COMPOSICIÓN DE AZUFRE LIPOSOMADO DESCRIPCIÓN La presente invención se refiere a una composición de liposomas que contienen azufre elemento incorporado a su membrana lipídica y al uso de dicha composición en el tratamiento de enfermedades, principalmente dermatológicas, como la dermatitis seborreica o el acné, además de otras. Por tanto, la invención se podría encuadrar en el campo de la farmacología y la cosmética.

ESTADO DE LA TÉCNICA

El uso de azufre como agente terapéutico para diversos desórdenes o enfermedades dermatológicos y no dermatológicos data de tiempos inmemoriales. Durante muchos años se ha considerado al azufre elemento por vía tópica en distintas formas o preparaciones galénicas como el remedio específico de la seborrea. Debido a su escasa solubilidad o su solubilidad en disolventes no permitidos o no apropiados para su uso humano o animal, la actividad de dichas formulaciones siempre ha sido relativa, escasa o baja y por ello los preparados han tenido que incorporar altas concentraciones de dicho elemento para compensar dicha problemática, entre un 2 % y un 10% o 20% del mismo. Dicha baja actividad o eficacia, siempre ha estado relacionada y determinada o condicionada por su forma de suspensión/dilución y el tamaño de partícula del azufre elemento incorporado en la formulación, ambas consecuencias directas de su escasa o casi nula solubilidad.

Las aplicaciones por vía tópica del azufre elemento en diferentes formas o preparaciones galénicas son múltiples. Por su efecto queratolítico, es de utilidad en el tratamiento y prevención de la dermatitis seborreica, el acné, la rosácea, la pitiriasis versicolor, algunas parasitosis como la escabiosis, foliculitis y otras patologías cutáneas como algunas dermatofitosis superficiales, dermatitis perioral, acné necrótico, y ciertos formas de eccema y psoriasis. También se ha utilizado a bajas concentraciones como queratoplásico, como antipruriginoso, y, además, posee actividad oxidorreductora, vasomotora, fotosensibilizante, "despigmentante", cierta actividad germicida y fungicida. A altas dosis puede ser irritante, producir prurito/quemazón, enrojecimiento de la piel, exfoliación o hiperproliferación. Por vía general el azufre elemento ha sido utilizado en el tratamiento de algunas parasitosis intestinales, también como oligoelemento por su carácter "nutritivo" esencial para la síntesis de muchos aminoácidos, para la caída del pelo, fortalecer uñas, etc ..

De todas sus posibilidades terapéuticas, son las aplicaciones dermatológicas por vía tópica mencionadas las más frecuentes y relevantes hasta el momento.

Las formulaciones o formas de azufre elemento tópico más conocidas históricamente son el azufre precipitado y el azufre sublimado. Ambas formulaciones o formas contienen azufre elemento con un grado de pureza mínimo del 99,5% en forma anhidra. La experiencia galénica y terapéutica con el azufre elemento, sublimado o precipitado, ha llevado a los expertos a la conclusión de que cuanto menor sea el tamaño de partícula del azufre elemento en la formulación, mayor y más homogéneo será el grado de interacción o contacto con la zona a tratar y, por ello, mayor será también su eficacia terapéutica.

Con el fin de mejorar sus características galénicas y funcionales se han desarrollado otros preparados de azufre como por ejemplo el azufre coloidal, el "bioazufre", la potasa sulfurada, etc. Otros ejemplos de ello son los ácidos politiónicos, sus sales alcalinas, los politionatos de amonio cuaternario, y los ácidos mercaptocarboxílicos ya sean en forma de ácido, ésteres o amidas. Se han obtenido resultados funcionales interesantes utilizando algunos de los derivados minerales u orgánicos del azufre, ya sean naturales o sintéticos, aunque generalmente sus características organolépticas, especialmente el mal olor que desprenden, complican o condicionan su utilización y aceptación.

