅ 2.84-2.80 (m, 2H, H-5 _D , H-3 _D ), 2.26, 2.13, 2.11, 2.03 (4s, 12H, H _Ac ), 1.52 (s, 3H, H _iPr ), 1.50 (s, 3H, H _iPr ), 1.44 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.37 (d, 3H, J _5,6 = 6.2 Hz, H-6 _B ), 1.33 (d, 3H ₅ J _5,6 = 6.2 Hz ₅ H-6 _C ). RMN. ¹³ C (CDCl ₃ ), δ 170.6, 170.5, 170.3, 170.2 (4C, C _Ac ), 162.4 (C _NTC A), 138.6-137.8 (C _Ph ), 134.3 (CH=), 129.8-127.7 (CH _Ph ), 117.6 (=CH ₂ ), 101.6 (C-1 _D , ¹ JcH = 164.7 Hz) ₅ 99.9 (C _iPr ), 99.2 (C-1 _B , ¹ Jc _H = 174.2 Hz) ₅ 98.8 (C-1 _A , ¹ J _0H = 171.2 Hz), 98.4 (C-l _c , ¹ JcH= 170.5 Hz) ₅ 94.7 (C-1 _E , ¹ Jc _H = 166.9 Hz) ₅ 93.4 (CCl ₃ ), 83.5 (C-3 _E ), 81.5 (C-4 _C ), 80.7 (C-2 _E ), 80.2 (C-4 _A ) ₅ 79.2 (C-4 _E ), 78.7 (C-3 _D ), 76.5 (C _Bn ), 75.6 (C-3 _C ), 75.7, 75.6, 75.4, 75.3 (4C ₅ C _Bn ), 74.9 (C-3 _A ) ₅ 74.1 (C-2 _A ), 73.8 (C _Bn ), 72.9 (C-4 _D ), 72.5 (C-2 _C ), 71.2 (C-4 _B ), 70.3 (2C, C-2 _B , C-5 _E ), 69.6 (C- 3 _B ), 68.8 (C-5 _A ), 68.4 (C-6 _E ), 68.3 (C-S ₀ ), 68.2 (C _A11 ), 67.8 (C-5 _B ), 67.4 (C-5 _D ), 62.5 (C-6 _D ), 58.0 (C-2 _D ), 29.6 (C _iPr ), 21.4, 21.3, 21.2, 21.1 (4C, C _Ac ), 19.5 (C _iPr ), 18.5 (C-6 _C ), 18.3 (C-6 _A ) ₅ 17.7 (C-6 _B ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₈₈ H ₁₀₄ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₇ Na m/z théorique : 1734.5759 m/z mesurée : 1734.5825 [M+NH ₄ ] ⁺ C ₈₈ H _1O4 ³⁵ Cl ₃ NO ₂₇ NH ₄ m/z théorique : 1729.6205 m/z mesurée : 1729.6278

> AUyI (α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-(2-0-acétyl-4-0-benzyl-α-L- rhamnopyranosyl)-(l→3)-(2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-2- trichloroacétamido- β-D-glucopyranosyl)-(l→2)-[2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-g lucopyranosyl-(l→3)]- 4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 54 :

> AHyI α-L-rhamnopyranosyI-(l→3)-(4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosy l)-(l→3)- (2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-2-trichloroacétamido-β-D- glucopyranosyl)- (l→2)-[2,3,4,6-tétra-O-benzyI-α-D-glucopyranosyI-(l→3) ]-4-O-benzyl-α-L- rhamnopyranoside 55 :

Chemical Formula: Cg2HggCl3Nθ24 Chemical Formula: CgoHgsCl3Nθ23

Exact Mass: 1585,5544 Exact Mass: 1543,5439 Molecular Weight: 1588,0068 Molecular Weight: 1545,9701

Le glycoside d'allyle 52 (525 mg, 300 μmol) est dissous dans du MeOH (20 mL) puis du carbonate de potassium {42 mg, 300 μmol, 1 éq.) est ajouté au milieu réactionnel. Après 25 min sous agitation à TA, le suivi par CCM (DCM/MeOH, 96/4 et Tol/EtOAc, 8/2) indique la disparition de 52 (Rf= 0,35 et I ₅ respectivement) et l'apparition de deux produits plus polaires (Rf= 0,3 et 0,25 dans Tol/EtOAc, 8/2). Le milieu réactionnel est alors neutralisé par addition de résine échangeuse d'ion DOWEX (H ⁺ ), puis filtré sur fritte. La résine est lavée avec un mélange DCM/MeOH et les solvants sont évaporés. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/ Acétone, 6/4→4/6) pour conduire par ordre d'élution au produit mono-acétylé 54 sous forme d'un solide blanc (414 mg, 85%) et au produit non-acétylé 55 sous forme d'un solide blanc (33 mg, 7%). 54 : Rf = 0,3 (DCM/MeOH, 96/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), «57.42-7.07 (m, 35H, CH _Ph ), 6.95 (d, IH, J _NH , ₂ = 8.8 Hz, NH), 5.92 (m, IH, CH=), 5.26 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.18 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.15 (d, IH, J _u = 3.4 Hz, H-1 _E ), 5.09-5.05 (m, 4H, H-2 _C , H-1 _B , 2H _Bn ), 4.98 (d, IH, J= 12.2 Hz, H _Bn ), 4.87 (d, IH, J= 12.2 Hz, H _Bn ), 4.80-4.74 (m, 3H, H-1 _A , 2H _Bn ), 4.70 (d, IH, J= 11.2 Hz, H _Bn ), 4.66-4.63 (m, 3H, H _Bn , H-l _c , H _Bn ), 4.56-4.47 (m, 3H, 2H _Bn , H-1 _D ), 4.30 (d, IH, J= 11.9 Hz, H _Bn ), 4.14-4.05 (m, 5H, H _A n, H-3 _E , H-3 _A , H-5 _E , H-3 _C ), 4.00-3.94 (m, 4H, H-2 _D , H _A n, H-2 _A , H- 5 _C ), 3.87-3.84 (m, 4H, H-6a _D , H-2 _B , H-5 _B , H-2 _E ), 3.79 (pt, IH, J _3,4 = 9.1 Hz, H-4 _E ), 3.70-3.65 (m, 3H, H-6b _D , H-5 _A , H-3 _B ), 3.53 (pt, IH, J _3;4 = 9.2 Hz, H-4 _D ), 3.46-3.37 (m, 5H, H-4 _B , H- 6a _E , H-6b _E , H-4 _C , H-4 _A ), 2.81-2.71 (m, 2H, H-5 _D , H-3 _D ), 2.14 (s, 3H, H _Ac ), 1.47 (s, 3H, H _iPr ), 1.43 (s, 3H, HiPr) ₃ 1.38 (d, 3H, J _5;6 = 5.9 Hz, H-6 _A ), 1.36 (d, 3H, J _5;6 = 6.0 Hz, H-6 _B ), 1.25 (d, 3H, J _5i6 = 6.2 Hz, H-6c).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £170.5 (C _A c), 162.6 (C _NTCA ), 138.7-138.1 (C _Ph ), 134.2 (CH=), 129.8- 127.7 (CHp _h ), 117.7 (=CH ₂ ), 101.6 (C-I ₁₃ , ¹ Jc _H = 170.5 Hz), 101.4 (C-1 _D , ¹ JcH = 159.5 Hz), 99.9 (CiPr), 98.7 (C-U, ¹ JCH = 172.0 Hz), 98.2 (C-I ₀ , ¹ JCH = 169.1 Hz), 94.6 (C-I _E , ¹ JcH = 166.9 Hz), 93.3 (CCl ₃ ), 83.4 (C-3 _E ), 81.3 (C-4 _C ), 80.6 (C-2 _E ), 80.1 (C-4 _A ), 79.1 (C-4 _E ), 78.7 (C-3 _D ), 76.5 (C _Bn ), 76.0 (C-3 _C ), 75.7, 75.6, 75.5, 75.3 (4C, C _8n ), 74.8 (C-3 _A ), 73.9 (C-2 _A ), 73.8 (C-4 _B ), 73.7 (C _Bn ), 72.9 (C-2 _C ), 72.7 (C-4 _D ), 71.8 (C-3 _B ), 71.4 (C-2 _B ), 70.2 (C-5 _E ), 69.2 (C-5 _B ), 68.7 (C-5A), 68.3 (C-5 _C ), 68.2 (2C, C-6 _E , C _A11 ), 67.3 (C-5 _D ), 62.4 (C-O ₀ ), 57.9 (C-2 _D ), 29.6 (CiPr), 21.6 (C _AC ), 19.5 (C _iPr ), 18.4 (C-6 _A ), 18.3 (C-6 _C ), 17.8 (C-6 _B ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₈₂ H ₉₈ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₄ Na m/z théorique : 1608.5542 m/z mesurée : 1608.5582 [M+NH ₄ ] ⁺ C ₈₂ H ₉₈ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₄ NH ₄ m/z théorique : 1603.5889 m/z mesurée : 1603.6035 [M+K] ⁺ C ₈₂ H ₉₈ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₄ K m/z théorique : 1624.5182 m/z mesurée : 1624.5436 55 : Rf - 0,25 (DCM/MeOH, 96/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.38-7.04 (m, 35H ₅ CH _Ph ), 6.93 (d, IH, J _NH ,2 = 8.8 Hz, NH), 5.86 (m, IH, CH-), 5.26 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.18 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.15 (d, IH, J _lj2 = 3.5 Hz, H-I _E ), 5.09-4.95 (m, 4H, H-1 _B , 3H _Bn ), 4.89 (d, IH, J= 12.3 Hz, H _Bn ), 4.78 (d, IH, J = 11.0 Hz, H _Bn ), 4.75 (d, IH, J _u = 1.0 Hz, H-I _A ), 4.73-4.61 (m, 4H, 2H _Bn , H-I ₀ , H _Bn ), 4.57 (d, IH, 8.4 Hz, H-I _n ), 4.32 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _Bn ), 4.14-4.07 (m, 4H, H _A n, H-3 _A , H-3 _E , H-5 _E ), 4.03 (d, IH, J _U2 = 9.2 Hz, H-2 _D ), 4.00-3.91 (m, 4H, H-5 _C , H-2 _A , H-3 _C , H _A n), 3.89-3.79 (m, 6H, H-2 _C , H-2 _B , H- 2 _E , H-6a _D , H-4 _E , H-3 _B ), 3.75-3.64 (m, 3H, H-5 _B , H-6b _D , H-5 _A ), 3.52-3.48 (pt, 2H, J ₃ , ₄ = 9.2 Hz, H-4 _D , H-4 _B ), 3.44 (m, 2H, H-6a _E , H-6b _E ), 3.48 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.9 Hz, H-4 _C ), 3.48 (pt, IH, J _3,4 ≈ 9.5 Hz, H-4 _A ), 2.74-2.69 (m, 2H, H-3 _D , H-5 _D ), 1.46 (s, 3H, H _iPr ), 1.42 (s, 3H, H _iPr ), 1.41 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.0 Hz, H-6 _B ), 1.37 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.22 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _C ). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 162.3 (CNT _CA ), 138.8-138.2 (C _Ph ), 134.2 (CH=), 129.8-127.7 (CH _Ph ), 117.6 (=CH ₂ ), 102.0 (C-1 _B , ¹ JcH = 175.6 Hz), 101.4 (C-1 _D , ¹ J _0H = 162.5 Hz), 100.2 (C-I ₀ , ¹ J ₀ H= 171.2 Hz), 99.8 (C _iPr ), 98.7 (C-IA, ¹ JcH= 172.0 Hz), 94.4 (C-1 _E , ¹ J ₀ H= 166.1 Hz), 93.3 (CCl ₃ ), 83.5 (C-3 _E ), 80.7 (C-4 _C ), 80.5 (C-2 _E ), 80.1 (C-4 _A ), 79.4 (C-3 _C ), 79.1 (C-4 _E ), 78.0 (C- 3 _D ), 76.6, 75.8, 75.6, 75.4, 75.3 (5C, C _Bn ), 74.5 (C-3 _A ), 73.8 (C-4 _B ), 73.7 (C _Bn ), 73.6 (C-2 _A ), 72.5 (C-4 _D ), 72.0 (C-3 _B ), 71.5 (C-2 _C ), 71.4 (C-2 _B ), 70.1 (C-5 _E ), 69.2 (C-5 _B ), 68.7 (C-5 _A ), 68.2

(2C, C-6 _E , C _A H), 68.0 (C-5 _C ), 67.3 (C-5 _D ), 62.4 (C-6 _D ), 58.1 (C-2 _D ), 30.1 (C _iPr ), 19.5 (C _iPr ), 18.3, 18.2 (C-6 _A ^* ,C-6 _C ^* ), 17.8 (C-6 _B ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Naf C ₈₀ H ₉₆ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₃ Na m/z théorique : 1566.5337 m/z mesurée : 1566.5404

[M+NH ₄ f C ₈₀ H ₉₆ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₃ NH ₄ m/z théorique : 1561.5782 m/z mesurée : 1561.5812

> AHyI (α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-(2-6>-acétyl-4-O-benzyl-� �-L- rhamnopyranosyl)-(l-→3)-(2-désoxy-2-trichloroacétamido-� �-D-glucopyranosyl)- (1— ^2)-[2,3,4,6-tétra-C?-benzyI-α-D-glucopyranosyl-(l— >3)]-4-O-benzyl-α-L- rhamnopyranoside 56 :

Chemical Formula: C7gHg4Cl3Nθ24

Exact Mass: 1545,5231 Molecular Weight: 1547,9430

Une solution aqueuse de TFA 50% (2 mL) est additionnée lentement à une solution de triol 54 (292 mg, 180 μmol) dans du DCM (5 mL) à 0°C. Le milieu réactionnel est agité pendant 2 h à cette température, temps au bout duquel le suivi par CCM (DCM/MeOH, 95/5) indique la disparition totale de 54 (Rf = 0,35) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,3). Le milieu réactionnel est concentré par coévaporation avec du Toi (3 x 10 mL). L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (DCM/MeOH, 95/5→93/7) pour obtenir le mono-acétylé 56 sous forme d'un solide blanc (274 mg, 95%). Rf= 0,3 (DCM/MeOH, 95/5).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), (57.39-7.05 (m, 36H, CH _Ph , NH), 5.88 (m, IH, CH=), 5.28 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.22-5.20 (m, 2H, H-1 _E , =CH ₂ ), 5.11 (m, IH, H-2 _C ), 5.09-5.02 (m, 3H, H _Bn ), 4.98 (m, IH, H-1 _B ), 4.93 (d, IH, J = 12.5 Hz, H _Bn ), 4.84 <d, IH, J _1;2 ≈ 1.3 Hz, H-IA), 4.81- 4.73 (m, 3H, H _Bn ), 4.63-4.60 (m, 3H ₅ H _Bn , H-1 _D , H _5n ), 4.57 (m, IH, H-I ₀ ), 4.54-4.49 (m, 2H,

H _Bn ), 4.33 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _Bn ), 4.17-4.07 (m, 6H, H-3 _A , H _A π, H-3 _E , H-5 _E , H-3 _C , H-2 _A ), 4.00-3.95 (m, 2H ₅ H-2 _D , H _A n), 3.90 (m, IH, H-5 _C ), 3.88-3.85 (m, 2H, H-2 _B , H-6a _D ), 3.84-3.78 (m, 2H, H-2 _E , H-4 _E ), 3.77-3.61 (m, 4H, H-6b _D , H-5 _B , H-3 _B , H-5 _A ), 3.51-3.41 (m, 5H, H-4 _A , H-6a _E , H-6b _E , H-4 _C , H-4 _B ), 3.53 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 8.9 Hz, H-4 _D ), 3.04 (m, IH ₅ H-5 _D ), 2.29 (m, IH, H-3 _D ), 2.19 (s, 3H, H _Ac ) ₅ 1.25 (d, 3H ₅ J _5,6 = 6.2 Hz ₅ H-6 _B ), 1.36 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz ₅ H- 6 _C ) ₅ 1.38 (d, 3H ₅ J ₅ , ₆ = 6.2 Hz ₅ H-6 _A ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ 170.5 (C _Ac ), 162.8 (C _NTCA ), 138.9-138.2 (C _Ph ), 134.3 (CH=), 129.7- 127.8 (CHph), 117.7 (=CH ₂ ), 102.1 (C-1 _B , ¹ J _0H = 167.9 Hz) ₅ 101.1 (C-1 _D , ¹ JcH = 164.0 Hz), 98.7 (C-Ic ₅ ¹ JCH= 170.3 Hz), 98.6 (C-1 _A , ¹ Jc _H = 170.3 Hz) ₅ 94.5 (C-1 _E , ¹ JcH = 167.9 Hz) ₅ 93.2 (CCl ₃ ), 86.6 (C-3 _D ) ₅ 83.4 (C-3 _E ), 80.7 (C-2 _E ), 80.3 (C-4 _C ), 79.9 (C-4 _A ), 79.1 (C-4 _E ), 77.7 (C- 3 _C ), 76.6, 75.9, 75.7, 75.4, 75.3 (5C, C _Bn ), 75.2 (C-5 _D ), 74.8 (C-3 _A ), 74.0 (C-2 _A ), 73.8 (C-4 _B ), 73.7 (C _Bn ), 72.5 <C-2 _C ), 71.9 (C-3 _B ), 71.4 (C-2 _B ), 70.9 (C-4 _D ), 70.3 <C-5 _E ,), 69.5 (C-5 _C ), 69.4 (C-5A), 68.8 (C-5 _B ), 68.4 (C-6 _E ) ₅ 68.2 (C _A1I ), 63.1 (C-6 _D ), 55.8 (C-2 _D ), 21.4 (C _Ac ) ₅ 18.4 (C-6 _C ), 18.3 (C-6 _B ), 17.8 (C-6 _A ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₇₉ H ₉₄ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₄ Na m/z théorique : 1568.5129 m/z mesurée : 1568.5162 [M+NH ₄ ] ⁺ C ₇₉ H ₉₄ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₄ NH ₄ m/z théorique : 1563.5575 m/z mesurée : 1563.5681

> AUyI α-L-rhamnopyranosyl-(l→^3)-(4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranos yl)-(l-→3)- (2-désoxy-2-trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l— ^2)-[2,3 ₅ 4,6-tétra-C?- benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l→3)]-4-0-benzyl-α-L-rhamnopy ranoside 57 :

Chemical Formula: C ₇ 7Hg2Cl3Nθ ₂ 3

Exact Mass: 1503,5126 Molecular Weight: 1505,9063

Une solution aqueuse de TFA 50% (2 mL) est additionnée lentement à une solution de tétraol 55 (340 mg, 180 μmol) dans du DCM (5 mL) à 0°C. Le milieu réactionnel est agité pendant 2

h à cette température, temps au bout duquel le suivi par CCM (DCM/MeOH, 94/6) indique la disparition totale de 55 (Rf = 0,35) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,2). Le milieu réactionnel est concentré par coévaporation avec du Toi (3 x 10 mL). L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (DCM/MeOH, 95/5→93/7) pour obtenir le non-acétylé 57 sous forme d'un solide blanc (314 mg, 95%). Rf= 0,2 (DCM/MeOH, 94/6).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.34-7.05 (m, 35H, CH _Ph , NH), 6.93 (d, IH, J _NH , ₂ = 8.7 Hz, 5.86 (m, IH, CH=), 5.26 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.20 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.17 (d, IH, J _lj2 = 3.6 Hz, H-I _E ), 5.06 (d, IH, J = 11.0 Hz, H _Bn ), 5.02 (m, IH, H-1 _B ), 5.01-4.97 (m, 2H ₅ H _Bn ), 4.88 (d, IH, J = 12.3 Hz, H _Bn ), 4.81 (d, IH, J _1;2 = 1.4 Hz, H-U) ₅ 4.78-4.69 (m, 3H, H _Bn ), 4.62-4.56 (m, 3H, H _Bn , H-1 _D , H _Bn ), 4.51-4.47 (m, 3H, H _5n , H-l _c , H _Bn ), 4.32 (d, IH, J = 12.0 Hz, H _Bn ), 4.15-4.13 (m, 2H, H-3 _A , H _A n), 4.11-4.07 (m, 2H, H-3 _E , H-5 _E ), 4.02 (m, IH, H- 2 _A ), 3.98-3.95 (m, 2H ₅ H-3 _C , H _A π), 3.93-3.87 (m, 4H ₅ H-2 _C H-2 _D , H-5 _C , H-2 _B ), 3.84 (m, IH, H-6a _D ), 3.82-3.71 (m, 5H ₅ H-5 _B , H-2 _E , H-4 _E , H-6b _D , H-3 _B ), 3.69 (m, IH, H-5 _A ), 3.48 (pt, IH ₅ J _3,4 = 9.2 Hz ₅ H-4 _B ), 3.47-3.37 (m, 5H ₅ H-4 _C , H-6a _E , H-6b _E , H-4 _A , H-4 _D ), 3.04 (m, IH ₅ H-5 _D ), 2.38 (pt, IH, J _3;4 = 9.1 Hz, H-3 _D ), 1.27 (d, 3H, J _5>6 = 6.5 Hz, H-6 _C ), 1.36 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.37 (d, 3H ₅ J ₅₎₆ = 6.2 Hz, H-6 _B ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 162.4 (C _NTCA ), 138.2-137.9 (C _Ph ), 134.2 (CH=), 129.2-127.7 (CH _Ph ), 117.7 (=CH ₂ ), 101.4 (C-1 _B , ¹ JcH = 167.6 Hz), 101.1 (C-I ₀ , ¹ JCH = 159.5 Hz), 100.9 (C-l _c , ¹ Jc _H = 168.3 Hz) ₅ 98.6 (C-1 _A , ¹ J _0H = 174.2 Hz), 94.3 (C-1 _E , ¹ J _0H = 169.1 Hz), 93.3 (CCl ₃ ), 85.8 (C-3 _D ), 83.4 (C-3 _E ), 80.6 (C-2 _E ), 80.3 (C-4 _A ), 80.0 (C-4 _C ), 79.2 (C-4 _E ), 78.8 (C-3 _C ) ₅ 76.6, 75.7, 75.6, 75.5 (4C, C _Bn ), 75.3 (C-5 _D ), 75.2 (C _Bn ), 74.5 (C-3 _A ) ₅ 74.0 (C-2 _A ), 73.7 (C _Bn ) ₅ 73.6 (C-4 _B ), 71.9 (C-3 _B ), 712 (C-2 _B ), 70.9 (C-2 _C ), 70.6 (C-4 _D ), 70.3 (C-5 _E ,), 69.4 (2C, C-5 _B , C-5 _C ), 68.8 (C-5 _A ), 68.3 (C-6 _E ), 68.1 (C _A ,,), 63.0 (C-6 _D ), 56.3 (C-2 _D ), 18.2, 18.1, 18.0 (C-6 _A ^* ₅ C-6 _B ^* , C-6c ^* ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₇₇ H ₉₂ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₃ Na m/z théorique : 1526.5023 m/z mesurée : 1526.5076 [M+NH ₄ ] ⁺ C ₇₇ H ₉₂ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₃ NH ₄ m/z théorique : 1521.5470 m/z mesurée : 1521.5582 [M+K] ⁺ C ₇₇ H ₉₂ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₃ K m/z théorique : 1542.4763 m/z mesurée : 1542.4871 > AUyI 3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside ⁹⁶ ' ¹⁰² 58 :

Chemical Formula: C23H28O5

Exact Mass: 384,1937 Molecular Weight: 384,4654

Le diol 26 (1,9 g, 6,6 mmol) et l'oxyde de dibutylétain (1,8 g, 7,2 mmol, 1,1 éq.) sont dissous dans du Toi (52 mL). Le milieu réactionnel est chauffé à reflux durant 2 h surmonté d'un soxhlet contenant du tamis moléculaire activé. La solution est refroidie à 60°C et le soxhlet est enlevé. Du flurorure de césium (1,5 mL, 13,1 mmol, 2 éq.) est ajouté et le milieu réactionnel est évaporé. Le résidu est repris au DMF (50 mL) et du bromure de benzyle (1,6 mL, 13,1 mmol, 2 éq.) est additionné. Le milieu réactionnel est alors agité durant une nuit à TA, temps au bout duquel le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3) montre l'apparition d'un nouveau composé moins polaire (Rf= 0,35). Le milieu réactionnel est alors filtré, repris au dichlorométhane (200 mL) et lavé avec une solution de NaCl sat (3 x 50 mL), de l'H ₂ O (3 x 50 mL) puis séché sur Na ₂ SO ₄ et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 8/2→4/6) pour conduire à l'alcool 58-sous forme d'une huile incolore (2,2 g, 88% soit 68% via 27). Rf= 0,35 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), J7.41-7.36 (m, 1OH, CH _Ph ), 5.93 (m, IH, CH=), 5.32 (m, IH, J _tran s= 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.23 (m, IH ₅ J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 4.94 (d, IH, J = 10.9 Hz, H _Bn ), 4.90 (d, IH, J _1; 2 = 1.5 Hz, H-I), 4.74 (m, 2H, H _Bn ), 4.70 (d, IH, J= 10.9 Hz, H _Bn ), 4.19 (m, IH, H _A n), 4.10 (m, IH, H-2), 4.03 (m, IH, H _A π), 3.93 (dd, IH, J _2,3 = 3.3 Hz, J _3>4 = 9.1 Hz, H-3), 3.81 (m, IH, H-5), 3.53 (pt, IH, J _4,5 = 9.3 Hz, H-4), 2.69 (bs, IH, OH), 1.38 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.3 Hz, H-6). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ 138.8-138.4 (C _Ph ), 134.3 (CH=), 128.9-128.1 (CH _Ph ), 117.7 (=CH ₂ ), 98.7 (C-I, ¹ Jc _H = 167.6 Hz), 80.5 (C-4), 80.4 (C-3), 75.8, 72.4 (2C, Q _3n ), 69.0 (C-2), 68.3 (C _A H), 67.8 (C-5), 18.3 (C-6).

> Allyl 3,4-di-0-benzyl-2-0-lévuUnoyl-α-L-rhamnopyranoside 59 :

Chemical Formula: C28H34O7

Exact Mass: 482,2305 Molecular Weight: 482,5654

L'alcool 58 (2,2 g, 5,7 mmol) est dissous dans du DCM (120 mL) puis la DCC (1,8 g, 8,5 mmol, 1,5 éq.), la DMAP (1,4 g, 11,3 mmol, 2 éq.), et l'acide lévulinique (1,1 mL, 10,2 mmol, 1,8 éq.) sont ajoutés par portions. Le milieu réactionnel est agité durant une nuit, temps

au bout duquel le suivi par CCM (DCM/EtOAc, 9/1) montre la formation d'un composé moins polaire majoritaire (Rf= 0,75) et la disparition de 58 (Rf= 0,65). La DCU est filtrée sur célite et le filtrat est repris à l'H ₂ O (50 mL). La phase aqueuse est extraite au DCM (3 x

200 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution d'HCl 10% (3 x

100 mL), une solution de NaHCO _3sa t (3 x 100 mL), une solution de NaCl _sa t (3 x 100 mL), filtrées sur filtre séparateur de phases et concentrées à l'évaporateur rotatif. L'huile obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 85/15→8/2) pour conduire à l'ester de lévulinoyle 59 sous forme d'une huile incolore (2,4 g, 89%).

Rf= 0,4 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), (57.39-7.30 (m, 10H, CH _Ph ), 5.91 (m, IH, CH=), 5.43 (m, IH, H-2), 5.28

(m, IH, J _trans = 15.8 Hz, =CH ₂ ), 5.22 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 4.95 (d, IH, J= 10.8 Hz,

H _Bn ), 4.81 (d, IH, J _1;2 = 1.5 Hz, H-I), 4.72 (d, IH, J= 11.2 Hz, H _Bn ), 4.65 (d, IH, J= 10.8

Hz, HB ₁₁ ), 4.55 (d, IH, J= 11.2 Hz, H _Bn ), 4.16 (m, IH, H _A π), 3.99 (m, 2H, H _AI1 , H-3), 3.81 (m,

IH, H-5), 3.46 (pt, IH, J ₄ , ₅ = 9.4 Hz, H-4), 2.74 (m, 4H, 2CH _2Le y) ₅ 2.19 (s, 3H, CH _3Le v), 1.37

(d, 3H, J _5,6 = 6.2 Hz, H-6).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.6 (C _Lev ), 172.5 (C _Lev ), 138.9-138.5 (C _Ph ), 133.9 (CH=), 128.9-128.1

(CHp _h ), 118.0 (=CH ₂ ), 97.1 (C-I, ¹ Jc _H = 169.8 Hz), 80.5 (C-4), 78.5 (C-3), 75.8, 72.0 (2C,

Q _3n ), 69.5 (C-2), 68.4 (C _A n), 68.1 (C-5), 38.4 (CH _2L ev), 30.2 (CH _3L ev), 28.6 (CH _2Lev ), 18.4 (C-

6).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₂₈ H ₃₄ O ₇ Na m/z théorique : 505.2202 m/z mesurée : 505.2201 > 3,4-Di-0-benzyl-2-0-IévuIinoyl-α/β-L-rhamnopyranose 60 :

-Chemical Formula. C25H30O7

Exact Mass: 442,1992 Molecular Weight: 442,5015

Le (1 ,5-cyclooctadiènebis(méthyldiphénylphosphine)iridium(I)he xafluorophosphate) (120 mg) est dissous dans du THF (60 mL) sous agitation. Le milieu subit 5 cycles dégazage vide/argon, 5 cycles dégazage vide/hyrdogène puis est mis sous hydrogène pendant 15 min. Le milieu subit alors une seconde fois 5 cycles dégazage vide/argon. La solution de glycoside d'allyle 59 (2,7 g, 5,7 mmol) dans du THF (8 mL) est transféré sur la solution de catalyseur activé. Le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3) montre la disparition de 59 (Rf= 0,4) et l'apparition d'un produit un peu moins polaire (Rf= 0,5).

Du diiode (2,9 g, 11,3 mmol, 2 éq.) en solution dans un mélange THF/H ₂ O (8/2, 30 mL) est ajouté au milieu réactionnel. Le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3 et DCM/MeOH, 98/2) indique la disparition de l'intermédiaire (Rf= 0,5 et 0,8, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé beaucoup plus polaire (Rf= 0,05 et 0,25, respectivement). Pour stopper la réaction, une solution aqueuse de NaHSO ₃ 10% (20 mL) est ajoutée par fractions au milieu jusqu'à disparition de la coloration noire. Le milieu réactionnel est repris avec du DCM (50 mL) et la phase aqueuse est extraite au DCM (3 x 30 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaCl _sat (3 x 30 mL), avec de l'H ₂ O (3 x 30 mL) puis séchées sur filtre séparateur de phases et concentrées à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (DCM/MeOH, 99/1 — >9/l) pour obtenir un mélange d'anomères α/β dans les proportions 75/25 de Phémiacétal 60 sous forme d'une huile jaune (2,4 g, 96%). Rf= 0,25 (DCM/MeOH, 98/2)

60 _α : RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.37-7.28 (m, 10H, CH _Ph ), 5.40 (m, IH, H-2), 5.13 (m, IH, H-I), 4.95 (d, IH, J= 10.9 Hz, H _Bn ), 4.75-4.51 (m, 2H, H _Bn ), 4.20 (d, IH, J= 10.7 Hz, H _Bn ), 4.03- 3.98 (m, 2H, H-3, H-5), 3.43 (pt, IH, J _3j4 = 9.4 Hz, H-4), 2.73 (m, 4H, 2CH _2Le v), 2.18 (s, 3H, CH ₃ LeO, 1-33 (d, 3H, J _5;6 = 6.2 Hz, H-6).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.8 (C _Lev ), 172.5 <C _Lev ), 138.9-138.0 (C _Ph ), 128.8-128.0 (CH _Ph ), 92.7 (C-I, ¹ Jc _H = 170.3 Hz), 80.5 (C-4), 77.9 (C-3), 75.7, 72.0 (2C, C _5n ), 70.0 (C-2), 68.1 (C-5), 38.5 <CH _2L ev), 30.1 (CH ₃ LeO, 28.6 (CH ₂ Uv), 18.4 (C-6).

60 _β : RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.37-7.28 (m, 10H, CH _Ph ), 5.56 (m, IH, H-2), 4.95 (d, IH, J= 10.9 Hz, H _Bn ), 4.77 (d, IH, H-I), 4.75-4.51 (m, 2H, H _5n ), 4.20 (d, IH, J= 10.7 Hz, H _3n ), 3.66 (dd, IH, J _2;3 = 3.3 Hz, J ₃ , ₄ = 8.9 Hz, H-3), 3.38 (m, IH, H-5), 3.21 (m, IH, H-4), 2.73 (m, 4H, 2CH _2Lev ), 2.20 (s, 3H, CH ₃ LeO, 1-38 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 5.9 Hz, H-6).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ 208.2 (C _Lev ), 173.0 (CuO, 138.9-138.0 (C _Ph ), 128.8-128.0 (CH _Ph ), 93.5 (C-lβ, ¹ Jc _H = 158.8 Hz), 80.4 (C-3), 79.9 (C-4) 75.8, 71.9 (2C, Ca ₁ ), 72.1 (C-5), 70.5 (C-2), 39.0 (CH ₂ LeO, 30.2 (CH ₃ LeO, 28.8 (CH ₂ Uv), 18.4 (C-6).

HRMS (ESf) : [M+Na] ⁺ C ₂₅ H ₃₀ O ₇ Na m/z théorique : 465.1889 m/z mesurée : 465.1876 > Trichloracétimidate de 3,4-di-0-benzyl-2-CMévulinoyl-α-L-rhamnopyranose 49 :

Chemical Formula: C27H30GI3NO7

Exact Mass: 585,1088 Molecular Weighf 586,8886

L'hémiacétal 60 (2,1 g, 4,8 mmol) est solubilisé dans du DCE (15 mL) et agité sous argon à - 5°C puis de la DBU (202 μL, 1,3 mmol, 0,28 éq.) et du trichloroacétonitrile (2,4 mL, 24,2 mmol, 5 éq.) sont ajoutés. Le milieu réactionnel est agité à cette température pendant 15 min puis il est déposé, sans aucun traitement, sur une colonne de gel de silice (flash chromatographie, Chex/EtOAc+5% NEt ₃ , 7/3→l/l) pour obtenir le trichloroacétimidate 49 sous forme d'une huile jaune (2,6 g, 92%). Rf= 0,4 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ U (CDCl ₃ ), J8.68 (s, IH, NH), 7.37-7.28 (m, 1OH, CH _Ph ), 6.20 (d, IH, J _1;2 = 1.9 Hz, H-I), 5.50 (m, IH, H-2), 4.97 (d, IH, J= 10.8 Hz, H _Bn ), 4.74 (d, IH, J= 11.3 Hz, H _Bn ), 4.67 (d, IH, J= 10.8 Hz, H _Bn ), 4.58 (d, IH, J= 11.3 Hz, H _Bn ), 4.03-3.94 (m, 2H, H-3, H-5), 3.53 (pt, IH, J ₄ , ₅ = 9.5 Hz, H-4), 2.78 (m, 4H, 2CH _2Lev ), 2.19 (s, 3H, CH _3Lw ), 1.37 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.4 (C _Lev ), 172.2 (C _Uv % 160.7 (C=NH), 138.5-138.0 (C _Ph ), 128.8- 128.2 (CHp _h ), 95.5 (C-1, ¹ J _0H = 178.6 Hz), 91.3 (CCl ₃ ), 79.7 (C-4), 77.6 (C-3), 76.0, 72.3 <2C, C _Bn ), 71.1 (C-5), 68.2 (C-2), 38.4 (CH _2Lev ), 30.2 (CH _3Lev ), 28.5 (CH _2Lev ), 18.4 (C-6).

> Allyl (3,4-di-0-benzyI-2-0-lévulinoyI-α-L-rhamnopyranosyI)-(l-� �3)-2-0-acétyI-4- O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 61 :

Chemical Formula: C43H52O12

Exact Mass: 760,3459 MolecularWeight. 760,8658

Du TMSOTf (I ₅ I mL, 6,0 mmol, 0,3 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 31 (6,8 g, 20,2 mmol) et de donneur 49 (14,2 g, 24,2 mmol, 1,2 éq.) dans du Toi (250 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (17 g), agitée sous argon à -78°C. Après 1 h à cette température, le bain éthanol-carboglace est retiré et l'agitation est poursuivie pendant 30 min, temps au bout duquel le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2, Chex/EtOAc, 6/4) indique la disparition de 31 (Rf = 0,3 et 0,4, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé (Rf = 0,45 et 0,5, respectivement). La réaction est stoppée par addition de triéthylamine (1 mL) puis le milieu

réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 95/5→85/15) pour obtenir le glycoside d'allyle

61 sous forme d'une huile incolore (13,3 g, 89%).

Rf= 0,5 (Chex/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δl '.39-7..27 (m, 15H, CH _Ph ), 5.89 (m, IH, CH=), 5.46 (m, IH, H-2 _B ), 5.29

(m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.21 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.17 (m, IH, H-2 _C ), 5.05

(d, IH, J _1>2 = 1.5 Hz, H-I _B ), 4.91 (d, IH, J = 11.0 Hz, H _Bn ), 4.87 (d, IH, J = 10.9 Hz, H _Bπ ),

4.80 (d, IH, J _u = 1.5 Hz, H-I ₀ ), 4.67-4.60 (d, 3H, H _Bn ), 4.45 (d, IH, J= 11.3 Hz, H _Bn ), 4.20-

4.13 (m, 2H, H-3 _C , H _A π), 3.98 (m, IH, H _A n), 3.90 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 3.3 Hz, J ₃ , ₄ = 9.3 Hz, H-3 _B ),

3.83-3.74 (m, 2H, H-5 _B , H-5 _C ), 3.47 (pt, IH, J _3,4 = 9.5 Hz, H-4 _C ), 3.43 (pt, IH, J _3j4 = 9.4 Hz,

H-4 _B ), 2.71 (m, 4H, 2CH _2L ev), 2.18 (s, 3H, CH _3Le v), 2.14 (s, 3H, H _Ac ), 1.31 (m, 6H, H-6 _C , H-

6B).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), «5206.4 (C _Lev ), 172.2 (C _Lev ) ₅ 170.6 (C _Ac ), 138.9-138.4 (C _Ph ), 133.9 (CH=),

128.9-128.0 (CHp _h ), 117.8 C=CH ₂ ), 100.0 (C-1 _B , ¹ JcH = 169.5 Hz), 96.6 (C-l _c , ¹ JCH = 170.0

Hz), 80.7 (C-4 _C ), 80.2 (C-4 _B ), 78.1 (C-3 _C ), 78.0 (C-3 _B ), 75.9, 75.6 (2C, C _Bn ), 72.7 (C-2 _C ),

71.9 (C _Bn ), 69.7 (C-2 _B ), 69.0 (C-5 _B ), 68.6 (C _A11 ), 68.2 (C-5 _C ), 38.4 (CH _2Lev ), 30.2 (CH _3Lev ),

28.6 (CH _2Lev ), 21.4 (C _Ac ), 18.3(2C, C-6 _B , C-6 _C ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₄₃ H ₅₂ O ₁₂ Na m/z théorique : 783.3356 m/z mesurée : 783.3364 [M+NH ₄ ] ⁺ C ₄₃ H ₅₂ Oi ₂ NH ₄ m/z théorique : 778.3802 m/z mesurée : 778.3829

> (3,4-Di-0-benzyl-2-O-lévulinoyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l— »3)-2-O-acétyl-4-0- benzyl-α/β-L-rhamnopyranose 62 :

Chemical Formula:

Exact Mass: 720,3146 MolecularWeight: 720,8019

Le (l,5-cyclooctadiènebis(méthyldiphénylphosphine)iridium(I) hexafluorophosphate) (175 mg) est dissous dans du THF (90 mL) sous agitation. Le milieu subit 5 cycles dégazage vide/argon, 5 cycles dégazage vide/hyrdogène puis est mis sous hydrogène pendant 15 min. Le milieu subit alors une seconde fois 5 cycles dégazage vide/argon. La solution de glycoside d'allyle 61 (8,0 g, 10,6 mmol) dans du THF (15 mL) est transféré sur la solution de catalyseur

activé. Le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2) montre la disparition du produit de départ (Rf= 0,45) et l'apparition d'un produit un peu moins polaire (Rf= 0,5).

Du diiode (5,4 g, 21,2 mmol, 2 éq.) en solution dans un mélange THF/H ₂ O (8/2, 30 mL) est ajouté au milieu réactionnel. Le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2 et DCM/MeOH, 98/2) indique la disparition de l'intermédiaire (Rf= 0,5 et 0,95, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé beaucoup plus polaire (Rf= 0,05 et 0,45, respectivement). Pour stopper la réaction, une solution aqueuse de NaHSO ₃ 10% (25 mL) est ajoutée par fractions au milieu jusqu'à disparition de la coloration noire. Le milieu réactionnel est repris avec du DCM (100 mL) et la phase aqueuse est extraite au DCM (3 x 100 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaCl _sat (3 x 50 mL), avec de l'H ₂ O (3 x 50 mL) puis séchées sur filtre séparateur de phases et concentrées à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (DCM/MeOH, 99/l→9/l) pour obtenir majoritairement Fhémiacétal 62 sous forme d'une huile jaune (7,1 g, 93%). Rf= 0,45 (DCM/MeOH, 98/2).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.39-7.28 (m, 15H, CH _Ph ), 5.44 (dd, IH, J _ij2 = 1.9 Hz, J ₂ , ₃ = 3.2 Hz, H- 2 _B ), 5.16 (dd, lH, J _u = 1.8 Hz, J _2j3 = 3.1 Hz, H-2 _C ), 5.12<d, lH, J _lj2 = 1.5 Hz, H-l _c ), 5.05 (d, IH, J _1;2 = 1.5 Hz, H-I _B ), 4.92 (d, IH, J- 11.0 Hz, H _Bn ), 4.83 (d, IH, J= 10.9 Hz, H _Bn ), 4.67- 4.60 (m, 3H, H _Bn ), 4.45 (d, IH, J= 11.3 Hz, H _Bn ), 4.20 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 3.3 Hz, J _3;4 = 9.5 Hz, H- 3 _C ), 3.98 (dq, IH, H-5 _C ), 3.89 (dd, IH, J _2;3 = 3.3 Hz, J _3i4 = 9.3 Hz, H-3 _B ), 3.83 (dq, IH, H-5 _B ), 3.77 (m, IH, OH), 3.47 (pt, IH, J _3;4 = 9.5 Hz, H-4 _C ), 3.43 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.3 Hz, H-4 _B ), 2.70 (m, 4H, 2CH _2Le v), 2.18 (s, 3H, CH _3L ev), 2.14 (s, 3H, H _Ac ), 1.29 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.3 Hz, H-6 _B ), 1.30 (d, 3H, J _5;6 = 6.2 Hz, H-6 _C ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), J206.8 (C _L e _v ), 172.6 (C _Lev ), 171.6 (C _Ac ), 138.8-138.4 (C _Ph ), 128.9-128.1 (CHp _h ), 99.9 (C-1 _B , ¹ Jc _H = 173.3 Hz), 92.0 (C-l _c , ¹ J _0H = 170.0 Hz), 80.7 (C-4 _C ), 80.2 (C-4 _B ), 78.0 (C-3 _B ), 77.7 (C-3 _C ), 75.8, 75.6 (2C, Ca ₁ ), 73.2 (C-2 _C ), 72.0 (C _Bn ), 69.7 (C-2 _B ), 69.0 (C- 5 _B ), 68.0 (C-5 _C ), 38.4 (CH _2Lev ), 30.2 (CH _3Lβ v), 28.5 (CH _2Lev ), 21.5 (C _Ac ), 18.5, 18.4 (C-6 _B ^* , C- 6c ^* )- HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₄₀ H ₄₈ O ₁₂ Na m/z théorique : 743.3043 m/z mesurée : 743.3173 [M+NH ₄ ] ⁺ C ₄₃ H ₅₂ Oj ₂ NH ₄ m/z théorique : 738.3489 m/z mesurée : 738.3627

> Trichloroacétimidate de (3,4-di-0-benzyl-2-0-lévulinoyl-α-L-rhamnopyranosyl)- (l→3)-2-0-acétyl-4-0-benzyl-α/β-L-rhamnopyranose 47 :

Chemical Formula: C ₄₂ H ₄₈ CI ₃ NOi ₂

Exact Mass: 863,22 Molecular Weight: 865,19

L'hémiacétal 62 (8,7 g, 12,1 mmol) est solubilisé dans du DCE (50 mL) et agité sous argon à -5 ⁰ C puis de la DBU (508 μL, 3,3 mmol, 0,28 éq.) et du trichloroacétonitrile (6,1 mL, 60,7 mmol, 5 éq.) sont ajoutés. Le milieu réactionnel est agité à cette température pendant 15 min puis il est déposé, sans aucun traitement, sur une colonne de gel de silice (flash chromatographie, Chex/EtOAc+5% NEt ₃ , 7/3-→l/l) pour obtenir le trichloroacétimidate 47 sous forme d'une huile jaune (8,7 g, 84%). Rf= 0,5 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £8.72 (s, IH, NH), 7.42-7.29 (m, 15H, CH _Ph ), 6.22 (d, IH, J _lj2 - 1.9 Hz, H-Ic), 5.48 (dd, IH, J _1>2 = 1.8 Hz, J _2;3 - 3.2 Hz, H-2 _B ), 5.31 (dd, IH, J _1;2 = 2.1 Hz, J ₂ , ₃ = 3.1 Hz, H-2 _C ), 5.10 (d, IH, J _lj2 = 1.4 Hz, H-I ₁₃ ), 4.92 (d, IH, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.85 (d, IH, J = 10.8 Hz, H _Bn ), 4.68-4.62 (m, 3H, H _Bn ), 4.51 (d, IH, J= 11.3 Hz, H _Bn ), 4.26 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 3.3 Hz, J ₃ , ₄ = 9.5 Hz ₅ H-3 _C ), 3.96 (dq, IH, H-5 _C ), 3.89 (dd, IH, J _2;3 = 3.3 Hz, J ₃ , ₄ = 9.3 Hz, H-3 _B ), 3.82 (dq, IH, H-5 _B ), 3.58 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.5 Hz, H-4 _C ), 3.44 (pt, IH, J _3;4 = 9.4 Hz, H-4 _B ), 2.72 (m, 4H, 2CH _2L ev) ₅ 2.18 (s, 3H, CH _3Lev ), 2.17 (s, 3H, H _Ao ), 1.36 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _C ), 1.29 (d, 3H, J _5;6 = 6.2 Hz, H-6 _B ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.5 (C _Lev ), 172.3 (C _Lev ), 170.3 (C _Ac ), 160.5 (C=NH), 138.8-138.0 (C _Ph ) ₅ 129.2-127.9 (CH _Ph ), 99.9 (C-1 _B , ¹ JcH = 137.3 Hz), 94.5 (C-l _c , ¹ JcH = 177.8 Hz), 91.2 (CCl ₃ ), 80.2 (C-4 _C ), 80.1 (C-4 _B ), 77.9 (C-3 _B ), 76.5 (C-3 _C ), 76.1, 75.7, 72.0 (3C, C _Bn ), 71.2 (C- 2 _C ), 71.1 (C-5 _C ), 69.6 (C-2 _B ),. 69.1 (C-5 _B ), 38.4 (CH _2Le v), 30.2 (CH _3Lev ), 28.5 (CH _2Le v), 21.3 (CAC), 18.4, 18.3 (C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ).

> Allyl (3,4-di-0-benzyl-2-0-lévulinoyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-� �3)-(2-0-acétyI- 4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→3)-(2-désoxy-4,6-0-i sopropylidène-2- trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyI)-(l-→2)-[2,3,4,6-t étra-0-benzyl-α-D- glucopyranosyl-(l-→3)]-4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 64 :

Chemical Formula: CioiH-]-|gCl3Nθ26

Exact Mass: 1863,6851 MolecuIarWeight: 1866,3518

Du TMSOTf (49,0 μL, 270 μmol, 0,3 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 38 (1,1 g, 0,9 mmol) et de donneur 47 (1,2 g, 1,4 mmol, 1,5 éq.) dans du Toi (30 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (1,1 g), agitée sous argon à -40°C. Après 15 min sous agitation, le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2) indique la disparition de 38 (Rf = 0,25) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,35). La réaction est stoppée par l'addition de triéthylamine (0,1 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 9/l-→7/3) pour obtenir le glycoside d'allyle 64 sous forme d'un solide blanc (1,4 g, 75%). Rf= 0,35 (Tol/EtOAc, 8/2).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), <57.51-7.13 (m, 4OH, CH _Ph ), 6.95 (d, IH, J _NH , ₂ = 8.0 Hz, NH), 5.94 (m, IH, CH=), 5.48 (dd, IH, J _u = 1.1 Hz, J _2;3 = 3.0 Hz, H-2 _B ), 5.33 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.24 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.24 (d, IH, J _1;2 = 3.5 Hz, H-1 _E ), 5.16 (m, 2H, H _Bn ), 5.12 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 2.8 Hz, H-2 _C ), 5.11 (d, IH, J ₁₂ = 1.3 Hz, H-1 _B ), 5.07 (d, IH, J = 12.2 Hz, H _Bn ) ₅ 4.96 (m, 2H, H _Bn ), 4.87 (d, 2H, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.84 (d, 1H, J _1;2 = 1.7 Hz, H- I _A ), 4.79 (d, IH, J _lj2 = 1.6 Hz, H-l _c ), 4.77-4.54 (d, 8H, H _Bn , H-1 _D ), 4.46 (d, IH, J= 11.3 Hz, H _Bn ), 4.36 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _Bn ), 4.24-4.15 (m, 5H, H-3 _E , H-3 _C , H _A n, H-3 _A , H-5 _E ), 4.09- 3.98 (m, 5H, H-2 _D , H-2 _A , H-5 _C , H _A n, H-5 _B ), 3.95 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 3.2 Hz, J _3;4 = 9.2 Hz, H-3 _B ), 3.91-3.85 (m, 3H, H-6a _D , H-2 _E , H-4 _E ), 3.78-3.73 (m, 2H ₅ H-5 _A , H-6b _D ), 3.57 (pt, IH, J _3>4 = 9.2 Hz, H-4 _D ), 3.52 (pt, IH, J _3;4 = 9.6 Hz, H-4 _A ), 3.50-3.44 (m, 4H, H-6a _E , H-6b _E , H-4 _C , H- 4 _B ), 2.87 (m, IH, H-5 _D ), 2.77 (m, 5H, H-3 _D , 2CH _2Le v) ₅ 2.21 (s, 3H, CH _3Lev ), 2.16 (s, 3H, H _Ac ), 1.52 (s, 3H, Hip _r ), 1.50 (s, 3H, H _iPr ), 1.46 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.40 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _B ), 1.31 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _C ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), 6206.5 (C _Lev ), 172.1 (C _Le v), 169.9 (C _Ac ), 162.4 (C _N TCA), 139.1-138.8 (Cp ₁₁ ), 134.4 (CH=), 129.5-127.8 (CH _Ph ), 117.5 (-CH ₂ ), 101.7 (C-1 _D , ¹ JcH = 163.9 Hz), 99.9 (Qp _r ), 99.4 (C-IB, ¹ JCH = 174.7 Hz), 98.8 (C-I _A , ¹ JCH = 171.5 Hz), 98.1 (C-l _c , ¹ J ₀ H = 167.6 Hz), 94.9 (C-I _E , ¹ J _C H= 165.3 Hz), 93.5 (CCl ₃ ), 83.5 (C-3 _E ), 80.9 (C-2 _E ), 80.8 (C-4 _B ), 80.3 (C- 4 _C ), 80.1 (C-4 _A ), 79.2 (C-3 _D ), 79.1 (C-4 _E ), 78.0 (C-3 _B ),77.1 (C-3 _C ), 76.4, 75.8, 75.7, 75.4, 75.3, 75.2 (6C ₃ C _Bn ), 75.1 (C-3 _A ), 74.2 (C-2 _A ), 73.8 (C _Bn ), 73.1 (C-4 _D ), 72.8 (C-2 _C ), 71.9 (C _Bn ), 70.3 (C-5 _E ), 69.9 (C-2 _B ), 69.0 (C-5 _B ), 68.8 (C-5 _A ), 68.4 (C-6 _E ), 68.3 (C-5 _C ), 68.2 (C _AI1 ),

67.4 (C-5 _D ), 62.5 (C-6 _D ), 57.8 (C-2 _D ), 38.6 (CH _2Lev ), 30.3 (CH _3Lev ), 29.6 (C _iPr ), 28.7 (CH _2Lev ),

21.5 (C _Ac ), 19.4 (Ci _P r), 18.5 (C-6 _C ), 18.4 (C-6 _A ), 18.3 (C-6 _B ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Naf C ₁₀₁ H ₁₁₆ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₆ Na m/z théorique : 1886.6749 m/z mesurée : 1886.6445

[M+NH ₄ f C ₈₈ H ₁₀₄ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₇ NH ₄ m/z théorique : 1881.7195 m/z mesurée : 1881.6897

> AHyI (2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-2-trichloroacétamido-3-tri méthylsillyl-β-D- gIucopyranosyl)-(l→2)-[2,3,4,6-tétra-0-benzyI-α-D-glucop yranosyl-(l— >3)]-4-O- benzyl-α-L-rhamnopyranoside 63 :

Chemical Formula: G ₆ 4H7βCI ₃ NOi5Si

Exact Mass: 1233,4206 Molecular Weight: 1235,7463

Du TMSOTf (49,0 μL, 270 μmol, 0,3 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 38 (2,0 g, 1,7 mmol) et de donneur 47 (2,3 g, 2,6 mmol, 1,5 éq.) dans du Toi (30 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (1,1 g), agitée sous argon à -78 ⁰ C. Après 15 min sous agitation, le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2) indique la disparition de 38 (Rf = 0,25) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,35). La réaction est stoppée par l'addition de triéthylamine (0,1 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Toi/ AcOEt : 9/1— >7/3) pour obtenir par ordre d'élution le composé silylé 63 (233 mg, 11%) puis le glycoside d'allyle 64 (1,4 g, 66%).

