La présente invention concerne des produits de contraste pour la radiologie par rayons X.

Ces molécules, de forte masse moléculaire puisqu'elles comportent au moins 12 noyaux phényles triiodés, ont une ré anence vasculaire nettement supérieure à celle des produits de contraste actuellement utilisés en clinique -comme l'iobitridol ou l'iohexol- et plus ou moins analogue à celle des compositions résultant du greffage de noyaux iodés à des polymères, compositions dont on connaît les inconvénients dus à la présence de molécules de masses moléculaires diverses dans un même échantillon. Ainsi on a constaté que cinq minutes après l'injection intraveineuse chez le rat, d'une même dose en iode des produits de l'invention ou d'agents de contraste commercialisés, la concentration sanguine en iode des nouveaux composés était au moins trois fois plus élevée.

Par ailleurs, les solutions aqueuses de ces nouveaux composés ont une viscosité compatible avec leur administration intraveineuse chez l'homme, aux doses habituelles, tandis que leur osmolalité doit, en général, être relevée.

Les composés de l'invention sont représentés par la formule générale Xd

Zb

I

Xb dans laquelle Za, Zb, Zc, Zd, identiques ou différents, représentent Tz-Qz-Vz, Tz étant fixé sur A; et Tz et Vz, identiques ou différents, représentent 0, COND ou NDCO avec D représentant H, alkyle, hydroxyalkyle ou polyhydroxyalkyle en C, à C ₆ et Qz représente alkylene, hydroxyalkylene ou polyhydroxyaikylène en C, à C ₆ , de préférence en C, à C ₄ ; ou bien Qz et/ou Tz n'existent pas:

- Xa, Xb, Xc Xd, identiques ou différents, représentent

^• T„ T„ V,, V„identiques ou différents, représentent CO-ND" ou ND'-CO avec D' représentant H ou alkyle enC, à C _t portant, éventuellement, un ou plusieurs groupes OH;

^• Q, et Q'„ identiques ou différents, représentent alkylene en C, à C,, et de préférence en C, à C ₄ , portant éventuellement, un ou plusieurs groupes OH;

^• Ar et Ar', identiques ou différents, représentent: - soit la formule III ou la formule IV

dans laquelle formule III, R est COOH et R' est CO-NR',R', ou N(R' ₁ )-CO-R' ₂ , R', et R'. étant

H, alkyle, hydroxyalkyle ou polyhydroxyalkyle en C, à C, et comportant à eux deux plus de 4 OH; ou dans laquelle R et R', identiques ou différents, représentent CO-NR',R'. ou N(R',)-

CO-R'. et R', et R' ₂ sont H, alkyle, hydroxyalkyle ou polyhydroxyalkyle en C, à C, et R et R' comportent à eux deux plus de 6 groupes OH, ou mieux plus de 8 groupes OH et de préférence 10 groupes OH; et dans laquelle formule IV, R" représente CO-NR'.R'. ou N(R' ₁ )-CO-R' ₂ , R', et R', étant hydroxyalkyle ou polyhydroxyalkyle en C, à C, tels qu'ils comportent à eux deux plus de 8

OH et de préférence plus de 10 OH; - soit la formule V ou la formule VI

VI

dans laquelle formule V, R et R', identiques ou différents, représentent respectivement T.-Q.-V.-Ar. et TVQ' ₂ -V' ₂ -Ar' ₂ ^{et les T} _J* v Q|. ^Q '.- ^V ₂ . ". ^a y ^aπt respectivement l'une des significations des T,, Q,, et V, et Ar. et Ar' ₂ ayant les significations des formules III ou IV; et dans laquelle formule VI, R" représente T ₂ -Q ₂ -V ₂ -Ar ₂ qui peut avoir l'une des significations données pour la formule V;

- et A est le reste biocompatible d'une molécule aliphatique ou aromatique, comportant éventuellement un ou des hétéroatomes choisis notamment parmi l'oxygène, l'azote ou les halogènes et particulièrement l'iode, le-dit reste, de masse moléculaire inférieure à 2000, ayant une structure telle que les 4 groupes Za, Zb, Zc, Zd puissent y être fixés pour former des liaisons amide ou éther-oxyde.

Par reste aliphatique, on entend un reste cyclique ou acyclique, dont les valences libres sont situées sur plusieurs atomes.

