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Title:
IMPROVEMENTS TO THE METHOD FOR PREPARING HYDROXOCOBALAMIN AND THE HIGH-PURITY SALTS THEREOF
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2014/142640
Kind Code:
A1
Abstract:
The invention relates to a novel method for the production and purification of hydroxocobalamin and the pharmaceutically acceptable salts of same, wherein the method consists in converting cyanocobalamin into hydroxocobalamin by reduction, and the subsequent purification thereof, which produces better yields, prevents degradation of the hydroxocobalamin and substantially improves the purity of same and the salts thereof.

Inventors:
CASAZZA BRUNO, Umberto (Ave. Insurgentes 93, Paseo Virreyes Casa 9, C.P. Tepozotlán, 54600, MX)
AGUIÑAGA MÁRQUEZ, Mario (Calle Jilguero Oriente, L-21 Frac, Lago de Guadalup, C.P. Cuautitlán Izcalli, 54760, ES)
Application Number:
MX2013/000030
Publication Date:
September 18, 2014
Filing Date:
March 13, 2013
Export Citation:
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Assignee:
INTERQUIM, S.A. DE C.V. (Calle Antoine Lavoiser 22, Frac. Parque Industrial CuamatlaC.P. 5430 Cuautitlán, Izcalli, MX)
International Classes:
C07H23/00; A61K31/714; A61P3/02
Foreign References:
US3167539A1965-01-26
CN1323746A2001-11-28
GB934462A1963-08-21
FR2480755A11981-10-23
FR2309564A11976-11-26
Other References:
DATABASE WPI Derwent World Patents Index;
Attorney, Agent or Firm:
PÉREZ PÉREZ, Lorenzo (Leiria No. 37, Col. San Andrés TetepilcoC.P., Mexico D.F., 09440, MX)
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Claims:
REIVINDICACIONES

1 .- Un proceso mejorado para la preparación de hidroxocobalamina y sus sales farmacéuticamente aceptables, caracterizado dicho proceso porque comprende las siguientes etapas:

A). Preparar Sulfito de cobalamina.

B) . Preparar Nitro cobalamina a partir del sulfito de cobalamina.

C) . Obtener hidroxocobalamina por hidrólisis de la nitro cobalamina

D) . Extraer hidroxocobalamina. y

E) Purificar hidroxocobalamina

2.- El proceso según la reivindicación 1 , carcacterizado porque la preparación del sulfito de cobalamina se lleva a cabo haciendo reaccionar cianocobalamina con metabisulfito de potasio en medio acuoso a a una temperatura de 50°C, a un pH entre 3.6 y 4.0; y en un tiempo aproximado de entre 18 y 20 hrs.

3. - El proceso según la reivindicación 2, caracterizado porque el pH se ajusta con ácido acético glacial.

4. - El proceso según la reivindicación 2, caracterizado porque la relación molar de cianocobalamina:sulfito de potasio es de aproximadamente 1 :10.

5. - El proceso según la reivindicación 1 , carcaterizado porque se hace

reaccionar el sulfito de cobalamina con nitrito de sodio en medio acuoso a una temperatura de 50°C, durante 5 a 7 horas y a un pH de aproximadamente 4.

6. - El proceso según la reivindicación 5, caracterizado porque la relación molar de los reactantes es de entre 1 :1 y 2: 1 , nitrito de sodio.sulfito de cobalamina.

7. - El proceso según la reivindicación 1 , carcaterizado porque se hace reaccionar ácido sulfámico y nitrato de cobalamina en agua caliente a 50°C, durante 5 a 7 hr, a un pH entre 1.3 y 1 .7.

8.- El proceso según la reivindicación 7, carcaterizado porque la mezcla de reacción conteniendo hidroxocobalamina cruda se extrae con una mezcla de fenol/cloroformo, según el siguiente procedimiento:

a) se adiciona la mezcla fenol-cloroformo a la mezcla de reacción conteniendo hidroxocobalamina cruda y agitar durante 30 minutos.

b) reposar la mezcla durante 30 minutos.

c) separar la fase inferior orgánica.

d) repetir los pasos a), b) y c) dos veces más

e) separar las fases orgánica y acuosa.

