说明书 发明名称：杂代吡啶并嘧啶酮衍生物作为 CDK抑制剂及其应用 技术领域

[0001] 本发明涉及药物制备技术领域， 特别是涉及一种杂代吡啶并嘧啶酮衍生物作为 CDK抑制剂及其应用。

背景技术

[0002] 周期蛋白依赖性蛋白激酶 （cyclin-dependent kinase, CDK) 和周期蛋白 （cyclin ) 是细胞周期调控中的重要因子。 CDK可以和 cyclin结合形成异二聚体， 其中 CD K为催化亚基， cyclin为调节亚基， 形成各种 cyclin-CDK复合物， 使不同底物磷 酸化， 对细胞周期不同的吋相起推进和转化作用。

[0003] 在哺乳动物中至少存在 9种 CDK。 细胞由 G1期向 S期转化主要受 G1期 CDK激酶 控制。 与 G1期细胞周期蛋白 （cyclin) 结合的 CDK激酶主要包括 CDK2、 CDK4 和 CKD6。 Cyclin D主要与 CDK4和 CKD6结合并调节后者活性； cyclin E在 G1/S期 与 CDK2结合， 呈现 CDK 2的激酶活性促进细胞进入 S期。 G2/M期主要受 CDK1 激酶调控， Cyclin A、 CyclinB与 CDK1结合， CDK1使底物蛋白磷酸化， 如将组 蛋白 HI磷酸化则导致染色体凝缩， 如将核纤层蛋白磷酸化则使核膜解体。 在 M 期， M期促发因子 （MPF) 激活后期促进因子 APC， 将泛连接在 Cyclin

A和 Cyclin B上， 通过多泛素化作用， 使它们被蛋白酶体降解， 完成一个细胞周 期 (Malumbres M.etal.Nat Cell Biol 11： 1275,2009;Malumbres M.etal.Nat Rev Cancer 9: 153,2009)。

[0004] 过去十年来， CDK抑制剂作为抗肿瘤新药幵发为全球药业的一 个热点， 有超过 20个 CDK抑制剂进入临床幵发。 尽管 CDK抑制剂抗肿瘤临床前药效学结果显著 ， 但是早前多数临床试验结果不尽人意。 主要问题包括在实体瘤缺乏疗效和毒 性较大。 （Guha M . Nat Rev Drug Disl 1:892,2012) 。 而在分析产生严重毒副作 用吋发现， 部分 CDK抑制剂药物对 CDK亚型缺乏选择性， 因此产生了较大的毒 副作用。

[0005] CDK4和 CDK6是两个密切相关的激酶， 在肿瘤细胞周期中与 Cyclin D结合促 使 Gl期进入 S期， 是 DNA复制细胞分裂的细胞周期进程必需的。 而超过 90%的人 类肿瘤中， 均发现通过各种的基因和生化适应导致 G1-S期的过渡控制机制改变 。 P16和人视网膜母细胞瘤抑制蛋白 （retinoblastom^Rb) 是重要的肿痛抑制蛋白 ， 其能调控细胞周期。 P16基因蛋白抑制 CDK4、 Cyclin Dl和 Rb的反馈回路， 并 通过调节 Rb的蛋白活性， 从而防止细胞过度增殖， 以达到抑制肿瘤的目的。 已 经证明在人体肿瘤中 （如乳腺癌和骨髓瘤） ， CDK4和 CDK6激活导致细胞周期 改变发生。 而抑制 CDK4和 CDK6， 可阻止肿瘤抑制蛋白 Rb的失活和干扰肿瘤细 胞周期进展 （Choi YJ and Anders L , Oncogene 33: 1890-903,2014) 。

[0006] 由于 CDK4/6在各种实体肿瘤和血液肿瘤的细胞周期控 制失调中起关键作用 。 目前， 选择性 CDK4/6抑制剂目前有多个处于临床阶段 （如 Palb _OC iclib、 LY283 5219和 LEE011) 。 这些药物的临床评价还包括转移性乳腺癌、 卵巢癌、 脂肪肉 瘤、 非小细胞肺癌、 肝癌、 胶质母细胞瘤、 黑素瘤、 多发性骨髓瘤和淋巴瘤等

[0007] 虽然有许多 CDK抑制剂类化合物已经被公幵， 但是， 由于受 CDK介导的病理 的原因， 仍然需要大量用于治疗与 CDK有关的障碍的大量药物， 特别是 CDK4/6 抑制类药物。

技术问题

[0008] 本发明的目的之一在于提供一种新的杂代吡啶 并嘧啶酮衍生物或其可药用的盐

[0009] 本发明的目的之二是提供该类化合物作为新型 CDK4/6抑制剂在制备预防或治 疗与 CDK4/6相关疾病的药物中的用途， 所述与 CDK4/6所参与的周期控制失调导 致的各种疾病， 特别是指恶性肿瘤的治疗， 包括但不限于乳腺癌、 卵巢癌、 前 列腺癌、 结直肠癌、 胰腺癌、 肝癌、 黑色素瘤、 胃癌和实体瘤等。

问题的解决方案

技术解决方案

[0010] 为实现上述目的， 本发明提供了如下通式 I表示的杂代吡啶并嘧啶酮衍生物或 其可药用的盐：

[0011] 其中:

[0012] 代表氢、 C _r C ₃ 的烷基、 C ₃ -C ₇ 的环烷基；

[0013] ₂ 代表^ ₅ 的烷基、 C ₃ -C ₇ 的环烷基、 5-6元杂芳基团基、 苯基、 取代苯基

[0014] R ₃ ， R ₄ 分别代表氢、 C _r C ₃ 烷基、 C ₃ -C ₇ 的环烷基、 乙酰基、 素、 三氟 甲基、 氰基或 CONR ₅ R _6;

[0015] 或者 R ₃ ， R ₄ 与相连接的碳原子一起形成 C 3-C ₇ 的脂肪环；

[0016] R ₅ ， R ₆ 分别代表氢、 甲基；

[0017] X代表 0、 S;

[0018] n为 0或 1。

[0019] 本发明还提供了药物组合物， 该药物组合物包含至少一种药用载体， 和至少 一种本申请所述式 （I) 化合物及其药用盐， 以作为 CDK4/6抑制剂的应用。

[0020] 本申请所述的 "Ci-C ₃ 的烷基 "是指甲基、 乙基、 正丙基或异丙基； "d-C^ 烷基"是指甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基、 仲丁基、 叔丁基、 1 -戊基、 2-戊基、 3-戊基、 2-甲基 -3-丁基、 1,1-二甲基 -1-丙基、 2,2-二甲基 -1-丙基 ； 所述的 "d-C ₃ 的烷氧基"是指甲氧基、 乙氧基、 正丙氧基、 异丙氧基； 所述" 卤素"是指 F、 Cl、 Br、 I； 所述" C ₃ -C 、烷基"是指环丙基、 环丁基、 环戊基、 环 己基、 环庚基； 所述" 5-6元杂芳基团基 "是指 5至 6元芳香的单环， 其包含 1-3个杂 原子， 该杂原子选自 N， 0， S， 其余的环原子为碳。

