本发明属于天然药物及药物化学领域， 涉及杂环氨基小檗胺衍生 物， 还涉及制备这些化合物的方法、 包含该化合物的组合物及其在制备 抗肿瘤药物中的用途。 背景技术

小檗胺 （berbamine, BBM ) 又称为 6,6，,7-三曱氧基 -2,2，-二曱基升 白胺 -12-醇（ 6,6，,7-trimethoxy-2,2，-dimethylberbaman-12-ol ) ， 是从中国 中草药小檗属植物中提取的一种双苄基异喹啉 类生物碱。 小檗胺的生 。

Oxyacanthine

Berbamine Cocsuline

小檗胺 尖刺碱 防己苏林

CAS: 478-61 - CAS: 15352-74-6 CAS: 26279-88-9

Gyclss i 6 Thalrugosaminine

环轮藤宁 Mol. Wt.: 560.73 绘唐松草宁 Mol. Wt.: 652.78

CAS: 518-94-5 CAS: 22226-73-9 小檗胺以及其类似物

小檗胺具有刺激髓细胞增殖作用， 能提高造血干细胞集落因子

( GCSF ) 的含量， 促进骨髓造血干细胞和粒祖细胞的增殖， 并向粒系 细胞分化， 促进白细胞的增生 （林传荣等， 升白胶（小檗胺）治疗化疗 性白细胞减少症的临床观察， 中成药， 1994 16 (7): 29 )

小檗胺通过诱导细胞凋亡和影响细胞周期的方 式抑制前列腺癌 PC-3细胞的增殖， 并具有时间和浓度的依赖性 （孙鹏等， 小檗胺诱 导前列腺癌 PC-3细胞凋亡及及机制，中华实验外科杂志， 2007 , 24 (8): 957 )

小檗胺在体外对 K562细胞具有明显的增殖抑制作用及明确的诱 导凋亡作用， 并呈时间-浓度依赖关系； 在荷瘤棵鼠体内， 小檗胺同 样具有显著的抑制 K562细胞生长的作用， 尤其能下调瘤体组织细胞 bcr/abl mRNA的表达水平 （吴东等， 小檗胺对 K562细胞体外及体内 作用的实验研究， 中华实验血液学杂志， 2005 13 (3): 373 ) 小檗胺对细胞毒性 T淋巴细胞有抑制作用，对小鼠体外自然杀伤� � 胞活性有明显促进作用， 在体内外可诱生出较高水平白细胞介素 II (IL-2), 可避免用大剂量 IL-2治疗肿瘤时引起的毒副反应。 实验证明， 小檗胺对辐射损伤小鼠免疫系统有良好防护作 用 （刘新等， 小檗胺对

BALB/C小鼠的免疫调节作用， 中国医科大学学报， 1996, 25 (3): 229; 罗崇念等， 小檗胺对小鼠脾细胞毒性 T淋巴细胞活性的抑制作用， 中国 药理学与毒理学杂志， 1995 , 9 (2): 159-160; 葛明珠等， 盐酸小檗胺对 辐射小鼠的免疫防护作用的实险研究，免疫学 杂志， 1998 , 14 (4): 238 )。

小檗胺诱导人白血病 Jurkat细胞凋亡机制也有研究与报道。 其结果 表明， 小檗胺能选择性抑制人白血病 Jurkat细胞凋亡， 使细胞周期阻滞 于 S期， 同时细胞 caspase-3蛋白表达增高。 且随着药物作用浓度从 0.5 ug/mL增加到 10 ug/mL， 细胞存活率由 93.69%降低为 14.85%， 在此作 用浓度范围内小檗胺对正常人外周血白细胞无 明显细胞毒作用 （董志煜 等， 小檗胺诱导人白血病 Jurkat细胞凋亡的实验研究， 中国肿瘤， 2007， 16 ( 9 ) :722 ) 。

中国已经批准盐酸小檗胺片的上市销售， 用于治疗各种原因引起的 白细胞减少症， 包括预防癌症放疗、 化疗后白细胞的减少。

也有报道小檗胺对细胞增殖的抑制作用， 例如小檗胺及其某些衍生 物对脑恶性胶质瘤细胞、 人宫颈癌细胞、 腹水癌细胞及黑色素瘤细胞有 明显的抑制作用（张金红等，小檗胺及其衍生 物的结构对宫颈癌（ CHeLa ) 细胞生长增殖的影响， 南开大学学 4艮 (自然科学） , 1996 , 29 ( 2 ): 89; 张金红等， 小檗胺及其衍生物对恶性黑色素瘤细胞增殖的 影响， 中草药， 1997， 28 (8): 483; 张金红等， 小檗胺衍生物 （ EBB )体内抗肿瘤作用 初探， 中草药， 1998 , 29 (4): 243; 段江燕等， 小檗胺类化合物对黑色 瘤细胞内钙调蛋白水平的影响， 中草药， 2002 , 33 (1): 59 )。 其中 [0-(4- 乙氧基) -丁基]-小檗胺 （EBB ) 为专一性强的 CaM拮抗剂， 专一性系数 高出小檗胺 6.5倍。 EBB诱导肺癌细胞凋亡， 同时维护主要器官细胞正 常生物功能（段江燕等， [0-(4-乙氧基)-丁基] -小檗胺诱导肺癌细胞凋亡 的初探， 山西师范大学学报（自然科学版） ， 2001， 15 (4): 55 ) 。 另一 小檗胺衍生物为 O-丹磺酞基小檗胺（DB ) ， 其含有疏水性萤光基团。 DB对依赖于 CaM的红细胞膜 Ca ²⁺ +Mg ²⁺ ATPase抑制活性比小檗胺强 25倍； DB对细胞内的颗粒酶 酸二酯酶活性有明显的抑制作用， 且存 在剂量与活性的关联性。 另外， 还发现 DB对肺癌细胞的作用比小檗胺 强， 而对人胚肺细胞细胞毒性小， 其抑制肺癌细胞除了与抑制原癌基因 有关， 也与控制失活的抑癌基因有关（张金红等， 钙调素拮抗剂 0-丹酰 基基小檗胺对磷酸二酯酶及肺细胞增殖的影响 ， 南开大学学报 (自然科 学） ， 2001， 34 (3): 64 ) 。

本发明人前期的研究已证实， 小分子化合物小檗胺具有明显抗人 白血病作用 （ Leukemia Research. 2006, 30: 17-23 ) 。

本发明人在专利 CN 101273989A描述了一类小檗胺衍生物用于 制备治疗抗肿瘤药物中的应用， 主要涉及苯曱酰基和苄基衍生物。

迄今为止， 所报道的化合物只能短暂抑制肿瘤细胞生长， 不能完全 清除肿瘤。 尤其是对血液系统恶性肿瘤如白血病、 多发性骨髓瘤、 淋巴 瘤， 和实体肿瘤如肝癌、 肺癌、 乳腺癌、 前列腺癌、 骨肉瘤等。 显而易 见， 抗肿瘤活性更高的小檗胺衍生物仍有待继续研 究与开发。 发明内容

本发明的一个目的是提供式 (I)的新型小檗胺衍生物或其药学上 可接受的盐：

其中，

n = 1-15;

Ri选自 H、 d-C ₆ 烷氧基、 卤代 d-C ₆ 烷氧基、 d-C ₆ 烷石基、 卤代 d-C ₆ 烷石基、 d-C ₆ 烷基、 卤代 d-C ₆ 烷基、 C ₃ -C ₇ 环烷基、 卤代 C ₃ -C ₇ 环烷基、 卤素、 硝基、 任选由一个或两个 C _r C ₆ 烷基取代的氨基和氰基；

R ₂ 为被选自 C _r C ₆ 烷氧基、 代^-^烷氧基、 C _r C ₆ 烷石基、 卤代 d-C ₆ 烷石基、 d-C ₆ 烷基、 卤代 d-C ₆ 烷基、 C ₃ -C ₇ 环烷基、 卤代 C ₃ -C ₇ 环烷基、 羟基、 卤素、 硝基、 任选由一个或两个 d-C ₆ 烷基取代的氨基 和氰基的取代基任选取代的芳基氨基曱酰基、 芳基羰基氨基、 杂芳基氨 基曱酰基、 杂芳基羰基氨基或氮连接的含氮杂环基羰基；

X、 Y独立地为不存在、 CH、 N或S， 条件是 X和 Y不能同时为不 存在。

本发明的另一个目的是提供制备本发明式 (I)化合物的方法：

,(CH 、N人 CI

III (路线 1 ) 其中 -氨基化反 应来制备， 其中， 化合物 (II)和 (III)中的 n、 X、 Y、 1^和1 ₂ 与上文 在式 (I)中的定义相同。 反应来制备

V II

或 IV v' II

(路线 2 )