Rf= 0,5 (Tol/EtOAc, 8/2).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), J7.47-7.08 (m, 26H ₅ NH, CH _Ph ), 5.89 (m, IH, CH=), 5.32 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.23 (m, IH, J _cis = 10.6 Hz ₅ =CH ₂ ), 5.12 (d, IH, Ji, ₂ = 3.6 Hz, H-1 _E ), 5.11- 5.05 (m, 3H, H _Bn ), 4.93 (d, IH, J= 12.8 Hz, H _Bn ), 4.86 (d, IH ₅ J _1;2 = 1.6 Hz, H-1 _A ), 4.83-4.76 (m, 3H ₅ H _Bn , H-1 _D , H _Bn ) ₅ 4.61-4.56 (m, 2H ₅ H _Bn ), 4.50 (d, IH ₅ J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.32 (d ₅ IH ₅ J=12.0 Hz ₅ H _Bn ), 4.22-4.10 (m, 4H, H-3 _E , H _A π, H-3 _A , H-5 _E ), 4.08-3.97 (m, 3H ₅ H-2 _A , H-2 _D , H _A I _I ), 3.90 (dd ₅ IH ₅ J ₅ , _6a = 5.3 Hz, J _6a , _6b = 10.7 Hz, H-6a _D ), 3.83-3.72 (m, 4H ₅ H-2 _E , H-4 _E , H- 6b _D , H-5 _A ) ₅ 3.55 (pt, IH ₅ J _3,4 = 9.1 Hz ₅ H-4 _D ), 3.54 (pt ₅ IH ₅ J _3;4 = 9.5 Hz ₅ H-4 _A ), 3.43 (m, 2H ₅ H-6a _E5 H-6b _E ), 3.36 (pt, IH, J _2,3 = 9.2 Hz ₅ H-3 _D ), 2.94 (m, IH ₅ H-5 _D ), 1.51 (s, 3H, H _iPr ) ₅ 1.45 (s, 3H,~H _iPr ), 1.44 (d ₅ 3H ₅ J ₅ , ₆ = 6.2 Hz ₅ H-6 _A ) ₅ 0.13 (s, 9H ₅ H _si ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 161.7 (C _NTC A), 138.7-137.7 (C _Ph ), 134.0 (CH=), 129.1-127.3 (CH _Ph ), 117.1 (=CH ₂ ) ₅ 101.5 (C-I _D , ¹ JcH = 163.6 Hz), 99.4 (C _iPr ), 98.5 (C-1 _A , ¹ J ₀ H = 174.0 Hz) ₅ 95.2 (C-1 _E , ¹ Jc _H = 167.5 Hz) ₅ 93.3 (CCl ₃ ), 83.3 (C-3 _E ), 79.8 (C-4 _A ), 78.7, 78.6 (2C, C-2 _E ^* ₅ C-4 _E ^* ), 75.9 (C _Bn ), 75.4 (C-3 _A ), 75.3, 74.9 (2C ₅ C _Bn ) ₅ 74.3 (C-3 _D ), 74.3 (C _Bn ) ₅ 74.2 (C-4 _D ), 74.1 (C- 2 _A ) ₅ 73.4 (C _Bn ) ₅ 70.0 (C-5 _E ), 68.5 (C-5 _A ), 67.9 (C-6 _E ), 67.8 (C _AII ), 67.2 (C-5 _D ), 62.1 (C-6 _D ), 58.6 (C-2 _D ), 29.1 (C _iPr ) ₅ 19.0 (C _iPr ) ₅ 18.0 (C-6 _A ) ₅ 0.7 (C _Si ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₆₄ H ₇₈ NO ₁₅ ³⁵ Cl ₃ SiNa m/z théorique : 1256.4104 m/z mesurée : 1256.4188

[M+NH ₄ ] ⁺ C ₆₄ H ₇₈ NO ₁₅ ³⁵ Cl ₃ SiNH ₄ m/z théorique : 1251.4550 m/z mesurée : 1251.4548

> AHyI (3,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l— >3)-(2-0-acétyl-4-0-benzyl-α- L-rhamnopyranosyl)-(l-→3)-(2-désoxy-4,6-0-isopropylidene- 2- trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l-→2)-[2,3,4,6-t étra-O-benzyl-α-D- glucopyranosyl-(l→3)]-4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 66 :

Chemical Formula- Cg ₆ H ₁ i ₀ CI ₃ Nθ24

Exact Mass: 1765,6483 MolecularWeight: 1768,2519

Le glycoside d'allyle 64 (1,2 g, 570 μmol) est dissous dans un mélange pyridine/acide acétique (3/2, 10 mL). De l'hydrazine monohydraté (280 μL, 5,7 mmol, 10 éq.) est ajouté goutte à goutte au milieu réactionnel. Après 25 min d'agitation à 0°C, le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 7/3) indique la disparition de 64 (Rf = 0, 5) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,35). Le milieu réactionnel est alors repris à l'eau froide (10 mL) et la phase aqueuse est extraite rapidement au DCM (3 x 50 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaCl _sat , filtrées sur filtre séparateur de phase et concentrées à l'évaporateur rotatif. L'huile obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 9/l→7/3) pour obtenir l'alcool 66 sous forme d'un solide blanc (950 mg, 94%). Rf= 0,35 (Tol/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), J7.48-7.06 (m, 4OH, CH _Ph ), 6.87 (d, IH, J _NH ,2 = 8.9 Hz, NH), 5.90 (m, IH, CH-), 5.29 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.24 (m, IH, J _cis = 11.5 Hz, =CH ₂ ), 5.16 (d, IH, Ji _;2 = 3.6 Hz, H-I _E ) ₅ 5.10-5.07 (m, 4H, H _8n , H-1 _B , H-2 _C , H _Bn ), 5.02 (d, IH, J= 12.1 Hz, H _Bn ), 4.89 (m, 2H, H _Bn ), 4.81 (d, IH, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.78 (d, IH, J _1;2 = 1.7 Hz, H-1 _A ), 4.76 (d, IH, J _)i2 = 1.7 Hz, H-Ic), 4.75-4.49 (m, 10H, 9H _Bn , H-1 _D ), 4.32 (d, IH, J- 11.9 Hz, H _Bn ), 4.19-4.10 (m, 5H, H-3 _E , H _A π, H-3 _A , H-3 _C , H-5 _E ), 4.04-3.93 (m, 5H, H-2 _D , H-2 _A , H _A11 , H-5 _C , H-2 _B ), 3.90-3.82 (m, 4H, H-5 _B , H-6a _D , H-2 _E , H-4 _E ), 3.77 (dd, IH, J _2,3 = 3.2 Hz, J _3;4 = 9.1 Hz, H-3 _B ), 3.74-3.67 (m, 2H, H-6b _D , H-5 _A ), 3.54 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.2 Hz, H-4 _D ), 3.51-3.44 (m, 4H, H-4 _A , H-4 _B , H-6a _E , H-6b _E ) 3.40 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.4 Hz, H-4 _C ), 2.81 (m, IH, H-5 _D ), 2.68 (pt, IH, J ₂ , ₃ ^≈ 9.2 Hz, H-3 _D ), 2.13 (s, 3H, H _Ac ), 1.48 (s, 3H, H _iPr ), 1.46 (s, 3H, H _iPr ), 1.40 (d, 3H, J _5>6 = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.33 (d, 3H, J _5,6 = 6.2 Hz, H-6 _B ), 1.25 (d, 3H, J _5,6 = 6.2 Hz, H-6 _C ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 169.6 (C _Ac ), 162.0 (C _NTCA ), 138.6-137.6 (C _Ph ), 133.9 (CH=), 129.4- 127.4 (CHp _h ), 117.1 (=CH ₂ ), 101.2 (C-I ₀ , ¹ J _0H = 158.9 Hz) ₅ 100.7 (C-1 _B , ¹ JcH = 172.6 Hz),

99.4 (CiPr), 98.4 (C-IA, ¹ JCH = 172.4 Hz), 97.4 (C-l _c , V _CH = 170.7 Hz), 94.3 (C-I _E , ¹ JcH ^≈ 166.4 Hz), 93.0 (CCl ₃ ), 83.1 (C-3 _E ), 80.4 (C-4 _C ), 80.3 (C-2 _E ), 79.9, 79.7 (2C, C-4 _A ^* , C-4 _B ^* ), 79.6 (C-3 _B ), 78.7 (C-4 _E ), 78.5 (C-3 _D ), 77.0 (C-3 _C ), 76.0, 75.3, 75.4, 75.0, 74.9, 74.8 (6C, C _Bn ),

74.5 (C-3 _A ), 73.7 (C-2 _A ), 73.3 (C _Bn ), 72.6 (C-4 _D ), 72.4 (C-2 _C ), 71.8 (C _Bn ), 69.9 (C-5 _E ), 69.0 (C-2 _B ), 68.4 (C-5A), 68.2 (C-5 _B ), 68.0 (C-6 _E ), 67.8 (C-5 _C ), 67.7 (C _A n), 66.9 (C-5 _D ), 62.1 (C- 6 _D ), 57.3 (C-2 _D ), 29.2 (C _iPr ), 21.1 (C _Ac ), 19.0 (C _iPr ), 18.1, 17.9, 17.8 (C-6 _A \ C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₉₆ H ₁₁₀ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₄ Na m/z théorique : 1788.6381 m/z mesurée : 1788.6537

[M+H] ⁺ C ₉₆ H ₁₁₀ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₄ m/z théorique : 1766.6561 m/z mesurée : 1766.6667

> AlIyI (3,4-di-0-benzyI-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→3)-(2-0-acétyI -4-0-benzyl-α- L-rhamnopyranosy I)-(I- »3)-(2-désoxy-2-trichIoroacétamido-β-D- glucopyranosyl)-(l-→2)-[2,3j4,6-tétra-0-benzyl-α-D-gluco pyranosyl-(l— >3)]-4-O- benzyl-α-L-rhamnopyranoside 67 :

Chemical Formula: Cg ₃ H-I O6CI3NO24

Exact Mass: 1725,6170 Molecular Weight: 1728,1880

Une solution aqueuse de TFA 50% (4 mL) est additionnée lentement à une solution d'alcool 66 (367 mg, 210 μmol) dans du DCM (10 mL) à 0 ⁰ C. Le milieu réactionnel est agité pendant 2 h à cette température, temps au bout duquel le suivi par CCM (DCM/MeOH, 95/5) indique la disparition totale du produit de départ (Rf = 0,85) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,3). Le milieu réactionnel est concentré par coévaporation avec du Toi (3 x 10 mL). L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 7/3→6/4) pour obtenir le triol 67 sous forme d'un solide blanc (300 mg, 84%).

Rf= 0,3 (DCM/MeOH, 95/5).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.44-7.06 (m, 40H ₅ CH _Ph ), 7.02 (d, IH, J _NH ,2 = 8.8 Hz, NH), 5.90 (m, IH, CH=), 5.30 (m, IH, J _tran s= 18.7 Hz, =CH ₂ ), 5.24-5.22 (m, 2H, =CH ₂ , H-I _E ), 5.14 (dd, IH, J _1;2 = 2.0 Hz, J _2,3 - 2.9 Hz, H-2 _C ), 5.10 (d, IH, J _u = 1.1 Hz, H-1 _B ), 5.10-5.05 (m, 2H, H _Bn ), 4.96 (d, IH, J= 12.7 Hz, H _Bn ), 4.90 (d, IH, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.84 (d, IH, J,, ₂ = 1.6 Hz, H- U), 4.83-4.73 (m, 4H, H _Bn ), 4.66 (d, IH, J = 10.9 Hz, H _Bn ), 4.51-4.50 (m, 8H, H _Bn , H-l _c , H _Bn , H-1 _D , 4H _Bn ), 4.34 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _8n ), 4.21 (bs, IH, OH-4 _D ), 4.20-4.12 (m, 5H, H- 3 _A , H _AII , H-3 _E , H-3 _C , H-5 _E ), 4.00-3.91 (m, 5H, H-2 _B , H-2 _A , H _A1I , H-2 _D , H-5 _C ), 3.86-3.69 (m, 7H, H-6a _D , H-2 _E , H-3 _B , H-4 _E , H-5 _B , H-6b _D , H-5 _A ), 3.50-3.45 (m, 4H, H-6a _E , H-6b _E , H-4 _A , H- 4 _B ), 3.40 (pt, IH, J _3j4 = 9.5 Hz, H-4 _C ), 3.36 (pt, IH, J _3>4 = 9.2 Hz, H-4 _D ), 3.03 (m, IH, H-5 _D ), 2.31 (bs, IH, OH-4 _D ), 2.24 (pt, IH, J _2;3 = 9.8 Hz, H-3 _D ), 2.18 (s, 3H, H _Ac ), 1.41 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.30 (m, 3H, H-6 _C ), 1.26 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _B ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), .5170.0 (C _Ac ), 162.2 (CN _TCA ), 138.5-137.6 (C _Ph ), 133.9 (CH=), 129.4- 127.4 (CHp _h ), 117.3 (=CH ₂ ), 101.0 (C-1 _D , ¹ Jc _H = 160.2 Hz), 100.7 (C-I ₈ , ¹ JcH = 165.1 Hz), 98.2 (2C, C-1 _A , C-1 _C , ¹ JcH = 169.6 Hz), 94.3 (C-1 _E , ¹ JcH = 166.7 Hz), 93.0 (CCl ₃ ), 86.7 (C- 3 _D ), 83.1 (C-3 _E ), 80.4 (C-2 _E ), 79.9, 79.7 (C-4 _A ^* , C-4 _B ^* ), 79.6 (C-4 _E ), 79.2 (C-4 _C ), 78.7 (C-3 _B ), 77.9 (C-3 _C ), 76.2, 75.4, 75.3, 75.0 (6C, C _8n ), 74.6 (C-5 _D ), 74.3 (C-3 _A ), 74.2 (C-2 _A ), 73.4 (C _Bn ), 72.0 (C-2 _C ), 71.6 (C _Bn ), 70.8 (C-4 _D ), 69.9 (C-5 _E ), 69.1 (C-5 _C ), 68.7 (C-2 _B ), 68.5 (C-5 _A ), 68.4 (C-5 _B ), 68.0 (C-6 _E ), 67.7 (C _A n), 62.9 (C-6 _D ), 55.1 (C-2 _D ), 21.1 (C _Ac ), 18.0, 17.9, 17.8 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₉₃ H ₁₀₆ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₄ Na m/z théorique : 1748.6068 m/z mesurée : 1748.6008 > Propyl α-L-rhamnopyranosyI-(l→3)-(2-0-acétyl-α-L-rhamnopyranos yl)-(l→3)-

(2-acétamido-2-désoxy-β-D-glucopyranosyI)-(l— »2)-[α-D-glucopyranosyI-(l— *3)]- α-L-rhamnopyranoside V :

Chemical Foirnula C37Hg ₃ Nθ24

Exact Mass 905,3740 MolecularWeight 905,8884

Voie l : Du Pd-C 10% (280 mg) est ajouté à une solution dégazée de pentasacchari.de 56 (270 mg, 180 μmol) dans de Féthanol (20 mL). La suspension est saturée avec de l'hydrogène à 50 bars et agitée à TA pendant 10 j. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5 et DCM/MeOH, 95/5) montre la disparition de 56 (Rf= 1 et 0,3, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf = 0,3 et 0, respectivement). Le milieu réactionnel est filtré sur un filtre Acrodisc LC 25 mm, et le filtrat est concentré à l'évaporateur rotatif. Le résidu obtenu est purifié sur colonne C- 18 (H ₂ O/CH ₃ CN, 100/0→7/3) pour conduire à la cible V sous forme d'un solide blanc (111 mg, 70%).

Voie 2 : Du Pd-C 10% (70 mg) est ajouté à une solution dégazée de pentasaccharide 67 (100 mg, 58 μmol) dans de l'éthanol (10 mL). La suspension est saturée avec de l'hydrogène à 50 bars et agitée à TA pendant 10 j. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5 et DCM/MeOH, 95/5) montre la disparition de 67 (Rf= 1 et 0,3, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf = 0,3 et 0, respectivement). Le milieu réactionnel est filtré sur un filtre Acrodisc LC 25 mm, et le filtrat est concentré à l'évaporateur rotatif. Le résidu obtenu est purifié sur colonne C- 18 (H ₂ O/CH ₃ CN, 100/0→7/3) pour conduire à la cible F sous forme d'un solide blanc (40 mg, 75%). Rf= 0,3 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5).

RMN ¹ H (D ₂ O), J5.04 (d, IH, J, _,2 = 3.7 Hz, H-I _E ), 4.91 (m, IH, H-2 _C ), 4.90 (d, IH, J,, ₂ = 1.4 Hz, H-IB), 4.83 (d, IH, J ₁₌₂ = 1.7 Hz, H-IA), 4.79 (d, IH, J _lj2 = 1.4 Hz, H-l _c ), 4.72 (d, IH, H- 1 _D ) _S 4.17 (m, IH ₅ H-2 _A ), 4.00 (m, IH, H-5 _C ), 3.96 (m, IH, H-5 _E ), 3.91 (m, IH, H-2 _B ), 3.86 (dd, IH, J ₂₎₃ = 3.2 Hz, J _3j4 = 9.7 Hz, H-3 _C ), 3.82-3.79 (m, 2H, H-3 _A , H-6a _D ), 3.76 (m, IH, H- 2 _D ), 3.71 (pt, IH, J _3;4 = 9.5 Hz, H-3 _E ), 3.69 (m, 2H, H-6a _E , H-6b _E ), 3.67-3.52 (m, 5H, H-6b _D ,

H _Pr , H-5 _A , H-2 _E , H-3 _B ), 3.48 (pt, IH ₅ J ₃ , ₄ = 9.9 Hz, H-4 _C ), 3.44 (m, IH, H-5 _B ), 3.40 (m, IH, H _Pr ), 3.38 (m, IH, H-4 _E ), 3.33 (m, IH, H-4 _B ), 3.33-3.28 (m, 3H, H-5 _D , H-4 _D , H-3 _D ), 3.23 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.7 Hz ₃ H-4 _A ), 2.07 (s, 3H, H _Ac ), 2.04 (s, 3H ₅ H _NAc ), 1-49 (sex, 2H, CH ₂ ), 1.17 (d, 3H, J _5;6 = 6.1 Hz, H-6 _A ), 1.16 (m, 3H, J _5>6 = 6.0 Hz, H-6 _B ), 1.15 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.4 Hz ₅ H-6 _C ), 0.80 (t, 3H ₅ J= 7.4 Hz, CH ₃ ).

RMN ¹³ C (D ₂ O) ₅ £174.7 (C _NAc ) _> 173.5 (C _Ac ), 103.1 (C-1 _B , U:H = 172.0 Hz), 101.9 (C-I ₀ , ¹ JCH = 163.9 Hz), 99.0 (C-I _A , ¹ JCH= 174.2 Hz), 98.7 (C-l _c , ¹ JCH= 171.2 Hz), 94.7 (C-l _Es ¹ JCH = 170.5 Hz), 83.0 (C-3 _D ), 77.4 (C-3 _C ), 76.4 (C-4 _O ), 74.7 (C-2 _A ), 74.0 (C-3 _A ), 73.5 (C-3 _E ), 72.8 (C-2c), 72.1 (C-4 _B ), 71.7 (C-5 _E ), 71.6 (C-2 _E ), 71.5 (C-4 _C ), 71.2 (C-4 _A ), 70.5 (C-2 _B ), 70.3 (C-3 _B ), 70.0 (CPT), 69.4 (2C ₅ C-4 _E , C-5 _D ), 69.2 (C-5 _C ), 69.1 (C-5 _A ), 68.5 (C-5 _B ), 61.0 (C-O ₀ ), 60.6 (C-6 _E ), 55.8 (C-2 _D ), 23.1 (C _NAc ), 22.3 (CH ₂ ), 20.6 (C _Ac ) ₅ 17.1, 16.9, 16.7 (C-6 _A ^* ₅ C-6 _B ^* , C-6c ^* ) ₅ 10.2 (CH ₃ ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ C ₃₇ H ₆₄ NO ₂₄ m/z théorique : 906.3818 m/z mesurée : 906.3823

[M+Naf C ₃₇ H ₆₃ NO ₂₄ Na m/z théorique : 928.3638 m/z mesurée : 928.3630 Procédé 6 :

> Propyl α-L-rhamnopyranosyl-(l— >3)-α-L-rhamnopyranosyl-(l→3)-(2- acétamido-2-désoxy-β-D-glucopyranosyI)-(l-→2)-[α-D-glu copyranosyI-(l— >3)]-α-

L-rhamnopyranoside VI :

Chemical Formula: C35H61NO23

Exact Mass: 863,3634 Molecular Weight: 863,8517

Du Pd-C 10% (250 mg) est ajouté à une solution dégazée de pentasaccharide 57 (200 mg, 130 μmol) dans de Péthanol (15 mL). La suspension est saturée avec de l'hydrogène à 50 bars et

agitée à TA pendant 2 j. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5 et DCM/MeOH, 95/5) montre la disparition de 57 (Rf = 1 et 0,2, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf = 0,2 et O ₅ respectivement). Le milieu réactionnel est filtré sur un filtre Acrodisc LC 25 mm, et le filtrat est concentré à l'évaporateur rotatif. Le résidu obtenu est purifié sur colonne C- 18 (H ₂ O/CH ₃ CN, 100/0→7/3) pour conduire à la cible Vl sous forme d'un solide blanc (81 mg, 71%). Rf= 0,2 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5).

RMN ¹ R (D ₂ O), £4.94 (d, IH, J _1;2 = 3.6 Hz, H-I _E ), 4.78 (bs, IH, H-1 _B ), 4.71 (bs, IH, H-U) ₅ 4.63 (bs, IH, H-ID), 4.61 (bs, IH, H-l _c ), 4.07 (m, IH, H-2 _A ), 3.83-3.78 (m, 3H ₅ H-2 _B5 H-5 _E , H-5 _C ) ₅ 3.71-3.68 (m, 2H, H-3 _A , H-6a _D ), 3.66-3.64 (m, 2H, H-2 _C , H-2 _D ), 3.62-3.59 (m, 2H, H- 3 _E , H-3 _B ) ₅ 3.59-3.52 (m, 5H, H-6a _E , H-6b _E , H-3 _C , H-5 _B , H-6b _D ), 3.50-3.39 (m, 2H, H-5 _A , H- 2 _E ) ₅ 3.41 (m, IH, H _Pr ), 3.32-3.18 (m, 7H, H-4 _E , H-4 _C , H _Pr , H-3 _D , H-5 _D , H-4 _B , H-4 _D ), 3.10 (pt, IH, J _3>4 = 9.7 Hz ₅ H-4 _A ), 1.89 (s, 3H ₅ H _NAc ), 1.38 (sex, 2H, CH ₂ ), 1.09 (m, 3H ₅ J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _B ) ₅ 1.05 (d, 3H ₅ J ₅ , ₆ = 6.2 Hz ₅ H-6 _A ), 1.01 (d, 3H, J _5,6 = 6.2 Hz ₅ H-6 _C ), 0.29 (t, 3H ₅ J- 7.4 Hz ₅ CH ₃ ).

RMN ¹³ C (D ₂ O), £ 174.4 (C _NAc ), 102.8 (C-1 _B , ¹ J _0H = 172.0 Hz) ₅ 102.0 (C-I ₀ , ¹ Jc _H = 163.2 Hz), 101.7 (C-Ic, ¹ JCH = 171.2 Hz), 99.1 (C-1 _A , ¹ J ₀ H = 172.7 Hz), 95.0 (C-1 _E , ¹ J ₀ H = 170.5 Hz), 82.1 (C-3 _D ), 78.5 (C-3 _C ), 76.5 (C-4 _D ), 74.8 <C-2 _A ), 74.4 (C-3 _A ), 73.6 (C-3 _E ), 72.5 (C-4 _B ), 71.9 (C-5 _E ), 71.8 (C-2 _E ), 71.7 (C-4 _C ), 71.3 (C-4 _A ), 71.0 (C-2 _C ), 70.7 (C-3 _B ), 70.6 (C-2 _B ) ₅ 70.1 (Cp _r ), 69.9 (C-5 _D ), 69.5 (2C, C-5 _B , C-5 _C ), 69.3 (C-5 _A ), 68.8 (C-4 _E ), 61.2 (C-6 _D ), 60.8 (C-6 _E ), 55.9 (C-2 _D ), 23.1 (C _NAc ), 22.5 (CH ₂ ), 17.2, 17.1, 16.9 (C-6 _A ^* ₅ C-6 _B ^* ₅ C-6 _C ^* ), 10.3 (CH ₃ ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ C ₃₅ H ₆₂ NO ₂₃ m/z théorique : 864.3713 m/z mesurée : 864.3652 [M+Na] ⁺ C ₃₅ H ₆₁ NO ₂₃ Na m/z théorique : 886.3532 m/z mesurée : 886.3461

Partie III - Synthèse des cibles XI, XIL XIIL XIV. XV et XVI

Dans cette partie, nous décrirons la synthèse de l'ensemble des cibles tétra- et pentasaccharides porteurs d'un résidu C ou D à leur extrémité réductrice. Comme précédemment, les cibles ont été synthétisées sous forme de glycoside de propyle de manière à bloquer la position réductrice conformément à Panomérie adoptée par le résidu au sein du polysaccharide naturel. Le résidu C est acétylé ou non, correspondant respectivement à des fragments représentatifs des antigènes O des sérotypes 3 a et X de S ¹ , flexneri.

Rétrosynthèse des oligosaccharides en série C et D réducteur Procédé 7 :

L'invention se rapporte au procédé de préparation du composé XI (tétrasaccharide (E)AB _Ac C) tel que défini dans la liste Ll comprenant les étapes suivantes :

condensation du disaccharide accepteur 79 (BC) avec le disaccharide donneur 80 ((E)A) conduisant au tétrasaccharide 87 de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1 ,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, Pacétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique,préférentiellement, dans le toluène ou le dichlorométhane en présence de TMSOTf (schéma 49) ; déprotection du tétrasaccharide 87 conduisant au tétrasaccharide accepteur 85 de préférence dans un mélange pyridine/AcOH en présence d'hydrazine monohydraté (schéma 49) ; déprotection par hydrogénolyse des groupes benzyles du tétrasaccharide 85 conduisant au tétrasaccharide (E)ABA _C C de préférence sous atmosphère atmosphérique d'hydrogène dans l'éthanol en présence de palladium en conditions neutres (schéma 50). 1. Monosaccharide B donneur

L'accès au synthon BC 61 implique le donneur 49 protégé en position 2 par un groupe lévulinoyle ⁸ ' ⁸⁹ (partie rétrosynthèse). Une synthèse de ce dernier, valorisant le succès de la synthèse du diol 26 à grande échelle, est décrite dans la partie 1. Ici, nous rapportons l'optimisation de la synthèse de l'accepteur 69, précurseur du donneur 49.

Une méthode d'accès rapide à un composé totalement protégé avec un rendement de l'ordre de 94% à partir du L-rhamnose commercial 27 issu d'un intermédiaire clé, l'orthoester de méthyle 70 a été décrite (Schéma 39). En procédant selon le protocole décrit, notre rendement en orthoester di-O-benzyl 70 fut seulement de 75%. Dans la mesure où notre objectif était d'accéder au synthon BC 61, à la fois accepteur et donneur, la préparation de l'orthoester d'allyle, a été préférée à celle de l'orthoester de méthyle, dans le but de synthétiser l'accepteur 58, après ouverture régiosélective de l'orthoester. ¹

Schéma 39 : Accès à l'orthoester de méthyle 70 selon Castro-Palomino et al ⁶⁷ Ainsi le rhamnose commercial 27 est péracétylé en un mélange d'anomères (8/2) 71, puis activé en précurseur 72 par action du bromure d'hydrogène dans l'acide acétique. ^{1 4} Le brut réactionnel, traité par l'alcool allylique dans la lutidine, ¹⁰⁵ conduit à l'orthoester di-O- acétylé 73. La désacétylation de ce dernier par action du carbonate de potassium dans le méthanol donne de façon quantitative le diol 74, qui est di-O-benzylé par action du

dialcoolate correspondant sur le bromure de benzyle. L'orthoester clé 75 est isolé par chromatographie sur gel de silice (76%) (Schéma 40).

2,6-lutidiπe,

AIIQH, DCjjfl

TMSOTf DCM ^,

76 58, 7 étapes, 61%

Schéma 40 : Méthode I d'accès à l'accepteur 58

Selon cette stratégie, la première option -consiste en une ouverture régiosélective en milieu acide. Différentes méthodes ont été décrites ¹⁰³ parmi lesquelles, l'utilisation du TMSOTf. ¹⁰⁶ En présence de ce promoteur, l'ouverture le de l'orthoester 75 est régio- et stéréosélective. En effet, seul l'anomère α 76 est isolé (88%) (Schéma 40). Un mécanisme permettant d'expliquer cette bonne stéréosélectivité a été proposé ¹⁰⁶ (Schéma 41). De façon forte intéressante, la présence de fonctions benzyles semble primordiale. En effet, traité dans les mêmes conditions, l'analogue di-O-acétylé réagit de façon très différente. ¹⁰

^TMSPT ₁

Encombre

Schéma 41 : Mécanisme d'ouverture stéréosélective des orthoesters 3, 4-di-O-benzyle proposé par Lindhorst °

La simple désacétylation de 76 réalisée en présence de NaOMe conduit à l'alcool 58 avec un rendement de 92%, soit 61% en 7 étapes à partir du L-rhamnose commercial. Par ailleurs, nous avons pu observer que le traitement de l'orthoester d'allyle 75 par une solution acide d'HCl à 10% conduit à un mélange de deux régioisomères monoacétylés 77 et 78 moins polaires, difficilement séparables, dans un rapport 3/2 (Schéma 43). En outre, le spectre C GD montre que le composé majoritaire 77 correspond à un anomère α alors que 78 correspond à un anomère β. D'autre part, les spectres HMBC et HSQC (Figure 17 et Figure 18), permettent de prouver que le composé 77 est acétylé en position 2 alors que le composé

78 l'est en position 1. Cette analyse par RMN complète a permis de confirmer la structure des deux composés 77 et 78, à savoir le 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranose et le 1- 0-acétyl-3,4-di-ο-benzyl-β-L-rhamnopyranose, respectivement. Ces résultats peuvent être expliqués sur la base des données de la littérature. ¹⁰⁷ ' ¹⁰⁸

Un mécanisme de formation des composés 77 et 78 est proposé (Schéma 42) sur la base des travaux de Kong, ¹⁰³ .

Schéma 42 : Mécanisme déformation des composés 77 et 78 d'après Kong et aV 103

Lorsque le mélange des composés 77 et 78 est chauffé dans l'alcool allylique en présence de chlorure d'acétyle, le glycoside d'allyle 58, désacétylé en position 2, est obtenu av€c un rendement de 85%, soit 65% en 6 étapes partir du L-rhamnose commercial (Schéma 43). Effectivement, la fonction acétyle, instable en milieu acide alcoolique, est probablement clivée lors de cette étape d'allylation anomérique. Cette voie s'est avérée plus efficace que la voie I puisqu'elle permet d'isoler l'alcool 58 avec un rendement plus élevée en moins d'étapes.

Lavage/HC1 10%

Schéma 43 : Méthode II d'accès à l'accepteur 58

Dans la partie précédente, l'accepteur 58 était obtenu avec un rendement de 68% en 5 étapes impliquant le diol 26 (Schéma 44). Malgré ce rendement légèrement supérieur, la voie II, proposé ci-dessus, reste la plus efficace car l'utilisation de l'étain est évitée et les 6 étapes peuvent être enchainées sans aucune purification intermédiaire. Dans ce cas, l'alcool 58 est isolé, par simple chromatographie avec un rendement global de 72%, au lieu des 65% obtenus sinon (Schéma 44).

88881111%%°°//

Schéma 44 : Comparaison des trois méthodes d'accès à l'accepteur 58 Pour rappel (Partie 2), l'accepteur 58 est transformé en donneur 49 en trois étapes, lévulinoylation, déallylation, puis activation avec un rendement de 78% (Schéma 44). La synthèse de l'alcool 58 ayant été optimisée, le donneur 49 est maintenant accessible en 9 étapes avec un rendement de 57%.

2. Disaccharide BC accepteur

Le disaccharide totalement protégé 61 (Partie 2) peut être converti en accepteur 79 après déprotection du groupement lévulinoyle (81%) dans un mélange pyridine/AcOH en présence d'hydrazine monohydraté ¹⁰⁹ (Schéma 45).

61 79

Schéma 45 : Conversion de l 'intermédiaire clé 61 en accepteur 79

3. Disaccharide (E)A donneur

La fonction lévulinoyle est le groupe protecteur orthogonal à la fonction acétyle, dit « participant », retenu à l'issu de l'analyse rétrosynthétique menée sur l'antigène O de S. flexneri 3a. En conséquence, le disaccharide donneur 80 est l'un des synthons clés, impliqués dans la préparation des cibles XI et XII (Figure 19).

Le premier test de lévulinoylation de l'accepteur 21 (Partie 2) est effectué dans les conditions utilisées pour préparer l'ester de lévulinoyle 81. à savoir par action sur l'acide lévulinique en présence de DCC et de DMAP dans le dichlorométhane. ⁸⁹ Mais, cette fois, la réaction n'est pas totale (Schéma 46).

21 81

Schéma 46 : Essai de lévulinoylation de l 'accepteur 21

Varier différents paramètres, tels le solvant ou la température de réaction, n'a permis au mieux que d'obtenir l'ester de lévulinoyle 81 en mélange avec l'alcool 21 dans un rapport 4/1 (Tableau 6). Ce résultat peut être expliqué par l'encombrement présumé de la fonction hydroxyle en position 2A-

Solvants Température Temps de réaction Conversion*

TA 3 jours 60%

DCM

50°C 5 jours 80%

DCE 5 jours 80%

80°C

CH ₃ CN / 0%

DMF 80°C / 0%

DCE 90°C 5 jours 80%

* Les taux de conversion sont déterminés par CCM

Tableau 6 : Lévulinoylation du glycoside d'allyle 21

La séparation de l'accepteur 21 et du lévulinate 81 étant extrêmement difficile, d'autres conditions d'introduction du groupement lévulinoyle ont été testées (Schéma 47). Elles impliquent le chlorure de lévulinoyle ¹¹⁰ ' ^{1 U} ou l'anhydride lévulinique. ¹¹²

Schéma 47 : Méthodes d'activation de l'acide lévulinique

L'action du chlorure de thionyle sur l'acide lévulinique ne permet pas d'isoler le chlorure de lévulinoyle 82, comme attendu, mais le produit de cyclisation confirmée par l'analyse RMN. ¹¹³ Ce dernier ne réagissant pas avec l'accepteur 21 ¹¹⁰ (Schéma 47), cette voie a été abandonnée. En revanche, lorsque l'acide lévulinique est mis en réaction avec la DCC, ¹¹² l'anhydride lévulinique 83 est obtenu de manière quantitative après contrôle RMN (Schéma 47). L'action de cet anhydride 83 sur l'accepteur 21 a été étudiée dans des conditions classiques d'estérification, pyridine et DMAP (Tableau 7). La comparaison des

entrées 1 et 2 du Tableau 7 permet de confirmer qu'augmenter la température lors de cette estérifîcation, augmente le taux de conversion alors que l'entrée 3 montre que la DMAP active la réaction. La quantité d'anhydride lévulinique ajouté a aussi été variée. Effectivement, l'augmentation des quantités de DMAP et d'anhydride lévulinique dans le milieu réactionnel (entrée 3, 4 et 5 du Tableau 7) est corrélée avec le taux de conversion de 21 en 81.

Entrée Anhydride lévulinique (éq.) DMAP (éq.) Température Conversion*

1 TA 10%

0.5

2 4 30%

3 2 60%

50°C

4 8 2 80%

5 90%

10 5

6 50 ⁰ C** 100%

* Les taux de conversion sont déterminés par CCM

** Dans ce cas, l'anhydride lévulinique est ajouté au milieu réactionnel à 50°C. Tableau 7 : Optimisation de la lévulinoylation de l 'accepteur 21 Au vu des résultats du Tableau 7 (entrée 5 et 6), si 10 équivalents d'anhydride lévulinique sont ajoutés à 50°C alors la conversion est maximale et permet d'isoler l'ester de lévulinoyle 81 voulu avec un rendement de 95%. Ensuite, le donneur 80 est préparé en deux étapes. Le disaccharide 81 est déallylé en hémiacétal 84 avec un rendement de 92%. ³⁹ ' ⁴⁰ Ce dernier est activé par action du trichloroacétonitrile pour obtenir le donneur 80 avec un rendement de 97%. ²² ' ²³

81 84 80

Schéma 48 : Synthèse du donneur 80 4. Tétrasaccharide (E)ABC

Une fois les disaccharides BC accepteur 79 et (E)A donneur 80 disponibles, la synthèse des tétrasaccharides (E)ABC accepteur 85 et donneur 86 a été réalisée, a. Série (E)ABC Accepteur

De même que pour les synthèses du partie 2, la réaction de glycosylation entre le donneur 80 et l'accepteur 79 a été étudiée dans différents solvants. ⁶⁹ ' ^76"79 Si la condensation est réalisée dans le dichlorométhane en présence de TMSOTf (0,3 éq.) et de tamis moléculaire, le tétrasaccharide 87 est obtenu avec la configuration α attendue (J _{1 2} = 1,6 Hz, ¹ Jc _H = 176,6 Hz) et un rendement de 69% (Schéma 49). En revanche, dans le toluène, le tétrasaccharide 87 est obtenu avec un meilleur rendement (75%), qui atteint 92% quand la synthèse est reproduite à grande échelle (4g d'accepteur 79 au lieu de 200 mg). Ce système de solvant a donc été adopté.

La déprotection du groupement lévulinoyle, porté par 87 dans un mélange pyridine/AcOH en présence d'hydrazine monohydraté ¹⁰⁹ conduit à l'accepteur 85 requis avec un rendement de 89% confirmant le caractère orthogonal du système de groupes protecteurs mis en place (Schéma 49).

80, 1,2 éq.

Schéma 49 : Synthèse de l'accepteur 85 b. Accès aux cibles XI et XII

La présence d'un groupement acétyle sur le tétrasaccharide 85 exclu, à priori des conditions d'hydrogénation en milieu acide. L'hydrogénolyse des groupes benzyles du tétrasaccharide 85 est donc conduite sous atmosphère atmosphérique d'hydrogène dans l'éthanol en présence de palladium en condition neutre. Le glycoside de propyle XI est isolé avec un rendement de 76% (Schéma 50).

36

étapes)

Schéma 50 : Hydrogénolyse des tétrasaccharides 63 et 69

Procédé 8 :

L'invention se rapporte aussi au procédé de préparation du composé XII (tétrasaccharide (E)ABC) tel que défini dans la liste Ll comprenant les étapes suivantes : condensation du disaccharide accepteur 79 (BC) avec le disaccharide donneur 80 ((E)A) conduisant au tétrasaccharide 87 de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, Pacétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, préférentiellement, dans le toluène ou le dichlorométhane en présence de TMSOTf (schéma 49) ; déprotection du tétrasaccharide 87 conduisant au tétrasaccharide accepteur 85 de préférence dans un mélange pyridine/AcOH en présence d'hydrazine monohydraté (schéma 49) ; désacétylation du tétrasaccharide accepteur 85 au tétrasaccharide 89 de préférence en présence de NaOMe à reflux conduisant ; déprotection par hydrogénolyse des groupes benzyles du tétrasaccharide 89 conduisant au tétrasaccharide (E)ABC de préférence sous atmosphère atmosphétrique d'hydrogène dans Féthanol en présence de palladium en conditions neutres (schéma 50). Pour obtenir la cible XII, représentative de l'antigène O de la bactérie S. flexneri X, une étape de désacétylation est nécessaire. L'accepteur 85 est désacétylé en présence de NaOMe à reflux pour obtenir le diol 89 (95%), puis débenzylé par hydrogénolyse. La cible attendu XII est obtenue sous forme de glycoside de propyle avec un rendement de 81% (Schéma 50).

Procédé 9 :

L'invention se rapporte au procédé de préparation du composé XIII (pentasaccharide D(E)AB _AC C) tel que défini dans la liste Ll comprenant les étapes suivantes : condensation du monosaccharide donneur 1 et du tétrasaccharide accepteur 85 conduisant au pentasaccharide 90 de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, l'acétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, préférentiellement, dans le toluène ou le dichlorométhane en présence de TMSOTf (schéma 51) ; désacétylation du pentasaccharide 90 conduisant au pentasaccharide 91 de préférence dans du lméthanol en présence de NaOMe (schéma 52) ; déprotection du pentasaccharide 91 pour conduire au pentasaccharide D(E)AB _Ac C de préférence sous pression d'hydrogène dans l'éthanol en présence de palladium sur charbon (schéma 53).

5. Pentasaccharide D(E)ABC

Le pentasaccharide 90 est obtenu par condensation du donneur 1 et de l'accepteur 85. Différentes conditions de solvant ont été comparées ⁶⁹ ' ^76~79 (Tableau 8). Dans les conditions de couplage « habituelles » (dichlorométhane ou toluène, 0,3 éq. de TMSOTf, tamis moléculaire, entrées 1 et 2), l'oxazoline l', ¹ déjà décrite, est isolée (O _H-1 = 6,35 ppm en RMN ¹ H) (Figure 20). Les couplages suivants ont été réalisés avec 0,5 éq. de TMSOTf pour permettre l'ouverture de l'oxazoline. ⁶¹

La comparaison des entrées 1 et 6 avec, respectivement les entrées 2 et 7 montrent, encore une fois, que l'utilisation du toluène (30% et 72%) est préférable à celle du dichlorométhane (20% et 67%) (Tableau 8).

Tableau 8 : Optimisation du couplage entre l'accepteur 63 et le donneur 10

Des trois conditions de température testées, les meilleurs résultats sont obtenus à - 40°C, c'est donc la température retenue (entrée 3, 4 et 5). En effet, à -20°C, le donneur 1 est vraisemblablement moins stable qu'à -40°C ce qui explique le rendement plus faible à cette température alors qu'à -78°C, l'accepteur 85 n'est pas assez réactif et l'hydrolyse du donneur 1 domine. Mais, lors de tous ces couplages, le tétrasaccharide 85 accepteur n'est pas totalement consommé. En revanche, si 2 éq. de donneur 1 sont employés (entrée 7), le glycoside d'allyle 90 est isolé avec un rendement de 82% et la configuration β attendue ( ¹ Jc _H = 161.0 Hz) (Schéma 51).

Schéma 51 : Couplage entre l 'accepteur 85 et le donneur 1

Dans un second temps, le clivage sélectif des acétyles présents sur l'unité glucosamine D a été testé dans différentes conditions (Tableau 9). Contrairement aux résultats obtenus lors de la desacétylation de 52, le carbonate de potassium ne permet pas une désacétylation sélective et le tétraol 92 est formé en quantités importantes aux dépens du triol 91 (entrée 1). Le même phénomène est observé si la triéthylamine est utilisée (entrée 6). Dans les conditions de Zemplen ⁶⁰ (entrée 2), la réaction est trop lente. Si la quantité de NaOMe est augmentée (entrée 3, 4 et 5), les résultats sont identiques (rapport 65/35), seule la durée de la réaction varie. Cette différence de sélectivité par rapport aux résultats décrits en série A réducteur (Partie 2) peut être expliquée par un encombrement beaucoup moins important de la fonction acétyle en position 2c- En effet, le résidu concerné est en position terminale et donc plus accessible

Entrée Conditions Temps de réaction Rapport 91/92

Tableau 9 : Conditions de désacétylation sélective

Le produit 90 est donc désacétylé sélectivement dans du méthanol en présence de NaOMe (2 éq.) pour obtenir le composé mono-acétylé 91 et le tétraol 92 dans un rapport 65/35 avec un rendement de 86% (Schéma 52).

Schéma 52 : Désacétylation sélective du pentasaccharide 90

Les conditions d'hydrogénolyse d'un oligosaccharide porteur, à la fois, d'une fonction trichloroacétamide et de fonction benzyles mises au point sur 56 (Partie 2) ont été appliquées aux intermédiaires de synthèse 91 et 92 sous 50 bars de pression. L'intermédiaire chloroacétamide a toujours été observé-mais la poursuite de la réaction sur plusieurs jours, a permis la conversion totale de ce dernier en acétamide. Cette réaction peut, en effet, être suivie par masse ou par analyse RMN grâce au déplacement des protons de la fonction C(O)CH ₂ Cl (δ _CH2 = 4,1 ppm) et du carbone (δcm = 42,5 ppm). Ainsi, l'hydrogénolyse des deux pentasaccharides 91 et 92 sous pression d'hydrogène (50 bars) permet d'isoler, après purification par chromatographie phase inverse (C 18), les deux glycosides de propyle XIII et XIV avec le même rendement de 74% (Schéma 53).

étapes)

Schéma 53 : Hydrogénolyse des pentasaccharides 91 et 92

II est à noter que Fhydrogénolyse de ces deux pentasaccharides 91 et 92 s'est faite, respectivement en 2 et un jour alors que pour les deux pentasaccharides 56 et 57, en 10 et 2 jours, respectivement. Cette différence de vitesse de conversion du trichloroacétamide en acétamide peut s'expliquer par l'encombrement plus important de l'unité D, comportant la fonction trichloroacétamide, des pentasaccharides en série A réducteur par rapport à ceux en série C réducteur. Procédé 10 :

L'invention se rapporte encore au procédé de préparation du composé XIV (pentasaccharide D(E)ABC) tel que défini dans laliste Ll comprenant les étapes suivantes : condensation du monosaccharide donneur 1 et du tétrasaccharide accepteur 85 conduisant au pentasaccharide 90 de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, Pacétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, préférentiellement, dans le toluène ou le dichlorométhane, en présence de TMSOTf (schéma 51) ; désacétylation du pentasaccharide 90 conduisant au pentasaccharide 92 de préférence dans du méthanol en présence de NaOMe (schéma 52) ; déprotection du pentasaccharide 92 pour conduire au pentasaccharide D(E)ABC de préférence sous pression d'hydrogène dans Péthanol en présence de palladium sur charbon (schéma 53).

Procédé 11 :

L'invention se rapporte au procédé de préparation du composé XV (pentasaccharide (E)AB _AC CD) tel que défini dans la liste Ll comprenant les étapes suivantes : condensation du monosaccharide accepteur 19 et du tétrasaccharide donneur 86 conduisant au pentasaccharide 93 de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1 ,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, l'acétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, préférentiellement, dans le toluène à 70 ⁰ C (schéma 55) ; clivage de la fonction lévulinoyle du pentasaccharide 93 conduisant au pentasaccharide 94, de préférence dans un mélange pyridine/AcOH en présence d'hydrazine monohydraté (schéma 56) ; clivage du groupement isopropylidène du pentasaccharide 94 par hydrolyse acide conduisant au pentasaccharide 95 ; hydrogénolyse du pentasaccharide 95 conduisant au pentasaccharide (E)AB _Ac CD , de préférence sous atmosphère d'hydrogène dans l'alcool, par exemple Péthanol en présence de dérivé de palladium, tel que le palladium sur charbon(schéma 58).

6. Série (E)ABC Donneur

Le donneur 86 est préparé en deux étapes, à partir du même intermédiaire 87. Après déallylation, ³⁹ ' ⁴⁰ l'hémiacétal obtenu 88 (90%) est activé en trichloroacétimidate 86 avec un rendement de 88% ²² ' ²³ .

87 88

Schéma 54 : Synthèse du donneur 86

7. Pentasaccharide (E)ABCD

Le pentasaccharide 93 est obtenu par condensation de l'accepteur 19 et du donneur 86. Or les résultats de la littérature, ¹¹⁴ appuyés des résultats obtenus au laboratoire, ¹¹⁵ ' ⁶² suggèrent

que la réactivité d'un accepteur de structure proche de celle de 19, peu soluble dû fait de la présence d'une fonction acétamide, pourrait être améliorée en augmentant la température de la réaction lors du couplage. Suite à cette observation, le couplage entre 19 et 86 a donc été réalisé à 70°C dans le toluène, sur la base des études de solvants de glycosylation précédentes (Partie 2). De plus, comme le donneur est un tétrasaccharide « coûteux », il est utilisé en défaut, de façon à assurer sa consommation totale. Lors du premier essai de couplage, le rendement en pentasaccharide 93 est de 43% et 36% de donneur hydrolyse 88 ont été récupéré, après purification. En revanche, en présence de 2,5 éq. d'accepteur, le donneur 86 est consommé en totalité et le pentasaccharide 93 est isolé avec un rendement de 78%. Ainsi les meilleurs résultats sont obtenus dans des conditions identiques à celle retenues dans une étude analogue. 62

19, 2,5 éq.

Schéma 55 : Couplage entre l 'accepteur 19 et le donneur 86

Le clivage de la fonction lévulinoyle de 93, traité dans un mélange pyridine/AcOH en présence d'hydrazine monohydraté, fournit le monoacétate 94 ¹⁰⁹ (85%), transformé en triol 95 après hydrolyse acide (92%) (Schéma 56).

Schéma 56 : Conversion de 93 en triol 95

Par analogie, 93 traité par du NaOMe à reflux du méthanol fournit cette fois le diol 96 (94%), ensuite converti en tétraol 97 avec un rendement de 70% (Schéma 57).

Schéma 57 : Conversion de 93 en tétraol 97

De la même façon que pour l'accès aux cibles XI et XII, Phydrogénolyse de 95 et 97 conduit aux pentasaccharides cibles XV et XVI sous forme de glycoside de propyle avec des rendements respectifs de 77% et 70% (Schéma 58).

étapes) étapes)

Schéma 58 : Hydrogénolyse des pentasaccharides 95 et 97 Procédé 12 :

L'invention se rapporte au procédé de préparation du composé XVI (pentasaccharide (E)ABCD) tel que défini dans la liste Ll comprenant les étapes suivantes : condensation du monosaccharide accepteur 19 et du tétrasaccharide donneur 86 conduisant au pentasaccharide 93 de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, Pacétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, préférentiellement, dans le toluène à 70°C (schéma 55) ; déprotection du pentasaccharide 93 conduisant au pentasaccharide 96, de préférence par transestérification (schéma 57) ; clivage du groupement isopropylidène du pentasaccharide 96 par hydrolyse acide conduisant au pentasaccharide 97, de préférence en solution aqueuse de TFA 50% dans le dichlorométhane à 0°C (schéma 57) ; hydrogénolyse du pentasaccharide 97 conduisant au pentasaccharide (E)ABCD ₅ de préférence sous atmosphère d'hydrogène dans l'alcool en présence de palladium sur charbon (schéma 58).

8. Conclusion

Dans cette partie, la synthèse d'un tétrasaccharide, à la fois potentiellement accepteur et donneur, a été réalisée en 27 étapes avec un rendement de 13% (Schéma 38). Ce synthon clé a permis l'accès à six cibles, incluant deux tétra- et quatre pentasaccharides, mono-acétylé ou non correspondant aux fragments de l'antigène O des bactéries S.flexneri 3a et/ou X.

80, 11 étapes, 40% 79, 16 étapes, 32%

85, 2 étapes, 82% 86, 3 étapes, 73% soit 10% soit 9%

Schéma 59 : Bilan pour l'accès à l'accepteur 85 et au donneur 86

Mise en œuyre expérimentale des procédés 7 à 12 Procédé 7 :

> 3,4-Di-0-benzyl-l,2-(méthyloxyéthyIidène)-β-L-rhamnopyra nose ⁶⁷ 70

> l,2,3,4-Tétra-0-acétyI-α,β-L-rhamnopyranose 71 :

Chemical Formula C-14H20O9

Exact Mass 332,1107 MolecularWeight 332,3032

Du L(+)-rhamnose monohydraté commercial 27 (36,4 g, 200,0 mmol) est dissous dans un mélange pyridine/anhydride acétique (1/1, 200 mL). A la fin de l'addition, le milieu réactionnel est laissé sous agitation pendant une nuit à TA. Après avoir vérifié par un suivi CCM (DCM/MeOH, 8/2) la disparition de 27 (Rf= 0,2) et l'apparition d'un nouveau composé (Rf= 0,9), le milieu réactionnel est concentré à l'évaporateur rotatif puis coévaporé au Toi (3 x 100 mL) et au DCM (3 x 100 mL). Le résidu est séché à la pompe à palettes pour conduire au per-acétylé 71 sous forme d'un mélange d'anomères α/β (8/2) et d'une huile jaune (66,3 g, quant.).

71 _α : Rf = 0,3 (Chex/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £5.98 (d, IH ₅ J _1>2 = 1.9 Hz ₅ H-I), 5.27 (dd, IH ₅ J ₃ , ₄ = 10.1 Hz ₅ J _2,3 = 3.5

Hz, H-3), 5.22 (m, IH ₅ H-2), 5.09 (pt, IH, J _4,5 = 9.9 Hz ₅ H-4), 3.91 (dq, IH ₅ H-5), 2.14, 2.13,

2.05, 1.98 (4s, 12H, H _Ac ), 1.20 (d, 3H ₅ J _5;6 - 6.3 Hz, H-6).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), 5170.5, 170.2, 170.0, 168.6 (4C ₅ C _Ac ), 91.0 (C-I ₅ ¹ J ₀ H = 177.0 Hz), 71.8

(C-5 _β ), 70.8 (C-4), 69.1 (C-3), 69.1 (C-5), 69.0 (C-2), 21.4, 21.2, 21.0, 20.8 (8C, C _Ac ) ₅ 17.8

(C-6 _α ), 17.7 (C-6).

