次に本発明の実施例を示すが、本発明はこ� ��らに限定されることがないことは言うまで� ��ない。
 一般式(1)で表される化合物は下記の製造方� ��A~Cに示す方法により合成するのが好ましい� ��

製造方法A
 N,N-ジアルキルアミノ酸塩酸塩3.1mmol、DCC 3.1 mmol、無水ピリジン30mlを加え30分間撹拌後、� �ァルネソール 3.1mmolを加え、室温で16時間撹 拌する。溶媒を減圧下留去し、残渣を蒸留水 に懸濁させ、酢酸エチルで可溶性画分を抽出 する。抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水後 減圧下溶媒を留去し、残渣をシリカゲルフラ ッシュクロマトグラフィー(溶離溶媒;n-ヘキ� �ン:酢酸エチル)で分離精製し、N,N-ジアルキ� �アミノ酸ファルネソールエステルを得る。

製造方法B
 N,N-ジアルキルアミノ酸ファルネソールエス テルを少量のアセトンに溶解し、2倍モル量� �塩酸-ジオキサンを加え溶媒を減圧下留去し� ��残渣をアセトンで再結晶してN,N-ジアルキル アミノ酸ファルネソールエステルの塩酸塩を 得る。

製造方法C
 アミノ酸0.1 molを蒸留水-ジオキサン(1:1, v/v )100 mlに溶解し、トリエチルアミン30 mlを加� ��、ジ-tert-ブチルジカルボネートを徐々に加� ��30分間室温で撹拌する。減圧下ジオキサン� �留去し、炭酸水素ナトリウム水溶液(0.5 M)50� �mlを加え酢酸エチル100 mlで洗う。酢酸エチ� �層を50 mlの炭酸水素ナトリウム液で洗い、� �層を合わせて氷冷下でクエン酸水溶液(0.5 M) を加えて酸性(pH 3)とし、塩化ナトリウムを� �和させた後、酢酸エチルで抽出する(100 ml x  3回)。抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水� �減圧下溶媒を留去し、油状残渣にイソプロ� �ルエーテルを加えるか、または冷却にて結� �化させてN-t-BOCアミノ酸を得る。

 ファルネソール5 mmol、N-t-BOCアミノ酸5 mm ol、DCC 5 mmolを無水ピリジン30 mlに加え室温� ��20時間撹拌する。溶媒を減圧下留去し、残� �に酢酸エチルを加えて可溶性画分を抽出す� �(100 ml x 2回)。抽出液を減圧下濃縮し、残� �をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶� ��溶媒;n-ヘキサン-酢酸エチル)で分離精製し� �ファルネソールN-t-BOC-アミノ酸エステルを得 る。

 ファルネソールN-t-BOC-アミノ酸エステル� �少量のアセトンに溶解し、塩酸-ジオキサン( 2.5~4.0 N)を塩酸量がエステルの20倍モル量に� �当する量加え1時間撹拌後、減圧下溶媒を留� ��する。残渣をアセトン-メタノール系または 酢酸エチル-メタノール系で再結晶して、フ� �ルネソールアミノ酸エステルの塩酸塩を得� �。

 ファルネソールアミノ酸エステルの塩酸� ��3 mmolを水150 mlに加え、炭酸水素ナトリウ� �を加えて溶液のpHを7~8にした後に酢酸エチル で抽出する(100 ml x 3回)。抽出液を無水硫酸 ナトリウムで脱水後減圧下溶媒を留去し、油 状のファルネソールアミノ酸エステルを得る 。

 一般式(3-1)で表される化合物は下記の製� �方法D~Gに示す方法により合成するのが好ま� �い。

製造方法D
 アミノ酸0.1 molを蒸留水-ジオキサン(1:1, v/v )100 mlに溶解し、トリエチルアミン30 mlを加� ��、ジ-tert-ブチルジカルボネートを徐々に加� ��30分間室温で撹拌する。減圧下ジオキサン� �留去し、炭酸水素ナトリウム水溶液(0.5 M)50� �mlを加え酢酸エチル100 mlで洗う。酢酸エチ� �層を50 mlの炭酸水素ナトリウム液で洗い、� �層を合わせて氷冷下でクエン酸水溶液(0.5 M) を加えて酸性(pH 3)とし、塩化ナトリウムを� �和させた後、酢酸エチルで抽出する(100 ml x  3回)。抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水� �減圧下溶媒を留去し、油状残渣にイソプロ� �ルエーテルを加えるか、または冷却にて結� �化させてN-t-BOCアミノ酸を得る。