[0021] 本发明的典型化合物包括， 但不限于以下表 1化合物：

[]

L£8LLI/L10Z OAV

[0022] 或其可药用的盐。

[0023] 可药用盐的例子包括无机盐和有机盐， 例如盐酸盐、 氢溴酸盐、 硫酸盐、 磷 酸盐、 柠檬酸盐、 酒石酸盐、 琥珀酸盐、 马来酸盐、 富马酸盐、 扁桃体酸盐和

[0024] 本发明的部分化合物可采用如下的合成通法制 备:

[]

[0025] 根据文献 （ISOO ITO, NORIICHI ODA,等 Chem. Pharm. Bull, 1976, ppl l89;

BURNETT DUANE A^WO2015066697Al) 中报道的程序制备 1 ₆ ， 即取代 2,4- 二氯嘧啶 （1 与胺 （1 ₂ ) 在碱性条件下制得中间体 1 ₃ ， 1 ₃ 经脱甲基得 1 ₄ ， I

[0026] 与 1 ₅ 经取代、 环合反应制得酯中间体 1 ₆ 。

[0027] ₆ 与胺 （1 ₇ ) 经催化反应制得目标产物 I。

[0028] 本发明涉及所述杂代吡啶并嘧啶酮类衍生物为 CDK4/6抑制剂， 所述化合物可 用于 CDK4/6所参与的细胞周期控制失调导致的各种临 床疾病， 如癌症。 这类疾 病包括但不限于乳腺癌、 卵巢癌、 前列腺癌、 结直肠癌、 肝癌、 黑色素瘤、 急 性淋巴细胞白血病、 慢性淋巴细胞白血病、 多发性骨髓瘤、 肺癌、 胃癌、 胰腺 癌。

[0030] 本发明的衍生物在实施疾病治疗过程中， 可以组合物的形成通过口服、 注射 等方式， 用于治疗相关癌症及其他疾病。

[0031] 所述组合物包括治疗有效量的上述化合物或其 可药用的盐和医学上可接受的 载体。

[0032] 所述及的载体是指药学领域常规的载体， 如： 稀释剂、 赋形剂如水等； 粘合 剂如纤维素衍生物、 明胶、 聚乙烯吡咯烷酮等； 填充剂如淀粉等； 崩裂剂如碳 酸钙、 碳酸氢钠； 另外， 还可以在组合物中加入其他辅助剂如香味剂和 甜味剂 [0033] 用于口服吋， 可将其制备成常规的固体制剂如片剂、 粉剂或胶囊等； 用于注 射吋， 可将其制备成注射液。

[0034] 本发明的组合物的各种剂型可以采用医学领域 常规的方法进行制备， 其中活 性成分的含量为 0.1<¾〜99.5<¾ (重量比)。

[0035] 本发明的施用量可根据用药途径、 患者的年齢、 体重、 所治疗的疾病的类型 和严重程度等进行变化， 其日剂量为 0.005-30mg/kg体重（口服）或 0.005-30mg/kg 体重 (注射)。

发明的有益效果

有益效果

[0036] 本发明提供一种新的杂代吡啶并嘧啶酮衍生物 或其可药用的盐。 该类化合物作 为新型 CDK4/6抑制剂在制备预防或治疗与 CDK4/6相关疾病的药物中的用途， 所 述与 CDK4/6所参与的周期控制失调导致的各种疾病， 特别是指恶性肿瘤的治疗 ， 包括但不限于乳腺癌、 卵巢癌、 前列腺癌、 结直肠癌、 胰腺癌、 肝癌、 黑色 素瘤、 胃癌和实体瘤等。

本发明的实施方式

[0037] 实施例 1

[0038] 化合物 （1-1

) 6,6-二甲基 -8-异丙基 -2-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8

H)-酮

[0039] 步骤 1 :

2,4-二氯 -5-甲氧基嘧啶 (l.Og, 5.59mmol) 、 异丙胺 (0.33g, 5.59mmol) 、 Ν,Ν- 二异丙基乙胺 （7.2g， 55.9mmol) 加入异丙醇 (iPA, 10mL) 中， N ₂ 保护下 100 °C反应 6h。 浓缩溶剂至干， 剩余物加 H ₂ 0 (50mL) /二氯甲烷 （DCM， 50mL) 搅拌萃取， 有机层干燥、 过滤、 浓缩得淡黄色固体 2-氯 -N-异丙基 -5-甲氧基嘧啶- 4-氨 (0.78g， 粗品收率 69.3%) 。

[0040] 步骤 2: 2-氯 -N-异丙基 -5-甲氧基嘧啶 -4-氨 （0.78g， 3.88mmol) 加入 DCM (15mL) 中， 冰浴下滴加 BBr ₃ (14.5g， 58.2mmol) 的 DCM (15mL) 溶液， 滴加完毕， 升至 室温搅拌反应 10h， 滴加甲醇 （10mL) 淬灭反应。 反应液中加入 DCM (20mL) ， 并以饱和 NaHC0 ₃ 溶液调 pH值约为 8， 分液， 有机层经干燥、 过滤、 浓缩得白 色固体 2-氯 -N-异丙基 -5-羟基嘧啶 -4-氨 （0.54g， 粗品收率 74.5%) 。

[0041] 步骤 3: 2-氯 -N-异丙基 -5-羟基嘧啶 -4-氨 （0.54g， 2.89mmol) 、 2-溴代异丁酸 甲酯 (0.63g, 3.46mmol) 、 K ₂ C0 ₃

(1.2g， 8.66mmol) 加入乙腈 （20mL) 中， N ₂ 保护下 80°C反应 8h。 浓缩溶剂至 干， 剩余物加 H ₂ 0 (50mL) /二氯甲烷 （DCM， 50mL) 搅拌萃取， 有机层干燥 、 过滤、 浓缩得淡黄色固体， 再经乙酸乙酯 （10mL) 重结晶， 得 2-氯 -6,6-二甲 基—8-异丙基 -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮 （0.73g， 收率 99.0%) ， MS(m/z): 257 [M+H] +。

[0042] 步骤 4:

2-氯 -6,6-二甲基 -8-异丙基 -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮 （0.73g， 2.85mmol) 、 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯 （0.79g， 2.85mmol) 、 Pd ₂ (dba) ₃