Parmi les restes A(Tz) de l'invention, on peut citer: les dérivés tétrakis du méthane, tels que: - C(CH ₂ CONH)- ₄ préparé à partir du tétraacide décrit dans J. Chem. Soc. 1638 (1922)

- C(CH ₂ 0(CH ₂ ) ₂ CONH)- ₄ dont l'acide correspondant est décrit dans US 2,401 ,607

- C(CH ₂ 0) ₄ dérivé du tétrakis(hydroxyméthyl)méthane

- C(CH ₂ NHCO)- ₄ préparé à partir de la tétraamine décrite dans J. Chem. Soc. 1588-1595 (1938) ou les restes tétracarboxamido, dérivés de l'acide 1 ,2,3,4-butyltétracarboxylique, de la triéthylènetétramine, de l'acide éthylènediaminetétraacétique et de l'acide 1 ,4,7,10- tétraazacyclododécane N, N', N", N""-tétraacétique.

Par reste aromatique, on entend un reste qui comprend un ou plusieurs noyaux phényles et éventuellement des groupes alkyles en C, à C ₄ qui peuvent être liés au noyau phényle directement ou par l'intermédiaire d'un groupe fonctionnel tel qu'un éther ou un amide, les valences libres du-dit reste pouvant être situées ou non sur les noyaux.-. Parmi les restes A (Tz) qui en dérivent on peut citer:

- les tétraamido dérivés du tétrakis(carboxyphényl)méthane décrit dans Angew. Chem. Int. Ed. 25, 1097 (1986), de l'acide phényl-1 ,2,4,5-tétracarboxylique décrit dans J. Amer. Chem. Soc. 80, 2322 (1958) et de ses dérivés iodés, ainsi que le dérivé hexaiodé décrit dans EP-A-0 501 875, du tétrakιs(amιnophényl)méthane décrit dans Chem. Ber. 109, 2389 (1976)

ou du tétrakis(aminométhylphényl)méthane décrit dans Angew. Chem. Int. Ed. 25, 1097 (1986).

A peut aussi comporter des hétéroatomes comme dans les amides aromatiques, par exemple les dérivés des acides oxalique, malonique et succinique de formule

n = 0, 1, 2 décrits dans Molecular and Biochemical Parasitology 52 201-210 (1993) qui peuvent être préparés par action de dichlorures d'acides aliphatiques sur les acides aminophényl- dicarboxyliques; dans le cas de leurs analogues iodés sur les noyaux phényles, il est préférable de préparer directement les tétrachlorures d'acide par action des chlorures d'acides oxalique, malonique ou succinique, par exemple, sur le dichlorure de l'acide 5-amino-2,4,6-triiodoisophtalique.

Les sels pharmaceutiquement acceptables des acides de formule I constituent également un objet de l'invention.

Les groupes alkyles peuvent être linéaires ou ramifiés. Les groupes R', et R' ₂ , dont dépend l'hydrophilie de la molécule, seront avantageusement hydroxylés et mieux comporteront à eux deux au moins 6 hydroxyles.

On préfère les composés dans lesquels les substituants T et V sont des groupes amides et mieux des groupes amides aromatiques secondaires; parmi ceux-ci les composés dans lesquels les substituants Q sont des alkylènes en C, ou C ₂ sont préférés du fait de leur compacité.

Parmi les groupes A aliphatiques, on préfère les dérivés tétrakis du méthane tandis que parmi les groupes aromatiques on préfère les dérivés du tétrakis- carboxyphénylméthane, iodés ou non.

Les molécules dans lesquelles les quatre substituants de A sont identiques et mieux les deux substituants du noyau phényle triiodé lié à Z sont aussi identiques sont plus faciles d'accès.

Les composés dans lesquels Ar et Ar' sont représentés par les formules V et VI ont une rémanence vasculaire supérieure à celle de leurs homologues pour lesquels Ar et Ar* sont représentés par les formules III et IV et on choisira un type ou l'autre suivant l'indication

R', et R' _j étant hydroxyalkyle ou polyhydroxyalkyle en C, à C,, et comportant à eux deux au moins 6 OH sont des composés particulièrement utiles comme agents de contraste pour l'observation du compartiment vasculaire du fait de leurs propriétés structurales moléculaires (volume, densité, répartition des zones hydrophobes et hydrophiles ) et de leur biocompatibilité (solubilité, toxicité) pour les doses d'iode convenant aux examens.

