Login| Sign Up| Help| Contact|

Patent Searching and Data


Title:
MANNANASE
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2014/082552
Kind Code:
A1
Abstract:
Provided is a novel mannanase, and amino acid sequence thereof is set forth in SEQ ID NO:1. Also provided are the gene of the novel mannanase, Pichia pastoris engineering bacteria and Trichoderma reesei engineering bacteria recombinant expressing the gene. The mannanases produced by the Pichia pastoris engineering bacteria and the Trichoderma reesei engineering bacteria have an optimum pH at 4.5 and an optimum temperature at 60 ℃. Furthermore, the use of the novel mannanase in preparation of feed additive is also provided.

Inventors:
HUANG YIJUN (CN)
CHENG SIDA (CN)
KANG LIHUA (CN)
WANG HUAMING (CN)
QU YINBO (CN)
LIU GUODONG (CN)
CHEN MEI (CN)
Application Number:
PCT/CN2013/087752
Publication Date:
June 05, 2014
Filing Date:
November 25, 2013
Export Citation:
Click for automatic bibliography generation   Help
Assignee:
QINGDAO VLAND BIOTECH GROUP CO LTD (CN)
International Classes:
C12N9/42; A23K1/165; C12N1/15; C12N1/19; C12N15/56; C12N15/63; C12R1/80; C12R1/84; C12R1/885
Foreign References:
CN102994479A2013-03-27
CN102329785A2012-01-25
Other References:
ZHOU, HAIYAN ET AL.: "REVIEW ABOUT THE DIVERSITY OF MANNANASE", BIOTECHNOLOGY BULLETIN, 31 December 2008 (2008-12-31), pages 60 - 63 AND 67
CAI, HONGYING ET AL., WORLD JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY, vol. 27, no. 12, 3 May 2011 (2011-05-03), pages 2813 - 2819
DATABASE GENBANK REGISTRY 25 September 2013 (2013-09-25), LIAO, H. ET AL., accession no. GW24296.1
DATABASE GENBANK REGISTRY 22 July 2013 (2013-07-22), LIU, G. ET AL., accession no. PS31069.1
Attorney, Agent or Firm:
BEIJING HUIZE INTELLECTUAL PROPERTY LAW LLC (CN)
北京汇泽知识产权代理有限公司 (CN)
Download PDF:
Claims:
杈利要求书

1、 一种甘露聚糖酶, 其特征在于:

1) 其氨基酸序列为 SEQIDNO: 1的甘露聚糖酶;

2) 其氨基酸序列与 SEQIDNO: 1同源性高于 75%的甘露聚糖酶;

3) 在 1) 或 2) 中的氨基酸上发生取代、 缺失或添加一个或数个氨基 酸得到的, 具有甘露聚糖酶活性的酶。

2、编码权利要求 1所述的甘露聚糖酶的核酸,核苷酸序列为 SEQ ID NO:

2。

3、 一种甘露聚糖酶, 是权利要求 1所述的酶去掉信号肽后形成的, 其 氨基酸序列为 SEQ ID NO: 3。

4、编码权利要求 3所述的甘露聚糖酶的核酸,核苷酸序列为 SEQ ID NO:

4。

5、 一种重组表达载体, 其包含编码权利要求 4所述的甘露聚糖酶的核 苷酸。

6、 如权利要求 5所述的重组表达载体, 其特征在于, 所述的核苷酸的 序列为 SEQ ID NO: 2。

7、 一种表达宿主细胞, 所述的宿主细胞其携带有权利要求 5所述的重 组表达载体。

8、 权利要求 7所述的宿主细胞为毕赤酵母 PichiaPastoris 。

9、 权利要求 7所述的宿主细胞为里氏木霉 Trichoderma reesef)。

10、 权利要求 3所述的甘露聚糖酶在制备饲料添加剂中的应用。

Description:
一种甘露聚糖酶

技术领域 本发明属于微生物工程生物技术领域, 具体涉及一种新型的甘露聚糖 酶, 及用于表达该酶的重组表达工程菌。 背景技术 甘露聚糖酶包括外切酶、 内切酶和甘露糖苷酶, 三种酶的协同作用才 能将甘露聚糖彻底降解。 其中, β -l, 4-D-甘露聚糖酶 (EC 3.2.1.78 ) 又称 为甘露聚糖酶, 属于内切酶; 它能水解含有 β -l, 4-D-甘露糖苷键, 生成甘 露寡糖或甘露多糖, 属于半纤维素酶类。 甘露聚糖是以 β -l, 4-D-吡喃甘露 糖苷键连接的线状多糖, 如果主链某些残基被葡萄糖取代, 或半乳糖通过 α -1, 6-糖苷键与甘露糖残基相连形成分支, 则称为异甘露聚糖, 主要有半 乳糖甘露聚糖、 葡萄甘露聚糖、 半乳葡萄甘露聚糖 (齐军茹等, 2002, 中 国食品添加剂; 许牡丹等, 2006, 动物医学进展)。

