MÉTODO INDUSTRIAL DE SÍNTESIS DE NANOPARTÍCULAS METÁLICAS DE

TAMAÑO GRADUABLE

SECTOR TÉCNICO

La presente invención se encuadra en el ámbito de la Química Inorgánica y tiene una aplicación directa en el sector sanitario. De forma más específica, proporciona un método biosostenible para sintetizar nanopartículas metálicas de tamaño graduable, en particular nanopartículas de un metal u óxido metálico con características antimicrobianas (ej: Ag, Au, Pt, Cu, Cu ₂ 0, CuO, ZnO). Así, las nanopartículas obtenidas por este método pueden utilizarse para tratar y reducir agentes patógenos (tales como virus, hongos y bacterias) con incidencia en la salud humana y animal, en la agricultura y, en general, en la Naturaleza.

Las nanopartículas metálicas obtenidas por el método de la presente invención son micelares, lo que supone una ventaja significativa, ya que garantiza su biodisponibilidad y, en consecuencia, su actividad antimicrobiana in vivo.

ESTADO DE LA TÉCNICA

En el estado de la técnica se conocen las propiedades antimicrobianas de metales tal como, por ejemplo, plata, oro, platino y cobre; así como de diversos óxidos metálicos tal como Cu ₂ 0, CuO, ZnO.

Por otro lado, el campo de la nanotecnología está creciendo a pasos agigantados debido a la aparición de los denominados nanomateriales, en particular nanopartículas inorgánicas (NP) con funciones únicas y propiedades fisicoquímicas que son dependientes del tamaño y de su geometría. El potencial de las nanopartículas inorgánicas se ha explorado en aplicaciones de nanomedicina, administración de fármacos y dispositivos biomédicos, cosmética, electrónica, así como en el sector energético y la protección ambiental.

En particular, las nanopartículas metálicas o de óxidos metálicos (NP-M) tienen propiedades físicas y químicas distintivas, por ejemplo, alta conductividad térmica y eléctrica, dispersión Raman mejorada en la superficie, estabilidad química, actividad catalítica y comportamiento óptico no lineal. Debido a estas propiedades, las NP-M pueden utilizarse en una amplia gama de aplicaciones en la industria, en particular en la preparación de productos de consumo (por ejemplo, tintas, plásticos, envases de alimentos, jabones, pastas, alimentos y textiles) y en sectores biomédicos, especialmente debido a su eficacia contra los microbios (bacterias, hongos y virus), su actividad antiinflamatoria, y su capacidad de curación de heridas y quemaduras.

Otra ventaja adicional de las NP-M es que pueden utilizarse en diversas formas (líquida o sólida). Por ejemplo, se pueden mezclar las nanopartículas con material sólido para la síntesis de polímeros, permitiendo la obtención de esmaltes, recubrimientos o pinturas; se pueden encontrar suspendidas en materiales tal como jabón; o en la composición de telas.

En relación con la síntesis de nanopartículas metálicas, en el estado de la técnica existen descritos métodos químicos, físicos, fotoquímicos y biológicos para sintetizar este tipo de nanopartículas. Cada método tiene sus ventajas y desventajas, comúnmente asociadas a cuestiones relativas al procedimiento (en particular, coste de producción y escalabilidad), o a las características de las nanopartículas obtenidas (en particular, estabilidad, tamaño y concentración).

Por lo general, se prefieren los métodos químicos debido a la facilidad de síntesis. Estos métodos se basan generalmente en tres factores: (a) un precursor del metal; (b) un agente reductor; y (c) un agente estabilizador. La síntesis y geometría de las nanopartículas metálicas obtenidas por este método se basa en la nucleación y posterior apilamiento de los núcleos de metal.

Junto con los métodos químicos, se han descrito varias técnicas físicas alternativas. En particular, se han implementado procesos de evaporación y condensación. Uno de los inconvenientes más comunes de estos métodos es el mayor requerimiento de energía y el tiempo requerido. De forma paralela, también se ha desarrollado un procedimiento de descomposición térmica en el que, mediante la formación de un complejo entre Ag y oleato a temperatura elevada, se obtienen NP-Ag con un tamaño de partícula inferior a 10 nm. Otra técnica muy común es la electrólisis, en la cual se emplean electrodos de plata de alta pureza, superior a 99,99%. Sin embargo, se considera que el coste es el principal obstáculo para adoptar dicho método, ya que necesita consumibles costosos.

