CAMPO DE LA INVEN CIÓN La presente invención pertenece al campo de las formulaciones farmacéuticas de principios activos escasamente solubles en agua. En particular se refiere a formulaciones inyectables de agentes alquilantes aptas para procesos de infusión parenteral en quimioterapia oncológica. ESTADO DE LA TÉCNICA

Las formulaciones farmacéuticas de principios activos escasamente solubles en medios acuosos han sido profusamente estudiadas en las últimas décadas. Se han desarrollado innumerables estrategias para lograr inyectar estos principios activos en organismos de mamíferos, con el fin de mejorar su farmacotécnia y disminuir sus efectos colaterales.

El melfalano o p-(bis-(2-cloroetil)-amino-L-fenilalanina o L-sarcolisina, un agente alquilante, citotóxico, descubierto en la década del 50 por Bergel et al., y reivindicado en la patente US 3032584, es el principio activo de elección en el tratamiento de diversos tipos cánceres.

Diversos son los intentos en el estado de la técnica que buscan resolver las dificultades relacionadas con la inestabilidad de dicha droga, así como de lograr un direccionamiento de la misma de modo de alcanzar una mayor efectividad. Ejemplos que se pueden mencionar son:

La solicitud de patente WO 2008016711 divulga una composición que comprende un derivado de una sal de ácido pirimidixincarboxílico (orotato de litio) y melfalano que pretende reducir los niveles de las drogas citotóxicas, tal como el melfalano, en tejidos no cancerosos mediante la derivatización de dicha droga en una sal de orotato de litio.

La patente US 6310039 divulga una formación de un conjugado de transferrina, albúmina o PEG, con al menos un grupo tiol (-SH) unido a una droga anti-neoplásica (melfalano), mostrando una efectividad inhibitoria tumoral al menos igual o mayor que la del compuesto sólo.

La solicitud de patente US 20050214310 divulga un método de producir una prodroga de melfalano, que luego puede ser activado por un conjugado anticuerpo-enzima, donde dicho anticuerpo tiene especificidad por un epitope de superficie de la célula tumoral.

La patente US 7135547 divulga un conjugado de glucosaminoglicano unido a melfalano mediante linker el cual presenta sitios de reconocimiento para proteasas. Ejemplo de nuevas formulaciones es la patente RU 2060031, en la que se divulga una formulación que comprende melfalano, polivinilpirrolidona, ácido ascórbico, ácido glutámico, ácido clorhídrico y D-manitol. También se han llevado a cabo pruebas de nuevas formulaciones inyectables utilizando derivados de ciclodextrinas, tal como se divulga en el trabajo titulado "New injectable melphalan formulations utilizing (SBE)7m- -CD or ΗΡ-β- CD" (Int Journal of Pharma Vol 189, Issue 2, 5 Nov 1999, Pages 227-234).

Diversos son los intentos del estado de la técnica por desarrollar nuevas formulaciones de melfalano que proponen combinaciones de este citotóxico con otras moléculas, así como está develado en la patente US4.738.843, que une melfalano con inmunoglobulinas.

Otros desarrollos para la dosificación de una gran variedad de materias activas son micropartículas que pueden obtenerse a partir de un proceso de liofilización, tales como las descritas en la solicitud US 2005/0238725 que reivindica una partícula de menos de 2000nm y una composición de péptido adsorbida a la superficie de la materia activa que funciona como tensoactivo al momento de diluirse.

En la actualidad el melfalano se comercializa en forma de tabletas de 2 mg de melfalano base, o como clorhidrato de melfalano liofilizado, junto con una solución reconstituyente, bajo la marca ATkeran®.

La primera formulación que se comercializó de ATkeran® polvo estéril de melfalano inyectable, consistía de tres componentes, y se reconstituía en dos etapas, justo antes de su aplicación. Los tres componentes del sistema consistían en un vial con melfalano base, en forma de polvo, una ampolla que contenía un alcohol acidificado (HCl) y una ampolla de disolvente compuesta por un diluyente de buffer fosfato y propilenglicol. Para su reconstitución el melfalano en polvo se disolvía en el alcohol acidificado, agitando hasta lograr su disolución completa y luego se diluía la concentración de melfalano por adición del diluyente de buffer fosfato y propilenglicol. Este sistema de tres componentes y el proceso de reconstitución en dos etapas era un procedimiento incómodo. Además el melfalano se disolvía lentamente y en ocasiones no lo hacia por completo.

La actual formulación de ATkeran® liofilizado inyectable corresponde a la descrita en la Patente US 4997651 de Poole et al. Esta segunda formulación comercial de ATkeran® inyectable consiste de dos componentes y supera, parcialmente, las desventajas de la primera formulación de tres componentes. La actual formulación comprende clorhidrato de melfalano y polivinilpirrolidona (PVP) liofilizados, y un diluyente que comprende una mezcla de citrato de sodio, agua, propilenglicol y etanol.

El ATkeran® inyectable se presenta como una formulación de clorhidrato de melfalano liofilizado, equivalente a 50 mg de melfalano base y 20 mg de polivinilpirrolidona, que se reconstituye en un diluyente compuesto por 0,2 mg de citrato de sodio, 6,0 mi de propilenglicol, 0,52 mi de etanol 96% y agua para inyección en cantidad suficiente para obtener 10 mi. El Alkeran® para ser infundido debe ser diluido a no más de 0,45 mg/ml en Solución Salina Normal (SSN) de 0,9% p/v ClNa e infundido durante 15 minutos (y antes de los 60 minutos de haber sido reconstituido según su prospecto).

El melfalano es el principio activo de elección en el tratamiento de diversos tipos cánceres, entre los que se pueden mencionar: mieloma múltiple (MM), amiloidosis (AL), cáncer de ovario, melanoma maligno, cáncer de próstata avanzado y cáncer de testículos.

El MM es una proliferación neoplásica de las células plasmáticas caracterizada por lesiones líticas óseas, anemia y elevación de las globulinas séricas y urinarias (3). El tratamiento de MM se divide en dos grupos: grupo A comprende aquellos que pueden someterse a un transplante autólogo de médula ósea (TAMO) y el grupo B aquellos que no tienen la opción de TAMO. El tratamiento para el grupo A comprende una alta dosis de melfalano, administrada en forma intravenosa, seguida por TAMO, el tratamiento estándar para el grupo B es melfalano y prednisona (4). El tratamiento para el grupo B no ha cambiado desde que fue diseñado en los años 60 (5), el tratamiento del grupo A comenzó como un estudio de fase I, utilizando una alta dosis de melfalano (180 mg/m ² dividida en 3 dosis diarias de 60 mg/m ² ) a mediado de los años 80 y se esta convirtiendo en uno de los regímenes más utilizados combinado con TAMO (2). Dosis altas de melfalano seguidas de TAMO, mejoran las tasas de respuesta y aumentan la supervivencia y se ha convertido en la pauta de elección de pacientes de 65 años o menores (4) y actualmente es el tratamiento estándar para muchos pacientes con MM (18). Numerosos son los trabajos científicos que demuestran mediante estudios clínicos un aumento de supervivencia de pacientes con MM o con amiloidosis de cadenas ligeras (AL) tratados con dosis alta de melfalano seguidas de TAMO (6, 2, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16).

Los estudios clínicos con dosis alta de melfalano comprenden dosis desde 100 mg/m ² (7, 17, 16, 24) hasta 200 mg/m ² (6, 16, 17, 18, 19, 21, 22, 23, 24). Administrándose la dosis de 200 mg/m ² en algunos casos en forma de única administración (23, 25, 18).

La AL es la más común de las amiloidosis en el mundo desarrollado. Es un desorden clonal de células plasmáticas, en la cual las inmonugolobulinas de cadenas largas sintetizadas por las células plasmáticas polimerizan en depósitos de tejido fibrilar. Estos depósitos ocasionan disfunciones en el órgano. En pacientes no tratados, la enfermedad progresa rápidamente provocando fallas y muerte del órgano (26). Los órganos más frecuentemente afectados son principalmente el riñon, seguidos por el corazón y el hígado (27). Actualmente altas dosis de melfalano con TAMO representa el "estándar de oro" para el tratamiento de pacientes seleccionados, ya que este tratamiento produce las más alta velocidad de respuesta hematológica completa y de respuesta de los órganos (26).

El propilenglicol, CAS 57-55-6, es un líquido claro, viscoso y prácticamente sin olor. Es muy usado en formulaciones farmacéuticas como solvente, preservante antimicrobiano, desinfectante, humectante, agente estabilizante y cosolvente miscible en agua (28). El propilenglicol ha sido identificado por la American Academy of Pediatrics como un aditivo potencialmente peligroso (29). Si bien el propilenglicol es considerado inocuo, en grandes concentraciones, causa acidosis láctica e hiperosmolalidad, hemolisis, toxicidad renal incluyendo disfunción tubular y necrosis tubular aguda (29, 30).

La Organización Mundial de la Salud (OMS) recomienda una carga total de 1,875 g de propilenglicol por día para una persona de 75 kg (31, 34). Fue determinado daño renal relacionado al propilenglicol en pacientes que recibieron 52 g/dia, 87,7 g/dia y 89,97 g/dia de propilenglicol (31).

Un niño de 16 años, quién recibió infusiones diarias durante 14 días de formulaciones fenobarbital y pentobarbital que contenían propilenglicol, siendo el aporte diario de este último entre 10 y 90 g, sufrió una falla renal aguda provocada por propilenglicol. En la biopsia del riñon se encontró daños a las células del túbulo proximal. Se estima que el propilenglicol, el cual es lipofílico, penetra la membrana lipídica de las células y dentro de las mismas aumenta su osmolalidad, esto ocasiona un flujo de líquido hacia dentro de la célula, provocando hinchamiento y lisis de las mismas (32).

Cuando el propilenglicol esta presente en altas dosis en medicamentos intravenosos, este aumenta la osmolalidad de la formulación, y su uso, especialmente en pacientes con funciones renales disminuidas, debería ser monitoreado determinando diariamente la osmolalidad plasmática (33).

Deberían no ser usadas las formulaciones que contienen propilenglicol en pacientes con una seria disfunción renal (35).

Se ha sugerido reducir la osmolalidad de las formulaciones parenterales a niveles fisiológicos y reevaluar el uso del propilenglicol en las mismas (36).