Le procédé de préparation des composés de formule I est un autre objet de l'invention. Ces composés peuvent être préparés en faisant réagir dès la première étape, le reste A portant les groupes fonctionnels convenables, avec le dérivé du phényle triiodé de formule

dans laquelle T _p , T _p , Z' sont des groupes fonctionnels réactifs précurseurs des groupes T, T et Z de la formule I, pour fixer sur le produit obtenu lors d'étapes ultérieures les substituants T^-V _j -Ar et T _I -Q' ₁ -V' ₁ -Ar' simultanément lorsqu'ils sont identiques ou par étapes successives. Néanmoins, de préférence, on prépare d'abord les composés VII portant un groupe précurseur de Z, de formule

dans laquelle les T, Q, V et Ar ont la même signification que dans la formule I et Z ^* représente un groupe réactif précurseur de Z qui peut être COOH, COCI, NDH, OH ou Z représente Pz-Qz-Vz, Tz étant un groupe précurseur de Tz, puis on fait réagir les composés de formule VII avec le reste A portant 4 groupes réactifs qui peuvent être selon la nature de Tz à obtenir et de Z: COOH, COCI, NDH, Cl, Br ou sulfonate ou avec A-Tz-Qz-V'z, Vz étant un groupe précurseur de Vz; les hydroxyles peuvent être éventuellement protégés au cours de ces réactions.

Dans les deux cas, la préparation met en oeuvre des techniques classiques de formation des groupes amides, à partir d'acides carboxyliques et d'aminés, ou de groupes éther-oxydes à partir de phénols et d'halogénures ou de sulfonates, en tenant compte de la faible réactivité des groupes acide et chlorure d'acide carboxylique, aminé et hydroxyle situés sur un noyau phényle lorsque les deux atomes de carbone adjacents portent un atome d'iode. Plus particulièrement, le procédé selon l'invention comprend:

1) la réaction du composé de formule

choisi selon la nature de Ar et Ar' dans le composé de formule I à obtenir, dans lesquelles Rβ, R' _α et R" _α représentent selon le cas COCI ou NH ₂ et W représente un groupe précurseur des V choisi parmi, selon le cas, ND'H, COCI et OH, avec

- lorsque les R _α représentent COCI, un aminoalcool de formule HNR'.R',, par exemple dans un solvant aprotique et de préférence en présence d'une base susceptible de fixer l'acide chlorhydrique libéré

- ou lorsque les R _α représentent NH ₂ , dans des conditions classiques avec R' ₂ COCI ou avec R' ₂ COOH en présence d'un agent de couplage tel que ceux utilisés dans la chimie des peptides, les groupes hydroxyles de R' ₂ étant éventuellement protégés durant la réaction d'amidification, cette réaction devant être, si nécessaire, suivie de l'alkylation de l'amide secondaire obtenue, par exemple avec R',CI;

2) puis la réaction du produit obtenu avec le produit de formule Tα-Q-Vα, dans laquelle T _α et V _α sont les groupes précurseurs des T, T et V, V et Q représente selon le cas Q,, Q ₂ , Q', ou Q' ₂ , T _α étant éventuellement protégé ainsi que les groupes OH des Q, pour former les T _α -Q-V-Ar,

- soit au cours d'une réaction d'amidification lorsque l'un parmi W et V _α est COCI, et l'autre est NDH

- soit lorsque W est OH et V _α est Cl, Br ou un sulfonate, au cours d'une réaction d'éthérification classique, en présence d'une base forte dans un solvant polaire; 3) et lorsque Ar et Ar' dans la formule I représentent la formule V ou la formule VI, la réaction d'un ou deux T _α -Q-V-Ar obtenu dans l'étape précédente avec, selon le cas,

puis celle du produit obtenu avec un T _α -Q-V _α défini comme à l'étape 2, avec le produit de formule

x t

dans laquelle T _p et T _p , identiques ou différents, sont des groupes précurseurs de T, et T,, c'est-à-dire représentent des groupes qui, par réaction avec W et W formeront T, et T„ et Z représente un groupe qui pourra, avec les groupes convenables situés sur A, former Za, Zb, Zc et Zd s 4) ou lorsque Ar et Ar' dans la formule I représentent la formule III ou la formule IV, la réaction d'un ou deux T _α -QNα-Ar avec le composé XI