其中， 化合物 (11)、 （IV)和 (IV)中的 X、 Y、 和 与上文在式 (I) 中的定义相同。

其中， 式 (V)化合物优选为被选自 C _r C ₆ 烷氧基、 1¾代(^ ₁ -0 ₎ 烷氧基、 d-c ₆ 烷石基、 卤代 d-C ₆ 烷石基、 d-C ₆ 烷基、 卤代 d-C ₆ 烷基、 c ₃ -c ₇ 环烷基、 卤代 C ₃ -C ₇ 环烷基、羟基、 卤素、硝基、任选由一个或两个 d-C ₆ 烷基取代的氨基和氰基的取代基任选取代的芳 基胺、 杂芳基胺或含氮杂 环。

式 (v，)化合物优选为被选自 c _r c ₆ 烷氧基、 卤代 c _r c ₆ 烷氧基、 c _r c ₆ 烷石 基、 卤代 d-C ₆ 烷石 基、 d-C ₆ 烷基、 卤代 d-C ₆ 烷基、 c ₃ -c ₇ 环烷基、 卤代 C ₃ -C ₇ 环烷基、 羟基、 卤素、 硝基、 任选由一个或两个 d-C ₆ 烷基取 代的氨基和氰基的取代基任选取代的芳基曱酰 卤、 杂芳基曱酰卤或氮连 接的含氮杂环基曱酰卤。 反应来制备

VI VII I IVV (路线 3 ) 其中， 化合物 (VI)和 (IV)中的 X、 丫和！^与上文在式 (I)中的定义相 同 其中， 式 (VII)卤代试剂可以为但不限于三氯氧 （POCl ₃ ) 、 氯化 亚砜 ( SOCl ₂ )或草酰氯（（COCl) ₂ ) 。

本发明的另一个目的是提供包含本发明化合物 的药物组合物， 所 述药物组合物包括至少一种本发明化合物， 和任选的药学上可以接受 的赋形剂。

本发明的另一个目的是提供本发明化合物或包 含该化合物的药物 组合物在制备药物、 特别是抗肿瘤药物中的用途。 相应地， 本发明提 供一种治疗肿瘤患者的方法， 包括给予需要治疗的患者治疗有效量的 至少一种本发明的化合物。所述肿瘤特别选自 白血病、多发性骨髓瘤、 淋巴瘤、 肝癌、 胃癌、 乳腺癌、 胆管细胞癌、 胰腺癌、 肺癌、 大肠癌、 骨肉瘤、 黑色素瘤、 前列腺癌等。

本发明还涉及用于治疗肿瘤的本发明的化合物 。 具体实施方式

本发明提供通 (I)的新型小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐 ：

n = 1-15;

选自 H、 d-C ₆ 烷氧基、 卤代 C 烷氧基、 d-C ₆ 烷石基、 卤代 d-C ₆ 烷石基、 d-C ₆ 烷基、 卤代 d-C ₆ 烷基、 c ₃ -c ₇ 环烷基、 卤代 c ₃ -c ₇ 环烷基、 卤素、 硝基、 任选由一个或两个 c _r c ₆ 烷基取代的氨基和氰基; R ₂ 选自被选自 d-C ₆ 烷氧基、 卤代 d-C ₆ 烷氧基、 d-C ₆ 烷石基、 卤 代^-^烷石 基、 d-C ₆ 烷基、 卤代 d-C ₆ 烷基、 C ₃ -C ₇ 环烷基、 卤代 C ₃ -C ₇ 环烷基、 羟基、 卤素、 硝基、 任选由一个或两个 d-C ₆ 烷基取代的氨基 和氰基的取代基任意取代的芳基氨基曱酰基、 芳基羰基氨基、 杂芳基氨 基曱酰基、 杂芳基羰基氨基、 氮连接的含氮杂环基羰基；

X、 Y为不存在、 CH、 N或S， X和 Y不能同时为不存在。

在一种实施方式中， 本发明涉及式 I的化合物， 其中 n为 1- 10的整 数。

在一种实施方式中， 本发明涉及式 I的化合物， 其中 n为 1-7的整 数。

在一种实施方式中， 本发明涉及式 I的化合物， 其中 n为 3-5的整 数， 例如 n为 3， 4或 5。

在一种实施方式中， 本发明涉及式 I的化合物， 其中 1^为11、 Ci-C ₆ 烷氧基、 d-C ₆ 烷硫基、 d-C ₆ 烷基、 C ₃ -C ₇ 环烷基、 卤素、 硝基、 任选由 一个或两个 C _r C ₆ 烷基取代的氨基或氰基。

在一种实施方式中， 本发明涉及式 I的化合物， 其中 1^为11、 Ci-C ₆ 烷氧基、 d-C ₆ 烷基、 c ₃ -c ₇ 环烷基或卤素。

在一种实施方式中， 本发明涉及式 I的化合物， 其中 1^为11、 Ci-C ₃ 烷氧基、 c _r c ₃ 烷基或 c ₅ -c ₆ 环烷基。

在一种实施方式中， 本发明涉及式 I的化合物， 其中 1^为11、 曱氧 基或曱基。

在一种实施方式中， 本发明涉及式 I的化合物， 其中 为曱基。 在一种实施方式中， 本发明涉及式 I的化合物， 其中 为氢。

在一种实施方式中， 本发明涉及式 I的化合物， 其中 R ₂ 为被选自 d-c ₆ 烷氧基、 d-C ₆ 烷硫基、 d-C ₆ 烷基、 c ₃ -c ₇ 环烷基、 羟基、 卤素、 硝基、 任选由一个或两个 d-C ₆ 烷基取代的氨基和氰基的取代基任意取 代的芳基氨基曱酰基、 芳基羰基氨基、 杂芳基氨基曱酰基、 杂芳基羰基 氨基、 氮连接的含氮杂环基羰基。

在一种实施方式中， 本发明涉及式 I的化合物， 其中 R ₂ 为被选自 d-c ₃ 烷氧基、 d-C ₃ 烷基、 c ₅ -c ₆ 环烷基、 羟基、 卤素、 硝基、 任选由一 个或两个 d-C ₃ 烷基取代的氨基和氰基的取代基任意取代 的芳基氨基曱 酰基、 芳基羰基氨基、 杂芳基氨基曱酰基、 杂芳基羰基氨基、 氮连接的 含氮杂环基羰基。

在一种实施方式中， 本发明涉及式 I的化合物， 其中 R ₂ 为被选自 C C ₃ 烷氧基和卤素的取代基任意取代的芳基氨 基曱酰基、 芳基羰基氨 基、 杂芳基氨基曱酰基、 杂芳基羰基氨基或氮连接的含氮杂环基羰基。

在一种实施方式中， 本发明涉及式 I的化合物， 其中 R ₂ 为被选自曱 氧基、 氯和氟的取代基任意取代的芳基氨基曱酰基、 芳基羰基氨基、 杂 芳基氨基曱酰基、 杂芳基羰基氨基、 氮连接的含氮杂环基羰基。

在一种实施方式中， 本发明涉及式 I的化合物， 其中 R ₂ 为被选自曱 氧基、 氯和氟的取代基任意取代的苯基氨基曱酰基、 苯基羰基氨基、 吗 啉 -4-基羰基。 。

在一种实施方式中，本发明涉及式 I的化合物，其中 X = N， Y = CH。 在一种实施方式中， 本发明涉及式 I的化合物， 其中 X = S， 丫=不 存在。

在一种实施方式中，本发明涉及式 I的化合物，其中 X = CH， Y = N。 在一种实施方式中， 本发明涉及式 I的化合物， 其中 X = CH， Y =

CH。

本发明不同实施方案中的不同的优选条件在化 学上允许的情况下 可以任意组合。

在另一种 ：

12-0-(3-(5-(2-氯 -5-曱氧基苯曱酰氨基) -嘧啶 -2-氨基) -丙基)-小檗 胺 (化合物（ι >，

12-0-(3-(5-(2-氯 -6-曱基苯氨曱酰基) -噻唑 -2-氨基) -丙基)-小檗胺 (化 合物 (2 )，

12-0-(3-(5-(3-曱氧基苯氨曱酰基) -4-曱基噻唑 -2-氨基) -丙基)-小檗胺 Ci匕合物 (3 )，

12-0-(3-(5-(3-曱氧基苯氨曱酰基) -吡嗪 -2-氨基) -丙基)-小檗胺 (化合 物 (4))，

12-0-(3-(5- (吗啉 -4-曱酰基) -吡嗪 -2-氨基) -丙基)-小檗胺 (化合物 (5))，

12-0-(3-(5-(3-曱氧基苯氨曱酰基) -吡啶 -2-氨基) -丙基)-小檗胺 (化合 物 (6))，

12-0-(3-(5-(4-氟苯氨曱酰基) -吡啶 -2-氨基) -丙基)-小檗胺 (化合物

(7))。

本发明涉及以下形式的本发明的式 (I)化合物： 它们的盐、 溶剂化 物、 水合物、 加成物、 复合物、 多晶型物或前药。

如本文所使用，术语 "C _r C ₆ 烷基"是指含有 1-6个碳原子的直链或 支链烃基。 d-C ₆ 烷基的例子包括但不限于曱基、 乙基、 正丙基、 异 丙基、 叔丁基、 正戊基和正己基。 术语" d-C ₆ 烷氧基 "是指 -0- Ci-C ₆ 烷基。

