本発明のHIV-プロテアーゼ阻害剤は、乳酸 菌と枯草菌で発酵させた培地を用いてキノコ 菌を培養した後、さらに麹菌で発酵させて得 られる培養物の液状部又は当該液状部の濃縮 若しくは希釈物を含むことを特徴とする。即 ち本発明のHIV-プロテアーゼ阻害剤は、(1)乳� �菌と枯草菌による発酵(第1発酵工程)、(2)キ� �コ菌の培養(キノコ菌培養工程)、(3)麹菌によ る発酵(第2発酵工程)、及び(4)培養物の液状部 の分離(固液分離工程)を経て得られる液体又� ��その濃縮又は希釈物(以下、これら3つをま� �めて「発酵キノコエキス」と呼ぶ)を有効成� ��とする。尚、ここでの「濃縮」及び「希釈� ��の程度は特に限定されない。従って、水分� ��が実質的にない状態(即ち乾燥状態)にまで� �ることも「濃縮」の概念に含むものとする� �以下、図1を参照しながら発酵キノコエキス� ��製造工程について詳述する。

(1)第1発酵工程(図1のa)
 この工程ではまず培地を用意する。後のキ� ��コ菌の培養に適し、且つ乳酸菌及び枯草菌� ��資化可能なものである限り、培地の種類は� ��に限定されない。例えば、コーンコブミー� ��(トウモロコシ芯の粉砕物)、竹や笹或いは� �スキ等の粉砕物、廃ホダギ(椎茸や舞茸等の� ��培廃棄物)の粉砕物、コーヒーかす、稲ワラ 、麦わら、サトウキビ搾りかす等を基材とし 、おから(豆乳の絞りかす)、豆類(大豆など)� �粉砕物、小麦ふすま、米ぬか、及びトウモ� �コシぬか等の栄養材を添加した培地を使用� �ることができる。基材と栄養材の使用量比� �を重量比で60~90:40~10になるようにするとよい 。尚、使用する基材に十分な量の栄養分(窒� �分など)が含有されている場合には栄養材の� ��用は必須ではない。

 培地を均一に混合した後、水分量を50%~80% 、好ましくは65%~75%に調整する。このように� �備した培地に乳酸菌及び枯草菌を植菌し、� �養する。乳酸菌又は枯草菌の培養開始を他� �の培養開始に先行させてもよい。即ち、乳� �菌の植菌時期と枯草菌の植菌時期は必ずし� �同時でなくてよい。

 乳酸菌としては、バシラス・コアグラン� ��(Bacillus coagulans)等のバシラス属の乳酸菌、� ��クトバシラス・カゼイ(Lactobacillus casei)、ラ クトバシラス・ブルガリカス(Lactobacillus bulga ricus)、ラクトバシラス・アシドフィラス(Lacto bacillus acidophilus)、ラクトバシラス・ブレビ� �(Lactobacillus brevis)、ラクトバシラス・プラン タラム(Lactobacillus plantarum)等のラクトバシラ� ��属の乳酸菌、ビフィドバクテリウム・ビフ� ��ダム(Bifidobacterium bifidum)、ビフィドバクテ� �ウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)、ビフィ� ��バクテリウム・ラクティス(Bifidobacterium lact is)等のビフィドバクテリウム属の乳酸菌、ラ クトコッカス・ラクティス(Lactococcus lactis)、 ラクトコッカス・クレモリス(Lactococcus cremori s)、ラクトコッカス・ジアセチラクティス(Lac tococcus diacetylactis)、ラクトコッカス・プラン タラム(Lactococcus plantarum)、ラクトコッカス・ ラフィノラクティス(Lactococcus rafinolactis)等の ラクトコッカス属の乳酸菌、ペディオコッカ ス・ダムノサス(Pediococcus damnosus)、ペディオ� ��ッカス・ペントサセウス(Pediococcus pentosaceus )等のペディオコッカス属の乳酸菌、カルノ� �クテリウム・ディバージェンス(Carnobacterium  divergens)、カルノバクテリウム・ピシコーラ(C arnobacterium piscicola)等のカルノバクテリウム� �の乳酸菌、ロイコノストック・メセンテロ� �ズ(Leuconostoc mesenteroides)、ロイコノストック� ��シトレウム(Leuconostoc citreum)等のロイコノス トック属の乳酸菌、ストレプトコッカス・サ ーモフィラス(Streptococcus thermophilus)、ストレ� ��トコッカス・フェーカリス(Streptococcus faecal is)、ストレプトコッカス・ピオジェネス(Strep tococcus pyogenes)等のストレプトコッカス属の� �酸菌、エンテロコッカス・カゼリフラバス(E nterococcus caseliflavus)、エンテロコッカス・サ� ��フレウス(Enterococcus sulfreus)等のエンテロコ� ��カス属の乳酸菌を使用することができる。� ��、市販の菌株又は公的機関等に寄託された� ��株を用いることしても、新たに単離した菌� ��使用することにしてもよい。また、二種類� ��上の乳酸菌を併用することにしてもよい。

