DOMAINE TECHNIQUE

La présente invention concerne un procédé de préparation d’un hydrogel comprenant un polysaccharide réticulé, en particulier, un procédé de préparation d’un hydrogel injectable comprenant de l’acide hyaluronique réticulé. La présente invention concerne également un hydrogel, de préférence injectable, susceptible d’être obtenu par le procédé, une composition comprenant l’ hydrogel, et les utilisations de cet hydrogel.

ETAT DE LA TECHNIQUE ANTERIEURE

Les hydrogels de polysaccharides sont utilisés dans divers domaines comme dans les domaines esthétiques, cosmétiques et thérapeutiques. Ils peuvent notamment se substituer aux tissus biologiques. En particulier, les gels d’acide hyaluronique (HA) trouvent des applications en ophtalmologie, en parodontologie, en rhumatologie ou encore en chirurgie esthétique. Les hydrogels d’acide hyaluronique sont utilisés notamment pour combler des tissus mous, de préférence la peau, présentant des défauts volumiques tels que des rides, des cicatrices ou pour augmenter le volume de tissus mous.

Pour obtenir des gels d’acide hyaluronique avec des propriétés mécaniques, une durabilité in vivo et une résistance à la dégradation souhaitables pour le comblement des tissus mous, l’acide hyaluronique est généralement réticulé avec un ou plusieurs agent(s) réticulant. Les agents réticulants conventionnels possèdent au moins deux fonctions réactives avec des groupements fonctionnels présents sur le polysaccharide qui leur permettent de lier des molécules de polysaccharide entre elles et donc de les réticuler. De ce fait, ces agents réticulants présentent une certaine toxicité in vivo car leurs fonctions réactives avec des groupements fonctionnels présents sur le polysaccharide peuvent leurs permettre de réagir également avec des biopolymères tels que les peptides, les glucides et l’ADN et donc de les réticuler.

Pour des questions de biocompatibilité et de sécurité des produits, il est donc souhaitable de diminuer les quantités d’agent réticulant conventionnellement utilisées afin de conserver un polysaccharide le moins modifié possible. Néanmoins, en deçà d’un certain seuil, les gels préparés ne présentent plus des propriétés adaptées. Notamment, des gels d’acide hyaluronique réticulé au 1 ,4-butanediol diglycidyl éther (BDDE) avec un degré de modification d’environ 1% sont très peu cohésifs.

Pour répondre à ce problème, différentes modifications de paramètres de procédé ont déjà été essayées comme l’ajout de sels d’halogénures alcalins ou de phosphates, l’augmentation de la concentration en acide hyaluronique et/ou en NaOH dans le milieu de réticulation. L’ajustement de la durée et de la température de la réaction de réticulation a également été étudié ( W02014/064633 ; W02016/096920 ; W02017/016917 ; Sukwha Kim et al. Facile strategy involving low-temperature chemical cross- linking to enhance the physical and biological properties of hyaluronic acid hydrogel, Carbohydrate Polymers, 2018, 202, 545-553). Néanmoins, il est toujours souhaitable de diminuer davantage les quantités d’agent réticulant conventionnel utilisées.

Par ailleurs, des gels d’acide hyaluronique réticulé via des liaisons Si-O-Si ont été préparés avec un polymère polysiloxane diépoxyde (Morshedi et al. Temperature- dependent formulation of a hydrogel based on Hyaluronic acid-polydimethylsiloxane for biomedical applications, Helyion, 2020, 6(3): e03494). Néanmoins, ces gels ont des propriétés mécaniques très importantes et sont donc difficilement injectables.

Des gels à base d’acide hyaluronique réticulé via des liaisons Si-O-Si ont également été préparés en fonctionnalisant de l’acide hyaluronique avec du 3-aminopropyltriethoxysilane (APTES) pour former un HA-APTES puis en séchant cet HA-APTES en présence de tétraéthoxysilane (TEOS) et de polydimethylsiloxane (PDMS) (Sanchez-Tellez et al., Siloxane-inorganic chemical crosslinking of hyaluronic acid - based hybrid hydrogels: Structural characterization, Carbohydrate Polymers, 2020). Néanmoins, les gels obtenus ne sont pas injectables.

Il a en outre été envisagé d’utiliser des dérivés du silicium pour préparer de nouveaux gels à base de biopolymères réticulés via des liaisons Si-O-Si, comme illustré dans WO2011 /089267 et WO2017/009200. Néanmoins, il est à noter que WO2011 /089267 n’aboutit pas à la formation d’un gel avec des propriétés mécaniques souhaitables pour être injecté.

De plus, ce type de gels utilisant uniquement des dérivés du silicium sont peu stables à la stérilisation à la chaleur et deviennent des solutions après traitement.

D’ailleurs, les méthodes décrites dans WO2011 /089267 et WO2017/009200 ne comprennent pas une telle étape de stérilisation finale. Enfin, des gels à base d’acide hyaluronique réticulé en présence de 1 ,4-butanediol diglycidyl éther (BDDE) (degré de modification de 12,8% et taux de réticulation molaire de 16%) et de (3-glycidyloxypropyl)triméthoxysilane (GPTMS) (degré de modification de 9% et taux de fonctionnalisation molaire de 27%) ont également été décrits dans le but d’emprisonner des substances actives dans un réseau d’acide hyaluronique réticulé pour obtenir leur libération prolongée (Lee et al., One-pot synthesis of si lane- modified hyaluronic acid hydrogels for effective antibacterial drug delivery via sol-gel stabilization, Colloids and surfaces B : Biotinterfaces, 2019, 174:308-315). Toutefois, les hydrogels obtenus n’ont pas des propriétés rhéologiques satisfaisantes pour pouvoir être injectés et la quantité d’agent réticulant BDDE reste très élevée.

Il existe donc encore un besoin de fournir de nouveaux hydrogels à base de polysaccharide, et notamment d’acide hyaluronique réticulé, pouvant être injectés et contenant des quantités moindres d’agent réticulant conventionnel tel que le BDDE.

RESUME DE L’INVENTION

La présente invention a donc pour but de fournir des hydrogels à base d’au moins un polysaccharide réticulé, et plus particulièrement d’acide hyaluronique réticulé, avec une quantité moindre d’agent réticulant conventionnel, tel que le BDDE, pour une biocompatibilité augmentée, avec des propriétés mécaniques acceptables pour les applications thérapeutiques, cosmétiques et esthétiques visées par la présente invention, en particulier injectable, notamment avec une très bonne cohésivité et une bonne stabilité dans le temps et à la stérilisation, en particulier à la stérilisation à la chaleur.

Pour pouvoir diminuer davantage la quantité d’agent réticulant utilisée pour réticuler un polysaccharide, sans impacter les propriétés mécaniques de la composition préparée avec ledit polysaccharide réticulé, les inventeurs ont découvert qu’il était possible de combiner :

- l’utilisation d’un agent réticulant « conventionnel », i.e., un agent réticulant comprenant au moins deux fonctions réactives capables de réagir avec un groupement fonctionnel (e.g., hydroxyle ou acide carboxylique) du polysaccharide (e.g., l’acide hyaluronique), tel que le BDDE ;

- à l’utilisation de molécules comprenant une seule fonction réactive capable de réagir avec un groupement fonctionnel (e.g., hydroxyle ou acide carboxylique) du polysaccharide (e.g., l’acide hyaluronique) et au moins une fonction Si-OR, R représentant un atome d’hydrogène ou un groupement hydrocarboné aliphatique, les fonctions Si-OR pouvant se condenser entre elles (une fois les fonctions Si-OR hydrolysées pour donner des fonctions Si-OH le cas échant) pour former des liaisons Si-O-Si entrainant une réticulation additionnelle dudit polysaccharide.

L’utilisation de telles molécules présentant une seule fonction réactive vis-à-vis du polysaccharide et permettant une réticulation uniquement via une réaction sol-gel ne présentent donc pas la toxicité rencontrée avec les agents réticulants usuels puisque ces molécules ne sont pas capables de réticuler des molécules biologiques (protéines, ADN, etc.). En outre, de manière surprenante, la présence combinée d’un agent silylé et d’une faible quantité d’agent réticulant permet l’obtention d’un gel réticulé stable et présentant les propriétés mécaniques recherchées, y compris après stérilisation.

Selon un mode de réalisation, les gels préparés selon l’invention ont un caractère filant, qui est potentiellement avantageux dans la recherche de propriétés muco-adhésives d’un matériau.

La présente invention a donc pour objet un procédé de préparation d’un hydrogel, de préférence injectable, comprenant les étapes suivantes : a) fourniture d’au moins un polysaccharide ou un sel de celui-ci ; b) réticulation du polysaccharide en présence de 0,05 à 10%, notamment de

0,05 à 5%, préférentiellement de 0,1 à 2% ou de 0,1 à 1%, en moles d’au moins un agent réticulant ou un sel de celui-ci pour 1 mole d’unité de répétition du polysaccharide, ledit agent réticulant comprenant au moins deux groupements fonctionnels Z, identiques ou différents, choisis parmi les groupements isocyanate, amino, époxyde, carboxyle, N-succinimidyloxycarbonyle,

N-sulfosuccinimidyloxycarbonyle, halogénocarbonyle, isothiocyanate, vinyle, formyle, hydroxyle, sulfhydryle, hydrazino, acylhydrazino, aminoxy, carbodiimide, et un résidu d’anhydride d’acide ; c) fonctionnalisation du polysaccharide avec au moins une molécule de formule Chem. I : ou un sel de celle-ci dans laquelle :

T représente un groupement isocyanate, amino, époxyde, carboxyle, N-succinimidyloxycarbonyle, N-sulfo succinimidyloxycarbonyle, halogénocarbonyle, isothiocyanate, vinyle, formyle, hydroxyle, sulfhydryle, hydrazino, acylhydrazino, aminoxy, carbodiimide, ou un résidu d’anhydride d’acide ;

À représente une liaison chimique ou un groupement espaceur ; R ⁵ et R ⁶ , identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ; un atome d'halogène ; un groupement -OR ⁴ avec R ⁴ représentant un atome d'hydrogène, un groupement aryle ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone ; un aryle ; ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone éventuellement substitué par un ou plusieurs groupe(s) choisis parmi un atome d’halogène, un aryle et un hydroxyle ; R ¹⁰ représente un atome d’hydrogène, un groupement aryle ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone ; d) réaction sol-gel d’au moins une partie des groupes Si-OR ¹⁰ et optionnellement au moins une partie des groupes SiOR ⁴ lorsqu’ils sont présents ; dans lequel l’étape b) est réalisée préalablement, ou concomitamment à l’étape c), ou l’étape b) est réalisée consécutivement aux étapes c) et d).

La présente invention a également pour objet un hydrogel susceptible d’être obtenu par le procédé selon l’invention.

La présente invention a également pour objet un hydrogel, de préférence injectable, comprenant au moins un polysaccharide réticulé avec au moins un lien de réticulation LR1 et au moins un lien de réticulation LR2,

- le lien de réticulation LR1 comprenant au moins un motif Si-O-Si,

- le lien de réticulation LR2, différent du lien de réticulation LR1 , étant obtenu par réticulation dudit polysaccharide avec au moins un agent réticulant comprenant au moins deux groupements fonctionnels Z, identiques ou différents, choisis parmi les groupements isocyanate, amino, époxyde, carboxyle, N-succinimidyloxycarbonyle, N-sulfosuccinimidyloxycarbonyle, halogénocarbonyle, isothiocyanate, vinyle, formyle, hydroxyle, sulfhydryle, hydrazino, acylhydrazino, aminoxy, carbodiimide, et un résidu d’anhydride d’acide, ledit hydrogel présentant un degré de modification par ledit au moins un agent réticulant de 0,05 à 10,0%, notamment de 0,05 à 5,0%, préférentiellement de 0,1 à 1 ,0%.

La présente invention a également pour objet une composition comprenant un hydrogel selon l’invention, ainsi que les applications thérapeutiques, cosmétiques et esthétiques des hydrogels selon l’invention. DEFINITIONS

Un « gel » selon la présente invention est un réseau de polymères qui est dilaté dans tout son volume par un fluide. Cela signifie qu'un gel est formé de deux milieux l’un « solide » et l’autre « liquide » dispersés l'un dans l'autre. Le milieu dit "solide" est constitué des longues molécules polymères connectées entre elles par des liaisons faibles (par exemple Hydrogène) ou covalentes (Réticulation) et le milieu liquide est constitué d’un solvant.

Lorsque le milieu liquide servant de solvant est majoritairement de l'eau (par exemple au moins 90%, en particulier au moins 95%, notamment au moins 99% en poids), le gel est dénommé « hydrogel ». De manière préférée, le milieu liquide comprend, notamment consiste en, une solution tampon, permettant avantageusement un pH du milieu liquide compris entre 6,8 et 7,8, notamment un tampon phosphate salin.

Un gel selon la présente invention correspond de préférence à un produit qui possède un angle de phase δ inférieur ou égal à 45° à 1 Hz pour une déformation de 0,1 % ou une pression de 1 Pa, avantageusement un angle de phase δ compris entre 2° et 45° . Avantageusement certains gels présentent un angle de phase δ compris entre 20° et 45° .

Préférentiellement, un gel selon la présente invention, acceptable pour les applications thérapeutiques, cosmétiques et/ou esthétiques visées par la présente invention, possède un stress au cross-over (ou contrainte au croisement des modules G’ et G”) supérieur ou égal à 50 Pa, préférentiellement entre 50 et 5000 Pa, et encore préférentiellement entre 100 et 1000 Pa et un module élastique G’ supérieur ou égal à 20 Pa, notamment de 20 Pa à 2000 Pa, préférentiellement de 100 Pa à 2000 Pa, encore préférentiellement de 100 Pa à 1000 Pa.

Préférentiellement, un gel selon la présente invention, acceptable pour les applications thérapeutiques, cosmétiques et/ou esthétiques visées par la présente invention, possède une cohésivité de 1 N à 30 N, la cohésivité étant préférentiellement de 2 N à 15 N pour des applications superficielles, et préférentiellement de 5 N à 20 N pour des applications profondes. Cette cohésivité est mesurée par compression mécanique à l’aide d’un rhéomètre. Plus un gel est cohésif, i.e. plus sa valeur de cohésivité est élevée, plus il est capable de résister à des contraintes, telles que celles qu’il peut rencontrer après son administration chez un sujet.

Selon la présente invention une application superficielle se réfère à l’administration d’une composition dans les couches supérieures de la peau, i.e., dans ou sur la peau, par exemple par mésothérapie et par exemple pour réduire les rides superficielles et/ou pour améliorer la qualité de la peau (comme son éclat, sa densité ou sa structure) et/ou pour rajeunir la peau.