5) et finalement la réaction d'un ou plusieurs de ces groupes sur A (Z"a) (Z"b) (Z"c) (Z"d), les Z" représentant des groupes réactifs choisis pour former avec les Z une liaison amide ou éther, et pouvant être identiques ou différents, ces réactions étant selon la nature du composé de formule I des réactions d'éthérificatioπ ou d'amidification. L'ordre des étapes peut être inversé, notamment les 1 et 2.

W peut aussi représenter T _α -Q-V, auquel cas l'étape 2 et selon le cas une partie de l'étape 3 sont supprimées, étant entendu que les composés VIII et IX ont été préalablement préparés par action de T _α -QN _a sur le dérivé du phényle tri- ou tétraiodé portant les groupes COOH, OH ou ND'H convenables.

Z peut aussi représenter W auquel cas avant la condensation finale sur A, on pourra le modifier pour obtenir un précurseur de Z.

Lorsque R est COOH, il peut être bloqué sous forme d'ester, par exemple méthylique, dont on pourra effectuer l'hydrolyse en dernière étape avant une éventuelle salification.

Les phényles triiodés ou tétraiodés portant les fonctions acide carboxylique, aminé ou phénol convenables sont connus ou peuvent être préparés par des réactions classiques. Par exemple, l'acide 5-aminotriiodoisophtalique et l'acide 3,5-diaminotriiodobenzoïque décrit dans GB 782,313 résultent de l'iodation par ICI des aminoacides correspondants; l'acide triiodotrimésique peut être préparé par diazotation, cyanation et hydrolyse de l'acide 5-aminotriiodoisophtalique tandis que l'acide 5-hydroxytriiodoisophtalique décrit dans Chem. Abs. £286643-6 peut être obtenu par iodation de l'acide commercial.

Les chlorures d'acide de ces composés peuvent être préparés de façon classique, par action du chlorure de thionyle, éventuellement dans un solvant neutre tel qu'un hydrocarbure chloré ou aromatique.

Les aminoalcools nécessaires pour la préparation des groupes CONR',R' ₂ sont connus ou peuvent être préparés par des procédés d'analogie. Parmi ceux préférés dans lesquels R',et R' ₂ comportent chacun au moins un hydroxyle, on peut citer ceux ayant

- R', = CH ₂ -(CHOH) ₄ -CH ₂ OH R' ₂ = CH ₂ -(CHOH) ₄ -CH ₂ OH ou CH ₂ -CHOH-CH ₂ OH ou CH ₂ -CH ₂ OH qui sont commercialisés

- R', = CH-(CHOH),-CH.OH R' ₂ = CH ₂ -CHOH-CH ₂ OH décrit dans EP-A-558 395

CH ₂ OH

- R ^* , = R'. = CH.-fCHOHJ.-CH H déαit dans J. Org. Chem. 35(2) 464-7 (1970)

- R', = R '. = CH.-(CHOH) ₂ -CH ₂ OH décrit dans US 4,661 ,646 D'autres aminoalcools peuvent être préparés par disubstitution de la benzylamine avec un dérivé halogène ou sulfoné de Palcool convenable suivie de la débenzylation du composé obtenu, notamment par action de H _r On peut aussi faire réagir un aldéhyde hydroxyle comme un saccharide sur un aminoaJcool primaire et réduire l'imine obtenue par action de H _p pour obtenir, par exemple, les composés avec R", = CH-CHOH-CH.OH R'. = C^-CHOH-CH _j OH ou CH ₂ -(CHOH) ₂ -CH ₂ OH

CH.OH ou

R', = CH ₂ -(CHOH) ,-CH ₂ OH R' ₂ = CH.-CHOH-CH ₂ OH ou CH ₂ -(CHOH) ₂ -CH ₂ OH

Dans le cas où le noyau phényle iodé porte deux groupes chlorure d'acide ou amine, on peut préparer des composés dissymétriques en faisant réagir successivement les deux chaînes à coupler sur le noyau avec lors de la première condensation une quantité de chaîne limitée à un équivalent stoechiométrique.