71 _β : Rf = 0,3 (Chex/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £5.84 (d, IH, J ₁₌₂ = 1.2 Hz, H-I), 5.45 (m, IH, H-2), 5.05 (m, 2H, H-3, H-

4), 3.65 (dq, IH, H-5), 2.20, 2.12, 2.07, 1.95 (4s, 12H, H _Ac ), 1-26 (d, 3H ₅ J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 170.3, 170.1, 169.9, 168.7 (4C, C _Ac ), 91.0 (C-I, ¹ J _0H = 162.6 Hz), 71.8

(C-5), 71.1, 70.6 (2C, C-3 ^* _, C-4 ^* ) ₅ 68.9 (C-2), 21.3, 21.1, 20.9, 20.7 (8C, C _Ac ), 17.8 (C-6 _α ),

17.7 (C-6).

> Bromure de 2,3 _? 4-0-acétyl-α-L-rhamnopyranose 72 :

Chemical Formula C ₁₂ H ₁₇ BrO ₇

Exact Mass 352,0158

Molecular Weight 353,1632

Le per-acétylé 71 (66,3 g, 200,0 mmol) est dissous dans du DCM (500 mL) puis est ajouté de l'acide bromhydrique (100 mL) et de l'anhydride acétique (23 mL) à 0°C. A la fin de l'addition, le milieu réactionnel est laissé sous agitation pendant une nuit à TA. Après avoir vérifié par un suivi CCM (Chex/EtOAc, 6/4) la disparition de 71 (Rf= 0,25) et l'apparition d'un nouveau composé (Rf= 0,35), l'excès d'acide bromhydrique est évaporé à la trompe à eau puis le milieu réactionnel est concentré à l'évaporateur rotatif et coévaporé au Toi (3 x

100 mL). Le résidu est séché à la pompe à palettes pour conduire au bromure 72 sous forme d'une huile jaune (70,6 g, quant.) qui est engagée directement dans l'étape suivante après contrôle par RMN ¹ H.

Rf= 0,35 (Chex/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £6.26 (d, IH, J _1>2 = 0.8 Hz, H-I) ₅ 5.66 (dd, IH ₅ J _3,4 = 10.2 Hz, J _2;3 = 3.4

Hz, H-3), 5.44 (m, IH, H-2), 5.14 (pt, IH, J _4,5 = 10.0 Hz, H-4), 4.10 (dq, IH, H-5), 2.14,

2.06, 1.99 (3s, 9H, H _Ac ), 1.25 (d, 3H ₅ J _5,6 = 6.3 Hz ₅ H-6).

RMN ¹³ C (CDl ₃ ), £170.1, 170.0, 169.9 (3C, C _Ac ), 84.1 (C-I, ¹ J _0H = 184.3 Hz), 72.8 (C-2),

71.5 (C-5), 70.7 (C-4), 68.3 (C-3), 21.1, 21.0, 20.9 (3C, C _Ac ), 17.3 (C-6).

> 3,4-Di-0-acétyI-l,2-(allyloxyéthylidène)-β-L-rhamnopyran ose 73 :

A une solution du bromure 72 (70,6 g, 200,0 mmol) dans un mélange alcool allylique/DCM (1/1, 400 mL) est ajouté de la 2,6-lutidine (28 mL). A la fin de l'addition, le milieu réactionnel est laissé sous agitation pendant une nuit à TA. Après avoir vérifié par un suivi CCM (Chex/EtOAc, 7/3) la disparition de 72 (Rf= 0,25) et l'apparition d'un nouveau composé (Rf= 0,35), le milieu réactionnel est repris avec un mélange DCM/H ₂ 0 (2/1, 150 mL) et la phase aqueuse est extraite au DCM (3 x 150 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution d'acide citrique 10% (3 x 50 mL), une solution de NaHCO _3sat (3 x 50 mL), et une solution d'H ₂ O (3 x 30 mL) puis séchées sur filtre séparateur et concentrées à Pévaporateur rotatif. Le résidu est séché à la pompe à palettes pour conduire à l'orthoester 73 sous forme d'une huile jaune (66,0 g) qui est engagée directement dans l'étape suivante après contrôle par RMN ¹ H. Rf= 0,35 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £5.85 (m, IH, CH=), 5.39 (d, IH, J _1;2 = 2.4 Hz, H-I), 5.22 (m, IH, J, _rans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.09 (m, IH, J _cis = 11.8 Hz, =CH ₂ ), 5.06 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 3.9 Hz, J ₃ , ₄ = 9.7 Hz, H-3), 5.01 (pt, IH, J _4,5 = 9.9 Hz, H-4), 4.56 (dd, IH, J _lj2 = 2.4 Hz, J ₂ , ₃ = 3.9 Hz, H-2), 4.00 (m, 2H, H _AH ), 3.49 (dq, IH, H-5), 2.07, 2.02 (2s, 6H, H _Ac ), 1.72 (s, 3H, CH _3or tho), 1.20 (d, 3H, J _5>6 = 6.2 Hz, H-6).

RMN ¹³ C (CDl ₃ ), £170.7, 170.3 (2C, C _Ac ), 134.5 (CH=), 124.5 (C _or tho), H6.9 (=CH ₂ ), 97.4 (C-I, ¹ Jc _H = 175.0 Hz) ₅ 77.0 (C-2), 71.1 (C-3), 70.7 (C-4), 69.5 (C-5), 64.0 (C _A n), 24.5 (CH ₃ ortho), 21.2, 21.0 (2C ₅ C _Ac ), 17.8 (C-6). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ Ci ₅ H ₂₂ O ₈ Na m/z théorique : 353.1212 m/z mesurée : 353.1235 > l,2-(Allyloxyéthylidène)-β-L-rhamnopyranose 74 :

Chemical Formula: C-i iHi _β Og

Exact Mass: 246,1103 Molecular Weight: 246,2570

L'orthoester 73 (66,0 g, 200,0 mmol) est dissous dans du MeOH (250 mL) puis du carbonate de potassium (1,1 g, 8,0 mmol, 0.04 éq.) est ajouté au milieu réactionnel. Après 3 h sous

agitation, le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3 et DCMMeOH, 95/5) indique la disparition de 73 (Rf= 0,4 et 1, respectivement) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0 et 0,4, respectivement). Le milieu réactionnel est évaporé sous pression réduite pour conduire au diol 74 sous forme d'un solide jaunâtre (49,2 g) qui est engagée directement dans l'étape suivante après contrôle par RMN ¹ H. Rf= 0,5 (DCM/MeOH, 9/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £5.85 (m, IH, CH=), 5.39 (d, IH, J _1]2 = 2.0 Hz, H-I), 5.26 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.15 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 4.48 (m, IH, H-2), 4.07 (m, 2H, H _A n), 3.70 (dd, IH, J _3>4 = 9.2 Hz, J _2,3 = 4.0 Hz, H-3), 3.42 (pt, IH, J _4;5 = 9.2 Hz, H-4), 3.30 (dq, IH, H-5), 1.71 (s, 3H, CH _3orth o), 1.31 (d, 3H, J _5,6 = 6.0 Hz, H-6).

RMN ¹³ C (CDl ₃ ), £134.4 (CH=), 124.0 (C _or th _o ), 116.8 (=CH ₂ ), 97.7 (C-I, ¹ JcH = 175.1 Hz), 79.6 (C-2), 72.9 (C-3), 72.7 (C-4), 71.1 (C-5), 64.0 (C _A n), 25.5 (CH _3orth o), 17.8 (C-6). > 3,4-Di-0-benzyl-l,2-(allyloxyéthyIidène)-β-L-rhamnopyrano se 75 :

Molecular Weighl: 426,5021

A une solution de diol 74 (49,2 g, 200,0 mmol) dans du DMF (300 mL) est ajouté par petites portions du NaH 60% dans l'huile (24,0 g, 600,0 mmol, 3 éq.) à 0 ⁰ C. Le milieu réactionnel est alors laissé sous agitation pendant 15 min puis replacé à 0°C. Du bromure de benzyle (57,3 mL, 480,0 mmol, 2,4 éq.) est ajouté goutte à goutte puis le milieu réactionnel est agité pendant une nuit à TA. Après avoir vérifié par un suivi CCM (DCM/MeOH, 9/1 et Chex/EtOAc, 7/3) la disparition de 73 (Rf= 0,5 et 0, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé (Rf= 0,9 et 0,5, respectivement), le milieu réactionnel est placé à 0°C et du MeOH (30 mL) est ajouté. Le milieu réactionnel est alors repris par un mélange EtOAc/H ₂ O (3/1, 40OmL) et la phase aqueuse est extraite à FEtOAc (3 x 150 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaCl _sat (3 x 50 mL), et une solution d'H ₂ O (3 x 50 mL) puis séchées sur Na ₂ SO ₄ et concentrées à l'évaporateur rotatif. L'huile obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 9/l-→7/3) pour conduire au di-O- benzyle 75 sous forme d'une huile incolore (64,8 g, 76%, 5 étapes). Rf= 0,5 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.47-7.35 (m, 10H, CH _Ph ), 5.96 (m, IH, CH=), 5.33 (m, IH ₅ J _tran s= 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.31 (d, IH, J _1;2 = 1.7 Hz, H-I), 5.22 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 4.99 (d, IH, J = 10.8 Hz, H _Bn ), 4.80 (m, 2H, H _Bn ), 4.71 (d, IH, J= 10.8 Hz, H _Bn ), 4.41 (dd, IH, Ji, ₂ = 1.7 Hz,

J _2,3 = 4.1 Hz, H-2), 4.08 (m, 2H, H _A11 ), 3.73 (dd, 1H, J _3;4 = 9.1 Hz, J _2,3 = 4.1 Hz, H-3), 3.52 (pt, IH, J _4;5 = 9.1 Hz, H-4), 3.37 (dq, IH, H-5), 1.80 (s, 3H ₅ CH _3ort h _o ), 1-34 (d, 3H, J _5>6 = 6.2 Hz, H-6).

RMN ¹³ C (CDl ₃ ), £ 138.7-138.3 (C _Ph ), 135.0 (CH=), 129.0-128.3 (CH _Ph ), 124.1 (C _ort ho), H6.9 (=CH ₂ ), 97.8 (C-I, ¹ JcH = 173.6 Hz), 79.9 (C-4), 79.6 (C-3), 77.5 (C-2), 76.6, 72.6 (2C ₅ C _Bn ), 70.7 (C-5), 64.0 (CAII), 25.4 (CH _3θ rtho), 18.4 (C-6).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₂₅ H ₃₀ O ₆ Na m/z théorique : 449.1940 m/z mesurée : 449.1980 > AIIyI 2-0-acétyl-3,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 76 :

Chemical Formula: C2sH3oOg

Exact Mass: 426,2042 Molecular Weight: 426,5021

A une solution du di-O-benzyle 75 (53,8 g, 126,0 mmol) dans du DCM (300 mL) est ajouté du TMSOTf (4,5 mL, 25,2 mmol, 0,2 éq.), en présence de tamis moléculaire 4 â (55 g), agitée sous argon à 0°C. Après 3 h sous agitation à TA, le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3) indique la disparition de 75 (Rf = 0,5) et l'apparition d'un nouveau composé moins polaire (Rf= 0,6). La réaction est stoppée par l'addition de triéthylamine (2 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 9/l→7/3) pour conduire au glycoside d'allyle 76 sous forme d'une huile incolore (47,5 g, 88%). Rf= 0,6 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.42-7.33 (m, 1OH, CH _Ph ), 5.90 (m, IH, CH=), 5.42 (dd, IH, J _1>2 = 1.8 Hz, J2, ₃ = 3.4 Hz, H-2), 5.29 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.21 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 4.95 (d, IH ₃ J= 10.8 Hz, H _Bn ), 4.80 (d, IH, J, _,2 = 1.7 Hz, H-I), 4.73 (d, IH, J= 11.2 Hz, η _Bn ), 4.64 (d, IH, J= 10.8 Hz, H _Bn ), 4.56 (d, IH, J= 11.2 Hz, H _Bn ), 4.19 (m, IH, H _AI1 ), 4.01-3.97 (m, 2H, H _A n, H-3), 3.37 (dq, IH, H-5), 3.47 (pt, IH, J _4;5 = 9.4 Hz, H-4), 2.17 (s, 3H ₅ H _Ao ), 1.36 (d, 3H, J _5>6 = 6.2 Hz, H-6).

RMN ¹³ C (CDl ₃ ), 5170.7 (C _Ac ), 139.0-138.5 (C _Ph ), 134.0 (CH=), 128.9-128.1 (CH _Ph ), 118.0 C=CH ₂ ), 97.3 (C-1, ¹ Jc _H = 169.6 Hz), 80.5 (C-4), 78.6 (C-3), 75.8, 72.2 (2C, C _Bn ), 69.5 (C-2), 68.4 (C _A11 ), 68.2 (C-5), 21.5 (C _Ac ), 18.4 (C-6).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₂₅ H ₃₀ O ₆ Na m/z théorique : 449.1940 m/z mesurée : 449.1951

> AlIyI 3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside ⁹⁶ ' ^m 58 :

Chemical Formula C2 ₃ H2βθs

Exact Mass 384,1937 MolecularWeight 384,4654

Voie 1 : Après addition de NaOMe 0,5 M (222,7 mL, 111,0 mmol, 1 éq.) au glycoside d'allyle 76 (47,5 g, 111,0 mmol) en solution dans du MeOH (150 mL), le milieu réactionnel est agité pendant 2 h et son évolution est suivie par CCM (Chex/EtOAc, 7/3). Après avoir observé la disparition de 76 (Rf= 0,6) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,35), le milieu réactionnel est neutralisé par addition de résine échangeuse d'ion DOWEX (H ⁺ ), puis filtré sur fritte. La résine est lavée avec un mélange DCM/MeOH et les solvants sont évaporés. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 8/2→7/3) pour conduire à l'alcool 58 sous forme d'une huile incolore (39,2 g, 92% soit 61% à partir du L-Rhamnose commercial 27).

Voie 2 : Le brut de 76 (65,2 g, 200,0 mmol) est repris par de l'EtOAc (300 mL). La phase organique est lavée avec une solution de HCl 10% (3 x 50 mL), une solution de NaCl _sa t (3 x 50 mL), et une solution d'H ₂ û (3 x 50 mL) puis séchées sur Na ₂ SO ₄ et concentrées à l'évaporateur rotatif. Du chlorure d'acétyle est ajouté (35,5 mL, 500,0 mmol, 2,5 éq.) par portions à d'alcool allylique (300 mL) à 0°C durant 15 min, puis le brut précédent est ajouté au milieu réactionnel. Le milieu réactionnel est ensuite chauffé à 70°C pendant 2,5 h puis à 40°C durant une nuit. Le suivi de la réaction par CCM (Chex/EtOAc, 7/3) montre la disparition de 76 (Rf= 0,25) et la présence d'un produit majoritaire moins polaire (Rf= 0,35). Le milieu réactionnel est refroidi à 0°C, neutralisé par addition de NaHCO ₃ puis filtré sur célite et enfin concentré à l'évaporateur rotatif. Les volatiles sont coévaporés avec du Toi (2 x 100 mL) pour conduire à une huile jaune. L'huile jaune est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 8/2→l/l) pour conduire à l'alcool 58 sous forme d'une huile incolore (55 g, 72% à partir du L-Rhamnose commercial 27). Voie 3 : Partie 2

> AUyI (3,4-di-C?-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-2-0-acétyl- 4-0-benzyI-α-L- rhamnopyranoside 79 :

Chemical Formula' C38H45O10

Exact Mass: 662,3091 Molecular Weight: 662,7658

Le glycoside d'allyle 61 (Partie 2) (172 mg, 230 μmol) est dissous dans un mélange pyridine/acide acétique (3/2, 5mL). De l'hydrazine monohydraté (55 μL, 1,1 mmol, 5 éq.) est ajouté goutte à goutte au milieu réactionnel. Après 30 min d'agitation à TA, le suivi par CCM

(Tol/EtOAc, 8/2) indique la disparition de 61 (Rf = 0,45) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,3). Le milieu réactionnel est alors repris à l'eau froide (10 mL) et la phase aqueuse est extraite rapidement au DCM (3 x 50 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaCl _sat , filtrées sur filtre séparateur de phase et concentrées à l'évaporateur rotatif. L'huile obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice

(Tol/EtOAc, 9/l—>75/25) pour obtenir l'accepteur 79 sous forme une huile incolore (121 mg,

81%).

Rf= 0,3 (Tol/EtOAc, 8/2).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.40-7.28 (m, 15H, CH _Ph ), 5.89 (m, IH, CH=), 5.29 (m, IH, J _tra ns = 17.2

Hz, =CH ₂ ), 5.21 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.17 (m, IH, H-2 _C ), 5.10 (d, IH, J _1;2 = 1.5 Hz,

H-I _B ), 4.88 (d, IH, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.80 (d, IH, J _lj2 = 1.6 Hz, H-l _c ), 4.87 (d, IH, J= 11.0

Hz, Hs _n ), 4.69-4.60 (d, 4H, H _Bn ), 4.18-4.13 (m, 2H, H-3 _C , H _A n), 4.01-3.96 (m, 2H, H-2 _B ,

H _AI I), 3.83-3.74 (m, 3H, H-3 _B , H-5 _B , H-5 _C ), 3.48 (pt, IH, J _3,4 = 9.1 Hz, H-4 _B ), 3.46 (pt, IH,

J ₃ , ₄ - 9.4 Hz, H-4 _C ), 2.14 (s, 3H, H _Ac ), 1.31 (m, 6H, H-6 _B , H-6 _C ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 170.7 (C _Ac ), 138.8-138.3 (C _Ph ), 133.9 (CH=), 129.4-128.1 (CH _Ph ), 117.9

(=CH ₂ ), 101.8 (C-I _B , ¹ Jc _H = 171.0 Hz), 96.6 (C-I ₀ , ¹ Jc _H = 169.2 Hz), 80.7 (C-4 _C ), 80.2 (C-

4 _B ), 80.1 (C-3 _B ), 78.5. (C-3 _C ), 75.9, 75.6 (2C, C _Bn ), 72.9 (C-2 _C ), 72.4 (C _Bn ), 69.4 (C-2 _B ), 68.7

(C-5 _B ), 68.6 (C _A H), 68.1 (C-5 _C ), 21.5 (C _Ac ), 18.3, 18.2 (C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₃₈ H ₄₆ Oi ₀ Na m/z théorique : 685.2989 m/z mesurée : 685.2993 [M+NH ₄ ] ⁺ C ₃₈ H ₄₆ O ₁₀ NH ₄ m/z théorique : 680.3434 m/z mesurée : 680.3472 [M+K] ⁺ C ₃₈ H ₄₆ O ₁₀ K m/z théorique : 701.2728 m/z mesurée : 701.2731 > 5-Chloro-5-méthyl-dihydro-furan-2-one ¹¹³ 82 :

Chemical Formula C ₅ H ₇ CIO ₂

Exact Mass 134,0135 Molecular Weight 134,5609

A une solution d'acide lévulinique (5,0 mL, 48,6 mmol, 1 éq.) est ajouté lentement du chlorure de thionyle (3,9 mL, 53,0 mmol, 1,1 éq.). Le milieu réactionnel est agité à TA pendant Ih puis porté à 50°C pendant 30 min. L'excès de chlorure de thionyle est alors évaporé. L'huile obtenue contrôlé par RMN ¹ H et les données obtenues sont identiques à la littérature. ¹¹³

> Anhydride Lévulinique ¹¹² 83 :

Chemical Formula

Exact Mass 214,0841 Molecular Weight 214,2152

A une solution d'acide lévulinique (79,5 mL, 780,0 mmol, 2 éq.) dans le THF (500 mL) est ajouté de la DCC (80 g, 390 mmol) et le milieu réactionnel est agité à TA pendant 1 nuit. La DCU formé est alors filtrée sur célite et le filtrat est concentré à Févaporateur rotatif. Le solide blanc obtenu (89,0 g) est engagé directement dans l'étape suivante après contrôle par RMN ¹ H.

> AUyI (2,3,4,6-tétra-0-benzyI-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-4-0-be nzyl-2-0- lévuIinoyl-α-L-rhamnopyranoside 81 :

C55Hg2ûi2

Exact Mass 914,4241 Molecular Weight 915,0736

L'alccol 21 (18,6 g, 22,8 mmol) est dissous dans de la pyridine (150 mL) puis de la DMAP (13,9 g, 114 mmol, 5 éq.) est ajouté et le milieu réactionnel est porté à 50°C. De l'anhydride lévulinique 83 (48,8 g, 228,0 mmol, 10 éq.) dissout dans la pyridine (200 mL) est ajouté goutte à goutte pendant lh30. Après 3 h, le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3) indique la disparition de 21 (Rf = 0,40) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,3). Le milieu réactionnel est alors concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile obtenue est purifiée par

chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 9/l-→75/25) pour obtenir l'ester de lévulinoyle 81 sous forme d'une huile incolore (19,7 g, 95%).

Rf= 0,3 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), c57.40-7.10 (m, 25H, CH _Ph ), 5.87 (m, IH, CH=), 5.39 (m, IH, H-2 _A ), 5.28

(m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.19 (d, IH, J _u = 5.6 Hz, H-1 _E ), 5.28 (m, IH ₅ J _cjs = 10.3 Hz,

=CH ₂ ), 5.02 (d, IH, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.96-4.85 (m, 3H, H _Bn ), 4.78 (d, IH, Ji, ₂ = 1.8 Hz, H-

1 _A ), 4.78-4.59 (m, 4H, H _Bn ), 4.50 (d, IH, J= 11.0 Hz, H _8n ), 4.36 (d, IH, J = 12.0 Hz, H _Bπ ),

4.26 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 3.2 Hz, J ₃ , ₄ = 9.6 Hz, H-3 _A ), 4.18-4.04 (m, 3H, H _A n, H-3 _E , H-5 _E ), 3.97 (m,

IH, H _A I _I ), 3.80 (m, IH, H-5 _A ), 3.77 (pt, IH, J ₄ , ₅ = 9.2 Hz, H-4 _E ), 3.64-3.52 (m, 4H, H-2 _E , H-

6a _E , H-4 _A , H-6b _E ), 2.55 (m, 4H, 2CH _2Lev ), 2.09 (s, 3H, CH _3Lev ), 1.40 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-

6A).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.5 (C _Lev ), 172.5 (C _Lev ), 139.2-138.1 (C _Ph ), 134.0 (CH=), 129.0-127.8

(CHph), 117.8 (=CH ₂ ), 97.0 (C-1 _E , ¹ J ₀ H = 170.2 Hz), 93.3 (C-1 _A , ¹ JcH = 167.5 Hz), 82.5 (C-

3 _E ), 80.3 (C-4 _A ), 80.0 (C-2 _E ), 78.3 (C-4 _E ), 76.5, 75.9, 75.3, 73.7, 72.8 (5C, C _Bn ), 72.8 (C-3 _A ),

70.6 (C-5E), 68.7 (C-6 _E ), 68.6 (C-2 _A ), 68.5 (C _A11 ), 68.4 (C-5 _A ), 38.2 (CH _2Lev ), 30.0 (CH _3Lev ),

28.4 (CH _2Lev ), 18.3 (C-6 _A ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₅₅ H ₆₂ Oi ₂ Na m/z théorique : 937.4139 m/z mesurée : 937.4109 [M+NH ₄ ] ⁺ C ₅₅ H ₆₂ O ₁₂ NH ₄ m/z théorique : 932.4585 m/z mesurée : 932.4542

> (2,3,4,6-Tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-4-0-be nzyl-2-0-lévulinoyl- α/β-L-rhamnopyranose 84 :

Chemical Formula: C52H58O12

Exact Mass: 874,3928 MolecularWeight: 875,0097

Le (1 ,5-cyclooctadiènebis(méthyldiphénylphosphine)iridium(I)he xafluorophosphate) (250 mg) est dissous dans du THF (100 mL) sous agitation. Le milieu subit 5 cycles dégazage vide/argon, 5 cycles dégazage vide/hyrdogène puis est mis sous hydrogène pendant 15 min. Le milieu subit alors une seconde fois 5 cycles dégazage vide/argon. La solution d'ester de lévulinoyle 81 (8,5 g, 9,3 mmol) dans du THF (15 mL) est transféré sur la solution de

catalyseur activé. Le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3) montre la disparition de 81 (Rf= 0,3) et l'apparition d'un produit un peu moins polaire (Rf= 0,35).

Du diiode (4,7 g, 18,6 mmol, 2 éq.) en solution dans un mélange THF/H ₂ O (8/2, 50 mL) est ajouté au milieu réactionnel. Le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3 et DCM/MeOH, 98/2) indique la disparition de l'intermédiaire (Rf= 0,35 et 0,85, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé beaucoup plus polaire (Rf= 0,05 et 0,2, respectivement). Pour stopper la réaction, une solution aqueuse de NaHSO ₃ 10% (40 mL) est ajoutée par fractions au milieu jusqu'à disparition de la coloration noire. Le milieu réactionnel est repris avec du DCM (100 mL) et la phase aqueuse est extraite au DCM (3 x 100 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaCl _sat (3 x 50 mL), avec de l'H ₂ O (3 x 50 mL) puis séchées sur filtre séparateur de phases et concentrées à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (DCM/MeOH, 99/1 →9/l) pour obtenir un mélange d'anomères α/β de l'hémiacétal 83 dans les proportions 7/3 sous forme d'une huile jaune (7,5 g, 92%). Rf= 0,2 (DCM/MeOH, 98/2).

83 _« : RMN ¹ H (CDCl ₃ ), J7.43-7.14 (m, 25H, CH _Ph ), 5.43 (m, IH, H-2 _A ), 5.25 .(d, IH, Ji, ₂ = 3.4 Hz, H-IE), 5.15 (d, IH, J _1;2 = 1.7 Hz, H-IA), 5.07-4.87 (m, 3H, H _Bn ), 4.80 (d, IH, J= 12.2 Hz, H _Bn ), 4.74-4.59 (m, 3H, H _Bn ), 4.52 (d, IH, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.46-4.36 (d, 2H, H _Bn ), 4.34 (m, IH, H-3 _A ), 4.20-4.10 (m, 2H, H-3 _E , H-5 _E ), 4.05 (m, IH, H-5 _A ), 3.78-3.73 (m, 2H, OH, H- 4 _E ), 3.70-3.55 (m, 4H, H-2 _E , H-6a _E , H-4 _A , H-6b _E ), 2.55 {m, 4H, 2CH _2L ev), 2.11 (s, 3H, CH _3L ev), 1-41 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), 5206.9 (C _Lev ), 172.6 (C _Lev ), 139.2-138.9 (C _Ph ), 129.0-127.8 (CH _Ph ), 93.0 (C-IE, ¹ JcH = 169.0 Hz), 92.4 (C-1 _A , ¹ JcH = 170.7 Hz), 82.5 (C-3 _E ), 80.3 (C-4 _A ), 79.9 (C-2 _E ), 78.3 (C-4 _E ), 76.5, 75.9, 75.4, 73.6, 73.2 (5C, C _Bn ), 72.3 (C-3 _A ), 70.5 (C-5 _E ), 69.0 (C-2 _A ), 68.7 (C-6 _E ), 68.3 (C-5 _A ), 38.3 (CH _2Lev ), 30.1 (CH _3Lev ), 28.6 (CH _2Lev ), 18.5 (C-6 _A ). 83 _β : RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ 7.43 -7.14 (m, 25H, CH _Ph ), 5.62 (d, IH, J _2;3 = 2.7 Hz, H-2 _A ), 5.38 (d, IH, J _lj2 = 3.4 Hz, H-IE), 5.07-4.87 (m, 3H, H _Bn ), 4.80 (d, IH, J= 12.2 Hz, H _Bn ), 4.79 (s, IH, H-1 _A ), 4.74-4.59 (m, 3H, H _Bn ), 4.53 (d, IH, J = 11.0 Hz, H _Bn ), 4.46-4.36 (d, 2H, H _Bn ), 4.20-4.10 (m, 2H, H-3 _E , H-5 _E ), 4.00 (m, IH, H-3 _A ), 3.75 (m, IH, H-4 _E ), 3.70-3.55 (m, 3H, H- 2 _E , H-6a _E , H-6b _E ), 3.53 (pt, IH, J _4>5 = 9.3 Hz, H-4), 3.44 (m, IH, H-5 _A ), 2.55 (m, 4H, 2CH _2L ev), 2.14 (s, 3H, CH _3Lev ), 1-47 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.0 Hz, H-6 _A ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), 5208.6 (C _Lev ), 173.1 (C _Lev ), 139.2-138.9 (C _Ph ), 129.0-127.8 (CH _Ph ), 93.6 (C-1 _A , ¹ JcH = 160.9 Hz), 92.6 (C-1 _E , ¹ J _0H = 169.1 Hz), 82.4 (C-3 _E ), 79.6 (C-4 _A ), 80.0 (C-2 _E ),

78.4 (C-4 _E ), 76.6, 76.0, 75.5 (3C, C _Bn ), 74.2 (C-3 _A ), 73.6, 73.4 (2C ₅ C _Bn ), 72.3 (C-5 _A ), 70.5 (C-5 _E ), 69.0 (C-2A), 68.8 (C-6 _E ), 39.1 (CH _2Lev ), 30.0 (CH _3L ev), 28.5 (CH _2Lev ), 18.5 (C-6 _A ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₅₂ H ₅₈ O ₁₂ Na m/z théorique : 897.3826 m/z mesurée : 897.3777

[M+NH ₄ f C ₅₂ H ₅₈ O ₁₂ NH ₄ m/z théorique : 892.4272 m/z mesurée : 892.4234

> Trichloracétimidate de (2,3 _? 4,6-tétra-0-benzyI-α-D-glucopyranosyl)-(l-→3)-4-0- benzyI-2-O-lévulinoyl-α/β-L-rhamnopyranose 80 :

Chemical Formula: C54H58CI3NO12

Exact Mass: 1017,3025 Molecular Weight: 1019,3968

L'hémiacétal 83 (7,1 g, 8,1 mmol) est solubilisé dans du DCE (30 mL) et agité sous argon à - 5°C puis de la DBU (340 μL, 2,3 mmol, 0,28 éq.) et du trichloroacétonitrile (4,0 mL, 40,5 mmol, 5 éq.) sont ajoutés.- Le milieu réactionnel est agité à cette température pendant 15 min puis il est déposé, sans aucun traitement, sur une colonne de gel de silice (flash chromatographie, Chex/EtOAc+5% NEt ₃ , 7/3→l/l) pour obtenir le trichloroacétimidate 80 sous forme d'une huile jaune (8,0 g, 97%). Rf= 0,35 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), <58.72 (s, IH, NH), 7.42-7.14 (m, 25H, CH _Ph ), 6.24 (d, IH, J _1>2 = 2.0 Hz, H-IA), 5.61 (m, IH, H-2 _A ), 5.27 (d, IH, J _1>2 = 3.4 Hz, H-1 _E ), 5.05-4.99 (m, 2H, H _Bn ), 4.92- 4.88 (m, 2H, H _Bn ), 4.80 (d, IH, J = 12.0 Hz, H _Bn ), 4.74-4.53 (m, 4H, H _Bn ), 4.42 (d, IH, J = 12.2 Hz, H _Bn ), 4.34 (dd, IH, J _2,3 = 3.1 Hz, J ₃ , ₄ = 9.7 Hz, H-3 _A ), 4.16-4.06 (m, 2H, H-3 _E , H-5 _E ), 4.02 (m, IH, H-5 _A ), 3.79 (pt, IH, J _3,4 = 9.3 Hz, H-4 _E ), 3.71-3.62 (m, 3H, H-4 _A , H-6a _E , H-2 _E ), 3.52 (m, IH, H-6b _E ), 2.59 (m, 4H, 2CH _2L ev), 2.11 (s, 3H, CH _3L e _v ), 1-45 (d, 3H, J _5>6 = 6.2 Hz, H-6 _A ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.3 (C _Lev ), 172.5 (C _Lev ), 160.5 (C=NH), 139.1-137.9 (C _Ph ), 129.2- 127.8 (CHp ₁₁ ), 95.4 (C-1 _A , ¹ J _0H = 178.9 Hz), 93.4 (C-1 _E , ¹ J _0H = 168.3 Hz), 91.3 (CCl ₃ ), 82.4 (C-3 _E ), 79.8 (C-2 _E ), 79.5 (C-4 _A ), 78.2 (C-4 _E ), 76.8, 75.9, 75.4, 73.8, 73.2 (5C, C _Bn ), 72.5 (C- 3A), 71.4 (C-5A), 70.8 (C-5 _E ), 68.4 (C-6 _E ), 66.9 (C-2 _A ), 38.2 (CH _2Lev ), 30.0 (CH _3Le v), 28.4 (CH _2Lev ), 18.4 (C-6 _A ).

AHyI (2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l— >3)-(4-0-benzyl-2-0-lévulinoyl-α- L-rhamnopyranosyl)-(1^2)-(3,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnopyranos yl)-(l-→3)-2-0-acétyl- 4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 87 :

Chemical Formula CgoH-|θ2θ2i

Exact Mass- 1518,6914 MolecularWeight 1519,7603

Du TMSOTf (340,0 μL, 1,9 mmol, 0,3 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 79 (4,2 g, 6,3 mmol) et de donneur 80 (8,0 g, 7,8 mmol, 1,2 éq.) dans du Toi (100 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (5,3 g), agitée sous argon à -78°C. Après 1 h à cette température, le bain éthanol-carboglace est retiré et l'agitation est poursuivie pendant 30 min, temps au bout duquel le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2, Chex/EtOAc, 7/3) indique la disparition de 79 (Rf = 0,35 et 0,4, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé (Rf = 0,65 et 0,45, respectivement). La réaction est stoppée par addition de triéthylamine (0,5 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 95/5—>85/15) pour obtenir le glycoside d'allyle 87 une huile incolore (8,8 g, 92%). Rf- 0,45 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.42-7.15 (m, 4OH, CH _Ph ), 5.89 (m, IH, CH-), 5.58 (m, IH, H-2 _A ), 5.31 (m, IH, λ _a n _s = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.28 (d, IH, J _U2 = 3.4 Hz, H-1 _E ), 5.21 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.19 (m, IH, H-2 _C ), 5.04 (d, IH, J = 11.0 Hz, H _Bn ), 5.01 (d, IH, J _1>2 = 1.4 Hz, H-1 _B ), 5.00 (d, IH, J _i;2 = 1.6 Hz, H-U), 4.98-4.87 (m, 4H, H _Bn ), 4.84 (d, IH, J _1;2 = 1.6 Hz, H-I ₀ ), 4.82-4.61 (m, 8H, H _Bn ), 4.57 (d, IH, J = 11.1 Hz, H _Bn ), 4.52 (d, IH, J = 11.0 Hz, H _Bn ), 4.36 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _B ,0, 4.28 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 3.1 Hz, J ₃ , ₄ = 9.6 Hz, H-3 _A ), 4.19 (m, IH, H _A n), 4.17-4.07 (m, 3H, H-3 _E , H-3 _C , H-5 _E ), 4.04 (m, IH, H _A π), 3.99 (m, IH, H-2 _B ), 3.90 (m, IH, H- 5A), 3.88-3.81 (m, 2H, H-3 _B , H-4 _E ), 3.79-3.74 (m, 3H, H-5 _C ), 3.73 (m, IH, H-5 _B ), 3.69-3.65 (m, 2H, H-2 _E , H-6a _E ), 3.60-3.56 (m, 2H, H-6b _E , H-4 _A ), 3.54 (pt, IH, J _3;4 = 9.4 Hz, H-4 _B ), 3.45

(pt, IH, J _3;4 = 9.5 Hz, H-4 _C ), 2.57 (m, 4H, 2CH _2Lev ), 2.17 (s, 3H, H _Ac ), 2.11 (s, 3H, CH _3L ev), 1.35 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1-30 (m, 6H, H-6 _C , H-6 _B ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.6 (C _L ev), 172.1 (C _Lev ), 170.8 (C _Ac ), 138.6-138.4 (C _Ph ), 134.0 (CH=), 129.0-127.9 (CHp _h ), 117.9 (=CH ₂ ), 101.7 (C-I _B , V _CH = 169.9 Hz), 99.5 (C-I _A , ^ι Jca = 176.6 Hz), 96.5 (C-Ic, ¹ JcH = 170.6 Hz), 93.3 (C-I _E , ¹ Jc _H = 168.8 Hz), 82.6 (C-3 _E ), 80.7 (C-4 _B ), 80.3 (C-4 _C ), 80.2 (C-4 _A ), 79.8 (C-2 _E ), 79.7 (C-3 _B ), 79.4 (C-3 _C ), 78.2 (C-4 _E ), 76.5, 76.0, 75.9 (3C, C _Bn ), 75.8 (C-2 _B ), 75.7, 75.4, 73.8, 73.2 (4C, C _8n ), 72.9 (C-2 _C ), 72.6 (C-3 _A ), 72.5 (C _Bn ), 70.6 (C-5E), 69.4 (C-5 _B ), 69.0 (C-5 _A ), 68.7 (C _A1I ), 68.6 (C-6 _E ), 68.4 (C-2 _A ), 68.1 (C-5 _C ), 38.3 (CH _2Lev ), 30.1 (CH _3Lev ), 28.5 (CH _2Le v), 21.5 (C _Ac ), 18.4, 18.3, 18.2 (C-6 _A ^* ₅ C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₉₀ H ₁₀₂ O ₂₁ Na m/z théorique : 1541.6812 m/z mesurée : 1541.6769

[M+NH ₄ ] ⁺ C ₉₀ H ₁₀₂ O ₂₁ NH ₄ m/z théorique : 1536.7257 m/z mesurée : 1536.7207

> Allyl (2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyI)-(l→3)-(4-0-b enzyl-α-L- rhamnopyranosyl)-(l→2)-(3,4-di-0-benzyl-αrL-rhamnopyranos yl)-(l→3)-2-0- acétyl-4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 85 :

Chemical Formula: CggHggO-ig

Exact Mass: 1420,6546 Molecular Welghf 1421,6603

Le glycoside d'allyle 87 (552 mg, 360 μmol) est dissous dans un mélange pyridine/acide acétique (3/2, 5mL). De l'hydrazine monohydraté (88 μL, 1,8 mmol, 5 éq.) est ajouté goutte à goutte au milieu réactionnel. Après 30 min d'agitation à TA, le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2) indique la disparition de 87 (Rf = 0,65) et l'apparition d'un produit moins polaire (Rf= 0,7). Le milieu réactionnel est alors repris à l'eau froide (10 mL) et la phase aqueuse est extraite rapidement au DCM (3 x 100 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaCl _sat , filtrées sur filtre séparateur de phase et concentrées à l'évaporateur rotatif. L'huile obtenue est purifiée par chromatographie sur gel

de silice (Tol/EtOAc, 9/1) pour obtenir l'accepteur 85 sous forme d'une huile incolore (456 mg, 89%).

Rf= 0,7 (Tol/EtOAc, 8/2).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.43-7.23 (m, 4OH, CH _Ph ), 5.89 (m, IH, CH=), 5.35 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.25 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, -CH ₂ ), 5.22 (m, IH, H-2 _C ), 5.19 (s, IH, H-1 _A ), 5.06 (d, IH, J _li2 = 1.4 Hz, H-I ₃ ), 5.03-4.96 (m, 3H, H _Bn ), 4.97 (d, IH, Ji _j2 = 3.7 Hz, H-1 _E ), 4.91- 4.89 (m, 3H, H _Bn ), 4.81 (d, IH, J _lj2 = 1.3 Hz, H-l _c ), 4.81 (d, IH, J= 10.7 Hz, H _Bn ), 4.75-4.68 (m, 3H, H _Bn ), 4.66-4.53 (m, 5H, H _Bn ), 4.36 (d, IH, J = 11.9 Hz, H _Bn ), 4.19 (m, IH, H _Aπ ), 4.17-4.08 (m, 5H, H-3 _C , H-2 _A , H-2 _B , H-3 _E , H-3 _A ), 4.03 (m, IH, H _A11 ), 4.01 (m, IH ₅ H-5 _E ), 3.93 (m, IH, H-5 _A ), 3.89 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 2.8 Hz, J _3,4 = 9.4 Hz ₅ H-3 _B ) ₅ 3.85 (m, 3H ₅ H-5 _C ), 3.79 (pt, IH ₅ J _3i4 = 9.7 Hz, H-4 _E ), 3.74 (m, IH, H-5 _B ), 3.66 (dd, IH, J _1;2 = 3.6 Hz, J _2;3 = 9.6 Hz, H- 2 _E ), 3.57 (pt, IH, J _3,4 = 9.3 Hz ₅ H-4 _A ), 3.54-3.43 (m, 4H, H-6a _E , H-4 _B , H-4 _C , H-6b _E ) ₅ 2.19 (s, 3H ₅ H _Ac ), 1.37 (d, 3H, J _5,6 = 6.3 Hz, H-6 _A ), 1.35 (d, 3H, J _5>6 = 6.2 Hz, H-6 _B ), 1.33 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _C ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £170.8 (C _Ac ), 138.8-138.6 (C _Ph ), 134.0 (CH=), 129.1-128.1 (CH _Ph ), 117.9 (=CH ₂ ) ₅ 101.9 (C-1 _B5 ¹ Jc _H = 168.4 Hz) ₅ 101.3 (C-1 _A , ¹ J ₀ H = 173.1 Hz), 96.6 (C-l _c , ¹ JCH = 170.4 Hz) ₅ 94.3 (C-1 _E , ¹ J _0H = 167.2 Hz) ₅ 82.8 (C-3 _E ), 80.8 (C-4 _B ) ₅ 80.4 (C-4 _C ), 80.0 (C-3 _B ) ₅ 79.6 (C-4 _A ) ₅ 79.4 (2C ₅ C-2 _E , C-3 _C ), 78.2 (C-4 _E ), 76.8 (C-3 _A ), 76.0, 75.9, 75.7 (4C ₅ C _Bn ) ₅ 75.6 (C-2 _B ) ₅ 75.3, 74.8, 73.8 (3C ₅ C _Bn ) ₅ 73.0 (C-2 _C ) ₅ 72.7 (C _Bn ), 71.1 (C-5 _E ), 69.4 (C-5 _B ), 68.7 (C _A11 ), 68.7 (C-6 _E ), 68.3 (C-5 _A ), 68.2 (C-5 _C ), 67.8 (C-2 _A ), 21.6 (C _Ac ), 18.4, 18.3, 18.2 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₈₅ H ₉₆ O ₁₉ Na m/z théorique : 1443.6444 m/z mesurée : 1443.6505 [M+NH ₄ f C ₈₅ H ₉₆ O ₁₉ NH ₄ m/z théorique : 1438.6890 m/z mesurée : 1438.6960

> Propyl α-D-glucopyranosyl-(l— »3)-α-L-rhamnopyranosyl-(l— >2)-α-L- rhamnopyranosyl-(l→3)-2~0-acétyl-α-L-rhamnopyranoside XI :

Chemical Formula. C2gH5oO-jg

Exact Mass 702,2946 MolecularWeight. 702,6959

Du Pd-C 10% (300 mg) est ajouté à une solution dégazée d'alcool 85 (400 mg, 281 μmol) dans de Féthanol (30 mL). La suspension est saturée avec de l'hydrogène à pression atmosphérique et agitée à TA pendant 1 nuit. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5 et Tol/EtOAc, 8/2) montre la disparition de 85 (Rf = 1 et 0,7, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf = 0,8 et O ₅ respectivement). Le milieu réactionnel est filtré sur célite, et le filtrat est concentré à Pévaporateur rotatif. Le résidu obtenu est purifié sur colonne C- 18 (H ₂ O/CH ₃ CN, 100/0→8/2) pour conduire à la cible XI sous forme d'un solide blanc (150 mg, 76%). Rf= 0,8 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5).

RMN ¹ H (D ₂ O), £5.09 (d, IH, J _1;2 = 1.0 Hz ₅ H-1 _B ), 5.07 (m, IH, H-2 _C ), 5.00 (d, IH, J _lj2 = 3.8 Hz, H-I _E ), 4.88 (d, IH, J _lj2 = 1.5 Hz, H-I _A ), 4.72 (d, IH, J _1;2 - 1.5 Hz ₅ H-l _c ), 4.17 (dd, IH, J _2;3 = 2.5 Hz, H-2 _A ), 3.91-3.83 (m, 3H, H-2 _B , H-3 _C , H-5 _E ), 3.75-3.61 (m, 7H, H-3 _A , H-5 _C , H- 6a _E , H-6b _Es H-3 _E , H-5 _A , H-3 _B ), 3.60-3.54 (m, 2H, H _Pr , H-5 _B ), 3.49 (pt, IH, J ₃ , ₄ ^≈ 9.7 Hz ₅ H- 4 _C ), 3.48-3.37 (m, 3H ₅ H-2 _E , H-4 _A , H _Pr ) ₅ 3.42 (pt, IH, J _3,4 - 10.0 Hz, H-4 _B ), 3.42 (pt, IH ₅ J ₃ , ₄ = 9.2 Hz, H-4 _E ) ₅ 2.07 (s, 3H ₅ H _Ac ), 1.60 (sex, 2H ₅ CH ₂ ), 1.27 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz ₅ H-6 _C ), 1.18-1.16 (m, 6H ₅ H-6 _A , H-6 _B ) ₅ 0.88 (t, 3H ₅ J= 7.4 Hz ₅ CH ₃ ). RMN ¹³ C (D ₂ O) ₅ 5173.4 (C _Ac ), 102.4 (C-IA, ¹ JCH= 175.5 Hz), 101.2 (C- 1 _B , ^ι Jcn ^≈ 173.2 Hz),

97.2 (C-Ic ₅ ¹ JCH = 172.3 Hz) ₅ 95.8 (C-I _E , ¹ JCH = 167.3 Hz) ₅ 78.8 (C-2 _B ), 76.2 (C-3 _C ), 75.7 (C- 3 _A ) ₅ 73.3 (C-3 _E ), 72.5 (C-4 _C ), 72.4 (C-4 _E ), 72.3 (C-2 _C ), 72.1 (C-5 _E ), 71.8 (C-2 _E ), 70.7 (C-4 _A ),

70.3 (Cpr), 70.2 (C-5 _A ), 69.8 (2C ₅ C-4 _B , C-5 _B ) ₅ 69.7 (C-3 _B ), 69.0 (C-5 _C ), 67.1 (C-2 _A ) ₅ 60.7 (C- 6E), 22.4 (CH ₂ ), 20.7 (C _Ac ), 17.2, 17.1, 16.9 (C-6 _A \ C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ) ₅ 10.3 (CH ₃ ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₂₉ H ₅₀ O ₁₉ Na m/z théorique : 725.2844 m/z mesurée : 725.2827

Procédé 8 :

> AUyI (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-(4-O-b enzyl-α-L- rhamnopyranosyI)-(l-→2)-(3,4-di-0-benzyI-α-L-rhamnopyrano syI)-(l—>3)-4-0- benzyl-α-L-rhamnopyranoside 89 :

Chemical Formula: Cg3Hg4θ-j8

Exact Mass 1378,6440 Molecular Weight: 1379,6237

Après addition de NaOMe 0,5 M (770 μL, 390 μmol, 1,1 éq.) à l'alcool 85 (500 mg, 350 μmol) en solution dans du MeOH (10 mL). Le milieu réactionnel est porté à reflux et agité pendant 3 h, temps au bout duquel le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3), indique la disparition de 85 (Rf= 0,5) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,3). Après retour à TA, le milieu réactionnel est neutralisé par addition de résine échangeuse d'ion DOWEX (H ⁺ ), puis filtré sur fritte. La résine est lavée avec un mélange DCM/MeOH et les solvants sont évaporés. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 75/25→7/3) pour conduire au diol 89 sous forme d'un solide blanc (461 mg,

70).

Rf- 0,3 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), (57.42-7.20 (m, 4OH, CH _Ph ), 5.93 (m, IH, CH=), 5.33 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.23 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.18 (s, IH, H-I _A ), 5.10 (d, IH, J _1;2 = 1.5 Hz, H-IB), 5.03-4.98 (m, 3H, H _Bn ), 4.95 (d, IH, J _1;2 = 3.3 Hz, H-1 _E ), 4.92-4.87 (m, 3H, H _3n ), 4.84 (d, IH, J _1;2 = 1.5 Hz, H-Ic), 4.79 (d, IH, J= 11.4 Hz, H _Bn ), 4.75-4.69 (m, 5H, H _Bn ), 4.60-4.56 (m, 2H, H _Bn ), 4.52 (d, IH, J = 11.0 Hz, H _Bn ), 4.33 (d, IH, J = 12.0 Hz, H _Bn ), 4.19 (m, IH, HA ₁₁ ), 4.13-4.07 (m, 5H, H-2 _A , H-3 _E , H-2 _B , H-3 _A , H-2 _C ), 4.03 (m, IH, H _A π), 4.01-3.98 (m, 2H, H-3 _C , H-5 _E ), 3.93-3.87 (m, 3H, H-3 _B , H-5 _B , H-5 _A ), 3.81-3.76 (m, 2H, H-4 _E , H-5 _C ), 3.65 (dd, IH, J _1;2 = 3.5 Hz, J _2;3 = 9.7 Hz, H-2 _E ), 3.56 (pt, IH, J _3>4 = 9.5 Hz, H-4 _A ), 3.54-3.43 (m, 4H, H- 4 _B , H-6a _E , H-4 _C , H-6b _E ), 2.19 (s, IH, OH), 1.37 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.34 (d, 3H, H- 6 _A , J ₅ ,6= 6.3 Hz, H-6 _B ), 1.30 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.3 Hz, H-6 _C ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ 138.6-138.2 (C _Ph ), 134.0 (CH=), 129.0-128.1 (CH _Ph ), 117.7 (=CH ₂ ), 101.5 (C-IB, ¹ JCH == 170.1 Hz), 10143 (C-1 _A , ¹ JcH = 170.1 Hz), 98.8 (C-I ₀ , ¹ JcH = 167.2 Hz), 94.3 (C-1 _E , ¹ JcH = 169.2 Hz), 82.8 (C-3 _E ), 81.5 (C-3 _C ), 80.7 (C-4 _B ), 80.2 (C-4 _C ), 80.0 (C-3 _B ), 79.6 (C-4 _A ), 79.3 (C-2 _E ), 78.2 (C-4 _E ), 76.8 (C-3 _A ), 76.0, 75.9, 75.8 (4C, C _Bn ), 75.9 (C-2 _B ), 75.3, 74.8, 73.8, 72.7 (4C, C _Bn ), 71.3 (C-2 _C ), 71.1 (C-5 _E ), 69.6 (C-5 _B ), 68.4 (C _A n), 68.3 (C- 6 _E ), 68.3 (C-5 _A ), 68.0 (C-5 _C ), 67.7 (C-2 _A ), 18.4, 18.3, 18.2 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ).

HRMS (ESI ⁺ ) [M+Na] ⁺ C ₈₃ H ₉₄ Oi ₈ Na m/z théorique : 1401.6338 m/z mesurée : 1401.6403 [M+NH ₄ ] ⁺ C ₈₃ H ₉₄ O ₁₈ NH ₄ m/z théorique : 1396.6783 m/z mesurée : 1396.6854

> Propyl α-D-glucopyranosyl-(l— >3)-α-L-rhamnopyranosyl-(l→2)-α-L- rhamnopyranosyl-(l→3)-α-L-rhamnopyranoside XII :

Chemical Formula ^yH^gO^

Exact Mass 660,2841 MolecularWeight 660,6592

Du Pd-C 10% (300 mg) est ajouté à une solution dégazée de diol 89 (360 mg, 261 μmol) dans de Péthanol (30 mL). La suspension est saturée avec de l'hydrogène à pression atmosphérique et agitée à TA pendant 1 nuit. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5 et Chex/EtOAc, 7/3) montre la disparition de 89 (Rf = 1 et 0,3, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,5 et 0, respectivement). Le milieu réactionnel est filtré sur célite, et le filtrat est concentré à l'évaporateur rotatif. Le résidu obtenu est purifié sur colonne C- 18 (H ₂ O/CH ₃ CN, 100/0→8/2) pour conduire au à la cible XII sous forme d'un solide blanc (140 mg, 81%).

Rf= 0,5 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5).

RMN ¹ H (D ₂ O), £5.10 (bs, IH, H-1 _B ), 4.99 (d, IH, Ji, ₂ = 3.8 Hz, H-1 _E ), 4.89 (d, IH, J _1;2 = 1.5 Hz, H-1 _A ), 4.65 (d, IH, J _li2 = 1.4 Hz, H-I ₀ ), 4.17 (dd, IH, J _2;3 = 2.4 Hz, H-2 _A ), 3.95 (m, IH, H-2 _B ) 3.88-3.81 (m, 3H, H-2 _C , H-5 _E , H-3 _B ), 3.73 (dd, IH, J _2;3 = 3.0 Hz, J _3,4 = 9.7 Hz, H-

3 _A ), 3.71-3.59 (m, 7H, H-3 _C , H-6a _E , H-6b _E , H-5 _B , H-3 _E , H-5 _C , H-5 _A ), 3.53 (m, IH ₅ H _Pr ), 3.48- 3.37 (m, 5H, H-2 _E , H-4 _A , H-4 _C , H _Pr , H-4 _B ), 3.34 (pt, IH, J _3,4 = 9.3 Hz, H-4 _E ), 1.50 (sex, 2H, CH ₂ ), 1.18-1.16 (m, 9H, H-6 _A , H-6 _B , H-6 _C ), 0.81 (t, 3H, J= 7.4 Hz, CH ₃ ). RMN ¹³ C (D ₂ O), £ 102.3 (C-1 _A , ¹ JcH = 167.2 Hz), 101.0 (C-1 _B , ¹ JCH = 173.1 Hz), 99.8 (C-l _c , ¹ J _CH = 169.4 Hz), 95.7 (C-1 _E , ¹ Jc _H = 169.5 Hz), 78.8 (C-2 _B ), 77.7 (C-3 _C ), 75.5 (C-3 _A ), 73.2 (C-3 _E ), 72.4 (C-4 _B ), 72.2 (C-4 _C ), 72.0 (C-5 _E ), 71.7 (C-4 _A ), 70.6 (C-2 _E ), 70.3 (C-2 _C ), 70.2 (C- 3 _B ), 69.9 (C _Pγ ), 69.7 (C-5 _B ), 69.6 (C-4 _E ), 69.5 (C-5 _C ), 68.9 (C-5 _A ), 67.0 (C-2 _A ), 60.6 (C-6 _E ), 22.3 (CH ₂ ), 17.1, 17.0, 16.8 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ), 10.2 (CH ₃ ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₂₇ H ₄₈ O ₁₈ Na m/z théorique : 683.2739 m/z mesurée : 683.2729 Procédé 9 :

> AUyI (3,4,6-tri-0-acétyI-2-désoxy-2-trichloroacétamido-β-D-gI ucopyranosyl)- (l→2)-[2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l→3) ]-(4-(?-benzyl-α-L- rhamnopyranosyl)-(l-→2)-(3,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnopyrano syI)-(l→^3)-2-(?- acétyl-4-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 90 :

Chemical Formula: C9 ₉ H-|-t2θ3Nθ27

Exact Mass: 1851,6487 MolecularWeight: 1854,2981

Du TMSOTf (28,0 μL, 160 μmol, 0,5 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 85 (442 mg, 310 μmol) et de donneur 1 (370 mg, 620 μmol, 2 éq.) dans du Toi (8 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (253 mg), agitée sous argon à -40 ⁰ C. Après 1 h, à cette température, le bain éthanol-carboglace est retiré et l'agitation est poursuivie pendant 30 min, temps au bout duquel le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2) indique la quasi-disparition de 85 (Rf = 0,65) et l'apparition d'un nouveau composé (Rf = 0,45). La réaction est stoppée par addition de triéthylamine (0,1 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif.