Además, la problemática galénica del azufre elemento y otras formas del mismo incluye en muchos casos la necesidad de utilizar como solventes o dispersantes determinados componentes, como son grasas o aceites, para su formulación final, de efecto oclusivo y engrasante, cuya aplicación puede ser contraproducente en la patología a tratar, un ejemplo de ello sucede con dicho tipo de formulación y patologías como la dermatitis seborreica, el acné, etc. El azufre terapéutico actualmente se aplica sobre la piel y faneras en muy diferentes formas o preparaciones galénicas, como por ejemplo, pomadas, cremas, geles, lociones o leches, jabones o champús, máscaras y ungüentos. Su aplicación a altas dosis y concentraciones puede ser irritante, producir descamación, quemazón, enrojecimiento de la piel, exfoliación, hiperproliferación...por lo que existe la necesidad de un sistema de administración de azufre que sea efectivo y que no requiera altas concentraciones de éste para minimizar las posibles reacciones adversas, facilitar su aplicación y mejorar sus características organolépticas.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La incorporación del azufre elemento en liposomas con una buena actividad funcional, en una formulación galénicamente correcta, y, organolépticamente muy aceptable es la innovación desarrollada y objeto de esta patente. Esta encapsulación del azufre elemento en liposomas se ha realizado con el fin de solubilizar, suspender y/o dispersar el mismo sin necesidad de utilizar disolventes no permitidos u otros productos no convenientes, solucionando con ello el principal problema galénico del mismo, así como a su vez su aspecto funcional que también mejora de forma considerable pues, debido a su tamaño nanométrico y a las características fisicoquímicas de dichos liposomas, una vez aplicado, el azufre elemento en forma liposomal será transportado por dichas nanoestructuras mejorando sus características farmacocinéticas y farmacodinámicas. Además de los problemas de solubilidad, de formulación galénica, y funcionales del azufre elemento, el producto resultante, en su forma liposomal, es organolépticamente mucho mejor, más fácil de aplicar y tolerable o agradable para los pacientes, tanto por su olor como por sus posibles texturas y por su facilidad de aplicación o uso, todo ello en comparación con las formas clásicas o convencionales del mismo.

Así como las concentraciones de azufre elemento utilizadas en las formas convencionales son altas, entre 20 y 200 mg/g, en la forma liposomal éstas oscilan entre 0,02 y 0,4 mg/ml.

El producto final, una suspensión liposomal de base acuosa, es de muy fácil y rápida aplicación, como por ejemplo la atomización, rápida absorción y no tiene efecto oclusivo ni engrasante de la zona tratada. Puede ser fácilmente aplicado a faneras, pelos y uñas, con las mismas ventajas. Apenas mancha la piel ni la ropa. En la forma liposomal propia del invento la eficacia del azufre elemento en el tratamiento o prevención de ciertas patologías se ve potenciada, no sólo por las aportaciones galénicas, farmacocinéticas y farmacodinámicas de la estructura liposomal, sino que también por la reconocida actividad antiseborreica - anticomedogénica de la fosfatidilcolina en especial, y los fosfolípidos insaturados en general, principales componentes de la membrana liposomal, y que actúan sinérgicamente con el azufre en dichas patologías. La eficacia antiseborreica- anticomedogénica de estos compuestos es principalmente atribuida a su alto contenido en ácido linoleico.

Las ventajas de la presente invención se enumeran a continuación:

- El liposoma al solubilizar, suspender o dispersar el azufre elemento en una fase acuosa en forma de unas partículas de tamaño diminuto y muy homogéneo ofrece una muy buena alternativa galénica a dicho activo.

- El liposoma por sus características fisicoquímicas especiales mejora las propiedades terapéuticas del azufre elemento comparado con las formas galénicas clásicas o convencionales. Esta mejora es debida a las especiales características farmacodinámicas y farmacocinéticas del azufre elemento encapsulado en los liposomas.

- Las mejoras o ventajas anteriormente mencionadas permiten utilizar concentraciones y dosis más bajas del activo manteniendo su actividad terapéutica, disminuyendo el riesgo de reacciones adversas o no deseadas, como son irritación, quemazón...

- Las formulaciones farmacéuticas que incorporan la forma liposomal de azufre elemento tienen mejores características organolépticas, especialmente el olor, comparadas con las que lo contienen en sus concentraciones y formas galénicas convencionales.

- El producto en forma liposomal, de base acuosa, además de aplicarse y absorberse con mucha mayor facilidad que las formulaciones convencionales, especialmente las grasas, no engrasa y ocluye la piel, no deja color sobre la misma, y apenas mancha la ropa.

- Las características especiales y muy versátiles de la formulación liposomal de azufre elemento permiten incorporarla y presentarla en muchas formas galénicas, tanto en forma fluida tipo loción, suspensión, serum, atomizador,... como también en formas semisólidas como son los geles, emulsiones, emulgeles, ungüentos, máscaras, etc. - El "concentrado" liposomal o los liposomas con azufre elemento es/son fácilmente incorporable/s o asociable/s a otras formulaciones o productos que además del mismo contengan otro u otros activos sinérgicos o complementarios destinados al tratamiento de diferentes patologías con el fin de mejorar su eficacia y/o tolerancia.