La cantidad de propilenglicol inyectada en un paciente de MM de 1,9 m ² de superficie, la cual corresponde a una persona de 75 kg de peso y 1,75 m de alto, con la dosis de melfalano intravenosa convencional declarada en el prospecto de Alkeran ^® , la cual es 16 mg/m ² , es de 3,648 g, la cual es 1,95 veces la recomendada por la OMS. Pero para los tratamientos de MM y AL con TAMO, los cuales no están declarados en la sección indicación y uso del prospecto de Alkeran®, la dosis que se esta imponiendo como estándar esta entre 100 y 200 mg/m ² . En el primer caso el paciente de 1,9 m ² de superficie recibe 22,8 g y en el segundo 45,6 g de propilenglicol, las cuales representan 12 y 24 veces la recomendada por la OMS. Del 12 al 45 % del propilenglicol es excretado por el riñon y el resto es metabolizado en el hígado a ácido láctico, pirúvico y acetona. La vida media plasmática del propilenglicol en individuos con funciones renales normales es de 5 horas (31). Por lo que la gran cantidad de propilenglicol administrada en los regímenes de alta dosis no va a ser metabolizada rápidamente, esto provoca hiperosmolalidad y acidosis, agravando la disfunción del sistema renal. El estado de la técnica de las formulaciones inyectables de melfalano y su problemática asociada ha sido recientemente descrito en la solicitud de patente WO2009150278A1. Este documento, en sus ejemplos de aplicación números 11 y 12, describe una formulación farmacéutica inyectable de melfalano a 50 mg/ml de ácido clorhídrico 6 N libre de propilenglicol, donde a cada mi de la misma diluida en 75 mi de solución salina normal se neutraliza con 35 mi de una solución acuosa neutralizante de hidróxido de sodio, citrato de sodio y etanol.

La formulación de ATkeran ^® , presenta una alta tonicidad u osmolalidad de la infusión a ser administrada, que permite a lo sumo usar concentraciones de 0,45 mg/ml en la infusión, ya que posee una osmolalidad mayor a 1000 mOsmol/kg, la cual es hiperosmótica. Dado que la osmolalidad plasmática es de aproximadamente 290 mOsm/Kg, las soluciones de infusión que tienen una osmolalidad entre 285 y 310 mOsm/Kg son llamadas isoosmóticas, y las soluciones que tienen una osmolalidad superior a 310 son consideradas hiperosmóticas. La administración intravenosa de soluciones hiperosmóticas provoca un encogimiento de las células de la sangre (37). En la práctica, grandes rangos de osmolalidad de soluciones intravenosas pueden ser toleradas, sin embargo también es verdad que para todos los inyectables lograr una formulación isotónica debería ser un objetivo (38). Se dice que las infusiones parenterales no deben tener una osmolalidad que exceda de 700 a 800 mOsmol/Kg (39). En la práctica, la hiperosmolalidad de la solución de infusión de ATkeran® impide farmacotécnicamente, que se pueda efectuar administraciones a concentraciones mayores que 0,45 mg/ml (1023 mOsmol/kg), aunque hay trabajos clínicos que usan ATkeran® a 1 mg/ml, que posee la altísima hiperosmolalidad de 1971 mOsmol/kg, dado que esto permite usar 2,2 veces menos de volumen de fluido a ser inyectado, con el consiguiente beneficio de mayor rapidez en su administración.

La formulación de ATkeran®, presenta una notable inestabilidad del reconstituido de 5 mg/ml. En la sección preparación para la administración/estabilidad del prospecto establece que ATkeran® inyectable debe ser reconstituido inyectando rápidamente los 10 mi del diluyente, agitando vigorosamente hasta que se obtenga una solución clara, para inmediatamente transferir el reconstituido en la bolsa de infusión de solución salina normal y homogenizarla por agitación. El reconstituido de 5 mg/ml produce una solución con 60% de solventes orgánicos, sobresaturada en melfalano base, que entre los 3 a 10 minutos de preparada produce un precipitado de melfalano base, que no puede ser redisuelto por agitación y que en ese caso, debe ser descartada. La solubilidad y la estabilidad a su hidrólisis acuosa de una solución acuosa de melfalano es dependiente del pH y de la concentración de iones cloruros. Para inyectar el melfalano liofilizado se lo debe disolver a una concentración del orden de 5 mg/ml, donde si se pretende tener un pH cercano a 6, como usa ATkeran®, se debe usar un disolvente casi totalmente orgánico (EP0317281A2 y US4997651A). Por otra parte la elaboración del liofilizado de Alkeran®, presenta el problema que la solución acuosa ácida del clorhidrato de melfalano es inestable y obliga a ser elaborada y dosificada a una temperatura por debajo del punto de rocío de un área estéril, con el consiguiente problema farmacotécnico y regulatorio del manejo de frascos con solución dosificada, que condensan humedad ambiente en su exterior antes de ser cargados en el liofilizador y son un posible foco de contaminación microbiológica. La inestabilidad química de su solución madre para ser liofilizada de un producto genérico de Alkeran®, hace necesaria la presencia de ácido clorhídrico en al menos 4 equivalentes de ácido clorhídrico por cada mol de melfalano, preferentemente más de un equivalente y medio de ácido clorhídrico por cada mol de melfalano. La preparación de la solución madre a ser liofilizada, de un producto equivalente al Alkeran, necesita la presencia de ácido clorhídrico por dos razones en el mismo sentido. Tanto la solubilidad como la estabilidad aumentan con el aumento la cantidad relativa de acido clorhídrico utilizada. Así, para disolver en tiempos aceptables el melfalano base se necesitan tres moles de cloruro de hidrógeno por cada mol de melfalano que a su vez brindan la estabilidad suficiente para realizar las operaciones de producción de un lote de tamaño comercial sin riesgos de degradación. Por otro lado la presencia de ácido clorhídrico no puede elevarse mucho más allá de estos valores por los problemas de corrosión que puede provocar una solución ácida en un ambiente clasificado y fundamentalmente en el liofilizador y su sistema de vacío ya que durante el proceso de liofílización se elimina el cloruro de hidrógeno en exceso a través de este sistema de evacuación. Asimismo, la relación de compromiso a la que se llega obliga a trabajar a bajas temperaturas, en medio ácido, con una degradación aceptable durante la elaboración de los lotes.

Otro inconveniente que presenta la elaboración de formulación liofilizada Alkeran®, es la alta viscosidad del reconstituido de Alkeran®, que al agitar enérgicamente para reconstituir el liofilizado produce una nube de burbujas, que desaparece lentamente, e interfiere con la inspección visual de la total disolución del liofilizado.

La presente invención resuelve los problemas del estado de la técnica hasta aquí descritos.

BREVE DES CRIPCIÓN D E LA INVEN CIÓN

Una formulación farmacéutica inyectable de melfalano, objeto de la presente invención, comprende una composición sólida de melfalano liofilizado y una solución reguladora de pH, y en una forma preferida además comprende una composición reconstituyente de dicho liofilizado de melfalano. Siendo dicha composición reconstituyente una solución acuosa estéril de cloruro de sodio en una concentración de entre 0% y 10%. En una alternativa de la presente invención dicha composición reconstituyente comprende además un solvente orgánico en una concentración menor al 50 %, preferentemente menor al 30 %, más preferentemente menor al 4 %, más preferentemente aún en una cantidad de hasta 25 veces, preferentemente menor a 10 veces la masa del liofilizado de melfalano que se reconstituye; siendo dicho solvente orgánico seleccionado del conjunto comprendido por etanol; propilenglicol, polietilenglicol 300, polietilenglicol 400; polietilenglicol 600, dimetilsulfóxido, glicofurol, N-metil-2-pirrolidona, D,L,a, -isopropilidenglicerol (Solketal®), acetona, dimetilacetamida, glicerol formal, alcohol tetrahidrofurfurílico, y diglima (dimetileter del dietilenglicol), o sus mezclas.

En otra alternativa de la presente invención dicha composición reconstituyente es libre de solvente orgánico.

La formulación farmacéutica inyectable de melfalano de la presente invención comprende dicha solución reguladora de pH que es un buffer en solución acuosa, donde dicho buffer es seleccionado del conjunto comprendido por citrato de trisodio dihidratado, citrato de sodio, succinato de sodio, malato de sodio, acetato de sodio, tartrato de sodio, y sus mezclas; además dicha solución reguladora de pH comprende dicho buffer en una masa de entre 100 a 300 mg por cada 50 mg de melfalano de dicha composición sólida de melfalano liofilizado.

Por otra parte en la formulación de la invención tanto dicho melfalano liofilizado como dicha solución reguladora de pH se diluyen en un recipiente de solución salina normal, y dicho melfalano liofilizado es reconstituido con composición reconstituyente de dicho melfalano liofilizado e inyectado en recipiente de infusión. Además dicha solución reguladora de pH se inyecta en el mismo recipiente de infusión.

Otro objeto de la presente invención es una composición sólida que comprende clorhidrato de melfalano liofilizado soluble en agua con un contenido de impurezas de hasta 1,3 %(P/P), y que puede contener además un excipiente de liofilización. Dicha composición sólida es obtenible a partir de la liofilización de una solución que comprende ácido acético, preferentemente glacial; ácido clorhídrico en una concentración de hasta 0,6 N, preferentemente hasta 4 moles de ácido clorhídrico por cada mol de melfalano a liofilizar, más preferentemente entre 1 y 3 moles; y melfalano base.

Otro objeto de la presente invenciones un proceso para elaborar dicha composición sólida que comprende los siguientes pasos:

a. disolver melfalano base en una solución de ácido acético, preferentemente glacial y ácido clorhídrico, preferentmenete en una solución acuosa al 37 % p/p, preferentemente en una relación molar entre dicho ácido clorhídrico y dicho melfalano base (moles de ácido clorhídrico/moles de melfalano base) menor a 4, más preferentemente entre 1 y 3,

b. homogeneizar,

c. liofilizar, preferentemente en una multiplicidad de viales. Donde dicha liofilización del paso c. comprende un período menor a tres días y se realiza congelando a una temperatura de entre -30 y -70°C, luego de congelado durante 5 hs, iniciando vacío a la misma temperatura, luego llevando el estante a -20°C, luego a o°C y secando finalmente a 5°C. Además se logra un taco compacto reconstituible en menos de 30 segundos. Además el tiempo que lleva el paso c de liofilización es de hasta dos días, y la temperatura de la solución que se homogeneiza en el paso b., hasta que se liofiliza, se mantiene a una temperatura ambiente mayor a 5 °C, preferentemente a 25°C, sin degradarse.