L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 9/l→7/3) pour obtenir le glycoside d'allyle 90 sous forme d'un solide blanc (469 mg, 82%). Rf= 0,45 (Tol/EtOAc, 8/2).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), J7.43-7.09 (m, 41H, CH _Ph , NH), 5.89 (m, IH, CH=), 5.31 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.26 (d, IH, Ji _,2 = 3.5 Hz, H-1 _E ), 5.22 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.18 (m, 2H, H _Bn ), 5.16 (m, IH, H-2 _C ), 5.19 (d, IH, Ji, ₂ = 1.1 Hz, H-I _A ), 5.06 (m, IH, H-4 _D ), 5.05 (m, 2H, H _3n ), 5.00 (d, IH, J _1>2 = 1.0 Hz, H-I ₃ ), 4.96 (m, IH, H _3n ), 4.94 (m, IH, H-I ₀ ), 4.88 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 10.4 Hz, H-3 _D ), 4.81 (d, IH, J _1;2 = 1.6 Hz, H- l _c ), 4.77-4.85 (m, 4H, H ₃ ,0, 4.62-4.56 (m, 4H, H _8n ), 4.52-4.47 (m, 2H, H ₃₁ O, 4.32 (d, IH, J = 11.9 Hz, H _3n ), 4.26 (m, IH, H-2 _D ), 4.20 (m, IH, H-2 _A ), 4.18-4.14 (m, 3H, H _A π, H-3 _A , H-3 _E ), 4.12-4.08 (m, 2H ₅ H-5 _E , H-3 _C ), 4.01 (m, IH, H _Aπ ), 3.98 (m, IH, H-6a _D ), 3.96-3.92 (m, 2H, H-2 _B , H-2 _E ), 3.87-3.82 (m, 4H, H-6b _D , H-4 _E , H-5 _A , H-3 _B ), 3.79 (m, 3H, H-5 _C ), 3.74 (m, IH ₅ H-5 _B ), 3.50 (pt, IH ₅ J ₃ , ₄ = 9.3 Hz, H-4 _B ), 3.48 (pt, IH ₅ J _3;4 = 9.4 Hz ₅ H-4 _A ), 3.54-3.40 (m, 3H ₅ H-6a _E , H-6b _E , H-4 _C ), 2.97 (m, IH, H-5 _D ), 2.15, 2.08, 2.03, 1.90 (4s, 12H, H _Ac ), 1-34 (d, 3H ₅ J _5,6 = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.32 (d, 3H ₅ J _5>6 = 6.2 Hz, H-O ₃ ) 1.27 (d, 3H, J _5,6 = 6.2 Hz, H-6 _C ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), J 171.0, 170.9, 170.8, 169.6 (4C ₅ C _Ac ), 162.6 (C _NTCA ), 139.0-138.0 (C _Ph ), 134.0 (CH=), 129.0-127.8 (CH _Ph ), 117.9 (=CH ₂ ), 101.7 (C-I ₃ , ¹ Jc _H = 173.2 Hz), 101.3 (C-I _A , ¹ JCH = 171.0 Hz), 101.2 (C-I ₀ , ¹ J ₀ H = 161.0 Hz), 96.5 <C-1 _C , ¹ JcH = 168.8 Hz), 95.1 (C-I ₃ , ¹ JcH = 164.5 Hz), 93.1 (CCl ₃ ), 82.8 (C-3 _E ), 80.8 (C-4 _B ), 80.3 (C-4 _C ), 80.1 (C-4 _A ), 79.3 (C-3 _C ), 79.2 (C-2 _E ), 79.1 (C-4 _E ), 78.9 (C-3 _B ), 76.4 (C ₃₁ O, 76.0 (C-2 _B ), 75.9, 75.7, 75.5, 75.3 (4C, C _3n ), 75.1 (C-3 _A ), 74.4 (C-2 _A ), 74.3, 73.8 (2C, C _3n ), 73.6 (C-3 _D ), 72.9 (C-2 _C ), 72.3 (C _Bn ) ₅ 72.2 (C- 5 _D ) ₅ 70.4 (C-5 _E ), 69.2 (C-5 _B ), 69.1 (C-5 _A ), 68.6 (C _AII ), 68.2 (C-4 _D ), 68.2 (C-6 _E ), 68.1 (C-5 _C ), 61.9 (C-6D), 56.2 (C-2 _D ), 21.5, 21.0, 20.9, 20.8 (4C, C _Ac ), 18.3, 18.2, 18.1 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* ₅ C-

6c ^* ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₉₉ H ₁₁₂ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₇ Na m/z théorique : 1874.6385 m/z mesurée : 1874.6638

[M+NH ₄ ] ⁺ C ₉₉ Hj _I2 ³⁵ Cl ₃ NO ₂₇ NH ₄ m/z théorique : 1869.6831 m/z mesurée : 1869.6978

> AUyI (2-désoxy-2-trichloroacétamido-β-D-gIucopyranosyl)-(l—& gt;2)-[2,3,4,6-tétra- 0-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l-→3)]-(4-(?-benzyl-α-L-rha mnopyranosyl)- (1— ^2)-(3,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-2-0-acét yl-4-0-benzyl-α- L-rhamnopyranoside 91 :

> AHyI (2-désoxy-2-trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyI)-(l-→ 2)-[2,3,4,6-tétra- 0-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l→^3)]-(4-0-benzyI-α-L-rham nopyranosyl)- (l→2)-(3,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosy I)-(I- »3)-4-0-benzyl-α-L- rhamnopyranoside 92 :

Chemical Formula: Cg ₃ H-]oçCI ₃ Nθ24 Chemical Formula: Cg-)Hio4CI ₃ Nθ2 ₃

Exact Mass: 1725,6170 Exact Mass: 1683,6065 MolecularWeight: 1728,1880 Molecular Weight: 1686,1514

Le glycoside d'allyle 90 (200 mg, 100 μmol) est dissous dans du MeOH (12,5 mL) puis du NaOMe 0,5 M (431 μL, 200 μmol, 2 éq.) est ajouté au milieu réactionnel. Après 25 min sous agitation, le suivi par CCM (DCM/MeOH, 95/5 et Chex/EtOAc, 6/4) indique la disparition de 90 et l'apparition de deux produits plus polaires (Rf= 0,3 et 0,2 dans DCM/MeOH, 95/5). Le milieu réactionnel est alors neutralisé par addition de résine échangeuse d'ion DOWEX (H ⁺ ), puis filtré sur fritte. La résine est lavée avec un mélange DCM/MeOH et les solvants sont évaporés. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 7/3 -→ 1/1) pour conduire par ordre d'élution au produit mono-acétylé 91 sous forme d'un solide blanc (103 mg, 56%) et au produit non-acétylé 92 sous forme d'un solide blanc (55 mg, 30%). 91 : Rf = 0,3 (DCM/MeOH, 95/5).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.41 (d, IH, J _2jNH = 6.1 Hz, NH), 7.39-7.08 (m, 4OH, CH _Ph ), 5.94 (m, IH, CH=), 5.38 (bs, IH, H-IA), 5.33 (m, IH, J _tra ns = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.23 (m, IH, J _cjs = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.19-5.15 (m, 4H, H-2 _C , H-1 _E , 2H _Bn ), 5.12-5.01 (m, 2H, H _Bn ), 4.96 (d, IH, J = 10.7 Hz, H _B n), 4.91 (bs, IH, H-1 _B ), 4.82 (d, IH, J _1]2 = 1.5 Hz, H-l _c ), 4.80-4.64 (m, 5H, H _3n ), 4.55 (m, IH ₅ H-1 _D ), 4.54-4.49 (m, 5H, H _Bn ), 4.32 (d, IH, J= 11.9 Hz ₅ H _3n ), 4.20 (m, IH ₅ H- 2 _B ), 4.17 (m, IH ₅ H _A n), 4.15 (m, IH, H-2 _A ) ₅ 4.13-4.08 (m, 4H, H-3 _E , H-3 _A , H-3 _C , H-5 _E ) ₅ 4.1 l(m, IH, HAII), 3.89-3.82 (m, 3H, H-4 _E , H-3 _B , H-2 _E ), 3.79-3.69 (m, 4H, H-2 _D , H-5 _C , H-5 _A ,

H-5 _B ), 3.63 (m, IH, H-6a _D ), 3.52-3.36 (m, 5H, H-4 _B , H-4 _A , H-6a _E , H-6b _E , H-4 _C ), 3.12 (pt, IH, J3 _;4 = 9.3 Hz, H-4 _D ), 3.05 (m, IH, H-5 _D ), 2.92 (m, IH, H-6b _D ), 2.37 (m, IH, H-3 _D ), 2.14 (s, 3H, H _AC ), 1.34-1.27 (m, 6H, H-6 _A , H-6 _B ), 1.28 (d, 3H, J _5;6 = 6.1 Hz, H-6 _C ). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), 5170.8 (C _Ac ), 164.9 (C _NTCA ), 138.7-138.1 (C _Ph ), 134.0 (CH=), 129.5- 127.7 (CHp _h ), 118.2 (=CH ₂ ), 102.0 (C-I ₁₃ , ¹ Jc _H = 170.5 Hz), 101.3 (C-I ₀ , ¹ J ₀ H = 161.0 Hz), 100.4 (C-IA, ¹ JCH = 171.2 Hz), 96.5 (C-l _c , ¹ JcH = 171.2 Hz), 94.6 (C-1 _E , ¹ JcH = 169.8 Hz), 92.9 (CCl ₃ ), 83.4 (C-3 _E ), 80.6 (C-4 _B ), 80.5 (C-4 _E ), 80.1 (C-4 _C ), 80.1 (C-3 _C ), 79.9 (C-3 _B ), 79.4 (C-4 _A ), 79.0 (C-2 _E ), 76.6 (C _Bn ), 76.5 (C-3 _D ), 76.1 (C-5 _D ), 75.9, 75.6, 75.4, 75.3 (5C, C _Bπ ),

74.4 (C-3 _A ), 74.1 (C-2 _A ), 73.9, 73.2 (2C, C _Bn ), 72.9 (C-4 _D ), 72.8 (C-2 _C ), 72.1 (C-2 _B ), 70.4 (C- 5 _B ), 69.7 (C-5 _E ), 69.2 (C-5 _A ), 68.8 (C _A n), 68.0 (C-6 _E ), 67.9 (C-5 _C ), 62.9 (C-6 _D ), 58.8 (C-2 _D ),

21.5 (CAC), 18.3, 18.2, 18.1 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₉₃ H ₁₀₆ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₄ Na m/z théorique : 1748.6068 m/z mesurée : 1748.6366

[MfNH ₄ ] ^"1" C ₉₃ H ₁₀₆ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₄ NH ₄ m/z théorique : 1743.6514 m/z mesurée : 1743.6545 92 : Rf = 0,2 (DCM/MeOH, 95/5).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), 57.41 (d, IH, J _2,NH = 6.6 Hz, NH), 7.40-7.11 (m, 4OH, CH _Ph ), 5.92 (m, IH, CH=), 5.38 (bs, IH, H-1 _A ), 5.31 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.23 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.19 (d, IH, J _ιa = 3.5 Hz, H-1 _E ), 5.14-4.98 (m, 4H, H _Bn ), 4.96 (bs, IH, H-1 _B ), 4.93 (d, IH, J = 12.3 Hz, H _Bn ), 4.81 (d, IH, J _1;2 = 1.3 Hz, H-l _c ), 4.80 (d, IH, J = 10.7 Hz, H _Bn ), 4.74-4.66 (m, 6H, H _Bn ), 4.55 (m, IH, J _1;2 = 4.4 Hz, H-1 _D ), 4.55-4.69 (m, 3H, H _Bn ), 4.37 (d, IH, J= 11.9 Hz, H _Bn ), 4.20 (m, IH, H _AU ), 4.18-4.10 (m, 5H, H-2 _B , H-2 _A , H-3 _A , H-3 _E , H- 5 _E ), 4.07 (m, IH, H-2 _C ), 4.1 l(m, IH, H _A11 ), 3.97 (m, IH ₅ H-3 _C ), 3.92 (m, IH, H-3 _B ), 3.89-3.83 (m, 3H, H-4 _E , H-2 _E , H-2 _D ), 3.88 (m, IH, H-5 _B ), 3.76 (m, IH, H-5 _C ), 3.72 {m, IH, H-5 _A ), 3.67 (m, IH, H-6a _D ), 3.56 (pt, IH, J _3>4 = 9.4 Hz), 3.53-3.39 (m, 4H, H-6a _E , H-6b _E , H-4 _A , H-4 _C ), 3.18 (pt, IH, J _3;4 = 8.9 Hz, H-4 _D ), 3.13 (m, IH, H-5 _D ), 3.08 (m, IH, H-6b _D ), 2.48 (m, IH, H- 3 _D ), 1.28 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _B ), 1.28 (d, 3H, J _5,6 = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.28 (d, 3H, J _5>6 = 6.2 Hz, H-6 _C ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), 5164.7 (C _NTCA ), 138.7-138.2 (C _Ph ), 134.2 (CH=), 129.6-127.7 (CH _Ph ), 117.9 (=CH ₂ ), 101.7 (C-1 _B , ¹ JcH = 170.5 Hz), 101.4 (C-I ₀ , ¹ Jc _H - 158.1 Hz), 100.6 (C-1 _A , ¹ JCH = 173.4 Hz), 98.8 (C-I ₀ , ¹ J _0H = 169.8 Hz), 94.7 (C-1 _E , ¹ J _0H = 168.3 Hz), 93.0 (CCl ₃ ), 83.7 (C-3 _E ), 81.9 (C-3 _C ), 80.7 (C-4 _B ), 80.3 (C-3 _B ), 80.1 (C-4 _A ), 80.0 (C-4 _C ), 79.4 (C-4 _E ), 79.1 (C-2E), 76.6 (CB ₁₁ ), 76.5 (C-3 ₀ ), 76.2 (C-5 _D ), 75.8, 75.7, 75.4, 75.3 (5C, C _Bn ), 74.4 (C-3 _A ),

74.3 (C-2 _A ), 73.9, 73.4 (2C, C _Bn ), 72.8 (C-4 _D ), 72.7 (C-2 _B ), 71.3 (C-2 _C ), 70.4 (C-5 _E ), 69.7 (C- 5 _B ), 69.3 (C-5 _A ), 68.4 (C-6 _E ), 68.2 (C _A n), 67.9 (C-5 _C ), 63.0 (C-6 _D ), 58.8 (C-2 _D ), 18.4, 18.3, 18.2 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ).

HRMS (ESI^) : [M+Na] ⁺ C _9I H ₁₀₄ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₃ Na m/z théorique : 1706.5962 m/z mesurée : 1706.6206 [M+NH ₄ ] ⁺ C ₉₁ H ₁₀₄ ³⁵ Cl ₃ NO ₂₃ NH ₄ m/z théorique : 1701.6409 m/z mesurée : 1701.6571

> Propyl (2-acétamido-2-désoxy-β-D-glucopyranosyl)-(l→2)-[α-D-g lucopyranosyl- (l→3)]-α-L-rhamnopyranosyl-(l→2)-α-L-rhamnopyranosyl-( l— »3)-2-0-acétyl- α-L-rhamnopyranoside XIII :

Chemical Formula: C37H63NO24

Exact Mass: 905,3740 MdecularWeight: 905,8884

Du Pd-C .10% (300 mg) est ajouté à une solution dégazée de triol 91 (310 mg, 180 μmol) dans de l'éthanol (20 mL). La suspension est saturée avec de l'hydrogène à 50 bars et agitée à TA pendant 2 j. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5 et DCM/MeOH, 95/5) montre la disparition de 91 (Rf = 1 et 0,3, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf = 0,2 et 0, respectivement). Le milieu réactionnel est filtré sur un Filtre Acrodisc LC 25 mm, et le filtrat est concentré à l'évaporateur rotatif. Le résidu obtenu est purifié sur colonne C-18 (H ₂ O/CH ₃ CN, 100/0→7/3) pour conduire à la cible XIII sous forme d'un solide blanc (119 mg, 74%). Rf= 0,2 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5).

RMN ¹ H (D ₂ O), £5.09 (bs, IH, H-1 _B ), 5.08 (m, IH, H-2 _C ), 5.07 (d, IH, J _1;2 = 3.5 Hz, H-1 _E ), 4.99 (d, IH, J _lj2 = 1.5 Hz, H-IA), 4.73 (bs, IH, H-l _c ), 4.72 (d, IH, J _1;2 = 8.5 Hz, H-1 _D ), 4.33 (m, IH, H-2 _A ), 3.95 (m, IH, H-5 _E ), 3.93 (m, IH, H-2 _B ), 3.88 (dd, IH, J _2;3 = 3.4 Hz, J ₃ , ₄ = 9.6

Hz, H-3 _C ), 3.83-3.79 (m, 2H ₃ H-3 _A , H-6a _D ), 3.76-3.68 (m, 4H, H-3 _E , H-5 _C , H-6a _E , H-6b _E ), 3.66-3.52 (m, 7H, H-6b _D , H-2 _D , H-3 _B , H-5 _A , H-2 _E , H _Pr , H-5 _B ), 3.49 (pt, IH, J _3j4 = 9.7 Hz, H- 4 _C ), 3.42 (m, IH ₅ H _Pr ), 3.38 (m, IH, H-4 _E ), 3.37-3.29 (m, 4H, H-4 _B , H-5 _D , H-4 _D , H-3 _D ), 3.26 (pt, IH, J _3;4 - 9.7 Hz, H-4 _A ), 2.08 (s, 3H, H _Ac ), 2.00 (s, 3H, H _NA o), 1-53 (sex, 2H, CH ₂ ), 1.22 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _C ), 1.17 (m, 3H, J _5,6 = 6.4 Hz, H-6 _B ), 1.15 (d, 3H, J _5>6 = 6.2 Hz, H- 6 _A ), 0.83 (t, 3H, J= 7.4 Hz, CH ₃ ).

RMN ¹³ C (D ₂ O) ₅ £174.8 (C _NAc ), 173.3 (C _Ac ), 102.2 (C-1 _D , ¹ Jc _H = 163.9 Hz), 101.7 (C-1 _A , ¹ JCH = 173.4 Hz), 101.0 (C-1 _B , ¹ JcH = 172.7 Hz), 97.1 (C-l _c , ¹ JcH = 172.0 Hz), 94.9 (C-1 _E , ¹ JCH= 170.5 Hz), 78.7 (C-2 _B ), 76.3 (C-4 _D ), 76.0 (C-3 _C ), 74.5 (C-3 _D ), 74.4 (C-2 _A ), 74.1 (C-3 _A ), 73.4 (C-3 _E ), 72.5 (C-4 _C ), 72.3 (C-2 _C ), 72.2 (C-4 _B ) ₅ 71.7 (C-5 _E ), 71.6 (C-2 _E ), 71.1 (C-4 _A ), 70.2 (C _Pr ), 70.1 (C-5 _D ), 69.8 (C-3 _B ), 69.7 (3C, C-4 _E , C-5 _A , C-5 _B ), 68.9 (C-5 _C ), 61.0 (C-6 _D ), 60.6 (C-6 _E ), 56.0 (C-2 _D ), 23.0 (C _NAc ), 22.3 (CH ₂ ), 20.7 (C _Ac ), 17.2, 17.0, 16.8 (C-6 _A ^* ₅ C-6 _B ^* , C- 6c ^* ), 10.2 (CH ₃ ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ C ₃₇ H ₆₄ NO ₂₄ m/z théorique : 906.3818 m/z mesurée : 906.3831

[M+Na] ⁺ C ₃₇ H ₆₃ NO ₂₄ Na m/z théorique : 928.3638 m/z mesurée : 928.3652 Procédé 10 :

> Propyl (2-acétamido-2-désoxy-β-D-glucopyranosyl)-(l→-2)-[α-D- glucopyranosyl-

(l→3)]-α-L-rhamnopyranosyl-(l→2)-α-L-rhamnopyranosy l-(l→3)-α-L- rhamnopyranoside XIV :

Chemical Formula C35H61NO23

Exact Mass 863,3634 MolecularWeight 863,8517

Du Pd-C 10% (250 mg) est ajouté à une solution dégazée de tétraol 92 (240 mg, 143 μmol) dans de Féthanol (15 inL). La suspension est saturée avec de l'hydrogène à 50 bars et agitée à TA pendant 24 h. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5 et DCM/MeOH, 95/5) montre la disparition de 92 (Rf= 1 et 0,2, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf = 0,15 et 0, respectivement). Le milieu réactionnel est filtré sur un filtre Acrodisc LC 25 mm, et le filtrat est concentré à l'évaporateur rotatif. Le résidu obtenu est purifié sur colonne C- 18 (H ₂ O/CH ₃ CN, 100/0→7/3) pour conduire à la cible XIV sous forme d'un solide blanc (91 mg, 74%). Rf= 0,15 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5).

RMN ¹ H (D ₂ O) ₅ 55.17 (bs, IH, H-I _B ), 5.14 (d, IH, J _Jj2 = 3.6 Hz, H-IE), 5.06 (d, IH, J _1;2 = 1.2 Hz, H-I _A ), 4.78 (d, IH, J _1;2 = 8.5 Hz, H-1 _D ), 4.73 (bs, IH, H-l _c ), 4.39 (m, IH, H-2 _A ), 4.03 (m, IH, H-2 _B ), 4.00 (m, IH, H-5 _E ), 3.95 (m, IH, H-2 _C ), 3.90 (m, IH, H-3 _B ), 3.89-3.85 (m, 2H ₅ H-3 _A , H-6a _D ), 3.82-3.72 (m, 5H, H-3 _E , H-6a _E , H-6b _E , H-5 _B , H-3 _C ), 3.73-3.65 (m, 5H, H- 2 _D , H-6b _D , H-5 _A , H-2 _E , H-5 _C ), 3.61 (m, IH ₅ H _Pr ), 3.51 (pt, IH ₅ J ₃ , ₄ = 9.6 Hz ₅ H-4 _C ) ₅ 3.47 (m, IH ₅ H _Pr ), 3.45 (m, IH, H-4 _E ), 3.43 (m, IH ₅ H-4 _B ), 3.41-3.3 (m, 3H ₅ H-5 _D , H-4 _D , H-3 _D ), 3.32 (pt, IH ₅ J _3>4 = 9.7 Hz ₅ H-4 _A ), 2.06 (S, 3H ₅ H _NAC ), 1.57 (sex ₅ 2H ₅ CH ₂ ), 1.25 (m, 6H ₅ H-6 _B , H- 6 _C ) ₅ 1.22 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz ₅ H-6 _A ), 0.88 (t, 3H, J= 7.4 Hz ₅ CH ₃ ).

RMN ¹³ C (D ₂ O) ₅ (5174.8 (C _N AC), 102.3 (C-I _D , ¹ JCH = 163.2 Hz) ₅ 101.7 (C-IA, './CH = 170.5 Hz) ₅ 101.0 (C-IB ₅ ¹ JCH = 172.7 Hz), 99.9 (C-I _c , ¹ JCH = 169.8 Hz) ₅ 95.0 (C-1 _E , ¹ J ₀ H = 170.5 Hz) ₅ 78.9 (C-2 _B ), 77.8 (C-3 _C ), 76.3 (C-4 _D ), 74.6 (C-3 _D ), 74.5 (C-2 _A ), 74.2 (C-3 _A ), 73.5 (C-3 _E ), 72.6 (C-4 _B ), 72.5 (C-4 _C ), 71.8 (C-5 _E ), 71.7 (C-2 _E ), 71.2 (C-4 _A ), 70.4 (C-2 _C ), 70.2 (2C, C-5 _D , C-3 _B ), 70.0 (C _Pr ), 69.9 (2C, C-5 _A , C-4 _E ), 69.5 (C-5 _B ), 69.0 (C-5 _C ), 61.1 (C-6 _D ), 60.7 (C-6 _E ), 56.0 (C-2 _D ), 23.0 (C _NAc ), 22.4 (CH ₂ ), 17.2, 17.I ₅ 16.9 (C-6 _A ^* ₅ C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ), 10.3 (CH ₃ ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ C ₃₅ H ₆₂ NO ₂₃ m/z théorique : 864.3713 m/z mesurée : 864.3726

[M+Na] ⁺ C ₃₅ H ₆ ]NO ₂₃ Na m/z théorique : 886.3532 m/z mesurée : 886.3522 Procédé 11 :

> (2,3,4,6-Tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-(4-0-b enzyI-2-0-lévulinoyl- α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→2)-(3,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnop yranosyl)-(l-→3)-2-

O-acétyl-4-O-benzyl-α/β-L-rhamnopyranose 88 :

Chemical Formula: CβyHggOgi

Exact Mass: 1478,6601 Molecular Weight: 1479,6964

Le (l,5-cyclooctadiènebis(méthyldiphénylphosphine)iridium(I) hexafluorophosphate) (25 mg) est dissous dans du THF (90 mL) sous agitation. Le milieu subit 5 cycles dégazage vide/argon, 5 cycles dégazage vide/hyrdogène puis est mis sous hydrogène pendant 15 min. Le milieu subit alors une seconde fois 5 cycles dégazage vide/argon. La solution du glycoside d'allyle 87 (1,9 g, 1,2 mmol) dans du THF (15 mL) est transféré sur la solution de catalyseur activé. Le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 9/1) montre la disparition de 87 (Rf= 0,3) et l'apparition d'un produit un peu moins polaire (Rf= 0,35).

Du diiode (340 mg, 2,5 mmol, 2 éq.) en solution dans un mélange THF/H ₂ O (8/2, 10 mL) est ajouté au milieu réactionnel. Le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 9/1 et DCM/MeOH, 99/1) indique la disparition de l'intermédiaire (Rf= 0,35 et 0,95, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé beaucoup plus polaire (Rf= 0,05 et 0,25, respectivement). Pour stopper la réaction, une solution aqueuse de NaHSO ₃ 10% (2 mL) est ajoutée par fractions au milieu jusqu'à disparition de la coloration noire. Le milieu réactionnel est repris avec du DCM (50 mL) et la phase aqueuse est extraite au DCM (3 x 50 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaCl _sat (3 x 25 mL), avec de l'H ₂ O (3 x 25 mL) puis séchées sur filtre séparateur de phases et concentrées à Pévaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (DCM/MeOH, lOO/O→-99/l) pour obtenir majoritairement l'anomère α de l'hémiacétal 88 sous forme d'une huile jaune (1,7 g, 90%).

Rf= 0,25 (DCM/MeOH, 99/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.42-7.15 (m, 4OH, CH _Ph ), 5.56 (m, IH, H-2 _A ), 5.26 (d, IH, J _1;2 = 3.4 Hz, H-IE), 5.19 (m, 2H, H-2 _C , H- l _c ), 5.04 (d, IH, J= 10.9 Hz, H _Bn ), 5.01 (d, IH, J _1>2 ≈ 1.2 Hz, H- 1 _B ), 4.97 (d, IH, Ji, ₂ = 1.4 Hz, H-I _A ), 4.96-4.81 (m, 14H, H _Bn ), 4.35 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _Bn ), 4.28 (dd, IH, J ₂ ,3 = 3.0 Hz, J ₃ , ₄ = 9.6 Hz, H-3 _A ), 4.17-3.97 (m, 5H, H-3 _C , H-3 _E , H-5 _E , H-5 _C , H-

2 _B ), 3.88 (m, IH, H-5 _A ), 3.86-3.78 (m, 2H ₅ H-3 _B , H-4 _E ), 3.71 (m, IH, H-5 _B ), 3.67-3.63 (m, 2H, H-2 _E , H-6a _E ), 3.56 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.3 Hz, H-4 _A ), 3.55 (m, IH, H-6b _E ), 3.51 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.4 Hz, H-4 _B ), 3.43 (pt, IH, J _3;4 = 9.4 Hz, H-4 _C ), 3.13 (m, IH, OH), 2.53 (m, 4H ₅ 2CH _2Lev ), 2.16 (s, 3H, H _Ac ), 2.10 (s, 3H, CH _3L ev), 1.34 (d, 3H, J _5;6 = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.29 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.1 Hz, H-6 _B ), 1.27 (d, 3H, J _5>6 = 6.2 Hz, H-6 _C ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.7 (C _Lev ), 172.1 (C _Le v), 170.9 (C _Ac ), 139.1-138.8 (C _Ph ), 129.1-127.9 (CHp _h ), 101.6 (C-I _B , ¹ J _CH = 171.8 Hz), 99.5 (C-1 _A , ¹ J ₀ H= 169.9 Hz), 93.2 (C-1 _E , ¹ JcH= 169.6 Hz) ₅ 92.0 (C-Ic, ¹ Jc _H = 170.2 Hz), 82.5 (C-3 _E ), 80.6 (C-4 _B ), 80.2 (C-4 _A ), 80.1 (C-4 _C ), 79.7 (C- 2 _E ) ₅ 79.6 (C-3 _B ), 78.8 (C-3 _C ), 78.1 (C-4 _E ), 76.6, 76.0 (2C, C _Bn ), 75.8 (C-2 _B ), 75.8, 75.7, 75.4, 74.0 (4C ₅ C _Bn ), 73.2 (C-2 _C ), 73.1 (C _Bn ), 72.6 (C-3 _A ), 72.4 (C _Bn ), 70.5 (C-5 _E ), 69.3 (C-5 _B ), 69.0 (C-5A), 68.6 (C-6 _E ), 68.4 (C-2 _A ), 68.1 (C-5 _C ), 38.3 (CH _2Le v), 30.1 (CH _3Lev ), 28.5 (CH _2Le v), 21.5 (C _Ac ), 18.4, 18.3, 18.2 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₈₇ H ₉₈ O ₂₁ Na m/z théorique : 1501.6498 m/z mesurée : 1501.6665

[M+NH ₄ f C ₈₇ H ₉₈ O ₂₁ NH ₄ m/z théorique : 1496.6945 m/z mesurée : 1496.7114

> Trichloroacétimidate (2,3,4,6-tétra-C?-benzyI-α-D-glucopyranosyl)-(l-→3)-(4-0 - benzyl-2-O-lévuIinoyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→2)-(3,4-d i-O-benzyl-α-L- rhamnopyranosyl)-(l→3)-2-0-acétyl-4-0-benzyI-α/β-L-rham nopyranose 86 :

Chemical Formula: 039Hg ₃ CIsNO ₂ I

Exact Mass- 1621,5697 Molecular Weight: 1624,0835

L'hémiacétal 88 (1,5 g, 1,0 mmol) est solubilisé dans du DCE (5 mL) et agité sous argon à - 5°C puis de la DBU (42 μL, 280 μmol, 0,28 éq.) et du trichloroacétonitrile (520 μL, 5,2 mmol, 5 éq.) sont ajoutés. Le milieu réactionnel est agité à cette température pendant 15 min puis il est déposé, sans aucun traitement, sur une colonne de gel de silice (flash

chromatographie, Chex/EtOAc+5% NEt ₃ , 8/2→7/3) pour obtenir le trichloroacétimidate 86 sous forme d'une huile jaune (1,5 g, 88%). Rf= 0,35 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ B. (CDCl ₃ ), £8.73 (s, IH, NH), 7.37-7.14 (m, 4OH, CH _Ph ), 6.24 (d, IH, J _]>2 = 1.9 Hz ₅ H-Ic), 5.56 (dd, IH, Ji _,2 - 2.7 Hz, J ₁₂ = 4.9 Hz, H-2 _A ), 5.32 (dd, IH, Ji, ₂ = 2.2 Hz, J _li2 = 3.1 Hz, H-2 _C ), 5.26 (d, IH ₅ Ji, ₂ = 3.4 Hz ₅ H-1 _E ), 5.04 (d, IH, J= 10.9 Hz, H _8n ), 5.03 (d, IH, J _lj2 = 1.3 Hz, H-I _B ) ₅ 4.99 (d, IH, J _li2 = 1.6 Hz ₅ H-I _A ), 4.97-4.79 (m, 6H ₅ H _Bn ), 4.73-4.49 (m, 8H ₅ H _Bn ), 4.35 (d, IH ₅ J= 12.0 Hz, H _Bn ), 4.25 (dd, 1H, J _2,3 = 3.1 Hz, J ₃ , ₄ = 9.6 Hz ₅ H-3 _A ), 4.19 (dd, IH, J _2;3 = 3.3 Hz ₅ J _3>4 = 9.5 Hz, H-3 _C ), 4.14 (pt, IH, J _3;4 = 9.3 Hz, H-3 _E ), 4.08 (m, IH ₅ H-5 _E ) ₅ 3.98-3.88 (m, 3H ₅ H-2 _B5 H-5 _C , H-5 _A ), 3.86-3.81 (m, 2H, H-3 _B , H-4 _E ), 3.73 (m, IH, H-5 _B ), 3.67-3.64 (m, 2H, H-2 _E , H-6a _E ), 3.58 (m, IH ₅ H-6b _E ) ₅ 3.57 (pt, IH !; J _3;4 = 9.6 Hz ₅ H-4 _A ), 3.54 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.5 Hz ₅ H-4 _C ), 3.52 (pt, IH ₅ J _3,4 = 9.4 Hz ₅ H-4 _B ), 2.55 (m, 4H ₅ 2CH _2Lev ), 2.19 (s, 3H, H _Ac ) ₅ 2.10 (s, 3H ₅ CH _3Lev ), 1-34 (d, 3H, J _5>6 = 6.3 Hz ₅ H-6 _A ), 1.31 (d, 3H, Js ₁₆ = 6.1 Hz ₅ H- 6 _B ) ₅ 1.28 (d, 3H ₅ J _5;6 = 6.0 Hz ₅ H-6 _C ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.7 (C _Lev ), 172.2 (C _Lev ), 170.3 (C _Ac ) ₅ 160.5 (C=NH), 139.1-138.8 (C _Ph ), 129.1-127.9 (CH _Ph ), 101.5 (C-1 _B , ¹ Jc _H = 178.7 Hz) ₅ 99.8 (C-I _A , ¹ JCH = 174.2 Hz) ₅ 94.6 (C-Ic, ¹ JcH = 178.5 Hz), 93.3 (C-1 _E , ¹ JcH = 170.0 Hz) ₅ 93.3 (CCl ₃ ), 82.5 (C-3 _E ), 80.6 (C-4 _C ), 80.1 (C-4 _A ), 79.8 (C-4 _B ), 79.6 (C-2 _E ), 79.4 (C-3 _B ), 78.2 (C-3 _C ), 78.1 (C-4 _E ), 76.7 (C _Bn ), 76.4 (C-2 _B ), 76.0, 75.9, 75.8, 75.4, 73.8, 73.2 (6C, C _Bn ), 72.6 (C-3 _A ) ₅ 72.6 (C _Bn ), 71.3 (C-2 _C ), 71.0 (C-5 _C ), 70.6 (C-5 _E ), 69.5 (C-5 _B ), 68.9 (C-5 _A ) ₅ 68.5 (C-6 _E ) ₅ 68.4 (C-2 _A ), 38.3 (CH _2Le v), 30.1 (CH _3L ev), 28.5 (CH _2Lev ), 21.4 (C _Ac ) ₅ 18.4, 18.3, 18.2 (C-6 _A \ C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ).

> AUyI (2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-(4-0-b enzyl-2-0- lévulinoyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→2)-(3,4-di-0-benzyl- α-L- rhamnopyranosyl)-(l→^3)-(2-0-acétyl-4-0-benzyl-α-L-rhamn opyranosyl)-(l—>3)- 2-acétamido-2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-β-D-glucopyran oside 93 :

Chemical Formula C101H119NO26

Exact Mass 1761,8020 Molecular Weight 1763,0167

Du TfOH (45,0 μL, 515 μmol, 0,9 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 19 (432 mg, 1,4 mmol, 2,5 éq.) et de donneur 86 (926 mg, 571 μmol, 1 éq.) dans du Toi (25 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (3,2 g), agitée sous argon à 0°C. Le milieu réactionnel est alors chauffé à 75 °C. Après 1 h à cette température, le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 7/3) indique l'apparition d'un nouveau composé (Rf = 0,25). La réaction est stoppée par addition de triéthylamine (0,2 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 7/3-→6/4) pour obtenir le glycoside d'allyle 93 sous forme d'un solide blanc (780 mg, 78%). Rf= 0,45 (Tol/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.42-7.10 (m, 4OH, CH _Ph ), 5.89 (m, 2H, NH, CH=), 5.56 (dd, IH, Ji, ₂ = 2.2 Hz, H-2 _A ), 5.30 (m, IH, Jtπm _s ≈ 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.25 (d, IH, Ji, ₂ = 3.4 Hz, H-1 _E ), 5.21 (m, IH, J _CIS = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.15 (d, IH, J _1>2 = 8.3 Hz, H-I _n ), 5.07 (dd, IH, J _1;2 = 1.6 Hz, Ji, ₂ = 3.2 Hz ₅ H-2c), 5.02 (d, IH, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.98 (d, IH, Ji, ₂ = 1.5 Hz, H-I _A ), 4.96 (d, IH, J _1;2 = 1.3 Hz, H-IB), 4.97-4.86 (m, 4H, H _Bn ), 4.80 (bs, IH, H-I _c ), 4.78 (d, IH, J = 11.9 Hz, H _Bn ), 4.73 (d, IH, J= 11.5 Hz, H _Bn ), 4.67 (d, IH, J= 13.4 Hz, H _Bn ), 4.62 (d, IH, J= 12.3 Hz, H _Bn ), 4.61-4.53 (m, 6H, H _Bn ), 4.50 (d, IH, J = 11.0 Hz, H _Bn ), 4.39 (pt, IH, J _3>4 = 9.2 Hz, H- 3 _D ), 4.31 (m, IH, H _A n), 4.26 (dd, IH, J _2,3 = 3.0 Hz, J _3>4 = 9.6 Hz, H-3 _A ), 4.15-4.06 (m, 3H, H- 3 _E , HAII, H-5 _E ),4.04-3.94 (m, 4H, H-5 _C , H-3 _C , H-2 _B , H-Oa ₀ ), 3.88 (dq, IH, J ₄ , ₅ = 9.5 Hz, H- 5A), 3.84-3.77 (m, 3H, H-3 _B , H-4 _E , H-Ob ₀ ), 3.71-3.62 (m, 3H, H-5 _B , H-6a _E , H-2 _E ), 3.60-3.52 (m, 3H, H-6b _E , H-4 _A , H-4 _D ), 3.50 (pt, IH, J _3>4 = 9.4 Hz, H-4 _B ), 3.40 (m, IH, H-5 ₀ ), 3.38 (pt, IH, J _3î4 = 9.6 Hz, H-4c), 3.49 (m, IH, J _2,NH = 8.0 Hz, H-2 _D ), 2.53 (m, 4H, 2CH _2Lev ), 2.11 (s,

3H, H _NAc ), 2.09 (s, 3H, CH _3L ev), 2.04 (s, 3H, H _Ac ), 1.50 (s, 3H, Ha*), 1.42 (s, 3H, H _jPr ), 1.35 (d, 3H, J _5i6 = 6.2 Hz, H-6A), 1.26 (d, 3H, J _5;6 = 6.2 Hz, H-6 _B ), 1.20 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _C ). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.1 (C _Lev ), 171.7 (C _Lev ), 171.3 (C _Ac ), 170.5 (C _NAc ), 138.8-137.6 (C _Ph ), 133.8 (CH=), 129.1-127.4 (CH _Ph ), 117.5 (=CH ₂ ), 101.2 (C-1 _B , ¹ JCH = 169.4 Hz), 99.4 (C _iPr ), 99.0 (C-1 _A , ¹ JcH= 173.7 Hz), 98.9 (C-I ₀ , ¹ J _0H = 162.7 Hz), 97.6 (C-l _c , ¹ JcH= 171.0 Hz) ₅ 92.8 (C-IE, ¹ JCH = 167.6 Hz), 82.1 (C-3 _E ), 80.2 (C-4 _B ), 79.8 (C-4 _A ), 79.6 (C-4 _C ), 79.5 (C-2 _E ), 79.4 (2C, C-3 _B ^* , C-3 _C *), 77.8 (C-4 _E ), 76.3 (C _Bn ), 76.1 (C-3 _D ), 75.6, 75.5, 75.3 (3C, C _8n ), 75.2 (C- 2 _B ), 75.1, 75.0, 73.4 (3C, C _8n ), 73.1 (C-4 _D ), 72.8 (C-2 _C ), 72.8 (C _Bn ), 72.2 (C-3 _A ), 72.0 (C _8n ), 70.5 (C _A II), 70.3 (C-5 _E ), 69.0 (C-5 _B ), 68.6 (C-5 _A ), 68.3 (C-6 _E ), 68.0 (C-2 _A ), 67.6 (C-5 _C ), 67.0 (C-5 _D ), 62.3 (C-6 _D ), 59.6 (C-2 _D ), 37.9 (CH _2Lev ), 29.7 (CH _3Lev ), 29.1 (C _iPr ), 28.1 (CH _2Lev ), 23.5 (CAC), 21.2 (C _NAc ), 19.3 (C _iPr ), 18.0, 17.9, 17.8 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C _1O iH ₁₁₉ NO ₂₆ Na m/z théorique : 1784.7917 m/z mesurée : 1784.7917

[M+H] ⁺ C ₁₀₁ H ₁₁₉ NO ₂₆ m/z théorique : 1762.8098 m/z mesurée : 1762.8038

[M+NH ₄ ] ⁺ C ₁₀₁ Hn ₉ NO ₂₆ NH ₄ m/z théorique : 1779.8364 m/z mesurée : 1779.8289

> Allyl (2,3,4,6-tétra-O-benzyI-α-D-gIucopyranosyl)-(l→3)-(4-6&g t;-benzyl-α-L- rhamnopyranosyl)-(l→2)-(3,4-di~0-benzyl-α-L-rhamnopyranos yl)-(l→3)-(2-0- acétyl-4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→3)-2-acétami do-2-désoxy-4,6-0- isopropylidène-β-D-glucopyranoside 94 :

Chemical Formula CgeHn3Nθ24

Exact Mass 1663,7653 Molecular Weight 1664,9167

^

Le glycoside d'allyle 93 (720 mg, 409 μmol) est dissous dans un mélange pyridine/acide acétique (3/2, 20 mL). De l'hydrazine monohydraté (200 μL, 4,0 mmol, 10 éq.) est ajouté goutte à goutte au milieu réactionnel. Après 30 min d'agitation à O ⁰ C, le milieu réactionnel est repris à l'eau froide (20 mL) et la phase aqueuse est extraite rapidement au DCM (3 x 100 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaCl _sa t (3 x 50 mL), filtrées sur filtre séparateur de phase et concentrées à l'évaporateur rotatif. L'huile obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 9/1— »75/25) pour obtenir l'alcool 94 sous forme d'un solide blanc (580 mg, 85%). Rf= 0,45 (Tol/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.44-7.18 (m, 4OH, CH _Ph ), 5.96 (d, IH, J _NH , ₂ = 6.8 Hz, NH), 5.91 (m, IH, CH=), 5.32 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.24 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.20 (bs, IH, H-U), 5.16 (d, IH, J _1>2 = 8.4 Hz, H-1 _D ), 5.12 (dd, IH, J _1;2 = 1.6 Hz, J _U2 = 3.2 Hz, H-2 _C ), 5.03 (d, IH, J _li2 = 1.3 Hz, H-1 _B ), 5.02-4.95 (d, 3H, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.95 (d, IH, J _u = 3.9 Hz, H-IE), 4.91-4.86 (m, 3H, H _Bn ), 4.86 (bs, IH, H-l _c ), 4.84-4.81 (m, 2H, H _Bn ), 4.72-4.70 (m, 3H, H _Bn ), 4.63-4.58 (m, 4H, H _Bn ), 4.53 (d, IH, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.41 (pt, IH, J _3j4 = 9.3 Hz, H-3 _D ), 4.34 (m, IH, H _A n), 4.15-3.96 (m, 9H, H _A π, H-2 _B , H-3 _E , H-2 _A , H-3 _A , H-5 _C , H-3 _C , H-5 _E , H-6a _D ), 3.91 (dq, IH, J _4,5 = 9.6 Hz, H-5 _A ), 3.88 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 2.7 Hz, J ₃ , ₄ = 9.4 Hz, H-3 _B ), 3.83 (m, IH, H-6b _D ), 3.80 (pt, IH, J _3,4 = 10.1 Hz, H-4 _E ), 3.72 (dq, IH, J _4;5 = 9.4 Hz, H-5 _B ), 3.66 (dd, IH, J _2;3 = 3.6 Hz, J _3j4 = 9.6 Hz, H-2 _E ), 3.62-3.56 (m, 2H, H-4 _D , H-4 _A ), 3.54-3.40 (m, 5H, H-6a _E , H-4 _B , H-6b _E , H-4 _C , H-5 _D ) 3.16 (m, IH, J _2,NH = 8.0 Hz, H-2 _D ), 2.16 (s, 3H, H _Ac ), 2.09 (s, 3H, H _NAc ), 1-54 (s, 3H, H _iPr ), 1.46 (s, 3H, H _jPr ), 1.38 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.33 (d, 3H, J _5;6 = 6.5 Hz, H-6 _B ), 1.26 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _C ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 171.3 (C _NAc ), 170.5 (C _Ac ), 138.7-137.6 (C _Ph ), 133.9 (CH=), 129.1-127.7 (CH _Ph ), 117.6 (=CH ₂ ), 101.6 (C-1 _B , ¹ Jc _H = 171.0 Hz), 100.8 (C-1 _A , ¹ JcH = 175.0 Hz) ₅ 99.4 (C _iPr ), 99.0 (C-I _D , ¹ Jc _H = 160.7 Hz), 97.6 (C-l _c , ¹ Jc _H = 170.8 Hz), 94.0 (C-1 _E , ¹ J ₀ H = 166.2 Hz), 82.4 (C-3 _E ), 80.4 (C-4 _B ), 79.7 (C-4 _C , C-3 _B ), 79.5 (C-3 _C ), 79.3 (C-4 _A ), 79.0 (C-2 _E ), 77.8 (C-4 _E ), 76.5 (C-3 _A ), 76.2 (C-3 _D ), 75.7, 75.6, 75.4, 75.3, 75.0 (5C, C _8n ), 74.9 (C-2 _B ), 74.5, 73.5 (2C, C _Bn ), 73.1 (C-4 _D ), 72.9 (C-2 _C ), 72.3 (C _Bn ), 70.8 (C-5 _E ), 70.5 (C _A1I ), 69.0 (C-5 _B ), 68.0 (C- 6 _E ), 67.9 (C-5 _A ), 67.6 (C-5 _C ), 67.4 (C-2 _A ), 67.1 (C-5 _D ), 62.3 (C-6 _D ), 59.7 (C-2 _D ), 29.2 (C _iPr ), 23.6 (CNAC), 21.2 (C _Ac ), 19.3 (C _iPr ), 18.0, 17.9, 17.8 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₉₆ H ₁₁₃ NO ₂₄ Na m/z théorique : 1686.7550 m/z mesurée : 1686.7488 [M+H] ⁺ C ₉₆ H ₁₁₃ NO ₂₄ m/z théorique : 1664.7731

_1?5

m/z mesurée : 1664.7709 [M+NH ₄ ] ⁺ C ₉₆ Hi _I3 NO ₂₄ NH ₄ m/z théorique : 1681.7997 m/z mesurée : 1681.7993

> Allyl (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-(4-O-b enzyl-α-L- rhamnopyranosyl)-(l→^2)-(3,4-di-O-benzyI-α-L-rhamnopyrano syl)-(l— >3)-(2-O- acétyl-4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l— >3)-2-acétamido-2-désoxy-β-D- glucopyranoside 95 :

Chemical Formula: C93H-I09NO24

Exact Mass: 1623,7340 Molecular Weight: 1624,8529

Une solution aqueuse de TFA 50% (4 mL) est additionnée lentement à une solution d'alcool 94 (400 mg, 240 μmol) dans du DCM (10 mL) à 0 ⁰ C. Le milieu réactionnel est agité pendant 2 h à cette température, temps au bout duquel le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 4/6) indique la disparition totale de 94 (Rf = 0,6) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,2). Le milieu réactionnel est concentré par coévaporation avec du Toi (3 x 10 mL). L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (DCM/MeOH, 98/2→9/l) pour obtenir le triol 95 solide blanc correspondant au tétrasaccharide attendu (360 mg, 92%). Rf= 0,55 (DCM/MeOH, 95/5).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.42-7.13 (m, 4OH, CH _Ph ), 6.09 (m, IH, NH), 5.91 (m, IH, CH=), 5.27 (m, IH, =CH ₂ ), 5.22 (bs, IH, H-I _A ), 5.18 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.16 (m, 2H, H-l _c , H-2 _C ), 5.11 (d, IH, J ₁₎₂ = 8.3 Hz, H-1 _D ), 5.10-4.88 (m, 8H, H-1 _B , H-1 _E , H _Bn ), 4.83-4.49 (m, 9H, H _8n ), 4.35-4.29 (m, 2H, H _A ιi, H _Bn ), 4.14-3.96 (m, 9H, H-3 _E , H _A11 , H-2 _A , H-5 _C , H-3 _A , H-3 _C , H-5 _E , H-5 _A ), 3.87-3.73 (m, 4H, H-3 _B , H-6a _D , H-6b _D , H-4 _E ) ₅ 3.68 (m, IH, H-5 _B ), 3.65 (dd, IH, J _2j3 = 3.6 Hz, J ₃ , ₄ = 9.6 Hz, H-2 _E ), 3.59 (d ₅ IH, J ₄ , ₅ = 9.3 Hz, H-4 _A ), 3.54-3.36 (m, 6H, H-6a _E , H-5 _D , H-4B, H-4 _C , H-6b _E , H-4 _D ), 3.16 (m, IH, H-2 _D ), 2.14 (s, 3H, H _Ac ), 2.10 (s, 3H, H _NAc ), 1.25 (m, 9H, H-6 _A , H-6 _B , H-6 _C ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £170.5 (2C, C _NAc , C _Ac ), 138.6-137.5 (C _Ph ), 133.9 (CH=), 128.6-127.5 (CHph), 117.7 (=CH ₂ ), 101.3 (C-1 _B ), 100.8 (C-I _A , C-l _c , ¹ JcH = 168.2 Hz), 98.4 (C-I ₀ , ¹ JcH = 169.0 Hz), 94.0 (C- 1 _E , ¹ JCH = 166.3 Hz), 82.4 (C-3 _E ), 80.2 (C-4 _C ), 79.4-79.1 (C-4 _B \ C-3 _B ^* , C- 3 _C ^* , C-4 _A ^* ), 79.0 (C-2 _E ), 77.8 (C-4 _E ), 76.5 (C-3 _A ), 75.9, 75.6, 75.4 (3C, C _Bn ), 75.1 (C-4 _D ), 74.9, 74.5, 74.5, 73.5, 73.5 (5C, C _Bn ), 72.2 (C-2 _C ), 70.8 (C-5 _E ), 70.5 (C _A1 ,), 70.3 (C-5 _D ), 69.0 (C-5 _B ), 68.0 (C-5 _A ), 67.9 (C-6 _E ), 67.4 (C-5 _C , C-2 _A ), 62.3 (C-6 _D ), 59.7 (C-2 _D ), 23.2 (C _NAc ), 21.1 (CAC), 18.3, 17.9, 17.7 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _C ^" ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₉₃ H ₁₀₉ NO ₂₄ Na m/z théorique : 1646.7238 m/z mesurée : 1646.7377

[M+H] ⁺ C ₉₃ H ₁₀₉ NO ₂₄ m/z théorique : 1624.7418 m/z mesurée : 1624.7565

[M+NH ₄ ] ⁺ C ₉₃ H ₁₀₉ NO ₂₄ NH ₄ m/z théorique : 1641.7683 m/z mesurée : 1641.7848

> Propyl α-D-glucopyranosyl-(l→3)-α-L-rhamnopyranosyl-(l→2)-α- L~ rhamnopyranosyl-(l→3)-(2-0-acétyl-α-L-rhamnopyranosyl)-( l→3)-2- acétamido-2-désoxy-β-D-glucopyranoside XV :

Chemical Formula C37H53NO24

Exact Mass 905,3740 Molecular Weight 905,8884

Du Pd-C 10% (200 mg) est ajouté à une solution dégazée de triol 95 (230 mg, 142 μmol) dans de l'éthanol (15 mL). La suspension est saturée avec de l'hydrogène et agitée à TA pendant 2 j. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5 et DCM/MeOH, 95/5) montre la disparition de 95 (Rf = 1 et 0,55, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf = 0,35 et 0, respectivement). Le milieu réactionnel est filtré sur un filtre Acrodisc LC 25 mm, et le filtrat est concentré à l'évaporateur rotatif. Le résidu obtenu est purifié sur colonne C-18

(H ₂ O/CH ₃ CN, 100/0→7/3) pour conduire à la cible XV sous forme d'un solide blanc (100 mg, 77%).