Parmi les réactifs déshydratants utilisables pour la préparation des amides par réaction directe d'un acide sur l'aminé convenable, on peut citer la 1 -éthoxycarbonyl-2- éthoxy-1 ,2-dihydroquinoléine, le 1 -(3-diméthylaminopropyl)3-éthylcarbodiimide ou le

N,N'-dicyclohexylcarbodiimide éventuellement en présence d'hydroxybenzotriazole ou d'autres agents connus dans la chimie des peptides.

L ^' invention concerne aussi les produits de contraste pour la radiologie par rayons X qui comprennent comme composé absorbant les rayons au moins l'un des composés selon l ^' invention

Ces produits sous une forme pharmaceutique convenable peuvent être administrés par voie orale, rectale ou parentérale dont les voies intraveineuse, intra-artérielle, intrabronchique ou intra-arachnoïdienne; les excipients peuvent être choisis parmi ceux habituels du domaine et être associés aux additifs connus pour ajuster le pH ou l'osmolalité et diminuer certains des effets secondaires connus des dérivés iodés.

Pour une administration parentérale, notamment intravasculaire, on préfère les solutions aqueuses de pH voisin de 7, qui contiennent de 5 à 40 g d'iode fixé sur les noyaux aromatiques pour 100 ml. Suivant le type d'examen pratiqué, on pourra administrer de 5 ml à 250 ml de solution au sujet

Dans ce qui suit on décrit des exemples de composés objets de l'invention et préalablement la préparation de composés de formule VIII à XI.

A - Préparation du composé C, de formule VIII avec W = T _β -Q-V = H ₂ N-CH.-CO-NH R« = R' _β = CO-N(CH ₂ -(CHOH) ₄ -CH,OH) ₂

(1)

en utilisant les conditions opératoires décrites dans US 4.283.381 , on obtient ce composé avec 85% de rendement

208 g du dichlorure d'acide ci-dessus, 416 g de l'aminé commerciale, et 100 ml de triéthylamine sont dissous dans 2 litres de N-méthylpyrrolidone ou de diméthylacétamide et

20 la solution est maintenue à 70° C durant 24 heures. Le précipité formé est séparé et le solvant est éliminé par distillation sous pression réduite. Le résidu dissous dans le minimum d'eau à pH 3 est passé sur une résine échangeuse d'ions cationique (1 ,5 I d'Ambertite® IRN77 commercialisée par Rohm et Haas sous forme acide) pour éliminer les impuretés.

A une solution du diamide ainsi obtenu dans 1,4 litre d'eau, on ajoute 33,2 ml

25 d'hydrate d'hydrazine et on maintient le mélange à 80° C pendant 3 heures. A la température ambiante, on acidifie par addition de 53 ml d'une solution aqueuse d'acide chlorhydπque 10 N et on sépare le précipité formé.

La solution résiduelle est passée sur une colonne de résine échangeuse d ^' ions comprenant environ 1 litre d ^' Amberlite® IRA67 basique puis sur une colonne de 150 ml

>0 d ^' Amberiite® IRC50 sous forme acide puis greffée sur 4 litres d ^' Amoerice® 200C. d ^' où le produit cherché est élue par ^ne solution aqueuse de NH.OH.

L'éluat est concentré sous pression réduite Rendement 70%.

Chromatographie HPLC: colonne LiCrosphère® C 18;5 μm (Merck) - h = 25 cm; d = 4 mm.

Eluant ^* : CH,CN/P.I.C.® B8 0,05 M (Waters) 5/95; débit 1 ml/minute

Temps de rétention des isomères: 8 minutes environ

^* : P.I.C. B8: mélange acide octane sulfoπique/méthanol/acétate de calcium/eau.

B - Préparation du composé C ₂ de formule VII avec

T.-Q.-V, = T.-Q'.-V, = CO-NH-CH ₂ -CONH Z = H _J N-CH _J -CONH

Une solution de 59 g du dichlorure d'acide décrit en A-1 , 200 g de l'aminé primaire VIII obtenue en A et 29,5 ml de tributylamine dans 400 ml de N -m ét ylpy rrolidone ou de diméthylacétamide est maintenue à 70° C pendant 24 heures. Le solvant est éliminé sous pression réduite et le résidu est chromatographie sur 3 kg de silice silanisée RP2, commercialisée par MERCK (DE) en eluant avec de l'eau ou sur 4 kg d'adsorbant XAD 1600 (commercialisé par Rohm et Haas) en eluant avec un mélange CH _: OH/H ₂ 0.