Otro objeto de la presente invención es una solución reconstituida de melfalano, preferentemente con una viscosidad menor a 10 cp, más preferentemente 5 cp, más preferentemente aún alrededor de 1 cp., que comprende una composición sólida de melfalano liofilizado reconstituido en una concentración de melfalano de entre 1 y 20 mg/ml, preferentemente entre 3 y 10 mg/ml, más preferentemente 5 mg/ml, en una composición reconstituyente y dicha solución es acuosa. Además esta solución reconstituida de la invención comprende una relación molar entre dicho ácido clorhídrico y dicho melfalano base (moles de ácido clorhídrico/moles de melfalano base) de menor o igual a 4, preferentemente entre 1 y 3. Además dicha solución reconstituida de la invención comprende una estabilidad física en ausencia de precipitados de al menos 3 horas. Y dicha composición reconstituyente comprende solución acuosa estéril de cloruro de sodio en una concentración de entre 0% y 10%.

En una alternativa de la presente invención dicha solución reconstituida dicha composición reconstituyente comprende además un solvente orgánico en una concentración menor al 50 %, más preferentemente menor al 30 %, más preferentemente menor al 4 %, más preferentemente aún en una cantidad de hasta 10 veces la masa de liofilizado de melfalano que se reconstituye. Siendo dicho solvente orgánico es seleccionado del conjunto comprendido por etanol; propilenglicol, polietilenglicol 300, polietilenglicol 400; polietilenglicol 600, dimetilsulfóxido, glicofurol, N-metil-2-pirrolidona, Ό,Ι,,α,β- isopropilidenglicerol (Solketal®), acetona, dimetilacetamida, glicerol formal, alcohol tetrahidrofurfurílico, y diglima (dimetiléter del dietilenglicol), o sus mezclas.

En una alternativa preferida de la presente invención dicha solución reconstituida es libre de solvente orgánico.

Además en la solución reconstituida de la invención dicho melfalano comprende impurezas totales menores a 4 % luego de 5 minutos de ser reconstituido, y dicho melfalano comprende una pureza de al menos 96 % con respecto al melfalano base antes de liofilización.

Otro objeto de la presente invención es una perfusión inyectable de melfalano que comprende melfalano, un regulador de pH y un pH entre 4 y 6; con una osmolalidad menor a 320 mOsmol/kg. Donde dicha perfusión, en una forma preferida es libre de solvente orgánico. Mientras que en una alternativa de la presente invención dicha perfusión además comprende solvente orgánico en una relación másica con respecto a dicho melfalano (masa de solvente orgánico/masa de melfalano) menor a 25, preferentemente menor a 10, preferentemente menor o igual a 5.

Además dicha perfusión comprende una concentración de melfalano entre 0,3 a 3 mg/ml, preferentemente entre 0,4 a 2 mg/ml, más preferentemente alrededor de 1 mg/ml.

Otro objeto de la presente invención es un kit para elaborar la formulación de la reivindicación 1 caracterizado porque comprende un contenedor con composición sólida de melfalano liofilizado y un contenedor con solución reguladora de pH. En una alternativa de la presente invención dicho kit para elaborar la formulación de la reivindicación 1 comprende un contenedor con composición sólida de melfalano liofilizado, un contenedor con solución reguladora de pH y un contenedor con composición reconstituyente de dicho melfalano liofilizado. DES CRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Un objeto de la presente invención es un proceso de liofilización no acuoso de melfalano base o su clorhidrato, en ácido acético, preferentemente glacial con tres moles de ácido clorhídrico concentrado o de cloruro de hidrógeno por cada mol de melfalano base. Donde existe una degradación de la pureza del melfalano API utilizado, por HPLC (Pharmaeuropa, Vol 19, N° 2, Abril 2007, pag. 318-21), menor al 0,2% en área. Como alternativa del objeto inventivo se presenta una liofilización de clorhidrato de melfalano en ácido acético glacial, con el agregado optativo de excipientes inertes como povidona (Kollidon K12).

Este mismo proceso puede ser usado para obtener un clorhidrato de melfalano, que es más conveniente que la técnica descrita en la patente US4997651 que usa una solución concentrada de melfalano y cloruro de hidrógeno en etanol, que se calienta menos de cinco minutos y después se enfría para cristalizar el clorhidrato de melfalano, dado que el etanol presente en el clorhidrato de melfalano precipitado tiene tendencia a reaccionar y formar como impureza el éster etílico del melfalano en su proceso de secado un orden no inferior al 1%, mientras que el ácido acético con ácido clorhídrico o cloruro de hidrógeno no presenta este problema, y se puede obtener un clorhidrato de melfalano que cumpla la muy exigente calidad compendiada para este API en Pharmaeuropa, Vol 19, N° 2, Abril 2007, pag. 318-21. Para investigar la posibilidad de elaborar liofilizados de melfalano desde solventes orgánicos farmacéuticos se determinó que tanto el melfalano base, como su clorhidrato, no son solubles en alcohol terbutílico; en cambio si bien el melfalano base no es soluble en DMSO, si es soluble su clorhidrato hasta cerca del 10 % p/v, preparado mediante el agregado de tres moles de ácido clorhídrico como ácido concentrado al 37%.

El melfalano base es soluble en ácido acético glacial, preferentemente libre de anhídrido acético, en hasta cerca del 10 % p/v; como también similarmente lo es clorhidrato de melfalano; también se puede utilizar mezclas de ácido acético y solución acuosa de ácido clorhídrico al 37% p/p para la disolución del melfalano base, o también solución de cloruro de hidrógeno en ácido acético glacial.

El melfalano base es estable en una solución de 10 mg/ml de ácido acético. Se ha demostrado por HPLC que es perfectamente estable (ver ejemplos), durante las horas que debe permanecer en solución mientras se elabora y fracciona la solución a temperatura ambiente, aunque después del proceso de liofilización, preferentemente si ha sido secado a una temperatura mayor a 5°C, como por ejemplo 25°C, se forma un porcentaje inaceptable de impureza G. Sus resultados se detallan en los ejemplos.

El clorohidrato de melfalano, que es preparado mediante el agregado de tres moles de ácido clorhídrico como ácido concentrado al 37%, por cada mol de melfalano en la solución de 10 mg/ml de melfalano en ácido acético, se ha demostrado por HPLC (ver ejemplos) que es perfectamente estable a 25°C, durante las horas que debe permanecer en solución mientras se elabora y fracciona la solución a temperatura ambiente, como durante y después del proceso de liofilización, preferentemente si ha sido secado a una temperatura no mayor a 5°C. Dado que el clorhidrato de melfalano, si se lo seca en vacíos del orden de 25 microbares y temperaturas mayores a 5°C, tiene tendencia en su liofilización desde ácido acético a perder parte de las 2,5 moles de cloruro de hidrógeno por mol de melfalano que lo compone, en forma mayor a su proceso de liofilización acuoso, pudiendo quedarse con 1,8 a 1,3 moléculas de cloruro de hidrógeno por mol de melfalano, originando así un liofilizado de clorhidrato de melfalano parcialmente soluble en agua (el pH de una solución acuosa a 5 mg/ml de clorhidrato de melfalano con 2,5 moléculas de cloruro de hidrógeno por mol de melfalano, es de aproximadamente 1,9). Los resultados se detallan en los ejemplos.

El clorhidrato de melfalano liofilizado desde DMSO, preparado mediante el agregado de tres moles de ácido clorhídrico como ácido concentrado al 37%, por cada mol de melfalano no es muy estable pues tiene tendencia a generar cerca de un 3,6 % de aumento de las impurezas totales, aumentando varias de las impurezas conocidas y agregando otras desconocidas en su estudio por HPLC, según ejemplos.

El clorhidrato de melfalano liofilizado desde agua como se muestra en el ejemplo 6,1,2) requiere de mantener la solución acuosa del clorohidrato de melfalano a cerca de 5°C, para evitar problemas de hidrólisis y su liofilización es un proceso largo y complicado. Ya que liofilizar soluciones de ácido clorhídrico tiene su complicación cinética en la sublimación de este hidroxiácido desde solución acuosa, que tiene tendencia a generar problemas de "puffing", cuando el ácido se concentra en la fase acuosa en la sublimación, formándose un sólido plástico acuoso, que ya no sublima desde su superficie, sino hierve, haciendo complicada su liofilización. Mientras que la liofilización de clorohidrato de melfalano desde ácido acético glacial es un proceso que no requiere mantener a su solución madre a baja temperatura y su liofilización y secado secundario se pueden realizar, al menos, en la mitad de tiempo que el del proceso acuoso, con la substancial disminución de costos de liofilización. Un lote industrial de 5000 unidades de un Genérico de ATkeran® 50 mg requiere de 6 días de liofilización, mientras que desde ácido acético se resuelve en dos días.

Una solución reconstituida de melfalano, objeto de la presente invención, que comprende melfalano en solución acuosa, en una concentración de entre 1 a 20 mg/ml, preferentemente entre 5 y 10 mg/ml, y más preferentemente 6,25 mg/ml de melfalano liofilizado, en su forma de clorhidrato con 1 a 3, preferentemente 2 moléculas de cloruro de hidrógeno por cada una de melfalano. Esta nueva solución reconstituida ofrece una mayor estabilidad física y química que el reconstituido de ATkeran® a 5 mg/ml.

En diversas alternativas de esta invención el liofilizado, para dar la composición sólida de clorhidrato de melfalano liofilizado de la invención, se realiza opcionalmente desde ácido acético y ácido clorhídrico; o de sus mezclas acuosas; o de sólo agua; con y sin presencia de povidona u otro excipiente; y con o sin presencia de solventes orgánicos farmacéuticos en calidad de excipientes.

Una formulación farmacéutica inyectable de melfalano, objeto de la presente invención, comprende una composición sólida de clorhidrato de melfalano liofilizado y una solución reguladora de pH, que en una alternativa además comprende una composición reconstituyente de dicho melfalano liofilizado. A dicha composición sólida de melfalano liofilizado se le agrega solución salina normal o dicha composición reconstituyente; esta solución reconstituida se inyecta en bolsa de solución salina normal, luego el contenido de dicha bolsa es neutralizado con dicha solución reguladora de pH acuosa de un agente tampón o buffer, tales como el citrato de sodio, succinato de sodio, malato de sodio, acetato de sodio y tartrato de sodio, o sus mezclas. Esta solución reguladora de pH se agrega a la solución salina antes, después o conjuntamente con dicha solución reconstituida de melfalano, para producir una perfusión, objeto también de la presente invención, que es una solución para infusión isotónica de melfalano entre 0,3 a 3 mg/ml, preferentemente entre 0,4 a 2 mg/ml y más preferentemente a 1 mg/ml, con un pH entre 4 y 6.