术语 "d-c ₆ 烷硫基 "是指 -S- d-C ₆ 烷基。

术语" C ₃ -C ₇ 环烷基 "是指具有饱和环的 3-7元单环系统的烃， C ₃ -C ₇ 环烷基可以为环丙基、 环丁基、 环戊基、 环己基、 环庚基。

术语" 1¾素 "是指氟、 氯、 溴或碘。

术语"芳基"是指 6-20个碳原子的单价芳香烃基。优选， 本发明中 的芳基最多含有 18、 17、 16、 15、 14、 13、 12、 11或 10个碳原子。 该芳基可任选被一个或多个 R ² 定义中规定的取代基取代。 在一个实 施方式中， 芳基各环的 0、 1、 2、 3、 4、 5或 6个环原子上被取代基 取代。 芳基的例子包括但不限于苯基、 萘基、 蒽基、 芴基、 茚基等， 优选苯基或萘基。

术语"杂芳基"是指一个或多个碳原子和一个或� ��个选自 N、 0、 S 的杂原子的单价芳香基。 杂芳基可以是含有 2到 6个碳原子和 1到 3 个选自 N、 0、 S的杂原子的具有 3到 7个环成员的单环杂芳基或含 有 4到 9个碳原子和 1到 3个选自 N、 0、 S的杂原子的具有 7到 10 个环成员的双环杂芳基。 该杂芳基可任选被一个或多个 R ² 定义中规 定的取代基取代。 在一个实施方式中， 杂芳基的各环的 0、 1、 2、 3 或 4个环原子上可以被取代基取代。 杂芳基的例子包括但不限于吡啶 基、 1-氧代-吡啶基、 呋喃基、 苯并 [1,3]二氧杂环戊浠基（dioxolyl ) 、 苯并 [1,4]二氧芑基（dioxinyl )、 噻吩基， 吡咯基、 噁唑基、 噁二唑基、 咪唑基、 噻唑基、 异噁唑基、 喹啉基、 吡唑基、 异噻唑基、 哒嗪基、 嘧啶基、 吡。秦基、 三。秦基、 三唑基、 噻二唑基、 异奎啉基、 吲唑基、 苯并噁唑基、 苯并呋喃基、 中氮茚基（ indolizinyl ) 、 咪唑并吡啶基、 四唑基、 苯并咪唑基、 苯并噻唑基、 苯并噻二唑基、 苯并噁二唑基、 吲哚基、 四氢吲哚基、 氮杂吲哚基、 咪唑并吡啶基、 喹唑啉基、 嘌呤 基、 吡咯并 [2,3]嘧啶基、 吡唑并 [3,4]嘧啶基和苯并 (b)噻吩基、 3H-噻 唑并 [2,3-c][l,2,4]噻二唑基、 咪唑并 [l,2-d]-l,2,4-噻二唑基、 咪唑并 [2,l-b]-l,3,4-噻二唑基、 1H,2H-呋喃并 [3,4-d]-l,2,3-噻二唑基、 1H-吡唑 并 [5,l-c]-l,2,4-三唑基、 吡咯并 [3,4-d]-l,2,3-三唑基、 环戊三唑基、 3H- 吡咯并 [3,4-c]异噁唑基、 1H,3H-吡咯并 [1,2-c]噁唑基、 吡咯并 [2,1-b]噁 唑基等。

术语"含氮杂环 -N-基"是指一个或多个碳原子和一个或多个 N原 子以及任选的一个或多个 O或 S原子的 N-连接的饱和或非芳香不饱 和的单环或双环基团。 该含氮杂环 -N-基可以是含有 2到 6个碳原子 和 1到 3个选自 N、 0、 S的杂原子 （其中至少一个为氮） 的具有 3 到 7个环成员的 N-连接单环杂环基或含有 4到 9个碳原子和 1到 3 个选自 N、 0、 S的杂原子（其中至少一个为氮）的具有 7到 10个环成 员的 N-连接双环杂环基。 该杂环基可任选被一个或多个 R ² 定义中规 定的取代基取代。 在一个实施方式中， 杂环基的各环的 0、 1、 2、 3 或 4个环原子上可以被取代基取代。

所述氮连接的杂环的例子包括但不限于， 在氮丙啶、 吖丁啶、 吡 咯、 吡咯烷、 2-吡咯啉、 3-吡咯啉、 咪唑、 咪唑烷、 2-咪唑啉、 3-咪 ^p 坐啉、 吡坐、 吡 ^p 坐啉、 2-吡 ^p 坐啉、 坐啉、 ¹¹ 定、 。秦、 吲味、 二 氢吲哚、 1H-吲唑的 1位， 异吲哚或异二氢吲哚的 2位， 吗啉的 4位 和咔唑或 β-咔啉的 9位连接的那些。 更典型地， 氮连接的杂环包括但 不限于 1-氮丙啶基、 1-吖丁啶基、 1-吡咯基、 1-咪唑基、 1-吡唑基、 1-哌啶基和 4-吗啉基。

术语"取代的"是指一个或多个取代基（其可以� ��相同或不同的）， 各个取代氢原子。

如本文所使用， 术语"式 (I)化合物的药学上可以接受的盐"的例子 是由形成药学上可以接受的阴离子的有机酸形 成的有机酸盐， 包括但不 限于曱苯磺酸盐、 曱磺酸盐、 苹果酸盐、 醋酸盐、 柠檬酸盐、 丙二酸盐、 酒石酸盐、 琥珀酸盐、 乳酸盐、 苯曱酸盐、 抗坏血酸盐、 （X-酮戊二酸盐 和 α-甘油磷酸盐； 也可形成合适的无机盐， 包括但不限于盐酸盐、硫酸 盐、 硝酸盐、 碳酸氢盐和碳酸盐、 磷酸盐、 氢溴酸盐、 氢碘酸盐等。

药学上可以接受的盐可使用本领域熟知的标准 程序获得， 例如， 通 过将足量的碱性化合物和提供药学上可以接受 的阴离子的合适的^ 应生成。

术语"加成物和复合物"是指本发明的化合物与� ��他小分子或生 物大分子以非化学键形成的药学上可以接受的 物质。

如本文所使用， 术语"多晶型物 "是指本发明的化合物或其复合物 的固体晶体形式。 相同化合物的不同的多晶型物可以显示不同的 物 理、化学和 /或光谱性质。不同的物理性质包括但不限于� �定性（例如， 对热或光） 、 可压缩性和密度（对于配制制剂和产品生产是 重要的） 和溶解速率（其可以影响生物利用度） 。 稳定性的不同会造成化学反 应性（例如差异氧化， 使得当由一种多晶型物构成时比由另一多晶型 物构成时剂型更快地褪色）或机械性能（例如 ， 储存时作为动力学有 利的多晶型物的片剂碎末转化成热力学更加稳 定的多晶型物）或两者 (例如，一种多晶型物的片剂在高潮湿度时更� �容易破碎）中的变化。 多晶型物的不同的物理性质可以影响它们的加 工。 例如， 一种多晶型 物可能比另一种更可能形成溶剂化物或可能比 另一种更加难以过滤 或洗去杂质， 这是由于例如其颗粒的形状或大小分布。

如本文所使用， 术语"水合物 "是指本发明的化合物或其盐， 其进 一步包含通过非共价分子间力结合的化学计量 的或非化学计量的量 的水。

如本文所使用， 除非另外说明， 术语"前药"是指可以在生物学条 件（体外或体内）下水解、 氧化或进行其他反应以提供本发明的化合 物的衍生物。 前药仅在生物学条件下经过该反应成为活性化 合物， 或 者它们在它们不反应的形式中具有活性。 通常可以使用公知的方法制 备前药，例如 1 Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery (1995) 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff编， 第 5版）中描述的那些方法。