 枯草菌(Bacillus subtilis)として納豆菌(Bacillu s subtilis natto)を使用することが好ましい。� �豆菌の種類は特に限定されず、宮城野菌(有� ��会社 宮城野納豆菌製造所)、成瀬菌(株式会 社 成瀬発酵化学研究所)、高橋菌(納豆素本� � 高橋祐蔵研究所)等を使用することができ� �。尚、市販の菌株又は公的機関等に寄託さ� �た菌株を用いることとしても、新たに単離� �た菌を使用することにしてもよい。また、� �種類以上の枯草菌を併用することにしても� �い。

 乳酸菌と枯草菌を培地へ植菌すると次第� ��培地温度が上昇する。通常、培地への両菌� ��植菌後数時間(2~6時間程度)で培地温度が40℃ 程度まで上昇する(予備発酵)。予備発酵後、� ��イラーなどの蒸気で加温及び加湿可能な室� ��に培地を移し、室温を40℃~60℃程度に維持� �ることが好ましい。このようにすることに� �って培地温度が約45℃~約60℃に保持され、乳 酸菌及び枯草菌による良好な発酵が進行する (本発酵)。この本発酵を10日~2月、好ましくは 20日~1月継続する。尚、発酵時に使用する容� �の大きさは特に問わないが、通気不良を起� �すことを防止し且つ水分の維持をしやすく� �るために、培地の高さを10cm~30cm、好ましく� �15cm~25cm程度にして発酵させるとよい。

(2)キノコ菌培養工程(図1のb)
 まず、発酵工程後の培地の温度を適温まで� ��げる。例えば、培地温度が30℃以下になっ� �時点でキノコ菌を植菌する。キノコ菌とし� �は、アガリクス・ブラゼイ・ムリル(Agaricus  blazei Murill)、シイタケ(Lentinula edodes)、エノ� �タケ(Flammulina velutipes)、マッシュルーム(Agari cus bisporus)、マイタケ(Grifola frondosa)、ホンシ メジ(Lyophyllum shimeji)、ブナシメジ(Hypsizigus ma rmoreus)、ナメコ(Pholiota nameko)、エリンギ(Pleuro tus eryngii)等を用いることができる。乳酸菌� �は枯草菌の混入がキノコの菌糸体の生育に� �響する場合、植菌に先立って培地を滅菌(殺� ��)することが好ましい。培地の滅菌はオート クレーブ(例えば120℃、2気圧で10~30分)、間歇� ��菌法、煮沸滅菌法など、常法で行えばよい� ��尚、アガリクス・ブラゼイ・ムリル(Agaricus� �blazei Murill)やマッシュルーム(Agaricus bisporus) 等は滅菌操作をすることなく直接、植菌する こともできる。

 植菌後、使用するキノコ菌の生育に適した� ��件で菌糸体が十分に生育するまで培養する� ��培養期間は例えば1月間~4月間とする。培養� ��件の例を以下に示す。
 アガリクス・ブラゼイ・ムリル:室温26~30℃� ��湿度85%前後
 シイタケ:室温20~25℃、湿度85%前後
 マッシュルーム:室温22~27℃(平均24.5℃)、湿� ��85%前後
 マイタケ:室温20~25℃、湿度85%前後