 アルゴンガス雰囲気下で、トコフェロー� ��またはトコトリエノール5 mmol、N-t-BOCアミ� �酸5 mmol、DCC 5 mmolを無水ピリジン30 mlに加� ��室温で20時間撹拌する。溶媒を減圧下留去� �、残渣に酢酸エチルを加えて可溶性画分を� �出する(100 ml x 2回)。抽出液を減圧下濃縮� �、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ� �ー(溶離溶媒;n-ヘキサン-酢酸エチル)で分離� �製し、ファルネソールN-t-BOC-アミノ酸エステ ルまたはトコフェロールN-t-BOC-アミノ酸エス� ��ルまたはトコトリエノールN-t-BOC-アミノ酸� �ステルを得る。

 トコフェロールN-t-BOC-アミノ酸エステル� �たはトコトリエノールN-t-BOC-アミノ酸エステ ルを少量のアセトンに溶解し、塩酸-ジオキ� �ン(2.5~4.0 N)を塩酸量がエステルの20倍モル量 に相当する量加え1時間撹拌後、減圧下溶媒� �留去する。残渣をアセトン-メタノール系ま� ��は酢酸エチル-メタノール系で再結晶して、 トコフェロールアミノ酸エステルあるいはト コトリエノールアミノ酸エステルの塩酸塩を 得る。

製造方法E
 トコフェロールアミノ酸エステルまたはト� ��トリエノールアミノ酸エステルの塩酸塩3 m molを水150 mlに加え、炭酸水素ナトリウムを� �えて溶液のpHを7~8にした後に酢酸エチルで抽 出する(100 ml x 3回)。抽出液を無水硫酸ナト リウムで脱水後減圧下溶媒を留去し、油状の トコフェロールアミノ酸エステルまたはトコ トリエノールアミノ酸エステルを得る。

製造方法F
 アルゴンガス雰囲気下で、トコフェロール� ��たはトコトリエノール5 mmol、N,N-ジアルキ� �アミノ酸塩酸塩5 mmol、DCC 5 mmolを無水ピリ� ��ン30 mlに加え室温で20時間撹拌する。溶媒� �減圧下留去し、残渣を蒸留水に懸濁させ炭� �水素ナトリウムを加えて溶液のpHを7~8にした 後に酢酸エチルで抽出する(100 ml x 3回)。抽 出液を無水硫酸ナトリウムで脱水後減圧下溶 媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマ トグラフィー(溶離溶媒;n-ヘキサン-酢酸エチ� ��、8:2)で分離精製し、トコフェロールN,N-ジ� �ルキルアミノ酸エステルまたはトコトリエ� �ールN,N-ジアルキルアミノ酸エステルを得る� ��

製造方法G
 トコフェロールアミノ酸エステル、トコト� ��エノールアミノ酸エステル、トコフェロー� ��N,N-ジアルキルアミノ酸エステルまたはトコ トリエノールN,N-ジアルキルアミノ酸エステ� �2 mmolをアセトン20 mlに溶解し、塩酸-ジオキ サン(2.5~4.0 N)を塩酸量がエステルの10倍モル� ��に相当する量またはアルキルスルホン酸2 m molを加え、減圧下溶媒を留去する。残渣をア セトン-メタノール系または酢酸エチル-メタ� ��ール系で再結晶して、トコフェロールアミ� ��酸エステル、トコトリエノールアミノ酸エ� ��テル、トコフェロールN,N-ジアルキルアミノ 酸エステルまたはトコトリエノールN,N-ジア� �キルアミノ酸エステルの塩酸塩またはアル� �ルスルホン酸塩を得る。