Selon la présente invention une application profonde se réfère à l’administration d’une composition dans les couches les plus profondes de la peau et/ou sous la peau (i.e., au-dessus du périoste), par exemple pour augmenter le volume des tissus mous, comme pour combler les rides profondes et/ou les régions partiellement atrophiées du visage et/ou du corps.

À noter que certaines compositions peuvent être polyvalentes, i.e., être utilisées à la fois pour une application profonde et pour une application dans le derme entre les couches les plus profondes et les plus superficielles de la peau, par exemple pour réduire les rides moyennes à profondes.

Un produit « injectable » selon la présente invention correspond à un gel qui peut s’écouler et être injecté manuellement au moyen d’une seringue munie d'une aiguille de diamètre compris entre 0,1 et 0,5 mm, par exemple d’une aiguille hypodermique de 30 G, 27 G, 26 G, 25 G). Préférentiellement, un « gel injectable » est un gel présentant une force d’extrusion moyenne inférieure ou égale à 25N, de préférence de 5 à 25 N, de préférence de 8 à 15 N, lors d’une mesure avec un dynamomètre, à une vitesse fixe d’environ 12,5 mm/min, dans des seringues de diamètre externe supérieur ou égal à 6,3 mm, avec une aiguille de diamètre externe inférieur ou égal à 0,4 mm (27 G) et de longueur ½ ”, à température ambiante.

Selon la présente invention, le caractère « filant » d’un produit peut être déterminé à l’aide d’un texturomètre, d’une analyse sensorielle effectuée par un panel, ou encore de mesures rhéologiques et mécaniques incluant notamment la mesure de l’angle de phase (ô) ou des tests de traction. Notamment, ce caractère peut être mesuré comme décrit dans la partie exemple ou comme décrit par P. Micheels et al. (Micheels et al., Comparison of two swiss-designed hyaluronic acid gels : six-month clinical follow-up, Journal of Drug in Dermatology, 2017, 16:154-161, « Resistance to stretching »).

Selon la présente invention, la stérilisation d’un hydrogel ou d’une composition peut être réalisée par chauffage, notamment à l’autoclave (chaleur humide). La stérilisation est avantageusement effectuée en augmentant la température du milieu de stérilisation jusqu’à une température dite « température au plateau », qui est maintenue pendant une durée déterminée dite « durée au plateau ». Selon la présente invention, la valeur stérilisatrice FO correspond au temps nécessaire, en minutes, à 121 °C, pour inactiver 90% de la population de microorganismes présente dans le produit à stériliser.

Par « monosaccharide », encore appelé « ose », on entend, au sens de la présente invention, un monosaccharide non modifié ou modifié.

Un « monosaccharide non modifié » selon l’invention est un composé de formule H-(CHOH) _x -CO-(CHOH) _y -H avec x et y représentant, indépendamment l’un de l’autre, un nombre entier allant de 0 à 5 à la condition que 2 < x+y < 5, le monosaccharide pouvant se trouver sous une forme linéaire représentée par la formule susmentionnée ou pouvant se trouver sous une forme cyclisée par réaction de la fonction CO (aldéhyde ou cétone) avec l’un des groupes OH pour former un groupe hémiacétal ou hémicétal. De préférence, le monosaccharide est sous forme cyclisée. Il existe deux types d’ose : les aldoses qui portent une fonction aldéhyde (quand x ou y vaut 0) et les cétoses qui portent une fonction cétone (quand ni x, ni y vaut 0). Les monosaccharides sont classés par nombre de carbones. Par exemples les monosaccharides à 6 carbones (x+y=5) sont les hexoses de formule C ₆ H ₁₂ O ₆ et peuvent être l’allose, l’altrose, le glucose, le mannose, le gulose, l’idose, le galactose ou le talose. Les monosaccharides à 5 carbones (x+y=4) sont les pentoses de formule C ₅ H ₁₀ O ₅ et peuvent être le ribose, l’arabinose, le xylose, ou le lyxose. De préférence, le monosaccharide est un hexose, c’est-à-dire que x+y = 5. Un monosaccharide comprend en outre x+y carbones asymétriques et donc 2 ^{(x+y-1 )} paires d’énantiomères. Chaque paire d’énantiomères est désignée par un nom différent et les énantiomères d’une même paire sont qualifiés respectivement d’énantiomères D et L.

Un « monosaccharide modifié » selon l’invention est un monosaccharide non modifié tel que défini ci-dessus dont, par exemple :

- un ou plusieurs des groupes fonctionnels OH ont été remplacés par un autre groupe fonctionnel, par exemple :

(i) un groupe OR avec R représentant un groupe (C ₁ -C ₆ )alkyle tel que méthyle ou éthyle ; hydroxy-(C ₁ -C ₆ )alkyle tel qu’hydroxyéthyle (-CH ₂ CH ₂ OH) ou hydroxypropyle (-CH ₂ -CH(OH)-CH ₃ ) ; carboxy- (C ₁ -C ₆ )alkyle tel que carboxyméthyle (-CH ₂ COOH) ; ou CO-(C ₁ -C ₆ )alkyle tel qu’acétyle ; et/ou

(ii) un groupe NR’R” avec R’ et R” représentant, indépendamment l’un de l’autre, H, (C ₁ -C ₆ )alkyle ou CO-(C ₁ -C ₆ )alkyle tel qu’acétyle ; et/ou

(iii) un groupe OSO ₃ H ; et/ou - la ou les fonctions CH ₂ OH terminales ont été remplacées par un groupe COOH ou CHO ;

- une liaison -CH(OH)-CH(OH)- est oxydée pour donner deux groupes -CHO (aldéhyde) terminaux en lieu et place de cette liaison ; et/ou

- une fonction CH ₂ OH terminale a été condensée avec un groupe fonctionnel OH pour former une chaîne -O-CH ₂ -.

Un « polysaccharide » est, au sens de la présente invention, un polymère composé de monosaccharides (préférentiellement de la série D) joints entre eux par des liaisons glycosidiques.

Par « unité de répétition » d’un polysaccharide, on entend, au sens de la présente invention, un motif structurel constitué d’un ou plusieurs (généralement 1 ou 2) monosaccharides dont la répétition produit la chaîne de polysaccharide complète.

Une partie ou l’ensemble des monosaccharides peut être sous une forme modifiée. Les monosaccharides, lorsqu’ils sont modifiés, peuvent être sous différentes formes modifiées.

Des exemples de polysaccharides sont la pectine et les substances pectiques, la cellulose et ses dérivés, le chitosane, l’agarose ou encore les glycosaminoglycanes tels que l’acide hyaluronique, l’héparosan et le chondroïtine sulfate.

Un polysaccharide peut être sous la forme de sel, en particulier sous forme de sel physiologiquement acceptable tel que le sel de sodium, le sel de potassium, le sel de zinc, le sel de calcium, le sel de magnésium, le sel d’argent et les mélanges de ceux-ci, plus particulièrement sous forme de sel de sodium ou de potassium.

Les « substances pectiques », incluant la « pectine », sont des polysaccharides composés par un squelette d’acide D-galacturonique sous forme acide possiblement estérifié par du méthanol, et du L-rhamnose capable de former des ramifications avec d’autres oses.

La « cellulose » est un polysaccharide composé d'une chaîne linéaire de molécules de D-glucose. Les dérivés de cellulose comprennent la méthylcellulose, l’éthylcellulose, l’éthylméthylcellulose, l’hydroxypropylméthylcellulose (HPMC), l’hydroxyéthylcellulose (HEC), l’hydroxypropylcellulose (HPC), carboxyméthylcellulose (CMC).

Le « chitosane » ou « chitosan », et la « chitine » sont chacun un polysaccharide composé d’unités de répétition D-glucosamine liées entre elles en β-(1 ,4) dont une partie est N-acétylée. Le chitosane a plus particulièrement un degré d’acétylation inférieur à 50% tandis que la chitine a plus particulièrement un degré d’acétylation supérieur à 50%.

L’« agarose » est un polysaccharide comprenant comme unité de répétition un disaccharide de D-galactose et de 3,6-anhydro-L-galactopyranose.

Les « glycosaminoglycanes » sont des polysaccharides linéaires composés d’unités de répétition de disaccharides, lesdits disaccharides contenant une hexosamine (glucosamine (GlcN) ou galactosamine (GalN)) et un autre ose (acide glucuronique (GlcA), acide iduronique (IdoA) ou galactose (Gal)). L’hexosamine et l’autre ose peuvent être éventuellement sulfatés et/ou acétylés. Le glycosaminoglycane peut être notamment de l’acide hyaluronique, de l’héparosane, ou une chondroïtine sulfate.

L’« héparosane » ou « héparosan » est un glycosaminoglycane dont l’unité de répétition est un disaccharide composé d’acide glucuronique ((GlcA) relié par une liaison α-(1 ,4) à une N-acétyl glucosamine (GlcNAc). Chaque unité de répétition disaccharidique est reliée à la suivante par une liaison β-(1 ,4).

Le « chondroïtine sulfate » ou « sulfate de chondroïtine » est un glycosaminoglycane dont l’unité de répétition est un disaccharide composé d'acide glucuronique lié en β-(1 ,3) au N-acétyl galactosamine-6-sulfate. Chaque unité de répétition disaccharidique est reliée à la suivante par une liaison β-(1 ,4).

L’« acide hyaluronique » est un glycosaminoglycane dont l’unité de répétition est un disaccharide composé d'acide D-glucuronique et de N-acétyl-D-glucosamine, liés entre eux par des liaisons glycosidiques alternées β-(1 ,4) et β-(1 ,3). Lorsque l’acide hyaluronique est sous forme d’un sel, on parle également de « hyaluronate » ou de « hyaluronan ». Dans le cadre de la présente invention, l’acide hyaluronique peut avoir une masse moléculaire moyenne en poids comprise entre 0,05 et 10 MDa, préférentiellement entre 0,5 et 5 MDa, par exemple entre 0,5 et 4 MDa ou entre 0,5 et 2 MDa. L’acide hyaluronique peut être sous forme de sel, en particulier sous forme de sel physiologiquement acceptable tels que le sel de sodium, le sel de potassium, le sel de zinc, le sel de calcium, le sel de magnésium, le sel d’argent, le sel de calcium et les mélanges de ceux-ci. Plus particulièrement, l’acide hyaluronique est sous sa forme acide ou sel de sodium (NaHA).

Dans le cadre de la présente invention, une réaction de réticulation d’un polysaccharide est une réaction permettant la formation de liaisons, liens de réticulation, covalentes dans ou entre les chaines de polysaccharides.

Dans le cadre de la présente invention, un « agent réticulant » ou « agent de réticulation » est un composé comprenant au moins deux groupements fonctionnels capables de se lier de manière covalente avec des groupements fonctionnels présents sur le polysaccharide, tels que des groupes OH, CHO, NH ₂ ou COOH, et d’induire ainsi une réticulation entre les chaines de polysaccharides. En particulier, un agent réticulant selon l’invention comprendra au moins deux, de préférence de 2 à 8, notamment 2, groupements fonctionnels choisis de préférence parmi les groupements isocyanate (-N=C=O), amino (-NH ₂ ), époxyde, carboxyle (-COOH), N-succinimidyloxycarbonyle, N-sulfosuccinimidyloxycarbonyle, halogénocarbonyle, isothiocyanate (-N=C=S), vinyle (-CH=CH ₂ ), formyle (-CH=O), hydroxyle (-OH), sulfhydryle (-SH), hydrazino (-NH-NH ₂ ), acylhydrazino (-CO-NH-NH ₂ ), aminoxy (-O-NH ₂ ), carbodiimide, et un résidu d’anhydride d’acide.

Un groupement « époxyde » est un résidu d’oxyde d’éthylène lié au reste de la molécule par l’un de ses atomes de carbone.

Un groupement « N-succinimidyloxycarbonyle » est un groupe de formule Chem. GR1 ci-dessous :

Un groupement « N-sulfosuccinimidyloxycarbonyle» est un groupe de formule Chem.

GR2 ci-dessous :

Un groupement « halogénocarbonyle » est un groupement de formule -CO-Hal avec Hal représentant un halogène, tel que Cl ou Br.

Un groupement « carbodiimide » est un groupe comprenant un motif -N=C=N-, et plus particulièrement un groupement de formule -N=C=N-R ^a avec R ^a représentant un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 20 atomes de carbone, de préférence un groupe (C1 -C6)alkyle, dont un ou plusieurs atomes de carbone sont éventuellement remplacés par un hétéroatome choisi parmi O, S et N, notamment N.

Un « résidu d’anhydride d’acide » est un groupe comprenant un motif -C(O)-O-C(O)-, et plus particulièrement un groupement cyclique monovalent comprenant le motif- C(O)-O-C(O)-, tel qu’un groupe monocyclique monovalent hydrocarboné saturé comprenant 5 à 10, notamment 5 ou 6, atomes de carbone dont trois atomes de carbone successifs sont remplacés par C(O)-O-C(O) et éventuellement dont un ou plusieurs, notamment un, atomes de carbone additionnels, de préférence non consécutifs aux trois atomes de carbone substitués par CO-O-CO, sont chacun remplacés par un hétéroatome tel que N, O ou S, notamment N. Le résidu d’anhydride d’acide peut répondre en particulier à la formule Chem. GR3 suivante :

Le résidu d’anhydride d’acide peut aussi être choisi parmi un résidu d’anhydride maléique ou un résidu d’anhydride succinique.

En particulier, le groupement isocyanate peut réagir avec un groupe OH ou NH ₂ du polysaccharide pour former une fonction carbamate ou urée, le groupement amino peut réagir avec un groupe COOH du polysaccharide pour former une fonction amide, le groupement époxyde peut réagir avec un groupe OH ou COOH du polysaccharide pour former une fonction éther ou ester, le groupement carboxyle peut réagir avec un groupe OH ou NH ₂ du polysaccharide pour former une fonction ester ou amide, les groupements N-succinimidyloxycarbonyle et N-sulfosuccinimidyloxycarbonyle peut réagir avec un groupe OH ou NH ₂ du polysaccharide pour former une fonction ester ou amide, le groupement halogénocarbonyle peut réagir avec un groupe OH ou NH ₂ du polysaccharide pour former une fonction ester ou amide, le groupement isothiocyanate peut réagir avec un groupe OH ou NH ₂ du polysaccharide pour former une fonction thiocarbamate ou thiourée, le groupement vinyle peut réagir avec un groupe OH du polysaccharide pour former une fonction éther, le groupement formyle peut réagir avec un groupe OH ou NH ₂ pour former une fonction hémiacétal ou hémiaminal, un groupement hydroxyle peut réagir avec un groupe COOH du polysaccharide pour former une fonction ester, le groupement sulfhydryle peut réagir avec un groupe COOH du polysaccharide pour former une fonction thioester, le groupement hydrazino (-NH-NH ₂ ) peut réagir avec un groupe CHO pour former une fonction hydrazone, le groupement acylhydrazino peut réagir avec un groupe CHO du polysaccharide pour former une fonction hydrazone carbonylée =NNHC(O)-, le groupement aminoxy peut réagir avec un groupe CHO du polysaccharide pour former une fonction oxime =NO-, le groupement carbodiimide peut réagir avec un groupe COOH du polysaccharide pour donner une fonction CO-NR ^a -CO-NH, et un résidu d’anhydride d’acide peut réagir avec un groupe OH ou NH ₂ du polysaccharide pour former une fonction ester ou amide.