甘露聚糖酶在饲料、 食品、 造纸、 石油开采及生物研究技术等多方面 具有广泛的应用前景; 因此, 甘露聚糖酶的研究和开发越来越多。 甘露聚 糖是仅次于木聚糖的第二大的半纤维素成分。 饲料的主要原料如豆粕、 小 麦和麸皮等的细胞壁主要成分是甘露聚糖; 一方面它是非淀粉多糖的抗营 养因子; 另一方面, 低聚甘露糖具有的保健功能 (陈小兵等, 2005, 生物 工程杂志; Chesson A, etc., 1987, In Recentt Advance in Animal Nutrition )。 因 此, 甘露聚糖酶业已是饲料酶制剂使用量最大的单 酶之一。

产甘露聚糖酶的微生物很多, 包括芽孢杆菌和丝状真菌等。 而工业化 生产甘露聚糖酶的菌株主要来自诱变选育的高 产菌株或高效表达的基因工 程菌, 如通过诱变选育芽抱杆菌 AM-001的甘露聚糖酶的酶活力由 36 U/ml 提高到了 430U/ml耐。美国 ChamGen公司选育的迟缓芽孢杆菌产甘露聚糖 酶活力达到了 400U/ml。但是, 随着分子生物学技术的发展, 利用工程菌异 源高效表达生产甘露聚糖酶是当前的主要手段 。 利用毕赤酵母表达生产来 自 ^^7 的甘露聚糖酶其酶活达到约 40000U/ml; 同样, 毕赤酵母 表达生产来自曲霉的甘露聚糖酶其酶活达到约 343U/ml (李松瑜等, 2009, 生物技术通讯)。

目前已商业化的甘露聚糖酶主要来自芽孢杆菌 、 木霉和青霉。 芽孢杆 菌所产甘露聚糖酶属于中性甘露聚糖酶, 最适 pH为 6.5, 不耐胃酸和胃蛋白 酶。 木霉和青霉所产甘露聚糖酶虽具有耐酸性特点 , 但是不耐受胃蛋白酶。 而甘露聚糖酶在单胃动物体内的作用位点决定 了饲料中使用的甘露聚糖酶 必须是酸性的。

因此, 为了更好的提高单胃动物对含甘露聚糖饲料的 利用率, 就需要 获得能够在低 pH条件下具有高活性的甘露聚糖酶。 发明内容 本发明的目的是提供一种新型甘露聚糖酶及其 重组表达工程菌。 本发 明通过将来源于斜卧青霉 PeniciUum decumbens 的甘露聚糖酶基因分别 转化入里氏木霉和毕赤酵母中, 构建重组表达工程菌株。 本发明的甘露聚 糖酶可广泛用作饲料添加剂, 提高养殖动物的饲料利用率。

本发明一个方面提供一种新型的甘露聚糖酶, 其特征在于:

1 ) 其氨基酸序列为 SEQ ID NO: 1的甘露聚糖酶;

2 ) 其氨基酸序列与 SEQ ID NO: 1同源性高于 75%的甘露聚糖酶;