9.- El proceso según la reivindicación 8, carcaterizado porque la

hidroxocobalamina cruda es lavada de acurdo al siguiente procedimiento:

a) , mezclar en un reactor limpio, bajo agitación agua y la fase orgánica, conteniendo la hidroxoclorocobalamina.

b) . agitar durante 30 minutos y reposar.

c). separar las fases, dejar la fase acuosa en el reactor.

d) . extraer la fase acuosa dos veces con una mezcla de fenol-cloroformo, agitando cada vez durante 30 minutos, reposar otros 30 minutos y separar las fases.

e) . mezclar cloroformo, acetona, agua, 6: 1 .5:1 y la fase orgánica, obtenida del paso anterior, agitar la mezcla durante 30 minutos, reposar por otros 30 minutos, y separar la fase acuosa.

10. El proceso según la reivindicación 9, carcaterizado porque la solución acuosa de hidroxocobalamina se lava según el procedimiento:

a) verter en un reactor limpio la fase acuosa del paso anterior y agregar cloroformo, mezclar durante 30 minutos; b) reposar durante 30 minutos más y separar la fase acuosa de la orgánica; c) repetir el lavado de la fase acuosa con cloroformo, agitando durante 30 minutos, seguido de un reposo por otros 30 minutos.

d) separar la fase orgánica y desechar;

e) pasar aire filtrado mediante burbujeo por la fase acuosa durante 4 a 7 horas.

11. -El proceso según la reivindicación 1 , carcaterizado porque la purificación de la hidroxocobalamina se lleva a acbo siguiendo las etapas:

a) cargar en una columna una resina resina de intercambio iónico activada, b) lavar la resina con agua hasta obtener un pH entre 8 y 8.5

c) pasar la solución acuosa de hidroxocobalamina a una velocidad de flujo de 100 ml/min;

d) mantener el frente de la solución por encima del nivel de la resina agregando agua;

e) filtrar la solución por contacto de 0.22 micrómetros (absoluto) y se enjuaga el sistema de filtración con agua.

12. - Un proceso mejorado para la preparación del acetato de hidroxocobalamina caracterizado dicho proceso porque comprende las siguientes etapas:

a) mezclar una solución purificada y filtrada de hidroxocobalamina con ácido acético glacial, ajustando el pH de la solución a 4.15 - 4.25;

b) adicionar acetona con agitación durante 4 horas y reposar por 2 horas;

c) filtrar la mezcla en Büchner utilizando papel filtrante de 4.0 micrómetros. d) exprimir la torta por presión a vacío.

e) llevar a cabo un secado final a vacío, 500 mm de Hg, a una temperatura de 34°C durante 1 a 5 horas.

13. - El proceso de la revindicación 12 caracterizado porque se hidrata el acetato de hidroxocobalamina.

14. - El proceso de la revindicación 13 caracterizado porque la hidratación se lleva a cabo en un horno de charolas a una temperatura entre 30° a 32°C durante 20 minutos en presencia de agua calientea 85°C y a vacío.

15. - El proceso de la revindicación 12 caracterizado porque el sólido obtenido contiene menos de 5000 ppm de acetona (V.B.H. mayor del 85%), tiene una pureza promedio 99.01 %; promedio total de impurezas 0.9887%; promedio de valoración base seca 99.17%; promedio de rendimiento crudo 102.92%; promedio de rendimiento de activo: 94.18%.

16. - Un proceso mejorado para la preparación del sulfato de hidroxocobalamina caracterizado dicho proceso porque comprende las siguientes etapas:

a) mezclar una solución purificada y filtrada de hidroxocobalamina con ácido sulfúrico al 4.5 %, ajustando el pH de la solución a 4. 5 - 4.25;

b) adicionar acetona con agitación durante 5 - 6 horas y reposar por 30 min.; c) filtrar la mezcla en Büchner utilizando papel filtrante de 4.0 micrometros.

d) exprimir la torta por presión a vacío.

e) llevar a cabo un secado final a vacío, 500 mm de Hg, a una temperatura de 34°C durante 1 a 5 horas.