(0.26g， 0.28mmol) 、 Xantphos (0.25g， 0.43mmol) 和碳酸铯 （1.39g， 4.28m mol) 加入 1,4-二氧六环 （15mL) 中， N ₂ 保护下 100°C反应 8h。 浓缩溶剂至干， 剩余物加 H ₂ 0 (50mL) /二氯甲烷 （DCM， 50mL) 搅拌萃取， 有机层干燥、 过 滤、 浓缩得淡黄色固体， 无水乙醇 （10mL) 打浆， 得淡黄色固体 6,6-二甲基 -8- 异丙基 -2-(5-(4-羧酸叔丁酯 -1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H ) -酮 （0.50g， 收率 35.2%) ， MS(m/ ： 498 [M+H] +。

[0043] 步骤 5: 6,6-二甲基 -8-异丙基 -2-(5-(4-羧酸叔丁酯 -1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧 啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮 (0.50g， 2.0mmol) 加入乙酸乙酯 （5mL) 中， 搅拌 下加入 3N盐酸乙酸乙酯溶液， 室温搅拌反应 2h， 固体析出， 过滤， 粗品经无水 乙醇 （5mL) 打浆得淡黄色固体， 经真空干燥得目标产物 6,6-二甲基 -8-异丙基 -2- (5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮盐酸盐 （ 1-1， 0.2g ， 收率 46.0%) ， MS( ml z): 398 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.83 (br, 1H), 9.74 (br, 2H), 8.33 (s, 1H), 8.25-8.23 (d,/= 8.0Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.77-7.75 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.32-5.25 (m, IH), 3.71-3.52 (m, 8H), 1.59 (s, 12H)。

[0044] 实施例 2

[0045] 化合物 （1-2

) 6,6-二甲基 -8-环戊基 -2-(5-(l-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8

H)-酮

[0046] 化合物 1-2

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6,6-二甲基 -8-环戊基 -6H-嘧啶 [5,4-b ][1,4]恶嗪 -7(8H)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲氧基嘧啶 和环戊胺)和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯。 得终产物 6,6-二甲基 -8-环戊 基 -2-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮盐酸盐 （1-2) ， 淡黄色固体。 MS( ml z): 424 [M+H] ÷。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.88 (br, IH), 9.77 (br, 2H), 8.26 (s, IH), 8.24-8.22 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.93 (s, IH), 7.70-7.68 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.37-5.23 (m, IH), 4.61 (m, 4H), 3.45 (m, 4H), 2.05-1.55 (m, 8H),1.48 (s, 6H)。

[0047] 实施例 3

[0048] 化合物 （1-3

) 6,6-二甲基 -8-环戊基 -2-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基)甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][ 1,4]恶嗪 -7(8H)-酮

[0049] 化合物 1-3

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6,6-二甲基 -8-环戊基 -6H-嘧啶 [5,4-b ][1,4]恶嗪 -7(8H)-酮和 5-[(4-乙基哌嗪 -1-基)甲基]吡啶 -2-胺。 得终产物 6,6-二甲基- 8-环戊基 -2-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基)甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H) -酮盐酸盐 ( 1-3) ， 白色固体。 MS( m/ z): 466 [M+H] Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 12.04 (br, IH), 11.83 (br, IH), 8.53 (s, IH), 8.36-8.34 (d, / = 8.0Hz, IH), 8.19 (s, IH), 7.72-7.70 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.29-5.21 (m, IH), 4.41 (m, 4H), 3.59-3.51 (m, 6H), 3.08 (m, 2H), 1.99-1.47 (m, 8H), 1.39 (s, 6H) , 1.19-1.15 (t, / = 8.0Hz, 3H)。

[0050] 实施例 4

[0051] 化合物 （1-4 ) 8'-环戊基 -2'-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基)螺 [环丙 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪] -7'(8' H)-酮

[0052] 化合物 1-4

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2'-氯 -8'-环戊基-螺 [环丙 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][ 1,4]恶嗪] -7'(8Ή)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲氧基嘧啶 和 1-溴环丙烷甲酸甲酯)和 1-(2-吡啶基)和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯 。 得终产物 8'-环戊基 -2'-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基)螺 [环丙 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶 嗪] -7'(8Ή)-酮盐酸盐 ( 1-4) ， 淡黄色固体。 MS( m/ z): 422 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.89 (br, 1H), 9.80 (br, 2H), 8.25 (s, 1H), 8.23-8.21 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.70-7.68 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.36-5.23 (m, 1H), 4.60 (m, 4H), 3.47 (m, 4H), 2.03-1.55 (m, 8H), 1.01-0.57 (m, 4H)。

[0053] 实施例 5

[0054] 化合物 （1-5

) 8'-环戊基 -2'-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基)螺 [环丁 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪] -7'(8' H)-酮

[0055] 化合物 1-5

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2'-氯 -8'-环戊基-螺 [环丁 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][ 1,4]恶嗪] -7'(8Ή)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲氧基嘧啶 和 1-溴环丁烷甲酸甲酯)和 1-(2-吡啶基)和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯 。 得终产物 8'-环戊基 -2'-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基)螺 [环丁 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶 嗪] -7'(8Ή)-酮盐酸盐 （1-5) ， 淡黄色固体。 MS( m/ z): 436 [Μ+Η] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.87 (br, 1H), 9.79 (br, 2H), 8.26 (s, 1H), 8.24-8.22 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.70-7.68 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.35-5.23 (m, 1H), 4.55 (m, 4H), 3.45 (m, 4H), 2.71-2.59 (m, 4H), 2.03-1.98 (m, 2H), 1.75-1.57 (m, 8H)。

[0056] 实施例 6

[0057] 化合物 （1-6

) 8'-环戊基 -2'-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基)螺 [环戊 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪] -7'(8' H)-酮 [0058] 化合物 1-6

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2'-氯 -8'-环戊基-螺 [环戊 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][ 1,4]恶嗪] -7'(8Ή)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲氧基嘧啶 和 1-溴环戊烷甲酸甲酯)和 1-(2-吡啶基)和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯 。 得终产物 8'-环戊基 -2'-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基)螺 [环戊 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶 嗪] -7'(8Ή)-酮盐酸盐 （1-6) ， 淡黄色固体。 MS( m/ z): 450 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.88 (br, 1H), 9.81 (br, 2H), 8.27 (s, 1H), 8.24-8.22 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.70-7.68 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.34-5.23 (m, 1H), 4.59 (m, 4H), 3.47 (m, 4H), 2.25-2.10 (m, 4H), 2.03-1.58 (m, 12H)。

[0059] 实施例 7

[0060] 化合物 （1-7

) 8'-环戊基 -2'-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基)螺 [环己 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪] -7'(8' H)-酮

[0061] 化合物 1-7

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2'-氯 -8'-环戊基-螺 [环己 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][ 1,4]恶嗪] -7'(8Ή)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲氧基嘧啶 和 1-溴环己烷甲酸甲酯)和 1-(2-吡啶基)和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯 。 得终产物 8'-环戊基 -2'-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基)螺 [环己 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶 嗪] -7'(8Ή)-酮盐酸盐 ( 1-7) ， 淡黄色固体。 MS( m/ z): 464 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.87 (br, 1H), 9.79 (br, 2H), 8.27 (s, 1H), 8.25-8.23 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.70-7.68 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.35-5.23 (m, 1H), 4.65 (m, 4H), 3.57 (m, 4H), 2.23-1.95 (m, 4H), 1.93-1.54 (m, 14Η)=