 一般式(3-2)で表される化合物は下記の製� �方法H~Iに示す方法により合成するのが好ま� �い。

製造方法H
 t-ブチルメチルエーテル 50 mLと無水ピリジ ン 5 mLの混液にトコフェロール又はトコト� �エノール5 gを溶解し、撹拌しながらフォス� ��ォリルクロリド (POCl ₃ )3.68 gを徐々に加える。氷冷下15%硫酸水溶液2 0 mLを加え分液する。t-ブチルメチルエーテ� �層に35%硫酸水溶液20 mLを加え、撹拌しなが� �70℃で7時間還流する。t-ブチルメチルエーテ ル層と水層を分液し、t-ブチルメチルエーテ� ��層を蒸留水100 mLで3回洗う。t-ブチルメチル エーテル層にt-ブチルメチルエーテルを加え2 00 mLとする。pHを測定しながらt-ブチルメチ� �エーテル層に5%水酸化ナトリウムのメタノー ル溶液を加え、pH8.9にする。減圧下濃縮し、� ��セトンを加えて沈殿を生じさせる。沈殿を� ��燥後、メタノールで洗浄してトコフェロー� ��リン酸エステルナトリウム塩またはトコト� ��エノールリン酸エステルナトリウム塩を得� ��。

製造方法I
 t-ブチルメチルエーテル 50 mLと無水ピリジ ン 5 mLの混液にトコフェロール又はトコト� �エノール5 gを溶解し、撹拌しながらフォス� ��ォリルクロリド (POCl ₃ )3.68 gを徐々に加える。氷冷下メタノール20  mLを加え、反応液をシリカゲルカラムクロマ� ��グラフィー(溶離溶媒;n-ヘキサン-酢酸エチ� �、8:2)で分離精製し、トコフェロールメチル� ��ン酸エステルまたはトコトリエノールメチ� ��リン酸エステルを得る。

虚血再潅流脳障害の抑制効果の検 討
 脳梗塞は、脳血流量の低下によって種々の� ��害機序がドミノ式に生じ、脳損傷を虚血中� ��部から虚血周辺部に拡大していく進行性の� ��患であり、特に発症後の酸化ストレスや炎� ��反応の関与が強く、重篤性やQOLを考慮する� ��発症後の亜急性期、慢性期の治療が極めて� ��要である。臨床的には、脳梗塞後、投与開� ��が遅くても虚血再還流障害に対して抑制可� ��な薬剤が望まれる。
 このことから、MCA閉塞モデルにおいて再潅� ��後に薬物投与することで、再潅流による活� ��酸素種(ROIs)の直接的障害とROIsによる2次的� �酸化ストレスや炎症反応に至る過程を反映� �た虚血再潅流脳障害の治療効果評価モデル� �構築し、被験化合物の治療薬としての効果� �検討した。
 また、MCA閉塞モデルにおいて梗塞直前及び� ��塞中に薬物投与し、予防薬としての効果も� ��討した。

(1)虚血再潅流脳障害の予防効果評 価法
 ddY雄性マウス25-30 g(6-7週令)を用いKoizumi等� �方法(脳卒中、第8巻、1-8頁、1986年)に従って� ��大脳動脈(MCA)閉塞モデルマウスを作成し、MC A閉塞を4時間とし、梗塞開始直前と梗塞3時間 の2回試験薬物溶液を静脈内投与した。梗塞� �始24時間後の脳切片標本を作製しトリフェニ ルテトラゾリウムクロリド染色(TTC steining)後 、脳切片標本から画像処理によって脳梗塞巣 体積を測定した。

(2)虚血再潅流脳障害の治療効果評 価法
 ddY雄性マウス25-30 g(6-7週令)を用いKoizumi等� �方法(脳卒中、第8巻、1-8頁、1986年)に従って� ��大脳動脈(MCA)閉塞モデルマウスを作成し、MC A閉塞を4時間とし、虚血開始後6時間または10� ��間(再潅流後2時間または4時間)に薬物溶液を 静脈内単回投与した。閉塞開始24時間後の脳� ��片標本を作製しトリフェニルテトラゾリウ� ��クロリド染色(TTC steining)後、脳切片標本か� ��画像処理によって脳梗塞巣体積を測定した� ��

ファルネソール(FO)およびファル� �ソールN,N-ジメチルグリシンエステル塩酸塩( FODMG)の虚血再潅流脳障害の予防効果
 上記虚血再潅流脳障害の予防評価法に従っ� ��,(2E,6E) ファルネソール(FO)と(2E,6E) ファル� �ソールN,N-ジメチルグリシネート塩酸塩(FODMG) および市販製剤であるエダラボン(edaravone)の� ��再潅流脳障害に対する効果を評価した。
 図1にMCA閉塞マウスの閉塞24時間後脳切片標� ��を、図2にMCA閉塞マウスの閉塞24時間後脳切� ��標本から画像処理によって求めた閉塞開始2 4時間後の梗塞巣の体積を示した。FOはDMSOに� �解して静脈内投与し、FODMGは水に溶解して静 脈内投与した。

 FOは2μmol/kg x 2投与では有意な梗塞巣体積� �抑制は見られず、20μmol/kg x 2の投与量にお� ��て梗塞巣体積を有意に抑制した。
 FODMGは2μmol/kg x 2と20μmol/kg x 2のどちらの� ��与量においても梗塞巣体積を有意に抑制し� ��その効果は投与量に依存した。FODMGはFOに比 較して優れた血再潅流脳障害の予防効果を示 した。
 一方、エダラボンは2μmol/kg x 2投与では有� ��に抑制したが、20μmol/kg x 2の投与量では有 意な効果が見られず、投与量が高くなると有 効な効果が見られず、有効投与量の範囲が狭 いことが示された。
 FODMGの効果は投与量に依存することからは� �効投与量範囲が広く、エダラボンに比して� �れていることが明らかである。

ファルネソールN,N-ジメチルグリ� �ンエステル塩酸塩(FODMG)の虚血再潅流脳障害� ��治療効果
 上記虚血再潅流脳障害の治療効果評価法に� ��って、エダラボンでは効果が見られない投� ��量(20μmol/kg)におけるFODMGの虚血再潅流脳障� �の治療効果を虚血開始6時間後または10時間� �の単回投与で評価した。FOはDMSOに溶解して� �脈内投与し、FODMGは水に溶解して静脈内投与 した。
 FODMGは虚血開始6時間後と10時間後の単回投� �の何れにおいても梗塞巣体積を有意に抑制� �た(図3)。FODMGは静脈内投与が可能であり、脳 梗塞発症後の治療開始時間を極めて長く延長 できることが明らかである。

2R-γ-トコフェロールN,N-ジメチル� �リシン塩酸塩(γ-TDMG)の虚血再潅流脳障害の� �防効果
 上記虚血再潅流障害の予防効果評価法に従� ��て、γ-TDMGと2R-α-トコフェロール(α-Toc)およ� ��γ-トコフェロール(γ-Toc)の虚血再潅流障害� �予防効果を評価した。γ-TDMGは15%プロピレン� ��リコール含有水溶液に溶解して投与し、α-T ocとγ-TocはDMSOに溶解して投与した。
 図4にMCA閉塞マウスの閉塞開始24時間後脳切� ��標本を、図5に脳切片標本から画像処理によ って求めた閉塞開始24時間後の梗塞巣の体積� ��示した。
 α-TocのDMSO溶液投与では投与量20μmol/kg x 2� �は梗塞巣体積は有意に抑制されたが、投与� �2μmol/kg x 2では有意な梗塞巣体積の抑制は� �察されなかった。
 γ-TocのDMSO溶液投与では2μmol/kg x 2と20μmol/k g x 2のどちら投与量においても梗塞巣体積� �有意に抑制され、α-Tocの1/10投与量で有意に� ��制した。
 γ-TDMGの水溶液静脈内投与では2μmol/kg x 2と 20μmol/kg x 2のどちら投与量においても梗塞� �体積の有意な抑制が観察され、α-Tocの1/10の� ��投与量で虚血再潅流障害の予防効果を示し� ��γ-TDMGは優れた虚血再潅流障害の予防効果を 有することが明らかになった。