- Las mejoras galénicas, farmacocinéticas y farmacodinámicas aportadas por los liposomas propios del invento en general, pues por su gran biocompatibilidad pueden ser administrados por cualquier vía mejorando y potenciando los efectos del azufre elemento, nos permiten pensar en nuevas aplicaciones del mismo por cualquier vía de administración y para patologías no contempladas actualmente como susceptibles de ser tratadas con azufre elemento.

- El efecto antiseborreico-anticomedogénico de la fosfatidilcolina, principal componente de la membrana liposomal, que actúa sinérgicamente con el azufre elemento en determinadas patologías, también significa una ventaja importante de la forma liposomal del mismo frente a las convencionales.

- El aumento de la capacidad bactericida de los liposomas conteniendo azufre elemento, comparado con el azufre elemento en su forma convencional, siginifica una mejora en la actividad del mismo y tiene la ventaja de reforzar el efecto antiacneico, anticomedogénico, anti rosácea, etc. del producto.

- Las características fisicoquímicas, la facilidad y versatilidad de formulación de dicha forma de azufre elemento liposomal, tienen la ventaja de no necesitar de productos que interfieran o puedan ser contraproducentes para el tratamiento de determinadas patologías, o para la propia salud del paciente. Por ejemplo, no necesitar grasas, aceites u otros solventes o componentes para su formulación.

- El preparado tiene unas características, tamaño de partícula, que le permiten ser esterilfiltrado tanto en su fase de concentrado como también en su forma diluida, como producto acabado. Esta posibilidad supone la ventaja de permitir envasar y administrar los productos sin necesidad de añadir conservantes a la formulación.

Por tanto, un primer aspecto de la presente invención se refiere a una composición que comprende una suspensión de liposomas en fase acuosa caracterizada porque comprende:

· fosfolípidos con una proporción de fosfatidilcolina de entre el 75 y el 99,5% en peso,

^■ al menos una sal biliar,

^■ al menos un alcohol y

^■ agua,

y porque los liposomas contienen azufre elemento incorporado a la bicapa fosfolipídica. Los fosfolípidos de la composición pueden proceder de lecitinas naturales extraídas o ser de origen sintético. Por el término "liposoma" se entiende una vesícula esférica con al menos una membrana compuesta de una doble capa de fosfolípidos, también llamada bicapa fosfolipídica, que constan de partes hidrofílicas y lipofílicas.

Los liposomas pueden ser uni-, oligo- o multilamelares, es decir que pueden comprender una o varias dobles capas de fosfolípidos. Si bien los propios de la invención, los más adecuados y preferidos para su aplicación tópica son los unilamelares.

Por "composición que comprende liposomas" se entiende composiciones que den lugar a la formación de liposomas, ya sean uni-, oligo- o multilamelares y soluciones micelares convertibles por dilución en liposomas, si bien preferentemente interesan los liposomas unilamelares.

El término "azufre elemento incorporado a la bicapa" quiere decir que el azufre forma parte o está incluido en la estructura de bicapa lipídica del liposoma. La combinación de los componentes del liposoma y el azufre elemento como principio activo tiene lugar durante la preparación de los mismos y previa a la fabricación de la suspensión liposomal. Por el término "azufre elemento" se entiende cualquier forma de azufre mineral con un mínimo del 99,5% de pureza, si bien preferentemente se utiliza la sustancia conocida como "azufre flor" que, por poseer un tamaño de grano adecuado y unas características y propiedades terapéuticas y farmacéuticamente reconocidas, se transforma en el activo de dicha formulación o preparación liposomal.

El encapsulado de azufre elemento en liposomas conduce a una buena alternativa o solución de las dificultades de su formulación galénica, a una mejora de los aspectos o características funcionales del mismo, y, consecuentemente, a una reducción significativa de la dosis necesaria del mismo con la misma o superior eficacia terapéutica, comparado con la formas clásicas o no liposomales convencionales. Los inconvenientes de su formulación y presentación, así como gran parte de sus posibles efectos secundarios se reducen drásticamente o incluso desaparecen. Algunos ejemplos de esta mejora general son unas mejores características galénicas del producto, especialmente, una mejora de sus características organolépticas, una mayor facilidad de formulación, una mayor facilidad y comodidad de aplicación, una mayor seguridad y margen de seguridad del producto, una menor posibilidad de sobredosificación y de aparición de reacciones adversas.