17.- El proceso de la revindicación 16 caracterizado porque se hidrata el sulfato de hidroxocobalamina.

18.- El proceso de la revindicación 17 caracterizado porque la hidratación se lleva a cabo en un horno de charolas a una temperatura entre 30° a 32°C durante 20 minutos en presencia de agua calientea 85°C y a vacío.

19. - El proceso de la revindicación 16 caracterizado porque el sólido obtenido contiene menos de 5000 ppm de acetona, tiene una pureza promediomayor de 99.01 %; promedio total de impurezas menor de 1.0%; promedio de valoración base seca mayor de 99-0%; promedio de rendimiento crudo mayor de 100%; promedio de rendimiento de activo: 94.18%.

20. - Un proceso mejorado para la preparación del clorhidrato de

hidroxocobalamina caracterizado dicho proceso porque comprende las

siguientes etapas:

a) mezclar una solución purificada y filtrada de hidroxocobalamina con ácido clorídrico al 9%, ajusfando el pH de la solución a 4.1 -2.1 ;

b) adicionar acetona con agitación durante 4 horas y reposar por 2 horas;

c) filtrar la mezcla en Büchner utilizando papel filtrante de 4.0 micrometros.

d) exprimir la torta por presión a vacío.

e) llevar a cabo un secado final a vacío, 500 mm de Hg, a una temperatura de 34°C durante 1 a 5 horas.

21 . - El proceso de la revindicación 19 caracterizado porque se hidrata el clorhidrato de hidroxocobalamina.

22. - El proceso de la revindicación 20 caracterizado porque la hidratación se lleva a cabo en un horno de charolas a una temperatura entre 30° a 32°C durante 20 minutos en presencia de agua calientea 85°C y a vacío.

23. - El proceso de la revindicación 19 caracterizado porque el sólido obtenido contiene menos de 5000 ppm de acetona, tiene una pureza promedio mayor de 99.5%; promedio total de impurezas menor de 0.5%; promedio de valoración base seca mayor de 98.0%; promedio de rendimiento crudo mayor de 100%; promedio de rendimiento de activo: 94.18%.

Description:
MEJORAS AL PROCESO DE PREPARACIÓN DE HIDROXOCOBALAMINA Y SUS SALES DE ALTA PUEZA CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se relaciona con un proceso novedoso para la producción y purificación de hidroxocobalamina, así como de las sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

ANTECEDENTES

Hidroxocobalamina (OHCbl o B12a) es una forma natural, o vitamer, de la vitamina B12, es un miembro básico de la familia de compuestos de la cobalamina. Hidroxocobalamina es la forma de la vitamina B12 producida por muchas bacterias que se utilizan para producir comercialmente la vitamina. Al igual que otras formas de vitamina B12, hidroxocobalamina tiene un color rojo intenso. No es una forma que se encuentra normalmente en el cuerpo humano, pero se convierte fácilmente en el cuerpo a formas utilizables de la coenzima de la vitamina B12. Farmacéuticamente, la hidroxocobalamina generalmente se produce como una solución estéril inyectable y se utiliza para el tratamiento de la deficiencia de la vitamina y también (debido a su afinidad por iones cianuro) como tratamiento para la intoxicación con cianuro. Experimentalmente, ha sido probado como un depredador del óxido nítrico.

La vitamina B 2 es un término que refiere a un grupo de compuestos llamados cobalaminas que están disponibles en el cuerpo humano en una variedad de formas principalmente formas interconvertibles. Junto con el ácido fólico, las cobalaminas son cofactores esenciales necesarios para la síntesis de ADN en las células donde se producen la replicación cromosómica y la división, en particular la médula ósea y células mieloides. Como cofactor, las cobalaminas son esenciales para dos reacciones celulares: (1 ) activación de la metilmalonilcoenzima mitocondrial, para una conversión de mutación de ácido metilmalónico (MMA) a succinato, que enlaza lípidos y metabolismo de los carbohidratos y (2) activación de la metionina sintasa, que limita la velocidad paso en la síntesis de metionina de homocisteína y 5-metiltetrahidrofolato.