On appelle « groupement espaceur » selon la présente invention, un fragment comprenant au moins un atome. Préférentiellement, le groupement espaceur contient au moins un atome de carbone. Le groupe espaceur vise à lier ensemble deux groupements chimiques au sein d’une même molécule, ici notamment la molécule de formule Chem. I. Avantageusement, le groupement espaceur permettra également d’éviter une gêne stérique entre le groupement silylé et le groupement T de la molécule de formule Chem. I, tout en assurant une liaison stable entre ces deux groupements.

Le terme « halogène », tel qu’utilisé dans la description de la présente invention, désigne les atomes de fluor, chlore, brome et iode. De manière avantageuse, il s’agira du fluor, du brome ou du chlore.

Dans la présente invention, les termes « chaîne hydrocarbonée aliphatique » ou « groupe hydrocarboné aliphatique » désignent des groupes hydrocarbonés linéaires, ramifiés et/ou cycliques, saturés ou insaturés mais non aromatiques, avantageusement comprenant 1 à 50, notamment 1 à 20, par exemple 1 à 12 ou 1 à 6 atomes de carbone. Il s’agira en particulier de groupes alkyles.

Dans la présente invention, il est compris par « chaîne hydrocarbonée aliphatique ramifiée » une chaîne hydrocarbonée aliphatique principale comprenant également au moins une chaîne hydrocarbonée aliphatique secondaire.

Dans la présente invention, il est compris par « chaîne hydrocarbonée aliphatique étoilée » une chaîne hydrocarbonée aliphatique ramifiée comprenant plusieurs chaînes hydrocarbonées aliphatiques secondaires partant toutes d’un seul point de ramification.

Dans la présente invention, il est compris par « alkyle en C1 -Cx », « (C1 -Cx)alkyle » ou encore « alkyle comportant de 1 à x atomes de carbone », un groupe hydrocarboné monovalent saturé, linéaire ou ramifié, comportant de 1 à x atomes de carbone, avec x un nombre entier, comme par exemple un groupement méthyle, éthyle, isopropyle, tertio-butyle, n-pentyle, cyclopropyle, cyclohexyle, etc.

Par groupement « (C1 -Cx)alkylène », on entend un groupement hydrocarboné divalent saturé, linéaire ou ramifié, comportant de 1 à x atomes de carbone, avec x un nombre entier, comme par exemple un groupement methane-1 ,1 -diyle, ethane-1 ,1 -diyle, ethane-1 ,2-diyle, propane-1 ,3-diyle, butane-1 ,4-diyle, butane-1 ,3-diyle, butane-1 , 2- diyle, pentane-1 ,5-diyle, hexane-1 ,6-diyle, hexane-1 ,5-diyle, heptane-1 ,7-diyle, octane-1 ,8-diyle, nonane-1 ,9-diyle, decane-1 , 10-diyle, etc. Il s’agit notamment d’un groupe methane-1 ,1 -diyle ou propane-1 ,3-diyle.

Par groupement « hydroxy-(C1 -Cx)alkyle », on entend un groupement (C1 -Cx)alkyle tel que défini ci-dessus substitué par un groupe hydroxyle (OH) comme par exemple un hydroxyéthyle (-CH ₂ CH ₂ OH) ou un hydroxypropyle (par ex. -CH ₂ -CH(OH)-CH3).

Par groupement « carboxy-(C1 -Cx)alkyle », on entend un groupement (C1 -Cx)alkyle tel que défini ci-dessus substitué par un groupe carboxyle (COOH) comme par exemple un carboxyméthyle (-CH ₂ COOH).

Par groupement « aryle », on entend un groupement hydrocarboné aromatique monovalent, comportant de préférence de 6 à 10 atomes de carbone, comprenant un ou plusieurs cycles, comme par exemple un groupement phényle, ou naphtyle.

Par groupement « arylène », on entend un groupement hydrocarboné aromatique divalent, comportant de préférence de 6 à 10 atomes de carbone, comprenant un ou plusieurs cycles, comme un groupe phénylène.

Le terme « aryle-(C1 -Cx)alkyle », tel qu’utilisé dans la description de la présente invention, désigne un groupe aryle tel que défini ci-dessus, lié au reste de la molécule par l’intermédiaire d’une chaîne (C1 -Cx)alkyle telle que définie ci-dessus avec x un nombre entier. À titre d’exemple, on peut citer le groupe benzyle ou encore phényléthyle.

Un « groupe polyvalent » selon la présente invention est un groupe pouvant former plusieurs liaisons covalentes avec d’autres groupes d’un même composé. Les liaisons aux autres groupes peuvent être formées à partir d’un même atome du groupe polyvalent ou de différents atomes du groupe polyvalent, et de préférence à partir de différents atomes du groupe polyvalent. En particulier, le groupe polyvalent est un groupe divalent et peut donc former deux liaisons covalentes avec deux autres groupements d’un même composé ou de deux composés différents. Le nombre de liaisons covalentes pouvant être formées désigne la « valence » du groupe polyvalent. L’expression « taux de modification molaire » désigne le rapport molaire de la quantité d’agent modifiant (e.g. agent réticulant ou molécule de formule Chem. I en tant qu’agent de fonctionnalisation) par rapport à la quantité d’unité de répétition du polysaccharide utilisé dans le milieu de modification.

Plus spécifiquement, l’expression « taux de réticulation molaire » (%) désigne le rapport molaire de la quantité d’agent réticulant par rapport à la quantité d’unité de répétition du polysaccharide utilisé dans le milieu de réticulation, c’est-à-dire le milieu de l’étape b), exprimé pour 100 moles d’ unités de répétition du polysaccharide dans le milieu de réticulation ; l’expression « taux de fonctionnalisation molaire » (%) désigne le rapport molaire de la quantité d’agent de fonctionnalisation (e.g., molécule de formule Chem. I) par rapport à la quantité d’unité de répétition du polysaccharide utilisé dans le milieu de fonctionnalisation, c’est-à-dire le milieu de l’étape c), exprimé pour 100 moles d’unités de répétition du polysaccharide dans le milieu de fonctionnalisation.

L’expression « taux de modification massique » désigne le rapport massique de la masse d’agent modifiant (e.g., agent réticulant ou molécule de formule Chem. I en tant qu’agent de fonctionnalisation) par rapport à la somme de la masse d’agent modifiant et de la masse de polysaccharide dans le milieu de modification.

Plus spécifiquement, l’expression « taux de réticulation massique » (%) désigne le rapport massique de la masse d’agent réticulant par rapport à la somme de la masse d’agent réticulant et de la masse de polysaccharide dans le milieu de réticulation, c’est-à-dire dans le milieu de l’étape b), exprimé en pourcentages ; l’expression « taux de fonctionnalisation massique » (%) désigne le rapport massique de la masse d’agent de fonctionnalisation (e.g., molécule de formule Chem. I) par rapport à la somme de la masse d’agent de fonctionnalisation et de la masse de polysaccharide dans le milieu de fonctionnalisation, c’est-à-dire dans le milieu de l’étape c), exprimé en pourcentages.

Le « degré de modification » (MOD en abrégé, %) correspond à la quantité molaire d’agent modifiant, tel que d’agent réticulant ou d’agent de fonctionnalisation (e.g., molécule de formule Chem. I), liée au polysaccharide, par une ou plusieurs de ses extrémités, exprimée pour 100 moles d’unités de répétition du polysaccharide. Il peut être déterminé par des méthodes connues de l’homme du métier telle que la spectroscopie de Résonance Magnétique Nucléaire (RMN). Par exemple, un MOD de 1% signifie qu’il y a une molécule d’agent modifiant pour 100 moles d’unités de répétition de polysaccharide.

Dans le cadre de la présente invention, la « réaction sol-gel » consiste à former des liaisons Si-O-Si à partir de groupements Si-OR avec R représentant un atome d’hydrogène, un groupement aryle ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone. Cette réaction se déroule comme suit :

(i) si R n’est pas un atome d’hydrogène, une étape d’hydrolyse d’au moins une partie des groupements Si-OR pour donner des groupements Si-OH ; puis

(ii) une étape de condensation des groupements Si-OH deux à deux ou d’un groupement Si-OH avec un groupement Si-OR pour former des liaisons Si-O-Si. Dans la présente invention, les groupements Si-OR sont portés en particulier par des polysaccharides fonctionnalisés avec au moins une molécule de formule Chem. I lors de l’étape c).

Par « physiologiquement acceptable », on entend désigner ce qui est généralement sûr, non toxique et ni biologiquement ni autrement non souhaitable et qui est acceptable pour une utilisation cosmétique ou esthétique (c’est-à-dire non thérapeutique) ou thérapeutique humaine ou vétérinaire, notamment pour une utilisation par injection dans le corps humain ou animal ou pour une application topique sur la peau.

Les « sels » utilisés dans le cadre de la présente invention sont de préférence physiologiquement acceptables.

Les sels physiologiquement acceptables comprennent notamment :

(1 ) les sels d’addition d’acide pharmaceutiquement acceptable formés avec des acides inorganiques pharmaceutiquement acceptables tels que l’acide chlorhydrique, l’acide bromhydrique, l’acide sulfurique, l’acide nitrique, l’acide phosphorique et similaires ; ou formés avec des acides organiques pharmaceutiquement acceptables tels que l’acide formique, l’acide acétique, l’acide benzènesulfonique, l’acide benzoïque, l’acide camphresulfonique, l’acide citrique, l’acide éthane-sulfonique, l’acide fumarique, l’acide glucoheptonique, l’acide gluconique, l’acide glutamique, l’acide glycolique, l’acide hydroxynaphtoïque, l'acide 2-hydroxyéthanesulfonique, l’acide lactique, l’acide maléique, l’acide malique, l’acide mandélique, l’acide méthanesulfonique, l’acide muconique, l’acide 2-naphtalènesulfonique, l’acide propionique, l’acide salicylique, l’acide succinique, l’acide dibenzoyl-L-tartrique, l’acide tartrique, l’acide p-toluènesulfonique, l’acide triméthylacétique, l’acide trifluoroacétique et similaires, et

2) les sels d’addition de base pharmaceutiquement acceptable formés lorsqu’un proton acide présent dans le composé parent est soit remplacé par un ion métallique, par exemple un ion de métal alcalin (e.g., Na, K), un ion de métal alcalino-terreux (e.g., Ca, Mg), un ion de zinc, un ion d’argent ou un ion d'aluminium ; soit coordonné avec une base organique pharmaceutiquement acceptable telle que la diethanolamine, l’éthanolamine, N-méthylglucamine, la triethanolamine, la trométhamine et similaires ; ou avec une base inorganique pharmaceutiquement acceptable telle que l’hydroxyde d’aluminium, l’hydroxyde de calcium, l’hydroxyde de potassium, le carbonate de sodium, l’hydroxyde de sodium et similaires. DESCRIPTION DETAILLEE

PROCEDE

La présente invention a pour objet un procédé de préparation d’un hydrogel décrit ci-dessus, comprenant les étapes a), b), c) et d). Ce procédé est avantageusement réalisé en milieu aqueux.

En particulier, l’hydrogel est un hydrogel injectable.

Etape a)

L’étape a) du procédé selon l’invention comprend la fourniture d’au moins un polysaccharide ou un sel de celui-ci.

De préférence, le polysaccharide est choisi parmi la pectine et les substances pectiques ; le chitosan ; la cellulose et ses dérivés ; l’agarose ; les glycosaminoglycanes tels que l’acide hyaluronique, l’héparosan et la chondroïtine sulfate ; et leurs mélanges.

En particulier, les dérivés de la cellulose sont choisis parmi la méthylcellulose, l’éthylcellulose, l’éthylméthylcellulose, l’hydroxypropylcellulose (HPC), l’hydroxypropylméthylcellulose (HPMC), l’hydroxyéthylcellulose (HEC), et la carboxyméthylcellulose (CMC).

Avantageusement, le polysaccharide est un glycosaminoglycane, préférentiellement l’acide hyaluronique ou un sel de celui-ci, plus préférentiellement l’acide hyaluronique ou un de ses sels physiologiquement acceptables tels que le sel de sodium, le sel de potassium, le sel de zinc, le sel d’argent et les mélanges de ceux-ci, encore plus préférentiellement l’acide hyaluronique ou son sel de sodium.

De préférence, le polysaccharide a une masse moléculaire moyenne en poids Mw comprise entre 0,05 et 10 MDa, préférentiellement entre 0,5 et 5 MDa, par exemple entre 0,5 et 4 MDa ou entre 0,5 et 2 MDa.

En particulier, dans l’étape a) le polysaccharide est fourni sous forme hydratée, totalement ou partiellement, ou sous forme sèche, telle que sous forme de poudre ou de fibres. Plus particulièrement, dans l’étape a), le polysaccharide est fourni sous forme sèche telle que sous forme de poudre ou de fibres.

Lorsque le polysaccharide est fourni sous forme hydratée, il se trouve sous forme d’un gel non réticulé ou d’une solution.

En particulier, lorsque le polysaccharide est sous forme hydratée, il s’agit d’un gel non réticulé aqueux ou d’une solution aqueuse. Plus particulièrement, le polysaccharide est mélangé à de l’eau, éventuellement additionnée d’un tampon phosphate ou d’un tampon phosphate supplémenté, c’est-à-dire comprenant possiblement des composants additionnels tels que définis à l’étape f), ou un milieu alcalin adapté pour l’étape b).

Etape b)

L’étape b) du procédé selon l’invention comprend la réticulation du polysaccharide fourni à l’étape a) en présence de 0,05 à 10% en moles d’au moins un agent réticulant pour 1 mole d’unité de répétition du polysaccharide, ledit agent réticulant comprenant au moins deux groupements fonctionnels Z tels que décrits ci-dessous.

Lorsque le polysaccharide est un glycosaminoglycane tel qu’un acide hyaluronique, l’unité de répétition est donc une unité disaccharidique.