En una realización preferida los liposomas de azufre elemento son primero producidos o fabricados en una forma concentrada que puede ser almacenada durante largos periodos de tiempo, y/o, en segundo lugar, ser diluida o incorporada en otra formulación a una determinada concentración para su aplicación en pacientes. En determinados casos el producto puede aplicarse en la forma concentrada del mismo, si bien deberá realizarse con mucho cuidado. En una realización preferida de un producto final para su aplicación en pacientes, la composición se presenta o prepara en forma de suspensión acuosa a una concentración de azufre elemento en forma liposomal apropiada o adecuada para su aplicación tópica directa en forma de loción, atomizada o con cuentagotas, asociada o no a otros componentes u activos.

En otra realización preferida, la composición se presenta en una forma apropiada para la administración tópica, oral, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutánea, tópica cutánea, ungueal, capilar o inhalatoria. Preferiblemente por vía tópica cutánea, ungueal y capilar, (piel y faneras).

En otra realización preferida, los liposomas tienen un diámetro medio entre 40 nm y 500 nm, preferiblemente entre 60 nm y 180 nm, y más preferiblemente entre 75 nm y 145 nm. En otra realización preferida de invento, el azufre elemento incorporado en los liposomas es azufre flor de calidad farmacéutica. Preferiblemente en el producto final para el paciente la concentración de este elemento está entre los 0,004 gr por litro hasta los 0,4 gr por litro, más preferiblemente entre 0,012 gr por litro y los 0,25 gr por litro, y aun más preferiblemente entre 0,02 gr por litro y 0,12 gr por litro. En el concentrado resultante de la fabricación de los liposomas de azufre flor propios del invento, el azufre está preferiblemente a una concentración del 0,4% y en el producto final para el paciente la concentración preferida es de 0,04%.

En otra realización preferida del invento, la concentración de fosfolípidos es de 10 g a 200 g por litro de composición, más preferiblemente entre 50 g y 150 g por litro de composición y aún más preferiblemente entre 90 g y 1 10 g por litro de composición. En el concentrado resultante de la fabricación de los liposomas de azufre flor propios de la invención, la concentración de fosfolípidos es preferiblemente de 100 g/litro y en el producto final es de 10 g/litro.

En otra realización preferida, los fosfolípidos tienen la fórmula (I):

O

II

R1 - C -0- CH2

I

R ₂ - C -0- CH O

SI ¡ II

O CH ₂ -0- P-0-CH ₂ - CH ₂ -N ⁺ ( CH ₃ ) 3 O

)

donde R-ι y R ₂ pueden ser igual o diferentes entre sí, son cadenas hidrocarbonadas de C12-C22, que comprenden entre 0 y 8 enlaces dobles cis, preferiblemente entre 0 y 6 enlaces dobles cis.

En una realización más preferida, R-ι y R ₂ se seleccionan de la lista que comprende ácido oleico, ácido linoleico, ácido linolénico, ácido palmítico, ácido esteárico, acido araquidónico ácido eicosapentaenoico y ácido docosahexaenoico, preferiblemente ácido oleico, ácido linoleico, ácido linolénico, ácido palmítico, ácido esteárico.

Entre los fosfolípidos que comprenden estos ácidos grasos están la lecitina de soja, lecitina de huevo, lecitina de otras semillas como por ejemplo de la calabaza, etc .. y lecitina con fosfolípidos omega 3 de diferente origen, fosfolípidos de krill, fosfolípidos de crustáceos, de foca, etc.

En una realización particular de la presente invención, el fosfolípido tiene la siguiente composición de ácidos grasos: Acido graso en R1 y/o R2 % en fosfolípido ácido oleico 6-13

ácido linoleico 61 -71

ácido linolénico 4-7

ácido palmítico 10-15

ácido esteárico 1 ,5-3,5

acido araquidónico 0-2

En otra realización particular de la presente invención, el fosfolípido tiene la siguiente composición de ácidos grasos:

Esta última realización particular es especialmente útil cuando se desean liposomas de muy alta capacidad de difusión e intercambio, permeabilidad y flexibilidad. Preferiblemente el fosfolípido se selecciona del grupo que comprende lecitina de soja, lecitina de huevo, lecitina de semillas de calabaza, lecitina de krill y cualquiera de sus mezclas, más preferiblemente lecitina de soja, aunque también puede ser de huevo u otra fuente con alto contenido en fosfatidilcolina. Preferiblemente el contenido mínimo en fosfatidilcolina de las lecitinas o los fosfolípidos necesarios para la fabricación o producción de los liposomas de la invención está entre un 75% y 99,5% del total lipídico, más preferiblemente entre un 96,5 y 98,5 % del total lípido. Además de por fosfatidilcolina, la bicapa fosfolipídica del liposoma puede estar compuesta, en una proporción menor o igual a un 25% por fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol, fosfatidilserina, o cualquiera de sus mezclas y/o productos de degradación como es la lisofosfatidilcolina. En otra realización preferida, la sal biliar se selecciona del grupo que comprende colato sódico, desoxicolato sódico, glicocolato sódico, taurocolato sódico, taurodesoxicolato sódico, ursocolato sódico y quenoxicolato sódico, más preferentemente colato sódico.