Rf= 0,35 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5).

RMN ¹ H (D ₂ O), £5.03 (bs, IH, H-1 _B ), 5.00 (d, IH ₅ J _1;2 = 3.7 Hz, H-IE), 4.90 (m, 2H ₅ H-I _A ,

H-2 _C ), 4.76 (bs, IH ₅ H-I _c ), 4.40 (d, IH ₅ J _1;2 = 8.6 Hz ₅ H-I _n ), 4.17 (m, IH, H-2 _A ), 3.99 (m,

IH, J _5>6 = 6.3 Hz ₅ J _4j5 = 9.8 Hz ₅ H-5 _C ), 3.92 (dd, IH ₅ J _2;3 ≈ 5.2 Hz, H-2 _B ), 3.88-3.80 (m, 3H,

H-5 _E , H-3 _C , H-Oa ₀ ), 3.76-3.61 (m, 9H ₅ H-3 _A , H _Pr , H-2 _D , H-6a _E , H-6b _E , H-3 _E , H-5 _A , H-3 _B , H-

6b _D ), 3.51-3.40 (m, 7H, H-4 _C , H-4 _A , H-2 _E , H-4 _D , H _Pr , H-3 _D , H-5 _B ), 3.38-3.31 (m, 3H, H-4 _E ,

H-4 _B , H-5 _D ), 2.07 (s, 3H ₅ H _Ac ), 1.94 (s, 3H ₅ H _NAo ), 1.49 (sex, 2H, J= 7.1 Hz, CH ₂ ), 1.19-1.14

(m, 9H, H-6 _A , H-6 _B , H-6 _C ) ₅ 0.76 (t, 3H ₅ J= 7.4 Hz, CH ₃ ).

RMN ¹³ C (D ₂ O) ₅ £174.4 (C _NAc ) ₅ 173.0 (C _Ao ) ₅ 101.9 (C-1 _A , ¹ Jc _H = 175.6 Hz), 101.0 (C-IB ₅

¹ JCH = 172.4 Hz) ₅ 100.6 (C-I ₀ , ^ = 162.7 Hz) ₅ 98.5 (C-I _c , ¹ J _C H = 173.4 Hz) ₅ 95.3 (C-IE,

¹ J _CH = 170.3 Hz) ₅ 82.4 (C-3 _D ), 78.0 (C-2 _B ), 76.2 (C-3 _C ), 76.0 (C-5 _D ), 75.2 (C-3 _A ), 72.9 (C-3 _E ),

72.2 (Cpr), 72.2 (C-2 _C ), 71.8 (C-4 _B ), 71.6 (C-5 _E ), 71.6 (C-4 _C ) ₅ 71.4 (C-4 _A ) ₅ 70.2 (C-4 _D ), 69.9 (C-3 _B ), 69.4 (C-2 _E ), 69.3 (C-4 _E ), 69.3 (C-5 _A ), 68.8 (C-5 _C ), 68.3 (C-5 _B ), 66.6 (C-2 _A ), 60.7 (C- 6 _D ) ₅ 60.2 (C-6E), 55.2 (C-2 _D ), 22.2 (C _NAc ), 22.1 (CH ₂ ), 20.2 (C _Ac ), 16.7 (C-6 _A ), 16.5 (C-6 _B ),

16.3 (C-6 _C ), 9.6 (CH ₃ ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ C ₃₇ H ₆₃ NO ₂₄ m/z théorique : 906.3818 m/z mesurée : 906.3821

[M+Na] ⁺ C ₃₇ H ₆₃ NO ₂₄ Na m/z théorique : 928.3638 m/z mesurée : 928.3635

[M+K] ⁺ C ₃₇ H ₆₃ NO ₂₄ K m/z théorique : 944.3377 m/z mesurée : 944.3279 Procédé 12 :

> Allyl (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l-→3)-(4-O- benzyl-α-L- rhamnopyranosyl)-(l— >2)-(3,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-(4-0- benzyI-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-2-acétamido-2-désoxy- 4,6-0- isopropylidène-β-D-glucopyranoside 96 :

Chemical Formula: Cg4HmNθ ₂₃

Exact Mass: 1621,7547 MolecularWeight: 1622,8800

Après addition de NaOMe 0,5 M (830 μL, 414 μmol, 1 éq.) au glycoside d'allyle 93 (729 mg, 414 μmol) en solution dans du MeOH (20 mL). Le milieu réactionnel est porté à reflux et agité pendant 3 h, temps au bout duquel le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 1/1), indique la disparition de 93 (Rf= 0,5) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,2). Après retour à TA, le milieu réactionnel est neutralisé par addition de résine échangeuse d'ion DOWEX (H ⁺ ), puis filtré sur fritte. La résine est lavée avec un mélange DCM/MeOH et les solvants sont évaporés. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, l/l→4/6) pour conduire au diol 96 sous forme d'un solide blanc (631 mg, 94%). Rf= 0,2 (Tol/EtOAc, 1/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.41-7.16 (m, 4OH, CH _Ph ), 5.90 (m, IH, CH=), 5.81 (d, IH, J _NH , ₂ = 7.9 Hz, NH), 5.30 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz ₅ =CH ₂ ), 5.22 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.17 (bs, IH, H-IB), 5.07 (bs, IH, H-I _A ), 5.02-4.97 (m, 2H, H _Bn ), 4.94 (d, IH, J _1>2 = 4.0 Hz, H-1 _E ), 4.90-4.86 (m, 4H, 2H _Bn , H-I ₀ , H-l _c ), 4.80-4.66 (d, 8H, H _3n ), 4.59-4.51 (m, 3H, H _3n ), 4.38- 4.32 (m, 2H, H _A π, H _3n ), 4.21 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.4 Hz, H-3 _D ), 4.12-4.05 (m, 6H, H _A π, H-2 _B , H-3 _E , H-2 _A , H-3 _A , H-5 _C ), 3.99-3.84 (m, 7H, H-2 _C , H-5 _E , H-6a _D , H-3 _B ^* , H-3 _C ^* , H-5 _A , H-5 _B ), 3.83 (m, IH, H-6b _D ), 3.78 (pt, IH, J _3,4 = 9.6 Hz, H-4 _E ), 3.66-3.61 (m, 2H, H-2 _E , H-4 _D ), 3.57-3.52 (m, 2H, H-4 _A , H-4 _B ), 3.52-3.49 (m, 2H, H-2 _D , H-6a _E ), 3.43-3.35 (m, 3H, H-6b _E , H-4 _C , H-5 _D ), 2.02 (s, 3H, HNA _C ), 1.53 (s, 3H, H _iPr ), 1.43 (s, 3H, H _iPr ), 1.41, 1.28 (m, 6H, H-6 _A ^* , H-6 _B ^* ), 1-23 (d, 3H, J _5j6 = 6.2 Hz, H-6 _c ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 170.4 (C _NAc ), 138.6-137.6 (C _Ph ), 133.8 (CH=), 129.1-127.5 (CH _Ph ), 117.6 C=CH ₂ ), 101.0 (C-1 _A , ¹ J _0H = 168.4 Hz), 100.9 CC-I ₃ , ¹ J _0H = 172.3 Hz), 99.8 (C-l _c , ¹ JcH = 170.6 Hz), 99.6 (C-I ₀ , ¹ J _0H = 160.5 Hz), 99.5 (C _iPr ), 94.0 (C- 1 _E , ¹ J _0H = 167.5. Hz), 82.4 (C-

3 _E ), 80.4 (IC, C-4 _A ^" , C-4 _B *), 80.3 (IC, C-3 _B ^* , C-3 _C ^* ), 79.7 (C-4 _C ), 79.5 (IC, C-3 _B ^* , C-3 _C ^* ),

79.3 (IC, C-4 _A ^" » C-4 _B ^* ), 79.0 (C-2 _E ), 77.8 (C-4 _E ), 76.5 (C-3 _A ), 76.0 (C-3 _D ), 75.6 (3C, C _Bn ),

75.4 (C-2 _A ), 75.0, 74.9, 74.4, 73.5 (4C ₅ C _Bn ), 73.0 (C-4 _D ), 72.5 (C _Bn ), 71.2 (C-2 _C ), 70.7 (C- 5 _E ), 70.0 (C _A I _I ), 69.1 (IC, C-5 _A ^* , C-5 _B ^* ), 68.0 (C-6 _E ), 67.9 (IC, C-5 _A ^* , C-5 _B ^* ), 67.7 (C-5 _C ), 67.4 (C-2 _B ), 67.3 (C-5 _D ), 62.3 (C-6 _D ), 58.2 (C-2 _D ), 29.1 (C _lPr ), 23.5 (C _NAc ), 19.2 (C _lPr ), 18.0, 17.8 (3C, C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [MH-H] ⁺ C ₉₄ H _{1 ! J} NO ₂₃ m/z théorique : 1622.7626 m/z mesurée : 1622.7649

[M+Na] ⁺ C ₉₄ H _{1 ! t} NO ₂₃ Na m/z théorique : 1644.7445 m/z mesurée : 1644.7562

> AHyI (2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-(4-0-b enzyl-α-L- rhamnopyranosyl)-(l-→2)-(3,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnopyrano syl)-(l→^3)-(4-0- benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-2-acétamido-2-désoxy- β-D- glucopyranoside 97 :

Chemical Formula Cg-|H- _j o7Nθ23

Exact Mass 1581,7234 MoIecular Weight 1582,8162

Une solution aqueuse de TFA 50% (4 mL) est additionnée lentement à une solution de diol 96 (515 mg, 318 μmol) dans du DCM (10 mL) à 0°C. Le milieu réactionnel est agité pendant 2 h à cette température, temps au bout duquel le suivi par CCM (DCM/MeOH, 95/5) indique la disparition totale de 96 (Rf = 0,35) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,2). Le milieu réactionnel est concentré par coévaporation avec du Toi (3 x 10 mL). L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 3/7-→l/9) pour obtenir au tétraol 97 sous forme d'un solide blanc (330 mg, 66%). Rf= 0,2 (DCM/MEOH, 95/5).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.42-7.13 (m, 4OH, CH _Ph ), 5.90 (m, IH, CH=), 5.78 (d, IH, J _NH ,2 = 7.2 Hz, NH), 5.30 (m, IH, J _trans = 17.3 Hz, -CH ₂ ), 5.21 (m, IH ₅ J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.17 (bs, IH, H-I _B ), 5.01-4.94 (m, 4H, H-1 _D , H-I _A , 2H _Bn ), 4.92 (d, IH, J _lj2 = 3.7 Hz, H-1 _E ), 4.89-4.86 (m, 2H, H _Bn ), 4.83 (m, IH, J _1]2 = 2.4 Hz, H-I _c ), 4.78-4.65 (d, 7H, H _8n ), 4.57-4.49 (m, 3H, H _Bn ), 4.37-4.20 (m, 4H, H _A u, 2H _Bn , H-3 _D ), 4.13 (m, IH ₅ H _A π), 4.09-4.02 (m, 4H, H-3 _E , H-2 _B , H-2 _A , H-3 _A ), 4.00-3.91 (m, 5H, H-2 _C , H-5 _E , H-5 _B , H-3 _B , H-6a _D ), 3.88-3.82 (m, 4H, H-3 _C , H- 5c, H-5 _A , H-6b _D ), 3.77 (pt, IH, J _3>4 = 9.7 Hz, H-4 _E ) ₅ 3.63 (dd, IH, J _2j3 = 9.6 Hz, H-2 _E ), 3.56- 3.49 (m, 3H, H-4 _A , H-6a _E , H-4 _B ), 3.47-3.37 (m, 4H, H-4 _D , H-5 _D , H-4 _C , H-6b _E ), 3.15 (m, IH ₅ H-2 _D ), 1.97 (s, 3H ₅ H _NAc ), 1.34-1.28 (m, 9H, H-6 _A ^* , H-6 _B ^* , H-6 _C ^* ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), 5170.6 (C _NAc ), 138.6-137.5 (C _Ph ), 133.9 (CH=), 128.6-127.5 (CH _Ph ), 117.5 (=CH ₂ ), 101.5 (C-Ic ₅ ¹ J _CH = 171.3 Hz), 100.9 (C-1 _A , ¹ JcH = 168.8 Hz) ₅ 100.9 (C-1 _B , ¹ J _C H = 168.8 Hz) ₅ 98.7 (C-1 _D , ¹ J _0H = 163.1 Hz), 94.0 (C-1 _E , ¹ J ₀ H = 165.5. Hz), 84.1 (C-3 _D ), 82.4 (C-3 _E ), 80.2 (C-4 _B ), 79.8 (C-3 _B ), 79.4 (C-3 _C ), 79.3 (C-4 _A ), 79.2 (C-4 _C ), 79.0 (C-2 _E ), 77.8 (C-4 _E ), 76.5 (C-3 _A ), 75.8, 75.6, 75.5 (3C, C _Bn ), 75.1 (C-4 _D ), 75.0 (C-2 _A ), 75.0, 74.5, 73.4, 72.6 (5C, C _Bn ), 71.1 (C-5 _D ), 70.8 (2C, C-2 _C , C-5 _E ) ₅ 70.3 (C _A π), 69.3 (C-5 _B ) ₅ 69.0 (C-5 _C ), 68.0 (C-6 _E ), 67.9 (C-5 _A ), 67.3 (C-2 _B ), 62.8 (C-6 _D ), 57.3 (C-2 _D ), 23.6 (C _NAc ), 18.0, 17.9, 17.8 (C- 6 _A ^* ₅ C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ C ₉₁ H ₁₀₇ NO ₂₃ m/z théorique : 1582.7312 m/z mesurée : 1582.7300

[M+Na] ⁺ C ₉₁ H ₁₀₇ NO ₂₃ Na m/z théorique : 1604.7131 m/z mesurée : 1604.7180 > Propyl α-D-glucopyranosyl-(l→3)-α-L-rhamnopyranosyl-(l→2)-α- L- rhamnopyranosyl-(l→3)-α-L-rhamnopyranosyl-(l→3)-2-acét amido-2-désoxy-β-

D-glucopyranoside- XVI :

Molecular Weight: 863,8517

Du Pd-C 10% (200 mg) est ajouté à une solution dégazée de tétraol 97 (260 mg, 164 μmol) dans de l'éthanol (15 mL). La suspension est saturée avec de l'hydrogène et agitée à TA pendant 2 j. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5 et DCM/MeOH, 95/5) montre la disparition de 97 (Rf = 1 et 0,2, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf = 0,25 et 0, respectivement). Le milieu réactionnel est filtré sur un filtre Acrodisc LC 25 mm, et le filtrat est concentré à l'évaporateur rotatif. Le résidu obtenu est purifié sur colonne C-18 (H ₂ O/CH ₃ CN, 100/0→7/3) pour à la cible XVI sous forme d'un solide blanc (99 mg, 70%).

Rf= 0,25 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5).

RMN ¹ H (D ₂ O), 55.15 (bs, IH, H-1 _B ), 5.08 (d, IH, J _1>2 = 3.8 Hz, H-I _E ), 4.98 (d, IH, J _lj2 = 1.5 Hz, H-U), 4.79 (d, IH, J _];2 ≈ 1.2 Hz, H-l _c ), 4.50 (d, IH, J _1>2 = 8.6 Hz, H-I ₀ ), 4.17 (dd, IH ₅ J _2>3 = 2.6 Hz, H-2 _A ), 4.03 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 3.0 Hz, H-2 _B ), 3.99 (m, IH, J ₄ , ₅ = 9.8 Hz, H-5 _C ), 3.94 (m, IH, H-5 _E ), 3.92-3.87 (m, 2H, H-3 _B , H-6a _D ), 3.35-3.68 (m, 1OH, H-3 _A , H-2 _C , H _Pr , H- 2 _D , H-6a _E , H-6b _E , H-3 _E , H-3 _C , H-6b _D , H-5 _A , H-5 _B ), 3.58-3.40 (m, 9H, H-3 _D , H-4 _A , H-2 _E , H _Pr , H-4 _C , H-4 _D , H-4 _B , H-4 _E , H-5 _D ), 2.01 (s, 3H, H _NAc ), 1.51 (sex, 2H, J= 7.2 Hz, CH ₂ ), 1.29-1.24 (m, 6H, H-6 _A ^* , H-6 _B ^* ) ₅ 1.20 (d, 3H, J _5;6 = 6.2 Hz, H-6 _C ), 0.83 (t, 3H, J= 7.4 Hz, CH ₃ ). RMN ¹³ C (D ₂ O), £ 174.1 (C _NAc ), 102.0 (C-1 _A , ¹ Jc _H = 171.5 Hz), 101.3 (C-l _c , ¹ JCH = 173.6 Hz), 100.8 (C-I _B , ¹ Jc _H = 177.8 Hz) ₅ 100.6 (C-1 _D , ¹ Jc _H = 156.2 Hz), 95.4 (C-1 _E , ¹ JcH = 169.4 Hz) ₅ 81.7 (C-3 _D ), 78.3 (C-2 _B ), 77.3 (C-3 _C ), 76.0 (C-5 _D ), 75.3 (C-3 _A ), 73.0 (C-3 _E ), 72.3 (C _Pr ), 72.2 (C-4 _B ) ₅ 71.7 (2C ₅ C-4 _C , C-5 _E ), 71.4 (C-4 _A ), 70.6 (C-2 _C ), 70.3 (C-2 _E ), 69.9 (C-3 _B ), 69.4 (C-4 _E ), 69.3 (2C ₅ C-5 _A , C-5 _B ), 68.9 (C-5 _C ) ₅ 68.5 (C-4 _D ), 66.7 (C-2 _A ), 60.9 (C-6 _D ), 60.3 (C-6 _E ), 55.4 (C-2 _D ), 22.1 (2C, C _NAc , CH ₂ ), 20.2 (C _Ac ); 16.8, 16.7 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* ), 16.4 (C-6 _C ) ₅ 9.6 (CH ₃ ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ C ₃₅ H ₆₁ NO ₂₃ m/z théorique : 864.3713 m/z mesurée : 864.3718

[M+Na] ⁺ C ₃₅ H ₆₁ NO ₂₃ Na m/z théorique : 886.3532 m/z mesurée : 886.3501

Partie IV - Synthèse des cibles VIL VIIL JX XVII et XVIII

Outre les tri- (VII), tétra- (VIII) et pentasaccharides (IX) comportant un résidu B à leur extrémité réductrice, nous nous sommes, dans cette partie, attachés à synthétiser deux hexasaccharides. Comme précédemment, ces deux cibles, XVII en série S. flexneri 3 a et son correspondant XVIII en série 5. flexneri X, ont été synthétisées sous forme de glycoside de propyle.

Rétrosynthèse des oligosaccharides en série B réducteur

Procédé 13 :

L'invention se rapporte au procédé de préparation du composé VII (trisaccharide (E)AB) produit intermédiaire dans la synthèse d'un saccharide tel que défini dans la liste Ll comprenant les étapes suivantes : condensation du monosaccharide accepteur 58 et du disaccharide donneur 80' conduisant au trisaccharide 107' de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1,2-dichloroéthane, Péther, le toluène, l'acétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, préférentiellement, dans le toluène en présence d'une quantitié catalytique d'acide triflique (schéma 55) ; débenzoylation du trisaccharide 107' conduisant au trisaccharide 108 de préférence par action de MeONa dans un mélange dichlorométhane/méthanol ; hydrogénolyse du trisaccharide 108 conduisant au trisaccharide (E)AB de préférence sous atmosphère atmosphétrique d'hydrogène dans l'éthanol, par exemple Péthanol, en présence de palladium (schéma 60).

L'invention se rapporte également au procédé de préparation du composé VII (trisaccharide (E)AB) produit intermédiaire dans la synthèse d'un saccharide tel que définit dans la liste Ll comprenant les étapes suivantes : condensation du monosaccharide accepteur 58 et du disaccharide donneur 80 conduisant au trisaccharide 107 de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1 ,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, l'acétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, préférentiellement, dans le toluène en présence de TMSOTf à 0,3 éq. (schéma 61) ; délévulinoylation du trisaccharide 107' conduisant au trisaccharide 108 de préférence dans le NaOMe en présence de méthanol ; hydrogénolyse du trisaccharide 108 conduisant au trisaccharide (E)AB de préférence sous atmosphère atmosphétrique d'hydrogène dans l'alcool, par exemple éthanol, en présence de palladium (schéma 60). 1. Trisaccharide (E)AB a. Voie 2 _A -0-benzoyl

107"

EtOH

108 VII EAB

Schéma 60 : Synthèse du trisaccharide VII via l'accepteur 108

Le disaccharide donneur 80' porteur d'un groupement benzoyl en position 2 _A et préparé selon le protocole déjà décrit ⁴⁵ est condensé sur l'accepteur 58 dans le toluène en présence d'une quantité catalytique d'acide triflique pour donner le trisaccharide complètement protégé 107' avec un rendement de 93% (Schéma 60). Ce dernier est débenzoylé par action de MeONa dans un mélange dichlorométhane/méthanol 2/3 porté à reflux pour donner l'accepteur 108 (86%). Celui-ci est débenzylé par hydrogénolyse en présence de palladium sur charbon. Le trisaccharide cible VII est isolé après purification par HPLC (77%). b. Voie 2 _A -O-levuniloyl

Après avoir développé une nouvelle vois d'accès au disaccharide 21, précurseur du donneur 80 et optimisé la synthèse de l'accepteur rhamnose 58 dans la partie précédente, l'accès à la cible VII a été envisagé à partir de ces deux entités. Encore une fois, l'influence du solvant ⁶⁹ ' ^76"79 dans l'étape de glycosylation a été évaluée.

Dans le toluène, le trisaccharide 107 est obtenu avec un rendement de 91%, supérieur au rendement obtenu si le dichlorométhane est utilisé (82%). A grande échelle (1,5 g d'accepteur 61), ce rendement atteint même 92%. La délévulinoylation est cette fois-ci réalisée dans le NaOMe méthanolique, puisqu'il n'y a pas d'acétyle présent sur la molécule, pour accéder à l'accepteur 108 (94%) (Schéma 61).

80, 1,3 éq. 107 108

Schéma 61 : Synthèse alternative de l'accepteur 108 Procédé 14 :

L'invention se rapporte au procédé de préparation du composé VIII (tétrasaccharide D(E)AB) tel que défini dans la liste Ll comprenant les étapes suivantes : condensation du trisaccharide accepteur 108 avec le monosaccharide donneur 2 conduisant au tétrasaccharide 115 de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1,2-dichloroéthane, Péther, le toluène, l'acétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, préférentiellement, dans le toluène en présence de TMSOTf à une température comprise entre -20°C et -40°C (schéma 64) ; désacétylation du tétrasaccharide 115 conduisant au tétrasaccharide 110 de préférence en présence de carbonate de potassium (schéma 64) ; clivage du groupement isopropylidène du tétrasaccharide 110 et déprotection du tétrasaccharide obtenue conduisant au tétrasaccharide D(E)AB de préférence sous atmosphère d'hydrogène d'éthanol en présence de palladium (schéma 29).

L'invention se rapporte aussi au procédé de préparation du composé VIII (tétrasaccharide D(E)AB) tel que défini dans la liste Ll comprenant les étapes suivantes : condensation du trisaccharide accepteur 108 avec le monosaccharide donneur 1 conduisant au tétrasaccharide 115' de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, l'acétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, préférentiellement, dans le toluène en présence d'une quantité catalytique d'acide triflique (schéma 65) ; désacétylation du tétrasaccharide 115' conduisant au tétrasaccharide 115" de préférence par une solution de MeONa dans le méthanol ;

- déprotection du tétrasaccharide 115" conduisant au tétrasaccharide D(E)AB de préférence sous atmosphère atmosphétrique d'hydrogène dans Péthanol en présence de palladium (schéma 65).

2. Tétrasaccharide D(E)AB

D'après l'étude rétrosynthétique, la cible VIII est accessible en couplant l'accepteur 108 avec les donneurs glucosamines I ₅ 2, ou 3 décrits dans la première partie (Schéma 62).

Schéma 62 : Rétrosynthèse du tétrasaccharide 110

Mais, l'objectif à long terme étant la synthèse de cibles oligosaccharidiques de grande taille, une autre stratégie impliquant un nombre réduit d'étapes a aussi été envisagée. L'accepteur 58 peut-être couplé directement avec un donneur trisaccharide 109 au lieu du disaccharide 80, issu de la glycosylation avec le donneur 2 (Schéma 62). Ces deux stratégies ont donc été comparées. Il est à noter, que le nouveau donneur 109 ne possède pas de groupe participant en position 2 _A mais, les données de la littérature suggèrent que dans le cas du rhamnose et du mannose, une bonne stéréosélectivité en faveur de l'anomère α peut être envisagée en l'absence d'assistance anchimérique. a. Couplage D(E)A + B on

La synthèse du donneur 109 a été entreprise en 3 étapes, lévulinoylation de l'accepteur 38 (90%), déallylation ³⁹ ' ⁴⁰ du glycoside d'allyle 111 (80%) puis activation ²² ' ²³ de Fhémiacétal 112 (85%). Sur la base des études précédentes, le couplage entre ce donneur 109 et l'accepteur 54 a été conduit dans le toluène. Mais la dégradation du donneur 109 en hémiacétal 112 ainsi que la présence de l'accepteur de départ 58 ont été observées. En revanche, lorsque la condensation est réalisée dans le dichlorométhane, deux nouveaux composés ont été isolés et caractérisés.

Schéma 63 : l ^ère stratégie d'accès à 110

Après une analyse complète en RMN, ces deux derniers correspondent aux deux anomères tétrasaccharides CC _A 113 et P _A 114 obtenus avec un excellent rendement de couplage global de 88% mais dans un rapport 1/1 soit une très mauvaise stéréosélectivité de réaction (Schéma 63). L'influence de l'effet anomère attendu est probablement contrée par un encombrement stérique important, cette voie a donc été abandonnée. En conclusion, ce résultat valide le bien-fondé de notre stratégie initiale malgré le nombre d'étapes plus élevé, b. Couplage D + (E)AB a. Voie impliquant le donneur 2.

La deuxième voie d'accès au tétrasaccharide est la glycosylation entre l'accepteur 108 et le donneur 2. Malgré l'utilisation des conditions mises au point dans la partie 3 pour la synthèse du pentasaccharide 90, une optimisation de ce couplage a de nouveau été nécessaire (Tableau 10). En effet, les deux premiers tests réalisés à -40°C, dans le dichlorométhane et le toluène n'ont pas donné des résultats satisfaisants (entrée 1 et 2). Effectivement, en CCM, l'accepteur 108 est encore présent dans le milieu réactionnel alors que le donneur 2 est consommé. Dans la partie précédente, le donneur glucosamine 2 n'était pas assez réactif à - 78°C et se dégradait trop vite à -20 ⁰ C. Une glycosylation comparative à -20°C et à -40°C a

donc été réalisée, en augmentant à la fois la quantité de donneur pour avoir une réaction totale mais aussi la quantité d'acide pour augmenter la vitesse de réaction. Au vu des entrée 3 et 4, les résultats précédents sont, à nouveau, confirmés puisque la température idéale de couplage est -40°C même si la réaction n'est toujours pas totale. En revanche, au vu des entrées 3 et 5, l'augmentation de la quantité d'acide n'a pas eu l'influence souhaitée.

Donneur Rendement (rendement

Entrée TMSOTf Température Solvants

2 corrigé)

1 Dichlorométhane 35%

0,3 éq. -40 ⁰ C 1,4 éq.

2 56%

3 -40 ⁰ C 77% (84%)

0,4 éq. 1,5 éq.

4 -20°C Toluène 70% (78%)

5 1,5 éq. 75% (82%)

0,3 éq. -40°C

6 1.7 éq. 95%

Tableau 10 : étude du couplage entre 2 et 108

La présence d'accepteur 108 de départ lors de ces différents essais, a conduit à augmenter la quantité de donneur (entrée 6 du Tableau 10).

Schéma 64 : 2 ^eme stratégie d'accès à 110

A grande échelle (1,2 g d'accepteur), la réaction est totale et permet d'isoler le tétrasaccharide attendu 115 avec un rendement de 95% (Schéma 64). Ce dernier est désacétylé en présence de carbonate de potassium, ⁸⁵ pour accéder au tétrasaccharide accepteur 110 avec un excellent rendement de 92%. b. Voie impliquant le donneur 1.

Si l'élongation de la chaîne en position 3 _D n'est pas requise, il peut être judicieux d'utiliser le donneur de résidu glucosaminyl I ₅ plus aisément accessible. Cette voie a également été envisagée (Schéma 65).

Le produit de condensation triacétylé 115' est isolé (87%) à l'issu du couplage entre l'accepteur 108 avec le donneur 1 est réalisé dans le toluène en présence d'une quantité catalytique d'acide triflique. Traité à température ambiante par une solution de MeONa dans du méthanol, le tétrasaccharide 115' fournit le triol 115" (79%). Cet intermédiaire est débenzylé par hydrogénolyse en milieu légèrement acide, puis converti en acétamide par hydrodéchloration en milieu légèrement basique. Le tétrasaccharide libre VIII est isolé après purification par HPLC (68%).

Une alternative possible consiste à convertir le tétrasaccharide complètement protégé 115' en acétamido triol par action de MeONa dans un mélange dichlorométhane/méthanol. Cet intermédiaire est débenzylé par hydrogénolyse pour conduire au tétrasaccharide cible VIII avec un rendement global de 39% à partir de l'accepteur 108. On remarquera cependant que ce rendement est inférieur au rendement de 46% obtenu sur la séquence couplage/déprotection complète (108 → VHI) impliquant le trichloroacétamide 115'.

Schéma 65 : Synthèse du tétrasaccharide VIII via le donneur 1 Procédé 15 :

L'invention se rapporte encore au procédé de préparation du composé IX (pentasaccharide AcCD(E)AB) tel que défini dans la liste Ll comprenant les étapes suivantes : condensation du tétrasaccharide accepteur 116 et du monosaccharide donneur 39 conduisant au pentasaccharide 116' de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, l'acétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le

TMSOTf ou l'acide tiïflique, préférentiellement, dans le toluène en présence d'acide triflique (schéma 71) ; clivage du grouepement isopropylidène du pentasaccharide 116' conduisant au pentasaccharide 116" ; déprotection du pentasaccharide 116" conduisant au pentasaccharide _A cCD(E)AB de préférence sous atmosphère d'hydrogène dans Péthanol en présence de palladium sur charbon (schéma 71).

3. Nouvelle stratégie : Conversion du trichloroacétamide en acétamide en cours de synthèse

Si on prend en compte la présence de plusieurs fonctions trichloroacétamides sur la même molécule lors de la- synthèse de cibles de plus grande taille et les possibles difficultés rencontrées lors de l'hydrogénolyse finale, alors la conversion de la fonction trichloroacétamide en acétamide peut aussi être envisagée avant introduction de la fonction acétyle en position 2c plutôt qu'à la dernière étape. Ainsi la synthèse de l'analogue acétamide de 116 a été envisagée. Dans la littérature, beaucoup de méthodes de conversion existent (partie rétrosynthèse), mais l'étain voulant être évité, une nouvelle méthode a été développée. S Mise au point des conditions

Conformément aux résultats qui viennent d'être décrits concernant la transformation de 115' en VIH, lors de la désacétylation des trois fonctions acétyles du trisaccharide 22, un résultat surprenant a été observé puisque, si la réaction est conduite dans du méthanol alors seul le triol 37 est obtenu alors que si du dichlorométhane est ajouté au milieu réactionnel, un composé extrêmement polaire apparait en CCM. Comme ce dernier se révèle à la ninhydrine, l'hypothèse la plus plausible est la présence de la forme aminé libre (Schéma 66). Pour le vérifier, une acétylation en milieu alcoolique, sélective de la fonction aminé postulée, a été réalisée. La structure du produit de réaction 117 a été déterminée par une analyse complète en RMN et spectrométrie de masse ce qui a permis de confirmer l'hypothèse.

37

Schéma 66 : Désacétylation de 22 dans différentes conditions de solvants Cependant, la conversion de la fonction trichloroacétamide en acétamide est rendue difficile par la présence d'un composé secondaire 118, un carbamate de méthyle, dont la structure est très proche de celle de Facétamide voulue 117. La formation de ce carbamate 118 peut s'expliquer par un probable passage par un isocyanate instable qui réagit ensuite avec un alcool, ici le méthanol utilisé comme solvant de la réaction, pour donner le carbamate correspondant 116 (Schéma 67).

22

Schéma 67 : Mécanisme supposé pour la formation du produit secondaire 28 Pour réduire la formation de ce carbamate non désiré, cette réaction a donc été optimisée. En comparant les entrées 1, 2 et 3 du Tableau 11 ainsi qu'au vu de la figure 22, si le volume de NaOMe 0,5M méthanolique est fixe, alors la conversion est optimum lorsque le volume de DCM lui est 8 fois supérieur. Si au contraire le volume de DCM est fixe, alors plus la quantité de NaOMe est importante et plus la réaction est rapide (entrée 4, 5 et 6 du Tableau 11 et de la lfigure 22). Les conditions optimums sont donc celles de l'entrée 6 car, dans ce cas, la formation du carbamate est minoritaire. Effectivement, à plus grande échelle (5g de 22), l'acétamide 117 est obtenu avec un rendement de 90%, complété de seulement 5% de carbamate 118.

Temps de disparition

Entrée NaOMe (0.5M) VNaOMe/VocM de 22

1 4 3h45

2 5 éq. 8 2h30

3 12 5hl5

4 2éq. 4h

5 4éq. 8 3hl5

6 6éq. 2h

Tableau 11 : étude de la réduction de la fonction trichloroacétamide Pour préparer l'équivalent de l'accepteur 38 en série acétamide, le triol 117 est protégé régiosélectivement en position 4 _D et 6 _D par un groupement isopropylidène pour conduire à l'accepteur 119 avec un rendement de 85% ³⁰ ' ³¹ (Schéma 68). Il est à noter, que F isopropylidène de cet accepteur 119 est stable, contrairement à celui de l'accepteur 38 (Partie 2).

Schéma 68 : l ^ere voie d'accès à V accepteur 119 ^• S étude de la reproductibilité de la conversion du trichloroacétamide en acétamide sur d'autres synthons

Cette nouvelle méthode de conversion étant particulièrement efficace, elle a été appliquée à d'autres intermédiaires utilisés dans nos différentes synthèses comme par exemple le trisaccharide 23 pour accéder au même accepteur 119. Ainsi, la désacétylation de la fonction acétyle combinée à la détrichloracétylation de la fonction aminé du glycoside d'allyle 23 a permis d'isoler l'accepteur 119 avec un rendement de 90% (Schéma 69). Pour comparer les deux voies d'accès à l'accepteur 119, les différentes synthèses ont été réalisées à grande échelle (de l'ordre de 5 g) en essayant de limiter le nombre de chromatographies. Les résultats présentés sur le Schéma 69 montrent que les rendements sont comparables pour ces deux voies mais aussi comparables à la synthèse de l'accepteur 38 en série trichloroacétamide (Partie 2).

^^

Schéma 69 : 2 voie d'accès à l'accepteur 119

Ensuite deux autres synthons ont été convertis en acétamide, selon le même protocole, le pentasaccharide 90 (D(E)ABC Partie- 3) (66%) et le tétrasaccharide 115 avec un excellent rendement de 83% en 116 (Schéma 70). Cette nouvelle méthode de conversion a donc prouvé tout son potentiel, ce qui permet d'envisager l'allongement vers des oligosaccharides de grande taille.

Schéma 70 : Synthèse de l'accepteur 116 S Application à la préparation du pentasaccharide IX

Le tétrasaccharide 116 est condensé sur le donneur 39 en présence d'acide triflique (Schéma 71). La réaction menée dans le toluène conduit au pentasaccharide 106' complètement protégé (71%). La fonction isopropylidène est clivée par hydrolyse accide pour conduire quantitativement au diol 106". Ce dernier est débenzylé par hydrogénolyse en présence de Pd/C. Conformément au phénomène déjà observé pour le tétrasaccharide ///, le pentasaccharide IX est isolé après purification sous forme d'un mélange de régioisomères correspondant au produit voulu portant une fonction acétyle en position 2c et au produit de migration de la fonction acétyle sur l'hydroxyle c/s-vicinal.

Schéma 71 : Synthèse du pentasaccahride IX Procédé 16 :

L'invention se rapporte au procédé de préparation du composé XVII (hexasaccharide B _AC CD(E)AB) tel que défini dans la liste Ll comprenant les étapes suivantes : condensation du tétrasaccharide accepteur 110 et du disaccharide donneur 47 conduisant aux hexasaccharides 122 et 123 de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1,2-dichloroéthane, Péther, le toluène, Pacétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, préférentiellement, dans le toluène en présence de TMSOTf (schéma 74) ; clivage du groupement isopropylidène de l' hexasaccharide 122 conduisant à l'hexasaccharide 123 de préférence dans une solution aqueuse de TFA 50% dans le dichlorométhane (schéma 75) ;

délévulinoylation de l'hexasaccharide 123 conduisant à Phexasaccharide 124 de préférence en milieu tamponné en présence de d'hydrazine monohydraté (schéma 75) ; déprotection de l'hexasaccharide 124 à l'hexasaccaharide B _AC CD(E)AB de préférence sous 50 bars de pression conduisant (schéma 76). 4. Hexasaccharide BAγCD(E)AB (XVII)

Comme indiqué ci-dessus, dans le cas du dérive IX, la migration la fonction acétyle de la position 2c sur l'alcool vicinal en 3c est observée. Pour éviter cette migration et avoir des résultats d'antigénicité complets, la synthèse d'un fragment plus long, à savoir l'hexasaccharide B _AC CD(E)AB XVII a été envisagée. a. étude de couplage en série acétamide

Avant de réaliser la synthèse de cet hexasaccharide et pour faire suite aux résultats obtenus dans le cas de la synthèse de IX, l'étude de la faisabilité de glycosylation en série acétamide a été réalisée dans le cadre de la préparation d'un pentasaccharide issu du couplage entre l'accepteur 119 et le donneur 47 (Schéma 72). Les données de la littérature ¹¹⁴ ' ³⁸ et du laboratoire, ¹¹⁵ ' ⁶² complétées des résultats de la partie 3, suggèrent que les accepteurs acétamides sont moins réactifs que leurs analogues trichloroacétamides. Différentes conditions de glycosylation ont été évaluées (Tableau 12).

Les premiers tests à -20°C, dans le toluène et dichlorométhane (entrées 1 et 2), confirment la faible réactivité de l'accepteur 119. En effet, il est toujours présent dans le milieu réactionnel alors que le donneur 47 se dégrade rapidement. A -5 ⁰ C, les rendements en 120 sont toujours assez faibles, et ce quelque soit le solvant utilisé (entrées 3, 4 et 5). Pour le couplage entre 19 et 86 (Partie 3), les quantités de tamis moléculaire et d'acide avaient été augmentées pour réaliser la glycosylation à plus haute température selon les conditions mises au point antérieurement au laboratoire.

Tableau 12 : Optimisation du couplage entre l'accepteur 119 et le donneur 47

Ces conditions ont donc été appliquées à ce nouveau couplage (entrées 6 et 7). Les rendements en 120 sont identiques ce qui semble indiquer que la température optimum est de

0°C (Schéma 72).

47, 1,5 éq 120

Schéma 12 : Glycosylation entre l'accepteur 119 et le donneur 47 Ce résultat a été confirmé sur l'accepteur acétamide 116. Effectivement, à 0°C et en présence de TMSOTf (0,9 éq.), Phexasaccharide 121 est isolé avec un rendement de 65% (Schéma 73). Il est à noter que l'emploi de TMSOTf ou de TfOH (entrée 7 ou Schéma 73), n'a, dans notre cas, aucune influence puisque les rendements sont équivalents. Malgré ces résultats encourageants sur le pentasaccharide 120 et Phexasaccharide 121, l'analyse RMN de tous ces produits de glycosylation montre la présence systématique d'un contaminant qui co- élue avec ces derniers. La séparation de ce contaminant a été entreprise lors des étapes de déprotection, soit de Pacétal soit de la fonction lévulinoyle. Cependant, la réaction de délévulinoylation de 120 n'a jamais été totale et la désacétalation de 120 a permis d'obtenir le diol attendu, mais toujours contaminé. Le contaminant n'a pu être ni isolé ni identifié. Ainsi, avant de continuer la synthèse, une comparaison avec la série trichloroacétamide a été réalisée.

47, 1 ,5 éq 121

Schéma 73 : Glycosylation entre, l'accepteur 116 et le donneur 47 b. étude de couplage en série trichloroacétamide

La température optimale (-40 ⁰ C), déterminée lors de l'étude du couplage entre le trisaccharide 38 et le donneur 47 (Partie 2), a été testée lors de la glycosylation entre le tétrasaccharide 110 et le même donneur 47 (Tableau 13). Dans le dichlorométhane (entrée 1), la dégradation de la fonction isopropylidène est plus importante que dans le toluène (entrée 2), même si le rendement global en produit est proche. Comme précédemment pour 64, l'analyse RMN de 123, ainsi que Pisopropylidénation (93%, Schéma 74) de ce dernier a permis de confirmer la perte de l' isopropylidène ainsi que la position de glycosylation sur l'unité glucosamine.

Entrée Solvants Temps de réaction 122 123

1 DCM 25 min. 20% 62%

2 Toluène 25 min. 30% 55%

3 Toluène 10 min. 59% 23%

4 Toluène 40 min. 59% 21%

Tableau 13 : Etude du couplage entre le donneur 47 et l 'accepteur 110 L'entrée 3 montre, encore une fois, que la dégradation de l' isopropylidène peut être contrôlée en maintenant un temps de réaction très court. Mais l'intermédiaire 123, étant impliqué dans la synthèse de la cible XVII, la glycosylation a été reproduite à grande échelle

(1,7 g d'accepteur 110) sans contrôler ce facteur, permettant d'isoler 122 et 123 dans un rapport 75/25 avec un rendement global de 80% (entrée 4, Schéma 74).

47, 1 ,5 éq 122, 59% ¹²³ > ^{21 %}

Schéma 74 : Glycosylation entre l'accepteur 110 et le donneur 47

Traité par une solution aqueuse de TFA 50% dans le dichlorométhane, ' le pentasaccharide 122 conduit au diol 123 avec un rendement de 89%.

122 123 124

Schéma 75 : Désacétalation de 122 suivi de la délévulinoylation de l 'ester de lévulinoyle 123

Puis la délevulinoylation est effectuée en milieu tamponné en présence d'hydrazine monohydraté, ⁸⁹ ' ^97"101 pour conduire au hexasaccharide 124 (84%). Par analogie avec la synthèse des cibles des Parties 2 et 3, Phydrogénolyse, sous 50 bars de pression du triol 124 conduit au glycoside de propyle XVII avec un rendement de 64% (Schéma 76).

étapes)

Schéma 76 : Hydrogênolyse des hexasaccharides 124 et 125

Procédé 17 :

L'invention se rapporte au procédé de préparation du composé XVIII (hexasaccharide B ₀ CD(E)AB) tel que défini dans la lsite Ll comprenant les étapes suivantes : condensation du tétrasaccharide accepteur 110 et du disaccharide donneur 47 conduisant aux hexasaccharides 122 et 123 de préférence la réaction de condensation est réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1,2-dichloroéthane, l'éther, le toluène, Pacétonitrile ou tout autre solvant équivalent, en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf ou l'acide triflique, préférentiellement dans le toluène en présence de TMSOTf (schéma 74) ; clivage du grouepement isopropylidène de l' hexasaccharide 122 conduisant à Phexasaccharide 123 de préférence dans une solution aqueuse de TFA 50% dans le dichlorométhane (schéma 75) ; transestérification de Phexasaccharide 123 conduisant à Phexasaccharide 125 de préférence en présence de NaOMe à reflux du méthanol (schéma 76) ;

déprotection de l'hexasaccharide 125 conduisant à l'hexasaccahride BA _C CD(E)AB de préférence sous pression, par exemple sous 50 bars de pression (schéma 76). La désacétylation du triol 124 en présence de NaOMe à reflux du méthanol conduit au tétraol 125 avec un rendement de 92%. Pour finir, l'hydrogénation, effectuée dans les mêmes conditions que pour la cible XVII, permet d'isoler le glycoside de propyle XVIII avec un rendement de 82% (Schéma 76). 5. Conclusion

Outre celle des tri- (VII), tétra- (VIII), et penta- (IX), la synthèse des deux hexasaccharides XVII et XVIII. La différence de réactivité entre les accepteurs acétamides 119 et 116 avec les accepteurs trichloroacétamides 38 et 110, respectivement, a aussi été étudiée, permettant de confirmer la plus faible réactivité d'accepteurs de type N- acétylglucosamine. Effectivement, dans tous nos essais avec ce type d'accepteurs, les rendements restent plus faibles et la présence d'un contaminant ne permet pas de continuer la synthèse- des cibles. Même si la perte de l'isopropylidène est observée en série trichloroacétamide, Pacétalation peut de nouveau être effectuée sur le brut de la glycosylation sans perte de produit.

De plus, les rendements d'hydrogénolyse des dérivés trichloroacétamides 124 ou 125 sont comparables aux rendements de déprotection des intermédiaires acétamides (Partie 2, 3 et 4). Continuer en série trichloroacétamide durant toute la synthèse et réduire cette fonction lors de l'étape de déprotection finale est donc, la meilleure stratégie pour la synthèse d'oligosaccharides d'ordre supérieur.

Mise en œuyre expérimentale des procédés 13 à 17

Procédé 13 :

> AUyI (2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyI)-(l→3)-(4-0-b enzyl-2-0- lévu!inoyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→2)-3,4-di-(>benzyl -α-L-rhamnopyranoside 107 :

Chemical Formula: C75H84O-16

Exact Mass: 1240,5759 MoIecularWeight: 1241,4599

Du TMSOTf (210,0 μL ₅ 1,2 mmol, 0,3 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 58 (1,5 g, 3,9 mmol) et de donneur 80 (5,1 g, 5,1 mmol, 1,3 éq.) dans du Toi (100 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (3,4 g), agitée sous argon à -78°C. Après 15 min à cette température, le bain éthanol-carboglace est retiré et l'agitation est poursuivie pendant 30 min, temps au bout duquel le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 85/15) indique la disparition de 58 (Rf= 0,25) et l'apparition d'un nouveau composé moins polaire (Rf = 0,5). La réaction est stoppée par addition de triéthylamine (1 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à Pévaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 95/5→85/15) pour obtenir le glycoside d'allyle 107 sous forme d'une huile incolore (4,5 g, 92%). Rf= 0,5 (Tol/EtOAc, 85/15).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), J7.45-7.12 (m, 35H, CH _Ph ), 5.87 (m, IH, CH=), 5.61 (m, IH, H-2 _A ), 5.32 (d, IH, J _lj2 = 3.4 Hz, H-1 _E ), 5.31 (m, IH, J _tran s = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.23 (m, IH, Jc _is = 10.3 Hz, =CH ₂ ), 5.06 (d, IH, J = 10.5 Hz, H _Bn ), 5.05 (d, IH, Ji _,2 = 2.2 Hz, H-1 _A ), 5.00-4.89 (m, 5H, H _Bn ), 4.82 (d, IH, J= 12.2 Hz, H _Bn ), 4.81 (bs, IH, H-1 _B ) ₅ 4.74-4.64 (m, 5H, H _Bn ), 4.53 (d, IH, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.38 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _Bn ), 4.26 (dd, IH, J _2,3 = 3.2 Hz, J ₃ , ₄ = 9.6 Hz, H- 3 _A ), 4.20-4.09 (m, 3H, H _A n, H-3 _E , H-5 _E ), 4.03 (dd, IH, J _2,3 = 2.9 Hz, H-2 _B ), 3.97 (m, IH, H _A n), 3.96-3.90 (m, 2H, H-5 _A , H-3 _B ), 3.83 (pt, IH, J _4,5 = 9.5 Hz, H-4 _E ), 3.75 (dq, IH, J ₄ , ₅ = 9.4 Hz, H-5 _B ), 3.71-3.66 (m, 2H, H-6a _E , H-2 _E ), 3.63-3.57 (m, 2H, H-4 _A , H-6b _E ), 3.53 (pt, IH,

J ₄ , ₅ = 9.4 Hz ₅ RAB) ₃ 2.55 (m, 4H, 2CH _2Le v), 2.11 (s, 3H, CH _3Le v), 1-42 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H- 6 _A ), 1.37 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _B ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.2 (C _Lev ), 171.8 (C _Lev ), 138.7-137.7 (C _Ph ), 133.9 (CH=), 129.1-127.6 (CHp _h ), 117.2 (=CH ₂ ), 99.2 (C-1 _A , ¹ JcH= 173.4 Hz), 97.9 (C-I ₁₃ , ¹ JCH= 170.8 Hz), 92.9 (C-1 _E , ¹ J _C H= 168.9 Hz), 82.1 (C-3 _E ), 80.5 (C-4 _B ), 79.9 (C-4 _A ), 79.6 (C-3 _B ), 79.5 (C-2 _E ), 77.8 (C-4 _E ), 76.2, 75.6, 75.5, (3C, C _Bn ), 75.1 (C-2 _B ), 75.0, 73.4, 72.8 (3C, C _Bn ), 72.3 (C-3 _A ), 72.2 (C _Bn ), 70.3 (C-5 _E ), 68.4 (C-5 _A ), 68.3 (C-6 _E ), 68.1 (C-5 _B ), 68.0 (C-2 _A ), 67.7 (C _A n), 38.0 (CH _2Lev ), 29.7 (CH _3Lev ), 28.2 (CH _2Lev ), 18.1, 18.0 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₇₅ H ₈₄ Oi ₆ Na m/z théorique : 1263.5657 m/z mesurée : 1263.5437

[M+NH ₄ ] ⁺ C ₇₅ H ₈₄ Oi ₆ NH ₄ m/z théorique : 1258.6104 m/z mesurée : 1258.5887

> AUyI (2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-(2-O-b enzoyl-4-O- benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→2)-3,4-di-O-benzyl-α-L-r hamnopyranoside 107' :

Chemical Formula: C ₇₇ H ₈₂ O ₁₅

Exact Mass: 1246,57 MolecularWeight: 1247,47

De l'acide triflique (16 μL, 186 μmol, 0,2 éq.) est additionné à une suspension d'accepteur 58 (463 mg, 1,2 mmol), de donneur 80' (953 mg, 932 μmol) et de tamis moléculaire 4 â (500 mg) dans du Toi (10 mL), agitée sous argon à -30°C. La réaction est poursuivie pendant que le bain éthanol-carboglace revient à TA (environ 1 h). Le bain est retiré et l'agitation est poursuivie pendant 1 h, temps au bout duquel le suivi par CCM (DCM/EtOAc, 98/2) indique la présence d'un nouveau composé majoritaire moins polaire que 58. La réaction est stoppée par addition de triéthylamine (300 μL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à Tévaporateur rotatif. Le brut réactionnel est purifié par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 100/0→80/20) pour obtenir le glycoside d'allyle 107' sous forme d'une huile incolore (1,08 g, 93%). Rf= 0,5 (Chex/EtOAc, 8/2).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), (58.09-7.08 (m, 40H, CH _Ph ), 5.89 (m, IH, CH=), 5.84 (dd, IH, J _lj2 = 2.1 Hz, H-2 _A ), 5.37 (d, IH, J _1;2 = 3.4 Hz, H-I _E ), 5.28 (m, IH, J _tra ns = 17.3 Hz, =CH ₂ ), 5.20 (m _superp osé, IH, =CH ₂ ), 5.19 (m _sup6r posé, IH, H-U), 5.00 (d, IH, J= 10.2 Hz ₅ H _Bn ), 4.96 (d, IH, J= 10.8 Hz, H _Bn ), 4.86 (d, IH, J = 10.9 Hz, H _Bn ), 4.84 (d, IH, J= 10.9 Hz, H _Bn ), 4.78 (d, IH, J _1;2 = 1.8 Hz, H-I _B ), 4.75 (d, IH, J= 10.9 Hz, H _Bn ), 4.72 (s, 2H, H _Bn ), 4.67-4.63 (m, 3H, H _Bn ), 4.60 (d, IH, J= 12.1 Hz, H _Bn ), 4.46 (m, 2H, H _Bn ), 4.39 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 3.1 Hz, J ₃ , ₄ = 9.8 Hz, H- 3 _A ), 4.36 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _Bn ), 4.15 (m, IH, H _A n), 4.08-4.03 (m, 3H, H-3 _E , H-5 _E , H-2 _B ), 3.97-3.90 (m, 3H, H _Aπ , H-5 _A , H-3 _B ), 3.79 (dd, IH, J _4;5 = 9.4, J _3>4 = 9.7 Hz, H-4 _E ), 3.76-3.69 (m ₅ 3H, H-5 _B , H-6a _E , H-4 _A ), 3.62 (dd, IH, J _I;2 = 3.4, J _2,3 = 9.7 Hz, H-2 _E ), 3.59 (m, IH, J _5;6 ≈ 1.7 Hz, H-6b _E ), 3.56 (pt, IH, J _4;5 = 9.4 Hz, H-4 _B ), 1.43 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.35 (d, 3H, J ₅₍₆ = 6.2 Hz, H-6 _B ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ 166.0 (C _Bz ), 139.1-127.7 (C _Ph ), 117.6 (=CH ₂ ), 99.6 (C-1 _A ), 98.2 (C-1 _B ), 93.1 (C-I _E ), 82.4 (C-3 _E ), 80.9 (C-4 _B ), 80.3 (C-4 _A ), 80.1 (C-3 _B ), 79.3 (C-2 _E ), 77.8 (C-4 _E ), 76.7, 76.0, 75.9, 75.3, (4C, C _Bn ), 75.1 (C-2 _B ), 73.8 (C _Bn ), 72.9 (C-3 _A ), 72.6, 72.5 (2C, C _Bn ), 70.6 (C- 5 _E ), 68.8 (2C, C-2 _A , C-5 _B* ), 68.6 (C-6 _E ), 68.4 (C-5 _A* ), 68.0 <C _A1 0, 18.5, 18.4 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₇₇ H ₈₂ Oj ₅ Na m/z théorique : 1269.5552 m/z mesurée : 1269.5563

> AUyI (2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-(4-0-b enzyl-α-L- rhamnopyranosyl)-(l— »2)-3,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 108 :

Chemical Formula: C70H78O-14

Exact Mass: 1142,5392 MolecularWeight: 1143,3599

Voie a. Après addition de NaOMe méthanolique 0,5 M (2,5 mL, 1,25 mmol, 4 éq.) au glycoside d'allyle 107' (385 mg, 308 μmol) en solution dans un mélange DCM/MeOH 1/1 (10 mL). Le milieu réactionnel est porté à reflux et agité pendant 3 h, temps au bout duquel le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3), indique la disparition de 107' et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,6). Après retour à TA ₅ le milieu réactionnel est neutralisé par addition de résine échangeuse d'ion Dowex X8 (H ⁺ ), puis filtré sur fritte. La résine est lavée avec un mélange DCM/MeOH et les solvants sont évaporés. L'huile jaune obtenue est purifiée par

flash chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 10/0-→7/3) pour conduire à l'alcool 108 sous forme d'une huile incolore (303 mg, 86%).