La solución reguladora de pH que también cumple la función de neutralizante está constituida por una base o un buffer farmacéuticamente aceptable, capaz de corregir el pH de la bolsa de infusión a un valor comprendido entre 4 y 6.

La solución de infusión o perfusión es preparada, en una forma preferida, de la siguiente manera: diha composición sólida de melfalano liofilizado proveniente desde ácido acético, sus mezclas acuosas o agua, el cual contiene clorhidrato de melfalano y opcionalmente 0,4 mg de povidona K-12 por cada mg de melfalano, y hasta 4 moléculas de cloruro de hidrógeno por cada una de melfalano, es reconstituido utilizando como diluyente agua o solución salina normal a una concentración de 6,25 mg de melfalano/ml. Esta solución reconstituida es diluida en solución salina normal para dar una concentración desde 0,45 a 1 mg/ml. Esta solución es neutralizada por el agregado de una solución reguladora de pH de concentración 100 mg/ml de citrato de trisodio dihidratado en agua o en solución salina normal, la cual contiene 4 mg de citrato de trisodio dihidratado por cada mg de melfalano.

La estabilidad física de dicha solución reconstituida de clorhidrato de melfalano a 6,25 mg/ml de la presente invención es de al menos 3 horas, frente a la solución reconstituida del original que desde unos minutos después de su reconstitución a 5 mg/ml presenta partículas en suspensión.

Otro aspecto relevante de la presente invención es la viscosidad de dicha solución reconstituida de melfalano. La viscosidad determinada por el método 2.2.9 "Capillary viscometer method" de la European Pharmacopoeia 6.0 la solución reconstituida de melfalano 5 mg/ml de un producto genérico de Alkeran® fue de 10.77 cp, mientras que la viscosidad del reconstituido de 6,25 mg/ml de la presente invención es de aproximadamente 1 cp.

En la solución reconstituida de melfalano de la presente invención, gracias a su baja viscosidad, no se aprecian burbujas y la solución es clara inmediatamente luego de la agitación.

La osmolalidad de dicha perfusión a 0,45 mg/ml de la presente invención es más de 3 veces menor que la del original y si se compara en el solución de infusión de 1 mg/ml es de casi 6 veces menor.

La estabilidad química de solución de infusión de 0,45 y la de 1 mg de melfalano/ml en solución salina normal de la solución de infusión de la presente invención es similar a aquella del original.

La solución reconstituida de melfalano de la presente invención se obtiene, en un modo preferido, inyectando rápidamente 8 mi de solución salina normal o agua para inyectable al liofilizado, el cual contiene clorhidrato de melfalano equivalente a 50 mg de melfalano y 20 mg de povidona K-12, seguido por una vigorosa agitación hasta que se obtiene una solución clara.

La perfusión de la presente invención presenta una cantidad de solventes orgánicos, en un modo de realización, que no supera una relación másica con respecto a dicho melfalano (masa de solvente orgánico/masa de melfalano) un valor de 10, preferentemente 5. O sea que para un vial de 50 mg de melfalano corresponden 250 mg de solvente orgánico, sin que se genere un problema toxicológico, que cambie este solvente de su categoría de excipiente, a la de un producto farmacéuticamente activo. Esto origina que al ser infundido el melfalano a 0,45 a 1 mg/ml en solución salina normal, esta solución de infusión pueda poseer de 2,25 a 5 mg/ml de estos solventes útiles para inyectables farmacéuticos, sin generar un problema toxicológico en un régimen a 200 mg/m ² .

Tal solvente es seleccionado del conjunto comprendido por etanol, propilenglicol, polietilenglicol 300, polietilenglicol 400, polietilenglicol 600, dimetilsulfóxido, glicofurol, N-metil-2-pirrolidona, D,L,a,P-isopropilidenglicerol (Solketal®), acetona, dimetilacetamida, glicerol formal, alcohol tetrahidrofurfurílico, diglima (dimetileter del dietilenglicol), o sus mezclas.

La cantidad deseada de solventes orgánicos que puede aceptarse en una formulación de melfalano está relacionado con los regímenes de altas dosis de melfalano utilizados en la terapia de transplante de médula, que generalmente son de 200 a 240 mg/m ² . Así cuando se consideran 37 Kg/m ² para 200 mg/m ² , tenemos 5,41 mg melfalano/Kg y dado que los solventes de los inyectables generalmente para la WHO están en el orden de 25 a 50 mg/Kg- día, origina que una formulación de melfalano, dentro de tales parámetros puede contener hasta 5 a 10 partes en peso de un solvente por cada parte de melfalano.

EJEMPLOS DE APLICACION

Para los ejemplos que siguen las determinaciones de pureza del melfalano en sus distintas composiciones se analizaron por HPLC aplicando el método de Pharmaeuropa, Vol 21, N° 3, July 2009, pag. 425-28

Ejem plo 1

Lio filizació n de clo rhidrato de m elfalano des de ácid o acético y s us ensayo s de reco nstitució n y es tabilidad.

Ejem plo 1.1

Se disolvieron 428 mg de melfalano base Lote 20-01-2010, de una pureza por HPLC del 96,37%, con impureza B 0% -de área-; Imp. C 0,03%; Imp. D 0,12%; Imp. I 0,01%; Imp. J 0,14%; Imp. F 0,02%; Imp. G 2,79%; Imp. H 0,01%; y éster etílico de melfalano 0,20%; en 43,82 g de una solución de ácido acético glacial libre de anhídrido acético y 0,415 g de solución al 37 % p/p de ácido clorhídrico acuoso y se homogenizó. Y se dosificó 2,0 mi en 23 viales de 5 mi de tipo tubo de vidrio tipo I y se liofilizó en un Liofilizador Virtis Advantage, congelando a -50°C, luego de congelado durante 5 hs, iniciando vacío a la misma temperatura, luego llevando el estante a -20°C, luego a o°C y secando finalmente a 5°C y obteniéndose un taco compacto y blanco. Una vez concluida la liofilización el vial es taponado y precintado con precinto de aluminio. Su análisis de pureza por HPLC fue del 96,88%, con impureza B 0% -de área-; Imp. C 0,05%; Imp. D 0,23%; Imp. I 0,02%; Imp. J 0,14%; Imp. F 0,02%; Imp. G 2,27%; Imp. H 0,01%; y éster etílico de melfalano 0,17%; con un peso total de 26,3 mg/vial; con 1,3% p/p de ácido acético (analizado por cromatografía gaseosa) con respecto al peso total; con un contenido de 18,7 mg de melfalano base por vial, con 15,6% p/p de cloruros ionizables por USP con respecto al peso total. Lo que pone de manifiesto que el clorhidrato de mefalano obtenido tiene 1,88 moles de cloruro de hidrógeno por cada mol de melfalano. Estos resultados cromatográficos indican que este medio de liofilización es adecuado para obtener un melfalano liofilizado que cumpla las altas especificaciones de pureza de Pharmaeuropa, Vol 19, N° 2, Abril 2007, pag. 318-21.

Las impurezas mencionadas en este documento son las siguientes:

A: 4-[bis(2-hidroxietil)amino]-L-fenilalanina

B : 4-morfolin-4-il-L-fenilalanina

C: 4- [(2cloroetil) amino] -L-fenilalanina

D: 4- [(2-cloroetil)(2-hidroxietil) amino] -L-fenilalanina

F: 4-[bis(2-cloroetil)amino]-3-cloro-L-fenilalanina

G: dímero de melfalano

J: 4-[[2-(2 -cloroetoxi) etil] (2 -cloroetil) amino] -L-fenilalanina.

Ejemplo 1.2

Para el estudio de estabilidad a 25°C de una solución de melfalano a 10 mg/ml en ácido acético glacial con 3 moles de ácido clorhídrico, provenientes de ácido clorhídrico a 37% p/pe, se utilizaron 940 mg melfalano base Lote 20-01-2010 y se obtuvieron los resultados de la siguiente tabla I.

ANALISIS COMPARATIVO DE PUREZA POR HPLC DE LA ESTABILIDAD DE SOLUCION DE MELFALANO CON 3 MOLES DE HCL POR MOL DE MELFALANO PROVENIENTE DE ACIDO CLORHIDRICO 37%P/P A 10 mg/ml EN ACIDO ACETICO A 25 ^s C

VS. SU API. RESULTADOS EXPRESADOS EN % DE AREA.

Paralelamente se filtró, y dosificó la solución de melfalano a 10 mg/ml en ácido acético glacial con 3 moles de ácido clorhídrico, provenientes de ácido clorhídrico a 37% p/pe, que utilizó melfalano base Lote 20-01-2010, en viales de 5 mi de frasco tubo de boca de 20 mm, conteniendo 2 mi de la solución y se la liofilizó en un Liofilizador Virtis Advantage, congelando a -50°C durante 5 hs, iniciando vacío a la misma temperatura, luego llevando el estante a -20°C, luego a o°C y secando finalmente a 5°C, con un vacío final de 25 microbares. Obteniéndose un taco compacto y blanco y los resultados de la siguiente tabla que demuestran que el melfalano clorohidrato liofilizado no muestra degradación de la pureza inicial del API utilizado. Tabla II

ANALISIS COMPARATIVOS DE PUREZAS POR HPLC DEL LIOFILIZADO DESDE ACIDO ACETICO DE MELFALANO CON 3

MOLES DE HCL POR MOL DE MELFALANO PROVENIENTE DE ACIDO CLORHIDRICO 37%P/P (SECADO A 5 ² C) VS. SU API

ND: No detectable (es decir, no aparece en los cromatogramas)

< 0,05: signifiac que esta en el cromatograma pero por debajo del

limite de cuantificacion por lo que se debe informar como <0,05

Ejem plo 2

Reconstitución de la com posición sólida de m elfalano liofilizado del ejem plo 1 para lograr una s olución reconstituida de la invención.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 3,2 mi de solución salina normal, produciendo una solución de melfalano a 5,40 mg/ml con un pH de 1,80. Se tomó una alícuota de 0,8 mi y se le agrega otra de 4,2 mi de solución salina normal, produciendo 0,86 mg/ml con un pH de 2,33 y se neutralizó con 0,20 mi de una solución de 100 mg/ml de citrato trisódico dihidrato, produciendo un pH final de 5,44.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 0,4 mi etanol absoluto produciendo una solución de melfalano a 43 mg/ml.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 3,2 mi de una solución de etanol absoluto en solución salina normal a 39 mg/ml, produciendo una solución de melfalano a 5,40 mg/ml con un pH de 1,66. Se tomó una alícuota de 0,8 mi y se le agrega otra de 4,2 mi de solución salina normal, produciendo 0,86 mg/ml con un pH de 2,28 y se neutralizó con 0,20 mi de una solución de 100 mg/ml de citrato trisódico dihidrato, produciendo un pH final de 5,49.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 0,2 mi