Le produit obtenu avec 50% de rendement est traité par l'hydrate d'hydrazine, comme décrit précédemment, pour donner le composé cherché. (Rendement 45%).

Le volume d'élution de ce composé lors d'une filtration sur un gel Superdex® 30 dans une colonne de 16 mm x 60 cm, commercialisée par Pharmacia, dans un tampon à pH = 7,2 comprenant NaCI 0,1 M, NaH ₂ P0 ₄ 0.05M et NaN ₃ 0,01 M, avec un débit de

1 ml minute, est de 102 ml pour un échantillon injecté de 1 mg dans 250 μl de tampon Chromatographie HPLC colonne Symmetry® C 18,5 μm (Waters) - h = 25 cm, d = 4,6 mm

Eluant: CH ₅ CN/KH ₂ P0 ₄ aqueux 0,01 M (15/85) (sans CH ₃ CN pendant 5 minutes); débit 1 ml/minute

Temps de rétention des isomères: 18 minutes environ

C - Préparation du composé C, de formule VII avec T.-Q.-V, = r,-Q' _r V, = CO-NH-CH.-CONH

5,65 g du dichlorure d'acide de rétape A-1 , 48 g de l'aminé primaire VII obtenue selon B et 3 ml de tributylamine dans 100 ml de N-méthyl pyrrolidone sont maintenus à 70° C pendant 24 heures. Après purification comme selon B, le dérivé comportant les 7 noyaux phényles iodés est traité par l'hydrate d'hydrazine pour donner l'aminé primaire brute. Celle-ci est purifiée par passage sur des résines échangeuses d'ions sous forme acide et basique comme dans la préparation B suivie éventuellement d'une ultrafiltration avec une cassette Minisette de type nova commercialisée par FILTRON (USA) avec une membrane de seuil de coupure de 10 kdaltons, au cours de laquelle le produit cherché passe dans le filtrat Rendement: 65%.

Le volume d'élution de ce produit dans les mêmes conditions opératoires que dans la préparation B est de 91 ml, alors qu'il est de 11 1 ml sur une colonne de Superdex® 75.

Chromatographie HPLC: colonne Symmetry® C 18;5 μm (Waters) - h ^'• * 25 cm; d = 4,6 mm.

Eluant: CH _: CN/KH ₂ P0, aqueux 0,01 M (15/85) (sans CH.CN pendant 5 minutes); débit 1 ml/minute Temps de rétention des isomères: 23 minutes environ

D - Préparation du composé C ₄ de formule VIII avec W ≈ T _β -Q-V = H ₂ N -CH ₂ -CONH

R« = COOH R' _β = CONCH ₂ -(CHOH) ₄ -CH ₂ OH

CH ₂ CH ₂ OH 1) 239 g du dichlorure d'acide décrit dans la préparation A-1 , 83 g de

HN-CH ₂ -(CHOH) ₄ -CH ₂ OH commercialisé par ALDRICH et 39 ml de triéthylamine sont

CH.CH ₂ OH dissous dans 1 1 de N.N-di éthylacétamide. Après 24 heures à température ambiante, on introduit 300 ml d'eau dans le milieu qui est ensuite maintenu durant 48 heures à 45° C pour hydroiyser le chlorure d'acide résiduel. Les solvants sont alors éliminés par distillation sous pression réduite et le résidu est purifié comme précédemment par passage sur une colonne de 500 ml d'Amberiite® IRN77 et une de 3 kg de silice silanisée RP2 commercialisée par MERCK.

On obtient ainsi le monoamide avec un rendement de 40%. 2) Ce composé est traité par l'hydrate d'hydrazine et purifié par passage sur des résines échangeuses d'ions acide et basique comme dans la préparation A. Rendement 70%.

E - Préparation du composé C _$ de formule VII avec T,-Q,-V, = r.-C.-V, = CO-NH-CH ₂ -CONH

Z = H ₂ N-CH ₂ -CONH

Avec des conditions opératoires analogues à celles décrites oour la oréparation B. n obtient le cornoose recherc ^h e avec 30% de rendement

Son volume d'élution dans les conditions précédemment indiquées sur Superdex® 30 est de 92 ml.