Les groupements fonctionnels Z, identiques ou différents, sont choisis parmi les groupements isocyanate, amino, époxyde, carboxyle, N-succinimidyloxycarbonyle, N-sulfosuccinimidyloxycarbonyle, halogénocarbonyle, isothiocyanate, vinyle, formyle, hydroxyle, sulfhydryle, hydrazino, acylhydrazino, aminoxy, carbodiimide, et un résidu d’anhydride d’acide.

Avantageusement, les groupements fonctionnels Z sont identiques.

De préférence, les groupements fonctionnels Z sont identiques et représentent un groupement époxyde ou vinyle, plus préférentiellement époxyde.

Selon un autre mode de réalisation avantageux, les groupements fonctionnels Z sont identiques et choisis parmi les groupements amino, vinyle, formyle, et carbodiimide, de préférence sont des groupes amino.

En particulier, l’agent réticulant est choisi parmi le diisocyanate d’hexaméthylène, le 4,4'-diisocyanate de diphénylméthylène, le PEGZOK-isocyanate à 4 bras, la spermine (ou 1 ,12-diamino-5,9-diazadodécane), la spermidine (ou 1 ,8-diamino-5-azaoctane), la cadavérine (ou 1 ,5-diaminopentane), la putrescine (ou 1 ,4-diaminobutane), la poly(éthylène glycol) diamine, l’éthylènediamine, le 1 ,4-butanediol diglycidyl éther (BDDE), le 1 ,2,7,8-diépoxy-octane, le poly(éthylène glycol) diglycidyl éther (PEGDGE), le 1 ,2-bis(2,3-époxypropoxy)éthane (EGDGE), le 1 ,3-bis(3- glycidyloxypropyl)tétraméthyldisiloxane, le poly(diméthylsiloxane) terminé à chaque extrémité par un diglycidyl éther (numéro CAS : 130167-23-6), le diacide de poly(éthylène glycol), le subérate de disuccinimidyle, le bis(sulfosuccinimidyl)subérate, le chlorure de sébacoyle, le 1 ,4-butane diisothiocyanate, la divinylsulfone (DVS), le glutaraldéhyde, le polyéthylène glycol, le 1 ,5-pentanedithiol, l’acide adipique dihydrazide, le bis-aminooxy-poly(éthylène glycol), le dianhydride de d’acide diéthylènetriaminepentaacétique, et leurs mélanges.

Lorsque les groupements fonctionnels Z sont des groupements époxyde, l’agent réticulant est de préférence choisi parmi le 1 ,4-butanediol diglycidyl éther (BDDE), le 1 ,2,7,8-diépoxy-octane, le poly(éthylène glycol) diglycidyl éther (PEGDGE), le 1 ,2- bis(2,3-époxypropoxy)éthane (EGDGE), le 1 ,3-bis(3- glycidyloxypropyl)tétraméthyldisiloxane, le poly(diméthylsiloxane) terminé à chaque extrémité par un diglycidyl éther (numéro CAS : 130167-23-6), des billes d’hydroxyapatite modifiées pour porter des groupements époxy et leurs mélanges.

Plus préférentiellement, l’agent réticulant est choisi parmi le 1 ,4-butanediol diglycidyl éther (BDDE), le 1 ,2,7,8-diépoxy-octane, le poly(ethylene glycol) diglycidyl ether (PEGDGE), le 1 ,2-bis(2,3-époxypropoxy)éthane (EGDGE), et leurs mélanges.

Lorsque les groupements fonctionnels Z sont des groupements amino, l’agent réticulant est de préférence une polyamine choisie parmi la spermine (ou 1 , 12-diamino-5,9-diazadodécane), la spermidine (ou 1 ,8-diamino-5-azaoctane), la cadavérine (ou 1 ,5-diaminopentane), la putrescine (ou 1 ,4-diaminobutane), leurs sels ou un mélange de ceux-ci, plus préférentiellement l’agent réticulant est une polyamine choisie parmi la spermine, la spermidine, leurs sels et leurs mélanges.

Lorsque les groupements fonctionnels Z sont des groupements amino, la réaction de réticulation avec le polysaccharide est avantageusement réalisée en présence d’au moins un activateur, et le cas échéant associée à au moins un auxiliaire de couplage. À cet égard, l’activateur peut être sélectionné parmi les carbodiimides solubles dans l’eau tels que le 1 -éthyl-3-(3-diméthylaminopropyl)carbodiimide (EDC), le 1 -éthyl-3- [3-(triméthylamino)propyl]carbodiimide chlorhydrate (ETC), le 1 -cyclohexyl-3-(2- morphilinoéthyl)carbodiimide (CMC), leurs sels et les mélanges de ceux-ci, de préférence est représenté par l’EDC.

En ce qui concerne l’auxiliaire de couplage, lorsqu’il est présent, il peut être sélectionné parmi le N-hydroxy succinimide (NHS), le N-hydroxybenzotriazole (HOBt), le 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1 ,2,3-benzotriazole (HOOBt), le 1 -hydroxy-7- 7azabenzotriazole (HAt) et le N-hydroxysylfosuccinimide (sulfo NHS), et les mélanges de ceux-ci, de préférence est représenté par le HOBt.

L’agent réticulant peut être choisi parmi des billes d’hydroxyapatite modifiées pour porter des groupements époxy, un composé de formule Chem. Il tel que décrit ci-dessous, et leurs mélanges. De préférence, l’agent réticulant est un composé de formule Chem. Il : dans laquelle les groupes Z, identiques ou différents, sont tels que définis ci-dessus, n est un nombre entier supérieur ou égal à 2, notamment allant de 2 à 8, de préférence égal à 2,

Y est un groupe polyvalent hydrocarboné, notamment aliphatique, ayant une valence de n et comportant de 1 à 150 atomes de carbone :

- dans lequel un ou plusieurs (par exemple 1 à 150, ou encore 1 à 50 ou encore 1 à 15 ou encore 1 ou 2) motifs CH ₂ sont éventuellement remplacés par un ou plusieurs motifs divalents choisis parmi les arylènes ; -O- ; -S- ; -S(O)- ; -C(=O)- ; -SO ₂ - ; -N(R ¹ )- ; et

- [SiR ² R ³ O]m-SiR ² R ³ - avec : R ¹ représentant un atome d'hydrogène, un groupement hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone, ou un aryl-(C1 -C6)alkyle ; m un nombre entier compris entre 1 et 20 et les R ² et les R ³ , identiques ou différents, représentant un atome d'hydrogène ; un atome d'halogène ; un groupement -OR ¹¹ avec R ¹¹ représentant un atome d'hydrogène, un groupement aryle ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone ; un aryle ; ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone éventuellement substitué par un ou plusieurs groupes choisis parmi un atome d’halogène, un aryle ou un hydroxyle,

- ledit groupe polyvalent étant non substitué ou substitué par un ou plusieurs groupes monovalents choisis parmi un atome d'halogène, un hydroxyle, et un aryl-(C1 - C6)alkyle, de préférence non substitué.

En particulier n est un nombre entier allant de 2 à 8, de préférence n représente 2, 3 ou 4, encore plus préférentiellement n est égal à 2.

Avantageusement, R ¹ représente un atome d’hydrogène ou un groupement (C1 -C6)alkyle.

En particulier, les R ² et les R ³ , identiques ou différents, représentent un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone, plus particulièrement un groupe (C1 -C6)alkyle.

De préférence, dans la définition de Y, le groupe polyvalent hydrocarboné peut-être un groupe polyvalent hydrocarboné aliphatique ou aromatique, de préférence aliphatique et notamment saturé, ayant une valence de n et comportant de 1 à 150 atomes de carbone, préférentiellement de 1 à 50 atomes de carbone, plus préférentiellement de 1 à 20 atomes de carbone, encore plus préférentiellement de 2 à 20 atomes de carbone.

En particulier, dans la définition de Y, le groupe polyvalent hydrocarboné est un groupe polyvalent hydrocarboné aliphatique, saturé, notamment linéaire.

De préférence, Y est un groupe polyvalent hydrocarboné tel que décrit ci-dessus dans lequel un ou plusieurs motifs CH ₂ sont éventuellement remplacés par un ou plusieurs motifs divalents choisis parmi -O-, -SO ₂ -, -[SiR ² R ³ O]m-SiR ² R ³ - et -NH-, avec R ² , R ³ et m tels que décrits ci-dessus.

En particulier, Y est un groupe polyvalent hydrocarboné tel que décrit ci-dessus, de préférence aliphatique et saturé, et notamment linéaire, ramifié, ou étoilé, et éventuellement dans lequel :

- au moins deux motifs CH ₂ sont remplacés par -O-, particulièrement entre 1 et 50 motifs CH ₂ , plus particulièrement entre 1 et 15 motifs CH ₂ , ou

- au moins un, de préférence un ou deux, motif CH ₂ est remplacé par un motif -NH-, ou

- au moins un, de préférence un, motif CH ₂ est remplacé par un motif -SO ₂ -, ou

- au moins deux, de préférence deux, motifs CH ₂ sont remplacés par -O- et au moins un, de préférence un, motif CH ₂ est remplacé par un motif - [SiR ² R ³ O]m-SiR ² R ³ - avec R ² , R ³ et m tels que décrits ci-dessus.

Plus particulièrement, lorsqu’un ou plusieurs motifs CH ₂ sont remplacés par -O-, le ou les motifs remplacés sont tels que Y comprend un ou plusieurs motifs -CH ₂ -CH ₂ -O-. En particulier, Y comprend de 1 à 50 motifs -CH ₂ -CH ₂ -O-, avantageusement de 2 à 25 motifs -CH ₂ -CH ₂ -O-, plus avantageusement de 2 à 15 motifs -CH ₂ -CH ₂ -O-. Y peut comprendre uniquement des motifs -CH ₂ -CH ₂ -O-.

Plus préférentiellement, Y est un groupe alkyle comprenant 1 à 150, notamment 1 à 50, en particulier 1 à 20, par exemple 1 à 12, notamment 1 à 6 atomes de carbone, de préférence linéaire, dans lequel éventuellement un ou plusieurs motifs CH ₂ sont remplacés par un ou plusieurs motifs divalents choisis parmi choisis parmi -O- et -NH-, plus particulièrement entre 1 et 50, notamment entre 1 et 15, par exemple 1 ou 2, motifs divalents choisis parmi -O- et -NH-.

Selon un premier mode de réalisation, les R ² et les R ³ , identiques ou différents, représentent un groupement -OR ¹¹ avec R ¹¹ tel que décrit ci-dessus. En particulier, R ¹¹ représente un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone, plus particulièrement un groupe (C1 -C6)alkyle.

Selon un second mode de réalisation, les R ² et les R ³ , identiques ou différents, représentent un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone éventuellement substitué (de préférence non substitué) par un ou plusieurs groupes choisis parmi un atome d’halogène, un aryle ou un hydroxyle, plus préférentiellement un groupe (C1 -C6)alkyle non substitué tel qu’un méthyle ou un éthyle.

Avantageusement, l’agent réticulant est un composé de formule Chem. lla suivante : dans laquelle les groupes Z ¹ et Z ² , identiques ou différents, sont choisis parmi les groupements isocyanate, amino, époxyde, carboxyle, N-succinimidyloxycarbonyle, N-sulfosuccinimidyloxycarbonyle, halogénocarbonyle, isothiocyanate, vinyle, formyle, hydroxyle, sulfhydryle, hydrazino, acylhydrazino, aminoxy, carbodiimide, et un résidu d’anhydride d’acide, et Y ¹ représente une chaîne divalente hydrocarbonée, notamment aliphatique, comportant de 1 à 50 atomes de carbone :

- dans laquelle un ou plusieurs (par ex. 1 à 15 ou encore 1 ou 2) motifs CH ₂ sont éventuellement remplacés par un ou plusieurs motifs divalents choisis parmi les arylènes, -O-, -S-, -S(O)-, -C(=O)-, -SO ₂ -, -N(R ¹ )- , et -[SiR ² R ³ O]m-SiR ² R ³ - avec R ¹ représentant un atome d'hydrogène, un groupement hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone, ou un aryl-(C1 -C6)alkyle, m un nombre entier compris entre 2 et 20, et les R ² et les R ³ , identiques ou différents, représentant un atome d'hydrogène ; un atome d'halogène ; un groupement -OR ¹¹ avec R ¹¹ représentant un atome d'hydrogène, un groupement aryle ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone ; un aryle ; ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone éventuellement substitué par un ou plusieurs groupes choisis parmi un atome d’halogène, un aryle ou un hydroxyle,

- ladite chaine étant non substituée ou substituée par un ou plusieurs groupes monovalents choisis parmi un atome d'halogène, un hydroxyle, un aryl-(C1 -C6)alkyle. Les groupes Z ¹ et Z ² ont la même définition que le groupe Z défini ci-dessus. Y ¹ a la même définition que Y défini ci-dessus avec une valence n étant égal à 2. En particulier Y ¹ peut comprendre uniquement des motifs -CH ₂ -CH ₂ -O-, tel que défini précédemment.

De préférence, l’agent réticulant de formule Chem. Il ou Chem. Ila ne comprend pas de motifs -[SiR ² R ³ O]m-SiR ² R ³ -.

La réticulation du polysaccharide fourni à l’étape a) a lieu en présence de 0,05 à 10% en moles, notamment de 0,05 à 7%, plus avantageusement de 0,05 à 5%, encore plus avantageusement de 0,1 à 2% et notamment de 0,1 à 1 %, d’au moins un agent réticulant pour 1 mole d’unité de répétition du polysaccharide.

La concentration massique en polysaccharide dans le milieu de réticulation est comprise avantageusement entre 50 et 300 mg/g de milieu de réticulation, de préférence entre 100 et 200 mg/g.

En particulier, la réticulation a lieu en milieu réactionnel aqueux. Toutefois, si nécessaire, un solvant organique tel qu’un alcool, en particulier l’éthanol, ou le DMSO peut être utilisé pour solubiliser l’agent réticulant, par exemple lorsqu’il s’agit du poly(diméthylsiloxane) terminé à chaque extrémité par un diglycidyl éther (numéro CAS : 130167-23-6) avant ajout au milieu réactionnel aqueux.

Avantageusement, et notamment lorsque les groupes Z, tels que Z ¹ ou Z ² , représentent un groupe époxyde ou un groupe vinyle, la réticulation a lieu à un pH supérieur ou égal à 10, plus avantageusement supérieur ou égal à 12.

Pour cela, le milieu réactionnel comprend de préférence une base de Bronsted, plus préférentiellement un sel d’hydroxyde, tel qu’un hydroxyde de sodium ou de potassium.