DMSO calidad HPLC produciendo una solución de melfalano a 86 mg/ml.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 3,2 mi de DMSO calidad HPLC en solución salina normal a 39 mg/ml, produciendo una solución de melfalano a 5,40 mg/ml con un pH de 1,66. Se tomó una alícuota de 0,8 mi y se le agrega otra de 4,2 mi de solución salina normal, produciendo 0,86 mg/ml con un pH de 2,26 y se neutralizó con 0,20 mi de una solución de 100 mg/ml de citrato trisódico dihidrato, produciendo un pH final de 5,46.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 0,2 mi de i-metil-2-pirrolidona produciendo una solución de melfalano a 86 mg/ml.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 3,2 mi de i-metil-2-pirrolidona en solución salina normal a 39 mg/ml, produciendo una solución de melfalano a 5,40 mg/ml con un pH de 1,69. Se tomó una alícuota de 0,8 mi y se le agrega otra de 4,2 mi de solución salina normal, produciendo 0,86 mg/ml con un pH de 2,30 y se neutralizó con 0,20 mi de una solución de 100 mg/ml de citrato trisódico dihidrato, produciendo un pH final de 5,51.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 0,2 mi de propilenglicol produciendo una solución de melfalano a 86 mg/ml.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 3,2 mi de una solución de propilenglicol en solución salina normal a 39 mg/ml, produciendo una solución de melfalano a 5,40 mg/ml con un pH de 1,65. Se tomó una alícuota de 0,8 mi y se le agrega otra de 4,2 mi de solución salina normal, produciendo 0,86 mg/ml con un pH de 2,30 y se neutralizó con 0,20 mi de una solución de 100 mg/ml de citrato trisódico dihidrato, produciendo un pH final de 5,49.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 0,2 mi de polietilenglicol 400 (Lutrol E 400) produciendo una solución de melfalano a 86 mg/ml.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 3,2 mi de polietilenglicol 400 (Lutrol E 400) en solución salina normal a 39 mg/ml, produciendo una solución de melfalano a 5,40 mg/ml con un pH de 1,64. Se tomó una alícuota de 0,8 mi y se le agrega otra de 4,2 mi de solución salina normal, produciendo 0,86 mg/ml con un pH de 2,28 y se neutralizó con 0,20 mi de una solución de 100 mg/ml de citrato trisódico dihidrato, produciendo un pH final de 5,43.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 0,2 mi de dimetilacetamida produciendo una solución a 86 mg/ml.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 3,2 mi de dimetilacetamida en solución salina normal a 39 mg/ml, produciendo una solución de melfalano a 5,40 mg/ml con un pH de 1,74. Se tomó una alícuota de 0,8 mi y se le agrega otra de 4,2 mi de solución salina normal, produciendo 0,86 mg/ml con un pH de 2,29 y se neutralizó con 0,20 mi de una solución de 100 mg/ml de citrato trisódico dihidrato, produciendo un pH final de 5,50.

Ejem plo 3

Lio filizació n de clo rhidrato de m e lfalano des de D MS O y s us e nsayo s de reco ns titució n y e stabilidad Se disolvieron 479 mg de melfalano base Lote 20-01-2010, de una pureza por HPLC del 96,37%, con impureza B 0% -de área-; Imp. C 0,03%; Imp. D 0,12%; Imp. I 0,01%; Imp. J 0,14%; Imp. F 0,02%; Imp. G 2,79%; Imp. H 0,01%; y ester etílico de melfalano 0,20%; en 8,768 g de una solución de dimetilsulfóxido (DMSO) calidad HPLC y 0,445 g de solución al 37 % p/p de ácido clorhídrico acuoso y se homogenizó. Y se dosificó 0,40 mi (21,9 mg/vial) en 21 viales de 5 mi de tipo tubo de vidrio tipo I y se liofilizó en un Liofilizador Virtis Advantage, congelando a -50°C, luego de congelado durante 5 hs, iniciando vacío a la misma temperatura, luego llevando el estante a -20°C, luego a 17°C y secando finalmente a 25°C y obteniéndose un producto gomoso amarillento. Una vez concluida la liofilización el vial es taponado y precintado con precinto de aluminio. Su análisis de pureza por HPLC fue del 92,76 %, con impureza B 0,20% -de área-; Imp. C 0,43%; Imp. D 0,52%; Imp. I 0,03%; Imp. J 0,14%; Imp. F 1,23%; Imp. G 2,09%; Imp. H 0,02%; y éster etílico de melfalano 0,14%; estos resultados cromatográficos indican que este medio de liofilización no es el adecuado para obtener un melfalano que cumpla altas especificaciones de pureza.

Ejem plo 4

Re co nstitució n de la co m p o sició n s ó lida de m elfalan o lio filizad o del ejem plo 3 Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 3,2 mi de solución salina normal, produciendo una solución de melfalano a 6,84 mg/ml con un pH de 2,20. Se tomó una alícuota de 0,8 mi y se le agrega otra de 4,2 mi de solución salina normal, produciendo 1,09 mg/ml con un pH de 2,20 y se neutralizó con 0,20 mi de una solución de 100 mg/ml de citrato trisódico dihidrato, produciendo un pH final de 5,59.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 0,2 mi etanol absoluto produciendo una solución de melfalano a 110 mg/ml.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 3,2 mi de una solución de etanol absoluto en solución salina normal a 39 mg/ml, produciendo una solución de melfalano a 6,84 mg/ml con un pH de 1,62. Se tomó una alícuota de 0,8 mi y se le agrega otra de 4,2 mi de solución salina normal, produciendo 1,09 mg/ml con un pH de 2,22 y se neutralizó con 0,20 mi de una solución de 100 mg/ml de citrato trisódico dihidrato, produciendo un pH final de 5,64.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 0,2 mi de i-metil-2-pirrolidona produciendo una solución de melfalano a 110 mg/ml.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 3,2 mi de i-metil-2-pirrolidona en solución salina normal a 39 mg/ml, produciendo una solución de melfalano a 6,84 mg/ml con un pH de 1,65. Se tomó una alícuota de 0,8 mi y se le agrega otra de 4,2 mi de solución salina normal, produciendo 1,09 mg/ml con un pH de 2,24 y se neutralizó con 0,20 mi de una solución de 100 mg/ml de citrato trisódico dihidrato, produciendo un pH final de 5,61.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 0,2 mi de propilenglicol produciendo una solución de melfalano a 110 mg/ml.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 3,2 mi de una solución de propilenglicol en solución salina normal a 39 mg/ml, produciendo una solución de melfalano a 6,84 mg/ml con un pH de 1,61. Se tomó una alícuota de 0,8 mi y se le agrega otra de 4,2 mi de solución salina normal, produciendo 1,09 mg/ml con un pH de 2,22 y se neutralizó con 0,20 mi de una solución de 100 mg/ml de citrato trisódico dihidrato, produciendo un pH final de 5,62.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 0,2 mi de polietilenglicol 400 (Lutrol E 400) produciendo una solución de melfalano a 110 mg/ml.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 3,2 mi de polietilenglicol 400 (Lutrol E 400) en solución salina normal a 39 mg/ml, produciendo una solución de melfalano a 6,84 mg/ml con un pH de 1,61. Se tomó una alícuota de 0,8 mi y se le agrega otra de 4,2 mi de solución salina normal, produciendo 1,09 mg/ml con un pH de 2,21 y se neutralizó con 0,20 mi de una solución de 100 mg/ml de citrato trisódico dihidrato, produciendo un pH final de 5,58.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 0,2 mi de dimetilacetamida produciendo una solución a 110 mg/ml.

Un vial con la composición sólida de melfalano liofilizado se reconstituyó con 3,2 mi de dimetilacetamida en solución salina normal a 39 mg/ml, produciendo una solución de melfalano a 6,84 mg/ml con un pH de 1,68. Se tomó una alícuota de 0,8 mi y se le agrega otra de 4,2 mi de solución salina normal, produciendo 1,09 mg/ml con un pH de 2,24 y se neutralizó con 0,20 mi de una solución de 100 mg/ml de citrato trisódico dihidrato, produciendo un pH final de 5,61.

Ejem plo 5

Lio filizació n de m elfalano des de ácido acético co n y sin po vido na y s us ensayo s de reco ns titució n y e stabilidad

Ejemplo 5.1

Para la elaboración se utilizaron 374 mg de melfalano base, mezcla de los siguientes lotes: 325 mg del lote G-MEL- 1390-09, de una pureza por HPLC del 98,18%, con impureza B 0,01% -de área-; Imp. C o %; Imp. D 0,70%; Imp. I o %; Imp. J 0,36%; Imp. F o %; Imp. G 0,50%; Imp. H 0,01%; y éster etílico de melfalano o,i%;y 67 mg del lote G-MEL-134-08, de una pureza por HPLC del 98,37%, con impureza B 0% -de área-; Imp. C o %; Imp. D 0,11%; Imp. I o %; Imp. J 0,07%; Imp. F o %; Imp. G 0,76%; Imp. H 0,02%; y éster etílico de melfalano 0,08%;.

En un vaso de precipitado de 50 mi con agitación magnética, se agregan 15 mi de ácido acético glacial; se agregan lentamente 374 mg de melfalano base, y se disuelven fácilmente en el ácido acético; se lava con 0,49 mi de ácido acético glacial el vaso de precipitado donde se encontraba el melfalano base y se le agregó a la solución de melfalano en ácido acético.

Para la elaboración de la solución a liofilizar libre de PVP: se retiró con ayuda de micropipeta 7,5 mi de solución y se los colocó en un vaso de precipitado de 25 mi con agitación magnética. Se agregó con micropipeta 3,383 mi de ácido acético glacial. Esta solución es filtrada con filtro de nylon de 0,45 um y tiene una concentración de 16,67 mg/ml de melfalano en ácido acético glacial.