En las técnicas fotoquímicas, las nanopartículas metálicas se sintetizan mediante fotorreducción de precursores o iones metálicos, utilizando intermediarios fotoquímicamente activados. En uno de estos métodos, las NP-M se consiguen utilizando radiación UV, y una solución acuosa con el tensioactivo no iónico Tritón-X 100, compuesto químico que actúa como agente estabilizante. Este surfactante ayuda a mantener la estabilidad, monodispersión y tamaño uniforme de las NP-M sintetizadas. En otro método que utiliza una técnica fotoquímica, las nanopartículas de Ag se sintetizan a partir de una solución acuosa de álcali que contiene AgN0 ₃ y quitosano carboximetilado (CMCTS), usando radiación UV. En este método se utiliza CMCTS como agente estabilizante de las partículas, con un diámetro inferior a 10 nm.

De forma análoga a los métodos químicos, la síntesis biológica de nanopartículas metálicas y, en particular, de NP-Ag también requiere un precursor (preferentemente AgN0 ₃ ), un agente reductor y un agente estabilizador o de capping, por ejemplo: PVP (polivinil pirrolidona) o PVA (alcohol polivinílico), para evitar la aglomeración de las partículas que se obtienen. Sin embargo, en este tipo de métodos, las nanopartículas se sintetizan utilizando principios activos obtenidos a partir de plantas, algas, levaduras, hongos y/o bacterias como agentes reductores y estabilizadores. El tamaño de las NP-Ag obtenidas por estos métodos puede llegar a ser inferior a 15 nm, con características de dispersión uniforme, forma esférica, estabilidad mejorada y gran área superficial. Este procedimiento es económico, reproducible y consume menos energía frente a los convencionales.

En particular, en la solicitud de patente W02005120173 A2 se describe un método para la obtención de nanopartículas de plata (NP-Ag) utilizando un extracto de tejido vegetal. Sin embargo, el procedimiento descrito en este documento presenta varios inconvenientes. El primero de ellos es que la concentración de las NP-Ag que se obtiene en este método es muy reducida (no supera 6 ppm), lo que inviabiliza la explotación comercial de este procedimiento, ya que es necesaria una concentración mínima de 100 ppm para que el método sea competitivo. El segundo inconveniente viene derivado del hecho de que el tiempo de reacción en el método que se describe en este documento se puede prolongar durante varias horas. Por último, muchas de las plantas que se mencionan en la solicitud W02005120173 son de difícil acceso, lo que dificulta que el método descrito pueda llevarse a cabo de forma industrial.

Por otro lado, en la publicación científica“Synthesis and characterization of novel silver nanoparticles using Chamaemelum nobile extract for antibacterial application", Hoda Erjaee et al., 2017, Adv. Nat. Sci: Nanosci. Nanotechnol. 8 025004, se describe un método en el que se usa por primera vez la camomila, Chamaemelum nobile, para obtener NP-Ag. Sin embargo, los tiempos de reacción descritos en esta publicación superan las 8 horas, yendo incluso a las 16 y las 24 horas. Este inconveniente es importante para garantizar el éxito de la escalabilidad industrial.

En la publicación “Green Tea as Biológica! System for the Synthesis of Silver Nanoparticles", Elbossaty WF, J Biotechnol Biomater 7:269., se propone un método similar al anterior, pero adolece de los mismos inconvenientes: un tiempo excesivo de reacción y una muy reducida concentración de NP-Ag en ppm en el medio.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona un método de síntesis de nanopartículas metálicas, preferentemente NP-Ag, con estructura micelar y dispersadas en un medio acuoso. En el método que aquí se describe la síntesis de nanopartículas metálicas tiene lugar muy rápidamente, preferentemente en un periodo inferior a 10 min, y permite obtener una concentración de nanopartículas en solución mínimo de 100 ppm. En consecuencia, el método de la presente invención permite la obtención de nanopartículas metálicas, en particular NP-Ag, a escala industrial.