De préférence, la réticulation a lieu entre 4°C et 60° C, plus préférentiellement entre 10°C et 50°C.

En particulier, la réticulation a lieu entre 1 heure et 2 semaines, plus particulièrement entre 3 heures et 1 semaine.

En présence de plusieurs agents réticulants, les agents réticulants peuvent être ajoutés de manière simultanée ou séparée dans le temps. L’étape b) peut ainsi comprendre des étapes de réticulation répétées. Le taux de réticulation total en agents réticulant varie de 0,05 à 10% molaire tel que défini précédemment.

Cette étape permet de réticuler les chaines polysaccharidiques entre elles. Les groupes fonctionnels de l’agent réticulant réagissent avec des groupements fonctionnels présents sur les polysaccharides de sorte à lier les chaines polysaccharidiques entre elles et à les réticuler en formant des liaisons intermoléculaires. L’agent réticulant peut également réagir avec des groupements fonctionnels présents sur une même molécule de polysaccharide de sorte à former des liaisons intramoléculaires. Notamment, les groupes fonctionnels de l’agent réticulant réagissent avec les groupes -OH ou -COOH, ou encore -CHO, présents sur les polysaccharides tels que l’acide hyaluronique. On obtient ainsi des polysaccharides réticulés comprenant au moins un lien de réticulation entre deux chaines polysaccharidiques, ledit lien de réticulation étant le résidu de l’agent réticulant de l’étape b).

En particulier, suite à l’étape b), les polysaccharides réticulés comprennent au moins un lien de réticulation entre deux chaines polysaccharidiques, ledit lien de réticulation comprenant plus particulièrement le groupe polyvalent Y tel que décrit ci-dessus, de préférence, le groupe divalent Y ¹ tel que décrit ci-dessus.

Certains groupes fonctionnels Z (tels que Z ¹ et Z ² ) de l’agent réticulant peuvent cependant ne pas réagir avec une chaîne polysaccharidique.

En particulier, lorsque l’agent réticulant comporte deux groupements fonctionnels Z ¹ et Z ² , l’un des groupes fonctionnels Z ¹ peut réagir avec un polysaccharide tandis que l’autre groupe fonctionnel Z ² ne réagit pas avec aucun polysaccharide. Un lien pendant est alors formé.

Etape c)

L’étape c) du procédé selon l’invention comprend la fonctionnalisation du polysaccharide avec au moins une molécule de formule Chem. I suivante : ou un sel de celle-ci, dans laquelle:

T représente un groupement isocyanate, amino, époxyde, carboxyle, N-succinimidyloxycarbonyle, N-sulfosuccinimidyloxycarbonyle, halogénocarbonyle, isothiocyanate, vinyle, formyle, hydroxyle, sulfhydryle, acylhydrazino, aminoxy, carbodiimide, ou un résidu d’anhydride d’acide ;

A représente une liaison chimique ou un groupement espaceur ; R ⁵ et R ⁶ , identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ; un atome d'halogène ; un groupement -OR ⁴ avec R ⁴ représentant un atome d'hydrogène, un groupement aryle ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone ; un aryle ; ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone éventuellement substitué par un ou plusieurs groupes choisis parmi un atome d’halogène, un aryle et un hydroxyle ;

R ¹⁰ représente un atome d’hydrogène, un groupement aryle ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone.

Avantageusement, T représente un groupement isocyanate, sulfhydryle, amino, époxyde, vinyle, formyle, ou carbodiimide, plus avantageusement, T représente un groupement époxyde ou amino, encore plus avantageusement T représente un groupement époxyde.

En particulier, le groupement T de la molécule de formule Chem. I et les groupements Z ou Z ¹ et Z ² de la molécule de formule Chem. Il / Chem. Ila sont identiques.

De préférence, A représente un groupement espaceur, plus préférentiellement une chaîne divalente hydrocarbonée aliphatique, notamment linéaire ou ramifiée et saturée, comportant de 1 à 12 atomes de carbone :

- dans laquelle sont éventuellement intercalés, entre deux atomes de carbone de ladite chaîne, un ou plusieurs (notamment 1 , 2, 3 ou 4) motifs divalents choisis parmi les arylènes,-O-, -S-, -S(O)-, -C(=O)-, -SO ₂ - et -N(R ⁹ )- avec R ⁹ représentant un atome d'hydrogène, un groupement hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone, ou un aryl-(C1 -C6)alkyle,

- ladite chaîne étant non substituée ou substituée par un ou plusieurs groupes monovalents choisis parmi un atome d'halogène, un hydroxyle, un aryl-(C1 -C6)alkyle. Avantageusement, A est une chaîne divalente hydrocarbonée aliphatique, notamment linéaire ou ramifiée et saturée, dans laquelle sont éventuellement intercalés, entre deux atomes de carbone de ladite chaîne, un ou plusieurs motifs divalents -O-, plus avantageusement de 1 à 4 motifs divalents -O-, encore plus avantageusement un motif divalent O.

De préférence, A est une chaîne (C1 -C12)alkylène dans laquelle sont éventuellement intercalés, entre deux atomes de carbone de ladite chaîne, un ou plusieurs motifs divalents -O-, plus préférentiellement de 1 à 4 motifs divalents -O-, encore plus préférentiellement un motif divalent -O-.

En particulier, A représente une chaîne divalente -(C1 -C6)alkylène-O- (C1 -C6)alkylène-, notamment -(C1 -C4)alkylène-O-(C1 -C4)alkylène-, plus particulièrement une chaîne divalente -CH ₂ -O-(CH ₂ ) ₃ -, le groupe CH ₂ étant lié à T et le groupe (CH ₂ ) ₃ étant lié à Si dans la molécule de formule Chem. I.

Avantageusement, R ⁵ et R ⁶ , identiques ou différents, représentent un groupement - OR ⁴ avec R ⁴ représentant un atome d'hydrogène, un groupement aryle ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone ; ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone éventuellement substitué par un ou plusieurs groupes choisis parmi un atome d’halogène, un aryle et un hydroxyle.

En particulier, R ⁵ et R ⁶ , identiques ou différents, représentent un groupement -OR ⁴ avec R ⁴ représentant un groupe (C1 -C6)alkyle ; ou un groupe (C1 -C6)alkyle.

Avantageusement, R ⁵ et R ⁶ , identiques ou différents, représentent un groupement - OR ⁴ avec R ⁴ représentant un atome d'hydrogène, un groupement aryle ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone, de préférence avec R ⁴ représentant un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone, tel qu’un groupe (C1 -C6)alkyle.

Avantageusement, R ¹⁰ représente un atome d’hydrogène ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone tel qu’un groupe (C1 -C6)alkyle, plus avantageusement R ¹⁰ représente un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone tel qu’un groupe (C1 -C6)alkyle.

De préférence, la molécule de formule Chem. I est telle que :

- T est tel que défini ci-dessus et représente avantageusement un groupement amino ou époxyde, de préférence un groupement époxyde ;

- A est une chaîne divalente -(C1 -C6)alkylène-O-((C1 -C6)alkylène-, notamment -(C1 -C4)alkylène-O-(C1 -C4)alkylène-, telle que -CH ₂ -O-(CH ₂ ) ₃ -, le groupe CH ₂ étant de préférence lié à T et le groupe (CH ₂ ) ₃ étant lié à Si dans la molécule de formule Chem. I ;

- R ⁵ et R ⁶ , identiques ou différents, sont chacun un groupement -OR ⁴ avec R ⁴ représentant un groupement (C1 -C6)alkyle, de préférence un méthyle ou un éthyle ; ou un groupement (C1 -C6)alkyle, de préférence un méthyle ou un éthyle ; et

- R ¹⁰ est un groupement (C1 -C6)alkyle, de préférence méthyle ou éthyle ; les groupes R ⁵ , R ⁶ et OR ¹⁰ pouvant être identiques.

En particulier, la molécule de formule Chem. I est choisi parmi le (3- glycidyloxypropyl)triméthoxysilane (GPTMS), le 3-

Glycidoxypropyldimethoxymethylsilane, le 3-Glycidoxypropyldimethylethoxysilane, le (3-glycidyloxypropyl)éthoxydiméthoxysilane, le (3-glycidyloxypropyl)triéthoxysilane, le diéthoxy(3-glycidyloxypropyl)méthylsilane, et leurs mélanges ; de préférence parmi le (3-glycidyloxypropyl)triméthoxysilane (GPTMS), le (3- glycidyloxypropyl)éthoxydiméthoxysilane, le (3-glycidyloxypropyl)triéthoxysilane, le diéthoxy(3-glycidyloxypropyl)méthylsilane, et leurs mélanges.

De préférence, à l’étape c), le polysaccharide est fonctionnalisé en présence de 5 à 50%, préférentiellement de 10 à 45%, notamment de 20 à 45%, par exemple de 30% à 45%, ou encore en présence de 5 à 25%, notamment de 10 à 25%, par exemple de 15% à 25%, en moles de molécule de formule Chem. I ou un sel de celle-ci pour 1 mole d’unité de répétition du polysaccharide.

La concentration massique en polysaccharide dans le milieu de fonctionnalisation est comprise avantageusement entre 50 et 300 mg/g de milieu de fonctionnalisation, de préférence entre 100 et 200 mg/g.

D’une manière générale, la quantité en agent de fonctionnalisation augmente lorsque l’on diminue la quantité en agent réticulant, et réciproquement.

Avantageusement, la réticulation du polysaccharide a lieu à l’étape b) en présence de 0,05 à 2% ou de 0,05 à 1% en moles d’au moins un agent réticulant pour 1 mole d’unité de répétition du polysaccharide, et la fonctionnalisation du polysaccharide a lieu à l’étape c) en présence de 10% à 50%, notamment de 10% à 45%, de préférence de 30% à 45%, ou encore en présence de 5% à 50%, notamment de 10% à 25%, de préférence de 15% à 25%, en moles de molécule de formule Chem. I ou un sel de celle-ci pour 1 mole d’unité de répétition du polysaccharide.

Avantageusement, la réticulation du polysaccharide a lieu à l’étape b) en présence de 2% à 10% ou de 1 à 10% en moles d’au moins un agent réticulant pour 1 mole d’unité de répétition du polysaccharide, et la fonctionnalisation du polysaccharide a lieu à l’étape c) en présence de 5% à 50%, notamment de 10% à 45%, de préférence de 5% à 25% ou 20% ou 45% en moles de molécule de formule Chem. I ou un sel de celle-ci pour 1 mole d’unité de répétition du polysaccharide.

En particulier, la fonctionnalisation a lieu en milieu réactionnel aqueux.

Avantageusement, et notamment lorsque T est un époxyde, la fonctionnalisation a lieu à un pH supérieur ou égal à 10, plus avantageusement supérieur ou égal à 12.

Pour cela, le milieu réactionnel comprend de préférence une base de Bronsted, plus préférentiellement un hydroxyde, encore plus préférentiellement un hydroxyde de sodium ou de potassium.

De préférence, la fonctionnalisation a lieu entre 4°C et 60° C, plus préférentiellement entre 10°C et 50° C. En particulier, la fonctionnalisation a lieu entre 1 heure et 2 semaines, plus particulièrement entre 3 heures et 1 semaine.

L’étape c) permet de fonctionnaliser les chaines polysaccharidiques. Le groupe fonctionnel T de la molécule de formule Chem. I réagit ainsi avec un groupement fonctionnel présent sur les polysaccharides de sorte à fonctionnaliser les chaines polysaccharidiques. Notamment, le groupe fonctionnel T de la molécule Chem. I réagit ainsi avec un groupe -OH ou -COOH, ou encore une fonction CHO, présent sur les polysaccharides tels que l’acide hyaluronique. On obtient ainsi des polysaccharides fonctionnalisés comprenant des liens pendants sur une chaîne polysaccharidique, lesdits liens pendants comprenant un groupe -A-Si(R ⁵ )(R ⁶ )OR ¹⁰ , le groupe -A- Si(R ⁵ )(R ⁶ )OR ¹⁰ provenant de la molécule de formule Chem. I de l’étape c) pouvant apporter des propriétés biologiques à l’hydrogel.

Avantageusement, les étapes b) et c) sont concomitantes.

Etape d)

L’étape d) du procédé selon l’invention comprend une réaction sol-gel d’au moins une partie des groupes Si-OR ¹⁰ et optionnellement d’au moins une partie des groupes SiOR ⁴ lorsqu’ils sont présents.

Cette étape permet également de réticuler les chaines polysaccharidiques entre elles lorsqu’elles sont fonctionnalisées avec des molécules de formule Chem. I. En effet, lors de cette étape, au moins une partie des groupes Si-OR ¹⁰ et optionnellement au moins une partie des groupes SiOR ⁴ vont réagir deux à deux, éventuellement après hydrolyse de ces groupes, pour former des liaisons Si-O-Si. Cela implique que deux molécules de formule Chem. I greffées sur des chaines polysaccharidiques vont réagir ensemble via leurs groupes terminaux Si-OR ¹⁰ (voire SiOR ⁴ le cas échéant) et se lier de manière covalente via la formation de liaison Si-O-Si permettant ainsi de lier les chaines polysaccharidiques ensemble et de les réticuler davantage.

On obtient ainsi des polysaccharides réticulés comprenant des liens de réticulation entre deux chaines polysaccharidiques, lesdits liens de réticulation comprenant un groupement divalent -Si-O-Si-.

De ce fait, l’étape d) ne peut avoir lieu avant l’étape c). Elle est notamment au moins en partie concomitante à l’étape c).

Comme défini précédemment, la réaction sol-gel comprend une ou deux sous-étapes, à savoir une sous-étape d1 ) d’hydrolyse réalisée uniquement lorsque R ¹⁰ (ou R ⁴ ) n’est pas un atome d’hydrogène et une sous-étape d2) de condensation. Avantageusement, l’étape d1 ) d’hydrolyse a lieu à un pH supérieur à 9, de préférence supérieur à 10, plus préférentiellement supérieur à 12.

Pour cela, le milieu réactionnel comprend de préférence une base de Bronsted, plus préférentiellement un hydroxyde, encore plus préférentiellement un hydroxyde de sodium ou de potassium.

De préférence, l’hydrolyse a lieu entre 4°C et 60°C, plus préférentiellement entre 10°C et 50°C.

En particulier, l’hydrolyse a lieu entre 1 heure et 2 semaines, plus particulièrement entre 3 heures et 1 semaine.

L’étape c) et l’étape d1 ), lorsque cette dernière a lieu, sont donc de préférence concomitantes puisqu’elles peuvent être réalisées dans les mêmes conditions réactionnelles.