Se colocan 3,0 mi de esta solución en un vial de 15 mi de vidrio tubo tipo I y se pretapona con tapón de goma para liofilización con calidad farmacéutica. La solución es liofilizada en un Liofilizador Virtis modelo Advantage según técnica del ejemplo 1, una vez concluida la liofilización el vial es taponado y precintado con precinto de aluminio; obteniéndose un taco compacto y blanco.

Para la elaboración de la solución con PVP: en un vaso de precipitado de 5 mi con agitación magnética se agregan, con ayuda de micropipeta, 3,604 mi de ácido acético glacial, luego se agrega lentamente 77 mg de PVP Kollidon K-12 y se disuelve. Esta solución es transferida al vaso de precipitado de 50 mi el cual contiene la solución en agitación de melfalano en ácido acético. Esta solución es filtrada con filtro de nylon de 0,45 um. Se colocan 3,0 mi de esta solución en un vial de 15 mi de vidrio tubo tipo I y se pretapona con tapón de goma butilo para liofilización. La solución es liofilizada en un Liofilizador Virtis modelo Advantage, una vez concluida la liofilización el vial es taponado y precintado con precinto de aluminio. Su análisis de pureza por HPLC fue del 90,57 %, con impureza B 0,01% -de área-; Imp. C 0,17%; Imp. D 0,55%; Imp. I 0,79%; Imp. J 0,28%; Imp. F 0,03%; Imp. G 7,38%; Imp. H 0,02%; y éster etílico de melfalano 0,34%. Estos resultados cromatográficos indican que este medio de liofilización no es el adecuado para obtener un melfalano que cumpla altas especificaciones de pureza.

Ejem plo 5.2

Para el estudio de estabilidad a 25°C de una solución de melfalano a 10 mg/ml en ácido acético glacial, en ausencia de ácido clorhídrico, se utilizaron 830 mg melfalano base Lote 20-01-2010 y se obtuvieron los resultados de la siguiente tabla. Esta solución no está comprendida en la presente invención, sólo se introduce a efectos de comparar esta alternativa sin ácido clorhídrico que presenta mayor concentración de impurezas que la composición de melfalano liofilizado de la invención. Tabla III

Paralelamente se filtró, y dosificó la solución de melfalano a 10 mg/ml en ácido acético glacial, que utilizó melfalano base Lote 20-01-2010, en viales de 5 mi de frasco tubo de boca de 20 mm, conteniendo 2 mi de la solución y se la liofilizó en un Liofilizador Virtis Advantage, congelando a -50°C durante 5 hs, iniciando vacío a la misma temperatura, luego llevando el estante a -20°C, luego a o°C y secando finalmente a 25°C, con un vacío final de 25 microbares. Obteniéndose un taco compacto y blanco y los resultados de la siguiente tabla que demuestran que el melfalano liofilizado, en ausencia de ácido clorhídrico, muestra una degradación de la pureza inicial del API utilizado cercana al 1% p/p y un incremento notable de su impureza G.

Tabla IV

ANALISIS COMPARATIVOS DE PUREZAS POR HPLC DEL LIOFILIZADO DE MELFALANO DESDE ACIDO ACETICO

(SECADO A 25 ² C) VS. SU API

< 0,05: signifiac que esta en el cromatograma pero por debajo del

limite de cuantificacion por lo que se debe informar como <0,05

* En el cromatograma este pico no esta bien resuelto, por esto se ve

la diferencia con el duplicado. Ejem plo 6

6 ,1,1) Lio filizació n de clo rh idrato m elfalan o des de ácido acé tico .

En un balón de vidrio de 1 1 provisto de agitación magnética, se colocaron 315 mi de una solución de ácido acético glacial y 3,88 g de solución al 37 % p/p de ácido clorhídrico acuoso, con agitación constante hasta su homogenización. Se agregaron 4,00 g de melfalano del lote Mel i43-09(analizado por HPLC posee impureza A no detec, Imp. B no detec; Imp. C no detec; Imp. D o,i%p/p; Imp. J no detec; Imp. F no detec; Imp. G 0,9%p/p; Imp. H no detec; max. imp. desconocida o,i%p/p; impurezas totales del i,2%p/p), dispersándolo con agitación hasta su total disolución. La solución se filtró por membrana de 0,22 μηι a fin de esterilizarla y liberar a la solución de la presencia de cualquier cuerpo extraño. La solución estéril se dosificó asépticamente en 4,o±o,i mi en viales de vidrio tubo tipo I de 15 mi de boca de 20 mm, los cuales fueron previamente tratados de acuerdo a los procedimientos standard y validados, de la siguiente forma: los viales fueron lavados en la lavadora automática con agua para inyectables a 70-75°C, y luego fueron despirogenados y esterilizados por calor seco en la estufa durante 180 minutos a 220°C. Una vez llenados con la solución, los viales se taponaron con tapones de bromobutilo esterilizados, se cargaron en una bandeja de liofilización. El ciclo de congelado del producto en un liofilizador Virtis Advantage se hizo congelando a -50°C, luego de congelado durante 5 hs, iniciando vacío a la misma temperatura, luego llevando el estante a -20°C, luego a o°C y secando finalmente a 5°C; se precintaron con precintos de aluminio con tapa plástica. El producto obtenido fue analizado para determinar su título, pureza, hermeticidad del vial (con azul de metileno "European Pharmacopeia 6.0 método 3.2.9, pag 386-7"), aspecto (claridad y color de la solución), esterilidad y endotoxinas bacterianas. Los viales pasaron la prueba de hermeticidad, y todos los demás ensayos cumplieron las especificaciones del producto.

De esta manera se obtuvo un melfalano liofilizado que analizado por HPLC con impureza A no detec, Imp. B no detec; Imp. C <o,05 %; Imp. D 0,21%; Imp. J 0,06%; Imp. F < 0,05 %; Imp. G 0,92%; Imp. H «3,05%; max. imp. desconocida <0,05%;impurezas totales del 1,3 %. 6 ,1,2) Lio filizació n de clo rhidrato m elfalan o des de una s o lució n acu o sa co n po vid o na (genérico de Alke ran) .

En un balón de vidrio de 1 1 provisto de agitación magnética, se colocaron 500 mi de agua para inyectable a 5°C, se agregaron 6,0 g de ácido clorhídrico concentrado PA de 37 % y 2,00 g de povidona Kollidon K12 con agitación constante hasta su total disolución. Se agregaron 5,00 g de melfalano del lote Mel 143-09 (analizado por HPLC posee impureza A no detec, Imp. B no detec; Imp. C no detec; Imp. D o,i%p/p; Imp. J no detec; Imp. F no detec; Imp. G 0,9%p/p; Imp. H no detec; max. imp. desconocida o,i%p/p; impurezas totales del i,2%p/p), dispersándolo con agitación hasta su total disolución. La solución se filtró por membrana de 0,22 μηι a fin de esterilizarla y liberar a la solución de la presencia de cualquier cuerpo extraño. La solución estéril se dosificó a 5°C asépticamente en 5,o±o,i mi en viales de vidrio tubo tipo I de 15 mi de boca de 20 mm, los cuales fueron previamente tratados de acuerdo a los procedimientos standard y validados, de la siguiente forma: los viales fueron lavados en la lavadora automática con agua para inyectables a 70-75°C, y luego fueron despirogenados y esterilizados por calor seco en la estufa durante 180 minutos a 220°C. Una vez llenados con la solución, los viales se taponaron con tapones de bromobutilo esterilizados, se cargaron en una bandeja de liofilización. El ciclo de congelado del producto en un liofilizador Virtis Advantage se hizo por 12 h a -50°C, luego se inició vacío y se llevó a -10, o, 20; 25 y 30°C durante 10 h en cada temperatura; se precintaron con precintos de aluminio con tapa plástica. El producto obtenido fue analizado para determinar su título, pureza, hermeticidad del vial (con azul de metileno de European Pharmacopeia 6.0 método 3.2.9, pag 386-7), aspecto (claridad y color de la solución), esterilidad y endotoxinas bacterianas. Los viales pasaron la prueba de hermeticidad, y todos los demás ensayos cumplieron las especificaciones del producto.

De esta manera se obtuvo un melfalano liofilizado designado como Lote 02-06-09, que analizado por HPLC con impureza A no detec, Imp. B no detec; Imp. C <o,05 %; Imp. D 0,61%; Imp. J 0,07%; Imp. F < 0,05 %; Imp. G 0,97%; Imp. H <o,05%; max. imp. desconocida <o,05%;impurezas totales del 1,2 %.

6 ,2) Elab o ració n del dis o lvente de l genérico de Alke ran ®:

En un recipiente de acero inoxidable de volumen adecuado provisto de agitación, se colocaron 0,5 litros de agua para inyectable a 35°C, y se agregaron 100,9 g de citrato de sodio USP con agitación constante. Se mantuvo la agitación hasta disolución completa, durante unos 30 minutos. Se enfrió a temperatura ambiente. Se agregaron 3000 mi de Propilenglicol PA y 250 mi de etanol absoluto PA, dispersándolo con agitación permanente durante 30 minutos, hasta su disolución. Se agregó cantidad necesaria de agua calidad inyectable hasta completar el volumen final de 5,00 litros, agitando durante 5 minutos hasta homogenizar. La solución se filtró por membrana de 0,22 μηι a fin de esterilizarla y liberar a la solución de la presencia de cualquier cuerpo extraño. La solución estéril se dosificó io,3±o,i mi en viales de vidrio tubo tipo I de 15 mi de boca de 20 mm, los cuales fueron previamente tratados de acuerdo a los procedimientos standard y validados, de la siguiente forma: los viales fueron lavados en la lavadora automática con agua para inyectables a 70-75°C, y luego fueron despirogenados y esterilizados por calor seco en la estufa durante 180 minutos a 220°C. Una vez llenados con la solución, los viales se taponaron con tapones de bromobutilo teflonados esterilizados, se precintaron con precintos de aluminio con tapa plástica, y se esterilizaron en autoclave durante 40 minutos a 121°C. El producto obtenido fue analizado para determinar hermeticidad del vial (con azul de metileno de European Pharmacopeia 6.0 método 3.2.9, pag 386-7), aspecto (claridad y color de la solución), esterilidad y endotoxinas bacterianas. Los viales pasaron la prueba de hermeticidad, no se observó turbidez ni opalescencia en ningún vial, el pH no varió respecto al valor hallado en la solución antes de su esterilización por autoclave, y todos los demás ensayos cumplieron las especificaciones del producto.