En la fabricación de cobalaminas por fermentación la sustancia producida normalmente es cianocobalamina, sin embargo se ha descubierto que la hidroxocobalamina puede ser la sustancia de elección para aplicaciones médicas por lo que resulta deseable la fabricación de esta sustancia en lugar de cianocobalamina.

Sin embargo, la producción directa de hidroxocobalamina por fermentación tiene ciertas dificultades, particularmente en relación con el aislamiento de la sustancia del medio de fermentación, así que es preferible primero producir cianocobalamina y posteriormente convertirlo a hidroxocobalamina.

Previamente se ha propuesto convertir cianocobalamina a hidroxocobalamina por reducción, ya sea por hidrogenación o reducción química seguida de reoxidación, pero estos métodos dan lugar a rendimientos relativamente pobres acompañados de degradación indeseable de la sustancia deseada, también se ha propuesto efectuar la conversión por exposición de cianocobalamina a luz visible bajo condiciones ligeramente ácidas acompañado de aireación, sin embargo, esta conversión es lenta e inadecuada, además de que suele derivar en la degradación del producto, para su utilización a escala comercial.

Normalmente el aislamiento y purificación de hidroxocobalamina obtenida mediante el procedimiento de fermentación es muy difícil debido a que se presenta en concentraciones muy bajas entre diversas impurezas y porque hidroxocobalamina es altamente inestable y reactiva. Por ejemplo, la patente GB 1012360, menciona: "el caso donde la hidroxocobalamina se produce directamente de un caldo de fermentación es muy difícil porque hidroxocobalamina es altamente reactiva y se une fácilmente a otros iones presentes en una solución... ".

El proceso de fermentación comprende los pasos de conversión de la cianocobalamina a hidroxocobalamina se describe en la Patente de los Estados Unidos. N° 3448099.

Cuando la Vitamina B12 es producido industrialmente por fermentación microbiana, usando casi exclusivamente especies de Propionibacterium y Pseudomonas denitrificans ( Spalla et al., 1989 "Producción microbiana de vitamina B12", en: Biotech. Vitamins, Pigments and Growth factors, E. J. Van- damme ed., Elsevier, Londres, Nueva York, págs. 257-284). Los procesos que utilizan especies Propionibacterium tienen la ventaja que permiten formular vitamina B12 natural junto con la biomasa en la que se produce, como se describe en EP-A-0 824 152. Estos procesos para evitar la conversión de la vitamina B12 natural a la forma de cianocobalamina, incluyen procesos químicos de cianación seguido por pasos de extracción y purificación con solventes orgánicos. El paso de conversión química y cualquier posterior purificación hace que este proceso de producción sea caro, inseguro y perjudicial para los operadores. Objeto de la Invención

Es objeto de la presente invención proporcionar un proceso de obtención de hidroxocobalamina de alta pureza, también es objeto proporcionar un proceso mejorado para la obtención de hidroxocobalamina a partir de cianocobalamina. Otro objeto de la presente invención proporcionar mejoras al proceso de conversión de cianocobalamina en hydroxocobalamina que sea conveniente a escala comercial y proporcione un menor riesgo de degradación del producto. Tradicionalmente se ha convertido la cianocobalamina a hidroxocobalamina, convirtiendo la cianocobalamina a sulfitocobalamina con un exceso de sulfito (hasta 10 veces sobre la base mol a mol), pasar este último a nitritocobalamina y a partir del mismo obtener la hidtoxocobalamina, tales conversiones puede efectuarse con poca degradación de la cobalamina y obtener un excelente rendimiento que puede llegar al 95%.