[0062] 实施例 8

[0063] 化合物 （1-8

) 8'-环戊基 -2'-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基)螺 [环庚 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪] -7'(8' H)-酮

[0064] 化合物 1-8

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2'-氯 -8'-环戊基-螺 [环庚 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][ 1,4]恶嗪] -7'(8Ή)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲氧基嘧啶 和 1-溴环庚烷甲酸甲酯)和 1-(2-吡啶基)和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯 。 得终产物 8'-环戊基 -2'-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基)螺 [环庚 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶 嗪] -7'(8Ή)-酮盐酸盐 （1-8) ， 淡黄色固体。 MS( m/ z): 478 [Μ+Η] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.88 (br, 1H), 9.78 (br, 2H), 8.28 (s, 1H), 8.25-8.23 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.71-7.69 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.37-5.23 (m, 1H), 4.63 (m, 4H), 3.58 (m, 4H), 2.21-1.95 (m, 4H), 1.91-1.46 (m, 16Η)=

[0065] 实施例 9

[0066] 化合物 （1-9)

6-乙酰基 -8-环戊基 -2-(5-(l-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)- 酮

[0067] 化合物 1-9

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6-乙酰基 -8-环戊基 -6H-嘧啶 [5,4-b][ 1,4]恶嗪 -7(8H)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲氧基嘧啶 和 2-溴 -2-羰基乙酸甲酯)和 1-(2-吡啶基)和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯 。 得终产物 6-乙酰基 -8-环戊基 -2-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4] 恶嗪 -7(8H)-酮盐酸盐 （1-9) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 438 [Μ+Η] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.87 (br, 1H), 9.81 (br, 2H), 8.27 (s, 1H), 8.25-8.23 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.71-7.69 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.35-5.26 (m, 1H), 4.61 (m, 4H), 3.59 (m, 4H), 3.37 (s, 3H), 2.09-1.57 (m, 8H)=

[0068] 实施例 10

[0069] 化合物 （1-10)

6-氰基 -8-环戊基 -2-(5-(l-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮

[0070] 化合物 1-10

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6-氰基 -8-环戊基 -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4 ]恶嗪 -7(8H)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲氧基嘧啶和 2- 溴 -2-氰基乙酸甲酯)和 1-(2-吡啶基)和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯。 得 终产物 6-氰基 -8-环戊基 -2-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8 H)-酮盐酸盐 ( 1-10) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 421 [Μ+Η] +。 Ή NMR

(DMSO-d ₆ ): d: 11.89 (br, 1H), 9.80 (br, 2H), 8.28 (s, 1H), 8.26-8.24 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.71-7.69 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.58 (s, 1H), 5.36-5.26 (m, 1H), 4.62 (m, 4H), 3.59 (m, 4H), 2.03-1.57 (m, 8H)。

[0071] 实施例 11

[0072] 化合物 （1-11)

6-三氟甲基 -8-环戊基 -2-(5-(l-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H) -酮

[0073] 化合物 1-11的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6-三氟甲基 -8-环戊 基 -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4- 二氯 -5-甲氧基嘧啶和 2-溴 -2-三氟甲基乙酸甲酯)和 1 -(2-吡啶基)和 4-(6-氨基吡啶 -3 -基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯。 得终产物 6-三氟甲基 -8-环戊基 -2-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2- 氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮盐酸盐 （1-11) ， 淡黄色固体。 MS( m/ z ): 464 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.87 (br, 1H), 9.81 (br, 2H), 8.27 (s, 1H), 8.26-8.24 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.70-7.68 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.57-5.54 (m, 1H), 5.35-5.26 (m, 1H), 4.61 (m, 4H), 3.64 (m, 4H), 2.01-1.54 (m, 8H)。

[0074] 实施例 12

[0075] 化合物 （1-12

) 6,6-二氟 -8-环戊基 -2-(5-(l-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H) -酮

[0076] 化合物 1-12

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6,6-二氟 -8-环戊基 -6H-嘧啶 [5,4-b][l ,4]恶嗪 -7(8H)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲氧基嘧啶和 2-溴 -2,2-二氟乙酸甲酯)和 1-(2-吡啶基)和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯 。 得终产物 6,6-二氟 -8-环戊基 -2-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶 嗪 -7(8H)-酮盐酸盐 （1-12) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 432 [Μ+Η] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.88 (br, 1H), 9.79 (br, 2H), 8.26 (s, 1H), 8.23-8.21 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.70-7.67 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.37-5.26 (m, 1H), 4.62 (m, 4H), 3.63 (m, 4H), 2.03-1.57 (m, 8H)。

[0077] 实施例 13

[0078] 化合物 （1-13)

6-环丙基 -8-环戊基 -2-(5-(l-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)- 酮

[0079] 化合物 1-13

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6-环丙基 -8-环戊基 -6H-嘧啶 [5,4-b][ 1,4]恶嗪 -7(8H)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲氧基嘧啶 和 2-溴 -2-环丙基乙酸甲酯)和 1-(2-吡啶基)和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁 酯。 得终产物 6-环丙基 -8-环戊基 -2-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4 ]恶嗪 -7(8H)-酮盐酸盐 ( 1-13) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 436 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.89 (br, IH), 9.81 (br, 2H), 8.27 (s, IH), 8.24-8.22 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.89 (s, IH), 7.70-7.68 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.58-5.57 (d, /= 4.0Hz, IH), 5.38-5.26 (m, IH), 4.67 (m, 4H), 3.69 (m, 4H), 2.03-1.58 (m, 8H) , 1.05-1.01 (m, IH) , 0.87-0.69 (m, 4H)。

[0080] 实施例 14

[0081] 化合物 （1-14

) 6-环丁基 -8-环戊基 -2-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基）甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l, 4]恶嗪 -7(8H)-酮

化合物 1-14

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6-环丁基 -8-环戊基 -6H-嘧啶 [5,4-b][

I, 4]恶嗪 -7(8H)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲氧基嘧啶 和 2-溴 -2-丁丙基乙酸甲酯)和 5-[(4-乙基哌嗪 -1-基)甲基]吡啶 -2-胺。 得终产物 6-环 丁基 -8-环戊基 -2-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基）甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪- 7(8H)-酮 （1-14) ， 白色固体。 MS( m/ ： 492 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d:

I I.81 (br, IH), 8.53 (s, IH), 8.35-8.33 (d, /= 8.0Hz, IH), 8.20 (s, IH), 7.71-7.69 (d, J = 8.0Hz, IH), 5.58-5.57 (d, / = 4.0Hz, IH), 5.27-5.21 (m, IH), 4.87 (s, 2H), 4.45-4.23 (m, 11H), 2.47-2.21 (m, 14H), 1.19-1.15 (t, / = 8.0Hz, 3H)。 [0083] 实施例 15

[0084] 化合物 （1-15) 6-异丙基 -8-甲基 -2-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基)甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H- 嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮

[0085] 化合物 1-15

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6-异丙基 -8-甲基 -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4 ]恶嗪 -7(8H)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲氧基嘧啶、 甲 胺和 2-溴代异戊酸甲酯)和 5-[(4-乙基哌嗪 -1-基)甲基]吡啶 -2-胺。 得终产物 6-异丙 基 -8-甲基 -2-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基）甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H ) -酮 ( 1-15) ， 白色固体。 MS( m/ ： 426 [Μ+Η] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.81 (br, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.35-8.33 (d, /= 8.0Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.70-7.68 (d, J = 8.0Hz, 1H), 5.58-5.57 (d, / = 4.0Hz, 1H), 4.89 (s, 2H), 4.59 (s, 3H), 4.41-4.23 (m, 11H), 1.19-1.15 (t, /= 8.0Hz, 3H), 1.05-1.04 (d, / = 4.0Hz, 6H)。

[0086] 实施例 16

[0087] 化合物 （1-16

) 6-甲基 -6,8-二乙基 -2-(5-(4-甲基 -1-哌嗪基)甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4 ]恶嗪 -7(8H)-酮

[0088] 化合物 1-16

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6-甲基 -6,8-二乙基 -6H-嘧啶 [5,4-b][l ,4]恶嗪 -7(8H)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲氧基嘧啶、 乙胺和 2-溴代 -2-甲基丁酸甲酯)和 5-[(4-甲基哌嗪 -1-基)甲基]吡啶 -2-胺。 得终产物 6-甲基 -6,8-二乙基 -2-(5-(4-甲基 -1-哌嗪基)甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4] 恶嗪 -7(8H)-酮 （1-16) ， 白色固体。 MS( m/ ： 426 [Μ+Η] +。 Ή NMR (DMSO-d 6): d: 11.82 (br, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.35-8.33 (d, J = 8.0Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.70-7.68 (d, / = 8.0Hz, 1H), 4.89 (s, 2H), 4.67-4.63 (q, / =4.0Hz, 2H), 4.59 (s, 3H), 4.40-4.22 (m, 8H), 3.25-3.21 (q, / =4.0Hz, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.01-1.99 (t, /= 4.0Hz, 3H), 1.58-1.56 (t, / = 4.0Hz, 3H)。

[0089] 实施例 17

[0090] 化合物 （1-17 ) 6-环戊基 -8-仲丁基 -2-(5-(l-哌嗪基)甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4] 噻嗪 -7(8H)-酮

[0091] 化合物 1-17

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6-环戊基 -8-仲丁基 -6H-嘧啶 [5,4-b] [ 1,4]噻嗪 -7(8H)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲硫基嘧啶 、 仲丁胺和 2-溴代 -2-环戊基乙酸甲酯)和 5- [(哌嗪 -1-基)甲基]吡啶 -2-胺。 得终产物 6-环戊基 -8-仲丁基 -2-(5-(1-哌嗪基)甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4] 噻嗪 -7(8H)-酮盐酸盐 （1-17) ， 白色固体。 MS( m/ ： 482 [Μ+Η] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.89 (br, 1H), 9.81 (br, 2H), 8.55 (s, 1H), 8.35-8.33 (d, / = 8.0Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.70-7.68 (d, / = 8.0Hz, 1H), 4.88-4.65 (m, 4H), 4.42-4.25 (m, 8H), 2.21- 1.95 (m, 14H), 0.98-0.96 (t, / = 4.0Hz, 3H)。

[0092] 实施例 18

[0093] 化合物 （1-18

) 6-环己基 -8-叔戊基 -2-(5-(4-环丙基 -1-哌嗪基）甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b] [ 1,4]恶嗪 -7(8H)-酮

[0094] 化合物 1-18

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6-环己基 -8-叔戊基 -6H-嘧啶 [5,4-b] [ 1,4]恶嗪 -7(8H)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲氧基嘧啶 、 叔戊胺和 2-溴代 -2-环己基乙酸甲酯)和 5-[(4-环丙基哌嗪 - 1-基)甲基]吡啶 -2-胺。 得终产物 6-环己基 -8-叔戊基 -2-(5-(4-环丙基 -1-哌嗪基)甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b] [l,4]恶嗪 -7(8H)-酮 ( 1-18) ， 白色固体。 MS( ml z): 534 [M+H] Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.81 (br, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.34-8.32 (d, / = 8.0Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.70-7.68 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.58-5.57 (d, / = 4.0Hz, 1H), 4.88 (s, 2H), 4.42-4.21 (m, 9H), 2.21-2.01 (m, 19H), 1.19- 1.15 (t, / = 8.0Hz, 1H), 0.75-0.69 (m, 4H)

[0095] 实施例 19

[0096] 化合物 （1-19) 6-环庚基 -8-(3-甲基 -2-丁基）

-2-(5-(4-正丙基 - 1-哌嗪基）甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b] [l,4]噻嗪 -7(8H)-酮 [0097] 化合物 1-19

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6-环庚基 -8-(3-甲基 -2-丁基） -6H-嘧 啶 [5,4-b] [l,4]噻嗪 -7(8H)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲 硫基嘧啶、 3-甲基 -2-丁基胺和 2-溴代 -2-环庚基乙酸甲酯)和 5-[(4-丙基哌嗪 - 1-基） 甲基]吡啶 -2-胺。 得终产物 6-环庚基 -8-(3-甲基 -2-丁基） -2-(5-(4-正丙基 - 1-哌嗪基） 甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]噻嗪 -7(8H)-酮 （ 1-19) ， 白色固体。 MS( ml z): 567 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.82 (br, IH), 8.55 (s, IH), 8.34-8.32 (d, / = 8.0Hz, IH), 8.21 (s, IH), 7.70-7.68 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.58-5.57 (d, / = 4.0Hz, IH), 4.87-4.65 (m, 4H), 4.43-4.21 (m, 11H), 2.19-2.01 (m, 17H), 1.21- 1.18 (m, 9H)。

[0098] 实施例 20

[0099] 化合物 （1-20

) 6,6-二甲基 -8-环戊基 -2-(5-(4-环丁基 - 1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b] [l,4 ]恶嗪 -7(8H)-酮