En otra realización preferida, la proporción molar de fosfolípidos/sal biliar está entre 1 ,5 y 10, preferiblemente entre 2,5 y 5, y más preferiblemente entre 3 y 4. En otra realización preferida, la composición además comprende un alcohol seleccionado de la lista que comprende etanol, propanol, isopropanol y cualquiera de sus mezclas, preferiblemente etanol 96% de calidad farmacéutica.

En otra realización del primer aspecto de la presente invención, la proporción de alcohol/fosfolípido o lecitina en volumen/peso está entre 0,25 y 3, preferiblemente entre 0,75 y 2,5, y más preferiblemente entre 1 y 2.

En otra realización preferida, la fase acuosa comprende agua pura o agua con una sal seleccionada de la lista que comprende cloruro sódico, cloruro potásico, cloruro de magnesio, yoduro sódico y cualquiera de sus mezclas, preferiblemente cloruro sódico. Preferiblemente, la concentración de la sal es inferior a 9 gramos por litro, más preferiblemente entre 0 y 0,9 gramos por litro. Sin embargo también sería posible su producción con concentraciones superiores al 0,9% de NaCI, o incluyendo distintas sales, especialmente sales en la concentración del agua de mar, con 35 a 38 g de sales por litro de agua. Preferiblemente la fase acuosa comprende agua pura calidad farmacéutica.

En otra realización preferida, la composición además comprende suero glucosado, u otros azúcares como manitol.

La composición de liposomas además puede contener o comprender excipientes. El término "excipiente" hace referencia a una sustancia que ayuda a la administración (absorción) de cualquiera de los componentes del producto de la invención, estabiliza dichos componentes o ayuda a la preparación de la composición farmacéutica en el sentido de darle consistencia y así estabilizar la suspensión, o aportar olores que lo hagan más agradable. Así pues, los excipientes podrían tener la función de mantener los componentes unidos como por ejemplo almidones, azúcares o celulosas, función de olorizar o desodorizar, función de colorante, función de protección del medicamento. Por tanto, el término "excipiente" se define como aquella materia que, incluida en las formas galénicas, se añade a los principios activos o a sus asociaciones para ayudar a su administración, penetración en la piel o faneras, posibilitar su preparación o formulación y estabilizarla, modificar sus propiedades organolépticas o determinar las propiedades físico-químicas de la composición farmacéutica y su biodisponibilidad. El excipiente "farmacéuticamente aceptable" debe permitir la actividad de los compuestos de la composición farmacéutica, es decir, que sea compatible con dichos componentes. Ejemplos de excipientes son aglutinantes, rellenos, desintegradores, lubricantes, saborizantes o aromas y colorantes. Ejemplos más concretos no limitantes de excipientes aceptables son almidones, azúcares, ácido hialurónico, xantanas, glicerol, xilitol, sorbitol, o glicerina entre otros. Además la composición de la invención también puede comprender diversos antioxidantes, como vitamina E, vitamina A y vitamina C, que principalmente proporcionarían un efecto estabilizante químico de la composición, y también puede contener perfumes o substancias desodorizantes. La composición puede contener también uno o más aditivos como tampones, tensoactivos, agentes espesantes, conservantes, o cualquiera de sus mezclas.

La composición también puede contener uno o más activos sinérgicos o complementarios de la acción del azufre elemento como por ejemplo, antibacterianos, antisépticos, crecepelos, astringentes, queratolíticos, exfoliantes, activos oxidoreductores, etc.

Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de la composición de la invención para la fabricación de un medicamento o un cosmético o un dietético o un nutraceutico.

Otro aspecto de la invención se refiere al uso de la composición de la invención para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención por vía tópica de una enfermedad que se selecciona de entre dermatitis seborreica, acné, rosácea, pitiriasis versicolor, dermatofitosis superficiales, escabiosis, dermatitis perioral, verrugas, foliculitis, psoriasis, eccema, prurito, problemas de pigmentación o manchas en la piel, y queratosis.