De esta manera se obtuvo un disolvente genérico de ATkeran® con la siguiente composición farmacéutica:

Propilenglicol USP 31 6,00 mi

Etanol USP 31 0,52 mi

Citrato de sodio USP 31 200,00 mg

Agua para inyectable c.s.p. 10 mi

6 ,3 ,1) Elab o ració n de la co m po sició n re co ns tituyente de dich o m elfalan o lio filizad o de la presente invenció n :

En un recipiente de acero inoxidable de volumen adecuado provisto de agitación, se colocaron 3,5 litros de agua para inyectable a 35°C, y se agregaron 36,0 g de cloruro de sodio USP con agitación constante. Se agregó cantidad necesaria de agua calidad inyectable hasta completar el volumen final de 4,00 litros, agitando durante 5 minutos hasta homogenizar. La solución se filtró por membrana de 0,22 μηι a fin de esterilizarla y liberar a la solución de la presencia de cualquier cuerpo extraño. La solución estéril se dosificó 8,i±o,i mi en viales de vidrio tubo tipo I de 10 mi de boca de 20 mm, los cuales fueron previamente tratados de acuerdo a los procedimientos standard y validados, de la siguiente forma: los viales fueron lavados en la lavadora automática con agua para inyectables a 70- 75°C, y luego fueron despirogenados y esterilizados por calor seco en la estufa durante 180 minutos a 220°C. Una vez llenados con la solución, los viales se taponaron con tapones de bromobutilo teflonados esterilizados, se precintaron con precintos de aluminio con tapa plástica, y se esterilizaron en autoclave durante 40 minutos a 121°C. El producto obtenido fue analizado para determinar su hermeticidad del vial (con azul de metileno de European Pharmacopeia 6.0 método 3.2.9, pag 386-7), aspecto (claridad y color de la solución), esterilidad y endotoxinas bacterianas. Los viales pasaron la prueba de hermeticidad, no se observó turbidez ni opalescencia en ningún vial, el pH no varió respecto al valor hallado en la solución antes de su esterilización por autoclave, y todos los demás ensayos cumplieron las especificaciones del producto.

De esta manera se obtuvo un disolvente de nuestra invención con la siguiente composición farmacéutica:

Cloruro de sodio USP 31 48,0 mg

Agua para inyectable c.s.p 8,00 mi 6 ,3 ,2) Elabo ració n de s o lució n regulado ra de pH de la presente invenció n :

En un recipiente de acero inoxidable de volumen adecuado provisto de agitación, se colocaron 1,5 litros de agua para inyectable a 35°C, y se agregaron 200,5 g de citrato de sodio USP con agitación constante. Se mantuvo la agitación hasta disolución completa. Se agregó cantidad necesaria de agua calidad inyectable hasta completar el volumen final de 2,00 litros, agitando durante 5 minutos hasta homogenizar. La solución se filtró por membrana de 0,22 μηι a fin de esterilizarla y liberar a la solución de la presencia de cualquier cuerpo extraño. La solución estéril se dosificó 2,i±o,i mi en viales de vidrio tubo tipo I de 5 mi de boca de 20 mm, los cuales fueron previamente tratados de acuerdo a los procedimientos standard y validados, de la siguiente forma: los viales fueron lavados en la lavadora automática con agua para inyectables a 70-75°C, y luego fueron despirogenados y esterilizados por calor seco en la estufa durante 180 minutos a 220°C. Una vez llenados con la solución, los viales se taponaron con tapones de bromobutilo teflonados esterilizados, se precintaron con precintos de aluminio con tapa plástica, y se esterilizaron en autoclave durante 40 minutos a i2i°C. El producto obtenido fue analizado para determinar su hermeticidad del vial (con azul de metileno de European Pharmacopeia 6.0 método 3.2.9, pag 386-7), aspecto (claridad y color de la solución), esterilidad y endotoxinas bacterianas. Los viales pasaron la prueba de hermeticidad, no se observó turbidez ni opalescencia en ningún vial, el pH no varió respecto al valor hallado en la solución antes de su esterilización por autoclave, y todos los demás ensayos cumplieron las especificaciones del producto.

De esta manera se obtuvo un disolvente de nuestra invención con la siguiente composición farmacéutica:

Citrato de sodio USP 31 200,00 mg

Agua para inyectable c.s.p 2,00 mi

6 ,4) Es tabilidad fís ica de la s o lució n re co nstituida de m elfalan o de la pres ente inve nció n versus e l del genérico de Alkeran ^®

Se reconstituye el liofilizado de melfalano del ejemplo 6,1,1) con 8 mi de solución salina normal del ejemplo 6,3,1), agitando el vial vigorosamente hasta obtener una solución clara. Esto provee una solución de 6,25 mg/ml de melfalano correspondiente a nuestra invención.

Se reconstituye el liofilizado de melfalano del ejemplo 6,1,2) con 8 mi de solución salina normal del ejemplo 6,3,1), agitando el vial vigorosamente hasta obtener una solución clara. Esto provee una solución de 6,25 mg/ml de melfalano correspondiente a nuestra invención. Se reconstituye el liofilizado de melfalano del ejemplo 6,1,2) con 10 mi del disolvente del ejemplo 6,2), agitando el vial vigorosamente hasta obtener una solución clara. Esto provee una solución de 5 mg/ml de melfalano correspondiente al genérico de ATkeran®.

Siguiendo el método descrito en la técnica "2.9.20, particulate contamination: visible particles, de la European Pharmacopoeia 6.0" se comparó la estabilidad física de las soluciones reconstituidas del ATkeran ^® equivalente a la del original y la de la presente invención.

En el reconstituido correspondiente al genérico de ATkeran ^® desde los primeros minutos se pudo apreciar partículas en la solución.

La solución reconstituida de melfalano de los ejemplos 6,1,1) y 6,1,2), que corresponden a la presente invención luego de 3 horas de inspección visual no se pudo apreciar ningún precipitado.

6 ,5) Osm o lalidad co m parada de la perfusió n de la presente invención versus el genérico de Alkeran ^®

Utilizando un osmómetro Wescor, modelo Vapro 5520, se realizaron determinaciones de osmolalidad de las soluciones de infusión de 0,45 y 1 mg/ml de melfalano en solución salina normal de la formulación genérica de Alkeran ^® y de la perfusión de la presente invención. A los efectos de comparar las diferencias entre las dos formulaciones y eliminar la contribución de la solución salina normal, también se determinó la osmolalidad de la solución salina utilizada para la elaboración de las soluciones de infusión.

Preparación de las soluciones de infusión de la formulación genérica de Alkeran ^® : Se reconstituye el liofilizado de melfalano del ejemplo 5,1,2) con 10 mi del disolvente del ejemplo 5,2), agitando el vial vigorosamente hasta obtener una solución clara. Esto provee una solución de 5 mg/ml de melfalano de la formulación genérica de Alkeran ^® .

Para obtener la perfusión de 0,45 mg/ml, se extrae 0,45 mi del reconstituido y se diluye en 4,55 mi de solución salina normal. Para obtener la solución de 1 mg/ml se extrae 1 mi del reconstituido y se diluye en 4 mi de solución salina normal.

Preparación de las soluciones de infusión o perfusiones de las formulaciones de la presente invención: Se reconstituyen los liofilizados de melfalano del ejemplo 6,1,1) y 6,1,2) con 8 mi de solución salina normal del ejemplo 6,3,1), agitando el vial vigorosamente hasta obtener una solución clara. Esto provee dos soluciones de 6,25 mg/ml de melfalano correspondientes a la presente invención.

Para obtener la solución de 0,45 mg/ml, se extrae de cada una 3,6 mi de la solución reconstituida de melfalano y se diluye en 45,5 mi de solución salina, luego se le agregan a cada una 0,9 mi de la solución reguladora de pH del ejemplo 6,3,2). Para obtener la solución de i mg/ml, se extraen 1,6 mi del reconstituido de cada una y se diluyen en 8 mi de solución salina, luego se agregan 0,4 mi de la solución reguladora de pH del ejemplo 6,3,2).

Los resultados de la tabla V determinan que la osmolalidad de las soluciones para infusión del genérico de ATkeran ^® son de tres a seis veces mayores que los de la solución salina normal, mientras que los de la presente invención se mantienen isotónicos.

Tabla V

Tabla V. Osmolalidad de las soluciones para infusión del genérico Alkeran ^® versus los de la presente invención, y de la solución salina normal.

6 ,6) Estabilidad quím ica de las soluciones reconstituidas de los liofilizados de nuestra invención versus genérico de Alkeran ^® .

Se investigaron las soluciones de melfalano correspondientes a la presente invención del ejemplo 6,4) por HPLC (41) para determinar la pureza, título de las soluciones de 6,25 mg/ml de melfalano correspondientes a nuestra invención y de solución de 5 mg/ml de melfalano, correspondiente al genérico de Alkeran ^® .

Se realizaron ensayos de estabilidad, determinando título y pureza de melfalano, a los 5 minutos de preparada la soluciones reconstituidas.

En los ensayos el reconstituido es filtrado por 0,22 um, antes de realizar la inyección en el HPLC.

En la misma tabla 2 se comparan las impurezas del API, de los liofilizados con cada solución reconstituida. El resultado obtenido demuestra que las soluciones reconstituidas de la presente invención son más estables a los 5 minutos de ser elaborada, que la del genérico de Alkeran ^® , mientras que se parte del mismo API y purezas de los productos liofilizados similares, teniendo en cuenta la variabilidad analítica.

El prospecto de Alkeran ^® , establece que el reconstituido se debe diluir inmediatamente después de preparado con solución salina normal, por que la solución precipita como se estableció en el ejemplo 6,4).

Tabla VI. Estabilidad química comparada de las soluciones reconstituidas a los 5 minutos del genérico de Alkeran® y de las de la presente invención. Las impurezas totales están expresadas como % p/p del título de melfalano en el liofilizado.

Tabla VI

6,7) Resumen comparativo de los estudios de pureza por HPLC del API empleado, de los liofilizados de clorohidrato de melfalano desde agua (genérico de Alkeran ^® ) y desde ácido acético y sus respectivos liofilizados reconstituidos.