Voie b. Après addition de NaOMe méthanolique 0,5 M (12,2 mL, 6,1 mmol, 1,7 éq.) au glycoside d'allyle 107 (4,5 g, 3 ₅ 6 mmol) en solution dans du MeOH (200 mL). Le milieu réactionnel est porté à reflux et agité pendant 1 h, temps au bout duquel le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3), indique la disparition de 107 (Rf= 0,5) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,6). Après retour à TA, le milieu réactionnel est neutralisé par addition de résine échangeuse d'ion Dowex X8 (H ⁺ ), puis filtré sur fritte. La résine est lavée avec un mélange DCM/MeOH et les solvants sont évaporés. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 98/2— >9/l) pour conduire à l'alcool 108 sous forme d'une huile incolore (3,9 g, 94%). Rf= 0,6 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.47-7.19 (m, 35H, CH _Ph ), 5.93 (m, IH, CH=), 5.32 (m, IH, J _tran s= 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.25 (m, IH, J _cis = 10.3 Hz, =CH ₂ ), 5.22 (bs, IH, H-I _A ), 5.05-4.99 (m, 3H, H _Bn ), 4.97 <d, IH, J _1;2 = 3.5 Hz, H-1 _E ), 4.91-4.88 (m, 2H, H _Bn ), 4.84 (d, IH, J _1;2 = 1.6 Hz, H-1 _B ), 4.83-4.67 (m, 6H, H _Bn ), 4.60 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _Bn ), 4.54 (d, IH, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.36 (d, IH, J = 12.0 Hz, H _Bn ), 4.19 (m, IH, H _A n), 4.14-4.09 (m, 4H, H-2 _A , H-2 _B , H-3 _A , H-3 _E ), 4.04-3.95 (m, 3H, H _A n, H-5 _E , H-3 _B ), 3.92 (dq, IH, J _4,5 = 9.7 Hz, H-5 _A ), 3.80 (pt, IH, J ₄ , ₅ = 9.8 Hz, H-4 _E ), 3.75 (pt, IH, J _4;5 = 9.4 Hz, H-5 _B ), 3.66 (dd, IH, J _2;3 = 3.6 Hz, J ₃ , ₄ = 9.6 Hz, H-2 _E ), 3.75 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.3 Hz, H-4 _A ), 3.55-3.49 (m, 2H, H-6a _E , H-4 _B ), 3.45 (dd, IH, J ₅ , _6aE = 1.8 Hz, J _6aE;6bE = 10.8 Hz, H-6b _E ), 1.43 (d, 3H, J _5>6 = 6.3 Hz, H-6 _A ), 1.39 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H- 6B).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 138.7-137.6 (C _Ph ), 133.9 (CH=), 129.1-127.0 (CH _Ph ), 117.2 (=CH ₂ ), 101.0 (C-IA, ¹ JCH = 170.3 Hz), 98.1 (C-1 _B , ¹ JCH = 170.3 Hz), 94.0 (C- 1 _E , ¹ JCH = 166.7 Hz), 82.4 (C-3 _E ), 80.6 (C-4 _B ), 80.0 (C-3 _B ), 79.3 (C-4 _A ), 79.0 (C-2 _E ), 77.8 (C-4 _E ), 76.5 (C-3 _A ), 75.6, 75.6, 75.5 (3C, C _Bn ), 75.0 (C-2 _B ), 74.9, 74.4, 73.4, 72.5 (4C, C _Bn ), 70.7 (C-5 _E ), 68.1 (C-5 _B ), 68.0 (C-6 _E ), 67.7 (C-5 _A ), 67.7 (C _AI1 ), 67.4 (C-2 _A ), 18.0, 17.9 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* ). HRMS (ESI ⁺ ) : ' [M+Na] ⁺ C ₇₀ H ₇₈ O ₁₄ Na m/z théorique : 1165.5289 m/z mesurée : 1165.5283 [M+NH ₄ ] ⁺ C ₇₀ H ₇₈ O ₁₄ NH ₄ m/z théorique : 1160.5735 m/z mesurée : 1160.5674

> Propyl α-D-glucopyranosyl-(l→3)-α-L-rhamnopyranosyl-(l→2)-α- L- rhamnopyranoside VU :

^

Chemical Formula: C ₂ IH ₃₈ O-^

Exact Mass: 514,23 Molecular Weight: 514,52

Du Pd/C10% (250 mg) est ajouté à une solution dégazée d'alcool 108 (260 mg, 209 μmol) dans de l'éthanol (10 mL) complété d'acide chlorhydrique IM (155 μL). La suspension est placée sous atmosphère d'hydrogène (1 bar) et agitée une nuit à TA. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 7/1/02 montre la disparition de 108 et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire. Le milieu réactionnel est filtré sur Célite, et le filtrat est concentré à l'évaporateur rotatif. Le résidu obtenu est purifié par HPLC (colonne C- 18 Kromasil, TFA aqueux O ₃ OlM /CH ₃ CN, 100/0→60/40 en 20 min, 5 mL/min, 215 nm) pour conduire au tétrasaccahride libre VII sous forme d'une poudre blanche après lyophilisation (83 mg, 77%). Rf= 0,5 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/2).

RMN ¹ H (D ₂ O), δ 5.09 (d, IH, J _lj2 = 387 Hz, H-IE), 4.98 (d, IH, J _li2 = 1.7 Hz, H-U), 4.88 (d, IH, J _lj2 = 1.2 Hz, H-Ic), 4.25 (m, IH, H-2 _A ), 3.94 (m, IH, H-5 _E ), 3.90 (dd, IH, H-2 _B ), 3.85- 3.49 (m, 6H, H-3 _A , H-3 _B , H-3 _E , H-6a _E , H-6b _E , H-5 _A ), 3.69 (dq, IH, , J ₄ , ₅ ^≈ 9.6 Hz, H-5 _B ), 3.64-3.48 (m, 4H, OCH ₂ , H-2 _E , H-4 _A , OCH ₂ ), 3.52 (m, IH, H _Pr ), 3.44 (t, 2H, H-4 _E , H-4 _B ) 1.59 (sex, 2H, CH ₂ ), 1.27 (d, 6H, J _5j6 = 6.2 Hz, H-6 _A , H-6 _C ), 0.90 (t, 3H, J - 7.4 Hz, CH ₃ ). RMN ¹³ C (D ₂ O), δ 102.4 (C-l _c , ¹ Jc _H = 175 Hz), 99.0 (C-1 _B , ¹ JcH= 170.5 Hz), 95.7 (C-1 _E , ¹ J ₀ H - 168.8 Hz), 79.5 (C-2 _B ), 75.6 (C-3 _A ), 72.6 (CM ₂ *), 72.1 (C-2 _E ), 71.8 (C-5 _E ), 70.7 (C-3 _B ), 70.5 (C-4 _A ), 70.2(Cp ₁ -), 69.9 (C-4 _E ), 69.7 (C-5 _A ), 69.1 (C-5 _B ), 67.1 (C-2 _A ), 60.8 (C-6 _E ), 22.3 (CH ₂ ), 17.2, 17.0 (C-6 _A , C-6 _B ), 10.3 (CH ₃ ). MS (ESI ⁺ ) pour C ₂₉ H ₅₁ NO ₁ m/z théorique 514.2, trouvée 515.1[M+H] ⁺ . Procédé 14 :

> Allyl (2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-3-0-lévulinoyl-2-trichloro acétamido-β-D- glucopyranosyl)-(l-→2)-[2,3 ₅ 4,6-tétra-(?-benzyI-α-D-glucopyranosyl-(l— »3)]-4-O- benzyl-α-L-rhamnopyranoside 111 :

Chemical Formula: GgeHygC^NO^

Exact Mass: 1259,4179 Molecular Weight: 1261,6651

L'alcool 38 (2,0 g, 1,7 mmol) est dissous dans du DCM (15 mL) puis la DMAP (420 mg, 3,4 nimol, 2 éq.) est ajouté au milieu réactionnel. Dans un autre ballon, la DCC (532 mg, 2,6 mmol, 1,5 éq.), et l'acide lévulinique (317 μL, 3,0 mmol, 1,8 éq.) sont agités dans du DCM (15 mL) puis ajoutés au milieu réactionnel. Le milieu réactionnel est alors agité durant 1 h, temps au bout duquel le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 7/3) montre la formation d'un composé moins polaire majoritaire (Rf= 0,5) et la disparition de 38 (Rf= 0,35). La DCU est filtrée sur célite et le filtrat est repris à l'H ₂ O (15 mL). La phase aqueuse est extraite au DCM (3 x 100 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaHCO _3sa t (3 x 50 mL), une solution de NaCl _sat (3 x 50 mL), filtrées sur filtre séparateur de phases et concentrées à Pévaporateur rotatif. L'huile obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 85/15→8/2) pour conduire à l'ester de lévulinoyle 111 (1,9 g, 90%). Rf= 0,5 (Tol/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), <57.44-7.08 (m, 26H, NH, CH _Ph ), 5.94 (m, IH, CH=), 5.29 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.21 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.11 (d, IH, J _ιa = 3.5 Hz, H-I _E ), 5.10- 5.07 (m, 4H, H _Bn ), 4.80-4.69 (m, 5H, H-I _A , H _Bn , H-3 _D , H _Bn , H-I ₀ ), 4.59-4.54 (m, 2H, H _Bn ), 4.90 (d, IH, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.32 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _Bn ), 4.18-4.07 (m, 5H, H _A ιi, H-2 _D , H-3 _E , H-3 _A , H-5E), 3.99 (m, IH, J,, ₂ = 2.3 Hz, J _2,3 = 4.8 Hz, H-2 _A ), 3.94 (m, IH, H _A n) ₅ 3.90 (dd, IH, J _lj2 = 3.6 Hz, J _2>3 = 9.7 Hz, H-2 _E ), 3.85 (dd, IH ₅ J ₅ , _6a = 5.4 Hz, J _6a , _6b = 10.7 Hz, H- 6a _D ), 3.79 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 10.0 Hz, H-4 _E ), 3.74-3.69 (m, 2H, H-6b _D , H-5 _A ), 3.67 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.6 Hz, H-4 _D ), 3.45 (pt, IH, J _3,4 = 9.6 Hz, H-4 _A ), 3.41 (m, 2H, H-6a _E , H-6b _E ), 2.76-2.63 (m, 5H, H-5 _D , 2CH _2Lev ), 2.20 (s, 3H, CH _3Lev ), 1.47 (s, 3H, H _iPr ), 1.42 (s, 3H, H _iPr ), 1.39 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.3 Hz, H-6 _A ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.4 (C _Lev ), 172.6 (C _Lev ), 162.5 (C _NTC A), 139.0-138.5 (C _Ph ), 134.2 (CH=), 129.6-127.7 (CH _Ph ), 117.6 (=CH ₂ ), 101.8 (C-I ₀ , ¹ JcH = 163.0 Hz), 100.1 (C _iPr ), 98.7 (C-1 _A , ¹ Jc _H = 171.6 Hz), 95.1 (C-I _E , ¹ J _CH = 165.2 Hz), 93.2 (CCl ₃ ), 83.8 (C-3 _E ), 80.2 (C-4 _A ),

79.3 (C-2 _E ), 79.1 (C-4 _E ), 76.4, 75.5, 75.3 (3C, C _Bn ), 75.0 (C-3 _A ), 74.7 (C _Bn ), 74.6 (C-2 _A ), 73.8 (C _8n ), 73.3 (C-3 _D ), 71.6 (C-4 _D ), 70.3 (C-5 _E ), 68.7 (C-5 _A ), 68.3, 68.2 (2C, CAII*, C-6 _E *), 67.5 (C-5 _D ), 62.4 (C-6 _D ), 56.9 (C-2 _D ), 38.4 (CH _2Lev ), 30.2 (CH _3Lev ), 29.4 (C _iPr ), 28.5 (CH _2Lev ), 19.3

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₆₆ H ₇₆ NO ₁₇ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 1282.4076 m/z mesurée : 1282.4189

[M+NH ₄ ] ⁺ C ₆₆ H ₇₆ NO ₁₇ ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 1277.4523 m/z mesurée : 1277.4634 > (2-Désoxy-4,6-0-isopropylidène-3-0-lévulinoyl-2-trichloro acétamido-β-D- glucopyranosyl)-(l— >2)-[2,3,4,6-tétra-6>-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l-� ��3)]-4-O- benzyl-α-L-rhamnopyranose 112 :

Chemical Formula: C63H72CI3NO17

Exaα Mass: 1219,3866 MolecularWeight: 1221,6013

Le (l,5-cyclooctadiènebis(méthyldiphénylphosphine)iridium(I) hexafluorophosphate) (30 mg) est dissous dans du THF (11 mL) sous agitation. Le milieu subit 5 cycles dégazage vide/argon, 5 cycles dégazage vide/hyrdogène puis est mis sous hydrogène pendant 15 min. Le milieu subit alors une seconde fois 5 cycles dégazage vide/argon. La solution d'ester de lévulinoyle 111 (1,8 g, 1,5 mmol) dans du THF (15 mL) est transféré sur la solution de catalyseur activé. Le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2) montre la disparition de 111 (Rf== 0,5) et l'apparition d'un produit un peu moins polaire (Rf= 0,55).

Du diiode (740 mg, 2,9 mmol, 2 éq.) en solution dans un mélange THF/H ₂ O (8/2, 10 mL) est ajouté au milieu réactionnel. Le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2 et DCM/MeOH, 98/2) indique la disparition de l'intermédiaire (Rf= 0,55 et 1, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé beaucoup plus polaire (Rf= 0 et 0,3, respectivement). Pour stopper la réaction, une solution aqueuse de NaHSO ₃ 10% (4 mL) est ajoutée par fractions au milieu jusqu'à disparition de la coloration noire. Le milieu réactionnel est repris avec du DCM (50 mL) et la phase aqueuse est extraite au DCM (3 x 50 mL). Les phases organiques sont

regroupées et lavées avec une solution de NaCl _sat (3 x 15 mL), avec de l'H ₂ O (3 x 15 mL) puis séchées sur filtre séparateur de phases et concentrées à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (DCM/MeOH, 99/1— »97/3) pour obtenir majoritairement Panomère α 112 sous forme d'une huile jaune (1,4 g, 80%). Rf= 0,3 (DCM/MeOH, 98/2).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.45-7.05 (m, 26H, NH, CH _Ph ), 5.16 (d, IH, Ji, ₂ = 2.2 Hz, H-IA), 5.14 (d, IH, J _];2 = 3.7 Hz, H-I _E ) ₅ 5.12-5.07 (m, 4H, H _Bn ), 4.78-4.68 (m, 4H, H-3 _D , H _Bn , H-1 _D , H _3n ), 4.58-4.44 (m, 3H, H _Bn ), 4.30 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _Bn ), 4.21 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 2.9 Hz, J ₃ , ₄ = 9.6 Hz, H-3 _A ), 4.16-4.07 (m, 3H, H-2 _D , H-3 _E , H-5 _E ), 4.01 (m, IH, Ji, ₂ = 2.0 Hz, J ₂ , ₃ = 4.5 Hz, H- 2 _A ), 3.95 (dq, IH, J _4>5 = 9.4 Hz, H-5 _A ), 3.90 (dd, IH, J _1>2 = 2.4 Hz, J _2j3 = 9.6 Hz, H-2 _E ), 3.85 (dd, IH ₃ J _5j6a = 5.1 Hz, J _6a , _6b = 10.4 Hz, H-Oa ₀ ), 3.76 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.2 Hz, H-4 _E ), 3.70 (m, IH, H-Ob ₀ ), 3.66 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.5 Hz, H-4 _D ), 3.45 (pt, IH, J _3>4 = 9.5 Hz, H-4 _A ), 3.39 (m, 2H, H-6a _E , H-6b _E ), 3.30 (m, IH, OH-I), 2.77-2.61 (m, 5H, H-5 _D , 2CH _2Le v), 2.19 (s, 3H, CH _3L ev), 1.47 (s, 3H, H ₁ - _Pr ), 1.42 (s, 3H, H _iPr ), 1.38 (d, 3H, J _5;6 = 6.2 Hz, H-6 _A ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ206.2 (C _Lev ), 172.2 (C _Lev ), 162.1 (C _NTCA ), 138.6-137.6 (C _Ph ), 129.3- 127.2 (CHph), 101.4 (C-I ₀ , ¹ Jc _H = 167.7 Hz), 99.7 (CQ*), 94.6 (C-1 _E , ¹ J ₀ H = 167.2 Hz), 93.9 (C-I _A , ¹ J _CH = 171.7 Hz), 92.8 (CCl ₃ ), 83.4 (C-3 _E ), 79.7 (C-4 _A ), 78.8 (C-2 _E ), 78.7 (C-4 _E ), 76.2, 75.9, 75.1 (3C, C _Bπ ), 74.5 (C-2 _A ), 74.4 (C _Bn ), 74.1 (C-3 _A ) ₅ 73.3 (C _Bn ), 72.8 (C-3 _D ), 71.2 (C- 4 _D ), 69.9 (C-5 _E ), 68.3 (C-5 _A ), 67.8 (C-6 _E ), 67.1 (C-5 _D ), 62.0 (C-O ₀ ), 56.4 (C-2 _D ), 38.0 (CH _2Lev ), 29.8 (CH _3Lev ), 28.9 (C _iPr ), 28.0 (CH _2Lev ), 18.9 (C _iPr ), 17.9 (C-6 _A ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₆₃ H ₇₂ NOi ₇ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 1242.3763 m/z mesurée : 1242.3856 [M+NH ₄ ] ⁺ C ₆₆ H ₇₆ NOi ₇ ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 1237.4209 m/z mesurée : 1237.4213

> Trichloroacétimidate de (2-désoxy-4,6-(?-isopropylidène-3-(?-Iévulinoyl-2- trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l→2)-[2,3,4,6-t� �tra-0-benzyl-α-D- glucopyranosyl-(l→3)]-4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranose 109 :

Chemical Formula: C6sH72ClgN2θi7

Exact Mass: 1362,2962 Molecular Wright: 1365,9884

L'hémiacétal 112 (1,3 g, 1,1 mmol) est solubilisé dans du DCE (10 mL) et agité sous argon à -5 ⁰ C puis de la DBU (44 μL, 308 μmol, 0,28 éq.) et du trichloroacétonitrile (525 μL, 5,2 mmol, 5 éq.) sont ajoutés. Le milieu réactionnel est agité à cette température pendant 15 min puis il est déposé, sans aucun traitement, sur une colonne de gel de silice (flash chromatographie, Chex/EtOAc+5% NEt ₃ , 7/3→l/l) pour obtenir le trichloroacétimidate 109 une huile jaune (1,2 g, 85%). Rf= 0,45 (Chex/EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), J8.65 (s, IH, NH), 7.45-7.06 (m, 26H, NH, CH _H1 ), 6.22 (s, IH, H-U), 5.11-5.01 (m, 5H ₅ H-1 _E , 4H _Bn ), 4.80 (pt, IH, J _3,4 - 9.9 Hz, H-3 _D ), 4.78 (m, 2H, H _Bn ) 4.73 (d, IH, J _h2 = 8.4 Hz, H-1 _D ), 4.57-4.49 (m, 3H, H _Bn ), 4.33 (d, IH, J = 12.9 Hz, H _Bn ), 4.18-4.07 (m, 5H, H-2 _D , H-3 _A , H-2 _A , H-3 _E , H-5 _E ), 3.93-3.85 (m, 3H, H-5 _A , H-2 _E , H-Oa ₀ ), 3.82-3.74 (m, 2H, H-4 _E , H-Ob ₀ ), 3.71 (pt, IH, J _3;4 = 9.6 Hz, H-4 _D ), 3.56 (pt, IH, J _3;4 = 9.6 Hz, H-4 _A ), 3.42 (m, 2H, H-6a _E , H-6b _E ), 2.85 (m, IH, H-5 _D ), 2.77-2.58 (m, 4H, 2CH _2L e _v ), 2.20 (s, 3H, CH _3Lev ), 1.49 (s, 3H, Hi _Pr ), 1.43 (s, 3H, H _iPr ), 1.42 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.0 Hz, H-6 _A ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.0 (C _Lev ), 172.3 (C _Lev ), 162.1 (C _NTCA ), 160.2 (C=NH), 138.5-137.4 (C _Ph ), 129.2-127.4 (CHR ₁ ), 101.3 (C-I _D , ¹ JcH= 159.2 Hz), 99.8 (C _iPr ), 96.9 (C- 1 _A , ¹ JcH= 182.9 Hz), 95.0 (C-1 _E , ¹ J _0H = 165.6 Hz), 92.7 (CCl ₃ ), 91.1 (CCl ₃ ), 83.3 (C-3 _E ), 79.2 (C-4 _A ), 78.7 (C- 2 _E ), 78.6 (C-4 _E ), 76.3, 75.3, 75.0, 74.4 (4C, C _Bn ), 74.3 (C-3 _A ), 73.3 (C _Bn ), 72.7 (C-3 _D ), 72.2 (C-2 _A ), 71.2 (C-4 _O ), 71.1 (C-5 _A ), 70.1 (C-5 _E ), 67.9 (C-6 _E ), 67.3 (C-5 _D ), 61.9 (C-6 ₀ ), 56.5 (C- 2 _D ), 38.0 (CH _2Le v), 29.8 (CH _3Lev ), 29.0 (C _iPr ), 28.1 (CH ₂ Uv), 18.9 (C _iPr ), 17.9 (C-6 _A ). y AIIyI (2-désoxy-4,6-(?-isopropylidène-3-0-IévulinoyI-2-trichlor oacétamido-β-D- glucopyranosyl)-(l— >2)-([2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l— »3)]-4-0- benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l— »2)-3,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 113 :

> AUyI (2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-3-0-lévulinoyl-2-trichloro acétamido-β-D- glucopyranosyl)-(l-→2)-([2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-gluc opyranosyl-(l→3)]-4-0- benzyl-β-L-rhamnopyranosyl)-(l— >2)-3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranoside

114 :

Chemical Formula C ₆₆ Hg ₈ CI ₃ NO ₂ I Chemical Formula CggHg8CI ₃ Nθ2i

Exact Mass 1585,5697 Exact Mass 1585,5697 Molecular Weight 1588,0514 Molecular Weight 1588,0514

Du TMSOTf (IO ₅ O μL, 56 μmol, 0,3 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 58 (71 mg, 185 μmol) et de donneur 109 (380 mg, 280 μmol, 1,5 éq.) dans du DCM (5 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (160 mg), agitée sous argon à -78°C. Après 15 min sous agitation, le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 7/3) indique la disparition de 58 (Rf= 0,5) et l'apparition de deux nouveaux composés plus polaires (Rf= 0,6 et 0,65). La réaction est stoppée par l'addition de triéthylamine (1 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 9/1— >1/1) pour obtenir par ordre d'élution à Panomère α 113 sous forme d'une huile incolore (130 mg, 44%) puis à l'anomère β 114 sous forme d'une huile incolore (130 mg,

113 : Rf = 0,65 (Tol/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ: a : 7.49-7.07 (m, 36H, NH, CH _Ph ), 5.89 (m, IH, CH=), 5.27 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.21 (m, IH, J _cis = 10.3 Hz, =CH ₂ ), 5.16 (d, IH, J _K2 = 3.6 Hz, H-I _E ), 5.13-5.05 (m, 5H, H-I _A , 4H _Bn ), 4.93 (d, IH, J= 10.8 Hz, H _Bn ), 4.83-4.76 (m, 5H ₅ H-3 _D , 2H _Bn , H-1 _D , H-IB), 4.73-4.48 (m, 6H, H _Bn ), 4.32 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _Bn ) ₅ 4.20-4.09 (m, 6H ₅ H-3 _E , H-2 _D5 H-2 _A , H-3 _A , HAII, H-5 _E ), 4.00 (dd, IH, J _1;2 = 2.9 Hz, J ₂₎₃ = 5.0 Hz, H-2 _B ), 3.98 (m, IH ₅ HAII), 3.95-3.89 (m, 2H, H-3 _B , H-2 _E ), 3.83 (pt, IH, J _3>4 = 9.2 Hz ₅ H-4 _E ), 3.81 (m, IH, H-5 _B ), 3.73 (dq, IH ₅ J _4,5 = 9.4 Hz ₅ J ₅ , ₆ = 6.1 Hz, H-5 _A ), 3.64 (pt, IH ₅ J _3,4 = 9.5 Hz, H-4 _D ), 3.54-3.45 (m, 5H, H-6a _D , H-4 _A , H-4 _B , H-6a _E , H-6b _E ), 3.38 (m, IH ₅ H-6b _D ) ₅ 2.77 (m, IH ₅ H-5 _D ), 2.77-

2.62 (m, 4H, 2CH _2Lev ), 2.20 (s, 3H, CH _3Le v), 1.44 (s, 3H, H _iPr ), 1.40 (d, 3H, J _5j6 = 6.3 Hz, H-

6 _B ), 1-39 (s, 3H ₅ H _iPr ), 1.32 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ : a : 206.2 (C _Lev ), 172.3 (C _Lev ), 162.2 (C _NTCA ), 138.6-137.5 (C _Ph ) ₅ 133.8

(CH=), 129.2-127.3 (CH _Ph ), 117.2 (=CH ₂ ), 101.3 (C-1 _D , ¹ J _0H = 162.0 Hz), 100.9 (C-I _A , ¹ ZCH =

171.3 Hz), 99.7 (C _iPr ), 97.9 (C-1 _B , ¹ JCH = 170.2 Hz), 94.6 (C-I _E , ¹ ^CH = 165.1 Hz), 92.8

(CCl ₃ ), 83.4 (C-3 _E ), 80.4 (C-4 _B ), 79.8 (C-4 _A ), 79.5 (C-2 _E ), 78.6 (C-4 _E ), 78.4 (C-3 _B ), 76.1,

75.3, 75.2, 74.9 (4C, C _Bn ), 74.8 (C-2 _B ), 74.4 (C-3 _A ), 74.1 (C _Bn ), 73.8 (C-2 _A ), 73.5 (C _Bn ), 72.9

(C-3 _D ), 72.1 (C _Bn ), 71.3 (C-4 _D ), 69.9 (C-5 _E ), 68.6 (C-5 _B ), 68.0 (C-5 _A ), 67.9 (C-6 _E ), 67.7 (C _A11 ),

67.2 (C-5 _D ), 61.7 (C-6 _D ), 56.6 (C-2 _D ), 38.0 (CH _2Le v), 29.7 (CH _3Le v) ₃ 29.0 (C _iPr ), 28.1 (CH _2Lev ),

19.0 (CSPγ), 18.0 (C-6A), 17.9 (C-6 _B ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₈₆ H ₉₈ NO ₂₁ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 1608.5594 m/z mesurée : 1608.5730 [M+NH ₄ ] ⁺ C ₈₆ H ₉₈ NO ₂₁ ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 1603.6041 m/z mesurée : 1603.6112 114 : Rf = 0,6 (Tol/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ : β : 7.66-7.05 (m, 36H, NH, CH _Ph ), 5.89 (m, IH, CH=), 5.31 (m, IH, J _tra n _s ^≈ 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.21 (m, IH, J _cis = 10.3 Hz, =CH ₂ ), 5.20 (s, 2H, H _Bn ), 5.11 (d, IH, J _lj2 = 3.5 Hz, H-IE), 5.05 (d, 2H, H _Bn ), 4.95-4.89 (m, 4H, H-I _D , H-3 _D , 2H _Bn ), 4.86 (m, IH, J _1;2 = 2.7 Hz, H-1 _B ), 4.79 (d, IH, J= 10.5 Hz, H _Bn ), 4.64-4.48 (m, 7H, 3H _Bn , H-1 _A , 3H _Bn ), 4.34 (d, IH, J = 12.2 Hz, H _Bn ), 4.30-4.11 (m, 6H, H-2 _D , H _A11 , H-2 _B , H-2 _A , H-3 _E , H-5 _E ), 4.00 (m, IH ₅ H _A I _I ), 3.99-3.93 (m, 2H, H-3 _B , H-2 _E ), 3.88 (dd, IH, J ₅ , _6a = 5.2 Hz, J _6a , _6b = 10.6 Hz, H-Oa ₀ ), 3.80 (dd, IH, J _2,3 = 2.5 Hz, J ₃ , ₄ = 9.5 Hz, H-3 _A ), 3.78-3.67 (m, 3H, H-5 _B , H-4 _E , H-Ob _n ), 3.60- 3.40 (m, 5H, H-4 _D , H-4 _A , H-4 _B , H-6a _E , H-6b _E ), 3.28 (dq, IH, J _4,5 = 9.2 Hz, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H- 5 _A ), 2.83 (m, IH, H-5 _D ), 2.78-2.64 (m, 4H, 2CH _2Lev ), 2.18 (s, 3H, CH _3Lev ), 1.37 (s, 3H, H _iPr ), 1.40 (m, 6H, H-6 _A , H-6 _B ), 1.32 (s, 3H, H _iPr ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ: β : 206.1 (C _Lev ), 172.2 (C _Lev ), 162.0 (CNT _CA ), 139.1-137.5 (C _Ph ), 134.0 (CH=), 129.1-127.3 (CH _Ph ), 117.2 (=CH ₂ ), 100.7 (C-I _D , ¹ J _C H = 163.8 Hz), 99.7 (C _iPr ), 97.5 (C-U, ¹ JcH = 155.1 Hz), 96.9 (C-1 _B , ¹ J _0H = 167.2 Hz), 94.1 (C-1 _E , ¹ JcH = 167.7 Hz), 92.8 (CCl ₃ ), 83.7 (C-3 _E ), 81.0 (C-4 _B ), 79.7 (C-4 _A ), 78.7 (C-4 _E ), 77.8 (C-2 _E ), 77.4 (C-3 _B ), 76.4 (C- 3 _A ), 76.2, 75.3, 75.1, 74.6, 73.6 (5C, C _Bn ), 73.3 (3C, C-2 _A ^* , C-2 _B ^* , C-3 _D ^* ), 73.5 (C _Bn ), 72.4 (C- 5 _A ), 71.3 (C-4 _D ), 71.0 (C _Bn ), 69.9 (C-5 _E ), 68.0 (2C, C-5 _B ^* , C-6 _E ^* ), 67.8 (C _A11 ), 67.0 (C-5 _D ), 62.4 (C-6D), 56.7 (C-2 _D ), 38.0 (CH _2Lev ) ₅ 29.8 (CH _3Lev ), 29.0 (C _iPr ), 28.1 (CH _2Le v), 19.9 (C _iPr ), 18.4 (C-6 _A ), 18.0 (C-6B).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₈₆ H ₉₈ NO _2I ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 1608.5594 m/z mesurée : 1608.5914

[M+NH ₄ ] ⁺ C ₈₆ H ₉₈ NO _2I ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 1603.6041 m/z mesurée : 1603.6248 Procédé 14bis :

> AHyI (3-0-acétyl-2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-2-trichloroacé tamido-β-D- glucopyranosyl)-(l-→2)-[2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D-gluco pyranosyl-(l— >3)]-(4-O- benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→2)-3,4-di-O-benzyI-α-L-r hamnopyranoside 115 :

Du TMSOTf (69,0 μL, 380 μmol, 0,3 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 108 (1,5 g, 1,3 mmol) et de donneur 2 (1,2 g, 2,2 mmol, 1,7 éq.) dans du Toi (30 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (1,1 g), agitée sous argon à -40°C. Après 1 h d'agitation, le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 85/15) indique la disparition de 108 (Rf = 0,5) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf = 0,45). La réaction est stoppée par addition de triéthylamine (1 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à Pévaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 95/5→l/l) pour obtenir le glycoside d'allyle 115 sous forme d'un solide blanc (1,9 g, 95%). Rf= 0,45 (Tol/EtOAc, 85/15).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), J7.54-7.09 (m, 36H, NH, CH _Ph ), 5.91 (m, IH, CH=), 5.30 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.23 (m, IH, J _cis = 10.5 Hz, =CH ₂ ), 5.23-5.19 (m, 2H, H-I _E , H _8n ), 5.15 (bs, IH, H-U), 5.11 (d, IH, J = 10.9 Hz, H _Bn ), 5.08 (d, IH, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.96 (d, IH, J = 10.8 Hz ₃ H _Bn ), 4.88-4.78 (m, 5H, H _Bn , H-I _D , H-3 _D , 2H _Bn ), 4.75-4.66 (m, 3H, H _Bn ), 4.63-4.58 (m, 3H, H-IB, 2H _Bn ), 4.52 (d, IH, J= 11.0 Hz ₅ H _Bn ), 4.36 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _Bn ), 4.25-4.12

(m, 6H ₅ H-2 _D , H-3 _E , H-2 _AS H-3 _A , H _A π, H-5 _E ), 4.03 (dd, IH ₃ J _2;3 = 2.8 Hz ₅ H-2 _B ), 4.01-3.92 (m, 3H ₅ H _A π, H-2 _E , H-3 _B ), 3.88-3.80 (m, 2H, H-4 _E , H-5 _A ), 3.75 (dq, IH, J _4;5 = 9.4 Hz, H-5 _B ), 3.68 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.5 Hz ₅ H-4 _D ) ₅ 3.57-3.40 (m, 6H, H-6a _D , H-4 _A , H-4 _B , H-6a _E , H-6b _E , H-6b _D ) ₅ 2.82 (m, IH, H-5 _D ), 2.11 (s, 3H ₅ H _Ac ), 1.49 (s, 3H, H _iPr ), 1.44 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz ₅ H-6 _A ), 1.41 (s, 3H ₅ H _iPr ), 1.36 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _B ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £170.8 (C _Ac ), 162.2 (C _NTCA ), 138.6-137.6 (C _Ph ), 133.9 (CH=), 129.1- 127.4 (CH _Ph ), 117.2 (^CH ₂ ), 101.4 (C-I ₀ , ¹ JC _H = 164.1 Hz) ₅ 101.0 (C-IA, ¹ ^CT = 172.5 Hz) ₅ 99.7 (CiPr) ₅ 97.9 (C-I _B5 ¹ JCH = 167.9 Hz), 94.6 (C-1 _E , ¹ J _CH = 167.1 Hz) ₅ 92.8 (CCl ₃ ), 83.5 (C- 3 _E ), 80.5 (C-4 _B ), 79.8 (C-4 _A ), 79.6 (C-3 _B ), 78.6 (C-4 _E ), 78.2 (C-2 _E ), 76.2, 75.3, 75.2, 75.0 (4C, C _Bn ), 74.9 (C-2 _B ), 74.4 (C-3 _A ), 74.0 (C _3n ), 73.9 (C-2 _A ), 73.5 (C _13n ), 72.6 (C-3 _D ), 72.2 (C _Bn ), 71.3 (C-4 _D ), 70.0 (C-5 _E ), 68.7 (C-5 _A ), 68.0 (C-5 _B ), 67.9 (C-6 _E ), 67.7 (C _A ,,) ₅ 67.4 (C-5 _D ), 61.8 (C-6 _D ), 56.6 (C-2 _D ), 29.0 (C _iPr ), 20.9 (C _Ac ), 19.1 (C _iPr ) ₅ 18.0 (C-6 _B ), 17.9 (C-6 _A ). HRMS (ESI ⁺ ) : - [M+Naf C ₈₃ H ₉₄ NO ₂₀ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 1552.5332 m/z mesurée : 1552.5430

[M+NH ₄ ] ⁺ C ₈₃ H ₉₄ NO ₂₀ ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 1547.5779 m/z mesurée : 1547.5880

> AIIyI (2-désoxy-4,6-0-isopropyUdène-2-trichIoroacétamido-β-D-g lucopyranosyl)- (l→2)-[23A6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l→3)]-( 4-0-benzyl-α-L- rhamnopyranosyl)-(l— >2)-3,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 110 :

Chemical Formula: CSiHg ₂ OIsNO ₁₉

Exact Mass: 1487,5329 MoIecular Weight: 1489,9515

Le glycoside d'allyle 115 (1,9 g, 1,3 mmol) est dissous dans du MeOH (20 mL) puis du carbonate de potassium (175 mg, 1,3 mmol, 1 éq.) est ajouté au milieu réactionnel. Après 1 nuit sous agitation, le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 7/3) indique la disparition de 115 (Rf= 0,8) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,45). Les solvants sont alors évaporés et

l'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 9/l-→7/3) pour conduire à l'alcool 110 (1,7 g, 92%) sous forme d'un solide blanc. Rf= 0,45 (Tol/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), J7.43-7.08 (m, 36H, NH, CH _Ph ), 5.88 (m, IH ₅ CH=), 5.29 (m, IH, J _tran s = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.23-5.20 (m, 2H, H-I _E , =CH ₂ ), 5.14-5.05 (m, 4H, H _Bn , H- 1 _A , 2H _Bn ), 4.95 (d, IH, J = 10.8 Hz, H _B π), 4.90 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _Bn ), 4.83-4.77 (m, 3H, 2H _Bn , H-1 _B ), 4.70- 4.61 (m, 5H, 2H _Bn , H-I ₀ , 2H _Bn ), 4.58-4.52 (m, 2H, H _Bn ), 4.37 (d, IH, J= 12.0 Hz, H _Bn ), 4.19- 4.13 (m, 5H, H-3 _A , H-2 _A , H-3 _E , H _Aπ , H-5 _E ), 4.02 (dd, IH, J _2>3 = 2.8 Hz, H-2 _B ), 4.01-3.92 (m, 5H, H _AI1 , H-3 _B , H-2 _D , H-4 _E , H-2 _E ), 3.80 (dq, IH, J _4,5 = 9.2 Hz, H-5 _A ), 3.73 (dq, IH, J _4;5 = 9.4 Hz, H-5 _B ), 3.56 (dd, IH, J ₅ , ₆ = 5.3 Hz, J ₆ a, _δb = 10.8 Hz, H-6a _D ), 3.52-3.47 (m, 4H, H-6a _E , H- 6b _E , H-4 _A , H-4 _B ), 3.42-3.35 (m, 2H, H-4 _D , H-6b _D ), 2.85 (m, IH, OH), 2.82 (m, IH, H-5 _D ), 2.45 (pt, IH, J _3>4 = 9.7 Hz, H-3 _D ), 1.47 (s, 3H, H _iPr ), 1.46 (s, 3H, H _iPr ), 1.41 (d, 3H, J _5>6 = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1-35 (d, 3H, J ₅₎₆ = 6.2 Hz, H-6 _B ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ 163.7 (C _NTCA ), 138.6-137.5 (C _Ph ), 133.8 (CH=), 129.3-127.4 (CH _Ph ), 117.2 (=CH ₂ ), 101.0 (C-1 _D , ¹ JcH = 159.1 Hz), 101.0 (C-I _A , ¹ JC _H = 170.3 Hz), 99.7 (C _iPr ), 97.9 (C-1 _B , ¹ JcH = 168.6 Hz), 94.1 (C- 1 _E , ¹ J _C H = 166.2 Hz), 92.7 (CCl ₃ ), 83.3 (C-3 _E ), 80.5 (C-4 _B ), 79.8 (C-4 _A ), 79.7 (C-2 _E ), 79.5 (C-3 _B ), 78.7 (C-4 _E ), 76.3, 75.4, 75.3, 74.9 (5C, C _Bn ), 74.7 (C- 2 _B ), 74.1 (C-3 _A ), 74.0 (C-4 _D ), 73.5 (C _Bn ), 73.3 (C-2 _A ), 73.0 (C-3 _D ), 72.1 (C _Bn ), 70.0 (C-5 _E ), 68.7 (C-5 _A ), 68.0 (C-5 _B ), 67.9 (C-6 _E ), 67.7 (C _M ), 67.1 (C-5 _D ), 61.4 (C-6 _D ), 58.8 (C-2 _D ), 29.1 (Ci _P r), 19.0 (CiPr), 18.0 (C-6B), 17.8 (C-6 _A ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₈₁ H ₉₂ NO ₁₉ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 1510.5227 m/z mesurée : 1510.5243

[M+NH ₄ ] ⁺ C ₈₁ H ₉₂ NO ₁₉ ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 1505.5673 m/z mesurée : 1505.5669 Procédé 14ter :

> AUyI (3-0-acétyl-2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-2-trichIoroacé tamido-β-D- glucopyranosyl)-(l-→2)-[2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-gluco pyranosyI-(l-→3)]-(4-0- benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l—>2)-3,4-di-O-benzyl-α- L-rhamnopyranoside 115' :

Chemical Formula: C ₈₄ Hg ₄ CI ₃ NO ₂ Exact Mass: 1573,53 Molecular Wβight: 1576,00

De l'acide triflique (4 μL, 45 μmol, 0,3 éq.) est additionné à une suspension d'accepteur 108 (163 mg, 143 μmol), de donneur 1 (110 mg, 185 μmol, 1,3 éq.) et de tamis moléculaire 4 â (350 mg), dans du Toi (5 mL), agitée sous argon à -40°C. Après 1 h d'agitation à cette température complétée d' 1 h 30 d'abitation à TA, temps au bout duquel du donneur 1 (20 mg, 34 μmol, 0,23 éq.) est ajouté. L'agitation est poursuivie une nuit à TA. Le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3) indique la présence d'un nouveau composé plus polaire que 108. La réaction est stoppée par addition de triéthylamine puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. Le brut réactionnel est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 100/0→70/30) pour obtenir le glycoside d'allyle 115' (196 mg,

Rf= 0,33 (Chex/EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ7.54-7.09 (m, 36H, NH, CH _Ph ), 5.91 (m, IH, CH=), 5.30 (m, IH, J _trcm = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.23 (m, IH, J _cis = 10.5 Hz, =CH ₂ ), 5.23-5.19 (m, 2H, H-I & H _Bn ), 5.15 (bs, IH, H-I _A ), 5.11 (d, IH, J = 10.9 Hz, H _Bη ), 5.08 (d, IH, J = 11.0 Hz, H _8n ), 4.96 (d, IH, J = 10.8 Hz, H _Bn ), 4.88-4.78 (m, 5H, H _Bn , H-I ₁₃ , H-3 _D , 2H _Bη ), 4.75-4.66 (m, 3H, H _βη ), 4.63-4.58 (m, 3H, H-1 _B , 2H _Bn ), 4.52 (d, IH, J = ILO Hz, H ₈ J, 4.36 (d, IH, J = 12.0 Hz, H _Bη ), 4.25-4.12 (m, 6H, H-2 _D , H-3 _E , H-2 _A , H-3 _A , H _Mι , H-5 _E ), 4.03 (dd, IH, J ₂ ,3 = 2.8 Hz, H-2 _B ), 4.01-3.92 (m, 3H, H _A U, H-2 _E , H-3 _B ), 3.88-3.80 (m, 2H, H-4 _E , H-5 _A ), 3.75 (dq, IH, J ₄ ,5 = 9.4 Hz, H-5 _B ), 3.68 (pt, IH, J _3A = 9.5 Hz, H-4 _D ), 3.57-3.40 (m, 6H, H-6a _D , H-4 _A , H-4 _B , H-6a _E , H-6b _E , H-6b _D ), 2.82 (m, IH, H-5 _D ), 2.11 (s, 3H, H _Aç ), 1.49 (s, 3H, H _iPr ), 1.44 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6A), 1.41 (s, 3H, H _iPr ), 1.36 (d, 3H, J _s , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _B ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ 170.8 (C _Aς ), 162.2 (C _NTCA ), 138.6-137.6 (C _Ph ), 133.9 (CH=), 129.1-127.4 (CHF ₁₁ ), 117.2 (=CH ₂ ), 101.4 (C-1 _D , ¹ JcH = 164.1 Hz), 101.0 (C-I _A , ¹ JcH = 172.5 Hz), 99.7 (CiPr), 97.9 (C-1 _B , ¹ JC _N = 167.9 Hz), 94.6 (C-I _E , ¹ J ₀ H = 167.1 Hz), 92.8 (CCl ₃ ), 83.5 (C-3E),

80.5 (C-4 _B ), 79.8 (C-4 _A ), 79.6 (CS s), 78.6 (C-4 _E ), 78.2 (C-2 _E ), 76.2, 75.3, 75.2, 75.0 (4C, C _Bn ), 74.9 (C-2 _B ), 74.4 (CS ₄ ), 74.0 (C _Bn ), 73.9 (CS ₄ ), 73.5 (C _Bη ), 72.6 (C-3 _D ), 72.2 (C _Bη ), 71.3 (C-4 _D ), 70.0 (CSs), 68.7 (CS _A ), 68.0 (CS _B ), 67.9 (C-6 _E ), 67.7 (C _AU ), 67.4 (CS _D ), 61.8 (C-6D), 56.6 (C-2 _D ), 29.0 (C _iPr ), 20.9 (C _Aç ), 19.1 (C _iPr ), 18.0 (C-6 _B ), 17.9 (C-O ₄ ). HRMS (ESt) : [M+Naf C ₈₄ H ₉₄ NO ₂₂ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 1598.5234 m/z mesurée : 1598.5170

> Allyl (2-trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l→2)-[2,3,4,6 -tétra-(?-benzyl- α-D-glucopyranosyl-(l→^3)]-(4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranos yl)-(l— >2)-3,4-di-O- benzyl-α-L-rhamnopyranoside 115" :

Chemical Formula: C ₇₈ H ₈₈ CI ₃ NOi ₉

Exact Mass: 1447,50 Molecular Weight: 1449,89

Une solution méthanolique de MeONa 0,5 M (1,4 mL, 0,75 mmol, 6 éq.) est additionnée à une suspension de tétrasaccharide 115' (185 mg, 117 μmol) dans du méthanol (5 mL). Après 3 h d'agitation à TA, le suivi par CCM (CDCM/MeOH, 95/5) indique la présence d'un nouveau composé plus polaire. Le milieu réactionnel est neutralisé par addition de résine échangeuse d'ions Dowex X8 (H ⁺ ) et filtré. Le filtrat est concentré à l'évaporateur rotatif, puis le brut réactionnel est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (DCM/MeOH, 95/5) pour obtenir le triol 115" (135 mg, 79%). Rf= 0,58 (DCM/ MeOH, 9/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ 7.54-7.09 (m, 36H, NH, CH _Pli ), 5.91 (m, IH, CH=), 5.30 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, -CH ₂ ), 5.23 (m, IH, J _cis = 10.5 Hz, =CH ₂ ), 5.23-5.19 (m, 2H, H-1 _E , H _Bn ), 5.15 (bs, IH ₁ H-I ₄ ), 5.11 (d, IH, J = 10.9 Hz, H _Bn ), 5.08 (d, IH, J = 11.0 Hz, H _Bn ), 4.96 (d, IH, J = 10.8 Hz, H _Bn ), 4.88-4.78 (m, 5 H, H _Bn , H-I _D , HS _D> 2H _Bn ), 4.75-4.66 (m, 3 H, H _Bl J, 4.63-4.58 (m, 3H, H-1 _B , 2H _B11 ), 4.52 (d, IH, J = 11.0 Hz, H _Bn ), 4.36 (d, IH, J = 12.0 Hz, H _Bη ), 4.25-4.12 (m, 6H, H-2 _D , HS _E , H-2 _A , HS ₄ , HAU, HSE), 4.03 (dd, IH, J ₁₃ = 2.8 Hz, H-2 _B ), 4.01-3.92 (m,

3H, H AU, H-2 _E , H-3 _B ), 3.88-3.80 (m, 2H, H-4 _E , HS ₄ ), 3.75 (dq, IH, J ₄ , ₅ = 9.4 Hz, H-5 _B ), 3.68 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.5 Hz, H-4 _D ), 3.57-3.40 (m, 6H, H-6a _D , H-4 _A , H-4 _B , H-6a _E , H-6b _E , H-6b _D ), 2.82 (m, IH, H-5 _D ), 2.11 (s, 3H, H _AQ ), 1.49 (s, 3H, H _iPr ), 1.44 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6A), 1.41 (s, 3H, HtPr), 1.36 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _B ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ 170.8 (C _Ac ), 162.2 (C _NTCA ), 138.6-137.6 (C _P J, 133.9 (CH=), 129.1-127.4 (CH _Ph ), 117.2 ( ^≈ CHJ, 101.4 (C-I _a ^! J _CH = 164.1 Hz), 101.0 (C-U ¹ Jc _H = 172.5 Hz), 99.7 (CtPr), 97.9 (C-1 _B , ' ^j _CH = 167.9 Hz), 94.6 (C-I _E , ¹ J _CH = 167.1 Hz), 92.8 (CCl ₃ ), 83.5 (C-3 _E ), 80.5 (C-4 _B ), 79.8 (C-4 _A ), 79.6 (CS _E ), 78.6 (C-4ε), 78.2 (C-2 _E ), 76.2, 75.3, 75.2, 75.0 (4C, CBJ, 74.9 (C-2 _B ), 74.4 (CS ₄ ), 74.0 (C _B J, 73.9 (C-2 _A ), 73.5 (C _B J, 72.6 (CS ₀ ), 72.2 (CBJ, 71.3 (C-4 _D ), 70.0 (C-5 _E ), 68.7 (CS ₄ ), 68.0 (CS ₈ ), 67.9 (C-6 _E ), 67.7 (C _AU ), 67.4 (CS Q}, 61.8 (C-6 _D ), 56.6 (C-2 _D ), 29.0 (Ci _Pr ), 20.9 (C ₄ J, 19.1 (C _iPr ), 18.0 (C-O ₉ ), 17.9 (C-O ₄ ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₇₈ Hs ₈ NOi ₉ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 1472.4913 m/z mesurée : 1772 .4921

> Propyl 2-acétamido-2-désoxy-β-D-glucopyranosyl-(l— >2)-[α-D-glucopyranosyl- (l→3)]-α-L-rhamnopyranosyl-(l→2)-α-L-rhamnopyranoside VHI :

Chemical Formula: C ₂ gH ₅₁ Nθig

Exact Mass: 717,31 MolecularWeight: 717,71

Voie 1. Du Pd/C10% (108 mg) est ajouté à une solution dégazée de triol 115" (108 mg, 75 μmol) dans de Péthanol (10 mL) complété d'acide chlorhydrique IM (110 μL). La suspension est placée sous atmosphère d'hydrogène (1 bar) et agitée une nuit à TA. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 7/1/02 montre la disparition de 115" et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire. Le milieu réactionnel est filtré sur Célite, et le filtrat est concentré à l'évaporateur rotatif. Le résidu est repris dans de l'éthanol (10 mL) auquel est ajouté Et ₃ N (100 μL). Le milieu est dégazé, du Pd/C 10% (100 mg) est ajouté et le milieu réactionnel est agité sous atmosphère d'hydrogène pendant une nuit. Le suivi par CCM indique de nouveau la présence d'un composé plus polaire. Après filtration de la suspension et évaporation du

filtrat, le résidu obtenu est purifié par HPLC (colonne C- 18 Kromasil, TFA aqueux O ₃ OlM /CH ₃ CN, 100/0-→60/40 en 20 min, 5 mL/min, 215 nm) pour conduire au tétrasaccharide cible VIII sous forme d'une poudre blanche après lyophilisation (36 mg, 68%). Voie 2. Une solution d'acide triflique (2 μL, 23 μmol, 0,35 éq.) dans du toluène anhydre (98 μL) est additionnée à une suspension d'accepteur 108 (82 mg, 66 μmol), de donneur 1 (80 mg, 135 μmol, 2 éq.) et de tamis moléculaire 4 â (200 mg), dans du Toi (2 mL), agitée sous argon à -30°C. Après 1 h d'agitation à cette température complétée d'1 h d'abitation à TA, temps au bout duquel du donneur 1 (10 mg, 17 μmol, 0,25 éq.) est ajouté au milieu réactionnel refroidi à -30 ⁰ C. L'agitation est poursuivie 3 h alors que le bain revient lentement à TA. La réaction est stoppée par addition de triéthylamine puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. Le brut réactionnel est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 100/0→70/30) pour obtenir 115' (100 mg). Le glycoside d'allyle est solubilisé dans 1 mL de DCM et une solution 0,5 M de méthoxide de sodium méthanolique (500 μL) est ajoutée. Après 3 h d'agitation à TA, le suivi par CCM (CDCM/MeOH, 9/1) indique la présence d'un nouveau composé plus polaire révélé à la ninhydrine. Le milieu réactionnel est neutralisé par addition de résine échangeuse d'ions Dowex X8 (H ⁺ ) et filtré. Le filtrat est concentré à l'évaporateur rotatif, puis le brut réactionnel est repris dans de l'éthanol (2 mL) et traité par de l'anhydride acétique (1 mL). Après 2 h à TA, les volatiles sont covaporés au toluène et le brut réactionnel est chromatographie (DCM/MeOH, 95/5) pour obtenir l'acétamidotriol (54 mg, 67 %). Ce dernier est repris dans l'éthanol (5 mL) complété d'acide chlorhydrique IM (110 μL) et la solution est dégazée. Du Pd/C10% (50 mg) est ajouté et la suspension est placée sous atmosphère d'hydrogène (1 bar) et agitée une nuit à TA. Après filtration, concentration, purification par HPLC et lyophilisation, le tétrasaccharide cible VIII est isolé (19 mg, 40% à partir de 108). Rf= 0,32 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/2).