L’étape d2) de condensation peut avoir lieu à un pH supérieur à 9 mais avec une cinétique lente. C’est pourquoi il est préférable d’utiliser d’autres conditions réactionnelles pour favoriser cette condensation, comme notamment abaisser le pH à une valeur par exemple allant de 6,8 à 7,8 ou sécher (notamment déshydrater quand le milieu réactionnel est aqueux) partiellement ou complètement le milieu réactionnel (e.g. par chauffage (par ex. à 40-60° C) éventuellement sous vide, par mise sous vide à température ambiante (e.g. 20-25° C), par lyophilisation).

Ainsi, l’étape d2) de condensation comprendra généralement :

- une étape d21 ) de pré-condensation concomitante à l’étape c) de fonctionnalisation et à l’étape d1 ) d’hydrolyse le cas échéant, au cours de laquelle une partie des groupes Si-OR ¹⁰ et optionnellement des groupes SiOR ⁴ vont se condenser entre eux ; et

- une étape d22) de condensation avancée postérieure à l’étape c) de fonctionnalisation et à l’étape d1 ) d’hydrolyse le cas échéant, au cours de laquelle davantage de groupes Si-OR ¹⁰ et optionnellement de groupes SiOR ⁴ vont se condenser entre eux.

Lors de l’étape d22) de condensation avancée, le milieu réactionnel est de préférence séché ou le pH est compris entre 6,8 et 7,8.

Ainsi, l’étape d) est de préférence réalisée en partie concomitamment à l’étape c) puis est favorisée en modifiant les conditions réactionnelles comme décrit ci-dessus. Etape e)

De préférence, le procédé selon l’invention comprend en outre une étape e) d’ajout d’une molécule de formule Chem. Ill suivante : ou un sel de celle-ci dans laquelle :

- p est un nombre entier de 1 à 20 ;

- les R ¹² et les R ¹³ , identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ; un atome d'halogène ; un groupement -OR ¹⁴ avec R ¹⁴ représentant un atome d'hydrogène, un groupement aryle ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone ; un aryle ; ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone éventuellement substitué par un ou plusieurs groupes choisis parmi un atome d’halogène, un aryle ou un hydroxyle ; et

- R ⁷ et R ⁸ , identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupement aryle ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone.

De préférence, les R ¹² et les R ¹³ , identiques ou différents, représentent un groupement -OR ¹⁴ avec R ¹⁴ représentant un atome d'hydrogène, un groupement aryle ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone ; un aryle ; ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone éventuellement substitué par un ou plusieurs groupes choisis parmi un atome d’halogène, un aryle ou un hydroxyle.

En particulier, les R ¹² et les R ¹³ , identiques ou différents, représentent un groupement -OR ¹⁴ avec R ¹⁴ représentant un atome d'hydrogène, un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone, de préférence un groupement (C1 -C6)alkyle ; ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone, de préférence un groupement (C1 -C6)alkyle.

Avantageusement, R ⁷ et R ⁸ , identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone, de préférence un groupement (C1 -C6)alkyle.

Cette molécule de formule Chem. Ill comporte des groupements Si-OR (Si-O R ⁷ , Si-O R ⁸ et éventuellement Si-OR ¹⁴ ) capables de réagir avec les groupements Si-OR (Si-OR ¹⁰ et éventuellement Si-OR ⁴ ) de la molécule de formule Chem. I. Ainsi, lors de la réaction sol-gel permettant la formation de liaisons Si-O-Si, une molécule de formule Chem. Ill peut se lier à deux molécules de formule Chem. I greffées sur des chaines polysaccharidiques de sorte à former des liaisons de réticulation résultant du couplage d’une molécule de formule Chem. Ill avec deux molécules de formule Chem. I.

Par exemple, la molécule de formule Chem. Ill est l’acide orthosilicique, le tétraéthyl orthosilicate (TEOS), le polydiméthylsiloxane (PDMS), le TEOS/acide orthosilicique oligomérisés, ou le méthyl silanetriol (de préférence utilisé sous forme de son sel de sodium appelé méthyl siliconate de sodium - NaMS).

Cette étape e) peut être réalisée après l’étape d).

De préférence, l’étape e) est réalisée avant ou concomitamment à l’étape d), en particulier pendant l’étape d21 ).

Etape f)

Avantageusement, le procédé selon l’invention comprend en outre une étape f) d’ajout d’un composant additionnel choisi parmi les anesthésiants, les antioxydants, les acides aminés, les vitamines, les minéraux, les acides nucléiques et leurs mélanges tels que décrits ci-dessous.

Etape g)

De préférence, le procédé comprend en outre une étape g) de purification, en particulier par dialyse.

Selon un mode de réalisation particulier, la purification est réalisée après les étapes b) et c).

Préférentiellement, la purification est réalisée après les étapes b), c) et d).

Plus préférentiellement, la purification est réalisée après les étapes b), c), d1 ) et d21 ) et avant l’étape d22).

Etape h)

Avantageusement, le procédé comprend en outre une étape h) de stérilisation, notamment une étape de stérilisation à la chaleur réalisée à une température au plateau comprise entre 121 °C et 135 °C, de préférence d’une durée au plateau entre 1 minute et 20 minutes avec F0 ≥ 15, ou une étape de stérilisation par radiation UV. De préférence, l’étape de stérilisation est réalisée après les étapes a) à d) et les éventuelles étapes e), f) et g). HYDROGEL

La présente invention a également pour objet un hydrogel susceptible d’être obtenu par le procédé selon la présente invention.

Cet hydrogel est de préférence un hydrogel injectable. Il est de préférence stérile, notamment stérilisé à la chaleur à une température au plateau comprise entre 121 °C et 135°C, de préférence d’une durée au plateau entre 1 minute et 20 minutes avec F0 ≥ 15.

Cet hydrogel est de préférence homogène. Cet hydrogel est de préférence filant, avec notamment un angle de phase δ compris entre 20° et 45° . Cet hydrogel peut comprendre également un composant additionnel choisi parmi les anesthésiants, les antioxydants, les acides aminés, les vitamines, les minéraux, les acides nucléiques et leurs mélanges tels que décrits ci-dessous.

Le polysaccharide de cet hydrogel est de préférence tel que défini ci-dessus, dans le cadre de la description de l’étape a) du procédé selon l’invention.

L’agent réticulant utilisé pour réticuler le polysaccharide de cet hydrogel est de préférence tel que défini ci-dessus, dans le cadre de la description de l’étape b) du procédé selon l’invention. De préférence, il ne comprend pas de motifs Si-O-Si, et notamment il ne comprend pas de motifs -[SiR ² R ³ O]m-SiR ² R ³ -.

La molécule Chem. I utilisée pour fonctionnaliser le polysaccharide de cet hydrogel est de préférence tel que défini ci-dessus, dans le cadre de la description de l’étape c) du procédé selon l’invention.

La présente invention a également pour objet un hydrogel comprenant au moins un polysaccharide réticulé avec au moins un lien de réticulation LR1 et au moins un lien de réticulation LR2,

- le lien de réticulation LR1 comprenant au moins un motif Si-O-Si,

- le lien de réticulation LR2, différent du lien de réticulation LR1 , étant obtenu par réticulation dudit polysaccharide avec au moins un agent réticulant comprenant au moins deux groupements fonctionnels Z, identiques ou différents, choisis parmi les groupements isocyanate, amino, époxyde, carboxyle, N-succinimidyloxycarbonyle, N-sulfo succinimidyloxycarbonyle, halogénocarbonyle, isothiocyanate, vinyle, formyle, hydroxyle, sulfhydryle, hydrazino, acylhydrazino, aminoxy, carbodiimide, et un résidu d’anhydride d’acide, ledit hydrogel présentant un degré de modification par ledit au moins un agent réticulant de 0,05 à 10,0%, notamment de 0,05 à 5,0%, préférentiellement de 0,1 à 1 ,0%. Cet hydrogel est de préférence un hydrogel injectable. Il est de préférence stérile, notamment stérilisé à la chaleur à une température au plateau comprise entre 121 °C et 135°C, de préférence d’une durée au plateau entre 1 minute et 20 minutes avec F0 ≥ 15. Cet hydrogel est de préférence homogène. Cet hydrogel est de préférence filant, avec notamment un angle de phase δ compris entre 20° et 45° . Cet hydrogel peut comprendre également un composant additionnel choisi parmi les anesthésiants, les antioxydants, les acides aminés, les vitamines, les minéraux, les acides nucléiques et leurs mélanges tels que décrits ci-dessous.

Le polysaccharide de cet hydrogel est de préférence tel que défini ci-dessus, dans le cadre de la description de l’étape a) du procédé selon l’invention.

L’agent réticulant utilisé pour réticuler le polysaccharide de cet hydrogel est de préférence tel que défini ci-dessus, dans le cadre de la description de l’étape b) du procédé selon l’invention. De préférence, il ne comprend pas de motifs Si-O-Si, et notamment il ne comprend pas de motifs -[SiR ² R ³ O]m-SiR ² R ³ -.

Ainsi, par exemple, lorsque l’agent réticulant répond à la formule Chem, lia ci-dessus, le lien de réticulation LR2, obtenu par réticulation du polysaccharide avec l’agent réticulant de formule Chem. Ha, aura la formule Chem. V suivante : dans laquelle : Y ¹ est tel que défini ci-dessus, et

G ³ et G ⁴ , identiques ou différents, sont des groupes lieurs liés à des atomes de carbone du polysaccharide et résultant du couplage d’un des groupements fonctionnels Z ¹ et Z ² de l’agent réticulant de formule Chem, lia avec un groupement fonctionnel présent sur le polysaccharide (e.g. OH ou COOH ou encore CHO par exemple lorsque le polysaccharide est l’acide hyaluronique). G ³ et G ⁴ , identiques ou différents, sont donc par exemple choisis parmi les groupes suivants :

*-O-CO-NH-** (couplage de OH avec un isocyanate), *-NH-CO-NH- (couplage de NH ₂ avec un isocyanate), *-CO-NH-** (couplage de COOH avec un amino), *-O-CH ₂ -CH(OH)-** (couplage de OH avec un époxyde), *-COO-CH ₂ -CH(OH)-** (couplage de COOH avec un époxyde), *-O-CO-** (couplage de OH avec un carboxyle, N-succinimidyloxycarbonyle, N-sulfosuccinimidyloxycarbonyle, ou halogénocarbonyle), *-NH-CO-** (couplage de NH ₂ avec un carboxyle, N-succinimidyloxycarbonyle, N-sulfosuccinimidyloxycarbonyle, ou halogénocarbonyle), *-O-CS-NH-** (couplage de OH avec un isothiocyanate), *-NH-CS- NH- (couplage de NH ₂ avec un isothiocyanate), *-O-CH ₂ -CH ₂ -** (couplage de OH avec un vinyle), *-O-CH(OH)-** (couplage de OH avec un formyle), *-NH-CH(OH)-** (couplage de NH ₂ avec un formyle), *-CO-O-** (couplage de COOH avec un hydroxyle), *-CO-S-** (couplage de COOH avec un sulfhydryle), *=NH-NH-** (couplage de CHO avec un hydrazino), *=NH-NH-CO-** (couplage de CHO avec un acylhydrazino), *=NH-O-** (couplage de CHO avec un aminoxy), *-CO-NR ^a -CO-NH-** avec R ^a tel que défini ci-dessus (couplage de COOH avec un carbodiimide), *-O-CO-CH ₂ -N(CH ₂ -COOH)- (couplage de OH avec le résidu d’anhydride d’acide de formule Chem. GR3), *-NH-CO-CH ₂ -N(CH ₂ - COOH)- (couplage de NH ₂ avec le résidu d’anhydride d’acide de formule Chem. GR3), *-O-CO-CH ₂ -CH(COOH)-** (couplage de OH avec le résidu d’anhydride succinique), *- NH-CO-CH ₂ -CH(COOH)-** (couplage de NH ₂ avec le résidu d’anhydride succinique), *-O- CO-CH=C(COOH)-** (couplage de OH avec le résidu d’anhydride maléique), *-NH-CO- CH=C(COOH)-** (couplage de NH ₂ avec le résidu d’anhydride maléique), dans lesquels :

* représente le point d’attachement à un atome de carbone du polysaccharide, et ** représente le point d’attachement à Y ¹ .

Le lien de réticulation LR1 comprendra plus particulièrement un motif de formule Chem. IVa suivante : et plus particulièrement sera un groupe divalent de formule Chem. IV suivante : dans lesquelles : p1 est un nombre entier de 0 à 20, de préférence égal à 0, A ¹ et A ² , identiques ou différents, représentent une liaison chimique ou un groupement espaceur, chacun correspondant en particulier à un groupe A tel que défini ci-dessus, dans le cadre de la description de l’étape c) du procédé selon l’invention, R ⁵¹ , R ⁵² , R ⁶¹ et R ⁶² , identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ; un atome d'halogène ; un groupement -OR ⁴¹ avec R ⁴¹ représentant un atome d'hydrogène, un groupement aryle ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone ; un aryle ; ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone éventuellement substitué par un ou plusieurs groupe(s) choisis parmi un atome d’halogène, un aryle et un hydroxyle, R ¹²¹ et R ¹³¹ , identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ; un atome d'halogène ; un groupement -OR ¹⁴¹ avec R ¹⁴¹ représentant un atome d'hydrogène, un groupement aryle ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone ; un aryle ; ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone éventuellement substitué par un ou plusieurs groupes choisis parmi un atome halogène, un aryle ou un hydroxyle, et

G ¹ et G ² , identiques ou différents, sont des groupes lieurs liés à des atomes de carbone du polysaccharide et choisis parmi *-O-CO-NH-**, *-NH-CO-NH-, *-CO-NH-**, *-O-CH ₂ - CH(OH)-**, *-COO-CH ₂ -CH(OH)-**, *-O-CO-**, *-NH-CO-**, *-O-CS-NH-**, *-NH-CS-NH-, *- O-CH ₂ -CH ₂ -**, *-O-CH(OH)-**, *-NH-CH(OH)-**, *-CO-O-**, *-CO-S-**, *=NH-NH-**, *=NH- NH-CO-**, *=NH-O-**, *-CO-NR ^a -CO-NH-** avec R ^a tel que défini ci-dessus, *-O-CO-CH ₂ - N(CH ₂ -COOH)-**, *-NH-CO-CH ₂ -N(CH ₂ -COOH)-**, *-O-CO-CH ₂ -CH(COOH)-**, *-NH-CO- CH ₂ -CH(COOH)-**, *-O-CO-CH=C(COOH)-** et *-NH-CO-CH=C(COOH)-**, où * représente le point d’attachement à un atome de carbone du polysaccharide, et ** représente le point d’attachement à A ¹ pour G ¹ et à A ² pour G ² .