[0100] 化合物 1-20的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6,6-二甲基 -8-环戊 基 -6H-嘧啶 [5,4-b] [l,4]恶嗪 -7(8H)-酮和 1-环丁基 -4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪。 得终 产物 6,6-二甲基 -8-环戊基 -2-(5-(4-环丁基 - 1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b] [ 1,4]恶嗪 -7(8H)-酮 ( 1-20) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 478 [Μ+Η] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.83 (br, IH), 8.26 (s, IH), 8.22-8.20 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.91 (s, IH), 7.70-7.68 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.37-5.23 (m, IH), 4.61-4.56 (m, 5H), 3.45-3.40 (m, 4H), 2.05- 1.47 (m, 20H)。

[0101] 实施例 21

[0102] 化合物 （1-21

) 6,6-二甲基 -8-环戊基 -2-(5-(4-环戊基 - 1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b] [l,4 ]恶嗪 -7(8H)-酮

[0103] 化合物 1-21的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6,6-二甲基 -8-环戊 基 -6H-嘧啶 [5,4-b] [l,4]恶嗪 -7(8H)-酮和 1-环戊基 -4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪。 得终 产物 6,6-二甲基 -8-环戊基 -2-(5-(4-环戊基 - 1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b] [ 1,4]恶嗪 -7(8H)-酮 ( 1-21) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 492 [Μ+Η] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.81 (br, IH), 8.25 (s, IH), 8.23-8.21 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.92 (s, IH),

7.70-7.68 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.36-5.23 (m, IH), 4.60 (m, 4H), 3.45-3.39 (m, 5H),

2.03-1.43 (m, 22H)。

[0104] 实施例 22

[0105] 化合物 （1-22

) 6,6-二甲基 -8-环戊基 -2-(5-(4-环己基 -1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4

]恶嗪 -7(8H)-酮

[0106] 化合物 1-22的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6,6-二甲基 -8-环戊 基 -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮和 1-环己基 -4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪。 得终 产物 6,6-二甲基 -8-环戊基 -2-(5-(4-环己基 -1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][ 1,4]恶嗪 -7(8H)-酮 ( 1-22) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 506 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.83 (br, IH), 8.26 (s, IH), 8.23-8.21 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.93 (s, IH),

7.70- 7.68 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.35-5.25 (m, IH), 4.61 (m, 4H), 3.47-3.39 (m, 5H), 2.05-1.43 (m, 24H)。

[0107] 实施例 23

[0108] 化合物 （1-23

) 6,6-二甲基 -8-环戊基 -2-(5-(4-环庚基 -1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4

]噻嗪 -7(8H)-酮

[0109] 化合物 1-23的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6,6-二甲基 -8-环戊 基 -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]噻嗪 -7(8H)-酮和 1-环庚基 -4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪。 得终 产物 6,6-二甲基 -8-环戊基 -2-(5-(4-环庚基 -1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][ 1,4]噻嗪 -7(8H)-酮 ( 1-23) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 536 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.81 (br, IH), 8.27 (s, IH), 8.22-8.20 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.91 (s, IH),

7.71- 7.69 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.35-5.25 (m, IH), 4.61 (m, 4H), 3.46-3.37 (m, 5H), 2.07-1.42 (m, 26H)。

[0110] 实施例 24

[0111] 化合物 （1-24

) 6,6-二甲基 -8-环戊基 -2-(5-(4-异丙基 -1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4 ]噻嗪 -7(8H)-酮

[0112] 化合物 1-24的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6,6-二甲基 -8-环戊 基 -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]噻嗪 -7(8H)-酮和 1-异丙基 -4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪。 得终 产物 6,6-二甲基 -8-环戊基 -2-(5-(4-异丙基 -1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][ 1,4]噻嗪 -7(8H)-酮 ( 1-24) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 482 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.82 (br, IH), 8.26 (s, IH), 8.23-8.21 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.91 (s, 1H)， 7.71-7.69 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.38-5.27 (m, IH), 4.63 (m, 4H), 3.47-3.37 (m, 5H), 2.01-1.45 (m, 14H), 1.58-1.57 (d, / = 4.0Hz, 6H)。

[0113] 实施例 25

[0114] 化合物 （1-25) 8'-环戊基 -2'-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基)螺 [环丙 -1,6'-嘧 啶 [5,4-b][l,4]恶嗪] -7'(8Ή)-酮

[0115] 化合物 1-25

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2'-氯 -8'-环戊基-螺 [环丙 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][ 1 ,4]恶嗪] -7'(8Ή)-酮和 1 -(2-吡啶基)和 5-[(4-乙基哌嗪- 1 -基)甲基]吡啶 -2-胺。 得终 产物 8'-环戊基 -2'-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基)螺 [环丙 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][l,4] 恶嗪] -7'(8Ή)-酮 ( 1-25) ， 淡黄色固体。 MS( m/ z): 464 [M+H] Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.83 (br, IH), 8.53 (s, IH), 8.36-8.34 (d, J = 8.0Hz, IH), 8.21 (s, 1H)， 7.71-7.69 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.01-4.95 (m, 3H), 4.25-3.56 (m, 10H), 2.05-1.57 (m, 8H), 1.21-0.97 (m, 7H)。

[0116] 实施例 26

[0117] 化合物 （1-26

) 6-乙酰基 -8-环戊基 -2-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基）甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l, 4]恶嗪 -7(8H)-酮

[0118] 化合物 1-26

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6-乙酰基 -8-环戊基 -6H-嘧啶 [5,4-b][ 1,4]恶嗪 -7(8H)-酮和 1-(2-吡啶基)和 5-[(4-乙基哌嗪 -1-基)甲基]吡啶 -2-胺。 得终产 物 6-乙酰基 -8-环戊基 -2-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基）甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l, 4]恶嗪 -7(8H)-酮 （1-26) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 480 [Μ+Η] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.81 (br, IH), 8.52 (s, IH), 8.36-8.34 (d, / = 8.0Hz, IH), 8.20 (s, IH), 7.71-7.69 (d, / = 8.0Hz, IH), 6.15 (s, IH), 5.01-4.85 (m, 3H), 4.23-3.58 (m, 10H), 3.39 (s, 3H), 2.01-1.57 (m, 8H), 1.23-1.21 (t, /= 4.0Hz, 3H)。

[0119] 实施例 27

[0120] 化合物 （1-27) 6-氰基 -8-环戊基 -2-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基)甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H- 嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮

[0121] 化合物 1-27

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6-氰基 -8-环戊基 -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4 ]恶嗪 -7(8H)-酮和 1-(2-吡啶基)和 5-[(4-乙基哌嗪 -1-基)甲基]吡啶 -2-胺。 得终产物 6- 氰基 -8-环戊基 -2-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基）甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪- 7(8H)-酮 ( 1-27) ， 淡黄色固体。 MS( m/ z): 463 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.80 (br, IH), 8.51 (s, IH), 8.37-8.35 (d, / = 8.0Hz, IH), 8.21 (s, IH), 7.71-7.69 (d, J = 8.0Hz, IH), 6.17 (s, IH), 5.00-4.87 (m, 3H), 4.21-3.58 (m, 10H), 2.01-1.58 (m, 8H), 1.24-1.22 (t, /= 4.0Hz, 3H)。