El análisis de la tabla VII permite establecer que los métodos de liofilización de melfalano clorhidrato desde agua y acido acético pueden producir liofilizados de similar pureza, aunque el acuoso requiere mantener la solución madre a baja temperatura durante su elaboración y fraccionamiento para evitar la formación de la impureza D. La reconstitución a 6,25 mg/ml a temperatura ambiente de sendos liofilizados de clorhidrato de melfalano con solución salina normal (SSN) produce también degradaciones similares a los 5 minutos de haber sido reconstituidas, mientras que la reconstitución a 5 mg/ml a temperatura ambiente del liofilizado acuoso con el disolvente genérico de Alkeran ^® , a 5 minutos de su reconstitución, produce casi el doble de la degradación obtenida cuando se usa como reconstituyente la solución salina normal.

Tabla VII: Impurezas individuales y totales del API utilizado, del liofilizado de los ejemplos de 6,1,1) y 6,1,2); y sus respectivas soluciones reconstituidas a 6,25 y 5 mg/ml a los 5 minutos de haber sido preparadas.

Cabe destacar que, debido a la desviación de la Ley de Beer, para bajas concentraciones de impurezas con respecto al melfalano los porcentajes peso en peso %(p/p) equivalen a los porcentajes en área % Area multiplicados por un factor de 0,6.

6 ,8 ) Prese ntació n de la invenció n farm acéutica inye ctable .

La presentación de la formulación de la presente invención como producto terminado inyectable es un kit de dos o tres viales, que comprende el vial del liofilizado y el vial de la solución neutralizante. Además puede contener el vial de la composición reconstituyente de dicho melfalano liofilizado. En una alternativa de la presente invención el liofilizado es reconstituido con solución salina normal, por lo que no es necesario incorporarlo al kit.

El blister de 2 o tres cunas conteniendo los viales se encuentra junto con el prospecto del producto dentro de un estuche de cartulina con la información obligatoria correspondiente.

En una alternativa de la presente invención dicho kit comprende una jeringa prellenada.

REFEREN CIAS

i) Prospecto de Alkeran inyectable.

2) Hillar M. Lazarus et al.: High-Dose Melphalan and the Development of Hematopoietic Stem-Cell Transplantation: 25 Years Later. Journal of Clinical Oncology 26, 2240:2243, 2010.

3) Vassallo, J.A.; Barrios, E..: Actualización Ponderada de los Factores de Riesgo del Cáncer. Montevideo: Comisión Honoraria de Lucha contra el Cáncer, 2003.

4) Eduardo Flores Sañudo: Estado Actual del Tratamiento del Mieloma Múltiple. IX Congreso Nacional de la Sociedad Española de Oncología Médica, Tenerife, 2003.

5) J. Parker, P. Parker: Múltiple Myeloma. ICON Health Publications, 2004

6) R. L. Comenzó, E. Vosburgh et al.: Dose-Intensive Melphalan With Blood Stem- Cell Support for the Treatment of AL (Amyloid Light-Chain) Amyloidosis: Survival and

Responses in 25 Patients. Blood 91, 3662-3670, 1998.

7) S. Girnius,i D. C. Seldin: Hepatic response after high-dose melphalan and stem cell transplantation in patients with AL amyloidosis associated liver disease. Haematologica 94, 7, 1029-1032, 2009.

8) H. Goldschmidt, H. Lannert, et al.: Múltiple Myeloma and renal failure. Nephrol

Dial Transplant. 15, 301-304, 2000. 9) V. Sanchorawala, M. Skinner et al.: Long-term outcome of patients with AL amyloidosis treated with high-dose melphalan and stem-cell transplantation. Blood 110, 10, 3561-3569, 2007.

10) P. Zhou, J. Teruya-Feldstein et al.: Calreticulin expression in the clonal plasma cells of patients with systemic light-chain (AL-) amyloidosis is associated with response to high-dose melphalan. Blood 111, 2, 549-557, 2008.

11) D. Seldin, J. Anderson et al.: Improvement in quality of life of patients withAL amyloidosis treated with high-dose melphalan and autologous stem cell transplantation. Blood 104, 6, 1888-1893, 2004.

12) B. Bjórkstrand, T. Klausen et al.: Double versus single high-dose melphalan 200 mg/m2 and autologous stem cell transplantation for múltiple myeloma: a region-based study in 484 patients from the Nordic área. Hematology Reviews, 1, 1, 2009

13) P. Moreau, T. Facón et al.: Comparison of 200 mg/m2 melphalan and 8 Gy total body irradiation plus 140 mg/m2 melphalan as conditioning regimens for peripheral blood stem cell transplantation in patients with newly diagnosed múltiple myeloma: final analysis of the Intergroupe Francophone du Mye'lome 9502 randomized trial. Blood 99, 3, 731-735, 2002.

14) D. Seldin, J. Anderson et al.: Successful treatment of AL amyloidosis with high- dose melphalan and autologous stem cell transplantation in patients over age 65. Blood 108, 12, 3945-3947, 2006.

15) V. SANCHORAWALA, D. SELDIN: An overview of high-dose melphalan and stem cell transplantation in the treatment of AL amyloidosis. Amyloid, 14, 4, 261-269, 2007

16) M. ATTAL, J. HAROUSSEAU et al.: A PROSPECTIVE, RANDOMIZED TRIAL OF AUTOLOGOUS BONE MARROW TRANSPLANTATION AND CHEMOTHERAPY IN

MULTIPLE MYELOMA. The New England Journal of Medicine, 335, 2, 91-97, 1996

16) M. Skinner, V. Sanchorawala et al.: High-Dose Melphalan and Autologous Stem- Cell Transplantation in Patients with AL Amyloidosis: An 8-Year Study. Ann Intern Med. 140, 85-93. 2004

17) J. Perz, S. Schonland: High-dose melphalan with autologous stem cell transplantation after VAD induction chemotherapy for treatment of amyloid light chain amyloidosis: a single centre prospective phase II study. British Journal of Haematology, 127, 543-551, 2004.

18) M. Dimopoulos, V. Souliotis et al.: Extent of Damage and Repair in the p53 Tumor- Suppressor Gene After Treatment of Myeloma Patients With High-Dose Melphalan and Autologous Blood Stem-Cell Transplantation Is Individualized and May Predict Clinical Outcome. J Clin Oncol, 234, 381-4389, 2005 19) D. Vesole, J. Crowley et al.: High-Dose Melphalan With Autotransplantation for Refractory Múltiple Myeloma: Results of a Southwest Oncology Group Phase II Trial. J Clin Oncol, 17, :2173-2179, 1999

20) G. Sarosy, B. Leyland-Jones et al.: The Systemic Administration of Intravenous Melphalan. Journal of Clinical Oncology, 6, 11, 1768-1782, 1988.

21) N. Blijlevens, M. Schwenkglenks et al: Prospective Oral Mucositis Audit: Oral Mucositis in Patients Receiving High-Dose Melphalan or BEAM Conditioning

Chemotherapy— European Blood and Marrow Transplantation Mucositis Advisory Group. J Clin Oncol, 26, 1519-1525. 2008

22) R. Comenzó, E. Vosburgh et al.: Dose-Intensive Melphalan With Blood Stem Cell

Support for the Treatment of AL Amyloidosis: One-Year Follow-up in Five Patients. Blood, 88, 7, 2801-2806, 1996

23) S. Lenhoff, M. Hjorth et al.: Impact on survival of high-dose therapy with autologous stem cell support in patients younger than 60 years with newly diagnosed múltiple myeloma: a population-based study. BLOOD, 95, 1, 7-11, 2000

24) D. Vesole, B. Barlogie et al.: High-Dose Therapy for Refractory Múltiple Myeloma: Improved Prognosis With Better Supportive Care and Double Transplants. Blood, 84, 3, 950-956, 1994

25) J. Child, M. Gareth et al.: High-Dose Chemotherapy with Hematopoietic Stem- Cell Rescue for Múltiple Myeloma. N Engl J Med, 348, 1875-83, 2003.

26) D.Seldin: Can AL amyloidosis be cured. Xlth International Symposium on Amyloidosis. CRC Press, 2008

27) L. A. Sikkink, E. M. Badén et al.: AGGRESSIVE LIGHT CHAIN AMYLOIDOSIS CASES HAVE UNSTABLE IMMUNOGLOBULIN LIGHT CHAINS. Amyloid and Amyloidosis. CRC Press, 2005.

28) Handbook of Pharmaceutical Excipients, Sixth edition. Pharmaceutical Press,

2009.

29) M. Chicella , P. Cansen et al.: Propylene glycol accumulation associated with continuous infusión of lorazepam in pediatric intensive care patients. Crit Care Med, 30, 12, 2752-2756, 2002

30) Mark G. Parker, Gilíes L. Fraser et al.: Removal of propylene glycol and correction of increased osmolar gap by hemodialysis in a patient on high dose lorazepam infusión therapy. Intensive Care Med, 28, : 81-84, 2002

31) M. Levy, M. Aranda et al.: Propylene Glycol Toxicity Following Continuous Etomidate Infusión For The Control Of

Refractory Cerebral Edema. Neurosurgery. 37, 2, 363-371, 1995

32) P. Yorgin, A. Theodorou et al.: Propylene Glycol -Induced Proximal Renal Tubular Cell Injury. American Journal of Kidney Diseases, 30, 1, pp 134-1 39, 1997 33) H. Demey , R. Daelemans et al.: Propylene glycol-induced side effects during intravenous nitroglycerin therapy. Intensive Care Med, 14, 221-226, 1988

34) M. Khandoker, J. Sushil et al.: Propylene Glycol-Mediated Cell Injury in a Primary Culture of Human Proximal Tubule Cells. TOXICOLOGICAL SCIENCES 46, 410- 417, 1998 (1998)

35) M. Cawley. Short-Term Lorazepam Infusión and Concern for

Propylene Glycol Toxicity: Case Report and Review. Pharmacotherapy 21, 9, 1140- 1144, 2001

36) A. Doenicke, A. Nebauer, et al.: Osmolalities of Propylene Glycol-Containing Drug Formulations for Parenteral Use. Should Propylene Glycol Be Used as a Solvent? Anesth Analg, 75:431-435, 1992

37) M. Stranz, E. Kastango: A REVIEW of pH

AND OSMOLARITY. International Journal of Pharmaceutical Compounding, 6, 3,

2002

38) Encyclopedia of PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY, Third Edition. Informa Healthcare USA, 2007

39) Remington, 19a edición. Editorial Médica Panamericana, 1998.

40) Masako Ohnishi and Hiromichi Sagitani: The Effect of Nonionic Surfactant Structure on Hemolysis. JAOCS, 70, 7, 679-684, 1993

41) Pharmeuropa, 21, 3, 425-426, 2009.