Avantageusement, R ⁵¹ , R ⁵² , R ⁶¹ et R ⁶² , identiques ou différents, représentent un groupement -OR ⁴¹ avec R ⁴¹ représentant un atome d'hydrogène, un groupement aryle ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone ; ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone éventuellement substitué par un ou plusieurs groupes choisis parmi un atome d’halogène, un aryle et un hydroxyle.

Avantageusement, R ⁵¹ , R ⁵² , R ⁶¹ et R ⁶² , identiques ou différents, représentent un groupement -OR ⁴¹ avec R ⁴¹ représentant un atome d'hydrogène, un groupement aryle ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone, de préférence avec R ⁴¹ représentant H ou un groupe hydrocarboné aliphatique comportant de 1 à 6 atomes de carbone, tel qu’un groupe (C1 -C6)alkyle.

De préférence :

- p ¹ est tel que défini ci-dessus et avantageusement représente 0 ;

- G ¹ et G ² , identiques ou différents, de préférence identiques, sont tels que définis ci- dessus et représentent avantageusement un groupement *-CO-NH-** ou *-O-CH ₂ - CH(OH)-**, de préférence un groupement *-O-CH ₂ -CH(OH)-** ;

- A ¹ et A ² , identiques ou différents, de préférence identiques, sont chacun une chaîne divalente -(C1 -C6)alkylène-O-((C1 -C6)alkylène-, notamment -(C1 -C4)alkylène-O-(C1 - C4)alkylène-, telle que -CH ₂ -O-(CH ₂ ) ₃ -, le groupe CH ₂ étant de préférence lié à G ¹ ou G ² respectivement et le groupe (CH2) ₃ étant lié à Si ; et - R ⁵¹ , R ⁵² , R ⁶¹ et R ⁶² , identiques ou différents, sont chacun un groupement -OR ⁴¹ avec R ⁴¹ représentant H ou un groupement (C1 -C6)alkyle, de préférence H, un méthyle ou un éthyle ; ou un groupement (C1 -C6)alkyle, de préférence un méthyle ou un éthyle ; de préférence R ⁵¹ , R ⁵² , R ⁶¹ et R ⁶² , identiques ou différents, sont chacun un groupement -OR ⁴¹ avec R ⁴¹ représentant H ou un groupement (C1 -C6)alkyle, de préférence H, un méthyle ou un éthyle.

Le lien de réticulation LR1 résulte avantageusement de la fonctionnalisation du polysaccharide avec une molécule de formule Chem. I telle que définie ci-dessus et d’une réaction sol-gel permettant une réticulation additionnelle, éventuellement en présence d’une molécule de formule Chem. III. Ainsi, dans ce cas, les groupes lieurs

G ¹ et G ² résultent du couplage d’un groupe fonctionnel T de la molécule de formule Chem. I avec un groupe fonctionnel présent sur le polysaccharide (e.g. OH ou COOH ou encore CHO).

En particulier, l’hydrogel présente un degré de modification par la molécule de formule Chem. I de 5 à 50%, de préférence de 10 à 45%, notamment de 5 à 25%.

COMPOSITION

La présente invention a également pour objet une composition comprenant l’hydrogel selon la présente invention. Il s’agit de préférence d’une composition cosmétique ou pharmaceutique. Elle peut comprendre en outre des excipients physiologiquement acceptables.

L’hydrogel selon l’invention comprend un polysaccharide (e.g., de l’acide hyaluronique) réticulé. La composition peut comprendre en outre un polysaccharide (e.g., de l’acide hyaluronique) non réticulé.

La composition selon la présente invention peut ainsi comprendre de 0,1 à 5 % en poids, de préférence de 1 à 3 % en poids de polysaccharide (e.g., d’acide hyaluronique), par rapport au poids total de ladite composition, le polysaccharide (e.g., l’acide hyaluronique) étant présent sous forme réticulée et optionnellement non réticulée. En particulier, la teneur en polysaccharide (e.g., en acide hyaluronique) non réticulé varie de 0 à 40% en poids, préférentiellement de 1 à 40% en poids, plus préférentiellement de 5 à 30% en poids, par rapport au poids total de polysaccharide (e.g., d’acide hyaluronique) présent dans la composition.

Le polysaccharide de l’hydrogel est de préférence tel que défini ci-dessus, dans le cadre de la description de l’étape a) du procédé selon l’invention, en particulier de de l’acide hyaluronique. La composition selon la présente invention est de préférence une composition stérile, notamment stérilisée à la chaleur à une température au plateau comprise entre 121 °C et 135°C, de préférence d’une durée au plateau entre 1 minute et 20 minutes avec F0 ≥ 15. Il s’agit de préférence d’une composition injectable. La composition selon l’invention comprend alors de préférence un milieu physiologiquement acceptable, de préférence un milieu aqueux physiologiquement acceptable.

Le milieu aqueux physiologiquement acceptable peut comprendre un solvant ou un mélange de solvants physiologiquement acceptables et comprend de préférence de l’eau.

Le milieu physiologiquement acceptable peut également comprendre des agents isotoniques tels que des oses, du chlorure de sodium et leur mélange.

Le milieu physiologiquement acceptable peut en outre comprendre au moins une solution saline isotonique et physiologiquement acceptable.

De préférence, ladite solution saline équilibrée est une solution saline tamponnée par des phosphates, et particulièrement un tampon de solution saline de KH ₂ PO ₄ /K ₂ HPO ₄ . La composition selon l’invention peut comprendre en outre au moins un composé additionnel choisi parmi les anesthésiants, les antioxydants, les acides aminés, les vitamines, les minéraux, les acides nucléiques, les co-enzymes, les dérivés d’adrénaline, et les mélanges de ceux-ci.

En tant qu’anesthésiants, on peut mentionner l’Ambucaïne, l’Amoxécaïne, l’Amyléine, l’Aprindine, l’Aptocaïne, l’Articaïne, la Benzocaine, la Bétoxycaïne, la Bupivacaïne, la Butacaïne, le Butamben, la Butanilicaïne, le Chlorobutanol, la Chloroprocaïne, la Cinchocaïne, la Clodacaïne, la Cocaïne, la Cryofluorane, la Cyclométhycaïne, la Dexivacaïne, la Diamocaïne, le Dipérodon, la Dyclonine, l’Etidocaïne, l’Euprocine, la Fébuvérine, la Fomocaïne, le Guafécaïnol, l’Heptacaïne, l’Hexylcaïne, l’Hydroxyprocaïne, l’Hydroxytétracaïne, l’Isobutamben, la Leucinocaïne, la Lévobupivacaïne, le Lévoxadrol, le Lidamidine, la Lidocaïne, la Lotucaïne, le Menglytate, la Mépivacaïne, la Méprylcaïne, la Myrtécaïne, l’Octacaïne, l’Octodrine, l’Oxétacaïne, l’Oxybuprocaïne, la Paréthoxycaïne, la Paridocaïne, la Phénacaïne, la Pipérocaïne, la Piridocaïne, le Polidocanol, la Pramocaïne, la Prilocaïne, la Procaïne, la Propanocaïne, la Propipocaine, la Propoxycaïne, la Proxymétacaïne, la Pyrrocaïne, La Quatacaïne, La Quinisocaïne, la Risocaïne, la Rodocaïne, la Ropivacaïne, la Tétracaïne, la Tolycaïne, la Trimécaïne ou un sel de celui-ci, en particulier un chlorhydrate de celui-ci, et un mélange de ceux-ci. En tant qu’antioxydants, on peut mentionner le glutathion, le glutathion réduit, l’acide ellagique, la spermine, le resvératrol, le rétinol, la L-carnitine, les polyols, les polyphénols, les flavonols, les théaflavines, les catéchines, la caféine, l’ubiquinol, l’ubiquinone, l’acide alpha-lipoïque et leurs dérivés, et un mélange de ceux-ci.

En tant qu’acides aminés, on peut mentionner l’arginine (e.g., L-arginine), l’isoleucine (e.g., L-isoleucine), la leucine (e.g., L-leucine), la lysine (e.g., L-lysine ou L-lysine monohydratée), la glycine, la valine (e.g., L-valine), la thréonine (e.g., L-thréonine), la proline (e.g., L-proline), la méthionine, l’histidine, la phénylalanine, le tryptophane, la cystéine, leurs dérivés (e.g., dérivés N-acétylés comme la N-acétyl-L- cystéine) et un mélange de ceux-ci.

En tant que vitamines, et leurs sels on peut mentionner les vitamines E, A, C, B, spécialement les vitamines B6, B8, B4, B5, B9, B7, B12, et mieux la pyridoxine et ses dérivées et/ou sels, de préférence le chlorhydrate de pyridoxine.

En tant que minéraux, on peut en particulier mentionner les sels de zinc (e.g., acétate de zinc, notamment déshydraté), les sels de magnésium, les sels de calcium, les sels de potassium, les sels de manganèse, les sels de sodium, les sels de cuivre (e.g., sulfate de cuivre, notamment pentahydraté), éventuellement sous une forme hydratée, et les mélanges de ceux-ci.

En tant qu’acides nucléiques, on peut mentionner en particulier l’adénosine, la cytidine, la guanosine, la thymidine, la cytodine, leurs dérivés et un mélange de ceux- ci.

En tant que co-enzymes, on peut citer la coenzyme Q10, la CoA, le NAD, le NADP, et les mélanges de ceux-ci.

En tant que dérivés d’adrénaline, on peut mentionner l’adrénaline, la noradrénaline et un mélange de ceux-ci.

Les quantités de composés additionnels dépendent bien entendu de la nature du composé en question, de l’effet souhaité, et de la destination de la composition telle que décrite ici.

APPLICATIONS

L’hydrogel ou la composition selon l’invention peut avoir des applications thérapeutiques, cosmétiques et/ou esthétiques.

La présente invention concerne donc également un hydrogel ou une composition selon l’invention pour son utilisation dans le comblement et/ou le remplacement de tissus, en particulier de tissus mous, notamment par injection de l’hydrogel ou de la composition dans le tissu.

En particulier, l’hydrogel ou la composition selon l’invention est utilisé dans des soins bucco-dentaires et plus particulièrement dans le traitement de la récession gingivale, ou pour combler les poches parodontales. Plus particulièrement, l’hydrogel ou la composition selon l’invention est utilisé pour traiter les défauts de l’architecture gingivale qui peuvent arriver avec la perte de dent, avec le vieillissement, avec les maladies et troubles parodontales, ou après la pose d’implants de dent, de couronnes ou de bridges.

L’hydrogel ou la composition selon l’invention peut être utilisé également en ophtalmologie, plus particulièrement pour protéger les structures oculaires durant une chirurgie de l’œil comme par exemple la chirurgie ophtalmique du segment antérieur ou postérieur, l’extraction de la cataracte éventuellement avec implantation d’une lentille intraoculaire, la chirurgie de transplantation cornéenne, la chirurgie filtrante du glaucome, ou encore l’implantation d’une lentille secondaire. Dans ce cas, l’hydrogel ou la composition selon l’invention sera plus particulièrement injecté dans l’œil.

L’hydrogel ou la composition selon l’invention peut être utilisé également en orthopédie ou rhumatologie, par exemple par injection dans la cavité synoviale. L’hydrogel ou la composition selon l’invention est utilisé alors en tant que viscosupplémentation.

L’hydrogel ou la composition selon l’invention peut être utilisé également dans le traitement de la lipodystrophie.

L’hydrogel ou la composition selon l’invention peut être utilisé en chirurgie esthétique, en particulier pour des gynécoplasties et/ou pénoplasties.

L’hydrogel ou la composition selon l’invention est administré plus particulièrement par injection.

La présente invention concerne également une méthode de traitement des pathologies ci-dessus indiquées qui comprend l’administration, à un individu en ayant besoin, d’une dose efficace de l’hydrogel ou de la composition.

La dose efficace de l’hydrogel ou de la composition varie en fonction de nombreux paramètres tels que, par exemple, la voie d’administration choisie, le poids, l’âge, le sexe, l’état d’avancement de la pathologie à traiter et la sensibilité de l’individu à traiter. La présente invention a de préférence pour objet l’utilisation esthétique, et donc non thérapeutique, d’un hydrogel ou d’une composition selon l’invention pour prévenir et/ou traiter l’altération des propriétés viscoélastiques ou biomécaniques de la peau, et en particulier pour régénérer hydrater, raffermir ou restaurer l’éclat de la peau, notamment par mésothérapie ; pour combler des défauts volumiques de la peau, et notamment combler des rides, des ridules ou des cicatrices (en particulier des cicatrices creuses) ; ou pour réduire l’apparition des rides et ridules.

Par exemple, la présente invention a pour objet l’utilisation esthétique d’un hydrogel ou d’une composition selon l’invention pour atténuer les sillons naso-géniens et plis d’amertumes ; pour augmenter le volume des pommettes, du menton ou des lèvres ; pour rétablir les volumes du visage notamment des joues, des tempes, de l’ovale du visage, et du pourtour de l’œil ; ou pour régénérer, hydrater, raffermir ou restaurer l’éclat de la peau, notamment par mésothérapie.

En particulier, l’hydrogel ou la composition selon l’invention est un hydrogel ou une composition anti-âge. L’hydrogel ou la composition selon l’invention est administré plus particulièrement par injection.

La présente invention concerne également un procédé de traitement cosmétique, de préférence anti-âge, des matières kératiniques, en particulier de la peau, comprenant au moins une étape d’administration d’un hydrogel ou d’une composition selon l’invention sur ou à travers lesdites matières kératiniques, plus particulièrement par injection.

L’administration peut être une injection, en particulier une injection intra-épidermique et/ou intradermique et/ou sous-cutanée. L'administration par injection intra-épidermique et/ou intradermique et/ou sous-cutanée selon l'invention vise à injecter un hydrogel ou une composition de l'invention dans une région épidermique, dermo-épidermique et/ou dermique. L’hydrogel ou la composition selon l’invention peut être administré également par une injection supra-périostée.

L’hydrogel ou la composition selon l’invention peut être injecté en utilisant l’un quelconque des modes connus de l'homme du métier. Notamment, un hydrogel ou une composition selon l'invention peut être administré au moyen d'un dispositif d'injection adapté à une injection intra-épidermique et/ou intradermique et/ou sous-cutanée et/ou supra-périostée. Le dispositif d'injection peut notamment être choisi parmi une seringue, un ensemble de microseringues, un dispositif laser ou hydraulique, un pistolet d'injection, un dispositif d'injection sans aiguille, ou un rouleau à micro-aiguilles.