[0122] 实施例 28

[0123] 化合物 （1-28) 8'-环戊基 -2'-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基)螺 [环丁 -1,6'-嘧 啶 [5,4-b][l,4]恶嗪] -7'(8Ή)-酮

[0124] 化合物 1-28

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2'-氯 -8'-环戊基-螺 [环丁 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][ 1 ,4]恶嗪] -7'(8Ή)-酮和 1 -(2-吡啶基)和 5-[(4-乙基哌嗪- 1 -基)甲基]吡啶 -2-胺。 得终 产物 8'-环戊基 -2'-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基)螺 [环丁 -1,6'-嘧啶 [5,4-b][l,4] 恶嗪] -7'(8Ή)-酮 （1-28) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 478 [Μ+Η] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.82 (br, IH), 8.52 (s, IH), 8.37-8.35 (d, / = 8.0Hz, IH), 8.23 (s, IH), 7.71-7.69 (d, / = 8.0Hz, IH), 4.98-4.94 (m, 3H), 4.23-3.56 (m, 14H), 2.03-1.55 (m, 10H), 1.23-1.21 (t, /= 4.0Hz, 3H)。

[0125] 实施例 29

[0126] 化合物 （1-29

6,6-二甲基 -8-(2-噻吩基 )-2-(5-(l-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪- 7(8H)-酮

[0127] 化合物 1-29的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6,6-二甲基 -8-(2-噻 吩基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2, 4-二氯 -5-甲氧基嘧啶和 2-氨基噻吩)和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯。 得 终产物 6,6-二甲基 -8-(2-噻吩基 )-2-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4] 恶嗪 -7(8H)-酮盐酸盐 ( 1-29) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 438 [Μ+Η] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.89 (br, 1H), 9.78 (br, 2H), 8.26 (s, 1H), 8.24-8.22 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.91-7.78 (m, 4H), 6.58-6.52 (m, 1H), 4.61 (m, 4H), 3.47 (m, 4H), 1.48 (s, 6H)。

[0128] 实施例 30

[0129] 化合物 （1-30) 6,6-二甲基 -8-(2-吡啶基 )-2-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基)甲基 -吡啶 -2-氨 基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮

[0130] 化合物 1-30的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6,6-二甲基 -8-(2-吡 啶基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮和 5-[(4-乙基哌嗪 -1-基)甲基]吡啶 -2-胺。 得终产物 6,6-二甲基 -8-(2-吡啶基 )-2-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基)甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧 啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮 （1-30) ， 白色固体。 MS( m/ ： 475 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.83 (br, 1H), 8.67-8.64 (m, 1H), 8.61-8.58 (m, 1H), 8.51-8.47 (m, 2H), 8.36-8.34 (d, / = 8.0Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.05-8.01 (m, 1H), 7.72-7.70 (d, J = 8.0Hz, 1H), 4.87 (s, 2H), 4.23-3.56 (m, 10H), 1.58 (s, 6H) , 1.19-1.17 (t, / = 4.0Hz, 3H)。

[0131] 实施例 31

[0132] 化合物 （1-31) 6,6-二甲基 -8-(2-嘧啶基 )-2-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基)甲基 -吡啶 -2-氨 基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮

[0133] 化合物 1-31的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6,6-二甲基 -8-(2-嘧 啶基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮和 5-[(4-乙基哌嗪 -1-基)甲基]吡啶 -2-胺。 得终产物 6,6-二甲基 -8-(2-嘧啶基 )-2-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基)甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧 啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮 （1-31) ， 白色固体。 MS( m/ ： 476 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.81 (br, 1H), 8.92-8.89 (m, 2H), 8.53 (s, 1H), 8.37-8.34 (m, 2H), 8.20 (s, 1H), 7.72-7.70 (d, / = 8.0Hz, 1H), 4.87 (s, 2H), 4.21-3.64 (m, 10H), 1.57 (s, 6H) , 1.19-1.17 (t, / = 4.0Hz, 3H)。

[0134] 实施例 32

[0135] 化合物 （1-32

) 6,6-二甲基 -8-(2-呋喃基 )-2-(5-(l-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪-

7(8H)-酮

[0136] 化合物 1-32的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6,6-二甲基 -8-(2-呋 喃基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯 。 得终产物 6,6-二甲基 -8-(2-呋喃基 )-2-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][ 1,4]恶嗪 -7(8H)-酮盐酸盐 ( 1-32) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 422 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.87 (br, 1H), 9.81 (br, 2H), 8.25 (s, 1H), 8.24-8.22 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.98-7.82 (m, 3H), 6.57-6.52 (m, 2H), 4.62 (m, 4H), 3.48 (m, 4H), 1.51 (s, 6H)。

[0137] 实施例 33

[0138] 化合物 （1-33)

Ν,Ν-二甲基 -6-甲酰胺 -8-环戊基 -2-(5-(l-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4] 恶嗪 -7(8H)-酮

[0139] 化合物 1-33的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -Ν,Ν-二甲基 -6-甲酰 胺 -8-环戊基 -6Η-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8Η)-酮和 1-(2-吡啶基)和 4-(6-氨基吡啶 -3- 基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯。 得终产物 Ν,Ν-二甲基 -6-甲酰胺 -8-环戊基 -2-(5-(1-哌嗪基） -吡啶 -2-氨基) -6Η-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8Η)-酮盐酸盐 （ 1-33

) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 467 [Μ+Η] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.88 (br, 1H), 9.80 (br, 2H), 8.27 (s, 1H), 8.23-8.21 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.71-7.69 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.58 (s, 1H), 5.33-5.26 (m, 1H), 5.01 (s, 6H), 4.62 (m, 4H), 3.61 (m, 4H), 2.05-1.57 (m, 8H)。

[0140] 实施例 34

[0141] 化合物 （1-34)

6-甲酰胺 -8-环戊基 -2-(5-(l-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)- 酮 [0142] 化合物 1-34

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6-甲酰胺 -8-环戊基 -6H-嘧啶 [5,4-b] [ 1,4]恶嗪 -7(8H)-酮和 1-(2-吡啶基)和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 - 1-羧酸叔丁酯。 得终 产物 6-甲酰胺 -8-环戊基 -2-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8 H)-酮盐酸盐 （1-34) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 439 [Μ+Η] +。 Ή NMR

(DMSO-d ₆ ): d: 11.86 (br, 1H), 9.83 (br, 2H), 9.57 (br, 2H), 8.26 (s, 1H), 8.22-8.20 (d, J = 8.0Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.71-7.69 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.59 (s, 1H), 5.34-5.26 (m, 1H), 4.63 (m, 4H), 3.63 (m, 4H), 2.01-1.62 (m, 8H)。