3 ) 在 1 ) 或 2 ) 中的氨基酸上发生取代、 缺失或添加一个或数个氨基 酸得到的, 具有甘露聚糖酶活性的酶。

本发明另一方面提供了编码上述甘露聚糖酶的 基因, 其一种核苷酸序 列为 SEQ ID NO: 2。

本发明的甘露聚糖酶, 去掉信号肽后的氨基酸序列为 SEQ ID NO: 3。 其核苷酸的序列为 SEQ ID NO: 4。

本发明提供了一种表达载体, 其包含上述编码基酸序列为 SEQ ID NO: 3的甘露聚糖酶的核苷酸。

本发明另一方面提供了一种表达宿主细胞, 其携带有表达上述去掉信 号肽的甘露聚糖酶基因的表达载体。

上述表达宿主细胞为毕赤酵母 Pichia pastoris ) . 上述表达宿主细胞为里氏木霉 ( Trichoderma聽 ei)。

本发明的甘露聚糖酶用于制备饲料添加剂。

本发明提供了一个新型甘露聚糖酶基因, 并分别构建了重组表达该基 因的毕赤酵母工程菌和里氏木霉工程菌。 所述毕赤酵母工程菌和里氏木霉 工程菌所产甘露聚糖酶的最适作用 pH为 4.5, 最适作用温度为 60°C。 本发 明的甘露聚糖酶耐酸, 耐高温, 可广泛用作饲料添加剂, 能有效提高饲料 的利用率, 从而减少养殖中饲料的使用量, 节约粮食资源和养殖成本, 增 加生产效益。 附图说明 图 1 : 毕赤酵母工程菌发酵上清液 SDS-PAGE电泳检测分析图, 其中 箭头所指处即为重组表达的甘露聚糖酶。

图 2 : 里氏木霉工程菌发酵上清液 SDS-PAGE电泳检测分析图, 箭头 所指处即为重组表达的甘露聚糖酶。

图 3 : 重组表达的甘露聚糖酶最适作用 pH分析图。

图 4 : 重组表达的甘露聚糖酶最适作用温度分析图。 具体实施方式 以下实施例是为了更好地说明阐述本发明内容 , 本领域相关的技术人 员可以借助实施例更好地理解和掌握本发明。 但是, 本发明的保护和权利 要求范围不限于所提供的案例。

实施例 1斜卧青霉甘露聚糖酶基因的克隆

1.1 总 DNA的提取

将斜卧青霉 i ecw bera )过夜培养,取适量菌体置于离心管中, 13000 rpm离心 5 min, 弃上清; 加入 400μ1抽提缓冲液 (100 mM Tris-HCl, 100 mM EDTA, 250 mM NaCl, 1 %SDS); 然后加 lOOmg石英砂或玻璃珠, 在珠打仪 剧烈振荡 2min左右; 65 °C水浴 20min后, 加入 200μ1 10M NH 4 AC , 冰浴 lOmin; 13000rpm离心 10min, 取上清; 加入 2倍体积的无水乙醇, -20 °C 放置 30min; 13000 rpm离心 lOmin, 弃上清; 用 70%乙醇洗涤 2次; 晾干, 加入水溶解, 于 -20°C保存。

1.2 总 RNA的制备

OMEGA公司的 E.Z.N.A. Fungal RNA Kit制备斜卧青霉的 mRNA, 其 制备过程参照试剂盒的操作手册。

1.3基因克隆

以 1.1 中提取的基因组总 DNA 为模板, 分别利用引物对 (ATGTTGTACT CATCGGCG和 TCAGATCGCAGCGACATG ) 进行 PCR 扩增。 PCR扩增条件为 95 °C 4min; 94 °C 40S ; 58 °C 35S , 72 °C 1.2min 25 个循环; 72°C 7min。 利用凝胶回收试剂盒回收 PCR扩增产物。

以 1.2中提取的基因组总 RNA为模板,扩增其 cDNA序列。采用 TaKaRa 公司的 PrimeScript RT-PCR Kit扩增 cDNA基因序列。

1.4测序分析

将 1.2中回收的扩增产物分别连接到 pMD18 T-载体, 相应的克隆载体 分别命名为 pMDT-Manl和 pMDT-Man2; 最后把阳性克隆送至北京华大基 因研究中心进行测序分析。测序经比对发现 DNA序列和 cDNA序列间完全 同源, 这说明该基因序列没有内含子序列。 该甘露聚糖酶的氨基酸序列为 SEQ ID NO: 1, 其编码核苷酸序列为 SEQ ID NO: 2。

经 NCBI的 BLAST比对分析显示, SEQ ID NO: 1与 Neosartorya fischeri 菌的甘露聚糖酶基因(序列号: XM— 001262743.1 )核苷酸序列同源性最高, 同源性为 73%;而蛋白序列分析显示,该酶属于糖水解酶 2家族, SEQ ID NO: 1与 Penicimum chrysogenum菌的甘露聚糖酶序列同源性最高, 二者的 同源性为 72%。

经 SignalP4.0 ( http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/ ) 预测分析显示, 前 16aa残基为信号肽序列, 去掉信号肽的甘露聚糖酶的氨基酸序列为 SEQ ID NO: 3, 其编码基因序列为 SEQ ID NO: 4。