Le dispositif d'injection peut comporter tout moyen d'injection habituellement utilisée convenant à une injection intraépidermique et/ou intradermique et/ou sous-cutanée et/ou supra-périostée. De préférence, un tel moyen peut être une aiguille hypodermique ou une canule.

Une aiguille ou canule selon l'invention peut présenter un diamètre variant de 18 à 34 G, de préférence entre 25 et 32 G, et une longueur variant de 4 à 70 mm, et de préférence de 4 à 25 mm. L'aiguille ou canule est avantageusement à usage unique.

Avantageusement, l'aiguille ou canule est associée à une seringue ou tout autre dispositif permettant de délivrer à travers l'aiguille ou la canule ledit hydrogel ou ladite composition injectable.

Selon une variante de réalisation, un cathéter peut être intercalé entre l'aiguille/la canule et la seringue. De façon connue, la seringue peut être actionnée manuellement par le praticien ou bien par un support de seringue comme les pistolets.

De préférence, le dispositif d'injection peut être choisi parmi une seringue ou un ensemble de microseringues.

Dans une variante de réalisation, le dispositif d'injection peut être adapté à la technique de la mésothérapie.

La mésothérapie est une technique de traitement par injection intra-épidermique et/ou intradermique et/ou sous-cutanée d’une composition ou d’un hydrogel. La composition ou l’hydrogel est administré selon cette technique par injection sous forme de multiples gouttelettes de faible taille au niveau de l'épiderme, de la jonction dermo-épidermique et/ou du derme afin, notamment, de réaliser un nappage sous-cutané. La technique de mésothérapie est notamment décrite dans l'ouvrage « Traité de mésothérapie » de Jacques LE COZ, édition Masson, 2004. La mésothérapie faite sur le visage est également appelée mésolift, ou également sous le terme anglosaxon « mesoglow ».

L’administration peut également être topique.

De préférence, il s’agit d’une application topique sur la surface de la peau, plus particulièrement sur l’épiderme, encore plus particulièrement sur l’épiderme facial.

La présente invention est illustrée par les exemples non limitatifs ci-dessous. EXEMPLES

Matériel

- GPTMS : (3-Glycidyloxypropyl)triméthoxy-silane (Sigma 440167),

- NaHA : hyaluronate de sodium non réticulé 1 ,5MDa et 4MDa (HTL),

- NaOH 0,25M et 0,2M,

- HCl 1M (Chem Lab),

- Tampon Phosphate PBS (Braun),

- Chlorhydrate de Lidocaïne,

- Lyophylisateur,

- Agitateur tridimensionnel Turbula®,

- Rhéomètre DHR-2,

- Dynamomètre Mecmesin AFG 100N,

- Banc d’essai Mecmesin 2.5-dV,

- Broyeur homogénéisateur à palettes,

- Poche stérile pour broyeur homogénéisateur à palettes.

Mesure des propriétés viscoélastiques

Les propriétés viscoélastiques des hydrogels obtenus ont été mesurées en utilisant un rhéomètre (DHR-2) ayant un cône en acier inoxydable (1 ° - 40 mm) à géométrie cône-plan et un plan peltier en aluminium anodisé (42 mm) (entrefer 24 pm). 0,5 g d’hydrogel stérilisé est déposé entre le plan peltier et ledit cône. Puis un balayage en contraintes est effectué à 1 Hz et 25°C. Le module élastique G’, le module visqueux G” et l’angle de phase δ sont reportés pour une contrainte de 5 Pa.

La contrainte au croisement de G’ et G” est déterminée au croisement des courbes des modules G’ et G” et est exprimée en Pascal.

Mesure de la cohésivité

Pour la mesure de cohésivité (ou résistance mécanique, exprimée en Newton), le gel est déposé sur le plan peltier avec un entrefer initial de 2,60 mm puis laissé à reposer 60 secondes. Le gel est ensuite comprimé à une vitesse constante de 100 μm/s jusqu’à 70 % de l’entrefer initial, à 25° C. La cohésivité du gel est mesurée à la fin de la course de compression. Mesure de la force d’extrusion

Les forces d’extrusion (en Newton) des gels conditionnés en seringues ont été conduites par le biais d’un banc d’essai équipé d’un dynamomètre à une vitesse constante de 12.5 mm/min, à travers une aiguille 27G½ ” et à température ambiante. Les résultats de forces d’extrusion correspondent à la moyenne des forces moyennes d’extrusion sur au moins 2 échantillons.

Exemple 1 : Préparation et analyses d’échantillons à base d’acide hyaluronique modifié avec du BDDE et/ou du GPTMS

Les prototypes n° 1 à 12 sont préparés de la manière suivante avec les teneurs en NaOH, NaHA 1 ,5 MDa, BDDE, GPTMS décrites dans la Table 1 :

- Le hyaluronate de sodium (120mg de NaHA par gramme de milieu de réaction) et le BDDE sont dissous dans une solution de soude de concentration selon la Table 1 dans une poche stérile ;

- Le mélange est homogénéisé dans un broyeur à palettes pendant 2 cycles de 15 min à 210 rpm ;

- Le GPTMS, est ajouté dans la poche stérile ;

- Le mélange est homogénéisé dans un broyeur à palettes pendant 2 cycles de 15 min à 210 rpm ;

- Le mélange est maintenu à 21 °C pendant 72h, le pH du mélange est d’environ 13 ;

- Une solution d’HCl 1 N est ajoutée dans la poche stérile jusqu’à obtenir un pH de 7 ± 0,5 ;

- Le mélange est dilué jusqu’à une concentration de 23mg de HA/g de produit avec du tampon phosphate PBS ;

- Le mélange est homogénéisé durant 24 h grâce à un agitateur tridimensionnel ;

- Le mélange est dialysé ;

- Un hyaluronate de sodium NaHA 4 MDa est ajouté en tant que lubrifiant ;

- La solution aqueuse de chlorhydrate de lidocaïne est ajoutée pour obtenir 0,3% en poids de chlorhydrate de lidocaïne par rapport au poids du produit résultant ;

- Le produit ainsi obtenu est tamisé (tamis 710 pm) ;

- Dans le cas des prototypes n° 11 et 12, le produit est à ce stade séché par lyophilisation (congélation à -80° C pendant 6 heures suivie d’un séchage sous vide pendant 48 heures) puis réhydraté en 24 heures à une concentration de 23 mg/mL en utilisant de l’eau déminéralisée ;

- Le produit ainsi obtenu est conditionné en seringue ; - Enfin , le produit est stérilisé à l’autoclave (température au plateau comprise entre

121 ° C et 135°C avec F0 ≥ 15).

Les prototypes n°2 et 12 sont comparatifs. Les prototypes n° 1 et 3-11 sont des hydrogels selon la présente invention.

Les résultats sont reportés dans la Table 1 ci-dessous. Enfin

Après stérilisation, les prototypes sont analysés, le module élastique G’, l’angle de phase δ et la contrainte au croisement de G’ et G” sont déterminés. Les résultats sont reportés dans la Table 2 ci-dessous.

ND : Non Déterminable

(1 ) : % en mole de GPTMS/100 moles d’unités de répétition d’HA

(2) : % en mole de BDDE/100 moles d’unités de répétition d’HA

Les prototypes contrôles 2 et 12 sans GPTMS ou sans BDDE ne permettent pas d’obtenir des gels avec des propriétés mécaniques acceptables pour les applications thérapeutiques, cosmétiques et/ou esthétiques visées par la présente invention. C’est bien la combinaison de BDDE et de GPTMS qui permet d’obtenir des gels élastiques injectables ayant les propriétés mécaniques recherchées. Avec des teneurs massiques de 1% en BDDE et 6 % en GPTMS (prototype n°4) (teneurs molaires de 2% en BDDE et 12% en GPTMS), le gel préparé présente des propriétés mécaniques souhaitables pour les applications visées dans le cadre de la présente invention. Des gels préparés avec 0.2% massique de BDDE (0,4% molaire) et 15% ou 20% massique de GPTMS (32 et 44% molaire) (respectivement prototypes 8 et 7) ont de bonnes propriétés rhéologiques et d’injectabilité.

A noter que le prototype 8 est un gel avec des propriétés sensorielles particulièrement avantageuses, filants.

L’effet du séchage par lyophilisation puis réhydratation permet d’exacerber les propriétés élastiques des gels. Ainsi, le prototype 11 , lyophilisé et réhydraté, montre un G’ supérieur au prototype 9 préparé avec les mêmes teneurs en BDDE et GPTMS. La même chose est observée en comparant les prototypes 10 et 7.

Exemple 2 : Etude de l’effet du NaMS

Le prototype n° 10 est préparé comme décrit en Exemple 1. Le prototype 13 est préparé de la même manière avec, au moment de l’ajout de GPTMS, l’ajout de NaMS dans un ratio de 1 : 6 (mole de NaMS : mole d’unité dissacharidique de NaHA).

Les teneurs en NaOH, NaHA (1 ,5 MDa), BDDE et GPTMS sont décrites dans la Table 3 ci-dessous. Après stérilisation, les prototypes sont analysés, le module élastique G’, l’angle de phase δ et la contrainte au croisement de G’ et G” sont déterminés. Les résultats sont reportés en Table 4 ci-dessous.

Les résultats ci-dessus montrent qu’un produit préparé en présence de NaMS (prototype 13) présente des propriétés mécaniques améliorées par rapport à un produit préparé de manière identique mais sans NaMS (prototype 10).

Exemple 3 : Préparation et analyses d’échantillons à base d’acide hyaluronique modifié avec du DVS et/ou du GPTMS

Les prototypes n° 14 et 15 sont préparés de la manière suivante avec les teneurs en NaOH, NaHA (1 ,5 MDa), DVS et GPTMS décrites dans la Table 5 :

- Le GPTMS, puis le NaOH puis le hyaluronate de sodium NaHA (120mg de NaHA par gramme de milieu de réaction) sont ajoutés dans une poche stérile ;

- Le mélange est homogénéisé dans un broyeur à palettes pendant 3 cycles de 15 min à 210 rpm et par palpations manuelles de la poche entre chaque cycle ;

- Le DVS est ajouté dans la poche ;

- Le mélange est homogénéisé dans un broyeur à palettes pendant 15 min à 210 rpm ;

- Le mélange est maintenu à 21 °C pendant 48h, le pH du mélange est d’environ 13 ;

- Une solution d’HCl 1M est ajoutée dans la poche stérile jusqu’à obtenir un pH de 7 ± 0,5 ;

- Le mélange est dilué jusqu’à une concentration de 23mg de HA/g de produit avec du tampon phosphate PBS ;

- Le mélange est homogénéisé durant 24 h grâce à un agitateur tridimensionnel,

- Le mélange est dialysé ;

- Un hyaluronate de sodium NaHA 4 MDa est ajouté en tant que lubrifiant ;

- La solution aqueuse de chlorhydrate de lidocaïne est ajoutée dans la poche stérile pour obtenir 0,3% en poids de chlorhydrate de lidocaïne par rapport au poids du produit résultant ; - Le produit ainsi obtenu est tamisé puis conditionné en seringue ;

- Enfin, le produit est stérilisé à l’autoclave (température au plateau comprise entre

121 °C et 135°C avec F0 ≥ 15).

Les résultats sont reportés en Table 5 ci-dessous.

Après stérilisation, les prototypes sont analysés, le module élastique G’, l’angle de phase δ et la contrainte au croisement de G’ et G” sont déterminés. Les résultats sont reportés en Table 6 ci-dessous.

*ND : Non Déterminable : le prototype 14 présente une prédominance visqueuse avec un module G” supérieur au module G’ y compris pour de faibles contraintes (confirmée par sa valeur de δ supérieure à 45° ) ; il n’y a donc pas de croisement des courbes de G’ et de G”.

La faible quantité de DVS utilisée pour la modification de l’acide hyaluronique pour la préparation du prototype 14 ne permet pas d’aboutir à la formation d’un gel avec des propriétés mécaniques acceptables pour les applications thérapeutiques, cosmétiques et/ou esthétiques visées par la présente invention. En revanche, dans le cas du prototype 15, grâce à L’utilisation additionnelle de GPTMS, même avec une quantité aussi faible de DVS, un gel souhaitable est formé.

Exemple 4 : Préparation et analyses d’échantillons à base d’acide hyaluronique modifié avec du BDDE et de l’APTES

Le prototype n° 16 est préparé de la manière suivante avec les teneurs en NaOH, NaHA (1 ,5 MDa), BDDE, APTES, EDC et NHS décrites dans la Table 5 :

- Le NaOH puis le hyaluronate de sodium (50mg/g) sont ajoutés dans un pot ;

- Le mélange est placé au réfrigérateur (4 ± 1 °C) et homogénéisé à la spatule pendant 5 minutes toutes les heures durant 4 heures ;

- Le BDDE et le mélange est homogénéisé à la spatule pendant 5 minutes ;

- Le mélange est maintenu à 21 °C pendant 72h, le pH du mélange est d’environ 13 ;

- Une solution d’HCl 1M est ajoutée dans le pot jusqu’à obtenir un pH acide entre 4,5 et 6,5 ;

- L'EDC et le NHS sont ajoutés dans le pot et le mélange est homogénéisé 5 minutes à la spatule puis laissé à réagir à 21 °C pendant 30 minutes ;

- L’APTES est ensuite ajouté goutte à goutte et le mélange est homogénéisé à la spatule puis laissé 15 heures à 21 °C ;

- Le mélange est dilué jusqu’à une concentration de 23mg de HA/g de produit avec du tampon phosphate PBS ;

- Le mélange est homogénéisé durant 24 h grâce à un agitateur tridimensionnel ;

- Le mélange est dialysé ;

- Un hyaluronate de sodium NaHA 4 MDa est ajouté en tant que lubrifiant ;

- La solution aqueuse de chlorhydrate de lidocaïne est ajoutée dans la poche stérile pour obtenir 0,3% en poids de chlorhydrate de lidocaïne par rapport au poids du produit résultant ;

- Le produit ainsi obtenu est tamisé puis conditionné en seringue ;

- Enfin, le produit est stérilisé à l’autoclave (température au plateau comprise entre 121 ° C et 135°C avec F0 ≥ 15).

Les résultats sont reportés en Table 7 ci-dessous.

Après stérilisation, les prototypes sont analysés, le module élastique G’, l’angle de phase δ et la contrainte au croisement de G’ et G” sont déterminés. Les résultats sont reportés dans la Table 8 ci-dessous.

Malgré l’utilisation d’une faible quantité de BDDE, grâce à l’utilisation additionnelle d ’APTES pour la modification de l’acide hyaluronique conformément à la présente invention, le prototype 16 est un gel avec des propriétés mécaniques acceptables pour les applications thérapeutiques, cosmétiques et/ou esthétiques visées par la présente invention.