Otro aspecto de la invención se refiere a un método de tratamiento y/o prevención de una enfermedad que se selecciona de entre dermatitis seborreica, acné, rosácea, pitiriasis versicolor, dermatofitosis superficiales, escabiosis, dermatitis perioral, verrugas, foliculitis, psoriasis, eccema, prurito, problemas de pigmentación o manchas en la piel, o queratosis, que comprende la administración de la composición de la invención, preferiblemente por vía tópica, a un paciente que lo necesite.

Otro aspecto de la invención se refiere a un procedimiento de obtención de la composición de la invención que comprende las siguientes etapas:

a) preparar una disolución acuosa que comprende la sal biliar,

b) preparar una disolución alcohólica que comprende el fosfolípido,

c) diluir por agitación simple el azufre flor, azufre elemento, en dicha mezcla lípido- alcohol de la etapa (b),

d) homogeneizar conjuntamente las disoluciones obtenidas en las etapas (a) y (c); dicha homogeneización puede realizarse por diferentes medios mecánicos, agitación, cizallamiento, extrusión, etc. o una mezcla de ellos.

e) opcionalmente realizar una etapa de filtrado del producto obtenido en la etapa (d), preferiblemente esterilfiltrado, es decir, un filtrado con esterilización simultánea, f) diluir el concentrado liposomal con azufre elemento, obtenido siguiendo los pasos a) hasta e), en agua sin o con conservante, como por ejemplo el fenoxietanol al 0,5%, hasta que el preparado o formulación tenga la concentración deseada de azufre elemento en forma liposomal.

g) opcionalmente el producto puede ser utilizado en forma concentrada.

El producto en su forma concentrada obtenida en las etapas (d) ó (g) puede envasarse y almacenarse para su posterior utilización mezclado con otros componentes.

A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención. EJEMPLOS

A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que pone de manifiesto el uso de las composiciones de la invención como principio activo en el tratamiento de diferentes desórdenes dermatológicos tanto humanos como veterinarios.

Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.

Ejemplo 1.

Obtención de una composición de liposomas de azufre elemento. Se disolvieron por agitación simple 80 g de lecitina de soja en 80 mi de etanol del 96%. Se disolvieron por agitación simple 320 mg de Azufre Flor en la mezcla anterior, lecitina de soja/etanol. Se disolvieron por agitación simple 1 1 ,20 g de colato sódico en 640 mi de agua. Las disoluciones obtenidas se mezclaron y homegenizaron con un homogenizador y posteriormente se sometieron a esterilfiltrado o filtrado por 0,45 y/o 0,2 mieras con esterilización simultánea, obteniéndose una dispersión y suspensión muy fina y homogénea de partículas liposomales. Estas partículas se pueden diluir o no hasta la concentración deseada de administración, por ejemplo en una proporción 1/10 hasta una concentración de azufre del 0,04 mg/ml. El preparado puede ser esterilfiltrado por 0,45 o 0,2 mieras también en su forma diluida. Esta posibilidad permite administrar los productos sin necesidad de añadir conservantes. A dicha preparación final se le puede añadir o no conservante, substancias odorizantes... Esta preparación se realiza preferiblemente en vacío o atmósfera inerte para evitar la degradación de los diferentes componentes. Ejemplo 2.

Pruebas de actividad dermatológica realizadas con el azufre liposomado tópico.

Durante un periodo de seis meses se realizaron pruebas de actividad funcional del producto de investigación, el invento, por vía tópica cutánea en voluntarios afectos de dermatitis seborreica, seborrea y acné. El producto final utilizado, como producto de investigación tenía la siguiente composición, presentación y posología. Composición del producto final:

- Lecitina de Soja 10,00 mg/ml

- Etanol 7,89 mg/ml

- Colato Sódico 1 ,4 mg/ml

- Azufre Flor 0,04 mg/ml

- Agua, cantidad suficiente hasta 1 mi

- pH de la suspensión 7,25 Presentación:

Suspensión acuosa de azufre elemento liposomado esterilfiltrada a una concentración de 0,04 mg/ml de azufre, sin conservante, envasado:

1- en un vial de cristal topacio de 20 ml/u con cabezal atomizador grafado.

2- en una botella de cristal topacio de 125 mi de volumen con cuentagotas

Posología:

Se aplicó con el atomizador la cantidad de producto suficiente para humedecer la zona a tratar y realizar un ligero masaje para distribuirla y hacerla penetrar mejor. En la mayoría de casos, se realizó una aplicación diaria, preferiblemente por la noche. En algunos casos, la aplicación se repitió, espaciándolas en el tiempo unas 12 h aproximadamente, por ejemplo, aplicar por la mañana y por la noche.