Tal como se ha mencionado anteriormente, las nanopartículas que se obtienen por el método de síntesis que se describe en este documento presentan una estructura micelar. Esto supone una gran ventaja de cara a la utilización de las nanopartículas metálicas como agentes antimicrobianos, ya que aumenta significativamente su biodisponibilidad. De forma general, se prefiere que los compuestos antimicrobianos (CAM) sean hidrosolubles, ya que así las ventajas que proporcionan son significativamente mayores, al permitir una absorción completa por parte del huésped. Así, un primer aspecto de la presente invención es un método de obtención de nanopartículas metálicas que comprende:

a) obtener una infusión de al menos una planta seleccionada del grupo que consiste en: Camellia sinensis (té), Tilia (tila), Chameamelum nobile (manzanilla), Equisetum arvense (cola de caballo), y una combinación de las anteriores;

b) mezclar la infusión obtenida en la etapa anterior con un precursor que contiene al menos un elemento metálico, en un medio acuoso;

c) ajustar el pH de la mezcla entre 5 y 12, y la temperatura igual o inferior a 60°C; y d) aplicar una radiación UV a la mezcla, preferentemente entre 400 nm y 320 nm, y agitar mediante ultrasonidos hasta obtener una solución de nanopartículas metálicas, preferentemente de metal u óxido metálico, que comprende una cantidad igual o superior a 100 ppm de nanopartículas metálicas y una estructura micelar.

A diferencia de otros métodos descritos anteriormente, el método de obtención de nanopartículas metálicas que aquí se describe puede tener lugar en un medio acuoso, preferentemente agua, sin necesidad de añadir alcoholes tal como, por ejemplo, alcohol polivinílico, así como tampoco es necesaria la utilización de mezclas de alcohol/agua para que tenga lugar la síntesis de las nanopartículas. Es más, los inventores han observado que la utilización de agua como solvente mejora la estabilidad de las soluciones y la estructura micelar, mientras que la presencia de alcohol favorece la formación de estructuras coloidales.

Tal como se ha mencionado anteriormente, las nanopartículas obtenidas por el método que aquí se describe presentan una estructura micelar. Esta estructura se mantiene estable y sin la formación de coloides o suspensiones, inclusive cuando se trabaja con concentraciones de nanopartículas metálicas de hasta 2000 ppm, preferentemente entre 500 y 750 ppm. Adicionalmente, el método permite controlar el tamaño de nanopartículas metálicas en función del tiempo que se mantiene la iluminación UVA y la aplicación de los ultrasonidos. A mayor tiempo de exposición, mayor tamaño de las nanopartículas.

La utilización de forma combinada de radiación UV y ultrasonidos reduce significativamente_el tiempo de reacción, permitiendo la obtención de nanopartículas metálicas en un periodo inferior a 10 min, en particular entre 2 y 5 min. Así, el procedimiento que aquí se describe permite obtener nanopartículas metálicas en solución de forma estable y con estructura micelar incluso para una concentración de nanopartículas en solución de 2000 ppm. En particular, los inventores han observado que en estas condiciones el método de la presente invención permite obtener estructuras micelares estables en el tiempo, durante al menos 15 días, conservadas a 4°C y en atmósfera inerte.

A no ser que se indique expresamente lo contrario, en la presente invención debe entenderse que la concentración de nanopartículas en solución se expresa en peso/volumen, es decir, los ppm indicados corresponden a los miligramos de nanopartículas metálicas por litro de solución (mg/L).

Adicionalmente, el método de obtención de nanopartículas metálicas que aquí se describe puede comprender una etapa adicional, por ejemplo para estudios de caracterización, donde la solución de nanopartículas metálicas de la etapa d) se somete a un tratamiento para eliminar el solvente, por ejemplo, liofilización, simple evaporación o eliminación a vacío, para obtener nanopartículas metálicas en estado sólido con un tamaño de partícula igual o inferior a 400 nm, y más preferentemente inferior a 50 nm.

En el método de la presente invención pueden obtenerse NP-M con diferente morfología y diferente tamaño de partícula, sobre todo cuando se trabaja con NP-Au debido a la variabilidad característica de este tipo de nanopartículas. Esto se debe a que, con el tiempo, algunas de las NP pueden estabilizarse aumentando de tamaño.

Las nanopartículas metálicas obtenidas en el procedimiento que aquí se describe pueden ser nanopartículas de metales u óxidos metálicos con propiedades antimicrobianas o antitumorales. Preferentemente, nanopartículas de Ag, Au, Pt, Cu, Cu ₂ 0, CuO, ZnO o una combinación de las anteriores.