实施例 2表达序列为 SEQ ID NO: 3甘露聚糖酶基因的工程菌的构建

2.1 毕赤酵母工程菌的构建

以 质 粒 pT-Man2 为 模 板 , 利 用 引 物 ( agtgaattcCAGGTGGCGGAATATGGCC 和 agtgcggccgcTCAGATCGCAGCGACATG进行 PCR扩增, PCR扩增条件是 95 °C 4min; 94 °C 30S; 55 °C 40S, 72°C 1.2min 30个循环; 72°C 7min。 扩增 产物凝胶回收后,先进行 coRI和NotI双酶切。同样,对表达质粒 pPIC9K 也进行 coRI和 Notl双酶切。 用 T4连接酶把双酶切产物即克隆基因和表 达载体 4°C连接过夜。 最后, 把连接产物导入大肠杆菌 BL21。 相应的阳性 克隆表达质粒命名为 pPIC-Man,测序结果表明插入了序列为 SEQIDNO: 4 的片段。

表达质粒 pPIC-Man用 Sg/II酶切电泳鉴定后, 经乙醇沉淀浓縮, 测定 DNA浓度, 以 3μ § /μΙ^浓度稀释质粒片段保存备用。 制备毕赤酵母 GS115 电转化感受态细胞,最后重悬于 1 mL预冷的电泳缓冲液中 (;含 ImM MgCl 2 , lOmMHEPES, 250mM蔗糖,pH7.8)。 在 80μΙ^感受态细胞中加入 5μΙ^线性 化重组质粒; 电转化(条件为 1500V、 200 Ω、 25 F) ; 最后涂布于 MM平 板 (MM培养基组分: 1.34%YNB, 4X10_ 5 %生物素, 0.5%甲醇), 挑选重 组菌株。 所获得工程菌株命名为 Pichia pastoris CSD-2。

2.2里氏木霉工程菌的构建

(1) 表达载体构建

以质粒 pT-Man2为模板,利用引物(agtaatgccATGTTGTACTCATCGGC G 和 agtggtaccTCAGATCGCAGCGACATG)进行 PCR扩增, PCR扩增条件是 95 °C 4min; 94 °C 30S; 55 °C 40S, 72°C 1.2min 30个循环; 72°C 7min。 扩增 产物凝胶回收后, 先进行 Ncol和 Kpnl双酶切。 同样, 对木霉表达质粒 pKDN-EG也进行 Nco I和 Kpn I双酶切。用 Τ4连接酶把双酶切产物即克隆 基因和表达载体 4°C连接过夜。 最后, 把连接产物导入大肠杆菌 BL21。 相 应的阳性克隆表达质粒命名为 pKDN-Man。

(2) 原生质体制备

接种里氏木霉菌丝于 PDA平板上生长 4 天; 切取直径约 3cm的菌落 置于约 60ml YEG (0.5%酵母粉、 1%葡萄糖) 的液体培养基中, 30°C, 200 rpm振荡培养过夜; 多层纱布过滤收集菌丝; 将菌丝置于盛有 10-20 ml裂 解酶液(Sigma L1412)酶解 2-3小时; 取出酶解液, 加入 0.7 M NaCl溶液, 轻轻摇晃, 倒于三层灭菌擦镜纸过滤, 收集滤液, 3000 rpm, 离心 lOmin; 弃上清, 力 B 10-20 ml STC液 (20%蔗糖, 50mM Tris-Cl, 50mM CaCl 2 ) 悬 浮, 然后 3000 rpm, 离心 10 min; 加适量 STC悬浮分装 (150 μΐ/管, 10 8 个 /ml)。

( 3 ) 转化与验证

取 2 g pKDN-Man DNA加入到 150μ1原生质体中, 接着加入 500μ1

25%PEG轻轻混匀, 室温静置 25 min; 然后分 2-3次再加 lml 25%PEG, 轻 轻混匀,室温静置 25min,把原生质体加到 50 ml左右熔化后冷却至 45-55 °C 的上层半固体培养基(0.1%MgSO 4 , 1%KH 2 P04, 0.6%(NH 4 ) 2 SO 4 , 1%葡萄糖, 18.3%山梨醇 , 0.35%琼脂糖), 轻轻混匀后倒入含 lOO g/ml潮霉素下层基础 培养基平板 (2%葡萄糖, 0.5%(NH4) 2 SO 4 , 1.5%KH 2 P0 4 , 0.06%MgSO 4 , 0.06%CaCl 2 , 1.5%琼脂), 28 °C黑暗培养数天至转化子长出。