Resultados: a. 1 ) Dermatitis seborreica:

El producto final de investigación, con la composición y posología nombrada anteriormente, se ensayó en ocho voluntarios adultos, entre los 48 y 76 años de edad, afectos de dermatitis seborreica con un importante componente inflamatorio y descamativo, principalmente en la zona del surco nasogeniano y frente. La prueba clínica del producto final de investigación se realizó en tratamientos de 30 días de duración a cada paciente. El tratamiento se realizó en régimen ambulatorio y hubo dos visitas control por paciente, una al comienzo del tratamiento, con la entrega del producto objeto de estudio, y, otra al final del tratamiento, con la recogida de datos y opiniones. A los pocos días, (2 ó 3), del comienzo del tratamiento todos los enfermos notaron el buen funcionamiento del producto y refirieron una rápida disminución de la secreción o cantidad de grasa de su piel, acompañada de una importante disminución del componente inflamatorio y por tanto del enrojecimiento o eritema de la misma, propio de la dermatitis seborreica. En los pacientes con un componente descamativo importante de la piel (siete de los ocho) también se produjo una rápida reducción de la intensidad y número de escamas llegando, en un relativamente corto periodo de tiempo, 2 a 7 días, a su total desaparición en todos los casos. El producto final de investigación y su presentación tuvo un importante grado de aceptación por parte de los pacientes. Todos ellos reportaron y loaron las buenas características organolépticas del producto, así como su facilidad de manejo y aplicación. El producto final de investigación tuvo una muy buena tolerancia cutánea y en ninguno de los casos se produjo reacción adversa alguna. a. 2) Alopecia + Dermatitis seborreica:

El mismo producto final de investigación con la misma posología pero con una presentación en envases de cristal topacio de 125 mi de volumen con cuentagotas, se utilizó en otros cinco pacientes voluntarios, entre los 38 y 57 años de edad, afectados de alopecia androgénica con un importante componente seborreico. En estos casos el producto se asoció a otros preparados o productos anticaída/crecepelo como es la loción de minoxidilo tópico al 2%, en todos los caso con un importante éxito. La facilidad de su aplicación, textura y características organolépticas fueron del agrado de todos los voluntarios. El producto tuvo una muy buena tolerancia y en ningún caso se produjeron reacciones adversas. b) Acné:

El producto final de investigación, azufre elemento liposomado, se ensayó o probó en doce pacientes voluntarios de ambos sexos, entre los 16 y 24 años, afectados de acné de distinta gravedad. El producto final de investigación tiene la misma posología y la presentación descrita en el apartado de "presentación".

La prueba clínica del producto final de investigación se extendió durante un periodo de seis meses y se realizaron tratamientos de 21 días de duración a cada paciente. El tratamiento se realizó en régimen ambulatorio y hubo dos visitas control por paciente, una al comienzo del tratamiento, con la entrega del producto, y, otra al final del tratamiento, con la recogida de datos y opiniones. Entre el segundo o tercer día del comienzo del tratamiento todos los pacientes pudieron apreciar una mejora de su cuadro general. En mayor o menor grado, todos los enfermos notaron y refirieron una disminución de la cantidad de grasa y brillo de la piel, acompañada de una disminución del componente inflamatorio o eritematoso de los comedones.

En los siguientes días los comedones fueron disminuyendo de tamaño y, con el tiempo, aproximadamente entre los cinco y nueve días del inicio del tratamiento, también comenzó la disminución de su número. En algunos casos, ocho, la disminución del número de comedones fue muy importante hasta llegar casi a desaparecer en su totalidad durante el periodo que duró el tratamiento.

El producto fue muy bien tolerado por todos los pacientes, y, salvo algo de sequedad de la piel que se produjo en tres de los casos, no se produjeron reacciones alérgicas o adversas de otro tipo.

Todos los pacientes apreciaron y agradecieron la facilidad de uso del producto final, así como la textura y las características organolépticas del mismo, especialmente su poco olor.

El producto final y los liposomas en el contenidos, así como en el concentrado, se mantuvieron físicamente estables durante todo el periodo que duraron las pruebas y siguen estables un año y medio después.

Ejemplo 3.

Estudio microbiolóqico: actividad bactericida del azufre liposomado frente a azufre en polvo. Objetivo:

Comparar en el laboratorio la actividad bactericida del azufre liposomado (S-LIP) frente a la del azufre en polvo (S-POL) con el objetivo de demostrar que la forma liposomada presenta una actividad bactericida superior al azufre en polvo.