[0143] 实施例 35

[0144] 化合物 （1-35

) 6,6-二甲基 -8-苯基 -2-(5-(l-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b] [l,4]恶嗪 -7(8H) -酮

[0145] 化合物 1-35

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6,6-二甲基 -8-苯基 -6H-嘧啶 [5,4-b][l ,4]恶嗪 -7(8H)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2,4-二氯 -5-甲氧基嘧啶和 苯胺)和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯。 得终产物 6,6-二甲基 -8-苯基 -2-(5 -(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b] [l,4]恶嗪 -7(8H)-酮 （1-35) ， 淡黄色固 体。 MS( ml z): 432 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.86 (br, 1H), 9.82 (br, 2H), 8.56-8.52 (m, 4H), 8.26 (s, 1H), 8.24-8.22 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.99-7.92 (m, 3H), 4.61 (m, 4H), 3.49 (m, 4H), 1.52 (s, 6H)=

[0146] 实施例 36

[0147] 化合物 （1-36

) 6,6-二甲基 -8-(4-氯苯基 )-2-(5-(l-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b] [l,4]恶嗪- 7(8H)-酮

化合物 1-36的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6,6-二甲基 -8-(4-氯 苯基) -6H-嘧啶 [5,4-b] [l,4]恶嗪 -7(8H)-酮 (合成方法类似于实施例 1， 起始原料为 2, 4-二氯 -5-甲氧基嘧啶和 4-氯苯氨)和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 - 1-羧酸叔丁酯。 得终 产物 6,6-二甲基 -8-(4-氯苯基 )-2-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b] [l,4]恶 嗪 -7(8H)-酮 ( 1-36) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 466 [Μ+Η] +。 Ή NMR

(DMSO-d ₆ ): d: 11.87 (br, 1H), 9.85 (br, 2H), 8.56-8.54 (d, /= 8.0Hz, 2H), 8.45-8.43 (d, / = 8.0Hz, 2H), 8.26 (s, 1H), 8.23-8.21 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.71-7.69 (d, / = 8.0Hz, 1H), 4.63 (m, 4H), 3.51 (m, 4H), 1.54 (s, 6H)。

[0149] 实施例 37

[0150] 化合物 （1-37

) 6,6-二甲基 -8-(3-戊基) -2-(5-(l-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7( 8H)-酮

[0151] 化合物 1-37的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6,6-二甲基 -8-(3-戊 基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯。 得终产物 6,6-二甲基 -8-(3-戊基) -2-(5-(1-哌嗪基) -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4] 恶嗪 -7(8H)-酮盐酸盐 ( 1-37) ， 淡黄色固体。 MS( m/ ： 426 [Μ+Η] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.87 (br, 1H), 9.78 (br, 2H), 8.27 (s, 1H), 8.24-8.22 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.70-7.68 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.35-5.22 (m, 1H), 4.61 (m, 4H), 3.48 (m, 4H), 1.58 (s, 6H), 1.45-1.42 (m, 4H), 0.92-0.88 (m, 6H)。

[0152] 实施例 38

[0153] 化合物 （1-38

) 6,6-二甲基 -8-(3-戊基) -2-(5-(4-乙基 -1-哌嗪基）甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b] [1,4]恶嗪 -7(8H)-酮

[0154] 化合物 1-37的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 2-氯 -6,6-二甲基 -8-(3-戊 基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮和 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁 5-[(4- 乙基哌嗪 -1-基)甲基]吡啶 -2-胺。 得终产物 6,6-二甲基 -8-(3-戊基) -2-(5-(4-乙基 -1-哌 嗪基)甲基 -吡啶 -2-氨基) -6H-嘧啶 [5,4-b][l,4]恶嗪 -7(8H)-酮 （1-38) ， 淡黄色固体 。 MS( m/ ： 468 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.82 (br, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.36-8.34 (d, / = 8.0Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.72-7.70 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.21-5.08 (m, 3H), 4.61-4.02 (m, 10H), 1.59 (s, 6H), 1.46-1.42 (m, 4H), 0.93-0.88 (m, 9H)。

[0155] 实施例 39

[0156] 生物测试 [0157] 活性测试： 采用 Caliper迁移率变动检测技术 （Caliper mobility shift assay) 测定 CDK4蛋白激酶活性 （参见 J. Biomol. Screen,2009,PP31) 。 将待测化 合物以 DMSO溶解后用激酶缓冲溶液 (20mM HEPES-pH 7.5, 0.01% Triton X-100, 10mM MgCl ₂ ， 2mM DTT)稀释， 在 384孔板中加入 5 L的 10<¾DMSO溶解 的 5倍反应终浓度的化合物， 无化合物对照孔是 5μί的 10%DMSO， 无没活性对照 孔是 5μί的激酶缓冲液。 加入 ΙΟμί稀释 2.5倍后的 CDK4酶溶液 （GST-CDK4(l-30 3end)) 后在室温下孵育 10min， 再加入 ΙΟμί的稀释 2.5倍后的底物溶液 Peptide FAM-P8。 28。C下孵育 3h后加 25μί终止液终止反应， Caliper EZ Reader II

(Caliper Life Sciences) 上读取转化率数据， 按照上述方法把转化率转化成抑制 率数据。 其中， 抑制率 <¾= (max-转化） I (max-min) χ100<¾。

[0158] 活性测试： 采用 Caliper迁移率变动检测技术 （Caliper mobility shift

assay) 测定 CDK6蛋白激酶活性 （参见 J. Biomol. Screen,2009,PP31) 。 将待测化 合物以 DMSO溶解后用激酶缓冲溶液 (20mM HEPES-pH 7.5, 0.01% Triton X-100, 10mM MgCl ₂ ， 2mM DTT)稀释， 在 384孔板中加入 5 L的 10<¾DMSO溶解 的 5倍反应终浓度的化合物， 无化合物对照孔是 5μί的 10%DMSO， 无没活性对照 孔是 5μί的激酶缓冲液。 加入 ΙΟμί稀释 2.5倍后的 CDK6酶溶液 （GST-CDK6(l-32 6end)) 后在室温下孵育 10min， 再加入 ΙΟμί的稀释 2.5倍后的底物溶液 Peptide FAM-P8。 28。C下孵育 40min后加 25μί终止液终止反应， Caliper EZ Reader II

(Caliper Life Sciences) 上读取转化率数据， 按照上述方法把转化率转化成抑制 率数据。 其中， 抑制率 <¾= (max-转化） I (max-min) χ100<¾。

[0159] 上述实验结果如表 2所示。

[0160] 表 2.测试结果：

[] [表 2]

注： A表示 IC ₅ 。〉500nM， B表示 500nM≥IC ₅ 。〉 100nM， C表示 100nM≥IC > 20nM， D表示 IC ₅ 。≤20nM。