本发明化合物中小檗胺环部分具有式 I结构式所显示的立体化学 结构。 本文使用的立体化学的定义和约定一般遵循 MCGRAW-HILL DICTIONARY OF CHEMICAL TERMS (S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Book Company, New York, 1984); 和 ELIEL, E.和 WILEN, S., STEREOCHEMISTRY OF ORGANIC COMPOUNDS (John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994)。许多 有机化合物以光学活性形式存在， 即它们具有旋转平面偏光的平面的 能力。 本文使用的术语"治疗"一般是指获得需要的药� ��和 /或生理效 应。 该效应 居完全或部分地预防疾病或其症状， 可以是预防性的； 和 /或根据部分或完全稳定或治愈疾病和 /或由于疾病产生的副作用， 可以是治疗性的。 本文使用的"治疗"涵盖了对患者疾病的任何治� ��， 包括：（a)预防易感染疾病或症状但还没诊断� ��患病的患者所发生的疾 病或症状；（b)抑制疾病的症状，即阻止其发� ��；或 (C)緩解疾病的症状， 即， 导致疾病或症状退化。 发明涉及一种制备式 (I)化合物的方法， ,(CH Λ .. ./(CH2)n

III

ii I (路线 1 )

应来制备， 其中， 化合物 (11)、 （III)中的^ ¾、 n、 X、 Y、 1^和 与上文 在式 (I)中的定义相同， 所述反应一般在碱性、 加热条件下进行。

CIOC丫 ^γ _χ

胺类化合物

R人人 ci

IV V II

(路线 2 ) 化合物通过亲核取代反应来制备。其中，化合 物 (11)、 （IV)和 (IV，）中的 X、 Y、 1^和 与上文在式 (I)中的定义相同。

式 (V)化合物优选为被选自 C _r C ₆ 烷氧基、 卤代 C _r C ₆ 烷氧基、 Ci-C ₆ 烷硫基、 卤代 d-C ₆ 烷硫基、 d-C ₆ 烷基、 卤代 d-C ₆ 烷基、 c ₃ -c ₇ 环烷基、 卤代 C ₃ -C ₇ 环烷基、 羟基、 卤素、 硝基、 任选由一个或两个 d-C ₆ 烷基取 代的氨基和氰基取代基任意取代的芳基胺、 杂芳基胺或含氮杂环； 更优 选为邻位、 对位！ ¾素取代的苯胺、 间位烷氧基取代的苯胺或吗啉。 优选 的式 (V)化合物的实例为氯代或氟代苯胺、 曱氧基取代的苯胺或吗啉。

式 (V，)化合物优选为被选自 C _r C ₆ 烷氧基、 卤代 d-C ₆ 烷氧基、 c _r c ₆ 烷石 基、 卤代 d-C ₆ 烷石 基、 d-C ₆ 烷基、 卤代 d-C ₆ 烷基、 c ₃ -c ₇ 环烷基、 卤代 C ₃ -C ₇ 环烷基、 羟基、 卤素、 硝基、 任选由一个或两个 d-C ₆ 烷基取 代的氨基和氰基的取代基任选取代的芳基曱酰 卤、 杂芳基曱酰卤或氮连 接的含氮杂环基曱酰 1¾ ; 更优选为邻位、对位！ ¾素、 d-C ₆ 烷氧基取代的 苯曱酰卤。 优选的式 (V)化合物的实例为氯代、 曱氧基取代的苯曱酰氯。

该反应步骤一般采用过量胺或加入有机碱来中 和产生的卤化氢， 反 应一般在低温或常温下进行； 对于反应活性低的底物， 需要加热以促使 反应完成。

VI vii iv (路线 3 ) 式 (IV)化合物由羧酸化合物 (VI)与式 (VII)化合物通过羧羟基的卤置 换反应来制备。 其中， 化合物 (VI)和 (IV)中的 X、 丫和！^与上文在式 (I) 中的定义相同。 其中， 式 (VII)化合物优选为三氯氧 （POCl ₃ ) 、 氯化 亚砜（SOCl ₂ )或草酰氯（（COCl) ₂ ) ， 当卤代试剂为三氯氧 、 氯化亚 砜时， 需要将羧酸与其一起加热回流； 卤代试剂为草酰氯时， 反应条件 比较温和。

常规的化学转换可用于实施本发明。 本领域的技术人员可以决定 用于这些化学转换的适当的化学剂、 溶剂、 保护基和反应条件。 相关 信息描述于， 例如， R. Larock, Comprehensive Organic

Transformations , VCH 出版商（1989); T.W. Greene和 P.G.M. Wuts， Protective Groups in Organic Synthesis , 第 3版， John Wiley and

Sons( 1999); L. Fieser^M. Fieser, Fieser and Fieser 's Reagents for Organic Synthesis , John Wiley and Sons( 1994); 及 L. Paquette编辑的 Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis , John Wiley and

Sons( 1995)及其后来的版本。

保护基指那些一旦连接活性部分 (例如， 羟基或氨基)， 防止这些 基保护基的例子包括但不限于， 烷基、 苯曱基（苄基） 、 浠丙基、 三 苯曱基 (即， 三苯基曱基)、 酰基 (例如， 苯曱酰基、 乙酰基或 HOOC-X"-CO-， X"为亚烷基、 亚链浠基、 亚环烷基或亚芳基)、 曱硅 烷基 (例如， 三曱基曱硅烷基、 三乙基曱硅烷基和叔丁基二曱基曱硅 烷基)、 烷氧基羰基、 氨基羰基 (例如， 二曱基氨基羰基、 曱基乙氨基 羰基和苯基氨基羰基)、 烷氧曱基、 苯曱氧曱基和烷基巯曱基。 氨基 保护基的例子包括但不限于， 烷氧基羰基、 烷酰基、 芳氧基羰基、 芳 基取代的烷基等。羟基和氨基保护基已在 T.W. Greene和 P.G..M. Wuts , Protective Groups in Organic Synthesis, 第 2版， John Wiley and

Sons(1991)中讨论。 羟基和氨基保护基都可在反应后通过常规的方 法 去除。

本发明还提供了包含本发明式 I化合物的药物组合物。本发明提供 了这样的药物组合物， 其包含至少一种如上所述的本发明的式 I化合 物， 和任选的药学上可以接受的赋形剂。

制备各种含有一定量的活性成分的药物组合物 的方法是已知的， REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, Martin, E.W., ed" Mack Publishing Company, 19th ed.(1995)所述， 制备所述药物组合物的方法 包括掺入适当的药学赋形剂、 载体、 稀释剂等。

以已知的方法制造本发明的药物制剂， 包括常规的混合、 溶解或 冻干方法。 本发明的化合物可以制成药物组合物， 并向患者以适于选定 的施用方式的各种途径施用， 例如， 口服或肠胃外（通过静脉内、 肌内、 局部或皮下途径） 。

因此， 本发明的化合物结合药学上可以接受的载体（ 如惰性稀释剂 或可同化的可食用的载体）可以全身施用， 例如， 口服。 它们可以封闭 在硬或软壳的明胶胶嚢中， 可以压为片剂。 对于口服治疗施用， 活性化 合物可以结合一种或多种赋形剂， 并以可吞咽的片剂、颊含片剂、含片、 胶嚢剂、 酏剂、 悬浮剂、 糖浆、 圆片等的形式使用。 这种组合物和制剂 应该包含至少 0.1%的活性化合物。这种组合物和制剂的比例� �然可以变 化， 可以占给定的单位剂型重量的大约 1%至大约 99%。 在这种治疗有 用的组合物中， 活性化合物的量使得能够获得有效剂量水平。 片剂、 含片、 丸剂、 胶嚢剂等也可以包含： 粘合剂， 如黄蓍胶、 阿 拉伯胶、 玉米淀粉或明胶； 赋形剂， 如磷酸氢二钙； 崩解剂， 如玉米淀 粉、 马铃薯淀粉、 藻酸等； 润滑剂， 如硬脂酸镁； 和甜味剂， 如蔗糖、 果糖、 乳糖或阿司帕坦； 或调味剂， 如薄荷、 冬青油或樱桃香味。 当单 位剂型是胶嚢时， 除了上面类型的材料， 它还可以包含液体载体， 如植 物油或聚乙二醇。 各种其他材料可以存在， 作为包衣， 或以其他方式改 变固体单位剂型的物理形式。 例如， 片剂、 丸剂或胶嚢剂可以用明胶、 蜡、 虫胶或糖等包衣。 糖浆或酏剂可以包含活性化合物， 蔗糖或果糖作 为甜味剂， 对羟苯曱酸曱酯或对羟苯曱酸丙酯作为防腐剂 ， 染料和调味 剂 （如樱桃香料或桔子香料） 。 当然， 用于制备任何单位剂型的任何材 料应该是药学上可以接受的且以应用的量基本 上无毒。 此外， 活性化合 物可以掺入緩释制剂和緩释装置中。

活性化合物也可以通过输注或注射来静脉内或 腹膜内施用。 可以制 备活性化合物或其盐的水溶液， 任选地混和无毒的表面活性剂。 也可以 制备在甘油、 液体聚乙二醇、 甘油三乙酸酯及其混合物以及油中的分散 剂。 在普通的储存和使用条件下， 这些制剂包含防腐剂以防止微生物生 长。