Método: A partir de cultivos de concentraciones conocidas de cepas bacterianas representativas de la flora de epidermis humana o causantes de infecciones cutáneas o relacionadas con el acné (S.aureus, P.aeruginosa, coliformes como E.coli) se comparó el efecto bactericida de las dos formas de azufre (S-LIP y S-POL).

Materiales y medios:

Cepas bacterianas de trabajo: S. aureus, P. aeruginosa, E.coli

Tubos de 5ml. estériles

Agua estéril (H ₂ 0)

- Suero fisiológico (SF)

Agua de peptona (PEP)

Agar nutritivo (AN)

Instrucción:

1- Se preparó un banco de diluciones en SF de cada una de las cepas bacterianas citadas de manera que se obtengan concentraciones conocidas de cada una de ellas. Las concentraciones bacterianas para cada cepa que se enfrentaran a ambas sustancias son: 10 ⁶ - 10 ⁵ - 10 ⁴ - 10 ³ UFC ^* /0,1 ml.

*UFC: Unidades Formadoras de Colonia.

2- Se partió de S-LIP 0,4 g/1 OOml.

3- Se preparó la siguiente dilución con agua esterilizada a partir de S-POL: 0,4 g/100ml

4- En tubos estériles se dispensaron las preparaciones A y B junto las cepas bacterianas según la siguiente tabla:

S.aureus A (S-LIP 0,4) B (S-POL 0,4)

10 ⁶ (0,1 ml. 10 ⁶ + 2ml. A) x 2 (0,1 ml. 10 ⁶ + 2ml. C) x 2

10 ⁵ (0,1 ml. 10 ⁵ + 2ml. A) x 2 (0,1 ml. 10 ⁵ + 2ml. C) x 2

10 ⁴ (0,1 ml. 10 ⁴ + 2ml. A) x 2 (0,1 ml. 10 ⁴ + 2ml. C) x 2

10 ³ (0,1 ml. 10 ³ + 2ml. A) x 2 (0,1 ml. 10 ³ + 2ml. C) x 2

E.coli A (S-LIP 0,4) B (S-POL 0,4)

10 ^B (0,1 ml. 10 ^B + 2ml. A) x 2 (0,1 ml. 10 ^B + 2ml. C) x 2 10 ^b (0,1ml.10 ^b +2ml. A) x 2 (0,1ml.10 ^b + 2ml. C) x 2

10 ⁴ (0,1ml.10 ⁴ +2ml. A) x 2 (0,1ml.10 ⁴ + 2ml. C) x 2

10 ³ (0,1ml.10 ³ +2ml. A) x 2 (0,1ml.10 ³ + 2ml. C) x 2

P.aeruginosa A (S-LIP 0,4) B (S-POL 0,4)

10 ⁶ (0,1ml.10 ⁶ +2ml. A) x 2 (0,1ml.10 ⁶ + 2ml. C) x 2

10 ^b (0,1ml.10 ^b +2ml. A) x 2 (0,1ml.10 ^b + 2ml. C) x 2

10 ⁴ (0,1ml.10 ⁴ +2ml. A) x 2 (0,1ml.10 ⁴ + 2ml. C) x 2

10 ³ (0,1ml.10 ³ +2ml. A) x 2 (0,1ml.10 ³ + 2ml. C) x 2

Tabla 1

Control positivo: se dispensaron 2ml. de suero fisiológico con cada una cepas bacterias a las distintas concentraciones, según la siguiente tabla:

Tabla 2 - Se mezclaron en vortex todos los tubos e incubar a 37°C durante 48 horas. - Se inocularon 0,1 mi. de cada tubo en una placa de AN. - Se incubaron todas las placas a 37°C durante 24horas.

- Se anotaron los resultados obtenidos: (Crecimiento - C / No crecimiento - NC):

Tabla 3

Tabla 4

Conclusiones:

Según los resultados obtenidos, el azufre liposomado presenta una actividad bactericida superior a la del azufre en polvo para todas las cepas que se han ensayado (S. aureus, P.aeruginosa y E.coli), ya que en el ensayo con la forma liposomada no se obtuvo crecimiento a concentraciones de inoculo de hasta 10 ⁶ UFC en todos los casos.

En el caso del ensayo con azufre en polvo se obtuvo crecimiento bacteriano para las tres cepas ensayadas a concentraciones de inoculo de 10 ⁵ UFC y 10 ⁶ UFC.