RAdN ¹ H (D ₂ O), δ5.06 (d, IH, J ₁₂ = 3.7 Hz, H-I _E ), 4.83 (d, IH, J ₁₂ = 1.6 Hz, H-I ₄ ), 4.76 (d, IH, J _u = 1.3 Hz, H-Ic), 4.73 (d, IH, J ₁₂ = 8.6 Hz, H-IQ), 4.18 (m, IH, H-2A), 3.95 (m, IH, HS _E ), 3.88 (m, IH, H-5 _C ), 3.83-3.79 (m, 2H, H-3 _A , H-6a _D ), 3.74 (m, IH, H-2 _D ), 3.72 (m, IH, H-3 _E ), 3.70-3.67 (m, 3H, H-2 _C , H-6a _E , H-6b _E ), 3.65-3.59 (m, 4H, H-6b _D , H-3 _C , H-5 _A , H-2 _E ), 3.52 (m, IH, H _Pr ), 3.42-3.28 (m, 6H, H-4 _E , H _Pr , H-4 _D , H-5 _D , H-3 _D , H-4 _C ), 3.23 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.7 Hz, H-4A), 2.01 (s, 3H, H _NAq ), 1.49 (sex, 2H, CH ₂ ), 1.16 (d, 3H, J _5ι6 = 6.2 Hz, H-O ₄ ), 1.12 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.3 Hz, H-6 _C ), 0.80 (t, 3H, J = 7.4 Hz, CH ₃ ).

RMN ¹³ C (D ₂ O), 5174.5 (C _NA ç), 101.8 (C-I ₀ , ¹ Jc _H = 160.3 Hz), 101.6 (C-I _c ¹ JcH ^≈ 170.5 Hz), 99.0 (C-1 _A , 'j _CH = 172.7 HZ), 94.8 (C-I _& ¹ Jc _H = 169.8 Hz), 81.7 (C-3 _D ), 76.4 (C-4 _D ), 74.7 (C-2 A), 74.1 (CS ₄ ), 73.5 (CS ς), 72.2 (C-4 _C ), 71.7 (CS _E ), 71.6 (C-2 _E ), 71.2 (C-2ç), 71.0 (C-4 _A ), 70.5 (CSc), 70.0 (C _Pr ), 69.6 (CS _n ), 69.3 (CSc), 69.1 (CS ₄ ), 68.6 (C-4 _E ), 60.9 (C- 6 _D ), 60.6 (C-6 _E ), 55.9 (C-2 _D ), 22.8 (C _NAς ), 22.3 (CH ₂ ), 17.0, 16.7 (C-6 _A , C-6 _C ), 10.2 (CH ₃ ). MS (ESI ⁺ ) pour C ₂₉ H _5I NO ₁₉ : m/z théorique 717.32, trouvée 718.3 [M+Naf Procédé 15 :

> AHyI (2-acétamido-2-désoxy-β-D-gLucopyranosyl)-(l→2)-[2,3,4, 6-tétra-(9-benzyI- α-D-glucopyranosyl-(l-→3)]-4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosi de 117 :

> AHyI (2-désoxy-2-méthylcarbamate-β-D-glucopyranosyl)-(l→2)-[ 2,3,4,6-tétra-0- benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l→3)]-4-0-benzyl-α-L-rhamnopy ranoside 118 :

Chemical Formula: CsgH _β gNO-js Chemical Formula: CsβHggNO-je

Exact Mass: 1019,4667 Exact Mass: 1035,4616 MoIecular Weight: 1020,1662 MoIecular Weight: 1036,1656

Après addition de NaOMe 0,5 M (4,8 mL, 2,4 mmol, 6 éq.) au tri-0-acétyle 22 (500 mg, 400 μmol) en solution dans du DCM (38 mL), le milieu réactionnel est agité pendant 9 h et suivi par CCM (DCM/MeOH, 92/8 et EtOAc/MeOH-, 98/2). Après avoir observé la disparition de 22 et l'apparition d'un produit plus polaire révélé par la ninhydrine (Rf= 0,35 et 0,2, respectivement), le milieu réactionnel est dilué par addition de MeOH (77 mL) puis de l'anhydride acétique (300 μL, 3,2 mmol, 8 éq.) est additionné au milieu réactionnel. Après agitation pendant 2 h, on observe l'apparition d'un nouveau produit en CCM (Rf= 0,4 et 0,25, respectivement). Les solvants sont alors évaporés et le solide obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (DCM/MeOH, 98/2→95/5) pour conduire par ordre d'élution au carbamate non désiré 118 sous forme d'un solide blanc (20 mg, 5%) puis au triol 117 sous forme d'un solide blanc (371 mg, 90%). 117 : Rf= 0,4 (DCM/MeOH, 92/8).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.41-7.08 (m, 26H, NH, CH _Ph ), 5.88 (m, IH ₅ CH=), 5.29 (m, IH, J _tran s = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.21 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.09-5.06 (m, 2H, H-1 _E , H _Bn ), 5.01-4.96 (m, 2H, H-I _A , H _Bn ), 4.91-4.87 (m, 2H, H _Bn ), 4.81-4.76 (m, 2H, J= 10.3 Hz, H _Bn ), 4.63-4.58

(m, 2H ₅ H _Bn ), 4.50 (d, IH ₅ J= 10.9 Hz, H _Bπ ), 4.62 (m, IH, H- 1 _D ) _> 4.34 (m, IH ₅ H _Bn ), 4.19- 4.08 (m, 4H ₅ H-3 _A , H-5 _E , H _A11 ,H-3 _E ), 4.01 (m, IH, H _AI1 ), 3.91 (bs, IH ₃ H-2 _A ), 3.87-3.81 (m, 5H, H-2 _E , H-4 _E , H-2 _D , H-6a _D , H-6b _D ), 3.72 (m, IH, H-5 _A ), 3.51 (pt, IH ₅ J ₃₎₄ = 9.0 Hz, H-4 _D ), 3.51-3.45 (m, 3H, H-4 _A , H-6a _E , H-6b _E ), 3.13 (m, IH ₅ H-5 _D ), 2.80 (pt, IH ₅ J ₂ , ₃ = 9.2 Hz, H-3 _D ), 2.21 (s, 3H, H _NAc ), 1.40 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz ₅ H-6 _A ). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 173.3 (C _NA c), 138.6-137.5 (C _Ph ), 134.2 (CH=), 129.5-127.8 (CH _Ph ),

117.8 (=CH ₂ ), 103.0 (C-1 _D , ¹ JCH = 155.6 Hz) ₅ 98.5 (C-1 _A , ¹ JcH= 174.8 Hz) ₅ 94.6 (C-1 _E , ¹ JcH =

167.9 Hz), 83.7 (C-3 _E ), 80.2 (C-4 _A ), 79.2, 79.0 (2C ₃ C-2 _E , C-4 _E ), 77.1 (C-3 _D ), 76.9 (C-2 _A ), 76.5, 75.8 (2C ₅ C _Bn ), 75.7 (C-5 _D ), 75.6, 75.3 (2C ₃ C _3n ), 74.6 (C-3 _A ) ₅ 73.8 (C _Bn ), 71.8 (C-4 _D ), 70.3 (C-5 _E ), 68.7 (C-5 _A ), 68.3 ^' (C _A11 ), 68.2 (C-6 _E ), 62.7 (C-6 _D ), 57.4 (C-2 _D ), 23.6 (C _NAc ), 18.2

(C-6A).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ C ₅₈ H ₇₀ NO ₁₅ m/z théorique : 1020.4745 m/z mesurée : 1020.4739

[M+Na] ⁺ C ₅₈ H ₆₉ NOi ₅ Na m/z théorique : 1042.4565 m/z mesurée : 1042.4545 118 : Rf= 0,45 (DCM/MeOH, 92/8).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.42-7.08 (m ₅ 25H, CH _Ph ), 6.52 (d, IH, J _NH , ₂ = 7.0, NH), 5.90 (m, IH ₅ CH=), 5.29 (m, lH, Jt _rans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.20 (m, lH, J _cis = 10.4 Hz, -CH ₂ ), 5.11-4.96 (m ₅ 5H ₃ 2H _Bn , H-1 _E , 2H _Bn ) ₃ 4.92 (bs ₅ IH ₃ H-1 _A ), 4.84-4.79 (m, 2H, H _Bn ), 4.73 (d, IH, J= 10.4 Hz, H _Bn ), 4.63-4.55 (m, 2H, H _Bn ), 4.45-4.42 (m, 2H, H-1 _D , H _Bn ), 4.29 (m, IH, H-3 _E ), 4.15 (m, IH, H _AH ), 4.12-4.09 (m ₅ 2H ₅ H-3 _A , H-5 _E ), 3.98 (m, IH, H _AI1 ), 4.87 (m, IH ₅ H-2 _A ), 3.87-3.70 (m, 8H ₃ H-4 _E , OMe ₅ H-6a _D , H-6b _D , H-2 _E , H-5 _A ) ₅ 3.63 (m, IH ₃ H-2 _D ) ₅ 3.51 (m, 2H ₃ H-4 _A , H-4 _D ) ₅ 3.33 (m, 2H ₃ H-6a _E , H-6b _E ), 2.90 (m ₅ IH ₃ H-5 _D ) ₅ 2.61 (pt, IH ₃ J ₂ , ₃ = 9.8 Hz ₃ H-3 _D ), 1.40 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £ 159.4 (C _N0M e), 139.7-137.8 (C _Ph ) ₅ 134.2 (CH=), 129.4-127.9 (CHw ₁ ), 117.9 C=CH ₂ ), 103.2 (C-I ₀ , ¹ Jc _H = 161.6 Hz), 98.6 (C-1 _A , ¹ JcH= 171.5 Hz) ₅ 95.8 (C-1 _E , ¹ JcH = 170.5 Hz) ₃ 83.1 (C-3 _E ) ₅ 80.1 (C-2 _E ) ₅ 79.9 (C-4 _A ) ₅ 78.7 (C-4 _E ), 78.1 (C-2 _A ), 77.1 (C-3 _D ), 76.1 (C _Bn ), 76.0 (C-3 _A ), 75.7, 75.6, 75.4 (3C, C _5n ), 75.2 (C-5 _D ), 73.8 (C _Bn ), 71.5 (C-4 _D ), 70.6 (C- 5 _E ), 69.0 (C-5 _A ), 68.3 (C _A1 ,) ₃ 68.1 (C-6 _E ), 62.7 (C-6 _D ), 58.4 (C-2 _D ), 52.9 (OMe) ₃ 18.1 (C-6 _A ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₅₈ H ₆₉ NO ₁₆ Na m/z théorique : 1058.4514 m/z mesurée : 1058.4514

[M+NH ₄ ] ⁺ C ₅₈ H ₆₉ NO ₁₆ NH ₄ m/z théorique : 1053.4960 m/z mesurée : 1053.4946

> AlIyI (2-acétamido-2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-β-D-glucopyra nosyl)-(l— >2)- [2,3,4,6-tétra-(9-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l→3)]-4-O-b enzyl-α-L- rhamnopyranoside 119 :

Chemical Formula: C61H73NO15

Exact Mass: 1059,4980 MoiecularWeight: 1060,2300

Voie 1 : Dans du DMF (3 mL) est dissous le triol 117 (270 mg, 265 μmol) et le 2- méthoxypropène (76 μL, 795 μmol, 3 éq.). Du CSA (6,2 mg, 26 μmol, 0,1 éq.) est ajouté par fractions au milieu réactionnel. Le milieu réactionnel est alors agité à TA et la réaction est suivie par CCM (Chex/EtOAc, 1/1 et DCM/MeOH, 92/8). Après une nuit d'agitation, la transformation du produit de départ (Rf= 0,05 et 0,4, respectivement) en un produit moins polaire (Rf= 0,35 et 0,75, respectivement) est presque totale. Le milieu réactionnel est neutralisé avec de la triéthylamine (100 μL) puis concentré à l'évaporateur rotatif. Le solide obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 1/1) pour conduire à l'alcool 119 sous forme d'un solide blanc (240 mg, 85%).

Voie 2 : Du TMSOTf (92,3 μL, 514 μmol, 0,2 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 21 (2,1 g, 2,6 mmol) et de donneur 1 (1,8 g, 3,1 mmol, 1,2 éq.) dans du DCM (50 mL), en présence de tamis moléculaire 4 à (2,0 g), agitée sous argon à -78°C. Après 3 h sous agitation, le bain éthanol-carboglace est retiré et l'agitation est poursuivie pendant 30 min, temps au bout duquel le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3) indique la disparition de 21 (Rf= 0,5) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,2). La réaction est stoppée par l'addition de triéthylamine (0,2 mL) puis le milieu réactionnel est filtré puis concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 8/2→7/3) pour obtenir à un solide blanc (3,5 g).

Après addition de NaOMe 0,5 M (33,6 mL, 16,8 mmol, 6 éq.) au brut précédent (3,5 g, 2,8 mmol) en solution dans du DCM (270 mL), le milieu réactionnel est agité pendant 9 h et suivi par CCM (DCM/MeOH, 92/8 et EtOAc/MeOH, 98/2). Après avoir observé la disparition du produit de départ et l'apparition d'un produit plus polaire révélé par la ninhydrine (Rf= 0,35

et 0,2, respectivement), le milieu réactionnel est dilué par addition de MeOH (540 mL) puis de l'anhydride acétique (2,1 mL, 22,4 mmol, 8 éq.) est additionné au milieu réactionnel. Après agitation pendant 2 h, on observe l'apparition d'un nouveau produit en CCM (Rf= 0,4 et 0,25, respectivement). Les solvants sont alors évaporés et le solide obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (DCM/MeOH, 98/2→95/5) pour conduire à un solide blanc (2,7 g).

Dans du DMF (17 mL) est dissous le brut précédent (2,7 g, 2,6 mmol) et le 2- méthoxypropène (758 μL, 7,9 mmol, 3 éq.). Du CSA (61,2 mg, 263 μmol, 0,1 éq.) est ajouté par fractions au milieu réactionnel. Le milieu réactionnel est alors agité à TA et la réaction est suivie par CCM (Chex/EtOAc, 1/1 et DCM/MeOH, 92/8). Après 6 h d'agitation, la transformation du produit de départ (Rf= 0,05 et 0,4, respectivement) en un produit moins polaire (Rf= 0,35 et 0,75, respectivement) est presque totale. Le milieu réactionnel est neutralisé avec de la triéthylamine (0,1 mL) puis concentré à l'évaporateur rotatif. Le solide obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 1/1) pour conduire à l'alcool 119 sous forme d'un solide blanc (2,4 g, 87%).

Voie 3 : Après addition de NaOMe 0,5 M (3,7 mL, 1,9 mmol, 6 éq.) au glycoside d'allyle 23 (375 mg, 310 μmol) en solution dans du DCM (30 mL), le milieu réactionnel est agité pendant 9 h et suivi par CCM (Chex/EtOAc, 1/1 et Chex/EtOAc, 6/4). Après avoir observé la disparition de 23 et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,2 et 0,15, respectivement), le milieu réactionnel est dilué par addition de MeOH (60 mL) puis de l'anhydride acétique (234 μL, 2,5 mmol, 8 éq.) est additionné au milieu réactionnel. Après agitation pendant 2 h, on observe l'apparition d'un nouveau produit en CCM (Rf= 0,3 dans Chex/EtOAc, 1/1). Les solvants sont alors évaporés et le solide obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 1/1) pour conduire à l'alcool 119 sous forme d'un solide blanc (258 mg, 90%).

Voie 4 : Du TMSOTf (16,0 μL, 92 μmol, 0,3 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 21 (250 mg, 310 μmol) et de donneur 2 (220 mg, 400 μmol, 1,3 éq.) dans du DCM (8 mL), en présence de tamis moléculaire 4 à (250 mg), agitée sous argon à -78 ⁰ C. Après 6 h sous agitation, le bain éthanol-carboglace est retiré et l'agitation est poursuivie pendant 30 min, temps au bout duquel le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 7/3) indique la disparition presque totale de l'accepteur (Rf = 0,5) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,35). La réaction est stoppée par l'addition de triéthylamine (0,1 mL) puis le milieu réactionnel est filtré puis concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par

chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 8/2→7/3) pour obtenir un solide blanc (375 mg).

Après addition de NaOMe 0,5 M (3,7 mL, 1,9 mmol, 6 éq.) au brut précédent (375 mg, 310 μmol) en solution dans du DCM (30 mL), le milieu réactionnel est agité pendant 9 h et suivi par CCM (Chex/EtOAc, 1/1 et Chex/EtOAc, 6/4). Après avoir observé la disparition du produit de départ et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,2 et 0,15, respectivement), le milieu réactionnel est dilué par addition de MeOH (60 mL) puis de l'anhydride acétique

(234 μL, 2,5 mmol, 8 éq.) est additionné au milieu réactionnel. Après agitation pendant 2 h, on observe l'apparition d'un nouveau produit en CCM (Rf= 0,3 dans Chex/EtOAc, 1/1). Les solvants sont alors évaporés et le solide obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 1/1) pour conduire à l'alcool 119 sous forme d'un solide blanc (258 mg,

80%).

Rf= 0,35 (Chex/EtOAc, 1/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), J7.31-6.96 (m, 26H, NH, CH _Ph ), 5.88 (m, IH, CH=), 5.29 (m, IH, J _trans =

17.3 Hz ₅ =CH ₂ ), 5.21 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.09-5.06 (m, 2H, J _lj2 = 5.6 Hz, H-1 _E ,

H _Bn ), 4.98 (m, IH, J= 11.9 Hz, H _Bn ), 4.86 (m, 2H, H _Bn ), 4.84 (bs, IH, J _lj2 = 1.7 Hz, H-U),

4.80-4.74 (m, 2H, H _3n ), 4.63-4.57 (m, 2H, J= 11.9 Hz, H _Bn ), 4.50 (m, IH, J= 9.6 Hz, H _Bn ),

4.37-4.30 (m, 2H, J _1;2 = 8.3 Hz, H _Bn , H-1 _D ), 4.19-4.07 (m, 4H, H-3 _A , H-5 _E , H _A ,., H-3 _E ), 3.96

(m, IH, H _A U), 3.89-3.70 (m, 7H, H-2 _A , H-6a _D , H-2 _E , H-4 _E , H-2 _D , H-5 _A , H-6b _D ), 3.53 (pt, IH,

J _3>4 = 9.3 Hz, H-4 _D ), 3.51 (m, 2H, H-6a _E , H-6b _E ), 3.45 (pt, IH, J _3>4 = 9.6Hz, H-4 _A ), 2.87 (m,

IH, H-5 _D ), 2.81 (pt, IH, J ₂ , ₃ = 9.2 Hz, H-3 _D ), 2.20 (s, 3H, H _NAc ), 1.52 (s, 3H, H _iPr ), 1.48 (s,

3H, H _iPr ), 1.39 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ 173.3 (C _NAc ), 138.5-137.5 (C _Ph ), 134.2 (CH=), 129.5-127.7(CH _Ph ),

117.7 (=CH ₂ ), 102.8 (C-I ₀ , ¹ JcH= 155.2 Hz), 100.1 (C _iPr ), 98.6 (C-1 _A , ¹ J ₀ H = 172.4 Hz), 94.6

(C-1 _E , ¹ JC _H = 169.1 Hz), 83.7 (C-3 _E ), 80.2 (C-4 _A ), 79.9 (C-2 _E ), 79.1 (C-4 _E ), 76.6 (C-2 _A ), 76.5,

76.1, 75.8, 75.4 (4C, C _Bn ), 74.8 (C-3 _A ), 74.6 (C-3 _D ), 74.5 (C-4 _D ), 73.8 (C _Bn ), 70.4 (C-5 _E ), 68.8

(C-5 _A ), 68.3 (C _A ii), 68.2 (C-6 _E ), 67.3 (C-5 _D ), 62.3 (C-6 _D ), 58.9 (C-2 _D ), 29.5 (C _iPr ), 23.6

(C _NAc ) ₃ 19.3 (Ci _Pr ), 18.2 (C-6 _A ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ C ₆₁ H ₇₄ NO ₁₅ m/z théorique : 1060.5058 m/z mesurée : 1060.5066 [M+Na] ⁺ C ₆₁ H ₇₃ NO ₁₅ Na m/z théorique : 1082.4878 m/z mesurée : 1082.4875

> AHyI (2-désoxy-4,6-O-isopropylidène-2-acétamido-β-D-glucopyra nosyl)-(l→2)- [2,3,4,6-tétra-O-benzyI-α-D-glucopyranosyl-(l→3)]-(4-O-b enzyI-α-L- rhamnopyranosyl)-(l-→2)-3,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnopyranos ide 116 :

Chemical Formula CβiHgsNO-ig

Exact Mass 1385,6498 MolecularWeight 1386,6163

Après addition de NaOMe 0,5 M (5,7 mL, 2,8 mmol, 6,9 éq.) au glycoside d'allyle 115 (630 mg, 412 μmol) en solution dans du DCM (45 mL), le milieu réactionnel est agité pendant 6h30 et suivi par CCM (DCM/MeOH, 98/2 et Tol/EtOAc, 85/15). Après avoir observé la disparition de 115 et l'apparition d'un produit plus polaire révélé par la ninhydrine (Rf= 0,45 et 0, respectivement), le milieu réactionnel est dilué par addition de MeOH (91 mL) puis de l'anhydride acétique (386 μL, 4,1 mmol, 10 éq.) est additionné au milieu réactionnel. Après agitation pendant 2 h, on observe l'apparition d'un nouveau produit en CCM (Rf= 0,5 et 0,1, respectivement). Les solvants sont alors évaporés et le solide obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (Toi/ EtOAc, 6/4— >4/6) pour conduire à l'alcool 116 sous forme d'un solide blanc (470 mg, 83%). Rf= 0,35 (Toi/ EtOAc, 6/4).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.43-7.07 (m, 36H, NH, CH _Ph ), 5.89 (m, IH, CH=), 5.27 (m, IH, J _bans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.20 (m, IH, J _cis = 11.7 Hz, =CH ₂ ), 5.18 (d, IH, Ji, ₂ = 3.7 Hz, H-1 _E ), 5.11- 5.09 (m, 2H, H-IA, H _Bn ), 5.02-4.88 (m, 4H, H _Bn ), 4.83-4.79 (m, 2H, H _Bn ), 4.77 (d, IH, J _1]2 = 1.6 Hz, H-IB), 4.72-4.53 (m, 6H, H _Bn ), 4.10-4.35 (m, 2H, H _Bn , H-1 _D ), 4.19-4.11 (m, 4H, H-3 _A , H-5 _E , H _A II, H-3 _E ), 4.06 (dd, IH, J _2;3 = 2.2 Hz, H-2 _A ), 4.02 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 2.9 Hz, H-2 _B ), 3.94- 3.79 (m, 6H, H _A ,i, H-4 _E , H-3 _B , H-2 _E , H-2 _D , H-5 _A ), 3.73 (dq, IH, J ₄ , ₅ = 9.4 Hz ₅ H-5 _B ), 3.59- 3.46 (m, 6H, H-6a _D , H-6b _D , H-6a _E , H-6b _E , H-4 _D , H-4 _A , H-4 _B ), 2.83 (m, IH, H-5 _D ), 2.78 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.2 Hz, H-3 _D ), 1.50 (s, 3H, H _lPr ), 1.48 (s, 3H, H _iPr ), 1.40 (d, 3H, J _5>6 = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.35 (d, 3H, J _5,6 = 6.2 Hz, H-6 _B ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £172.9 (C _NAc ), 138.5-137.1 (C _Ph ), 133.8 (CH=), 129.2-127.4 (CH _Ph ), 117.2 (-CH ₂ ), 102.4 (C-1 _D , ¹ J _0H = 162.8 Hz), 101.0 (C-1 _A , ¹ JcH = 177.5 Hz), 99.6 (C _iPr ), 97.8 (C-I _B , ¹ JcH = 169.0 Hz), 94.1 (C-1 _E , ¹ J _0H = 167.0 Hz), 83.3 (C-3 _E ), 80.5 (C-4 _B ), 80.0 (C-4 _A ), 79.4 (C-2 _E ), 79.2 (C-3 _B ), 78.7 (C-4 _E ), 76.3 (C _Bn ), 75.9 (C-2 _A ), 75.7 (C _Bn ), 75.5 (C-2 _B ), 75.4 75.3, 75.0 (3C, C _Bn ), 74.2 (C-3 _A ), 74.1 (C-4 _D ), 74.0 (C-3 _D ), 73.5, 72.0 (2C, C _Bn ), 70.1 (C-5 _E ), 68.8 (C-5 _A ), 67.9 (2C, C-5 _B , C-6 _E ), 67.7 (C _A11 ), 66.9 (C-5 _D ), 61.7 (C-6 _D ), 58.5 (C-2 _D ), 29.1 (CiPr), 23.2 (CNA _C ), 19.0 (C _iPr ), 18.1 (C-6 _B ), 17.7 (C-6 _A ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ C ₈₁ H ₉₅ NO ₁₉ m/z théorique : 1386.6577 m/z mesurée : 1386.6625

[M+Naf C ₈₁ H ₉₅ NO ₁₉ Na m/z théorique : 1408.6396 m/z mesurée : 1408.6478

> AUyI (2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-( 2-acétamido-2- désoxy-4,6-0-isopropyIidène-β-D-glucopyranosyl)-(l-→2)- [2,3 _î 4,6-tétra-0-benzyI- α-D-glucopyranosyl-(l— >3)]-(4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→2)-3,4-di-0- benzyl-α-L-rhamnopyranoside 116' :

Chemical Formula: C ₁₀ 3H ₁₁₉ Nθ24

Exact Mass: 1753,81 MolecularWeight: 1755,O ₄

De l'acide triflique (2 μL, 23 μmol, 0,2 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 116 (128 mg, 94 μmol), de donneur 39 (97 mg, 188 μmol, 2 éq.) et de tamis moléculaire 4 â (200 mg), dans du toluène (1,5 mL) agitée sous argon à -4O ⁰ C. Après 1 h d'agitation à cette température suivie de 2 h d'agitation à TA, le suivi par CCM (DCM/MeOH, 97,5/2,5) indique la présence d'un nouveau composé moins polaire alors que 116 subsiste au mieux à l'état de traces. La réaction est stoppée par addition de triéthylamine (0,2 mL) puis le milieu

réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. Le brut réactionnel est purifiée par flash chromatographie sur gel de silice (Chex/EtOAc, 100/0→50/50) pour obtenir le glycoside d'allyle 116' sous forme d'un solide blanc (116 mg, 71%) . Rf= 0,58 (DCM/ MeOH, 98.5/2,5).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ 7.44-7.06 (m, 5OH, CH _Ph ), 6.38 (d, IH, NH), 5.85 (m, IH, CH=), 5.18 (m, IH, H-1 _E ), 5.04 (s, IH, H-I _A ), 5.13 (s, IH, H-2 _C ), 5.32-4.97 (m, 15H, H _A n, H _Bn ), 4.72 (s, IH, H-IB), 4.63 (s, IH, H-I ₀ ), 4.33 (d, IH, J = 12.0 Hz, H _Bn ), 4.27 (d, IH, J _1;2 = 8.6 Hz, H- 1 _D ), 4.21-4.08 (m, 5H, H-3 _E , H-5 _E , H-2 _D , H-3 _A , H _A n), 3.98-3.87 (m, 8H, H-2 _A , H-3 _C , H-5 _C , H- 2 _B , H _A1I , H-3 _B , H-2 _E , H-4 _E ), 3.75 (dq, IH, J _4,5 = 9.3 Hz, J _5,6 = 6.6 Hz, H-5 _A ), 3.69 (dq, IH, J _4>5 = 9.4 Hz, J _5j6 = 6.1 Hz, H-5 _B ), 3.52-3.41 (m, 8H, H-6a _D , H-6b _D , H-6a _E , H-6b _E , H-4 _A , H-4 _B , H- 4 _D , H-4 _C ,), 2.74 (m, IH, J ₅ , ₆ = 5.3 Hz, J _4;5 = 9.8 Hz, H-5 _D ), 2.62 (pt, IH, J _3;4 = J ₄ , ₅ = 9.4 Hz, H- 3 _D ), 2.28 (s, 3H, H _A0 ), 2.08 (s, 3H, H _NAc ), 2.05 (s, 3H, H _Ac ), 1.39 (s, 6H, H _iPr ), 1.33-1.30 (m, 6H, H-6 _A , H-6 _B ), 1.24 (d, 3H, J _5;6 = 6.3 Hz, H-6 _C ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ 170.9 (C _Ac ), 170.5 (C _NAc ), 139.2-18.7 (C _Ph ), 134.2 (CH=), 129.7-127.8 (CHph), 117.6 (=CH ₂ ), 103.8 (C-1 _D ), 101.5 (C-1 _A ), 99.6 (C _lPr ), 98.8 (C-1 _B ), 98.2 (C-I ₀ ), 94.4 (C-IE), 83.7 (C-3 _E ), 80.8-78.9 (7C, C-3 _D , C-4 _B , C-2 _E , C-4 _C , C-4 _A , C-3 _B , C-4 _E ), 78.1 (C-3 _C ), 76.6 (CB ₀ ), 76.4 (C-2 _A ), 75.6 (C-2 _B ), 76.0-75.4 (7C, C _8n ), 74.6 (C-3 _A ), 73.9 (C _8n ), 72.4 (C- 4 _D ), 72.3, 71.8 (2C, C _8n ), 70.3 (2C, C-2 ₀ , C-5 _E ), 69.2 (C-5 _A ), 68.2 (C-5 _B ), 68.0 (2C, C-6 _E , CAI _I ), 67.8 (C-5 _C ), 67.5 (C-5 _D ), 62.3 (C-6 _D ), 55.7 (C-2 _D ), 29.5 (C _iPr ), 24.4 (C _NAc ), 21.5 (C _Ac ), 19.5 (Cip _r ), 18.4, 87.3, 18.0 (C-6 _A , C-O ₈ , C-6 _C ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ C ₁₀₃ Hn ₉ NO ₂₄ m/z théorique : 1755.8234 m/z mesurée : 1755.8301

> Propyl (2-0-acétyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-(2-acétamido-2-d ésoxy-β-D- glucopyranosyl)-(l→2)-[α-D-glucopyranosyl-(l→3)]-α-L-r hamnopyranosyl- (l→2)-α-L-rhamnopyranoside IX :

Chemical Formula: C ₃₇ H ₆₃ NO ₂₄ Exact Mass: 905,37 Molecular Weight: 905,89

Une solution aqueuse de TFA 50% (2 mL) est additionnée lentement à une solution du glycoside d'allyle 116' (105 g, 84 μmol) dans du DCM (2 mL) à 0°C. Le milieu réactionnel est agité pendant 1 h à cette température, puis 15 min à TA. Le suivi par CCM (DCM/MeOH, 95/5) indique la disparition totale de 116' et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire 116". Le milieu réactionnel est concentré par coévaporation avec du toluène (3 x 10 mL). Le brut réactionnel (103 mg) est suffisamment correct d'après les analyses RMN pour être engagé tel que dans l'étape de débenzylation.

Du Pd/C10% (100 mg) est ajouté à une solution dégazée de diol 116" (102 mg, 60 μmol) dans de l'éthanol (4 mL). La suspension est placée sous atmosphère d'hydrogène (1 bar) et agitée à TA pendant 6 h. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 7/1/2 montre la disparition de 116" et la présence d'un composé plus polaire. Le milieu réactionnel est filtré sur Célite, et le filtrat est concentré à l'évaporateur rotatif. Après filtration de la suspension et évaporation du filtrat, le résidu obtenu est purifié par HPLC (colonne C- 18 Kromasil, TFA aqueux O ₅ OlM /CH ₃ CN, 100/0→70/30 en 20 min, 5,5 mL/min, 215 nm) pour conduire au tétrasaccharide cible VIII sous forme d'une poudre blanche après lyophilisation (36 mg, 68%). Rf= 0,41 (iPrOH/NH ₃ /H ₂ O, 7/1/2).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ 7.40-7.06 (m, 5OH, CH _Ph ), 6.38 (d, IH, J _m2 = 9.1 Hz, NH), 5.86 (m, IH, CH=), 5.44 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 3.0 Hz, H-2 _B ), 5.26 (m, IH, J _tram = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.20-5.17 (m, 2H, =CH ₂ , H-I ₁ ), 5.07 (d, IH, J ₁₂ = 1.6 Hz, H-Ij), 5.05 (d, IH, J ₁₂ = 1.8 Hz, H-H) ₁ 5.02- 4.75 (m, 9H, 4H _Bm H-2 _C , 4H _Bn ), 4.75 (d, IH, J _u = 1.4 Hz, H-I _B ), 4.70 (bs, IH, H-I _c ), 4.68- 4.57 (m, 9H, H _Bn ), 4.50 (d, IH, J = ILO Hz, H _Bn ), 4.42-4.33 (m, 2H ₁ H _Bn ), 4.28 (d, IH, J ₁₂ ^≈ 8.6 Hz, H-I ₀ ), 4.21-4.08 (m, 6H, H-3 _E , H-5 _E , H-2 _D , H-3 _A , H _Ml , H-3 _C ), 3.99 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 2.6

Hz, H-2j), 3.96-3.84 (m, 7H, H-5 _C , H~2 _B , H _AU , H-3 _B) H-3 _B ; H-2 _E , H-4 _E ), 3.81-3.73 (m, 2H, H- 5 A, H-5 _B )- , 3.71 (dq, IH, J ₁₅ = 9.4 Hz, H-5 _B ), 3.54-3.38 (m, 8H, H-6a _D , H-6h _D , H-6a _E , H-6b _E , H-4 _A , H-4 _B , H-4 _D , H-4 _C , H-4 _B ), 2.75-2.64 (m, 6H, H-5 _D , 2CH _2Lev , H-3 _D ), 2.31 (s, 3H, H _NAς ), 2.18 (s, 3H, CHs _Lev ), 2.05 (s, 3H, H _Ac ), 1.42 (s, 3H, H _iPr ), 1.39 (s, 3H, H _iPr ), 1.35-1.31 (m, 9H, H-6 _A , H-6 _B , H-6 _B ^* ), 1.24 (d, 3H, J ₅ ,,, = 6.2 Hz, H-6 _C ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), S 206.1 (CuJ, 171.7 (CuJ, 170.4 (C _A< ), 170.0 (C _NAc ), 138.6-137.5 (C _Plι ), 133.8 (CH≈), 129.3-127.7 (CH _FIι ), 117.1 (=CH ₂ ), 103.6 (C-1 _D , ¹ JcH = 159.0 Hz), 101.1 (C-1 _A , ¹ JcH = 172.8 Hz), 99.5 (C-I ₈ ; ¹ JcH = 167.8 Hz), 99.2 (C _iPr ), 97.9 (C-I ₈ , ¹ JCH = 172.8 Hz),

97.8 (C-Ic, ¹ Jc _H = 172.8 Hz), 94.2 (C-I _E , ¹ J _0H = 165.3 Hz), 83.4 (C-3 _E ), 80.5 (C-3 _D ), 80.4 (C- 4 _B ), 80.2 (C-2E), .80.1 (C-4 _B ), 80.0 (C-4 _C ), 79.8 (C^ ₄ ), 79.2 (C-3 _B ), 78.5 (C-4ε), 78.2 (C-3 _C ),

77.9 (C-3 _B ), 76.2 (C-2 _A ), 76.1, 75.7, 75.4 (3C, C _Bn ), 75.3 (C-2 _B ), 75.2, 75.1, 75.0, 74.5 (4C, CW, 74.5 (C-3 _A ), 73.5 (C _8n ), 73.2 (C-2 _C ), 72.1 (C-4 _D ), 71.9, 71.4 (2C, C _8n ), 70.0 (CSE), 69.3 (C-2 _B ), 68.9 (C-5 _A ), 68.5 (C-5 _B ), 67.9 (C-6 _E ), 67.8 (C-5 _B ), 67.7 (C _A U), 67.3 (C-5 _C ), 67.2 (C- 5 _D ), 62.0 (C-O n), 55.0 (C-2 _D ), 38.1 (CH ₂ LeJ, 29.8 (CH ₃ LeJ, 29.2 (C _iP J, 28.2 (CH ₂ LeJ, 24.1 (CW. 21.0 (C _Al ), 19.1 (C _iPr ), 18.0, 17.9, 17.8, 17.7 (C-6 _A , C-6 _B , C-6 _B ^* , C-6c ).

HRMS (ESf) : [M+ NaJ ⁺ C ₃₇ H ₆₃ NO ₂₄ Na m/z théorique : 928.3638 m/z mesurée : 928.3660 Procédé 16 :

> AUyI (3,4-di-0-benzyl-2-0-lévulinoyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→ 3)-(2-0-acétyI- 4-0-benzyI-α-L-rhamnopyranosyl)-(l— >3)-(2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-2- acétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l-→2)-[2,3 ₅ 4,6-tétra-O-benzyl-α-D- glucopyranosyl-(l→3)]-4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 120 :

Che :mical Formula: C-|oiHi-|gNθ26 Exact Mass: 1761,8020 MolecularWeight: 1763,0167

Du TfOH (23,0 μL, 263 μmol, 0,9 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 119 (310 mg, 290 μmol) et de donneur 47 (379 mg, 440 μmol, 1,5 éq.) dans du Toi (10 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (1,7 g), agitée sous argon à 0°C. Après 15 min sous agitation, le suivi par CCM (Chex/EtOAc, 1/1) indique la disparition de 119 (Rf = 0,1) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,35). La réaction est stoppée par l'addition de triéthylamine (0,2 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 8/2→6/4) pour obtenir le glycoside d'allyle 120 sous forme d'un solide blanc (383 mg, 74%) mais légèrement contaminé. Rf= 0,35 (Chex/EtOAc, 1/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.45-7.07 (m, 4OH, CH _Ph ), 6.47 (d, IH ₅ J _NH , ₂ = 9.0 Hz, NH), 5.90 (m, IH, CH=), 5.46 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 3.0 Hz, H-2 _B ), 5.29 (m, IH, J _tra n _s = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.20 (m, IH, J _c i _s = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.15 (d, IH, J _1;2 = 3.5 Hz, H-1 _E ), 5.09 (d, IH, J _lj2 = 1.2 Hz, H-I _B ), 5.07-4.98 (m, 4H, H _Bn ), 4.94 (dd, IH, J _2;3 = 2.7 Hz, H-2 _C ), 4.93-4.88 (m, 3H, H _Bn ), 4.84 (bs, IH, H-1 _A ), 4.77 (bs, IH, H-I _c ), 4.67-4.60 (m, 5H ₃ H _Bn ), 4.53-4.33 (d, 4H, H _Bn ), 4.28 (d, IH, J _lj2 = 8.6 Hz, H-1 _D ), 4.21-4.13 (m, 6H, H-3 _E , H-2 _D , H-5 _E , H-3 _C , H _A π, H-3 _A ), 4.00 (dq, IH, J ₄ , ₅ = 9.6 Hz, H-5 _C ), 3.97-3.83 (m, 6H, H _A π, H-3 _B , H-2 _E , H-2 _A , H-4 _E , H-6a _D ), 3.79 (dq, IH, J ₄ , ₅ = 9.4 Hz, H-5 _B ), 3.73 (m, IH, H-Ob ₀ ), 3.70 (dq, IH, J ₄ , ₅ = 9.5 Hz, H-5 _A ), 3.52 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.3 Hz, H-4 _D ), 3.58-3.40 (m, 5H, H-4 _A , H-6a _E , H-6b _E , H-4 _C , H-4 _B ), 2.76-2.68 (m, 6H, H-5 _D , 2CH _2Lev , H-3 _D ), 2.35 (s, 3H, H _NAc ), 2.19 (s, 3H, CH _3Lev ), 2.06 (s, 3H, H _Ac ), 1.48 (s, 3H, H _iPr ), 1.45 (s, 3H, Hip _r ), 1.38 (d, 3H, J _5;6 = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.34 (d, 3H, J _5,6 = 6.2 Hz, H-6 _B ), 1.27 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6c).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.1 (C _Le v), 171.8 (C _Lev ), 170.5 (C _Ac ), 170.1 (C _NAc ), 138.7-137.5 (C _Ph ), 134.0 (CH=), 129.4-127.8 (CH _Ph ), 117.1 (=CH ₂ ), 103.7 (C-I ₀ , ¹ Jc _H = 159.9 Hz), 99.5 (C-1 _B , ¹ JCH= 169.7 Hz), 99.3 (C _iPr ), 98.4 (C-I _A , ¹ JC _H = 182.1 Hz), 97.5 (C-I _c , ¹ J ₀ H= 170.6 Hz), 94.4 (C-I _E , ¹ JCH = 170.1 Hz), 83.5 (C-3 _E ), 80.7 (C-3 _D ), 80.4 (C-2 _E ), 80.1, 80.0 (C-4 _B ^* , C-4 _C ^* ), 79.8 (C-4 _A ), 78.5 (C-4 _E ), 78.2 (C-3 _C ), 77.9 (C-3 _B ), 76.7 (C-2 _A ), 76.1, 75.9, 75.5, 75.4, 75.1, 75.0 (6C, C _Bn ), 74.8 (C-3 _A ), 73.4 (C _Bn ), 73.3 (C-2 _C ), 72.4 (C-4 _D ), 71.3 (C _Bπ ), 70.0 (C-5 _E ), 69.3 (C- 2 _B ), 68.6 (C-5A), 68.5 (C-5 _B ), 67.9 (C-6 _E ), 67.8 (C _An ), 67.4 (C-5 _D ), 67.3 (C-5 _C ), 62.2 (C-6 _D ),

55.0 (C-2 _D ), 38.1 (CH _2Lev ), 29.8 (CH _3Lev ), 29.2 (C _iPr ), 28.3 (CH _2Lev ), 24.1 (C _NAc ), 21.1 (C _Ac ),

19.1 (CiPr), 17.9, 17.8, 17.7 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _C ^* ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ C _1O iH ₁₁₉ NO ₂₆ m/z théorique : 1762.8098 m/z mesurée : 1762.8198

[M+Na] ⁺ Ci _O iH _{1 I9} NO ₂₆ Na m/z théorique : 1784.7917 m/z mesurée : 1784.7988

> AUyI (3,4-di-0-benzyl-2-0-lévulinoyI-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→ 3)-2-0-acétyl-4- 0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l—>3)-(2-désoxy-4,6-0- isopropyIidène-2- acétamido-β-D-gIucopyranosyl)-(l— >2)-[2,3 _? 4,6-tétra-6>-benzyl-α-D- glucopyranosyI-(l→3)]-(4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l →2)-3,4-di-0- benzyl-α-L-rhamnopyranoside 121 :

Chemical Foπnula: C121H141NO30

Exact Mass: 2087,9538 Molecular Weight: 2089,4029

Du TMSOTf (18,0 μL, 100 μmol, 0,9 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 116 (150 mg, 110 μmol) et de donneur 47 (140 mg, 160 μmol, 1,5 éq.) dans du Toi (5 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (620 mg), agitée sous argon à 0°C. Après 45 min d'agitation, le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 75/25 et Chex/EtOAc, 1/1) indique la disparition de 116 (Rf = 0,05 et Rf= 0,15, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé moins polaire (Rf = 0,55 et Rf= 0,2). La réaction est stoppée par addition de triéthylamine (0,5 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 75/25→l/l) pour obtenir par ordre d'élution le glycoside d'allyle 121 sous forme d'un solide blanc (149 mg, 65%) mais légèrement contaminé.

Rf= 0,55 (Chex/ EtOAc, 1/1).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), <57.40-7.06 (m, 5OH, CH _Ph ), 6.38 (d, IH, J _NH , ₂ = 9.1 Hz, NH), 5.86 (m, IH, CH=), 5.44 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 3.0 Hz, H-2 _B 0 _» 5.26 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.20-5.17 (m,

2H, =CH ₂ , H-1 _E ), 5.07 (d, IH, J _1>2 = 1.6 Hz, H-I _A ), 5.05 (d, IH, J _lj2 = 1.8 Hz, H-IBO, 5.02- 4.75 (m, 9H, 4H _Bn , H-2 _C , 4H _Bn ), 4.75 (d, IH, J _li2 = 1.4 Hz, H-1 _B ), 4.70 (bs, IH, H-l _c ), 4.68- 4.57 (m, 9H, H _Bn ), 4.50 (d, IH, J= 11.0 Hz, H _Bn ), 4.42-4.33 (m, 2H, H _Bn ), 4.28 (d, IH, J _1>2 = 8.6 Hz, H-1 _D ), 4.21-4.08 (m, 6H, H-3 _E , H-5 _E , H-2 _D , H-3 _A , H _A1! , H-3 _C ), 3.99 (dd, IH, J ₂ , ₃ = 2.6 Hz, H-2 _A ), 3.96-3.84 (m, 7H, H-5 _C , H-2 _B , H _A11 , H-3 _B , H-3 _BS H-2 _E , H-4 _E ), 3.81-3.73 (m, 2H, H-5 _A , H-5 _B 0, 3.71 (dq, IH, J ₄ , ₅ = 9.4 Hz, H-5 _B ), 3.54-3.38 (m, 8H, H-6a _D , H-6b _D , H-6a _E , H- 6b _E , H-4 _A , H-4 _B , H-4 _D , H-4 _C , H-4 _B 0, 2.75-2.64 (m, 6H, H-5 _D , 2CH _2Lev , H-3 _D ), 2.31 (s, 3H, H _NAC ), 2.18 (s, 3H, CH _3Lev ) ₅ 2.05 (s, 3H, H _Ac ), 1.42 (s, 3H, H _iPr ), 1.39 (s, 3H, H _iPr ), 1.35-1.31 (m, 9H, H-6 _A ^* , H-6 _B *, H-6 _B >*), 1.24 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _C ).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.1 (C _Lev ), 171.7 (C _Lev ), 170.4 (C _Ac ), 170.0 (C _NAc ), 138.6-137.5 (C _Ph ), 133.8 (CH-), 129.3-127.7 (CH _Ph ), 117.1 (=CH ₂ ), 103.6 (C-I ₀ , ¹ Jc _H = 159.0 Hz), 101.1 (C-1 _A , ¹ JCH= 172.8 Hz), 99.5 (C-1 _B ', ¹ J _0H = 167.8 Hz), 99.2 (C _iPr ), 97.9 (C-1 _B , ¹ J ₀ H= 172.8 Hz), 97.8 (C-I ₀ , ¹ J ₀ H = 172.8 Hz), 94.2 (C-1 _E , ¹ J _0H = 165.3 Hz), 83.4 (C-3 _E ), 80.5 (C-3 _D ), 80.4 (C-4 _B ), 80.2 (C-2 _E ), 80.1 (C-4 _B 0, 80.0 (C-4 ₀ ), 79.8 (C-4 _A ), 79.2 (C-3 _B ), 78.5 (C-4 _E ), 78.2 (C-3 ₀ ), 77.9 (C-3 _B 0, 76.2 (C-2 _A ), 76.1, 75.7, 75.4 (3C, C _13n ), 75.3 (C-2 _B ), 75.2, 75.1, 75.0, 74.5 (4C, C _Bn ), 74.5 (C-3 _A ), 73.5 (C _Bn ), 73.2 (C-2 ₀ ), 72.1 (C-4 _D ), 71.9, 71.4 (2C, C _Bn ), 70.0 (C-5 _E ), 69.3 (C- 2BO, 68.9 (C-5 _A ), 68.5 (C-5 _B 0, 67.9 (C-6 _E ), 67.8 (C-5 _B ), 67.7 (C _AI1 ), 67.3 (C-5 _C ), 67.2 (C-5 _D ), 62.0 (C-6 _D ), 55.0 (C-2 _D ), 38.1 (CH _2Lev ), 29.8 (CH _3L ev), 29.2 (C _iPr ), 28.2 (CH ₂ Uv), 24.1 (C _NAc ), 21.0 (CAC), 19.1 (CiPr), 18.0, 17.9, 17.8, 17.7 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _B > ^* , C-6 _C ^* )- HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ C ₁₂₁ Hi ₄₁ NO ₃₀ m/z théorique : 2088.9617 m/z mesurée : 2088.9619

[M+ Na] ⁺ C ₁₂₁ H _14I NO ₃₀ Na m/z théorique : 2110.9436 m/z mesurée : 2110.9497

> Allyl (3,4-di-0-benzyI-2-0-lévulinoyI-α-L-rhamnopyranosyl)-(l— >3)-2-0-acétyl-4- 0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→3)-(2-désoxy-4,6-0-iso propylidène-2- trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyI)-(l— >2)-[2,3,4,6-tétra-O-benzyl-α-D- glucopyranosyl-(l→3)]-(4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l →2)-3,4-di-0- benzyl-α-L-rhamnopyranoside 122 :

Chemical Formula- C121 H ₁₃₈ CI ₃ NO ₃₀

Exact Mass- 2189,8369

Molecular Weight:

Du TMSOTf (61,0 μL, 340 μmol, 0,3 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 110 (1,7 g, 1,1 mmol) et de donneur 47 (1,5 g, 1,7 mmol, 1,5 éq.) dans du Toi (35 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (975 mg), agitée sous argon à -40°C. Après 1 h d'agitation, le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2) indique la disparition de 110 (Rf = 0,3) et l'apparition d'un nouveau composé moins polaire (Rf= 0,45). La réaction est stoppée par addition de triéthylamine (0,5 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à Pévaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 95/5→7/3) pour obtenir par ordre d'élution le glycoside d'allyle 122 sous forme d'un solide blanc (1,45 g, 59%) puis le diol 123 sous forme d'un solide blanc (505 mg, 21%). Rf= 0,45 (Toi/ EtOAc, 8/2).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.45-7.10 (m, 5OH, CH _Ph ), 6.94 (d, IH, J _NH,2 = 8.8 Hz, NH), 5.92 (m, IH, CH=), 5.46 (dd, IH, J _lj2 = 1.9 Hz, J _2,3 = 3.0 Hz, H-2 _B >), 5.30 (m, IH, J _tra n _s = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.25-5.22 (m, 2H, H-1 _E , =CH ₂ ), 5.15-5.05 (m, 6H, H- 1 _A , 2H _Bn , H-1 _B ', H-2 _C , H _Bn ), 4.98-4.93 (m, 3H, H _Bn ), 4.89-4.83 (m, 3H, H _Bn ), 4.81 (d, IH, J _lj2 = 1.4 Hz, H-1 _B ), 4.76 (d, IH, Ji, ₂ = 1.4 Hz, H-Ic), 4.72-4.60 (m, 8H, H _Bn ), 4.58 (d, IH, J _lj2 = 3.8 Hz, H-I _n ), 4.54 (d, IH, J= 11.0 Hz, H _Bn ); 4.45 (d, IH, J= 11.3 Hz, H _Bn ), 4.37 (d, IH, J = 12.0 Hz, H _Bn ), 4.21 (pt, IH, J _3>4 = 9.3 Hz, H-3 _E ), 4.19-4.14 (m, 5H, H-3 _C , H _A n, H-3 _A , H-2 _A , H-5 _E ), 4.07-3.86 (m, 9H, H-2 _B , H-2 _D , HAII, H-5 _C , H-5 _B ., H-3 _B , H-3 _BS H-2 _E , H-4 _E ), 3.80 (dq, IH, J _4j5 = 9.5 Hz, H-5 _A ), 3.74 (dq, IH, J ₄ , ₅ = 9.4 Hz, H-5 _B ), 3.60-3.43 (m, 8H, H-6a _D , H-4 _A , H-4 _B , H-6a _E , H-6b _E , H-4 _D , H-4 _B ., H-4 _C ), 3.35 (m, IH, J _6a , _6b = 10.4 Hz, H-Ob _n ), 2.82 (m, IH, H-5 _n ), 2.75-2.69 (m, 5H, 2CH _2Le v, H-3 _D ),

2.21 (s, 3H, CH _3L ev), 2.14 (s, 3H ₃ H _Ac ), 1.44-1.43 (m, 9H, H _iPr , H-6 _A ), 1.39 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.8 Hz, H-6 _B >), 1-37 (d, 3H, J _5;6 = 6.2 Hz, H-6 _B ), 1.37 (d ₅ 3H, J _5>6 = 6.2 Hz, H-6 _C ). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.3 (C _Lev ), 171.8 (C _Le v), 169.6 (C _Ac ), 162.0 (C _NT CA), 138.7-137.6 (Cp _h ), 133.9 (CH=), 129.4-127.5 (CH _Ph ), 117.2 (=CH ₂ ), 101.2 (C-I ₀ , 'J _CH = 163.9 Hz), 100.9 (C-IA, ¹ JcH = 172.0 Hz), 99.4 (C _iPr ) ₅ 99.0 (C-1 _B -, ¹ JcH = 168.3 Hz), 98.0 (C-1 _B , ¹ JcH = 168.7 Hz), 97.6 (C-Ic, ¹ JC _H = 170.4 Hz), 94.3 (C-1 _E , 'J _CH = 167.5 Hz), 93.1 (CCl ₃ ), 83.1 (C-3 _E ), 80.4, 80.1, 79.9, 79.7, 79.6, 79.0 (7C, C-3 _B ^* , C-3 _B - ^* , C-4 _A ^* , C-4 _B ^* , C-4 _C ^* , C-4 _E ^* ), 78.7 (C-3 _D ), 77.6 (C-2 _E ), 76.8 (C-3 _C ), 76.2, 75.4, 75.3, 75.2, 75.0, 74.9, 74.8 (7C, C _Bn ), 74.3 (C- 2 _B ), 74.2 (C-3 _A ), 73.5 (C _Bn ), 73.4 (C-2 _A ), 72.6 (C-4 _D ), 72.1 (C-2 _C ), 72.0, 71.5 (2C, C _Bn ), 69.9 (C-5 _E ), 69.4 (C-2 _B .), 68.7 (C-5 _A ), 68.5 (C-5 _B 0, 68.0 (C-5 _B ), 67.9 (C-6 _E ), 67.8 (C-5 _C ), 67.7 (CAII), 67.0 (C-5 _D ), 61.8 (C-6 _D ), 57.4 (C-2 _D ), 38.2 (CH _2Lev ), 29.9 (CH _3Lev ), 29.2 (C _iPr ), 28.2 (CH _2Lev ), 21.2 (C _Ac ), 19.1 (C _iPr ), 18.3, 18.1, 18.0, 17.9 (C-6 _A ^* , C-6 _B ' ^* , C-6 _C ^* ). HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ Ci _2I H ₁₃₈ NO ₃₀ ³⁵ Cl ₃ m/z théorique : 2190.8447 m/z mesurée : 2190.8403 [M+ Na] ⁺ C ₁₂₁ H ₁₃₈ NO ₃₀ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 2212.8267 m/z mesurée : 2212.8215