按照实施例 1中的方法提取转化子基因组 DNA为模板,利用引物扩增 目的验证转化子。 利用实施例 2中引物进行 PCR扩增目的基因。 PCR扩增 条件为 95 °C 4min; 94 °C 30S; 55 °C 40S , 72°C lmin 30个循环; 72°C 7min。 利用凝胶回收试剂盒回收 PCR扩增产物并进行测序分析, 即经过上述两个 PCR 反应选育和验证阳性转化子。 所获得的工程菌命名为 Trichoderma reesei CSD-3。

实施例 3发酵和酶学性质测定

3.1毕赤酵母工程菌摇瓶发酵

将毕赤酵母工程菌 CSD-2接种于 5ml BMGY ( l %酵母提取物, 2 %蛋 白陈, 1. 34 % YNB, 4xl0_ 5 %生物素, 1%甘油) , 30°C 培养过夜, 离心收 集菌体, 把菌体加入 50ml BMMY诱导培养基 (1 %酵母提取物, 2 %蛋白 陈, 1.34 %YNB, 4xl0_ 5 %生物素, 0.5 %甲醇), 每 12小时补加 50μΙ^甲醇, 诱导培养 5天,取上清液(命名为 PP-Man)进行 SDS-PAGE电泳检测分析, 结果如图 1所示。 图 1 中箭头所指处即为重组表达的甘露聚糖酶, 说明本 发明的序列为 SEQ ID NO:3的甘露聚糖酶在构建的毕赤酵母工程菌 CSD-2 中得到表达。

3.2里氏木霉工程菌摇瓶发酵

将里氏木霉工程菌 CSD-3接种于 MM发酵培养基(1.5%葡萄糖, 1.7% 乳糖, 2.5%玉米浆, 0.44%(NH 4 ) 2 SO 4 , 0.09%MgSO 4 , 2%KH 2 P0 4 , 0.04%CaCl 2 , 0.018%吐温 -80, 0.018%微量元素, 0.018%聚丙二醇 -2000 ), 28°C培养 48 小时, 然后 25°C诱导培养 48 小时, 取上清液 (命名为 TR-Man ) 进行 SDS-PAGE电泳检测分析, 结果如图 2所示。 图 2中箭头所指处即为重组 表达的甘露聚糖酶, 说明本发明的甘露聚糖酶在构建的里氏木霉工 程菌

CSD-3中得到表达。

3.3酶活测定

本发明还提供了一种甘露聚糖酶的测定方法, 该方法包括:

以 0.6%槐豆胶甘露聚糖 (Sigma公司, Batch#125K0091 ) 为底物, 以 0.1M醋酸-醋酸钠 (pH5.5 ) 为缓冲液, 将甘露聚糖底物 37°C平衡 20min, 将待测酶液 37°C平衡 10min。取 4支试管, 分别加入酶液 2ml, 其中 3支作 为测定管, 分别加入 2ml底物溶液, 另一支作为空白管, 加入 5ml DNS溶 液, 在 37°C±0.5°C水浴 30分钟。 然后三支测定管分别加入 5ml DNS溶液, 空白管加入 2ml底物溶液, 在沸水浴中反应 5分钟, 冷却后定容至 25ml。 以空白管调零, 在分光光度计 540nn处测吸光度。

甘露聚糖酶酶活定义: 在 37°C、 pH5.5 的条件下, 每分钟水解底物产 生 Ιμιηοΐ甘露糖所需酶液的量为一个甘露聚糖 活性单位。 蛋白含量测定参 照 Bradford法。

按照该方法进行酶活测定, 上述毕赤酵母工程菌 CSD-2的摇瓶发酵上 清液 PP-Man的酶活为 260U/mL, 上述里氏木霉工程菌 CSD-3的摇瓶发酵 上清液 TR-Man的酶活为 626U/mL, 说明本发明构建的两种工程菌都能高 效表达甘露聚糖酶。