El método que se propone en la presente invención utiliza una infusión de al menos una planta seleccionada del grupo que consiste en Camellia sinensis (té), Tilia (tila), Chameamelum nobile (manzanilla), Equisetum arvense (cola de caballo), y una combinación de las anteriores. El uso de cualquiera de estas cuatro plantas resulta ventajoso debido a su inocuidad, facilidad de acceso comercial y por su especial relevancia a la hora de conseguir la síntesis de las nanopartículas. La etapa a) del método que aquí se describe puede comprender realizar una infusión, procedimiento también denominado extracción, de una o más de las plantas especificadas anteriormente, bien por separado o mezcladas entre sí en cualquier proporción. Para realizar esta infusión se puede utilizar cualquiera parte de la planta, es decir, tallo, hojas e incluso la raíz o, alternativamente, se puede utilizar la planta en su totalidad. El denominador común de estas plantas es que comprenden alcaloides, terpenos, flavonoides y polifenoles en general que intervienen de forma decisiva en el proceso de reducción de los iones del metal correspondiente (por ejemplo: de Ag ⁺ a Ag metálica), así como en la estabilización de las nanopartículas obtenidas. En particular, los polifenoles se oxidan formando quinonas que se absorben en la superficie de las NP, contribuyendo de forma decisiva a su estabilización.

La infusión o extracción de la etapa a) se puede obtener mezclando una o más de las plantas especificadas anteriormente en un medio acuoso, calentando a ebullición y manteniendo en agitación durante un periodo mínimo de 10 min. La concentración de la planta en la mezcla a infusionar puede variar, siendo preferible que esta concentración se encuentre en torno a 50 g/l, en particular entre 30 g/l y 70 g/l, expresado en gramos de planta respecto al volumen de solvente añadido para obtener la mezcla a infusionar. Preferentemente el solvente utilizado es agua, no siendo necesario ni recomendable la adición de alcohol o mezclas de agua/alcohol. Se ha comprobado que el empleo de solo agua mejora la estabilidad de las soluciones y la estructura micelar de las nanopartículas en el tiempo, mientras que la presencia de alcohol/agua favorece la formación de estructuras coloidales. De esta forma se obtiene la disolución de los principios activos de la planta en el agua. La infusión final, una vez filtrada o centrifugada, se puede utilizar de forma separada o mezclada con una o más infusiones de otra de las plantas mencionadas.

Adicionalmente, el precursor que contiene al menos un elemento metálico puede ser una sal inorgánica (preferentemente, un nitrato o cloruro) que contiene el catión metálico correspondiente. En el caso particular de la obtención de nanopartículas de cobre, los inventores han observado que la utilización de sulfato de cobre como precursor no da buenos resultados, mientras que la utilización de nitrato de cobre sí permite obtener nanopartículas de cobre, obteniéndose una mezcla de Cu, Cu ₂ 0 y CuO. Algo similar ocurre en relación con la obtención de nanopartículas de zinc, por lo que también se prefiere la utilización de nitrato de zinc para obtener las nanopartículas, en este caso nanopartículas de ZnO. Por otro lado, para obtener nanopartículas de oro o de platino (propiedades antitumorales), se prefiere utilizar como precursor un cloruro del metal correspondiente, en particular, sales de AuCI ₃ xH ₂ 0 y Na ₂ PtCI ₄ .

La cantidad de precursor metálico se añade en función de la concentración de nanopartículas metálicas en solución que se pretende obtener, preferentemente en una relación molar 1 :1 entre precursor y nanopartículas metálicas. Por ejemplo, para obtener aproximadamente 1 litro de una solución con 500 ppm de NP-Ag, se puede utilizar 780 mg de AgN0 ₃ .

Preferentemente, el método de la presente invención comprende mezclar una solución acuosa que comprende el precursor metálico, con la infusión obtenida de al menos una planta seleccionada del grupo que consiste en Camellia sinensis (té), Tilia (tila), Chameamelum nobile (manzanilla), Equisetum arvense (cola de caballo) y una combinación de las anteriores.

En realizaciones particularmente preferidas, el método que aquí se describe comprende utilizar 50 mi del extracto de la infusión de la planta (50 g/l) y, una vez filtrado, adicionarlo gota a gota a una solución que comprende la cantidad de precursor metálico necesario (a relación molar 1 :1) para obtener 1 litro de 500 ppm de NP-M. De esta forma se dispone de un extracto suficientemente concentrado para producir las nanopartículas metálicas estabilizadas.