Exemple 1 Composé No. 1 de formule I dans laquelle

^A CO-NH-CH.-CO-NH

Une solution de 15,3 g du composé obtenu selon la préparation B, 0,486 g de tétrakis(carboxyphényl)méthane, 0,768 g -de 1 -hydroxybenzotriazole, 1 ,09 g de 1-(3-diméthylaminopropyl)3-éthylcarbodiimide et 1 ml de triéthylamine dans 100 ml de diméthylformamide est portée à 40° C et cette température est maintenue durant 6 heures avant élimination du solvant par distillation sous pression réduite.

Le résidu est dissous dans le minimum d'eau et soumis à une dia-ultrafiltration avec une cassette Minisette® de type nova commercialisée par FILTRON (USA) avec une membrane en polyéther sulfone de seuil de coupure de 5 kdaltons. Rendement 95%. Le volume d'élution pour ce composé, déterminé dans les mêmes conditions de filtration sur gel que précédemment est de 49 ml (Superdex® 30).

CO-NH -CH.-CO-NH

Le composé préparé en C est mis à réagir avec le tétrakis{carboxyphényl)méthane dans des conditions opératoires équivalentes à ∞lles décrites dans l'exemple précèdent, à Pexception de rultrafiltration qui a lieu sur une membrane de seuil de coupure 10 kdaltons.

Le composé de formule I, obtenu avec 90% de rendement, a un volume d'élution de 85 ml lors d'une filtration sur gel dans les conditions décrites précédemment (Superdex® 75).

Exemple 3

Composé No. 3 de formule I dans laquelle

CO-NH-CH ₂ -CO-NH

2β

20 g du composé Vil obtenu dans la préparation E. 0.89 g du tétrakis(carboxyphényl)méthane, 1,41 g de 1 -hydroxybenzotriazole et 2 g de 1-(3-diméthylaminopropyl)3-éthylcarbodiimide et 1,5 ml de triéthylamine sont dissous dans 200 ml de diméthylformamide et le milieu réactionnel est maintenu à 40° C durant 6 heures. Après élimination du solvant, le résidu est dissous dans l'eau puis soumis à une ultrafiltration comme précédemment mais avec une membrane de seuil de coupure de 3 kdaltons.

Le produit final précipite par addition de HCI concentré au milieu.

Rendement 87%.

Son volume d'élution, déterminé dans les conditions de filtration sur gel précédentes est de 49 ml. (Superdex® 30).

Exemple 4

Préparation des composés No. 1 et 2 dans le diméthylacétamide.

On dissout lentement dans le diméthylacétamide à une température comprise entre 20 et 60° C environ, 0.012 mole du composé C ₂ ou du compose C _Jt à raison de 25 g/100 ml On introduit ensuite à température ambiante 0.0025 mole de tétrakis- (carboxypheπyl)meihane. 0.01 - mole de N-N ^' -dicyclohexyicarbodnm-de. 0.0 mole de

1 -hydroxybenzotriazole et 0,015 mole de triéthylamine. Après 24 heures d'agitation, on ajoute 5 volumes d'eau et la solution est ultrafiltrée comme précédemment pour donner avec 55% de rendement le produit cherché sous forme d'une poudre blanche.

Ces composés peuvent être caractérisés par chromatographie d'exclusion stérique (CES) sur 4 colonnes montées en série commercialisées par SHODEX (JP) sous les références OHpaK SB-8.. HQ de diamètre 8 mm et de longueur 30 cm, contenant un gel de polyhydroxyméthacrylate: SB-804 (limite d'exclusion = 10' daltons, standard pullulan) + SB- 803 (10 ¹ ) + SB-602-5 (10 ⁴ ) + SB-802-5. L'éluant est un mélange de solution aqueuse de NaCI 0,16 M et acétonitrile (70/30- V/V); débit 0,8 ml minute; température 30° C.

Le temps de rétention du composé No. 1 est de 34,3 minutes alors que celui du composé C, de départ est de 38,7 minutes.

Pour le composé No.2, t, = 31 fi minutes et pour C,, t„ = 36,5 minutes.