适于注射或输注的药物剂型可以包括包含适于 无菌的可注射或可 输注的溶液或分散剂的即时制剂的活性成分（ 任选封装在脂质体中） 的 无菌水溶液或分散剂或无菌粉末。 在所有情况下， 最终的剂型在生产和 储存条件下必须是无菌的、 液体的和稳定的。 液体载体可以是溶剂或液 体分散介质， 包括， 例如水、 乙醇、 多元醇（例如， 甘油、 丙二醇、 液 体聚乙二醇等） 、 植物油、 无毒的甘油酯及其合适的混合物。 可以维持 合适的流动性， 例如， 通过脂质体的形成， 通过在分散剂的情况下维持 所需的粒子大小， 或通过表面活性剂的使用。 可以通过各种抗细菌剂和 抗真菌剂 （如对羟苯曱酸酯、 氯丁醇、 苯酚、 山梨酸、 硫柳汞等）产生 预防微生物的作用。 在许多情况下， 优选包括等渗剂， 如糖、 緩冲剂或 氯化钠。 通过使用延緩吸收剂的组合物 （例如， 单硬脂酸铝和明胶）可 以产生可注射的组合物的延长吸收。 通过将合适的溶剂中的需要量的活性化合物与 需要的上面列举的 各种其他成分结合， 然后进行过滤灭菌， 制备无菌可注射溶液。 在用于 制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下， 优选的制备方法是真空干燥和 冷冻干燥技术， 这会产生活性成分加上任何另外需要的以前无 菌过滤溶 液中存在的成分的粉末。

有用的固体载体包括粉碎的固体（如滑石、 粘土、 ί晶纤维素、 二 氧化硅、 氧化铝等）。 有用的液体载体包括水、 乙醇或乙二醇或水 -乙醇 /乙二醇混合物，本发明的化合物可以任选在� �毒的表面活性剂的帮助下 以有效含量溶解或分散在其中。 可以加入佐剂 （如香味）和另外的抗 ί 生物剂来优化对于给定用途的性质。

增稠剂 （如合成的聚合物、 脂肪酸、 脂肪酸盐和酯、 脂肪醇、 改性 纤维素或改性无机材料）也可和液体载体用于 形成可涂覆的糊剂、凝胶、 软膏、 肥皂等， 直接用于使用者的皮肤上。

化合物或其活性盐或衍生物的治疗需要量， 不仅取决于选择的特定 的盐， 而且取决于施药方式、待治疗的疾病的本质和 患者的年龄和状态， 最终取决于在场医师或临床医生的决定。

上述制剂可以以单位剂型存在， 该单位剂型是含有单位剂量的物 理分散单元， 适于向人体和其它哺乳动物体给药。 单位剂型可以是胶 嚢或片剂， 或是很多胶嚢或片剂。 根据所涉及的具体治疗， 活性成分 的单位剂量的量可以在大约 0.1到大约 1000毫克或更多之间进行变化 或调整。

本发明还提供本发明的化合物或包含该化合物 的组合物在制备药 物、 特别是抗肿瘤药物中的用途。 相应地， 本发明提供一种治疗肿瘤 患者的方法， 包括给予需要治疗的患者治疗有效量的至少一 种本发明 的化合物。 本发明的小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐 例如可用于 治疗白血病、 多发性骨髓瘤、 淋巴瘤、 肝癌、 胃癌、 乳腺癌、 胆管细 胞癌、 胰腺癌、 肺癌、 大肠癌、 骨肉瘤、 黑色素瘤、 宫颈癌、 神经胶 质瘤、 鼻咽癌、 喉癌、 食管癌、 中耳肿瘤、 前列腺癌等肿瘤。

在下列实施例中， 将更加具体地解释本发明。 但应理解， 下列实 在说明本发明而不对本发明的范围构成任何限 制 的合成方法获得, 实施例

实施例 1: 化合物 (8)

在搅拌下向 3-氯丙胺盐酸盐（11.0g,110 mmol)和三乙胺 (18.42 ml, 130 mmol)的氯仿溶液 (50 ml)， 緩慢加入二叔丁基二碳酸酯 (23.79 g, 110 mmol)的氯仿溶液 (50 ml)。 室温下搅拌过夜。 获得棕色油， 作为粗制产 物。 在低于 48 °C下， 克氏蒸馏（Kugelrohr distillation )产生无色固体化 合物 (8-2)(22 g, 95%)

将二盐酸小檗胺 (7.0 g, 10.28 mmol)溶于 Ν,Ν-二曱基曱酰胺 (150 ml) 中。 在氮气下， 冷却溶液至 0。C。 向溶液中加入 NaH (1.65 g , 60%, 41.12 mmol)。 搅拌混合物 1小时， 在 15分钟内逐滴加入化合物 (8-2) (2.18 g , 11.3 mmol)的 Ν,Ν-二曱基曱酰胺 (30 ml)溶液。 在 0 °C下搅拌 1小时后， 然后使混合物升温至室温， 并搅拌 3小时， 再加热至 80。C过夜。 真空 蒸发反应混合物， 用水稀释， 并用二氯曱烷 (3*150 ml)萃取。 合并的有机 相用水和盐水洗涤， 经无水 u酸钠干燥， 并过滤。 真空浓缩后， 残留物 经制备高效液相色谱纯化， 产生化合物 (8-3) (3.0 g, 38.1%)。

将化合物 (8-3) (3 g, 3.9 mmol)溶于二氯曱烷 /曱醇 (50 ml, 10: 1)。 将溶 液冷却到 0 °C。 10分钟内逐滴加入于二氧六环中的盐酸 (4N, 5 ml, 20 mmol)溶液中。 使溶液升温至室温并搅拌过夜后， 真空蒸发反应混合物 以产生化合物 (8) (2.8 g, 98.6 %)。 实施例 2: 化合物

将 2-氯 -5-曱氧基苯曱酸（4.0 g, 21.5 mmol) 和二氯亚砜 (2 ml, 27 mmol)的二氯曱烷（150 mL)溶液， 加热回流 3小时。 浓缩反应混合物， 以 生成产物。 反应 另外的纯化。 将醋酸（15 ml, 261 mmol, 8 当量)緩慢滴加到含有铁粉 (11 g, 196 mmol, 6当量)和 2-氯 -5-硝基 -嘧啶 (5.3 g, 33.33 mmol, 1当量)和曱醇 (75 ml)的混合物中。 3小时后， 用乙酸乙酯 (300 ml)稀释反应混合物， 用硅 藻土过滤，有机相依次用饱和碳酸钾水溶液 (200 ml)和盐水 (200 ml)洗涤， 无水石 酸钠 并浓缩产生黄色固体化合物 (1-2)(2.0 g, 46.4%)。

将 5-氨基 -2-氯嘧啶 (1-2) ( 2.7 g, 20.6 mmol), 2-氯 -5-曱氧基苯曱酰氯 (4.2 g, 20.6 mmol)和三乙胺 (7 ml)溶于二氯曱烷 ( 40 ml )中。 所得混合物 在室温下搅拌过夜。 然后蒸发除去溶剂， 将残余物倾入乙酸乙酯和水中 进行萃取分离。 合并的有机相经无水硫酸钠干燥， 真空浓缩， 并通过硅 胶柱色潘纯化， 以产生白色固体化合物 (1-3) (5.7 g, 82.6 %)。 1-3

将化合物 (8) (200 mg, 0.6 mmol)和化合物（1-3) (270 mg, 0.90 mmol) 溶于 Ν,Ν-二异丙基乙基胺 (2 mL) ,并加热至 1 10 °C。然后真空蒸发反应 混合物，并通过制备性薄层色谱法纯化，产生 白色或淡黄色化合物 (1) (16 mg, 2.9 %)。

LC/MS m/z: M+l 927.4 100% (纯度)。

lH NMR (CDC1 ₃ ) δ: 8.424 (s, 2Η), 7.734 (s, 1H), 7.273-7.253 (m, 2H), 7.210-7.192 (m, 1H), 7.058-7.043 (d, 1H, J=7.5 Hz), 6.902-6.878 (dd, 1H, J=9. Hz, 9.0 Hz), 6.769-6.753 (d, 1H, 8.0 Hz), 6.704-6.688 (d, 1H, J=8.0 Hz), 6.588-6.571 (d, 1H, J=8.5 Hz), 6.462 (s, 1H), 6.339 (s, 1H), 6.206 (s, 1H), 5.907 (s, 1H), 5.555-5.534 (t, 1H, J=5.0 Hz, 5.5 Hz), 4.136-4.1 12 (m, 2H), 3.766 (s, 4H), 3.681(s, 3H), 3.622-3.584 (dd, 2H, J=12.5 Hz, 12.5 Hz), 3.538 (s, 3H), 3.41 1 (s, 1H), 3.346-3.299 (m, 1H), 3.226-3.147 (m, 2H), 3.052 (s, 3H), 2.972-2.943 (d, 1H, J=14.5 Hz), 2.884-2.716 (m, 5H),