2R-γ-トコフェロールN,N-ジメチル� �リシン塩酸塩(γ-TDMG)の虚血再潅流脳障害の� �療効果
 図6にMCA閉塞マウスの閉塞開始24時間後脳切� ��標本から画像処理によって求めた閉塞24時� �後の梗塞巣の体積を示した。γ-TDMGは15%プロ� ��レングリコール含有水溶液に溶解して投与� ��、α-Tocとγ-TocはDMSOに溶解して投与した。
 γ-TDMG水溶液の静脈内投与とγ-TocのDMSO溶液� �静脈内投与は、どちらも虚血開始6時間後2μm ol/kg と20μmol/kgの単回投与において梗塞巣体� ��を有意に抑制した。
 脳梗塞治療においては梗塞後の治療開始ま� ��の時間が長いことが望まれており、γ-TDMGは 静脈内投与が可能であり、脳梗塞発症後投与 において治療効果を有することが明らかであ る。

2R-α-トコトリエノールN,N-ジメチ� �グリシン塩酸塩(α-T3DMG)の虚血再潅流脳障害� ��予防効果
 上記虚血再潅流障害の予防効果評価法に従� ��てα-T3DMGの虚血再潅流障害の予防効果を評� �した。α-T3DMGは15%プロピレングリコール含有 水溶液に溶解して投与し、α-Tocと2R-α-トコト リエノール(α-T3)はDMSOに溶解して投与した。
 図7に脳切片標本から画像処理によって求め た閉塞開始24時間後の梗塞巣の体積を示した� ��
 α-T3DMGの水溶液静脈内投与では2μmol/kg x 2� �20μmol/kg x 2のどちらの投与量においても梗� ��巣体積の有意な抑制が観察され、α-T3のDMSO� ��液投与と同じ投与量で効果があり、α-Tocの1 /10の低投与量で抑制効果を示すことが明らか となった。α-T3DMGは静脈内投与可能な虚血再� ��流脳障害の優れた予防剤として有用である� ��

2R-α-トコトリエノールN,N-ジメチ� �グリシン塩酸塩(α-T3DMG)の虚血再潅流脳障害� ��治療効果
 上記虚血再潅流脳障害の治療効果評価法に� ��って、α-T3DMGの治療薬としての効果を検討� �た。α-T3DMGは15%プロピレングリコール含有水 溶液に溶解して投与し、α-Tocと2R-α-トコトリ エノール(α-T3)はDMSOに溶解して投与した。
 図8にMCA閉塞マウスの閉塞開始24時間後脳切� ��標本から画像処理によって求めた閉塞開始2 4時間後の梗塞巣の体積を示した。
 α-T3DMG水溶液の静脈内投与は、虚血開始6時� ��後2μmol/kg と20μmol/kgの単回投与のどちらに� ��いても梗塞巣体積を有意に抑制し、α-T3DMG� �静脈内投与が可能であり脳梗塞発症後投与� �おいて治療効果を有することが明らかであ� �。

2R-γ-トコフェロールリン酸エステ ル2ナトリウム塩(γ-TPS)の虚血再潅流脳障害の 予防効果
 上記虚血再潅流障害の予防効果評価法に従� ��てγ-TPSの虚血再潅流障害の予防効果を評価� ��た。γ-TPSは水に溶解して投与した。図9に脳 切片標本から画像処理によって求めた閉塞開 始24時間後の梗塞巣の体積を示した。
 γ-TPSの水溶液静脈内投与では2μmol/kg x 2で� ��有意な効果は見られず、20μmol/kg x 2の投与 量において梗塞巣体積の有意な抑制が観察さ れ、γ-Tocに比べて低いもののα-Tocと同程度の 抑制効果を示した。γ-TPSは静脈内投与可能な 虚血再潅流脳障害の予防剤として効果を有す る。

2R-γ-トコフェロールリン酸エステ ル2ナトリウム塩(γ-TPS)の虚血再潅流脳障害の 治療効果
 上記虚血再潅流脳障害の治療効果評価法に� ��って、γ-TPSの治療薬としての効果を検討し� ��。γ-TPSは水に溶解して投与した。図10にMCA� �塞マウスの閉塞開始24時間後脳切片標本から 画像処理によって求めた閉塞開始24時間後の� ��塞巣の体積を示した。
 γ-TPSの水溶液静脈内投与では、虚血開始6時 間後の20μmol/kg の単回投与において梗塞巣体 積の有意な抑制が観察された。γ-TPSは静脈内 投与可能な虚血再潅流脳障害の治療剤として 効果を有する。