Según la invención, por lo tanto, ofrece un proceso para convertir cianocobalamina a hidroxocobalamina que comprende reaccionar la cianocobalamina con iones de sulfito para formar sulfitocobalamina y hacerla reaccionar con iones nitrito para formar nitritocobalamin que posteriormente se descompone el grupo nitroso para formar hidroxocobalamina.

Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar un proceso de purificación de hidroxocobalamina, para obtener un producto de alta pureza.

Aún otro objeto de la invención es porporcionar las sales framacéuticamente aceptables de hidroxocobalamina.

Finalmente, es objeto de la presente invención proveer un proceso de obtención de hidroxocobalamina y sus sales que mejore la relación pureza-rendimiento que se ha logrado en la actualidad. Descripción del proceso:

El proceso mejorado de obtención de hidroxocobalamina objeto de la presente invención comprende las siguientes etapas:

A) . Preparación de Sulfito de cobalamina.

A 115 litros de agua caliente a una temperatura de 50°C, se agregan lentamente bajo agitación 2.27 mol de cianocobalamina durante 10 minutos. Se mantiene la agitación hasta disolución total de la cianocobalamina.

A la solución anterior se agrega durante 10 minutos 14 litros de una solución de 2.08 molar de metabisulfito de potasio caliente a 50°C. Durante esta operación se inyecta a la mezcla de reacción, mediante burbujeo aire comprimido, esta operación se realiza desde el fondo del reactor.

Se agregan 4.6 litros de ácido acético glacial durante 30 minutos y bajo agitación, una vez concluido este tiempo se agregan lentamente 4.6 litros de ácido acético glacial. Habiendo transcurrido 8 horas del tiempo de reacción se agrega 2.3 Lt una solución caliente a 50°C de 1 .56 M de metasulfito metabisulfito de potasio. El pH de la mezcla se mantiene entre 3.8 y 4, mediante adición de ácido acético glacial.

Después de 12 h de reacción se agregan 1 .7 Lt de una solución 1 .21 M de metabisulfito de Potasio manteniendo el rango de pH 3.8-4.0.

Se mantiene la mezcla de reacción en agitación durante 18 a 20 hrs.

B) . Preparación de Nitro cobalamina. i . Se preparan 13 Lt de una solución 3.9 M de nitrito de sodio en agua caliente a 50°C. 2. La disolución anterior se agrega lentamente y con agitación durante 10 minutos a la disolución de sulfito de cobalamina obtenida en el paso anterior.

3. Se agita la mezcla durante 5 a 7 horas. El pH de la mezcla al final del tiempo de la reacción es de aproximadamente 4.

C). Obtención de Hidroxocobalamina

1 . Se preparan 17 Lt de una solución de 2.9 M de ácido sulfámico en agua caliente a 50°C y se adiciona lentamente durante 15 minutos a la solución de nitrocobalamina obtenida en la etapa anterior, evitando la formación de espuma.

2. Se mantiene bajo agitación la mezcla de reacción durante 5 a 7 hr, el pH de la mezcla se mantiene entre 1 .3 y 1 .7.

D). Extracción y purificación de hidroxocobalamina.

La mezcla de reacción conteniendo hidroxocobalamina cruda se procede a su extracción con una mezcla de fenol/cloroformo, de acuerdo al siguiente procedimiento:

a) se adiciona 18.5 Lt de mezcla fenol-cloroformo a la mezcla de reacción conteniendo hidroxocobalamina cruda y se agita durante 30 minutos.

b) se deja reposar la mezcla durante 30 minutos.

c) se separa la fase inferior orgánica.

d) se repiten los pasos a), b) y c) por dos veces más adicionando en la segunda extracción 9 Lt y la tercera 3.5 Lt de mezcla fenol-cloroformo. En caso de que la solución acuosa muestre una coloración rosa clara se efectúan hasta dos extracciones más con 2.0 y 1.0 Lt de mezcla fenol-cloroformo o cuando dicha coloración desaparezca.

e) se juntan las fases orgánicas y se desecha la fase acuosa.