2.541~2.497(m, 4H), 2.321-2.302 (m, 1H), 2.184 (s, 3H), 2.133-2.063 (m, 2H)。 实施例 3: 化合物 (2)的合成

在 -10。C下，用 N-溴代丁二酰亚胺 (19.6 g, 0.11 mol)处理 3-乙氧基丙 浠酸乙酯（I ⁴ . ⁴ g, 0.1 mol)的水 /二氧六环（1: 1) (100 mL)溶液。 室温下搅拌 反应混合物 1小时，然后加入硫脲 (7.6 g, 0.1 mol),并加热反应至 80。C 1 小时。 反应液冷却至室温后， 加入氨水 (20 mL)。 室温下搅拌产生的浆状 物 10分钟， 并过滤。 产生的滤饼用水洗涤并真空干燥， 产生化合物 (2-1) (12.1 g, 70%)

在 23。C下， 向亚硝酸叔丁酯（1.3 mL, 9.52 mmol)和氯化亚铜（1.0 g, 7.6 mmol)的乙腈（10 mL)和四氢呋喃（10 mL)的溶液 (10 mL)中加入 2-氨 基噻唑 -4-曱酸乙酯（1.0 g, 6.35 mmol)的乙腈（10 mL)和四氢呋喃（10 mL) 的溶液。 反应混合物需要在 65 °C下加热， 直到薄层色谱法（40%的乙 酸乙酯-己烷）表明的原料完全消耗。 之后， 将混合物冷却至室温， 在水 和乙酸乙酯之间分配，真空浓缩有机层， 并通过以 20%的乙酸乙酯 -己烷 洗脱的快速硅胶柱色谱纯化， 以产生 2-氯噻唑 -4-曱酸乙酯 (2-2) (0.49 g, 40%)。

将 2-氯噻唑 -4-曱酸乙酯 (8.8 g, 45 mmol)溶于乙醇（100 mL), 加入氢 氧化钠 (2.13 g, 53.3 mmol)和水 (50 mL)。 室温下搅拌过夜后， 减压除去乙 醇， 用水 (50 mL)稀释反应混合物。 用乙醚 (50 mL)洗涤混合物后， 用 HC1 将 pH值调节为大约 2。 通过过滤收集产生的固体， 用水洗涤并干燥， 生 成化合物 (2-3) (5.12 g, 70 %)。

在 0 °C下， 将于二氯曱烷 (10 mL)中的草酰氯 (2.52 g, 0.02 mol)逐滴 加到 2-氯噻唑 -5-曱酸 (1.64 g, 0.01 mol)和 Ν,Ν-二曱基曱酰胺 (1滴）的二氯 曱烷 (10 mL)悬浮溶液中， 并在室温下搅拌过夜。 真空蒸发反应混合物， 然后通过用另外的二氯曱烷 (100 mL)共沸混合物两次除去微量的草酰 氯， 以产生化合物 (2-4) (1.82 g, 100%)。

在 0 °C下， 将溶于二氯曱烷 (20 mL)的化合物 (2-4) (0.91 g, 5 mmol) 加入 2-氯 -6曱基苯胺 (0.79 g, 5 mmol)和三乙胺 (1.01 g, 10 mmol)的二氯曱 烷 (100 mL)溶液中， 并在室温下搅拌过夜。 将产生的溶液在二氯曱烷和 7 之间分配。有机层经无水石 酸钠干燥， 并浓缩以产生化合物 (2-5) (0.86 g, 60%)。 化合物 (8) (200 mg, 0.3 mmol)和化合物 (2-5) (129 mg, 0.45 mmol)溶 于 Ν,Ν-二异丙基乙胺 (2 mL)， 并加热至 110 °C过夜。 然后真空蒸发反应 混合物，并通过制备性薄层色谱法产生白色或 淡黄色化合物 (2) (68.6 mg, 24.9%)

LC/MS m/z: (M+2)/2 458.6 100% (纯度)。

lR NMR (CDC1 ₃ ) δ: 7.687 (s, IH) , 7.291-7.258 (m, 2H) , 7.157-7.102 (m, 4H), 6.909 (s, IH), 6.821-6.761 (m, 2H), 6.666-6.651 (d, IH, J=7.5 Hz) 6.528 (s, IH), 6.401 (s, IH), 6.277 (s, lH), 5.972 (s, IH), 4.240-4.196 (m, 2H), 3.823-3.805 (m, 2H), 3.746 (s ,3H), 3.637-3.578 (m, 5H), 3.386-3.363 (m , IH), 3.300-3.256 (m , IH), 3.197-3.158 (m, IH), 3.114 (s , 3H),

3.034-2.767 (m, 6H), 2.591-2.545 (m ,4H), 2.400-2.361 (m, IH), 2.275 (s , 3H), 2.237 (s, 2H), 2.197-2.153 (m, 2H), 2.010 (s, 2H)。 实施例

将 2-羟基 -4-曱基噻唑 -5-曱酸 (10 g, 62.9 mmol)溶于三氯氧 (50 ml)。 回流加热反应混合物过夜。 然后真空蒸发反应混合物， 以产生化合 物 (3-2)， 其可直接用于下一步反应而不必另外的纯化。

在 0 °C下，在 30分钟内向 3-曱氧基苯胺 (9.3 g, 75.5 mmol)的二氯曱 烷 (150 mL)溶液逐滴加入于二氯曱烷 (50 mL)中的化合物 (3-2)， 然后将反 应混合物加热至室温过夜。 用二氯曱烷 (250 mL)稀释反应混合物。 有机 相用水和盐水洗涤， 经无水 u酸钠干燥并过滤。 蒸发后， 残留物经硅胶 柱色谱纯化以产生化合物 (3-3) (18.5 g, 89.07 %)。 将化合物 (8) (200 mg, 0.3 mmol)和化合物 (3-3) (129 mg, 0.45 mmol) 溶于 Ν,Ν-二异丙基乙胺 (2 mL)， 并加热至 1 10 °C过夜。 然后真空蒸发反 应混合物， 并通过制备性薄层色谱法纯化， 产生白色或淡黄色化合物 (3) (80.9 mg, 24.9%)

LC/MS m/z: M+l 912.5 100% (纯度)。

lH NMR (CDC1 ₃ ) δ: 9.320 (s, 1Η), 7.184-7.247 (m, 2H), 7.099-7.148 (m, 1H), 7.042-7.142 (m, 1H), 6.963-7.001 (m, 1H), 6.794-6.851 (m, 1H), 6.687-6.783 (m, 2H), 6.540-6.611 (m, 1H), 6.431-6.352 (m, 1H),

6.182-6.242 (m, 1H), 5.888-5.959 (m, 1H), 4.092-4.183 (m, 2H),

3.770-3.874 (m, 2H), 3.729 (s, 3H), 3.672 (s, 3H), 3.612-3.653 (m, 2H), 3.524 (s, 3H), 3.240-3.460 (m, 3H), 3.134 (s, 3H), 2.982-3.066 (m, 1H), 2.863-2.964 (m, 2H), 2.829-2.933 (m, 4H), 2.500 (s, 3H), 2.449 (s, 3H), 2.185 (s, 3H), 2.041-2.123 (m, 2H)。 实施例 5:

在 0 °C下， 将草酰氯 (2.52 g, 0.02 mol)的二氯曱烷 (10 mL)溶液逐滴 加到 5-氯吡嗪 -2-曱酸 (1.56 g, 0.01 mol)和 Ν,Ν-二曱基曱酰胺（ 1滴） 的 二氯曱烷 (100 mL)悬浮溶液中。 在室温下搅拌过夜后， 真空蒸发反应混 合物， 然后通过用另外的二氯曱烷 (100 mL)共沸混合物两次除去微量的 草酰氯， 以产生化合物 (4-2) (1.77 g, 100%)。

在 0 °C下， 在 30分钟内， 将化合物 (4-2) ( 0.89 g, 5 mmol)的二氯曱 烷 (20 mL)溶液加入 3-曱氧基苯胺 (0.62 g, 5 mmol)和三乙胺 (1.01 g, 10 mmol)的二氯曱烷（lOO mL)溶液中，并加热反应混合物至室温过夜。用 二 氯曱烷 (100 ml)稀释反应混合物。有机相用水和盐水洗涤， 经无水石 酸钠 干燥并过滤。蒸发后，残留物经硅胶柱色谱纯 化以产生化合物 (4-3) (1.1 g, 80.0 %)o