(3)第2発酵工程(図1のc)
 この工程では、以上の培養によって得られ� ��キノコ菌培養物に麹菌及び水を添加し、麹� ��による発酵を行う。
 麹菌としては、アスペルギルス・オリゼ(Asp ergillus oryzae)、アスペルギルス・ニガー(Asperg illus niger)、アスペルギルス フラバス(Aspergil lus flavus)、アスペルギルス・ポリオキソジェ ネス(Aspergillus polyoxogenes)、アスペルギルス・ ソーヤ(Aspergillus sojae)、アスペルギルス・ア� ��モリ(Aspergillus awamori)、アスペルギルス・カ ワウチ(Aspergillus kawauchii)、アスペルギルス・ サミ(Aspergillus usami)、モナスカス・アンカ(Mon ascus anka)、モナスカス・ピロサス(Monascus pilo sus)、リゾプス・オリゴスポラス(Rhizopus oligos porus)、リゾプス・オリゼ(Rhizopus oryzae)等を用 いることができる。中でも、発育が容易で有 機酸を生成しやすい等の理由から、アスペル ギルス・オリゼ(Aspergillus oryzae)又はアスペル ギルス・ニガー(Aspergillus niger)を用いること� ��好ましい。

 麹菌と水の添加後、使用する麹菌に応じ� ��条件で培養(発酵)する。例えば、アスペル� �ルス・オリゼ(Aspergillus oryzae)であれば24~28℃ 、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)で� ��れば24~28℃の温度条件下で培養するとよい� �培養時間は特に限定されず、例えば12時間~48 時間培養を継続する。培養終了後、滅菌処理 することが好ましい。

(4)固液分離工程(図1のd)
 この工程では、以上の培養(発酵)によって� �られた培養物を固液分離し、不要な固形分� �除去する。固液分離はろ過、圧搾分離、遠� �分離等によって実施可能であるが、操作が� �便であり、有効成分のロスも少ないことか� �、好ましくはろ過によって固液分離する。� �過には布製(不織布製を含む)金属製、又は樹 脂製のフィルタを利用することができる。尚 、固液分離によって得られる液体の固形分濃 度が0.5%~3%程度になるように固液分離の条件� �設定することが好ましい。
 固液分離によって得られた液体(培養物の液 状部)は、必要に応じて、濃縮又は希釈され� �。

 以上の一連の工程によって得られた発酵� ��ノコエキスはそのまま又は必要な製剤化の� ��程を経た後、HIV-プロテアーゼ阻害剤として 用いられる。製剤化する場合には、製剤上許 容される他の成分(例えば、担体、賦形剤、� �壊剤、緩衝剤、乳化剤、懸濁剤、無痛化剤� �安定剤、保存剤、防腐剤、生理食塩水など)� ��含有させることができる。賦形剤としては� ��糖、デンプン、ソルビトール、D-マンニト� �ル、白糖等を用いることができる。崩壊剤� �してはデンプン、カルボキシメチルセルロ� �ス、炭酸カルシウム等を用いることができ� �。緩衝剤としてはリン酸塩、クエン酸塩、� �酸塩等を用いることができる。乳化剤とし� �はアラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、� �ラガント等を用いることができる。懸濁剤� �してはモノステアリン酸グリセリン、モノ� �テアリン酸アルミニウム、メチルセルロー� �、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキ� �メチルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウ� �等を用いることができる。無痛化剤として� �ベンジルアルコール、クロロブタノール、� �ルビトール等を用いることができる。安定� �としてはプロピレングリコール、ジエチリ� �亜硫酸塩、アスコルビン酸等を用いること� �できる。保存剤としてはフェノール、塩化� �ンザルコニウム、ベンジルアルコール、ク� �ロブタノール、メチルパラベン等を用いる� �とができる。防腐剤としては塩化ベンザル� �ニウム、パラオキシ安息香酸、クロロブタ� �ール等と用いることができる。

 製剤化する場合の剤型も特に限定されな� ��。例えば錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カ� ��セル剤、シロップ剤、注射剤、外用剤、及� ��座剤などの剤型を採用することができる。

 本発明のHIV-プロテアーゼ阻害剤はその形態 (特に剤型)に応じて経口投与又は非経口投与( 静脈内、動脈内、皮下、筋肉、又は腹腔内注 射、経皮、経鼻、経粘膜など)によってHIV患� �に適用される。
 本発明のHIV-プロテアーゼ阻害剤の投与量は 、期待される治療効果が得られるように設定 される。治療上有効な投与量の設定において は一般に症状、患者の年齢、性別、及び体重 などが考慮される。尚、当業者であればこれ らの事項を考慮して適当な投与量を設定する ことが可能である。投与スケジュールとして は例えば1日1回~数回、2日に1回、或いは3日に 1回などを採用できる。投与スケジュールの� �成においては、患者の病状や有効成分の効� �持続時間などを考慮することができる。