Lavado de hidroxocobalamina cruda a) . En un reactor limpio se mezclan bajo agitación 115 Lt de agua y la fase orgánica, 3: 1 (v/v) conteniendo la hidroxocobalamina.

b) . Se mantiene bajo agitación durante 30 minutos y al final de este tiempo se deja reposar la misma.

c). Se separan las fases, la fase acuosa se deja en el reactor.

d) . la fase acuosa se extrae dos veces con 9.0 y 7.0 Lt de mezcla fenol- cloroformo, agitando cada vez durante 30 minutos, reposar otros 30 minutos y separar las fases.

e) . Si la fase acuosa no presenta una coloración rosada clara se efectúan dos extracciones más con 3.0 y 1 .5 Lt de la mezcla de fenol-cloroformo, siguiendo el mismo procedimiento antes descrito.

f) . En un reactor lavado y secado se vierten 110 Lt de cloroformo, 27 Lt de acetona, 18 Lt de agua (6: 1 .5:1 v/v) y la fase orgánica, 7: 1 (v/v), obtenida del paso anterior, agitando la mezcla durante 30 minutos, después se deja reposar por otros 30 minutos, y se separa la fase acuosa.

g) La fase orgánica se extrae dos veces más con 9.0 y 2.5 Lt de agua siguiendo el procedimiento antes descrito.

Lavado de la solución acuosa de Hidroxocobalamina.

a) Verter en un reactor limpio la fase acuosa del paso anterior y agregar entre 40-50 Lt de cloroformo, mezclar por agitación durante 30 minutos;

b) reposar durante 30 minutos más y separar la fase acuosa de la orgánica; c) Se repite el lavado de la fase acuosa con 40-50 Lt de cloroformo, agitando durante 30 minutos, seguido de un reposo por otros 30 minutos.

d) separar la fase orgánica y desechar; e) pasar aire filtrado mediante burbujeo por la fase acuosa durante 4 a 7 horas, hasta eliminar el olor del cloroformo.

E) Purificación de hidroxocobalamina

a) en una columna de capacidad entre 20 y 40 litros se hacen pasar 5 litros de agua;

b) cargar la resina de intercambio iónico activada, del tipo Anionica IRA-458. c) lavar la resina con agua hasta obtener un pH entre 8 y 8.5 y se obtenga una prueba negativa de fenoftaleina;

d) se pasa la solución acuosa de hidroxocobalamina a una velocidad de flujo de 100 ml/min;

e) se mantiene el frente de la solución arriba del nivel de la resina agregando agua;

f) una vez que pasa toda la solución roja de hidroxocobalamina se lava la resina con agua, este lavado se reúne con el eluido principal;

g) se filtra la solución por contacto de 0.22 micrómetros (absoluto) y se enjuaga el sistema de filtración con agua.

F) Preparación del acetato de hidroxocobalamina

a) en un reactor se vierte la solución purificada y filtrada de hidroxocobalamina; b) se ajusta el pH de la solución a 4.1 -2.1 con ácido acético glacial;

c) se adiciona acetona por un periodo de 3.0 a 3.5 h, al termino de la adición se deja en agitación durante 4 horas y en reposo por 2 horas;

d) se filtra la mezcla en Büchner utilizando papel filtrante de 4.0 micrómetros. e) se exprime la torta por presión a vacío.

f) se seca al vacío durante 20 minutos a Temperatura menor a 32°C g) se repite el ciclo de calentamiento hasta que no se detecte olor a acetona al abrir el secador;

h) el secado final se lleva a acabo al vacío, 500 mmHg, a una temperatura de 34°C durante 1 a 5 horas.

Hidratación del acetato de hidroxocobalamina

a) El solido se distribuye en charolas de un secador;

b) Se calienta el secador a una temperatura de 30-32°C, y se colocan refractarios conteniendo agua a 85°C, se introducen las charolas con el sólido, se cierra el secador y se mantiene la temperatura durante 20 minutos;

c) finalizados los 20 minutos se aplica vacío al secador por otros 20 min al finalizar los mismos se ventea el secador.

d) se abre el secador y se homogeneiza el producto sólido.

e) Se repiten los pasos b) a d) hasta que no se detecte olor a acetona al abrir el secador.

f) Finalizada la hidratación y eliminada la acetona se seca el sólido a una temperatura no mayor a 34°C, a una presión no mayor de 500 mmHg, durante 2 a 5 hrs.

g) El sólido se pasa por malla No. 30.