En realizaciones preferidas, el método de la presente invención comprende ajustar el pH de la mezcla entre 7 y 10, antes de la aplicación simultánea de radiación UV y ultrasonidos. Así mismo, también se prefiere que la temperatura de la mezcla se mantenga entre 20°C y 60°C durante el proceso de formación de las nanopartículas. De forma inesperada, al ajustar el pH entre 7-10 se forman complejos ionizados en los polifenoles procedentes de la planta que ayudan a estabilizar las nanopartículas. No obstante, no se debe superar temperaturas de 60°C, durante la sonicación.

El método de obtención de nanopartículas metálicas que se describe en este documento comprende aplicar radiación en el rango UVA como catalizador. Preferentemente, esta radiación tiene una longitud de onda entre 400 nm y 320 nm, y más preferentemente en torno a los 370 nm. De esta forma la reacción se completa en muy pocos minutos (inferior a 10 min). El tamaño de la partícula obtenida es ajustable en función del tiempo de aplicación de la radiación UV y, en todo caso, inferior a los 100 nm.

Simultáneamente a la aplicación de radiación UVA, la mezcla de reacción se agita mediante ultrasonidos, preferentemente a una frecuencia entre 20.000 y 60.000 Hz.

El método propuesto recurre al uso combinado y simultaneo de ultrasonidos y luz UVA para conseguir acelerar los tiempos de reacción y ajustar el tamaño de las NP a los parámetros deseados. Ejecutando el procedimiento de esta forma, se obtienen las NP-M en un tiempo reducido, inferior a los 10 minutos, no descrito hasta ahora.

Otro objeto de protección de la presente invención son las nanopartículas metálicas obtenidas por el método que se describe en este documento, en particular NP-Ag. Estas nanopartículas se caracterizan por presentar una estructura micelar en solución y, preferentemente, un tamaño de partícula igual o inferior a 400 nm, más preferentemente un tamaño de partícula inferior a 50 nm.

Así mismo, la presente invención también se refiere al uso de las nanopartículas, con estructura micelar, obtenidas por el método que aquí se describe con agente antimicrobiano.

Breve descripción de las figuras

Figura 1 : Imágenes realizadas mediante microscopía de transmisión electrónica (TEM), realizadas con microscopio TEM de emisión de campo de 200kV modelo JEOL JEM- FS2200 HRP, de un extracto micelar obtenido por reducción de HAuCI ₄ en presencia de manzanilla ( Chameamelum nobile) (solución acuosa de 500 ppm de NP-Au), donde se observan AuNPs de diferentes morfologías y tamaños: Fig. 1 (a) y Fig. 1 (b) AuNPs triangulares, hexagonales (triangular truncado) y esferoidales a dos ampliaciones (100000* y 250000*); Fig. 1 (c) partícula hexagonal de 360*240 nm, acompañada de pequeñas partículas esferoidales, de 30 nm de diámetro; Fig. 1 (d) dos nanopartículas de aspecto triangular, una de 60 nm y otra de 110 nm; y una decahédrica, de 40 nm, ubicada en la parte inferior izquierda.

EJEMPLOS Ejemplo 1 : Obtención de una solución que comprende 500 ppm de NP-Ag

En primer lugar se obtiene una infusión de camolina ( Chameamelum nobile) de la siguiente forma: se pesan 50 g de esta planta y se añaden a 1 litro de agua desmineralizada. La mezcla se calienta hasta ebullición y se mantiene 10 min agitando en estas condiciones. Posteriormente, la mezcla se enfría y filtra.

Por otro lado, se pesan 780 mg de AgN0 ₃ y se añaden a 1 litro de agua desionizada y destilada. Esta solución se agita hasta conseguir una homogeneización total. A esta solución del precursor metálico se añaden 50 mi de la infusión de camomila ( Chamaemelum nobile) preparada anteriormente. Una vez realizada esta mezcla, se ajusta el pH con tampón fosfato 7,4 y se somete a la acción de ultrasonidos (20kHz) bajo la iluminación de una lámpara de luz UVA de 370 nm. La aplicación simultanea de luz UVA y agitación mediante ultrasonidos se aplicó durante 6 periodos de 5 minutos de sonicación, y no dejando que la temperatura de la mezcla sonicada supere los 60°C, obteniéndose una solución con una concentración de 500 ppm de NP-Ag con estructura micelar. Posteriormente, se eliminó el solvente de esta solución para obtener NP-Ag con un tamaño de partícula entre 20 y 100 nm.