在氮气下， 向烧瓶中加入于叔戊醇 (5.0 mL)中的 Pd ₂ (dba) ₃ (2.4 mg, 0.005当量, 相当于 0.01当量的钯) ^ Bippyphos (5.1 mg, 0.02当量, 相 当于配体和钯的摩尔比为 2: 1)， 然后加入水 (0.10 mL)以保持均相反应。 搅拌暗紫色反应混合物 5-15分钟后，加入氢氧化钾（ 87-89%的颗粒状物） (47.8 mg, 1.5当量)和化合物 (8) (399.4 mg, 6.00 mmol, 1.2当量）， 接着加 入化合物 (4-3) (0.13 g, 0.50 mmol, 1.0当量)。 产生的反应混合物变成橙 色， 并加热至 100 °C。 搅拌 3小时后， 反应冷却至室温， 并用曱基叔丁 基醚 (lOO mL)和水 (10 mL)稀释。有机层经无水 υ酸钠干燥，并真空浓缩， 通过制备性薄层色谱法产生白色或灰白色化合 物 (4) (55.7 mg, 12.5%)。

LC/MS m/z: (M+2)/2 447.2 100% (纯度)。

lU NMR (CDC1 ₃ ) δ: 9.320 (s, 1Η), 8.835-8.842 (m, 1H), 7.595-7.605 (m, 1H), 7.540-7.548 (m, 1H), 7.330-7.396 (m, 1H), 7.207-7.258 (m, 2H), 7.112-7.185 (m, 2H), 6.781-6.549 (m, 2H), 6.628-6.728 (m, 3H),

6.419-6.507 (m, 2H), 6.251-6.315 (m, 1H), 4.194-4.320 (m, 2H),

3.770-3.794 (m, 2H), 3.833 (s, 3H), 3.753 (s, 3H), 3.562-3.603 (m, 2H), 3.612 (s, 3H), 3.180-3.420 (m, 3H), 3.134 (s, 3H), 2.942-3.026 (m, 1H), 2.823-2.924 (m, 2H), 2.799-2.893 (m, 4H), 2.587 (s, 3H), 2.202 (s, 3H), 2.144-2.210 (m, 2H)。 实施例 6: 化合物 (5)的合成

5-1 5-2 5-3

H

[Pd]

在 0 °C下， 将草酰氯 (2.52 g, 0.02 mol)的二氯曱烷 (10 mL)溶液逐滴 加到 5-氯吡嗪 -2-曱酸 (1.56 g, 0.01 mol)和 Ν,Ν-二曱基曱酰胺（ 1滴） 的 二氯曱烷 (100 mL)悬浮溶液中。 在室温下搅拌过夜后， 真空蒸发反应混 合物， 然后通过用另外的二氯曱烷 (100 mL)共沸混合物两次除去微量的 草酰氯， 以产生化合物 (5-2) (1.77 g, 100%)。

在 0 °C下， 在 30分钟内， 将化合物 (5-2) ( 0.89 g, 5 mmol)的二氯曱 烷 (20 mL)溶液加入吗啉 (0.44 g, 5 mmol)和三乙胺（1.01 g, 10 mmol)的二 氯曱烷 (100 mL)溶液中， 然后加热反应混合物至室温过夜。 用二氯曱烷 (100 ml)稀释反应混合物。有机相用水和盐水洗涤， 经无水 υ酸钠干燥并 过滤。 蒸发后， 残留物经硅胶柱色谱纯化以产生化合物 (5-3) (0.83 g, 73.0 在氮气下， 向烧瓶中加入于叔戊醇 (5.0 mL)中的 Pd ₂ (dba) ₃ (2.4 mg, 0.005 当量， 相当于 0.01当量的 4巴） 和 Bippyphos (5.1 mg, 0.02当量， 相 当于配体和钯的摩尔比为 2: 1)， 然后加入水 (0.10 mL)以保持均相反应。 搅拌暗紫色反应混合物 5-15分钟后，加入氢氧化钾（ 87-89%的颗粒状物） (47.8 mg, 1.5当量)和化合物 (8) (399.4 mg, 6.00 mmol, 1.2当量）， 接着加 入化合物 (5-3) (0.13 g, 0.50 mmol, 1.0当量)。 产生的反应混合物变成橙 色， 然后加热至 100。C。 搅拌 3小时后， 反应冷却至室温， 并用曱基叔 丁基醚 (100 mL)和水 (10 mL)稀释。 有机层经无水硫酸钠干燥， 并真空浓 缩， 通过制备性薄层色谱法产生淡黄色化合物 (5) (42.9 mg, 10.0 %)。

LC/MS m/z: M+l 858.3 100% (纯度)。

¾ NMR (CDC1 ₃ ) δ: 8.440-8.450 (m, 1H), 7.620-7.630 (m, 1H), 7.300-7.330 (m, 1H), 7.120-7.140 (m, 1H), 6.780-6.830 (m, 2H),

6.650-6.670 (m, 1H), 6.540-7.550 (m, 1H), 6.389-6.460 (m, 1H),

6.249-6.303 (m, 1H), 5.938-6.046 (m, 1H), 4.196-4.302 (m, 2H),

3.820-3.834 (m, 2H), 3.500-3.800 (m, 4H), 3.752 (s, 3H), 3.602-3.643 (m, 2H),3.609 (s, 3H), 3.180-3.410 (m, 3H), 3.128 (s, 3H), 2.982-3.066 (m, 1H) 2.863-2.964 (m, 2H), 2.759-2.883 (m, 4H), 2.400-2.610 (m, 4H), 2.584 (s, 3H), 2.254 (s, 3H), 2.114-2.198 (m, 2H)。 实施例

将 6-氯 -烟酸 (5.0 g, 31.8 mmol)于二氯亚砜 (20 ml)中的混合物回流加 热过夜。 真空蒸发反应混合物， 以产生化合物 (6-2)， 其可直接用于下一 步反应而不必另外的纯化。

在 0 °C下， 在 30分钟内， 将化合物 (6-2)的二氯曱烷 (30 mL)溶液逐 滴加入 3-曱氧基苯胺 (5.5 g, 47.7 mmol)的二氯曱烷 (150 mL)溶液中，并加 热反应混合物至室温， 搅拌过夜。 用二氯曱烷 (250 ml)稀释反应混合物。 有机相用水和盐水洗涤， 经无水 u酸钠干燥并过滤。 蒸发后， 残留物经 硅胶柱色谱纯化以产生化合物 (6-3) (7.5 g, 90.0 %)。

化合物 (8) (200 mg, 0.3 mmol)和化合物 (6-3) (118 mg, 0.45 mmol)溶 于 Ν,Ν-二异丙基乙胺 (2 mL)， 并加热至 110 °C过夜。 然后真空蒸发反应 混合物， 并通过制备性薄层色谱法纯化， 产生白色或灰白色化合物 (6) (13.0 mg, 4.9 %)。

LC/MS m/z: M+l 892.4 100% (纯度)。

¾ NMR (CDC1 ₃ ) δ: 8.485-8.584 (m, 1H), 7.632-7.650 (m, 1H), 7.540-7.550 (m, IH), 7.331-7.345 (m, IH), 7.231-7.253 (m, IH), 7.146-7.178 (m, IH), 7.045-7.060 (m, IH), 6.950-7.060 (m, IH),

6.739-6.755 (m, IH), 6.696-6.712 (m, IH), 6.596-6.616 (m, 2H),

6.460-6.465 (m, IH), 6.372 (brs, IH), 6.264-6.282 (m, IH), 6.210-6.215 (m _: IH), 5.922-6.001 (m, 2H), 4.110-4.144 (m, 2H), 3.770-3.794 (m, 2H), 3.758 (s, 3H), 3.682 (s, 3H), 3.562-3.603 (m, 2H), 3.539 (s, 3H),

3.140-3.370 (m, 3H), 3.054 (s, 3H), 2.942-3.026 (m, IH), 2.823-2.924 (m, 2H), 2.699-2.823 (m, 4H), 2.502 (s, 3H), 2.178 (s, 3H), 2.054-2.138 (m, 2H)。 实施例

将 6-氯 -烟酸 (5.0 g, 31.8 mmol)于二氯亚砜 (20 ml)中的混合物加热回 流过夜。 真空蒸发反应混合物， 以产生化合物 (7-2)， 其可直接用于下一 步反应而不必另外的纯化。

在 0 °C下， 在 30分钟内， 将化合物 (7-2)的二氯曱烷 (30 mL)溶液逐 滴加入 4-氟苯胺 (5.3 g ,47.7 mmol)的二氯曱烷（150 mL)溶液中，加热反应 混合物至室温， 并搅拌过夜。 用二氯曱烷 (250 ml)稀释反应混合物。 有机 相用水和盐水洗涤， 经无水 u酸钠干燥并过滤。 蒸发后， 残留物经硅胶 柱色潘纯化以产生化合物 (7-3) (7.0 g, 88.05 %)。