El sólido obtenido contiene menos de 5000 ppm de acetona (V.B.H. mayor del 85%), tiene una pureza promedio 99.01 %; promedio total de impurezas 0.9887%; promedio de valoración base seca 99.17%; promedio de rendimiento crudo 102.92%; promedio de rendimiento de activo: 94. 8%.

G) Preparación del clorhidrato de hidroxocobalamina

a) en un reactor se vierte la solución purificada y filtrada de hidroxocobalamina obtenida del paso E); b) se ajusta el pH de la solución a 4.15 - 4.25 con ácido clorhídrico al 9.0%; c) se adiciona acetona con agitación durante 1 - 2 horas, después del cual se deja reposar por 30 min;

d) se filtra la mezcla en Büchner utilizando papel filtrante de 4.0 micrometros. e) se exprime la torta por presión a vacío.

Hidratación del clorhidrato de hidroxocobalamina

a) El solido se distribuye en charolas de un secador;

b) Se calienta el secador a una temperatura de 30-32°C, y se colocan refractarios conteniendo agua a 85°C, se introducen las charolas en el secador con el sólido, se cierra el secador y se mantiene la temperatura durante 20 minutos;

c) finalizados los 20 minutos se aplica vacío al secador por otros 20 min al finalizar los mismos se ventea el secador.

d) se abre el secador y se homogeneiza el producto sólido.

e) Se repiten los pasos b) a d) hasta que no se detecte olor a acetona al abrir el secador.

f) Finalizada la hidratación y eliminada la acetona se seca el sólido a una temperatura no mayor a 34°C, a una presión no mayor de 500 mm Hg, durante 2 a 5 hrs.

g) El sólido se pasa por malla No. 30.

El sólido obtenido contiene menos de 5000 ppm de acetona , tiene una pureza promedio 99.5%; promedio total de impurezas no mayor de 0.5%; promedio de valoración base seca mayor de 98.0%; promedio de rendimiento crudo mayor de 00 %; promedio de rendimiento de activo: 94.18%. H) Preparación del sulfato de hidroxocobalamina

a) en un reactor se vierte la solución purificada y filtrada de hidroxocobalamina; b) se ajusta el pH de la solución a 4.15-2.25 con ácido sulfúrico al 4.5%;

c) se adiciona acetona con agitación durante 5 - 6 horas, después del cual se deja reposar por 30 min

d) se filtra la mezcla en Büchner utilizando papel filtrante de 4.0 micrometros. e) se exprime la torta por presión a vacío.

Hidratación del sulfato de hidroxocobalamina

a) El solido se distribuye en charolas de un secador,

b) Se calienta el secador a una temperatura de 30-32°C, y se colocan refractarios conteniendo agua a 85°C, se introducen las charolas en el secador, se cierra el secador y se mantiene la temperatura durante 20 minutos;

c) finalizados los 20 minutos se aplica vacío al secador por otros 20 min al finalizar los mismos se ventea el secador.

d) Se abre el secador y se homogeneiza el producto sólido.

e) Se repiten los pasos b) a d) hasta que no se detecte olor a acetona al abrir el secador.

f) Finalizada la hidratación y eliminada la acetona se seca el sólido a una temperatura no mayor a 34°C, a una presión no mayor de 500 mm HG, durante 2 a 5 hrs.

g) El sólido se pasa por malla No. 30.

El sólido obtenido contiene menos de 5000 ppm de acetona, tiene una pureza promedio mayor a 99.00%; promedio total de impurezas menor a 1.00%; promedio de valoración base seca mayor a 97%; promedio de rendimiento crudo mayor a 100 %; promedio de rendimiento de activo: 94. 8%.




 
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