下面就对本发明重组表达的序列为 SEQ ID NO:3的甘露聚糖酶的理化 性质进行描述。

3.3酶学性质分析

( 1 ) 最适 pH分析

用 pH值分别为 2.0、 2.5、 3.0、 3.5、 4.0、 4.5、 5.0、 5.5、 6.0、 6.5、 7.0 和 7.5 的缓冲液进行稀释测定, 在温度 55 °C条件下测定酶活, 以最高酶活 为 100%,计算相对酶活,做 pH-相对酶活曲线(图 3 )。如图 3所示: PP-Man 和 TR-Man的 pH曲线基本一致, 它们的最适 pH为 4.0。 其中 PP-Man在 pH2.8-5.3的范围内,能保持 60%以上的酶活;而 TR-Man在 pH2.7-5.8的范 围内, 能保持 60%以上的酶活。

(2) 最适温度分析

分别在 30°C、 35°C、 40°C、 45 °C、 50°C、 55°C、 60°C、 65°C、 70 °C , pH4.0 的条件下测定酶活, 以最高酶活为 100%, 计算相对酶活, 做温度-相对酶 活曲线(图 4)。 如图 4所示: PP-Man和 TR-Man的温度曲线基本一致, 它 们的最适温度为 60°C, 且在 30°C-68°C范围内能保持 60%以上的酶活。

上述结果表明, 本发明构建的毕赤酵母工程菌和里氏木霉工程 菌重组 表达的甘露聚糖酶的最适作用 pH为 4.0, 最适作用温度为 60°C, 耐酸, 耐 实施例四低能日粮中添加本发明甘露聚糖酶对 肉鸡生产性能影响 本实验在肉鸡商品日粮基础上降低 150kcal/kg 的代谢能, 然后在日粮 中添加里氏木霉工程菌重组表达的甘露聚糖酶 (上述发酵上清液的冻干 粉)。 通过对肉鸡生产性能的评价, 探讨甘露聚糖酶对低能日粮能量利用率 的改善幅度。

试验选用 432只 1 日龄罗斯 308肉用公雏, 分为 6个处理组, 每个处 理设 4个重复, 每个重复 18只肉公鸡, 采用 3层笼养, 饲养在人工控温的 肉鸡舍。

实验分为 3组, 饲喂 21天。 正对照组: 正常商品日粮处理组; 负对照 组: 在正对照日粮基础上降低 150kcal/kg代谢能; 试验组: 在负对照日粮 基础上添加 80-120克 /吨本发明的甘露聚糖酶(400000U/g)。 正负对照组日 粮组成如下表所示。

基础日粮组成及营养水平

原料名称 510日粮 (1〜21 日龄)

正对照 负对照

玉米 56.50 50.33 玉米酒精糟 3.50 3.00

小麦 4.00 4.00 麸皮 ― 2.85 豆粕 21.50 20.50 棉粕 2.00 2.00 花生粕 5.00 5.00

玉米蛋白粉 2.00 1.45

猪油 1.00 ―

预混料 3.90 3.80

营养水平

粗蛋白 20.68 20.85

ME(kcal/kg) 2,670 2,773

钙 0.89 0.88 有效磷 0.36 0.39

总赖氨酸 0.93 0.97

实验结果如下:

(1)与正对照组和负对照组相比,试验组 7日龄个体重分别提高 2.6% (P=0.22)、 2.0% (P=0.30); 日增重比正对照组和负对照组分别高 3.4% (P=0.22)、 2.7% (P=0.33); 料重比在负对照日粮基础上降低了 3.1% (P=0.23), 育肥指数在负对照日粮基础上提高 5.9% (P=0.19), 并与正对 照组育肥指数一致。

(2) 与正对照组和负对照组相比, 试验组 14 日龄个体重在负对照组 基础上提高 2.5% (P=0.14), 8〜14d 日增重分别比正对照和负对照组提高 3.6% (P=0.12)、 4.2% (P=0.07); 育肥指数在负对照日粮基础上提高 5.7% (P=0.21), 与正对照组育肥指数基本一致。

(3) 试验组 21 日龄个体重、 日增重、 育肥指数在负对照组基础上分 别提高 4.4% (P<0.05)、 6.5% (P<0.05)、 8.2% (P<0.05)。

实验结果显示, 在减少日粮能量值的条件下, 通过在日粮中添加甘露 聚糖酶, 仍能提高 1〜21 日龄期肉鸡的个体重、 日增重和育肥指数, 降低 料重比。 说明本发明的甘露聚糖酶能有效提高饲料的利 用率, 从而减少养 殖中饲料的使用量, 节约粮食资源和养殖成本, 增加生产效益。