Ejemplo 2: Obtención de una solución que comprende 750 ppm de NP-Ag

En primer lugar se obtiene una infusión de té ( Camellia sinensis) de la siguiente forma: se pesan 50 g de esta planta y se añaden a 1 litro de agua desmineralizada. La mezcla se calienta hasta ebullición y se mantiene 10 min agitando en estas condiciones. Posteriormente, la mezcla se enfría y filtra.

Por otro lado, se pesan 1170 mg de AgN0 ₃ y se añaden a 1 litro de agua desionizada y destilada. Esta solución se agita hasta conseguir una homogeneización total. A esta solución del precursor metálico se añaden 50 mi de la infusión de té ( Camellia sinensis) preparada anteriormente. Una vez realizada esta mezcla, se ajusta el pH con tampón fosfato 7,4. Una vez realizada esta mezcla, se somete a la acción de ultrasonidos (20kHz) bajo la iluminación de una lámpara de luz UVA de 370 nm. La aplicación simultanea de luz UVA y agitación mediante ultrasonidos se aplicó durante un periodo de 5 minutos de sonicación, y no dejando que la temperatura de la mezcla sonicada supere los 60°C, obteniéndose una solución con una concentración de 500 ppm de NP-Ag con estructura micelar. Posteriormente, se eliminó el solvente de esta solución para obtener NP-Ag con un tamaño de partícula entre 20 y 100 nm.

Ejemplo 3: Obtención de una solución que comprende 500 ppm de NP-Au

En primer lugar, se obtiene una infusión de camolina ( Chameamelum nobile) de la misma forma que en los ejemplos anteriores.

Por otro lado, se pesan 868 mg de HAuCI4 y se añaden a 1 litro de agua desionizada y destilada. Esta solución se agita hasta conseguir una homogeneización total. A esta solución del precursor metálico se añaden 50 mi de la infusión de camomila ( Chamaemelum nobile) preparada anteriormente. Una vez realizada esta mezcla, se ajusta el pH con tampón fosfato 7,4 y se somete a la acción de ultrasonidos (20kHz) bajo la iluminación de una lámpara de luz UVA de 370 nm. La aplicación simultanea de luz UVA y agitación mediante ultrasonidos se aplicó durante 6 periodos de 5 minutos de sonicación, y no dejando que la temperatura de la mezcla sonicada supere los 60°C, obteniéndose una solución con una concentración de 500 ppm de NP-Au con estructura micelar.

Posteriormente, se eliminó el solvente de esta solución para obtener NP-Au con diferentes morfologías y tamaños (ver figura 1) y se observan nanopartículas metálicas en estado sólido con un tamaño de partícula igual o inferior a 400 nm, y más preferentemente inferior a 50 nm.

También se ha observado que cuando se trabaja con soluciones concentradas de 500 ppm de AuNPs, pueden aparecer también partículas hexagonales y flavonoides en forma de glucósido.

Tal como puede observarse en las diferentes imágenes de la figura 1 , el método que aquí se describe permite obtener NP-Au con diferentes morfologías y tamaños (esferoidales de 30 nm y triangulares de 30 nm y, en algún caso, de 110 nm). Esto se debe a que algunas de las NP-Au tienden a estabilizarse creciendo de tamaño, en función del tiempo, especialmente para soluciones concentradas de 500 ppm de NP-Au. Tal como se ha mencionado anteriormente, el método de obtención de NP-M de la presente invención permite obtener nanopartículas metálicas en estado sólido con un tamaño de partícula igual o inferior a 400 nm, y más preferentemente inferior a 50 nm. Así, aunque resulta particularmente preferido que las nanopartículas tengan un tamaño inferior a 50 nm, con el tiempo el tamaño de las partículas puede crecer dando lugar a la aparición de agregados o precipitados con tamaño de partícula igual o inferior a 400 nm. En el caso particular de la solución de NP-Au, se ha observado que la solución es estable al menos 15 días y que sus propiedades se mantienen inalteradas durante al menos este periodo de tiempo.