化合物 (8) (200 mg, 0.3 mmol)和化合物 (7-3) (118 mg, 0.45 mmol)溶 于 Ν,Ν-二异丙基乙胺 (2 mL)， 并加热至 110 °C。 然后真空蒸发反应混合 物， 并通过制备性薄层色谱法纯化， 产生白色或灰白色化合物 (7) (10.3 mg, 3.9 %)。

LC/MS m/z: M+l 880.4 100% (纯度)。

lR NMR (CDC1 ₃ ) δ: 8.554-8.564 (m, IH), 7.966 (s,lH), 7.690-7.712 (m, IH), 7.509-7.537 (m, 2H), 7.283-7.303 (m, IH), 7.098-7.112 (m, IH), 6.928-7.010 (m, 2H), 6.759-6.807 (m, 2H), 6.640-6.659 (m, IH),

6.530-6.480 (m, IH), 6.430 (brs, IH), 6.270-6.310 (m, 2H), 5.980-6.050 (m _: 2H), 4.178-4.210 (m, 2H), 3.810-3.834 (m, 2H), 3.741 (s, 3H), 3.602-3.643 (m, 2H),3.609 (s, 3H), 3.180-3.410 (m, 3H), 3.119 (s, 3H), 2.982-3.066 (m, IH), 2.863-2.964 (m, 2H), 2.739-2.863 (m, 4H), 2.502 (s, 3H), 2.236 (s, 3H), 2.094-2.178 (m, 2H)。 实施例 9: 本发明小檗胺衍生物抗白血病活性测定

(1) 实验材料

白血病细胞株： 人 K562白血病细胞系 （慢性髓系白血病， CML)、 K562/adr (耐药慢性髓系白血病， CML)、 NB4 (急性早幼粒细胞白血病， AML)、 Kasumi-1 (急性髓系白血病 M2型， AML-M2)、 Jurkat (急性淋巴 细胞白血病， ALL)、 H9 (急性淋巴细胞白血病， ALL)。

试剂： 小檗胺 (BBM)标准品购自四川什邡普康生化有限公司， 本发明小檗胺衍生物：

12-0-(3-(5-(2-氯 -5-曱氧基苯曱酰氨基) -嘧啶 -2-氨基) -丙基)-小檗 胺 (化合物（ι >，

12-0-(3-(5-(2-氯 -6-曱基苯氨曱酰基) -噻唑 -2-氨基) -丙基)-小檗胺 (化 合物 (2 )，

12-0-(3-(5-(3-曱氧基苯氨曱酰基) -4-曱基噻唑 -2-氨基) -丙基)-小檗胺 (化合物 (3))，

12-0-(3-(5-(3-曱氧基苯氨曱酰基) -吡嗪 -2-氨基) -丙基)-小檗胺 (化合 物 (4))，

12-0-(3-(5- (吗啉 -4-曱酰基) -吡嗪 -2-氨基) -丙基)-小檗胺 (化合物 (5))， 12-0-(3-(5-(3-曱氧基苯氨曱酰基) -吡啶 -2-氨基) -丙基)-小檗胺 (化合 物 (6))，

12-0-(3-(5-(4-氟苯氨曱酰基) -吡啶 -2-氨基) -丙基)-小檗胺 (化合物

(7))。

主要仪器： 细胞培养箱， 酶标仪

(2) 实验方法

取生长良好的白血病细胞 6000个， 接种到 96孔细胞培养板孔内。 培养液为含 10%胎牛血清的 1640细胞培养液。 加入不同浓度的小檗胺 类化合物， 混匀后, 置于二氧化碳（5%C0 ₂ ) 细胞培养箱 37。C培养 72 小时。 然后用 MTT法测定活细胞浓度。 在本实验中对照组（不加化合 物处理）细胞活力设为 100%， 并计算出化合物作用后细胞活力（％)和 72小时白血病细胞半数生长抑制浓度 (72小时 IC ₅₍₎ 值)。

(3) 实验结果

实验结果见表 1。 表 1显示本发明的小檗胺衍生物能诱导人慢性髓 系白血病、 急性髓系白血病和急性淋巴细胞白血病细胞死 亡和抑制这些 白血病细胞生长， 与小檗胺本身比较， 本发明小檗胺衍生物抗白血病细 胞活性明显增强， 其中本发明小檗胺衍生物 (3)抗人 K562白血病细胞系 (慢性髓系白血病， CML)和人 K562白血病细胞系 （慢性髓系白血病， CML)活性提高 8倍以上； 化合物 (4)抗 Jurkat急性淋巴细胞白血病活性 提高 13倍以上。 实施例 10:本发明小檗胺衍生物抗人多发性骨髓瘤和淋 巴瘤细胞活性测 定

(1) 实验材料

骨髓瘤和淋巴瘤细胞株： RPMI8226(多发性骨髓瘤）。

试剂： 同实施例 9

主要仪器： 细胞培养箱， 酶标仪。

(2) 实验方法

取生长良好的上述肿瘤细胞 6000个，接种到 96孔细胞培养板孔内。 培养液为含 10%胎牛血清的 1640细胞培养液。 加入不同浓度的小檗胺 类化合物， 混匀后， 置于二氧化碳（5%C0 ₂ ) 细胞培养箱 37 °C培养 72 小时。 然后用 MTT法测定活细胞浓度。 在本实验中对照组（不加化合 物处理）细胞活力设为 100%， 并计算出化合物作用后细胞活力（％)和 72小时白血病细胞半数生长抑制浓度 (72小时 IC ₅₍₎ 值)。

(3) 实验结果

实验结果见表 1。 表 1显示本发明的小檗胺衍生物能诱导人骨髓瘤 和淋巴瘤细胞死亡和抑制这些肿瘤细胞生长， 与小檗胺本身比较， 本发 明 、檗胺衍生物抗骨髓瘤和淋巴瘤细胞活性明显 增强， 其中本发明小檗 胺衍生物 (4)抗 RPMI8226(多发性骨髓瘤)活性提高 117倍以上。

表 1: 小檗胺衍生物对白血病， 淋巴瘤和多发性骨髓瘤细胞半数生 制浓度测定（72小时， IC ₅ 。值）

实施例 11: 本发明小檗胺衍生物抗人实体瘤作用测定

(1) 实验材料

人实体瘤细胞株： HepG2(人肝细胞肝癌， HCC)、 A549(人肺癌）、 MCF-7(乳 腺癌）、 PANC-1(胰腺癌）、 PC-3(前列腺癌）、 MG63(骨肉瘤）、 AGS (胃癌）、 Huh7(人肝癌细胞)、 Becap37(人乳腺癌细胞）、 Hela (人宫颈癌细胞)、 RKO(人结肠腺癌细胞)、 SW620(人结肠腺癌细胞)、 SW480(人结肠癌细 胞)、 MGC 803(人胃癌细胞)。

试剂： 同实施例 9

主要仪器： 细胞培养箱， 酶标仪。 (2) 实验方法

取生长良好的人实体瘤细胞 4000个，接种到 96孔细胞培养板孔内。 培养液为含 10%胎牛血清的 DMEM高糖细胞培养液。 置二氧化碳

( 5%C0 ₂ )细胞培养箱 37。C培养 24小时， 然后， 加入不同浓度的小檗 胺类化合物， 混匀后， 继续置于二氧化碳（5%C0 ₂ ) 细胞培养箱 37。C 培养 72小时。 然后用 MTT法测定活细胞浓度， 并计算出药物作用后细 胞活力（％ )。在本实验中对照组（不加化合物处理）细� �活力设为 100%。

(3) 实验结果

实验结果见表 2。 表 2显示本发明的小檗胺衍生物能诱导人实体瘤 细胞死亡和抑制这些肿瘤细胞生长， 与小檗胺本身比较， 本发明小檗胺 衍生物抗实体瘤细胞活性明显增强， 其中本发明 d、檗胺衍生物 (4)抗 MCF-7(乳腺癌)活性提高 26倍以上， 抗 HepG2(人肝细胞肝癌， HCC)活 性提高近 9倍，抗 MGC 803(人胃癌细胞)活性提高 8倍以上，抗 SW480(人 结肠癌细胞)活性提高 6倍以上。 本发明小檗胺衍生物 (2)抗 MG63(骨肉 瘤)活性提高 12倍以上。 本发明小檗胺衍生物 (6)抗 A549(人肺癌)活性提 高 14倍以上。

表 2 小檗胺衍生物对人实体瘤细胞半数生长抑制浓 度测定（72小 时， IC ₅₀ 值)

表 2 (续）