> AllyI (3,4-di-0-benzyl-2-0-lévulinoyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→ 3)-2-0-acétyl-4- 0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l- »3)-(2-désoxy-2-trichloroacétamido-β-D- gIucopyranosyl)-(l→^2)-[2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-gluco pyranosyl-(l-→3)]-(4-0- benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→2)-3,4-di-0-benzyl-α-L-r hamnopyranoside 123 :

Chemical Formula:

Exact Mass: 2149,8056 Molecular Weight: 2152,6743

Une solution aqueuse de TFA 50% (8 mL) est additionnée lentement à une solution du glycoside d'allyle 122 (1,9 g, 880 μmol) dans du DCM (30 mL) à 0 ⁰ C. Le milieu réactionnel est agité pendant 2 h à cette température, temps au bout duquel le suivi par CCM (Toi/ EtOAc, 7/3) indique la disparition totale de 122 (Rf = 0,55) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf= 0,4). Le milieu réactionnel est concentré par coévaporation avec du Toi (3 x 10 mL). L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 8/2→6/4) pour obtenir le diol 123 sous forme d'un solide blanc (1,7 g, 89%). Rf- 0,4 (Toi/ EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.62-7.13 (m, 50H, CHH ₁ ), 7.04 (d, IH, J _NH,2 = 8.8 Hz, NH), 5.94 (m, IH, CH=), 5.53 (dd, IH, J _2j3 = 3.0 Hz, H-2 _B >), 5.44. (bs, IH, H-I _A ), 5.34 (m, IH, J _tr ans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.34 (d, IH, J _1;2 = 3.6 Hz, H-1 _E ), 5.26 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, ≈CH ₂ ), 5.22-5.11 (m, 5H, 2H _Bn , H-IB-, H-2 _C , H _Bn ), 5.07-4.88 (m, 7H, H _Bn ), 4.82-4.78 (m, 3 H, 2H _Bn , H-1 _B ), 4.75- 4.64 (m, 8H, H _3n ), 4.60 (bs, IH, H-l _c ), 4.56 (d, IH, J ₁₌₂ = 8.8 Hz, H-1 _D ), 4.44 (m, 2H, H _Bn ), 4.30-4.18 (m, 7H, H-3 _C , H-2 _A , H-3 _A , H-3 _E , H-5 _E , H-2 _B , H _AU ), 4.05-3.70 (m, 7H, H _A1) , H-2 _D , H-3 _B , H-3 _B -, H-5 _C , H-4 _E , H-2 _E ), 3.88 (dq, IH, J _4;5 = 9.4 Hz, H-5 _B .), 3.81 (dq, IH, J ₄ , ₅ = 9.6 Hz, H-5 _B ), 3.78 (dq, IH, J _4,5 = 10.0 Hz, H-5 _A ), 3.72 (m, IH, H-Oa ₀ ), 3.61-3.56 (m, 4H, H-4 _B , H- 6a _E , H-6b _E , H-4 _A ), 3.54 (pt, IH, J _3,4 = 9.5 Hz, H-4 _C ), 3.48 (pt, IH, J _3,4 = 9.4 Hz, H-4 _B .), 3.10 (m, 2H, H-4 _D , H-5 _D ), 3.05 (m, IH, H-Ob ₀ ), 2.78 (m, 4H, 2CH _2Lev ), 2.24 (s, 3H, CH _3Lev ), 2.23 (s, 3H, H _A *), 2.19 (m, IH, H-3 _O ), 1.50 (d, 3H, J _5,6 = 6.3 Hz, H-6 _A ), 1.46 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _B ), 1.38 (d, 3H, Js ₁₆ = 6.1 Hz, H-6 _B .), 1.37 (d, 3H, J^ ₆ = 6.1 Hz, H-6 _C ). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £206.1 (C _Lev ), 171.7 (C _Lev ), 170.0 (C _Ac ), 162.2 (CN _T CA), 138.8-137.6 (C _Ph ), 133.9 (CH-), 129.4-127.5 (CH _Ph ), 117.1 (=CH ₂ ), 101.1 (C-I ₀ , ¹ J _0H = 165.4 Hz), 100.2 (C-1 _A , ¹ JCH= 175.4 Hz), 99.1 (C-1 _B -, ¹ J _0H = 171.8 Hz), 98.5 (C-I ₀ , ¹ J ₀ H= 173.3 Hz), 98.3 (C- I _B , ¹ JCH= 168.3 Hz), 94.1 (C-1 _E , ¹ J ₀ H= 166.9 Hz), 93.3 (CCl ₃ ), 87.2 (C-3 _D ), 83.1 (C-3 _E ), 80.6 (C-3 _B ), 80.5 (2C, C-2 _E , C-4 _B ), 80.1 (C-4 _B .), 79.7 (C-4 _A ), 79.5 (C-4 _C ), 78.8 (C-4 _E ), 77.7 (C- 3 _B 0, 77.3 (C-3 _C ), 76.3 (C _Bn ), 75.6 (C-5 _D ), 75.5, 75.4, 75.3, 75.0 (6C, C _Bn ), 74.1, 74.0 (C-2 _B ^* , C-3 _A ^* ), 73.5, 72.9 (2C, C _Bn ), 72.1 (C-2 _C ), 71.4 (C _Bn ), 71.3 (2C, C-2 _A , C-4 _D ), 70.1 (C-5 _E ), 69.4 (2C, C-2 _B -, C-5 _C ), 68.9 (C-SA), 68.7 (C-5 _B -), 68.4 (C-5 _B ), 68.0 (C-6 _E ), 67.6 (C _An ), 62.8 (C-6 D), 55.5 (C-2 _D ), 38.2 (CH _2Le v), 29.9 (CH _3Le v), 28.3 (CH _2Le v), 21.1 (C _Ac ), 18.1, 18.0, 17.8, 17.9 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _B ^> *, C-6 _C *).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ C _{1 I8} H ₁₃₄ NO ₃₀ ³⁵ Cl ₃ m/z théorique : 2150.8135 m/z mesurée : 2150.84857 [M+ Na] ⁺ C ₁ , ₈ H ₁₃₄ NO ₃₀ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 2172.7954

m/z mesurée : 2172.8081

> Allyl (3,4-di-0-benzyl-2-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-2-0-acétyl -4-0-benzyl-α- L-rhamnopyranosyl)-(l— >3)-(2-désoxy-2-trichIoroacétamido-β-D- glucopyranosyI)-(l→^2)-[2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-g!uco pyranosyl-(l-→3)]-(4-0- benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→^2)-3,4-di-0-benzyI-α-L-r hamnopyranoside 124 :

Chemical Formula

Exact Mass 2051,7688 Molecular Weight 2054,5743

Le diol 123 (700 mg, 320 μmol) est dissous dans un mélange pyridine/acide acétique (3/2, 5 mL). De Fhydrazine monohydraté (158 μL, 3,2 mmol, 10 éq.) est ajouté goutte à goutte au milieu réactionnel. Après 25 min d'agitation à O ⁰ C, le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 7/3) indique la disparition de 123 (Rf = 0,4) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,35). Le milieu réactionnel est alors repris à l'eau froide (10 mL) et la phase aqueuse est extraite rapidement au DCM (3 x 50 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaCl sat, filtrées sur filtre séparateur de phase et concentrées à Pévaporateur rotatif. L'huile obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 9/l→7/3) pour obtenir le triol 124 sous forme d'un solide blanc (560 mg, 84%). Rf = 0,35 (Toi/ EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), £7.44-7.07 (m, 50H, CH _Ph ), 7.02 (d, IH, J _NH , ₂ = 8.6 Hz, NH), 5.90 (m, IH, CH=), 5.40 (bs, IH, H-IA), 5.30 (d, IH, J _lj2 = 3.6 Hz, H-1 _E ), 5.29 (m, IH, J _trans = 17.2 Hz, =CH ₂ ), 5.22 (m, IH, J _cis = 10.4 Hz, =CH ₂ ), 5.18-5.12 (m, 4H, H _Bn , H-1 _B -, H-2 _C , H _Bn ), 5.16- 4.99 (m, 3H, H _Bn ), 4.93 (d, IH, J= 10.9 Hz, H _Bn ), 4.85-4.81 (m, 2H, H _Bn ), 4.77-4.66 (m, 7H, 3H _Bn , H-1 _B , 3H _Bn ), 4.62-4.54 (m, 6H ₃ 5H _Bn , H-l _c ), 4.51 (d, IH ₅ J _h2 = 8.4 Hz, H-I ₀ ), 4.38 (d,

IH ₃ J= 11.9 Hz, H _Bn ), 4.23-4.13 (m, 7H ₅ H-2 _B , H-3 _C , H-3 _E , H-3 _A , H _A n, H-5 _E , H-2 _A ), 5.53 (m, IH, H-2 _B 0, 4.00-3.87 (m, 6H, H _AU , H-2 _D , H-3 _B , H-5 _C , H-4 _E , H-2 _E ), 3.84-3.81 (m, IH, H-3 _B -, H-5 _B .), 3.78 (m, IH ₅ H-5 _B ), 3.72 (m, IH, H-5 _A ) ₅ 3.65 (m, IH, H-6a _D ), 3.55-3.49 (m, 5H, H- 6a _E , H-6b _E , H-4 _B , H-4 _A , H-4 _B -), 3.47 (pt, IH, J _3>4 = 9.5 Hz, H-4 _C ), 3.04 (m, 2H, H-4 _D , H-5 _D ) ₅ 2.94 (m, IH, H-Ob _n ), 2.20 (s, 3H, H _Ac ), 2.15 (m, IH, H-3 _D ), 1.46 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _A ), 1.42 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.2 Hz, H-6 _B ), 1.33-1.30 (m, 6H, H-6 _C , H-6 _B -).

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £170.0 (C _Ac ), 162.3 (C _NTCA ), 138.7-137.4 (C _Ph ), 133.8 (CH=), 129.4- 127.4 (CHph), 117.1 (=CH ₂ ), 101.1 (C-I ₀ , ¹ J _0H = 161.0 Hz), 100.6 (C-1 _B -, ¹ J ₀ H = 171.0 Hz) ₅ 100.1 (C-1 _A , ¹ J _0H = 174.7 Hz) ₅ 98.3 (C-I ₀ , ¹ J _0H = 170.4 Hz), 98.2 (C- 1 _B , ¹ J ₀ H = 170.4 Hz) ₅ 94.0 (C-I _E , ¹ J _0H = 163.1 Hz), 93.1 (CCl ₃ ), 87.1 (C-3 _D ), 83.1 (C-3 _E ), 80.5 (C-3 _B ), 80.4 (C-4 _B ), 80.3 (C-2 _E ), 80.0 (C-4 _A ), 79.7 (2C ₅ C-3 _B >, C-4 _B 0, 79.4 (C-4 _C ), 78.7 (C-4 _E ), 77.7 (C-3 ₀ ), 76.3 (C _0n ), 75.5 (C-5 _D ), 75.4, 75.4, 75.3, 75.0, 74.9 (6C, C _Bn ), 74.1 (C-2 _A ), 73.9 C-3 _A ), 73.5, 72.8 (2C, C _Bn ), 72.0 (C-2 _C ), 71.7 (C _0n ), 71.3 (C-4 _D ), 71.0 (C-2 _B ), 70.0 (C-5 _E ), ^" 69.1 (C-5 _C ), 68.8 (2C, C-2 _B ., C-5 _A ), 68.4, 68.3 C-5 _B - ^* ), 67.8 (C-6 _E ), 67.6 (C _An ), 62.7 (C-6 _D ), 55.3 (C-2 _D ), 21.2 (C _Ac ) ₅ 18.0, 17.8 (4C, C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _B > ^* , C-6 ₀ ^* ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₁₁₃ H ₁₂₈ NO ₂₈ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique :

2074.7585 m/z mesurée : 2074.7581 [M+NH ₄ f C, _O H ₁₂₈ NO ₂₈ ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 2069.8032 m/z mesurée : 2069.7925

> Propyl α-L-rhamnopy ranosyl-(l→3)-(2-O-acétyl-α-L-rhamnopy ranosyl)-(l →3)- (2-acétamido-2-désoxy-β-D-glucopyranosyl)-(l→2)-[α-D-g lucopyranosyl-(l→3)]- α-L-rhamnopyranosyl-(l→2)-α-L-rhamnopyranoside XIII :

MolecularWeight: 1052,0296

Du Pd-C 10% (400 mg) est ajouté à une solution dégazée de triol 124 (400 mg, 195 μmol) dans de l'éthanol absolu (20 mL). La suspension est saturée avec de l'hydrogène à 50 bar et agitée à TA pendant 10 j. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5 et Tol/EtOAc, 7/3) montre la disparition de 124 (Rf = 1 et 0,35, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf = 0,65 et 0, respectivement). Le milieu réactionnel est filtré sur un filtre Acrodisc LC 25 mm, et le filtrat est concentré à l'évaporateur rotatif. Le résidu obtenu est purifié sur colonne C-18 (H ₂ O/CH ₃ CN, 100/0→70/30) pour conduire à la cible XIII sous forme d'un solide blanc (131 mg, 64%). Rf= 0,65 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5)

RMN ¹ H (D ₂ O), tf 5.10 (d, IH, J _1>2 = 3.7 Hz, H-1 _E ), 5.00 (d, IH, Jj, ₂ = 1.6 Hz, H-IA), 4.91 (dd, IH, J _lj2 = 1.9 Hz, J _2;3 = 3.1 Hz, H-2 _C ), 4.89 (d, IH, J _1>2 = 1.4 Hz, H-IBO. ⁴ -80 (bs, 2H, H- IB, H-I _C ), 4.71 (m, IH, H-I ₀ ), 4.35 (m, IH, H-2 _A ), 4.02-3.92 (m, 3H, H-5 _C , H-5 _E , H-2 _B -), 3.89-3.51 (m, 14H, H-3 _C , H-2 _B , H-3 _A , H-6a _D , H-2 _D , H-3 _B , H-3 _E , H-6a _E , H-6b _E , H-5 _A , H-6b _D , H-2 _E , H-5 _B , H-3 _B -, H _Pr ), 3.49 (pt, IH, J _3;4 = 10.0 Hz, H-4 _C ), 3.47-3.30 (m, 8H, H-4 _Ds H _Pr , H- 5 _B -, H-4 _E , H-4 _B , H-4 _B >, H-5 _D , H-3 _D ), 3.26 (pt, IH ₅ J ₃ , ₄ ≈ 9.6 Hz, H-4 _A ), 2.08 (s, 3H, H _Ac ), 2.03 (s, 3H, H _NAc ), 1.50 (sex, 2H, CH ₂ ), 1.22-1.13 (m, 12H, H-6 _B> H-6 _A , H-6 _B -, H-6 _C ), 0.82 (t, 3H, J= 7.4 Hz, CH ₃ );

RMN ¹³ C (D ₂ O), δ 174.4 (C _NAc ), 173.2 (C _Ac ), 102.7 (C-1 _B >, ¹ JcH = 170.6 Hz), 101.4 (C-I ₀ , ¹ JCH = 166.0 Hz), 101.2 (C-IA, ¹ JC _H = 173.5 Hz), 98.4 (C-I _c , ¹ JcH = 167.8 Hz), 98.1 (C-1 _B , ¹ Jc _H = 171.5 Hz), 94.2 (C-1 _E , ¹ Jc _H = 172.8 Hz), 82.6 (C-3 _D ), 79.1(C-2 _B ), 77.0 (C-3 _C ), 76.0 (C-

5 _D ), 74.1 (C-2A), 73.3 (C-3 _A ), 73.0 (C-3 _E ), 72.4 (C-2 _C ), 71.9 (C-4 _B ), 71.7 (C-4 _B ') _> 71.3, 71.2, 71.1 (C-5 _E , C-2 _E , C-4 _C ), 70.7 (C-4 _A ), 70.1 (C-3 _B .), 69.9 (2C, C-2 _B >, C-3 _B ), 69.7 (C _Pr ), 69.4, 69.3 (3C, C-4 _E , C-5 _A , C-5 _B .), 68.8 (C-5 _C ), 68.6 (C-5 _B ), 68.1 (C-4 _D ), 60.6 (C-6 _D ), 60.3 (C-6 _E ), 55.3 (C-2 _D ), 22.7 (C _NAc ), 21.9 (CH ₂ ), 20.2 (C _Ac ), 16.8, 16.6, 16.5, 16.3 (C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _B .\ C-6 _C ^* ), 9.8 (CH ₃ );

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ C ₄₃ H ₇₃ NO ₂₈ m/z théorique : 1052.4397 m/z mesurée : 1052.4360

[M+Naf C ₄₃ H ₇₃ NO ₂₈ Na m/z théorique : 1074.4216 m/z mesurée : 1074.4202 Procédé 17 :

> AUyI (3,4-di-0-benzyI-2-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→3)-4-0-benzyl- α-L- rhamnopyranosyl)-(1^3)-(2-désoxy-2-trichloroacétamido-β-D -glucopyranosyl)- (l-→2)-[2,3 _? 4,6-tétra-(?-benzyl-α-D-gIucopyranosyl-(l-→3)]-(4-(?-ben zyl-α-L- rhamnopyranosyl)-(l→2)-3,4-di-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosi de 125 :

Chemical Formula: C-]-nH-|26C3^θ27

Exact Mass: 2009,7583 Molecular Weight: 2012,5376

Après addition de NaOMe 0,5 M (745 μL, 370 μmol, 1 éq.) au diol 123 (800 mg, 370 μmol) en solution dans du MeOH (20 mL). Le milieu réactionnel est porté à 60°C et agité pendant 1 h, temps au bout duquel le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 6/4), indique la disparition de 123 (Rf= 0,6) et l'apparition d'un produit plus polaire (Rf= 0,45). Après retour à TA, le milieu réactionnel est neutralisé par addition de résine échangeuse d'ion DOWEX (H ⁺ ), puis filtré sur fritte. La résine est lavée avec un mélange DCM/MeOH et les solvants sont évaporés.

L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 8/2→7/3) pour conduire au tétraol 125 sous forme d'un solide blanc (688 mg, 92%). Rf= 0,45 (Tol/EtOAc, 6/4)

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), <J7.44-7.05 (m, 5OH, CH _Ph ), 6.86 (d, IH, J _NH , ₂ = 8.6 Hz, NH), 5.89 (m, IH, CH=), 5.36 (bs, IH ₅ H-1 _A ), 5.28 (m, 2H ₅ =CH ₂ , H-1 _E ), 5.21 (m, IH, JdS = 10.4 Hz ₅ =CH ₂ ), 5.17 (d, IH ₅ Ji, ₂ = 1.6 Hz, H-1 _B >), 5.14-5.07 (m, 2H ₅ H _Bn ), 5.03-5.4.90 (m, 4H ₅ H _Bn ), 4.82 (d, IH ₅ J= 11.0 Hz ₅ H _Bn ), 4.74-4.51 (m, 13H ₅ H-1 _B , H _Bn ) ₅ 4.47 (d, IH ₅ J _u = 7.0 Hz ₅ H-I ₀ ), 4.47 (d ₅ IH ₅ J ₁₁₂ = 1.6 Hz ₅ H-Ic) ₃ 4.38 (d ₅ IH ₅ J= 11.9 Hz, H _Bn ), 4.19 (dd ₅ IH, J ₂ , ₃ = 2.4 Hz ₅ H-2 _B ) ₅ 4.17-4.12 (m, 5H ₅ H _A n, H-5 _E , H-3 _E , H-3 _A , H-2 _A ), 4.06-4.03 (m, 2H ₅ H-3 _C , H-2 _B 0, 3.99-3.82 (m, 9H ₅ H _AII , H-2 _C , H-2 _D , H-3 _B , H-S _C5 H-5 _B -, H-4 _E , H-2 _E , H-3 _B >), 3.78-3.64 (m, 3H ₅ H-5 _B , H- 5 _A , H-6a _D ) ₅ 3.59-3.45 (m, 6H ₅ H-4 _B >, H-6a _E , H-6b _E , H-4 _B , H-4 _A , H-4 _C ) ₅ 3.07-3.03 (m, 2H ₅ H- 5 _D , H-4 _D ), 2.94 (m ₅ IH ₅ H-6b _D ) ₅ 2.23 (m ₅ IH ₅ H-3 _D ) ₅ 1.44 (d, 3H ₅ J _5;6 = 6.2 Hz, H-6 _B 0, 1-43 (d ₅ 3H ₅ J _5>6 = 6.1 Hz ₅ H-6 _A ) ₅ 1.40 (d, 3H ₅ J _5>6 = 6.2 Hz ₅ H-6 _B ) ₅ 1.32 (d, 3H ₅ J _5;6 = 6.1 Hz ₅ H-6 _C ). RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £161.9 (C _NTCA ), 138.7-137.5 (C _Ph ) ₅ 133.9 (CH=), 129.1-127.3 (CH _Ph ) ₅ 117.1 (=CH ₂ ) ₅ 101.0 (C-I _D5 ¹ JCH = 162.7 Hz) ₅ 100.8 (C-l _c , ¹ JCH = 169.2 Hz) ₅ 100.1 (C-1 _A , ¹ JC _H = 180.3 Hz) ₅ 100.0 (C-1 _B -, ¹ J ₀ H = 180.3 Hz), 98.3 (C-1 _B , ¹ JcH = 170.3 Hz) ₅ 94.0 (C-1 _E , ¹ Jc _H = 168.6 Hz) ₅ 93.2 (CCl ₃ ), 86.5 (C-3 _D ) ₅ 83.0 (C-3 _E ), 80.5 (C-3 _B ), 80.4 (2C ₅ C-2 _E , C-4 _B ), 79.8, 79.7, 79.6 (4C, C-4 _A ^* , C-3 _B ' ^* ₅ C-4 _B > ^* ₅ C-4 _C ^* ) ₅ 78.8 (C-4 _E ), 78.3 (C-3 _C ), 76.3 (C _Bn ), 75.5 (C-5 _D ) ₅ 75.4, 75.3, 75.2, 74.9 (6C, C _Bn ), 74.0 (C-3 _A ), 73.8 (C-2 _A ), 73.5, 72.8, 72.0 (3C, C _Bn ), 71.3 (C-2 _B ), 71.1 (C-4 _D ), 70.4 (C-2 _C ) ₅ 70.0 (C-5 _E ), 68.9 (C-5 _C ) ₅ 68.8 (2C, C-5 _A , C-2 _B .) ₅ 68.7 (C-5 _B 0, 68.3 (C-5 _B ), 67.9 (C-6 _E ), 67.6 (C _A ,,), 62.7 (C-6 _D ), 55.8 (C-2 _D ), 18.1, 18.0, 17.8 (4C, C-6 _A , C-6 _B , C-6 _B ' , C-6c ).

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ C ₁₁₁ H ₁₂₆ NO ₂₇ ³⁵ Cl ₃ Na m/z théorique : 2032.7480 m/z mesurée : 2032.7448

> Propyl α-L-rhamnopyranosyl-(l— >3)-(α-L-rhamnopyranosyI)-(l→3)-(2- acétamido-2-désoxy-β-D-glucopyranosyl)-(l→2)-[α-D-gluc opyranosyl-(l→3)]-α- L-rhamnopyranosyl-(l→2)-α-L-rhamnopyranoside XIV :

Chemical Formula: C41H71 NO27

Exact Mass: 1009,4213 MolecularWeight: 1009,9929

Du Pd-C 10% (340 mg) est ajouté à une solution dégazée de tétraol 125 (580 mg, 289 μmol) dans de l'éthanol absolu (15 mL). La suspension est saturée avec de l'hydrogène à 50 bar et agitée à TA pendant 10 jours. Le suivi par CCM (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5 et Tol/EtOAc, 6/4) montre la disparition de 125 (Rf = 1 et 0,45, respectivement) et l'apparition d'un nouveau composé plus polaire (Rf = 0.2 et 0, respectivement). Le milieu réactionnel est filtré sur un filtre Acrodisc LC 25 mm, et le filtrat est concentré à l'évaporateur rotatif. Le résidu obtenu est purifié sur colonne C-18 (H ₂ O/CH ₃ CN, 100/0→70/30) pour conduire à la cible XIV sous forme d'un solide blanc (240 mg, 82%). Rf= 0,2 (iPrOH/H ₂ O/NH ₃ , 4/1/0,5)

RMN ¹ H (D ₂ O), £5.20 (d, IH, J _1;2 = 3.7 Hz, H- 1 _E ), 5.10 (d, IH ₅ J _1>2 ^≈ 1.6 Hz, H-IA), 5.01 (d, IH, J _li2 = 1.2 Hz, H-I _B O, 4.90 (m, IH, H-1 _B ), 4.84 (d, IH, J _1>2 = 1.9 Hz, H-l _c ), 4.82 (d, IH, J _1;2 = 9.5 Hz, H-1 _D ), 4.44 (m, IH, H-2 _A ), 4.06-3.99 (m, 3H, H-2 _B -, H-5 _E , H-5 _C ), 3.95-3.61 (m, 17H, H-2 _B , H-3 _A , H-6a _D , H-2 _C , H-2 _D , H-3 _B , H-3 _E , H-3 _B % H-6a _E , H-6b _E , H-3 _C , H-5 _B , H-5 _A , H- 6b _D , H-2 _E , H-5 _B ., Hp _r ), 3.55-3.38 (m, 8H, H _Pr , H-4 _C , H-4 _D , H-4 _E , H-3 _D , H-4 _B , H-4 _B >, H-5 _D ), 3.35 (pt, IH, J ₃ , ₄ = 9.7 Hz, H-4 _A ), 2.11 (s, 3H, H _NAc ), 1.59 (sex, 2H, CH ₂ ), 1.31 (d, 3H, J _5>6 - 6.3 Hz, H-6 _B ), 1.28 (d, 3H, J _5j6 = 6.3 Hz, H-6 _B -), 1.26 (d, 3H, J _5,6 = 6.3 Hz, H-6 _A ), 1.23 (d, 3H, J ₅ , ₆ = 6.3 Hz, H-6c), 0.91 (t, 3H, J= 7.4 Hz, CH ₃ );

RMN ¹³ C (D ₂ O), £174.0 (C _NA c), 102.4 (C-I ₈ ', ¹ J ₀ H = 171.2 Hz), 101.5 (C-I ₀ , ¹ JcH = 163.6 Hz), 101.3 (C-Ic, ¹ Jc _H = 169.8Hz), 101.2 (C-IA, ¹ JCH = 169.8 Hz), 98.2 (C-1 _B , ¹ J ₀ H = 170.5 Hz), 94.4 (C-1 _E , ¹ J _0H = 171.2 Hz), 81.7 (C-3 _D ), 79.1(C-2 _B ), 78.1 (C-3 _C ), 76.0 (C-5 _D ), 74.2 (C-

2A), 73.5 (C-3A), 73.2 (C-3 _E ), 72.2 (C-4 _B ), 72.0 (C-4 _B 0, 71.4 (C-5 _E ), 71.3 (C-2 _E ) 71.3 (C-4 _C ), 70.8 (C-4 _A ), 70.5 (C-2 _C ), 70.2 (C-3 _B 0. 70.2 (C-2 _B -), 70.0 (C-3 _B ), 69.8 (C _Pr ), 69.5 (C-4 _E ), 69.4 (C-5 _A ), 69.0 (2C, C-5 _C , C-5 _B ), 68.7 (C-5 _B 0, 68.3 (C-4 _D ), 60.7 (C-6 _D ), 60.4 (C-6 _E ), 55.5 (C- 2 _D ), 22.6 (CNAC), 21.9 (CH ₂ ), 16.8, 16.7, 16.5 (4C, C-6 _A ^* , C-6 _B ^* , C-6 _B > ^* , C-Oc ⁺ ), 9.9 (CH ₃ ); HRMS (ESI ⁺ ) : [M+H] ⁺ C ₄₁ H _7J NO ₂₇ m/z théorique : 1010.4292 m/z mesurée : 1010.4295 [MH-Na] ⁺ C ₄₁ H _7I NO ₂₇ Na m/z théorique : 1032.4111 m/z mesurée : 1032.4116

Partie V - Cibles de plus grandes tailles

Tableau 14 : Oligosaccharides d'ordre supérieur représentatifs des fragments de l'antigène

O de S. flexneri sérotype 3a et/ou X

Une analyse rétrosynthétique prenant en compte les fragments d'ordre supérieur des antigènes O de S. flexneri 3a et X, à savoir comportant 6 résidus au moins, a permis de sélectionner un nombre restreint de synthons communs dont la combinaison selon des séquences adaptées à chacune des cibles, permet d'accéder à l'ensemble des oligosaccharides d'intérêt. Comme indiqué plus haut, les synthons accepteurs peuvent être allongés à leur extrémité non réductrice par incorporation itérative des monosaecharides ou disaccharides donneurs requis fonctionnalisés de façon appropriée. En outre, les glycosides d'allyle peuvent être allongés à leur extrémité réductrice après déallylation sélective et activation, permettant leur couplage sur les monosaecharides ou disaccharides accepteurs requis pré-fonctionnalisés.

Donneur D 2 R = Ac Accepteur D 19 R = Ac 3 R = Lev D 20 R = CI ₃ Ac

(E)A Donneur 80

Schéma 77 : Synthons clés retenus

Plusieurs exemples de combinaison sont proposés ci-dessous. Les synthèses correspondantes sont en cours pour certains des procédés. Un octasaccharide complètement protégé a d'hors et déjà été synthétisé.

On remarquera également que l'emploi d'une fonction allyle anomérique ouvre la voie à des modifications ultérieures spécifiques de cette position, comme par exemple le greffage sur un support ou un carrier. Différentes méthodologies ont été proposées en ce sens dans la littérature.

Procédés 18 et 19 : Cibles D(EUBACCD(E)A (XIX) et D(EUBCD(EU (XX)

La présente invention se rapporte ainsi au procédé de préparation de l'octasaccharide D(E) AB _Ac CD(E)A (XIX), tel que défini dans la liste Ll, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : condensation du pentasaccharide accepteur 66 et du disaccharide donneur 80 conduisant à Fheptasaccharide accepteur 126 ;

^ ₇

délévulinoylation de Pheptasaccharide 126 conduisant à l'heptasaccharide 127 de préférence dans des conditions conventionnelles de déprotection sélective des lévilinates, par exemple en présence d'hydrazine monohydratée ; condensation de l'heptasaccharide accepteur 127 et du monosaccharide donneur 3 conduisant à l'octasaccharide 128, de préférence dans un solvant tel que le dichlorométhane, le 1 ,2-dichloroéthane, le toluène, l'acétonitrile ou leur équivalents utilisés usuellement dans l'industrie en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf, l'acide triflique, le trifluorométhane sulfonate de triméthylsilyle ; délévulinoylation de l'octasaccharide 128 conduisant à l'octasaccharide accepteur 128a ; déprotection en deux étapes, in cluant l'hydrolyse acide des fontcions isopropylidène puis la débenzylation et la réduction des fonction trichloroacétamides de préférence sous atmosphère d'hydrogène en présence de palladium de l'octasaccharide 128a conduisant à l'octasaccharide D(E)AB _Ac CD(E)A (schéma 78).

L'invention se rapprote également au procédé de préparation de l'octasaccharide D(E)ABCD(E)A) (XX) ₅ tel que défini dans la liste Ll, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : condensation du pentasaccharide accepteur 66 et du disaccharide donneur 80 conduisant à l'heptasaccharide accepteur 126 ; délévulinoylation de l'heptasaccharide 126 conduisant à l'heptasaccharide 127 de préférence dans des conditions conventionnelles de déprotection sélective des lévilinates, par exemple en présence d'hydrazine monohydratée ; condensation de l'heptasaccharide accepteur 127 et du monosaccharide donneur 3 conduisant à l'octasaccharide 128, de préférence en présence d'un acide de Lewis tel que le TMSOTf, l'acide triflique, le trifluorométhane sulfonate de triméthylsilyle ; transectérification de l'octasaccharide 128 puis hydrolyse acide des isopropylidènes et débenzylation et réduction des fonctions trichloroacétamides conduisant à l'octasaccharide D(E)ABCD(E)A de préférence par traitement sous pression d'hydrogène en présence de palladium sur charbon (schéma 78).

63%

Schéma 78

Mise en œuyre expérimentale des procédés 18 et 19

Procédé 18 :

> AUyI (2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-(4-0-b enzyl-2-0- lévulinoyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→2)-(3,4-di-0-benzyl-� �-L- rhamnopyranosyl)-(l→3)-(2-0-acétyl-4-0-benzyl-α-L-rhamno pyranosyl)-(l ^→ 3)- (2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-2-trichloroacétamido-β-D- gIucopyranosyl)- (l-→2)-[2,3,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l-→ 3)]-4-0-benzyI-α-L- rhamnopyranoside 126 :

Chemical Formula: C ₁₄₈ H ₁₆ SCI ₃ NO ₃₅

Exact Mass: 2622,0306 Molecular Weight: 2625,2463

Du TMSOTf (14,0 μL, 75,0 μmol, 0,3 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 66 (440 mg, 248 μmol) et de donneur 80 (380 mg, 370 μmol, 1,5 éq.) dans du Toi (6 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (236 mg), agitée sous argon à -5°C. Après 20 min. d'agitation, le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 8/2) indique la disparition de 66 (Rf = 0,15) et l'apparition d'un nouveau composé moins polaire (Rf = 0,4). La réaction est stoppée par addition de triéthylamine (0,5 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à Pévaporateur rotatif. Le brut obtenu (248 μmol) est dissous dans du DMF (10 mL) contenant du 2-méthoxypropène (48,0 μL, 498 μmol, 2 éq.). Du CSA (480 mg, 2,0 mmol, 8 éq.) est ajouté par fractions au milieu réactionnel jusqu'à obtenir un pH de 2. Le milieu réactionnel est agité à TA et la réaction est suivie par CCM (Tol/EtOAc, 8/2). Après 2 h d'agitation, le MeOH formé est

évaporé à l'évaporateur rotatif et du 2-méthoxypropène (24,0 μL, 250 μmol, 1 éq.) est de nouveau ajouté. Après 1 h d'agitation, le milieu réactionnel est neutralisé avec de la triéthylamine (0,2 mL) puis concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 9/l→7/3) pour obtenir le glycoside d'allyle 126 sous forme d'un solide blanc (596 mg, 91%). Rf= 0,4 (Toi/ EtOAc, 8/2). RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ Ok RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), £Ok

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ pas visible m/z théorique : m/z mesurée :

> AUyI (2β,4,6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(l→3)-(4-0-b enzyl-α-L- rhamnopyranosyl)-(1^2)-(3,4-di-0-benzyI-α-L-rhamnopyranosyl )-(l-→3)-(2-0- acétyl-4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→^3)-(2-désoxy -4,6-0-isopropylidène- 2-trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-(l-→2)-[2,3,4,6 -tétra-0-benzyI-α-D- glucopyranosyl-(l→3)]-4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranoside 127 :

Chemical Formula: C ₁₄₃ H ₁₆₀ CI ₃ NO ₃₃

Exact Mass: 2523,9938 Molecular Weight: 2527, 146 ₄

Le glycoside d'allyle 126 (1,23 g, 468 μmol) est dissous dans un mélange pyridine/acide acétique (3/2, 10 mL). De Phydrazine monohydraté (227 μL, 4,7 mmol, 10 éq.) est ajouté goutte à goutte au milieu réactionnel. Après 35 min d'agitation à 0 ⁰ C, le suivi par CCM

(Tol/EtOAc, 7/3) indique l'apparition d'un produit légèrement moins polaire (Rf= 0,6). Le milieu réactionnel est alors repris à l'eau froide (20 mL) et la phase aqueuse est extraite rapidement au DCM (3 x 80 mL). Les phases organiques sont regroupées et lavées avec une solution de NaCl sat, filtrées sur filtre séparateur de phase et concentrées à l'évaporateur rotatif. L'huile obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 9/l→8/2) pour obtenir l'alcool 127 sous forme d'un solide blanc (1,05 g, 87%). Rf= 0,6 (Toi/ EtOAc, 7/3). RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ Ok RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ Ok

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+ NH ₄ ] ⁺ C ₁₄₃ H ₁₆₀ NO ₃₃ ³⁵ Cl ₃ NH ₄ m/z théorique : 2542.0281 m/z mesurée : 2542.0186

> AUyI (2-désoxy-4,6-0-isopropylidène-3-0-lévulinoyl-2-trichloro acétamido-β-D- glucopyranose)-(l— >2)-[2,3 _? 4,6-tétra-0-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l-→3)]-(4-0- ben2yl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l-→2)-(3,4-di-O-benzyl-α-L- rhamnopyranosyl)- (l→3)-(2-0-acétyl-4-0-benzyl-α-L-rhamnopyranosyl)-(l→^ 3)-(2-désoxy-4,6-0- isopropylidène-2-trichloroacétamido-β-D-glucopyranosyl)-( l-->2)-[2,3 _î 4,6-tétra- 0-benzyl-α-D-glucopyranosyl-(l→3)]-4-0-benzyl-α-L-rhamno pyranoside l28 :

Chemical Formula: Ci ₅₉ H ₁₈₀ CI ₆ N ₂ O ₄₀

Exact Mass: 2967,0244 Molecular Weight: 2971,8379

Du TMSOTf (12,5 μL, 70,0 μmol, 0,35 éq.) est additionné à une solution d'accepteur 127 (455 mg, 180 μmol) et de donneur 3 (380 mg, 314 μmol, 1,7 éq.) dans du Toi (8 mL), en présence de tamis moléculaire 4 â (173 mg), agitée sous argon à 0°C. Après 20 min. d'agitation, le suivi par CCM (Tol/EtOAc, 7/3) indique la disparition de 127 (Rf = 0,6) et l'apparition d'un nouveau composé moins polaire (Rf = 0,5). La réaction est stoppée par addition de triéthylamine (0,5 mL) puis le milieu réactionnel est filtré et concentré à Pévaporateur rotatif. Le brut obtenu (180 μmol) est dissous dans du DMF (8 mL) contenant du 2-méthoxypropène (35,0 μL, 360 μmol, 2 éq.). Du CSA (250 mg, 1,1 mmol, 6 éq.) est ajouté par fractions au milieu réactionnel jusqu'à obtenir un pH de 2. Le milieu réactionnel est agité à TA et la réaction est suivie par CCM (Tol/EtOAc, 7/3). Après 2 h d'agitation, le MeOH formé est évaporé à l'évaporateur rotatif et du 2-méthoxypropène (17,5 μL, 180 μmol, 1 éq.) est de nouveau ajouté. Après 1 h d'agitation, le milieu réactionnel est neutralisé avec de la triéthylamine (0,2 mL) puis concentré à l'évaporateur rotatif. L'huile jaune obtenue est purifiée par chromatographie sur gel de silice (Tol/EtOAc, 9/l→75/25) pour obtenir le glycoside d'allyle 128 sous forme d'un solide blanc (340 mg, 63%). Rf - 0,5 (Toi/ EtOAc, 7/3).

RMN ¹ H (CDCl ₃ ), δ Ok

RMN ¹³ C (CDCl ₃ ), δ Ok

HRMS (ESI ⁺ ) : [M+Na] ⁺ pas visible m/z théorique : m/z mesurée :

Procédés 20 et 21 ; Cibles BACCD(E)AB _AP CD(E)A (XXI) et BCD(E)ABCD(E)A (XXII)

L'invention se rapprote en outre au procédé de préparation du décasaccharide B _AC CD(E)AB _AC CD(E)A (XXI), tel que défini dans la liste Ll, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : condensation de l'octasaccharide accepteur 128 et du disaccharide donneur 47 conduisant au décasaccharide 129 ; délévulinoylation du décasaccharide 129 conduisant au décasaccharide 130 ; clivage du groupement isopropylidène, notamment par hydrolyse acide, du décasaccharide 130 conduisant au décasaccharide 132 ; déprotection par hydrogénolyse du décasaccharide 132 conduisant au décasaccharide B _AC CD(E)AB _AC CD(E)A de préférence par traitement sous pression d'hydrogène en présence de palladium sur charbon (schéma 79).

L'invention se rapporte encore au procédé de préparation du décasaccharide BCD(E)ABCD(E)A (XXII), tel que défini dans la lsite Ll, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : condensation de l'octasaccharide accepteur 128 et du disaccharide donneur 47 conduisant au décasaccharide 129 ; délévulinoylation et désacétylation simultanées par transestérification du décasaccharide 129 conduisant au décasaccharide 131 ; clivage du groupement isopropylène, notamment par hydrolyse acide, du décasaccharide 131 conduisant au décasaccharide 133 ; déprotection du décasaccharide 133 conduisant au décasaccharide BCD(E)ABCD(E)A de préférence par traitement sous pression d'hydrogène en présence de palladium sur charbon (schéma 79).

B _Ac CD(E) A

Schéma 79

Procédés 22 et 23 : Cibles D(E)AB _Af CD (XXIII) et D(EUBCD (XXIV)

L'invention se rapporte au procédé de préparation de l'hexasaccharide

D(E)AB _AC CD (XXIII), tel que défini dans la liste Ll, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : condensation du monosaccharide accepteur 20 et du tétrasaccharide donneur 86 conduisant au pentasaccharide accepteur 134 ; délévulinoylation du pentasaccharide 134 conduisant au pentasaccharide 135 ; condensation du pentasaccharide accepteur 135 et du monosaccharide donneur 3 conduisant à l'hexasaccharide 136 ; délévulinoylation de l'hexasaccharide 136 conduisant à l'hexasaccharide 136a ; déprotection en deux étapes de l'hexasaccharide 136a incluant une étape d'hydrolyse acide des fonctions isopropylidènse puis la débenzylation et la réduction concomitante des fonctions trichloroacétamides conduisant à l'hexasaccharide D(E)AB AcCD de préférence par traitement sous pression d'hydrogène en présence de palladium sur charbon (schéma 80).

L'invention se rapporte aussi au procédé de préparation de l'hexasaccharide D(E)ABCD (XXIV), tel que défini dans la lsite Ll, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : condensation du monosaccharide accepteur 20 et du tétrasaccharide donneur 86 conduisant au pentasaccharide 134 ; délévulinoylation du pentasaccharide 134 conduisant au pentasaccharide accepteur 135 ; condensation du pentasaccharide accepteur 135 et du monosaccharide donneur 3 conduisant à l'hexasaccharide 136 ; transestérification de l'hexasaccharide 136 puis hydrolyse acide des fontcions isopropylidènes suivie de Fhydrogénolyse des fonctions benzyles et de la réduction concomitante des fonctions trichloroacétamides conduisant à l'hexasaccharide D(E)ABCD de préférence sous pression d'hydrogène en présence de palladium sur charbon (schéma 80).

OTCA

^DéL -C ¹ 1 ³ 36a B = IfS^ ) OéLev. DéAc 136b R = H, R' = H ^y

Schéma 80

Procédés 24 et 25 : Cibles B _A( .CD(EUBA _f CD (XXV) et BCD(EUBCD (XXVI)

L'invention se rapporte au procédé de préparation de l'octasaccharide B _ac CD(E)AB AcCD (XXV), tel que défini dans la lsite Ll, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : condensation de l'hexasaccharide accepteur 136 et du disaccharide donneur 47 conduisant à l'octasaccharide 137 ;

délévulinoylation de l'octasaccharide 137 conduisant à l'octasaccharide accepteur 137a ; déprotection en deux étapes de l'hexasaccharide 137a incluant une étape d'hydrolyse acide des fonctions isopropylidènse puis la débenzylation et la réduction concomitante des fonctions trichloroacétamides conduisant à l'octasaccharide B _ac CD(E)AB _AC CD de préférence par traitement sous pression d'hydrogène en présence de palladium sur charbon (schéma 81).

L'invention se rapprote au procédé de préparation de l'octasaccharide BCD(E)ABCD (XXVI), tel que défini aux revendications 1, 12 ou 13, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : condensation de l'hexasaccharide accepteur 136 et du disaccharide donneur 47 conduisant à l'octasaccharide 137 ; transestérification de l'octasaccharide 137 puis hydrolyse acide des fontcions isopropylidènes suivie de l'hydrogénolyse des fonctions benzyles et de la réduction concomitante des fonctions trichloroacétamides conduisant à l'octasaccharide BCD(E)ABCD de préférence sous pression d'hydrogène en présence de palladium sur charbon (schéma 81).

Schéma 81

(XXVIII)

L'invention se rapporte au procédé de préparation du décasaccharide D(E)AB _AC CD(E)ABACC (XXVII), tel que défini dans la liste Ll, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :

condensation du tétrasaccharide accepteur 85 et du monosaccharide donneur 3 conduisant au pentasaccharide 138a ; délévulinoylation du pentasaccharide 138a conduisant au pentasaccharide accepteur 138b ; condensation du pentasccharide accepteur 138b et du disaccharide donneur 47 conduisant à Pheptasaccharide 139a ; délévulinoylation de l'heptasaccharide 139a conduisant à l'heptasaccharide 139b ; condensation de l'heptasaccharide accepteur 139b et du disaccharide donneur 80 conduisant au nonasaccharide 140a ; délévulinoylation du nonasaccharide 140a conduisant au nonasaccharide accepteur 140b ; condensation du nonasaccharide accepteur 140b et du monosaccharide donneur 3 conduinsant au décasaccharide 141a ; délévulinoylation du décasaccharide 141a conduisant au décasaccharide accepteur 141b ; déprotection en deux étapes du décasaccharide 141b incluant une étape d'hydrolyse acide des fonctions isopropylidènes puis la débenzylation et la réduction concomitante des fonctions trichloroacétamides conduisant au décasaccharide D(E)AB _AC CD(E)AB _AC C de préférence par traitement sous pression d'hydrogène en présence de palladium sur charbon (schéma 82).

L'invention se rapporte au procédé de préparation du décasaccharide D(E)ABCD(E)ABC (XXVIII), tel que défini dans la liste Ll, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : condensation du tétrasaccharide accepteur 85 et du monosaccharide donneur 3 conduisant au pentasaccharide 138a ; délévulinoylation du pentasaccharide accepteur 138a conduisant au pentasaccharide accepteur 138b ; condensation du pentasaccharide 138b et du disaccharide donneur 47 conduisant à l'heptasaccharide 139a ; délévulinoylation de l'heptasaccharide 139a conduisant à l'heptasaccharide accepteur 139b ; condensation de l'heptasaccharide accepteur 139b et du disaccharide donneur 80 conduisant au nonasaccharide 140 ;

délévulinoylation du nonasaccharide 140a conduisant au nonasaccharide accepteur 140b ; condensation du nonasaccharide accepteur 140b et du monosaccharide donneur 3 conduinsant au décasaccharide 141a ; déprotection en deux étapes du décasaccharide 141a incluant une étape de transestérification, une étape d'hydrolyse acide des fonctions isopropylidènes puis la débenzylation et la réduction concomitante des fonctions trichloroacétamides conduisant au décasaccharide D(E)ABCD(E)ABC de préférence par traitement sous pression d'hydrogène en présence de palladium sur charbon (schéma 82).

139a 139b

Schéma 82

Exemple de mise en évidence de l'activité biologique des saccharides selon l'invention

1. Obtention des anticorps monoclonaux (mAbs)

Protocole 1) Quatre souris BP2 ont reçu par voie intrapéritonéale (i.p.) 5x10 bactéries vivantes de la souche S. flexneri 3a toutes les 3 semaines. Après 8 injections, la souris ayant développé la meilleure réponse anticorps contre le LPS de S. flexneri 3a, a reçu une injection de rappel 3 jours avant d'être sacrifiée pour réaliser la fusion cellulaire avec les splénocytes issus de la rate. Deux mAbs de type IgG (G17-12 and G17-37) reconnaissant spécifiquement le LPS de S. flexneri 3a ont été obtenus et caractérisés.

Protocole 2) Dix souris Balb/C et quatre souris BP2 ont été immunisées par injection en i.p. avec des bactéries vivantes virulentes de la souche S. flexneri 3a, toutes les trois semaines, en utilisant 2x10 bactéries pour les 2 premières immunisations et 5x10 pour les 4 suivantes. Comme la réponse anticorps anti-LPS 3a était trop faible pour réaliser une fusion cellulaire une série supplémentaire de 4 injections a été réalisée. Deux mAbs de type IgM, G19-2 et L18-9, ont été obtenus.

2. Caractérisation des déterminants oligosaccharidiques reconnus par les mAbs.

La caractérisation des déterminants oligosaccharidiques reconnus par les quatre mAbs obtenus a été réalisée en mesurant par ELISA d'inhibition l'interaction des différents oligosaccharides synthétisés avec ces mAbs.

1) Tout d'abord, une courbe standard DO = f (concentration du mAb) a été établie pour chaque anticorps.

Pour cela, du LPS purifié à partir de S. flexneri 3a a été fixé dans les puits de plaques ELISA (plaque à 96 puits), à une concentration de 25 μg/ml dans un tampon carbonate pH 9.6, à 4°C, pendant la nuit. Après lavage des puits avec une solution de PBS/ Tween 20 (0.05%) 1% et une étape de saturation avec PBS/BSA 1% pendant 30 minutes à 4 ⁰ C, différentes concentrations de chaque mAb ont été incubées 30 minutes à 4°C. Après une étape de lavage, un anticorps secondaire couplé à la phosphatase alcaline et spécifique des IgG ou des IgM de souris a été ajouté à une dilution de 1/5000 (Sigma- Aldrich) pendant Ih à 37°C. Après lavage, la réaction enzymatique a été effectuée avec le substrat spécifique de la phosphatase alcaline (12 mg de p-nitrophénylphosphate dans 1.2 ml de tampon Tris-HCl buffer IM (pH

^

8.8) et 10.8 ml de NaCl 5M). Une fois la réaction colorée développée, les plaques ont été lues à 405 nm (lecteur de plaque Dynatech MR 4000). La courbe standard OD =/(Ab concentration) a été affinée avec l'équation 7= a∑l +bX+c, où 7 correspond à la DO et X k la concentration en anticorps. Un facteur de corrélation (r2) de 0.99 a été généralement obtenu.

2) La concentration en oligosaccharide capable d'inhiber 50% de la fixation du mAb sur le LPS 3a a été ensuite déterminée comme suit.

Chaque mAb a été utilisé à une concentration donnée, celle définie comme la première concentration testée donnant une DO maximum sur la courbe standard (le premier point au début du plateau de la courbe). Différentes concentrations de chacun des oligosaccharides à tester ont ensuite été incubées séparément avec le mAb à concentration constante, pendant la nuit à 4°C, dans le tampon PBS-BSA 1%. La mesure de la concentration d'anticorps libre a été réalisée comme mentionné ci-dessus, après incubation des mélanges mAb/oligosaccharides à 4°C pendant 30 minutes sur des plaques recouvertes de LPS 3a et en utilisant la courbe standard réalisée en parallèle sur la même plaque. Pour chaque mAb et chaque oligosaccharide, une valeur appelée IC _5O a ensuite été calculée correspondant à la concentration en oligosaccharide permettant d'inhiber 50% de la fixation du mAb sur le LPS 3a.

Les tableaux suivants résument les résultats obtenus pour les oligosaccharides disponibles à ce jour en interaction avec les deux2 mlgG et un des deux mAb IgM.

Par ailleurs, l'IC ₅₀ caractérisant l'interaction de ces anticorps avec le LPS 3a a été également défini. Les valeurs sont 19 ng/ml pour Ll 8-9 (mlgM) ; 39 ng/ml pour Gl 9-2 (mlgM) ; et 450 ng/ml pour G17-12 et G17-37 (mlgG). Il est important de noter qu'ici la valeur est exprimée en ng/ml car il est très difficile d'évaluer la masse moléculaire du LPS ne connaissant pas précisément la longueur des chaînes et donc le nombre de répétitions du motif oligosaccharide de base.

Tableau 1 : mlgG C7-37 et mlgG G7-12

II est important de noter : (i) qu'il n'y a aucune différence entre ces deux anticorps pour la reconnaissance des oligosaccharides. Comme ils sont issus d'une même dilution limite, il est fort probable qu'il s'agit en fait d'un seul et même mAb ; (ii) ces résultats mettent en évidence le rôle crucial joué par Pacétylation du résidu C dans la reconnaissance.

Tableau 2 : IgM (G 19-2)

Les mêmes oligosaccharides G, M, 0 et R sont reconnus par cet anticorps mlgM et par les mlgG (tableaux 1 et 2) confirmant l'importance de la présence de l'acétyl. L'apport de résidus additionnels à la séquence oligosaccharidique G n'améliore pas la reconnaissance. Les valeurs obtenues ici sont plus élevées indiquant que l'interaction est plus faible que celle observée avec les mlgG.

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